JP7044252B2 - C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症の予測 - Google Patents
C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症の予測 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7044252B2 JP7044252B2 JP2018515408A JP2018515408A JP7044252B2 JP 7044252 B2 JP7044252 B2 JP 7044252B2 JP 2018515408 A JP2018515408 A JP 2018515408A JP 2018515408 A JP2018515408 A JP 2018515408A JP 7044252 B2 JP7044252 B2 JP 7044252B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- risk
- hepatocellular carcinoma
- elimination
- hepatitis
- polymorphism
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
以上の成果及び考察に基づき以下の発明が提供される。
(1)被検者から採取された核酸検体について、米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型を検出し、以下の(a)~(c)のいずれかの基準に従いリスクを判定することを特徴とする、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスクを判定するための方法:
(a)塩基がTのアリルが検出されればリスクが高い;
(b)AA型のリスク <AT型のリスク,TT型のリスク;
(c)AA型のリスク < AT型のリスク < TT型のリスク。
(2)前記一塩基多型と、高齢、男性、血小板低値、肝線維化進展、ALT高値、α-フェトプロテイン高値、γ-GTP高値、アルブミン低値、及び糖尿病の合併からなる群より選択される一以上のリスク因子とを併用し、肝細胞癌発症のリスクを判定することを特徴とする、(1)に記載のリスクを判定するための方法。
(3)以下のステップ(i)及び(ii)からなる判定手順を含む、(2)に記載のリスクを判定するための方法、
(i)被検者を肝線維化ステージで分類するステップ、
(ii)前記一塩基多型と、高齢、男性、血小板低値、ALT高値、α-フェトプロテイン高値、γ-GTP高値、アルブミン低値、及び糖尿病の合併からなる群より選択される一以上のリスク因子とを併用して被検者を更に分類し、被検者のリスクを判定するステップ。
(4)ステップ(i)において、肝線維化ステージが0~2の第1区分と、肝線維化ステージが3~4の第2区分を設定し、
被検者が第1区分に分類された場合には、前記一塩基多型と、リスク因子としての高齢を併用して被検者を更に分類し、被検者のリスクを判定し、
被検者が第2区分に分類された場合には、前記一塩基多型と、リスク因子としてのアルブミン低値及びα-フェトプロテイン高値を併用して被検者を更に分類し、被検者のリスクを判定する、(3)に記載のリスクを判定するための方法。
(5)米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型を検出するための核酸であって、前記多型部位を含む一定領域に相補的な配列を含み、前記領域に対して特異的にハイブリダイズする核酸を含む、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査用試薬。
(6)(5)に記載の試薬を含む、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査用キット。
(7)米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型の、以下の(a)~(c)のいずれかの基準に従いC型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症を予測するためのバイオマーカーとしての利用:
(a)塩基がTのアリルが検出されればリスクが高い;
(b)AA型のリスク <AT型のリスク,TT型のリスク;
(c)AA型のリスク < AT型のリスク < TT型のリスク。
その他、本発明は、以下のような形態として実現することも可能である。
[1]被検者から採取された核酸検体について、米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型を検出することを特徴とする、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査法。
[2]以下の(a)~(c)のいずれかの基準に従いリスクを判定することを特徴とする、[1]に記載のリスク検査法:
(a)塩基がTのアリルが検出されればリスクが高い;
(b)AA型のリスク <AT型のリスク,TT型のリスク;
(c)AA型のリスク < AT型のリスク < TT型のリスク。
[3]前記一塩基多型と、高齢、男性、血小板低値、肝線維化進展、ALT高値、α-フェトプロテイン高値、γ-GTP高値、アルブミン低値、及び糖尿病の合併からなる群より選択される一以上のリスク因子とを併用し、肝細胞癌発症のリスクを判定することを特徴とする、[1]又は[2]に記載のリスク検査法。
[4]以下のステップ(i)及び(ii)からなる判定手順を含む、[3]に記載のリスク検査法、
(i)被検者を肝線維化ステージで分類するステップ、
(ii)前記一塩基多型と、高齢、男性、血小板低値、ALT高値、α-フェトプロテイン高値、γ-GTP高値、アルブミン低値、及び糖尿病の合併からなる群より選択される一以上のリスク因子とを併用して被検者を更に分類し、被検者のリスクを判定するステップ。
[5]ステップ(i)において、肝線維化ステージが0~2の第1区分と、肝線維化ステージが3~4の第2区分を設定し、
被検者が第1区分に分類された場合には、前記一塩基多型と、リスク因子としての高齢を併用して被検者を更に分類し、被検者のリスクを判定し、
被検者が第2区分に分類された場合には、前記一塩基多型と、リスク因子としてのアルブミン低値及びα-フェトプロテイン高値を併用して被検者を更に分類し、被検者のリスクを判定する、[4]に記載のリスク検査法。
[6]以下のステップ(I)を含む、[1]~[5]のいずれか一項に記載のリスク検査法、
(I)判定結果に基づき、被検者の治療方針を決定又は変更するステップ。
[7]米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型を検出するための核酸であって、前記多型部位を含む一定領域に相補的な配列を含み、前記領域に対して特異的にハイブリダイズする核酸を含む、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査用試薬。
[8][7]に記載の試薬を含む、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査用キット。
[9]米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型からなる、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症予測マーカー。
本発明の第1の局面はC型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査法に関する。本発明において「肝細胞癌発症のリスク」とは、肝細胞癌を将来発症するおそれ(可能性)の程度をいう。また、本発明において「C型肝炎ウイルス排除後」とは、事前の治療によって、C型肝炎ウイルスに関してウイルス学的著効(Sustained virological response, SVR)になっていることを意味する。従って、本発明のリスク検査法は、C型肝炎に対する治療を受けた患者が被検者となる。SVRは、治療終了後、24週で血中HCV RNAが検出感度以下であると定義される。事前の治療の種類は特に限定されず、例えば、インターフェロン(IFN)療法(IFNαやPEG化IFNα、IFNβの使用)、抗ウイルス薬による治療、インターフェロン及び抗ウイルス薬の併用療法などが該当する。抗ウイルス薬としてはプリンヌクレオシドアナログ(例えばリバビリン)、NS3/4Aプロテアーゼ阻害剤(例えば、テラブレビル、アスナプレビル)、NS5A阻害剤(ダスラタスビル、レジパスビル)、NS5Bポリメラーゼ阻害剤(ソホスブビル)などが用いられている。
<例1>
フォワードプライマー:5’-AACTCCATTCCAAGCATTTACCAGAAAATAAAATTCTGTA-3’(配列番号2)
リバースプライマー:5’-ACCTCATATAATTTAGAATTATAGTTCATCACTCATTAACCCTA-3’(配列番号3)
メジャーアリル(A)用のクエリープローブ(query probe):5’-ACCACCGCTTGAATACAAAACATCTTCAGAAATAGATGTCAATGtACA-3’(配列番号4)
マイナーアリル(T)用のクエリープローブ(query probe):5’- CCGTGTCCACTCTAGAAAAACCTTCAGAAATAGATGTCAATGtACT-3’(配列番号5)
コモンプローブ(common probe):5’-GTGAAATGGACATAAGTGGGCAAAAAAAAAAAAGAGTTCATGGACGTAATGTAAGTGAGCA-3’(配列番号6)
フォワードプライマー:5’-GCTCGTATGTCATTTCAACTCTTTTT-3’(配列番号7)
リバースプライマー:5’-CCTGACCTTGCCTTCAGAAATAG-3’(配列番号8)
メジャーアリル(A)用のプローブ:5’-CCATTTCACAGTTCATT-3’(配列番号9)
マイナーアリル(T)用のプローブ:5’-TCCATTTCACTGTTCAT-3’(配列番号10)
(a)塩基がTのアリルが検出されればリスクが高い
(b)AA型のリスク <AT型のリスク,TT型のリスク
(c)AA型のリスク < AT型のリスク < TT型のリスク
リスク1:rs17047200多型がAA型、リスク因子を保有しない
リスク2:rs17047200多型がAT型、リスク因子の保有数が一つ
リスク3:rs17047200多型がAT型又はTT型、リスク因子の保有数が2
リスク4:rs17047200多型がAT型又はTT型、リスク因子の保有数が3
(但し、リスクの程度は、リスク1<リスク2<リスク3<リスク4)
(i)被検者を肝線維化ステージで分類するステップ
(ii)前記一塩基多型と、高齢、男性、血小板低値、ALT高値、α-フェトプロテイン高値、γ-GTP高値、アルブミン低値、及び糖尿病の合併からなる群より選択される一以上のリスク因子とを併用して被検者を更に分類し、被検者のリスクを判定するステップ
本発明の他の局面は、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査に用いられる試薬及びキットを提供する。本発明の試薬は、rs17047200多型を検出するための核酸(多型検出用核酸)からなる。
(1)多型位置の塩基がAである染色体領域(部分染色体領域)に相補的な配列を有する非標識又は標識核酸
(2)多型位置の塩基がTである染色体領域(部分染色体領域)に相補的な配列を有する非標識又は標識核酸
(3)(1)の核酸と(2)の核酸との組合せ
(4)多型位置の塩基がAである場合にのみ、該多型部位を含むDNAフラグメントを特異的に増幅するように設計された核酸セット
(5)多型位置の塩基がTである場合にのみ、該多型部位を含むDNAフラグメントを特異的に増幅するように設計された核酸セット
(6)(4)の核酸セットと(5)の核酸セットとの組合せ
(7)多型位置を含むDNAフラグメントを特異的に増幅するように設計された核酸セットであって、多型位置の塩基がAである、当該多型位置を含む染色体領域(部分染色体領域)に対して特異的にハイブリダイズするセンスプライマー、及び/又は多型位置の塩基がTである、当該多型位置を含む染色体領域(部分染色体領域)に対して特異的にハイブリダイズするセンスプライマーと、当該部分染色体領域の近傍領域に対して特異的にハイブリダイズするアンチセンスプライマーと、からなる核酸セット
1.患者
2007年から2015年にかけて、インターフェロンを基本とした治療によりHCV排除が得られた943人(GWASのために457人、続く再現性検証解析のために486人)のゲノムDNA検体および臨床情報を本邦43施設より収集した。GWASにおいては、SNPタイピング結果の得られたケース群(G-Case, n=123):治療終了後1年以上経過して肝細胞癌を発症した例、コントロール群[G-CTRL (≧5y), n=333]:治療終了後5年以上経過して肝細胞癌を発症していない例の2群間の関連解析を行った。一方、再現性検証解析においては、ケース群(R-Case, n=130):治療終了後1年以上経過して肝細胞癌を発症した例、コントロール群[R-CTRL (≧3y), n=356]:治療終了後3年以上経過して肝細胞癌を発症していない例、このうち治療終了後5年以上経過して肝細胞癌を発症していない例を[R-CTRL (≧5y), n=210]と層別化し関連解析を行った(図1、2)。
GWASにおけるSNPタイピングには、Affymetrix Axiom Genome-Wide ASI 1 Array Plate (Affymetrix, Inc. Santa Clara, CA) を用い、SNPコール率(call rate)≧95%、マイナーアリル頻度(MAF)≧5%、ハーディー・ワインバーグ平衡(HWE)P ≧ 0.001を満たした443,299 SNPsを関連解析対象とした。再現性検証解析におけるSNPタイピングは、DigiTag2アッセイ(Nishida N, Tanabe T, Takasu M, et al. Further development of multiplex single nucleotide polymorphism typing method, the DigiTag2 assay. Anal Biochem 2007;364:78-85.)、あるいはTaqMan(登録商標) SNP Genotyping Assays(Applied Biosystems, Carlsbad, CA)を用いた。
GWASおよび再現性検証解析におけるSNPのアリル頻度と発癌との関連解析はchi-square testを用い、ゲノムワイド有意水準はBonferroni補正によりGWAS: P = 1.12 × 10-7 (0.05/443,299)、再現性検証解析:P = 6.49 × 10-4(0.05/77)とし、これらの統合解析における有意水準はP < 5 × 10-8とした。その他の一般解析における2群間比較にはMann-Whitney U-test、累積発癌率はKaplan-Meier法、累積発癌リスクの多変量解析にはstepwise Cox proportional hazard modelを使用し、P < 0.05を有意基準とした。
再現性検証解析のSNPタイピングに用いたDigiTag2アッセイにおいて設計したプライマー、プローブ配列は図3のとおりである。DigiTag2法は、解析対象となるSNP毎にSNP特異的なコモンプローブ(common probe)と、アリル特異的なクエリープローブ(query probe)を用いて、一度に複数か所のSNPについて遺伝子型を決定することのできるマルチプレックスSNPタイピング法の一種である(Nishida N, Tanabe T, Takasu M, et al. Further development of multiplex single nucleotide polymorphism typing method, the DigiTag2 assay. Anal Biochem 2007;364:78-85.)。検出用プローブは、SNP位置と隣接して下流に存在する3'側プローブ(コモンプローブ)とSNPを3'末端に含む上流に存在する5'側プローブ'(クエリープローブ)に分かれている。クエリープローブはSNP毎にアリルに対応した2種類を用意する。クエリープローブの3'末端に対応するSNPの遺伝子型に応じて、それと相補的な塩基を持つクエリープローブだけが、3'側に隣接して存在するコモンプローブと結合することができる。尚、検出のために各クエリープローブの5'末端にはアリルに対応して2種類のクエリータグ(query tag)が連結されており、またコモンプローブの3'末端にはSNPごとに異なるコモンタグ(common tag)が連結されている。コモンプローブに連結されたコモンタグと相補的な塩基配列を持つオリゴDNAを固定したDNAチップを用いて検出を行う。検体の遺伝子型に応じて生成されたクエリープローブとコモンプローブの結合産物は、DNAチップ上のコモンタグと相補的な塩基配列を持つオリゴDNAに捕獲される。アリルに対応するクエリータグに対応して2種類の蛍光分子を導入することで、各SNPの遺伝子型が決定される。
1.HCV排除後の肝細胞癌発症に関連するSNPの同定
GWASにより、G-Case (n=123) vs. G-CTRL (≧5y)(n=333)における443,299 SNPsのアリル頻度比較を行った結果、70 SNPsにおいてP < 10-4を満たした(図5)。このうち、6番染色体C6orf118下流に存在する上位二つのSNPsはゲノムワイド有意水準を満たした[rs4709076, odds ratio (OR) = 2.66, P = 1.17 × 10-8; rs4709927, OR = 2.63, P = 1.95 × 10-8]。さらに、15番染色体NTRK3内に存在するrs922231、rs922232、rs11073757も強い関連を示した。そこで、まずこれらの領域のSNPに関して、GWASとは独立した486例による再現性検証解析を行ったが、再現性は得られなかった。次にGWASにおいてP < 10-4を満たした70 SNPsと過去の報告でHCV関連肝硬変、肝細胞癌発症との関連が示された9 SNPsについて、再現性検証解析を実施したところ、最終的に4番染色体のTLL1のイントロン領域に位置するrs17047200において(図6)、有意な再現性が得られた。このSNPについて、GWASと再現性検証解析を統合した結果、ゲノムワイド有意水準を満たした(OR = 2.37, P = 2.66 × 10-8)(図7)。Kaplan-Meier法によりrs17047200の遺伝子型別の累積発癌率をみたところ、GWAS、再現性検証解析において、ともにAA群に比べAT/TT群で有意に発癌率が高い結果が得られた(図8)。
次に、全症例(n=942)の臨床データを用いて、HCV排除後の肝細胞癌発症リスクに関する多変量解析を行ったところ、従来報告されてきた男性、高齢、血小板低値、肝線維化進展、糖尿病合併、アルブミン低値、α-フェトプロテイン高値に加え、rs17047200 AT/TTが独立した危険因子であることが判明した[hazard ratio (HR) = 1.78, P = 0.008](図9)。これまでに、肝線維化進展がHCV排除後発癌の主要な危険因子であることが報告されており、肝線維化進展度別にrs17047200遺伝子型の関連を検討した。肝線維化非進展例においては、多変量解析の結果、高齢(HR = 2.90, P = 0.001)、rs17047200 AT/TT (HR = 4.26, P = 0.005)が独立した危険因子であり(図10)、これらの組み合わせにより、HCV排除後発癌リスクは3群に分けられた(図11A)。肝線維化進展例においては、多変量解析の結果、α-フェトプロテイン高値(治療終了後)(HR = 1.90, P < 0.001)、アルブミン低値 (HR = 0.43, P = 0.004)、rs17047200 AT/TT (HR = 1.86, P = 0.017)が独立した危険因子であり(図12)、これらの組み合わせ(危険因子の合計数)により、HCV排除後発癌リスクは2群に分けられた(図11B)。
Mammalian Tolloid-like 1 (mTLL1) は、bone morphogenetic protein 1/tolloid (BMP1/TLD)-like proteinase ファミリーの1つであり、TLL1およびBMP1と相互作用するタンパクをin silico解析したところ、細胞外基質産生、TGF-βシグナルに関与していることが判明した(図14)。これらは様々な臓器における線維化形成に深く関わっていることが知られているため、ヒト肝星細胞株、肝線維化動物モデル、ヒト肝組織検体を用いてTLL1発現解析を行った。ヒト肝星細胞株(HHSteC)の培養上清にTGF-β1を添加すると星細胞活性化の指標であるACTA2と同様に、TLL1 mRNAレベルは亢進した(図15A)。次に、コリン欠乏メチオニン減量(CDAA: choline-deficient L-amino acid-defined)飼料投与による非アルコール性脂肪性肝炎(NASH: Non-alcoholic steatohepatitis)から肝線維化・発癌をきたすモデルラットを用いて解析したところ、肝線維化が進展するに従いTll1 mRNAレベルは亢進した(図15C)。同様の傾向は、ヒト正常肝(転移性肝癌の肝非癌部)、C型慢性肝炎患者の肝組織を用いた検討においても認められた(図16)。すなわち、TLL1は肝星細胞活性化あるいは肝線維化進展に伴って強く誘導され、従来、肝癌は肝線維化の進展した状態(肝硬変)から発症しやすいことが知られていることから、TLL1遺伝子は主に肝線維化進展を介して肝発癌に寄与している可能性が示唆された(図18)。
インターフェロン治療によりHCVを排除した日本人患者において、その後の肝細胞癌発症に関わるSNP解析を、宿主ゲノム全体に亘って網羅的に実施した結果、強く関連する(ゲノムワイド有意水準を満たす)SNPを発見した。HCV排除後の肝細胞癌発症に関連するSNPの報告はこれまでになく、本研究が世界で始めてとなる。治療法の進歩により、ほとんどのHCV感染患者におけるウイルス排除が可能となった現在、HCV排除後の最も重要な問題が、発癌サーベイランスである。特に、欧米に比べ本邦においては、HCV感染患者は高齢、かつ肝線維化進展例が多いため、HCV排除後の肝細胞癌発症は高率であることが推測され、より精度の高い発癌予測法の確立が望まれている。本研究で同定したSNP: rs17047200の遺伝子型をHCV排除後の肝細胞癌発症予測マーカーとして用いることによって、危険性の高い患者群を絞り込むことが可能となる。さらに、従来報告されている危険因子と組み合わせることにより、より明確に発癌を予測するモデルを構築した(図11)。これらの成果により、リスクに応じた発癌サーベイランスといった個別化医療を展開することが可能となる(図19)。今後、実際にrs17047200遺伝子型測定を臨床応用することを想定し、リアルタイムPCR法によるSNPタイピングに必要なプライマー、プローブをrs17047200の前後の塩基配列から設計し、良好な結果を得た。前述した背景から、rs17047200遺伝子型を測定する対象患者は極めて多く、臨床的な意義は大きいと考えられる。また、TLL1を中心としたさらなる研究により、HCV排除後やその他の肝疾患(B型肝炎、NASHなど)を原因とする肝発癌のメカニズムの解明、新規の治療法の開発も期待できる。尚、rs17047200多型の遺伝子型及びアリル頻度の分布は人種間(アフリカ系を除く)で類似している(図13)。この事実は、rs17047200多型の予測マーカーとしての汎用性が高いことを示す。
配列番号3:人工配列の説明:リバースプライマー
配列番号4:人工配列の説明:メジャーアリル用のクエリープローブ
配列番号5:人工配列の説明:マイナーアリル用のクエリープローブ
配列番号6:人工配列の説明:コモンプローブ
配列番号7:人工配列の説明:フォワードプライマー
配列番号8:人工配列の説明:リバースプライマー
配列番号9:人工配列の説明:メジャーアリル用のプローブ
配列番号10:人工配列の説明:マイナーアリル用のプローブ
Claims (4)
- 被検者から採取された核酸検体について、米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型を検出し、以下の(a)~(c)のいずれかの基準に従いリスクを判定することを特徴とする、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスクを判定するための方法:
(a)塩基がTのアリルが検出されればリスクが高い;
(b)AA型のリスク <AT型のリスク,TT型のリスク;
(c)AA型のリスク < AT型のリスク < TT型のリスク。 - 米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型を検出するための核酸であって、前記多型部位を含む一定領域に相補的な配列を含み、前記領域に対して特異的にハイブリダイズする核酸を含む、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査用試薬。
- 請求項2に記載の試薬を含む、C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症のリスク検査用キット。
- 米国バイオテクノロジー情報センター(NCBI)のSNPデータベースにおける登録番号rs17047200で特定される一塩基多型の、以下の(a)~(c)のいずれかの基準に従いC型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症を予測するためのバイオマーカーとしての利用:
(a)塩基がTのアリルが検出されればリスクが高い;
(b)AA型のリスク <AT型のリスク,TT型のリスク;
(c)AA型のリスク < AT型のリスク < TT型のリスク。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016093483 | 2016-05-06 | ||
JP2016093483 | 2016-05-06 | ||
PCT/JP2017/013525 WO2017191720A1 (ja) | 2016-05-06 | 2017-03-31 | C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症の予測 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2017191720A1 JPWO2017191720A1 (ja) | 2019-03-07 |
JP7044252B2 true JP7044252B2 (ja) | 2022-03-30 |
Family
ID=60202882
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018515408A Active JP7044252B2 (ja) | 2016-05-06 | 2017-03-31 | C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症の予測 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10907216B2 (ja) |
EP (1) | EP3453760B1 (ja) |
JP (1) | JP7044252B2 (ja) |
WO (1) | WO2017191720A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP7138074B2 (ja) * | 2019-04-22 | 2022-09-15 | ジェネシスヘルスケア株式会社 | B型肝炎及び/又はc型肝炎のリスクを判定する方法 |
CN110358683B (zh) * | 2019-07-25 | 2022-04-26 | 中国科学院电工研究所 | 一种生物反应器自动控制装置 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011193786A (ja) | 2010-03-19 | 2011-10-06 | Japan Health Science Foundation | C型肝炎の治療効果を予測するためのマーカー群、検査方法及び検査用キット |
WO2012108527A1 (ja) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | 独立行政法人理化学研究所 | 肝細胞癌への進展予測マーカー |
WO2013030786A1 (en) | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Centre Hospitalier Universitaire Vaudois | Method for diagnosing or predicting hepatocellular carcinoma outcome |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB9725197D0 (en) | 1997-11-29 | 1998-01-28 | Secr Defence | Detection system |
WO2001042498A1 (fr) | 1999-12-10 | 2001-06-14 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Procede de detection de polymorphisme nucleotidique |
JP4235902B2 (ja) | 2002-09-02 | 2009-03-11 | 東洋紡績株式会社 | 塩基多型の同定方法 |
US20050255485A1 (en) * | 2004-05-14 | 2005-11-17 | Livak Kenneth J | Detection of gene duplications |
US20070048756A1 (en) * | 2005-04-18 | 2007-03-01 | Affymetrix, Inc. | Methods for whole genome association studies |
WO2010096174A1 (en) | 2009-02-17 | 2010-08-26 | The Board Of Trustees Of The Leland | Closure device and method |
-
2017
- 2017-03-31 US US16/097,954 patent/US10907216B2/en active Active
- 2017-03-31 JP JP2018515408A patent/JP7044252B2/ja active Active
- 2017-03-31 WO PCT/JP2017/013525 patent/WO2017191720A1/ja unknown
- 2017-03-31 EP EP17792653.2A patent/EP3453760B1/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011193786A (ja) | 2010-03-19 | 2011-10-06 | Japan Health Science Foundation | C型肝炎の治療効果を予測するためのマーカー群、検査方法及び検査用キット |
WO2012108527A1 (ja) | 2011-02-10 | 2012-08-16 | 独立行政法人理化学研究所 | 肝細胞癌への進展予測マーカー |
WO2013030786A1 (en) | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Centre Hospitalier Universitaire Vaudois | Method for diagnosing or predicting hepatocellular carcinoma outcome |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
MATSUURA K. et al.,Genome-Wide Association ,Gastroenterology, Epub 2017 Feb 3, Vol.152, No.6, p.1383-1394 |
NCBI, dbSNP Short Genetic Variations,ss 276972898,Submitted Date Dec 16, 2010,https://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ss.cgi?subsnp_id=276972898,[retrieved on 2017.06.05] |
NCBI, Probe, rs17042700, 2004,[retrieved on 2017.06.05],https://www.ncbi.nlm.nih.gov/probe/?term=rs17042700 |
TANAKA Y. et al.,Hum Mol Genet, 2011, Vol.20, No.17, p.3507-3516 |
URABE Y. et al.,J Hepatol, 2013, Vol.58, p.875-882 |
島上哲朗 他,C型肝炎・肝硬変患者,キャリアのフォローアップ戦略とエビデンス,日本臨床, 2015, vol.73, p.788-792 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3453760A4 (en) | 2019-11-27 |
US10907216B2 (en) | 2021-02-02 |
EP3453760B1 (en) | 2021-09-01 |
JPWO2017191720A1 (ja) | 2019-03-07 |
WO2017191720A1 (ja) | 2017-11-09 |
EP3453760A1 (en) | 2019-03-13 |
US20190093173A1 (en) | 2019-03-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Wang et al. | Transforming growth factor-β1 gene polymorphisms are associated with progression of liver fibrosis in Caucasians with chronic hepatitis C infection | |
Hayashi et al. | Association of interleukin 28B and mutations in the core and NS5A region of hepatitis C virus with response to peg‐interferon and ribavirin therapy | |
JP7044252B2 (ja) | C型肝炎ウイルス排除後の肝細胞癌発症の予測 | |
JP5924644B2 (ja) | 肝細胞癌への進展予測マーカー | |
WO2011146985A1 (en) | Method of determining response to treatment with immunomodulatory composition | |
KR101359851B1 (ko) | 간세포암종의 예후 진단용 단일 염기 다형성 | |
JP2013070660A (ja) | C型肝炎患者の経過予測方法 | |
JP6141275B2 (ja) | 線維症感受性il22ra2遺伝子およびその使用 | |
US20060257850A1 (en) | Methods of treatment and diagnosis of patients with hepatitis c infection | |
US20140271542A1 (en) | Genetic marker for predicting prognosis in patients infected with hepatitis c virus | |
AU2021216136A1 (en) | Biomarkers and uses thereof in the treatment of chronic hepatitis B infection | |
Al-Qahtani et al. | Genetic variation at− 1878 (rs2596542) in MICA gene region is associated with chronic hepatitis B virus infection in Saudi Arabian patients | |
JP5656159B2 (ja) | インターフェロン療法の効果予測用マーカー | |
WO2011138370A1 (en) | Antiviral treatment susceptibility gene and uses thereof | |
CN110484658B (zh) | TNFRSF13B基因rs34562254 SNP的应用 | |
EP2195448B1 (en) | Method to predict iris color | |
WO2015037681A1 (ja) | 抗甲状腺薬誘発性無顆粒球症リスクを判定するための検査方法及び判定用キット | |
WO2022049504A2 (en) | Biomarkers and uses thereof in the treatment of chronic hbv infection | |
Lee et al. | Genetic association between functional haplotype of collagen type III alpha 1 and chronic hepatitis B and cirrhosis in Koreans | |
EP1707640A1 (en) | Method of screening for the presence of a genetic defect associated with deep venous thrombosis | |
Quiroga et al. | A new high sensitivity anti-HCV Core kit allows detecting hepatitis C virus infected individuals not detected by other available anti-HCV assays: 993 | |
WO2012145794A1 (en) | Method of determining response to treatment with immunomodulatory composition | |
Sato et al. | Up-regulated aldo-keto reductase family 1 member B10 in chronic hepatitis C: Association with serum alphafetoprotein and hepatocellular carcinoma: 990 | |
Shackelford et al. | Molecular-Genetic Testing in Hepatocellular Carcinoma and Its Premalignant Conditions | |
Deng et al. | Genomic Investigations in Viral Hepatitis: Likely to Help or Hinder? |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A801 Effective date: 20181012 |
|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20181015 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200210 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20200918 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20201118 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210302 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210428 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210914 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211005 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220208 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20220304 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7044252 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |