JP7072830B2 - Manufacturing method and kit for manufacturing gel for electrophoresis with high separability - Google Patents
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Description
本発明は、電気泳動用ゲル、特に分離能が向上した高分離能を有する電気泳動用ゲルの製造方法、およびこれを製造するためのキット等に関する。 The present invention relates to a method for producing an electrophoresis gel, particularly an electrophoresis gel having an improved resolution and a high resolution, a kit for producing the same, and the like.
電気泳動によって核酸またはタンパク質等を分離する場合には、ポリアクリルアミドゲルまたはアガロースゲルが主に用いられている。DNAなどの核酸を分離する際には、一般的にアガロースゲルがよく用いられている。 When separating nucleic acids or proteins by electrophoresis, polyacrylamide gels or agarose gels are mainly used. When separating nucleic acids such as DNA, agarose gels are generally often used.
アガロースゲルを用いて様々なサイズのDNAを分離する場合には、アガロースゲルの分離能に応じて好適なゲル濃度に調整したアガロースゲルを作製する必要があり、非常に操作が煩雑であった。また25kbpを超えるような大きいサイズのDNAを分離するためにはアガロースゲル濃度を0.5重量%未満にする必要があるが、これではゲルの強度が十分ではなく、電気泳動に供することが困難な場合があった。 When separating DNAs of various sizes using an agarose gel, it is necessary to prepare an agarose gel adjusted to a suitable gel concentration according to the separating ability of the agarose gel, and the operation is very complicated. Further, in order to separate DNA having a large size exceeding 25 kbp, it is necessary to reduce the agarose gel concentration to less than 0.5% by weight, but this does not have sufficient strength of the gel and it is difficult to use it for electrophoresis. There was a case.
このため、十分な強度と高い分離能とを有する電気泳動用ゲルの開発が求められ、種々の検討がなされている。例えば、非特許文献1には、アガロースに特定の多糖類を組み合わせてゲルを作製する技術が開示されている。また、特許文献1には、ガンマ線を照射したガラクトマンナンをアガロースと組み合わせる技術が開示されている。 Therefore, the development of an electrophoresis gel having sufficient strength and high resolution is required, and various studies have been conducted. For example, Non-Patent Document 1 discloses a technique for producing a gel by combining agarose with a specific polysaccharide. Further, Patent Document 1 discloses a technique for combining galactomannan irradiated with gamma rays with agarose.
しかしながら、上述のような従来技術は、十分な強度および高い分離能を有するゲルを簡便に得るという観点からは改善の余地があった。 However, the prior art as described above has room for improvement from the viewpoint of easily obtaining a gel having sufficient strength and high separation ability.
通常、アガロースゲル等の電気泳動用ゲルを作製する際には、アガロース等の高濃度溶液を調製しておき、最終的に所望のゲル濃度となるようにバッファー等で高濃度溶液を希釈し、これをゲル化することにより電気泳動用ゲルを作製する。非特許文献1の第252頁左欄には、0.5%を超えるような高い濃度ガラクトマンナンを実用的に使用するためには、ガラクトマンナンを部分的に加水分解する必要があることが記載されている。同頁には、これは、ガラクトマンナン-アガロース溶液のゴムのような堅さと高いゲル温度とに起因することが記載されている。このため、特許文献1に記載の技術では、ガラクトマンナン溶液の粘度を減少させるために、予めガラクトマンナンにガンマ線を照射する必要があった。よって、アガロースとガラクトマンナンとを含む電気泳動用ゲルを簡便に作製することはできないということが技術的な課題となり、当業者はアガロースとガラクトマンナンとを含む電気泳動用ゲルを実用的に使用することはなかった。 Normally, when preparing a gel for electrophoresis such as agarose gel, a high-concentration solution such as agarose is prepared, and the high-concentration solution is diluted with a buffer or the like so as to finally reach a desired gel concentration. A gel for electrophoresis is produced by gelling this. In the left column of page 252 of Non-Patent Document 1, it is stated that in order to practically use a high concentration galactomannan exceeding 0.5%, it is necessary to partially hydrolyze the galactomannan. Has been done. The same page states that this is due to the rubbery hardness of the galactomannan-agarose solution and the high gel temperature. Therefore, in the technique described in Patent Document 1, it is necessary to irradiate galactomannan with gamma rays in advance in order to reduce the viscosity of the galactomannan solution. Therefore, it becomes a technical problem that an electrophoresis gel containing agarose and galactomannan cannot be easily prepared, and those skilled in the art practically use an electrophoresis gel containing agarose and galactomannan. It never happened.
本発明の一態様は、上記の問題点に鑑みてなされたものであり、十分な強度および高い分離能を有するゲルを簡便に得る方法を実現することを目的とする。 One aspect of the present invention has been made in view of the above problems, and an object thereof is to realize a method for easily obtaining a gel having sufficient strength and high separation ability.
上記の課題を解決するために、本発明者が鋭意研究を行った結果、意外なことに予めアガロースとガラクトマンナンとを粉末の状態で混合することによって、十分な強度および高い分離能を有するゲルが極めて簡便に得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。本発明は以下の態様を含む。 As a result of diligent research conducted by the present inventor in order to solve the above problems, surprisingly, a gel having sufficient strength and high separability by mixing agarose and galactomannan in a powder state in advance. We have found that can be obtained extremely easily, and have completed the present invention. The present invention includes the following aspects.
<1>アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とを混合することによって混合粉末を得る工程と、上記混合粉末を緩衝液に溶解することによって溶液を得る工程と、上記溶液をゲル化させることによって電気泳動用ゲルを得る工程と、を含む、電気泳動用ゲルの製造方法。 <1> A step of obtaining a mixed powder by mixing a powder containing agarose and a powder of galactomannan, a step of obtaining a solution by dissolving the mixed powder in a buffer solution, and a step of gelling the solution. A method for producing an electrophoresis gel, which comprises a step of obtaining an electrophoresis gel.
<2>上記混合粉末におけるアガロースを含む粉末に対するガラクトマンナンの粉末の重量比(ガラクトマンナンの粉末の重量/アガロースを含む粉末の重量)が0.3~2である、<1>に記載の電気泳動用ゲルの製造方法。 <2> The electricity according to <1>, wherein the weight ratio of the galactomannan powder to the agarose-containing powder in the above mixed powder (weight of the galactomannan powder / weight of the powder containing agarose) is 0.3 to 2. A method for producing a gel for migration.
<3>上記緩衝液が、トリス-酢酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液またはトリス-ホウ酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液である、<1>または<2>に記載の電気泳動用ゲルの製造方法。 <3> The method for producing an electrophoresis gel according to <1> or <2>, wherein the buffer solution is tris-acetic acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution or tris-boric acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution.
<4>アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とを含む混合粉末。 <4> A mixed powder containing a powder containing agarose and a powder of galactomannan.
<5>上記アガロースを含む粉末に対する上記ガラクトマンナンの粉末の重量比(ガラクトマンナンの粉末の重量/アガロースを含む粉末の重量)が0.3~2である、<4>に記載の混合粉末。 <5> The mixed powder according to <4>, wherein the weight ratio of the galactomannan powder to the agarose-containing powder (weight of the galactomannan powder / weight of the powder containing agarose) is 0.3 to 2.
<6><4>または<5>に記載の混合粉末を備える電気泳動用ゲル製造キット。 <6> An electrophoresis gel production kit comprising the mixed powder according to <4> or <5>.
<7>トリス-酢酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液またはトリス-ホウ酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液をさらに備える、<6>に記載の電気泳動用ゲル製造キット。 <7> The gel production kit for electrophoresis according to <6>, further comprising a Tris-acetic acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution or a Tris-boric acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution.
本発明の一態様によれば、十分な強度および高い分離能を有する電気泳動用ゲルを簡便に作製することができるという効果を奏する。 According to one aspect of the present invention, there is an effect that an electrophoresis gel having sufficient strength and high separability can be easily produced.
以下、本発明の実施の形態の一例について詳細に説明するが、本発明は、これらに限定されない。なお、本明細書において特記しない限り、数値範囲を表す「A~B」は、「A以上、B以下」を意味する。 Hereinafter, an example of an embodiment of the present invention will be described in detail, but the present invention is not limited thereto. Unless otherwise specified in the present specification, "A to B" representing a numerical range means "A or more and B or less".
本明細書において、電気泳動用ゲルを単に「ゲル」と称する場合もある。ゲル中にてサイズの異なる核酸のバンド間の距離が離れているほど、分離能が高いと言える。 In the present specification, the gel for electrophoresis may be simply referred to as "gel". It can be said that the greater the distance between the bands of nucleic acids having different sizes in the gel, the higher the separation ability.
〔1.電気泳動用ゲルの製造方法〕
本発明の一実施形態に係る電気泳動用ゲルの製造方法は、アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とを混合することによって混合粉末を得る工程と、上記混合粉末を緩衝液に溶解することによって溶液を得る工程と、上記溶液をゲル化させることによって電気泳動用ゲルを得る工程と、を含む。アガロースにガラクトマンナンを混合することにより、得られるゲルの分離能および強度を向上させることができる。また、粉末の状態でアガロースとガラクトマンナンとを混合することにより、混合粉末を緩衝液へ均一に溶解させることができる。従って、十分な分離能および強度を有するゲルを簡便に作製することができる。なお、本発明の一実施形態によれば、ガラクトマンナンにガンマ線を照射する必要はない。
[1. Manufacturing method of gel for electrophoresis]
The method for producing an electrophoresis gel according to an embodiment of the present invention includes a step of obtaining a mixed powder by mixing a powder containing agarose and a powder of galactomannan, and a step of dissolving the mixed powder in a buffer solution. It includes a step of obtaining a solution and a step of obtaining a gel for electrophoresis by gelling the above solution. By mixing galactomannan with agarose, the separability and strength of the obtained gel can be improved. Further, by mixing agarose and galactomannan in the powder state, the mixed powder can be uniformly dissolved in the buffer solution. Therefore, a gel having sufficient separability and strength can be easily prepared. According to one embodiment of the present invention, it is not necessary to irradiate galactomannan with gamma rays.
これに対し、アガロースを溶解させた溶液と、ガラクトマンナンを溶解させた溶液とを別々に用意し、これらを混合した場合、十分な強度を有するゲルを作製することができない。例えば、ガラクトマンナンを高濃度にて溶解させる場合、ガラクトマンナンが均一に溶解せず、ゲルを作製することが困難となり得る。また、上述のようにガラクトマンナン溶液が高粘度となることもある。なお、ガラクトマンナンを含まず、アガロースのみを低濃度で含むゲルは、強度が不十分になり得る。 On the other hand, when a solution in which agarose is dissolved and a solution in which galactomannan is dissolved are prepared separately and mixed, a gel having sufficient strength cannot be prepared. For example, when galactomannan is dissolved at a high concentration, galactomannan does not dissolve uniformly, which may make it difficult to prepare a gel. Further, as described above, the galactomannan solution may have a high viscosity. A gel containing only agarose at a low concentration without containing galactomannan may have insufficient strength.
以下では、電気泳動用ゲルの製造方法を単に「製造方法」とも称する。また、本明細書では、アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とを混合した粉末を単に「混合粉末」とも称する。 Hereinafter, the method for producing an electrophoresis gel is also simply referred to as a “production method”. Further, in the present specification, a powder obtained by mixing a powder containing agarose and a powder of galactomannan is also simply referred to as "mixed powder".
<1-1.混合工程>
上記製造方法は、アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とを混合することによって混合粉末を得る工程を含む。すなわち、本発明の一実施形態に係る混合粉末は、アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とを含む。本明細書において、この工程は、「混合工程」とも称される。
<1-1. Mixing process>
The above-mentioned production method includes a step of obtaining a mixed powder by mixing a powder containing agarose and a powder of galactomannan. That is, the mixed powder according to the embodiment of the present invention contains a powder containing agarose and a powder of galactomannan. As used herein, this step is also referred to as a "mixing step".
アガロースを含む粉末は、100重量%中、アガロースを70重量%以上含むことが好ましく、80重量%以上含むことがより好ましく、90重量%以上含むことがさらに好ましい。アガロースを含む粉末は、アガロースからなる粉末(アガロースの粉末)であってもよく、寒天末であってもよい。寒天末は、寒天の粉末であり、アガロースに加えて、DNA分析を阻害しない程度にアガロース以外の多糖類も含み得る。 The powder containing agarose preferably contains 70% by weight or more of agarose, more preferably 80% by weight or more, and further preferably 90% by weight or more in 100% by weight. The powder containing agarose may be a powder made of agarose (agarose powder) or agar powder. The agar powder is an agar powder and may contain polysaccharides other than agarose to the extent that it does not inhibit DNA analysis, in addition to agarose.
アガロースは、1位と3位とで結合するβ-D-ガラクトースと、1位と4位とで結合する3,6-アンヒドロ-α-L-ガラクトースとが交互に結合した構造を有する多糖類である。換言すれば、アガロースは、D-ガラクトースが3,6-アンヒドロ-L-ガラクトースにβ1→4結合した繰り返し単位が、α1→3結合した構造を有する。市販のアガロースの粉末としては、Agarose H(ニッポンジーン社製)およびAgarose S(ニッポンジーン社製)等が挙げられる。 Agarose is a polysaccharide having a structure in which β-D-galactose bound at the 1-position and the 3-position and 3,6-anhydro-α-L-galactose bound at the 1-position and the 4-position are alternately bound. Is. In other words, agarose has a structure in which a repeating unit in which D-galactose is bound to 3,6-anhydro-L-galactose by β1 → 4 is bound by α1 → 3. Examples of commercially available agarose powder include Agarose H (manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.) and Agarose S (manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.).
なお、アガロースを含む粉末として、アガロースの粉末と寒天末とを併用してもよい。アガロースの粉末と寒天末との重量比は特に限定されないが、アガロースの粉末:寒天末=2.3:1~4:1であってもよい。 As the powder containing agarose, agarose powder and agar powder may be used in combination. The weight ratio of the agarose powder to the agar powder is not particularly limited, but the agarose powder: agar powder = 2.3: 1 to 4: 1 may be used.
ガラクトマンナンは、D-マンノースがβ1→4結合して形成された直線状主鎖に、D-ガラクトースがα1→6結合した構造を有する多糖類である。ガラクトマンナンは、ローカストビーン、グアーおよびフェヌグリーク等から抽出され得る。市販のガラクトマンナンの粉末としては、AgarMate(登録商標)(Diversified Biotech社製)およびLocust bean gum from Ceratonia siliqua seeds(Sigma-Aldrich社製)等が挙げられ、中でもAgarMateが好ましい。 Galactomannan is a polysaccharide having a structure in which D-galactose is bound to α1 → 6 on a linear main chain formed by binding D-mannose to β1 → 4. Galactomannan can be extracted from locust beans, guar, fenugreek and the like. Examples of commercially available galactomannan powder include AgarMate (registered trademark) (manufactured by Diversified Biotech) and Locust bean gum from Ceratonia siliqua seeds (manufactured by Sigma-Aldrich), and AgarMate is preferable.
上記混合粉末におけるアガロースを含む粉末に対する上記ガラクトマンナンの粉末の重量比(ガラクトマンナンの粉末の重量/アガロースを含む粉末の重量)は、0.3~2であることが好ましい。上記重量比が0.3以上であれば、得られるゲルの分離能および強度をより高めることができる。また、上記重量比が2以下であれば、混合粉末が緩衝液に溶解しやすい。 The weight ratio of the galactomannan powder to the agarose-containing powder in the mixed powder (weight of the galactomannan powder / weight of the powder containing agarose) is preferably 0.3 to 2. When the weight ratio is 0.3 or more, the separability and strength of the obtained gel can be further enhanced. Further, when the weight ratio is 2 or less, the mixed powder is easily dissolved in the buffer solution.
上記重量比は、例えば、0.8~2であってもよく、1~2であってもよい。このようにガラクトマンナンの濃度が比較的高い場合であっても、上記混合粉末は緩衝液に十分に溶解する。従って、十分な強度のゲルを得ることができる。これは、本発明の一実施形態ではアガロースとガラクトマンナンとが粉末の状態で混合されるためである。また、上記重量比は、0.3~0.6であってもよく、0.3~0.5であってもよい。このようにガラクトマンナンの濃度が比較的低い場合であっても、ゲルの分離能を十分に高めることができる。 The weight ratio may be, for example, 0.8 to 2 or 1 to 2. Even when the concentration of galactomannan is relatively high as described above, the mixed powder is sufficiently dissolved in the buffer solution. Therefore, a gel having sufficient strength can be obtained. This is because in one embodiment of the present invention, agarose and galactomannan are mixed in a powder state. Further, the weight ratio may be 0.3 to 0.6 or 0.3 to 0.5. Even when the concentration of galactomannan is relatively low as described above, the separation ability of the gel can be sufficiently enhanced.
アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とを混合する方法は、特に限定されない。これらの粉末は、手動で混合されてもよく、撹拌機構を備えた装置等によって混合されてもよい。いずれにせよ、アガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とが均一に混合されるように、これらの粉末を十分に撹拌することが好ましい。 The method of mixing the powder containing agarose and the powder of galactomannan is not particularly limited. These powders may be mixed manually or may be mixed by an apparatus provided with a stirring mechanism or the like. In any case, it is preferable to stir the powder sufficiently so that the powder containing agarose and the powder of galactomannan are uniformly mixed.
<1-2.溶解工程>
上記製造方法は、上記混合粉末を緩衝液に溶解することによって溶液を得る工程を含む。本明細書において、この工程は、「溶解工程」とも称される。上述の混合工程において、既にアガロースを含む粉末とガラクトマンナンの粉末とが混合されている。それゆえ、溶解工程において、混合粉末を均一に緩衝液に溶解させることができる。このようにして得られた均一な溶液は、後述のゲル化工程において、取り扱いが容易である。
<1-2. Dissolution process>
The production method comprises a step of obtaining a solution by dissolving the mixed powder in a buffer solution. As used herein, this step is also referred to as a "dissolution step". In the above-mentioned mixing step, the powder containing agarose and the powder of galactomannan are already mixed. Therefore, in the dissolution step, the mixed powder can be uniformly dissolved in the buffer solution. The uniform solution thus obtained is easy to handle in the gelation step described later.
緩衝液は、トリス-酢酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液またはトリス-ホウ酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液であることが好ましい。 The buffer is preferably Tris-acetic acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer or Tris-boric acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer.
トリス-酢酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液はTAE緩衝液とも称される。TAE緩衝液は、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、酢酸およびエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を水に溶解させることによって調製され得る。トリスヒドロキシメチルアミノメタンは、単にトリス(Tris)とも称される。トリスは塩の形態(例えば、トリス塩酸塩(Tris-HCL))で用いられてよい。また、酢酸は酢酸塩(例えば、酢酸ナトリウム)の形態で用いられてもよい。DNA回収および遺伝子工学的手法に提供するという観点からは、TAE緩衝液が好ましい。 Tris-acetic acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer is also referred to as TAE buffer. TAE buffer can be prepared by dissolving trishydroxymethylaminomethane, acetic acid and ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) in water. Tris hydroxymethylaminomethane is also simply referred to as Tris. Tris may be used in the form of salts (eg, Tris-HCL). Acetic acid may also be used in the form of acetate (eg, sodium acetate). TAE buffer is preferred from the standpoint of providing for DNA recovery and genetic engineering techniques.
トリス-ホウ酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液は、TBE緩衝液とも称される。TBE緩衝液は、トリスヒドロキシメチルアミノメタン、ホウ酸およびEDTAを水に溶解させることによって調製され得る。1kbp以下のDNAを分離するという観点からは、TBE緩衝液が好ましい。 Tris-boric acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer is also referred to as TBE buffer. TBE buffer can be prepared by dissolving trishydroxymethylaminomethane, boric acid and EDTA in water. From the viewpoint of separating DNA of 1 kbp or less, TBE buffer is preferable.
上記溶液100重量%におけるアガロースを含む粉末およびガラクトマンナンの粉末の合計の添加量は、0.4~1.5重量%であることが好ましく、0.4~1.0重量%であることがより好ましい。上記濃度が0.4重量%以上であれば、ゲルの分離能および強度を十分向上させることができる。上記濃度が1.5重量%以下であれば、均一な溶液を容易に得ることができる。 The total amount of the agarose-containing powder and the galactomannan powder added in 100% by weight of the solution is preferably 0.4 to 1.5% by weight, and preferably 0.4 to 1.0% by weight. More preferred. When the above concentration is 0.4% by weight or more, the separation ability and strength of the gel can be sufficiently improved. When the above concentration is 1.5% by weight or less, a uniform solution can be easily obtained.
上記溶液100重量%におけるアガロースを含む粉末の添加量は、0.3~1.5重量%であることが好ましい。アガロースを含む粉末の添加量が0.3重量%以上であれば、十分な強度のゲルを得ることができる。アガロースを含む粉末の添加量が1.5重量%以下であれば、均一な溶液を容易に得ることができる。 The amount of the powder containing agarose added in 100% by weight of the solution is preferably 0.3 to 1.5% by weight. When the amount of the powder containing agarose added is 0.3% by weight or more, a gel having sufficient strength can be obtained. When the amount of the powder containing agarose added is 1.5% by weight or less, a uniform solution can be easily obtained.
上記溶液100重量%におけるガラクトマンナンの粉末の添加量は、0.1~0.6重量%であることが好ましい。ガラクトマンナンの粉末の添加量が0.1重量%以上であれば、ゲルの分離能および強度を十分向上させることができる。ガラクトマンナンの粉末の添加量が0.6重量%以下であれば、均一な溶液を容易に得ることができる。 The amount of the galactomannan powder added in 100% by weight of the solution is preferably 0.1 to 0.6% by weight. When the amount of the galactomannan powder added is 0.1% by weight or more, the separation ability and strength of the gel can be sufficiently improved. When the amount of the galactomannan powder added is 0.6% by weight or less, a uniform solution can be easily obtained.
混合粉末を、緩衝液中に投入した後、撹拌することが好ましい。手動で撹拌してもよく、撹拌機構を備えた装置によって撹拌してもよい。撹拌機構を備えた装置としては、マグネチックスターラー等が挙げられる。 It is preferable to put the mixed powder into the buffer solution and then stir. It may be stirred manually or by a device equipped with a stirring mechanism. Examples of the device provided with the stirring mechanism include a magnetic stirrer and the like.
溶解工程においては、加熱しながら混合粉末を緩衝液に溶解させることが好ましい。これにより、容易に混合粉末を緩衝液に溶解させることができる。溶解工程における加熱温度は80~100℃であることが好ましい。加熱温度が上記範囲であれば、混合粉末を十分に溶解させることができる。加熱は、アガロースゲルの作製で通常用いられている、電子レンジなどを用いて行うことができる。 In the dissolution step, it is preferable to dissolve the mixed powder in the buffer solution while heating. This makes it possible to easily dissolve the mixed powder in the buffer solution. The heating temperature in the melting step is preferably 80 to 100 ° C. When the heating temperature is in the above range, the mixed powder can be sufficiently dissolved. The heating can be performed using a microwave oven or the like, which is usually used for producing an agarose gel.
混合粉末が均一に溶解しているか否かは目視で確認できる。本明細書においては、上記溶液において、溶解せずに残っているアガロースもしくは寒天、またはガラクトマンナンの塊が存在しなければ、均一に溶解していると判断する。 Whether or not the mixed powder is uniformly dissolved can be visually confirmed. In the present specification, if there is no lump of agarose or agar or galactomannan remaining undissolved in the above solution, it is determined that the solution is uniformly dissolved.
<1-3.ゲル化工程>
上記製造方法は、上記溶液をゲル化させることによって電気泳動用ゲルを得る工程を含む。本明細書において、この工程は、「ゲル化工程」とも称される。本明細書において、「ゲル化」とは、上記溶液を固化させることによって、流動性を示さないゲルを得ることを意図している。上記ゲルは、上述の混合粉末を溶解させた溶液をゲル化させたものである。それゆえ、上記ゲルは、十分な強度および高い分離能を有している。
<1-3. Gelling process>
The production method includes a step of obtaining a gel for electrophoresis by gelling the solution. As used herein, this step is also referred to as a "gelling step". As used herein, "gelling" is intended to obtain a gel that does not exhibit fluidity by solidifying the solution. The above gel is a gelled solution of the above-mentioned mixed powder. Therefore, the gel has sufficient strength and high resolution.
ゲル化工程においては、上記溶液を放置することによって固化させることが好ましい。放置する温度は、20~60℃であることが好ましく、室温であることがより好ましい。ここで、上記溶液を型に流し込んだ後に放置することによって、所望の形状のゲルを得ることができる。また、固化する前の上記溶液にコームを差し込んでおくことによって、サンプルを導入するためのウェルを形成することもできる。 In the gelling step, it is preferable to solidify the solution by leaving it to stand. The temperature at which it is left to stand is preferably 20 to 60 ° C., more preferably room temperature. Here, a gel having a desired shape can be obtained by pouring the solution into a mold and then leaving it to stand. It is also possible to form a well for introducing a sample by inserting a comb into the above solution before solidification.
〔2.電気泳動用ゲル製造キット〕
本発明の一実施形態に係る電気泳動用ゲル製造キットは、本発明の一実施形態に係る混合粉末を備える。それゆえ、上述のように、十分な強度および高い分離能を有するゲルを簡便に作製することができる。以下では、電気泳動用ゲル製造キットを単に「キット」とも称する。また、〔1.電気泳動用ゲルの製造方法〕で既に説明した事項については、以下では説明を省略し、適宜、上述の記載を援用する。
[2. Gel production kit for electrophoresis]
The gel production kit for electrophoresis according to an embodiment of the present invention comprises a mixed powder according to an embodiment of the present invention. Therefore, as described above, a gel having sufficient strength and high separability can be easily prepared. Hereinafter, the gel production kit for electrophoresis is also simply referred to as a “kit”. In addition, [1. Regarding the matters already described in [Method for producing a gel for electrophoresis], the description thereof will be omitted below, and the above description will be appropriately incorporated.
上記キットは、緩衝液として、TAE緩衝液またはTBE緩衝液をさらに備えていてもよい。上述の混合粉末を当該緩衝液に溶解させて溶液を得ることができる。当該溶液をゲル化させることにより、ゲルを作製することができる。 The kit may further include a TAE buffer or a TBE buffer as the buffer. A solution can be obtained by dissolving the above-mentioned mixed powder in the buffer solution. A gel can be prepared by gelling the solution.
上記緩衝液は、使用される際の濃度に比べて高い濃度にて調製されたストック溶液であってもよい。例えば、ストック溶液は、使用される際の濃度に比べて5倍、10倍、または50倍の濃度であってもよい。当該ストック溶液を希釈して、ゲルの作製に使用することができる。 The buffer solution may be a stock solution prepared at a concentration higher than the concentration at the time of use. For example, the stock solution may be 5 times, 10 times, or 50 times the concentration at the time of use. The stock solution can be diluted and used to make a gel.
また、上記キットは、トリス-酢酸-エチレンジアミン四酢酸の粉末またはトリス-ホウ酸-エチレンジアミン四酢酸の粉末を備えていてもよい。これらの粉末を水に溶解させることによって、TAE緩衝液またはTBE緩衝液を得ることができる。 The kit may also include tris-acetic acid-ethylenediaminetetraacetic acid powder or tris-boric acid-ethylenediaminetetraacetic acid powder. By dissolving these powders in water, a TAE buffer solution or a TBE buffer solution can be obtained.
上記キットは、混合粉末および緩衝液以外に、ゲルを作製するための部材を備えていてもよい。例えば、上記キットは、上記溶液が流し込まれるトレーを備えていてもよい。また、上記キットは、形成されたゲルを支持するためのプレートを備えていてもよい。さらに、上記キットは、ゲルにウェルを形成するためのコームを備えていてもよい。 In addition to the mixed powder and buffer, the kit may include members for making a gel. For example, the kit may include a tray into which the solution is poured. The kit may also include a plate to support the formed gel. In addition, the kit may include a comb to form a well in the gel.
本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。 The present invention is not limited to the above-described embodiments, and various modifications can be made within the scope of the claims, and the embodiments obtained by appropriately combining the technical means disclosed in the different embodiments. Is also included in the technical scope of the present invention.
本発明の一態様は、以下のように構成されてもよい。 One aspect of the present invention may be configured as follows.
<1>アガロースの粉末とガラクトマンナンの粉末とを混合してアガロース-ガラクトマンナン混合粉末を得る工程と、上記アガロース-ガラクトマンナン混合粉末を緩衝液に溶解してアガロース-ガラクトマンナン溶液を得る工程と、上記アガロース-ガラクトマンナン溶液をゲル化させて電気泳動用ゲルを得る工程と、を含む、電気泳動用ゲルの製造方法。 <1> A step of mixing an agarose powder and a galactomannan powder to obtain an agarose-galactomannan mixed powder, and a step of dissolving the above-mentioned agarose-galactomannan mixed powder in a buffer solution to obtain an agarose-galactomannan solution. , A method for producing an electrophoresis gel, which comprises a step of gelling the above agarose-galactomannan solution to obtain an electrophoresis gel.
<2>上記アガロース-ガラクトマンナン混合粉末におけるアガロースの粉末に対するガラクトマンナンの粉末の重量比(ガラクトマンナンの粉末の重量/アガロースの粉末の重量)が0.3~2である、<1>に記載の電気泳動用ゲルの製造方法。 <2> The weight ratio of the galactomannan powder to the agarose powder in the above agarose-galactomannan mixed powder (weight of the galactomannan powder / weight of the agarose powder) is 0.3 to 2, according to <1>. Method for producing a gel for electrophoresis.
<3>上記緩衝液が、トリス-酢酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液またはトリス-ホウ酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液である、<1>または<2>に記載の電気泳動用ゲルの製造方法。 <3> The method for producing an electrophoresis gel according to <1> or <2>, wherein the buffer solution is tris-acetic acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution or tris-boric acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution.
<4>アガロースの粉末とガラクトマンナンの粉末とを含むアガロース-ガラクトマンナン混合粉末。 <4> Agarose-galactomannan mixed powder containing agarose powder and galactomannan powder.
<5>上記アガロースの粉末に対する上記ガラクトマンナンの粉末の重量比(ガラクトマンナンの粉末の重量/アガロースの粉末の重量)が0.3~2である、<4>に記載のアガロース-ガラクトマンナン混合粉末。 <5> The agarose-galactomannan mixture according to <4>, wherein the weight ratio of the galactomannan powder to the agarose powder (weight of the galactomannan powder / weight of the agarose powder) is 0.3 to 2. Powder.
<6><4>または<5>に記載のアガロース-ガラクトマンナン混合粉末を備える電気泳動用ゲル製造キット。 <6> A gel production kit for electrophoresis comprising the agarose-galactomannan mixed powder according to <4> or <5>.
<7>トリス-酢酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液またはトリス-ホウ酸-エチレンジアミン四酢酸緩衝液をさらに備える、<6>に記載の電気泳動用ゲル製造キット。 <7> The gel production kit for electrophoresis according to <6>, further comprising a Tris-acetic acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution or a Tris-boric acid-ethylenediaminetetraacetic acid buffer solution.
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples, but the present invention is not limited to the following examples.
〔1.アガロースの粉末を用いた電気泳動方法〕
[1-1.電気泳動方法]
後述の実施例1~4および参考例1~3にて共通して行った電気泳動方法について説明する。
[1. Electrophoresis method using agarose powder]
[1-1. Electrophoresis method]
The electrophoresis method commonly performed in Examples 1 to 4 and Reference Examples 1 to 3 described later will be described.
(1)電気泳動
電気泳動装置(Mupidミニゲル泳動槽、ミューピッド社(旧アドバンス社)製)にゲルをセットした。ゲルに形成されたウェルに、DNAサイズマーカーを3~5μL加えた。DNAサイズマーカーとしては、下記の(a)~(d)を用いた。
(a)λHIIIマーカー(ニッポンジーン社製)に、発明者が作製した550bpおよび720bpのDNAを追加したもの
(b)1~10kbのDNA(1-10kb DNA Markers, FMC社製)
(c)0.1~10kbのDNA(Gene Ladder Fast2,ニッポンジーン社製)
(d)0.1~2kbのDNA(Gene Ladder 100, ニッポンジーン社製)
100Vで30分間、室温にて電気泳動を行った。泳動バッファーとしては、TAE緩衝液(pH8.0;40mM Tris-HCl、20mM 酢酸ナトリウム、2mM EDTA)を用いた。なお、電気泳動は、Molecular Cloning: A LABORATORY MANUAL, T. Maniatis, EF Fritsch, J. Sambrook, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982を参考にして常法により実施した。
(1) Electrophoresis The gel was set in an electrophoresis device (Mupid mini gel electrophoresis tank, manufactured by Mupid (formerly Advance)). 3-5 μL of DNA size marker was added to the wells formed in the gel. The following (a) to (d) were used as DNA size markers.
(A) λHIII marker (manufactured by Nippon Gene) plus 550 bp and 720 bp DNA prepared by the inventor (b) 1 to 10 kb of DNA (1-10 kb DNA Markers, manufactured by FMC).
(C) 0.1 to 10 kb of DNA (Gene Ladder Fast2, manufactured by Nippon Gene)
(D) 0.1 to 2 kb of DNA (Gene Ladder 100, manufactured by Nippon Gene)
Electrophoresis was performed at room temperature for 30 minutes at 100 V. As the migration buffer, TAE buffer (pH 8.0; 40 mM Tris-HCl, 20 mM sodium acetate, 2 mM EDTA) was used. The electrophoresis was carried out by a conventional method with reference to Molecular Cloning: A LABORATORY MANUAL, T. Maniatis, EF Fritsch, J. Sambrook, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982.
(2)ゲルの染色
エチジウムブロマイド(0.5μg/mL)を溶かしたTAE緩衝液に、電気泳動後のゲルを15分間浸漬した。さらに、当該ゲルを蒸留水に5分間、静置浸漬した。
(2) Staining of gel The gel after electrophoresis was immersed in a TAE buffer solution in which ethidium bromide (0.5 μg / mL) was dissolved for 15 minutes. Further, the gel was immersed in distilled water for 5 minutes.
(3)ゲルの撮影
アガロースゲル撮影装置(UVイルミネーター;Model BioDoc-It(登録商標) Imaging system, UVP社製)を用いてゲルを撮影した。
(3) Photographing the gel The gel was photographed using an agarose gel photographing apparatus (UV illuminator; Model BioDoc-It (registered trademark) Imaging system, manufactured by UVP).
[1-2.ガラクトマンナンの混合の有無に関する比較]
<参考例1>
(1)アガロースの溶解
蓋付きの200mLガラス瓶に、100mLのTAE緩衝液(pH8.0;40mM Tris-HCl、20mM 酢酸ナトリウム、2mM EDTA)およびスターラーバーを入れた。当該ガラス瓶に、アガロース(Agarose H, ニッポンジーン社製)0.5gを投入し、蓋をして上下に2~3回程度、素早く振盪した。マイクロウェーブオーブンを用いて、上記ガラス瓶を100℃で2分程度加熱し、アガロースを溶解させた。その後、ガラス瓶をスターラーに乗せ、撹拌した。これにより、アガロース溶液を得た。当該アガロース溶液においては、アガロースが完全に溶解されていることを確認した。
[1-2. Comparison of the presence or absence of galactomannan mixture]
<Reference example 1>
(1) Dissolution of agarose In a 200 mL glass bottle with a lid, 100 mL of TAE buffer (pH 8.0; 40 mM Tris-HCl, 20 mM sodium acetate, 2 mM EDTA) and stirrer bar were placed. 0.5 g of agarose (Agarose H, manufactured by Nippon Gene Co., Ltd.) was put into the glass bottle, covered with a lid, and shaken quickly up and down about 2 to 3 times. Using a microwave oven, the glass bottle was heated at 100 ° C. for about 2 minutes to dissolve the agarose. Then, the glass bottle was placed on a stirrer and stirred. This gave an agarose solution. It was confirmed that the agarose was completely dissolved in the agarose solution.
(2)ゲルの作製
上述の電気泳動装置に付属しているサンプルコーム(8ウェル用)およびゲルプレート(幅54mm、長さ60mm、高さ10mm)をゲル作製用トレーにそれぞれセットした。当該ゲル作製用トレーにアガロース溶液13mLを流し込んだ。アガロース溶液を室温で1時間放置し、固化させた。
(2) Preparation of gel The sample comb (for 8 wells) and the gel plate (width 54 mm, length 60 mm, height 10 mm) attached to the above-mentioned electrophoresis device were set in the gel preparation trays, respectively. 13 mL of agarose solution was poured into the gel preparation tray. The agarose solution was left at room temperature for 1 hour to solidify.
固化したゲルの上にTAE緩衝液を少量入れ、サンプルコームを注意深く抜き取った。このようにしてゲルを作製した。 A small amount of TAE buffer was placed on the solidified gel and the sample comb was carefully removed. The gel was prepared in this way.
<実施例1>
アガロース(Agarose H, ニッポンジーン社製)0.3gおよびガラクトマンナン(AgarMate(登録商標)(CAT No. AGM 200), Diversified Biotech社製)0.1gをそれぞれ秤量した。薬さじを用いて、これらをよく撹拌混合した。
<Example 1>
0.3 g of agarose (Agarose H, manufactured by Nippon Gene) and 0.1 g of galactomannan (AgarMate® (CAT No. AGM 200), manufactured by Diversified Biotech) were weighed respectively. These were well stirred and mixed using a spatula.
得られた混合粉末0.4gを、上述のアガロース0.5gの代わりに用いたこと以外は参考例1と同様に、ゲルを作製した。 A gel was prepared in the same manner as in Reference Example 1 except that 0.4 g of the obtained mixed powder was used instead of 0.5 g of the above-mentioned agarose.
<電気泳動>
参考例1および実施例1のゲルについて同時に電気泳動を行った。図1は、参考例1および実施例1の電気泳動の結果を示す図である。図1に示したDNAのサイズを表す目盛は、参考例1のバンドに基づく。汎用されるアガロースの濃度範囲は、0.5~2重量%である。実施例1は、これよりも低濃度である0.3重量%のアガロースを含む。それにもかかわらず、実施例1では、参考例1と同等の分離能が得られた。参考例1および実施例1では、1~23kbpにて、1kbp毎の違いがよく分離されていることがわかる。
<Electrophoresis>
The gels of Reference Example 1 and Example 1 were electrophoresed at the same time. FIG. 1 is a diagram showing the results of electrophoresis of Reference Example 1 and Example 1. The scale representing the size of the DNA shown in FIG. 1 is based on the band of Reference Example 1. The concentration range of commonly used agarose is 0.5 to 2% by weight. Example 1 contains 0.3% by weight agarose, which is a lower concentration. Nevertheless, in Example 1, the same separability as in Reference Example 1 was obtained. In Reference Example 1 and Example 1, it can be seen that the differences in 1 kbp are well separated from 1 to 23 kbp.
なお、アガロース0.3重量%を単独で使用した場合は極めて脆弱なゲルが得られ、使用不可能であった。これに対し、実施例1では、ガラクトマンナンの添加により、ゲルの強度が増大した。 When 0.3% by weight of agarose was used alone, an extremely fragile gel was obtained and it could not be used. On the other hand, in Example 1, the strength of the gel was increased by the addition of galactomannan.
[1-3.アガロースの含有量に関する比較]
<参考例2>
参考例1と同様にしてゲルを作製した。
[1-3. Comparison of agarose content]
<Reference example 2>
A gel was prepared in the same manner as in Reference Example 1.
<参考例3>
アガロース0.5gの代わりにアガロース1.5gを用いたこと以外は参考例1と同様にして、ゲルを作製した。
<Reference example 3>
A gel was prepared in the same manner as in Reference Example 1 except that 1.5 g of agarose was used instead of 0.5 g of agarose.
<電気泳動>
参考例2および参考例3のゲルについて同時に電気泳動を行った。図2は、参考例2および参考例3の電気泳動の結果を示す図である。アガロースをより高濃度にて用いた参考例3では、参考例2に比べてマーカーdの100bp毎の違いがより明確になった。参考例3では、参考例2に比べて分離能が改善されたことがわかる。
<Electrophoresis>
The gels of Reference Example 2 and Reference Example 3 were electrophoresed at the same time. FIG. 2 is a diagram showing the results of electrophoresis of Reference Example 2 and Reference Example 3. In Reference Example 3 in which agarose was used at a higher concentration, the difference in marker d every 100 bp became clearer than in Reference Example 2. It can be seen that in Reference Example 3, the resolution was improved as compared with Reference Example 2.
[1-4.ガラクトマンナンの含有量に関する比較]
<実施例2>
実施例1と同様にしてゲルを作製した。
[1-4. Comparison of galactomannan content]
<Example 2>
A gel was prepared in the same manner as in Example 1.
<実施例3>
ガラクトマンナン0.1gの代わりにガラクトマンナン0.3gを用いたこと以外は実施例1と同様にして、ゲルを作製した。
<Example 3>
A gel was prepared in the same manner as in Example 1 except that 0.3 g of galactomannan was used instead of 0.1 g of galactomannan.
<実施例4>
ガラクトマンナン0.1gの代わりにガラクトマンナン0.6gを用いたこと以外は実施例1と同様にして、ゲルを作製した。
<Example 4>
A gel was prepared in the same manner as in Example 1 except that 0.6 g of galactomannan was used instead of 0.1 g of galactomannan.
<電気泳動>
実施例2、実施例3および実施例4のゲルについて同時に電気泳動を行った。図3は、実施例2、実施例3および実施例4の電気泳動の結果を示す図である。実施例2、実施例3および実施例4を比較すると、ガラクトマンナンの濃度を0.1重量%、0.3重量%、0.6重量%と増加させるにつれて、マーカーdの100bp毎の違いがより明確になることがわかった。上述の参考例3は、通常、研究室で汎用されているような、アガロースを1.5重量%含むゲルである。この参考例3のゲルに比べても、実施例2~4では、100~2000bpにおいて格段に高い分離能が示されている。100~2000bpの領域は、PCR反応の結果解析に多用される領域である。従って、本発明の一実施形態に係る電気泳動用ゲルの製造方法は、将来的に汎用されるものになり得ることが強く示唆される。なお、実施例2~4のゲルは、いずれも強度に優れていた。
<Electrophoresis>
The gels of Example 2, Example 3 and Example 4 were electrophoresed at the same time. FIG. 3 is a diagram showing the results of electrophoresis of Example 2, Example 3, and Example 4. Comparing Example 2, Example 3 and Example 4, as the concentration of galactomannan was increased to 0.1% by weight, 0.3% by weight and 0.6% by weight, the difference in marker d for each 100bp was increased. It turned out to be clearer. Reference Example 3 above is a gel containing 1.5% by weight of agarose, which is usually used in the laboratory. Compared with the gel of Reference Example 3, in Examples 2 to 4, much higher separation ability is shown at 100 to 2000 bp. The region of 100 to 2000 bp is a region often used for analysis of the result of PCR reaction. Therefore, it is strongly suggested that the method for producing an electrophoresis gel according to an embodiment of the present invention may be general-purpose in the future. The gels of Examples 2 to 4 were all excellent in strength.
[1-5.まとめ]
参考例1~3および実施例1~4にて使用したゲルにおけるアガロースおよびガラクトマンナンの濃度を下記表1に示す。
[1-5. summary]
The concentrations of agarose and galactomannan in the gels used in Reference Examples 1 to 3 and Examples 1 to 4 are shown in Table 1 below.
従来、分離すべきDNAの長さに応じて、様々な濃度のアガロースゲルが利用されてきた。そして、その濃度毎に最適なアガロース製品が市販されている。本発明の一実施形態に係る電気泳動用ゲルの製造方法によれば、アガロースの粉末とガラクトマンナンの粉末とを混合した粉末を用いることにより、100bp~23kbpまでのDNAを簡単に分離できる。従って、作製したいアガロースゲルの濃度に応じて異なるアガロース製品を準備する必要はない。 Conventionally, agarose gels having various concentrations have been used depending on the length of DNA to be separated. Then, the most suitable agarose product for each concentration is commercially available. According to the method for producing an electrophoresis gel according to an embodiment of the present invention, DNA from 100 bp to 23 kbp can be easily separated by using a powder obtained by mixing agarose powder and galactomannan powder. Therefore, it is not necessary to prepare different agarose products depending on the concentration of the agarose gel to be produced.
〔2.寒天末を用いた電気泳動方法〕
[2-1.電気泳動方法]
後述の実施例5および比較例1においては、DNAサイズマーカーとして下記の(e)および(f)を用いた以外は、[1-1.電気泳動方法]と同様に電気泳動を行った。
(e)0.1~20kbのDNA(Gene ladder wide 2, ニッポンジーン社製)
(f)0.1~2kbのDNA(Gene Ladder 100, ニッポンジーン社製)
[2-2.ガラクトマンナンの混合の有無に関する比較]
<実施例5>
アガロース0.3gの代わりに寒天末(精製寒天末, ナカライテスク社製)0.5gを用い、ガラクトマンナンを0.5g用いたこと以外は、実施例1と同様にしてゲルを作製した(寒天末0.5重量%、ガラクトマンナン0.5重量%)。
[2. Electrophoresis method using agar powder]
[2-1. Electrophoresis method]
In Example 5 and Comparative Example 1 described later, except that the following (e) and (f) were used as DNA size markers, [1-1. Electrophoresis was performed in the same manner as in [Electrophoresis method].
(E) 0.1 to 20 kb of DNA (Gene ladder wide 2, manufactured by Nippon Gene)
(F) 0.1 to 2 kb of DNA (Gene Ladder 100, manufactured by Nippon Gene)
[2-2. Comparison of the presence or absence of galactomannan mixture]
<Example 5>
A gel was prepared in the same manner as in Example 1 except that 0.5 g of agar powder (purified agar powder, manufactured by Nakaraitesk Co., Ltd.) was used instead of 0.3 g of agarose and 0.5 g of galactomannan was used. Powder 0.5% by weight, galactomannan 0.5% by weight).
<比較例1>
アガロースの代わりに寒天末(精製寒天末, ナカライテスク社製)を用いたこと以外は、参考例1と同様にしてゲルを作製した(寒天末0.5重量%)。
<Comparative Example 1>
A gel was prepared in the same manner as in Reference Example 1 except that agar powder (purified agar powder, manufactured by Nacalai Tesque) was used instead of agarose (0.5% by weight of agar powder).
<電気泳動>
実施例5および比較例1のゲルについて同時に電気泳動を行った。図4は、実施例5および比較例1の電気泳動の結果を示す図である。なお、図中の*は、2kbのDNAバンドの位置を示している。実施例5のマーカーeのDNAバンド18本のうちの16本、および、マーカーfのDNAバンド全12本が完全に分離されていることが分かる。比較例1では、マーカーeおよびfのいずれも、1kb以上のDNAバンドは分離されているが、0.1kb以上1kb未満のDNAバンドは分離できていないことが分かる。
<Electrophoresis>
The gels of Example 5 and Comparative Example 1 were electrophoresed at the same time. FIG. 4 is a diagram showing the results of electrophoresis of Example 5 and Comparative Example 1. Note that * in the figure indicates the position of the 2 kb DNA band. It can be seen that 16 of the 18 DNA bands of the marker e of Example 5 and all 12 DNA bands of the marker f are completely separated. In Comparative Example 1, it can be seen that the DNA bands of 1 kb or more were separated from each of the markers e and f, but the DNA bands of 0.1 kb or more and less than 1 kb could not be separated.
これらの結果は、アガロースの代わりに寒天末を用いた電気泳動においても、ガラクトマンナンの使用が低分子領域の分離に極めて有効であることを示している。また、寒天末を用いたゲルは脆弱であることが知られている。しかし、ガラクトマンナンの添加により、ゲルの強度が向上した。つまり、ガラクトマンナンの添加により、ゲルの強度の問題も解決することができた。寒天末はアガロースより低廉である。よって、ガラクトマンナンと組み合わせることによって寒天末の利用が増加することが期待される。 These results indicate that the use of galactomannan is also extremely effective in separating small molecule regions in electrophoresis using agar powder instead of agarose. In addition, gels using agar powder are known to be fragile. However, the addition of galactomannan improved the strength of the gel. That is, the addition of galactomannan could also solve the problem of gel strength. Agar powder is cheaper than agarose. Therefore, it is expected that the use of agar powder will increase when combined with galactomannan.
本発明は、電気泳動を伴う解析が行われる様々な分野に利用することができる。 The present invention can be used in various fields in which analysis involving electrophoresis is performed.
Claims (6)
上記混合粉末を緩衝液に溶解することによって溶液を得る工程と、
上記溶液をゲル化させることによって核酸電気泳動用ゲルを得る工程と、を含む、核酸電気泳動用ゲルの製造方法。 A step of obtaining a mixed powder by mixing a powder containing agarose and a powder of galactomannan not irradiated with gamma rays .
The step of obtaining a solution by dissolving the above mixed powder in a buffer solution, and
A method for producing a nucleic acid electrophoresis gel, which comprises a step of obtaining a nucleic acid electrophoresis gel by gelling the above solution.
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