JP6987864B2 - トコジラミを誘引するための組成物および方法 - Google Patents

Description

本発明は、トコジラミを誘引するための、とりわけトコジラミを捕獲または検出するための組成物の分野に関する。特に、本発明は、トコジラミを誘引または検出するための、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを含む組成物、ならびにその組成物の使用方法に関する。

近年、人間の居住環境への昆虫の侵入が増加している。この増加の１つの理由は、一般的な駆除方法に対して実質的に免疫性である耐性昆虫種の進化である。一例として、１９４０年代に先進国でほぼ根絶されてきたトコジラミの個体数はその後ゆっくり回復している。さらに、その回復は１９９０年代半ばから加速している。

トコジラミ（Cimex lectularius、Cimex hemipterus）は、外骨格、リンゴ種子の大きさと形を持つ無翅昆虫である。それらは狭くて暗いスペースを好む。その結果、それらはベッドや隙間や床／壁のひびや幅木の後ろに隠れるのを好む。それらは血を餌とし、夜に活動的であり、露出した皮膚のあらゆる部分をかむ。トコジラミにかまれると、皮膚の発疹、アレルギー反応および／または精神的苦痛を含む、多くの健康への悪影響が起こり得る。明らかに、個体数の上述した増加は、トコジラミにかまれることおよび関連する状態の増加に貢献した。

一般に、昆虫の侵入、特にトコジラミのそれに対抗するいくつかの方法が当技術分野において知られている。

前記問題に対処するための１つの方法は、決められた期間の間、その侵入された部分をトコジラミに対して有害である高いまたは低い温度のいずれかにさらすことである。したがって、成虫のトコジラミや産まれた卵を殺すには、その部分を、１時間６０℃に加熱するか、または少なくとも４８時間−１８℃未満に保つ必要がある。

トコジラミに対抗するためによく使用される別の方法は、珪藻土（ＤＥ）を粉末形態で、床の上および／または部屋の幅木に沿ってまたはその後ろに散布することである。トコジラミがＤＥと接触すると、実質的に針状の、マイクロメートルサイズのＤＥが、トコジラミのワックス層を吸収する。これはトコジラミにおいて不可逆的な脱水プロセスを開始し、最終的には死に至る。この方法は、同様の性質および行動パターンを有する他の昆虫を駆除するのにも使用され得る。

さらに他の方法は、トコジラミを捕獲するように設計された異なる種類の罠の使用を提案する。

しかしながら、これらすべての方法に共通するのは、トコジラミをその罠またはＤＥに誘引する必要があること、またはいずれでも、トコジラミの駆除を開始する前にトコジラミを検出する、または駆除の試み後にあらゆる残りのトコジラミを検出する必要があることである。

米国特許出願第１５／１０，６７６号は、トコジラミを誘引および／または捕獲するための組成物を開示している。その配合物は、少なくともヒスタミンまたはジメチルジスルフィドおよびジメチルトリスルフィドを含む。その配合物は、典型的にはさらに（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−オクテナールおよび２−ヘキサノンを含む。

米国特許第７８９２５２８号は、ノナナール、デカナール、（Ｅ）−２−ヘキサナール、（Ｅ）−２−オクテナール、（Ｅ，Ｅ）−２，４−オクタジエナール、ベンズアルデヒド、ベンジルアルコール、（＋）−リモネン、（−）−リモネンおよびスルカトンを含む組成物を用いてトコジラミを誘引する方法を開示している。

国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３７６８８号は、例えば２−ヘキサノンを（Ｅ）−２−ヘキセナールまたは（Ｅ）−２−オクテナールと組み合わせて用いてトコジラミを誘引する方法を開示している。

Ｇｒｉｅｓらの「bed Bug Aggregation Pheromone Finally Identified」、Angewandte Chemie Internatiioal Edition ５４巻、４号は、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−オクテナールおよび２−ヘキサノンを含む組成物を開示している。

国際特許出願ＰＣＴ/ＵＳ２０１０/０２６９３８号は、（Ｅ）−トランス）−２−ヘキセナールおよび（Ｅ）−（トランス）−２−オクテナールを含む組成物を開示している。

米国特許出願第１３／３３５，３８９号は、ニーム油を含む農薬を開示している。

これらの最近の進歩にもかかわらず、トコジラミの検出および／または根絶を可能とする、トコジラミを誘引するさらなる組成物および方法が依然として必要とされている。
したがって、本発明の目的は、トコジラミを誘引するための組成物を提供することである。
本発明のさらなる目的は、トコジラミを誘引するための組成物を提供することであり、この組成物は、トコジラミを誘引するための様々な方法で使用することができる。
本発明のなおさらなる目的は、異なる形態で処方され得る組成物を提供することである。
本発明のなおさらなる目的は、トコジラミ用の罠を提供することであり、この罠は、トコジラミを誘引するための組成物を利用する。
本発明のなおさらなる目的は、その組成物または罠を使用してトコジラミを誘引および／または検出するための方法を提供することである。

本発明の第１の態様によれば、上記目的の少なくとも一つ、または以下の説明から明らかとなる目的の少なくとも一つは、トコジラミを誘引するための組成物によって達成され、その組成物は、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを含む。したがって、本発明は、以下の実施例セクションで立証されるように、これら５つの化合物が一緒になってトコジラミを強く引き付けるという発見に基づく。したがって、組成物は、例えばトコジラミを罠に誘い込む目的で、および／またはトコジラミに姿を現させる目的で、トコジラミを誘引するのに使用することができ、それによってトコジラミの侵入を検出することを可能にする。

本発明の第２の態様によれば、上記目的の少なくとも一つ、または以下の説明から明らかになる目的の少なくとも一つは、トコジラミを捕らえるための罠によって達成され、その罠は、トコジラミを誘引するための本発明の第１の態様による組成物を含む。

本発明の第３の態様によれば、上記の目的の少なくとも一つ、または以下の説明から明らかとなる少なくとも一つの目的は、トコジラミを誘引する方法によって達成され、その方法は、本発明の第１の態様による組成物の一部または本発明の第２の態様による罠を、トコジラミが存在することが疑われる場所に配置するステップを含む。

本発明の第４の態様によれば、上記目的の少なくとも一つ、または以下の説明から明らかとなる目的の少なくとも一つは、トコジラミを検出する方法によってさらに達成され、その方法は、本発明の第１の態様による組成物の一部または本発明の第２の態様による罠を、トコジラミが存在することが疑われる場所に配置するステップを含む。

発明の詳細な説明

本発明の第１の態様は、トコジラミを誘引するための組成物に関し、その組成物は、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを含有する。
したがって、本発明は、以下の実施例セクションで立証されるように、これら５つの化合物が一緒になってトコジラミを強く引き付けるという発見に基づく。したがって、組成物は、例えばトコジラミを罠に誘い込む目的で、および／またはトコジラミに姿を現させる目的で、トコジラミを誘引するのに使用することができ、それによってトコジラミの侵入を検出することを可能にする。
本発明の第１の態様による組成物は、誘引剤、すなわちトコジラミ誘引剤であり得る。その組成物はトコジラミを誘引することができる。
したがって、本発明の第１の態様は、あるいは、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを含むトコジラミ誘引剤として見てもよい。
トコジラミを誘引することに加えて、本発明の第１の態様による組成物は、トコジラミを捕らえること、すなわちトコジラミを組成物に近接させたままにすることも可能であり得る。したがって、本発明の第１の態様による組成物は、トコジラミを誘引すること、すなわちトコジラミを組成物に向かって移動させること、およびトコジラミを捕らえること、すなわちトコジラミが組成物の近くに移動した後にそれらをとどまらせること、の両方を可能にすることができる。
５つの化合物へのいかなる言及も、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを指すものとして理解されるべきである。
トコジラミは典型的にはCimex lectulariusまたはCimex hemipterusであり得る。

本発明の文脈内で、組成物のいくつかの実施形態は、（Ｅ）−２−ヘキセナールおよび（Ｅ）−２−オクテナールの（Ｚ）−異性体をさらに含み得ることが企図される。

本発明の第１の態様による組成物の好ましい実施形態では、組成物は、１部などの０．５〜２部の（Ｅ）−２−ヘキセナール、２〜５部の（Ｅ）−２−ヘキセン酸、１部などの０．５〜２部の（Ｅ）−２−オクテナール、１〜１０部の２−オクテン酸、および１部などの０．５〜２部の２−ヘキサノンを含む。
より好ましくは、組成物は、５つの化合物をそれぞれ１部含む。
５つの化合物のこれらの割合は、トコジラミを誘引するのに有効であることが示されている。実施例セクションを参照のこと。

本発明の第１の態様による組成物の好ましい実施形態では、組成物は、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノン以外の揮発性成分を含まない。
揮発性成分は、標準的な大気圧の１０１．３ｋＰａで測定して２５０℃（４８２°Ｆ）以下の初期沸点を有する任意の有機化合物など、通常の室温（２０℃）で高い蒸気圧を有する化合物として理解され得る。
あるいは、これは、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンが組成物中の唯一の揮発性成分であると表現することもできる。
好ましくは、組成物は、４−オキソ−（Ｅ）−２−ヘキセナール、４−オキソ−（Ｅ）−２−オクテナール、リモネン、ベンズアルデヒド、スルカトン、オクタナール、ノナナール、デカナール、ジメチルスルフィド、ジメチルトリスルフィドおよび１−オクテン−３−オールの少なくとも１種を含まず、より好ましくはいずれも含まない。
より好ましくは、組成物は、４−オキソ−（Ｅ）−２−ヘキセナールおよび４−オキソ−（Ｅ）−２−オクテナールを含まない；アリーナテストでこれらの化合物が、誘引効果を有さず、むしろ、反発的な効果を有すると認められたためである。例２を参照。

好ましくは、組成物は、アスコルビン酸などのいかなる抗酸化剤も含まない方がよい。これは、一般的な抗酸化剤であるアスコルビン酸が組成物の貯蔵寿命を短くすることがわかったためである。
特定の一実施形態では、本発明の第１の態様による組成物は、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンからなる。

本発明の第１の態様による組成物の好ましい態様では、組成物は、担体をさらに含む。これにより、組成物の投与および取り扱いがより容易になる。担体は、固体、液体またはゲルを含み得る。したがって、組成物は、液体、ゲル、固体（錠剤またはペレットなど）として処方することができる。

本発明の第１の態様による組成物の好ましい実施形態では、担体は、ゼラチンおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリアクリル酸ナトリウムなどの超吸収性ポリマー、鉱油、パラフィンおよび水からなる群から選択される。
ゼラチンおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、好ましい担体である。これは、それらが使用に容易かつ安価であるため、そして試験結果（実施例２および４参照）が、これらの担体が５つの化合物を、トコジラミを効率的に誘引するのに十分に長い時間（例えば少なくとも２４時間、例えば少なくとも７２時間、例えば２４〜１４４時間、例えば好ましくは最長３週間まで）使用することができる、トコジラミを誘引するための組成物を提供するために適当な速度で放出、すなわち気化させることを可能にすることを示したためである。
担体を含む組成物は、５つの化合物が担体から放出／気化される速度に影響を与えるように、成形などによってさらに成形および寸法決めされてもよい。より高い放出速度を得るために、組成物をペレットに形成して、組成物の重量当たりの比表面積を高くすることができる。反対の、すなわち遅い放出を得るために、組成物はより大きな部分または部分に形成されてもよい。５つの化合物の放出速度をさらに低下させるために、組成物は、コーティングでさらに覆われてもよい。
ＰＥＧは、４００〜９５００の分子量を有してもよく、液体（７００未満の分子量）、半固体（７００〜９００の分子量）、およびワックス状固体フレークまたは粉末（１０００を超える分子量）の外見であってもよい。

本発明の第１の態様による組成物の好ましい実施形態では、担体は、ＰＥＧ４０００（ＣＡＳ＃２５３２２−６８−３、平均分子量３６００〜４４００）を含むか、またはＰＥＧ４０００からなる。
このポリエチレングリコールは、担体の最終形状に応じて、組成物の量および組成物の形状に応じて、組成物を最大２週間有効にするのに十分な放出速度をもたらし得る。さらに、ＰＥＧ４０００は、室温で固体であり、したがって取り扱いおよび形成が非常に容易である。

本発明の第１の態様による組成物の１つの特定の実施形態では、組成物は、上述したような担体、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンからなる。
実施例セクションに示すように、有効な組成物は、さらなる化合物を含む必要はない。

本発明の第１の態様による組成物のいくつかの実施形態では、組成物は、組成物の全体積を基準にして、５０〜６００ｍｇ／ｌ（例えば１００〜３００ｍｇ／ｌ）の（Ｅ）−２−ヘキセナール、１００〜１５００ｍｇ／ｌの（Ｅ）−２−ヘキセン酸、５０〜６００ｍｇ／ｌ（例えば１００〜３００ｍｇ／ｌ）の（Ｅ）−２−オクテナール、１００〜３０００ｍｇ／ｌの２−オクテン酸、および５０〜６００ｍｇ／ｌ（例えば１００〜３００ｍｇ／ｌ）の２−ヘキサノンを含む。
これらの実施形態では、組成物は、好ましくは上記のような担体を含む。
より好ましくは、組成物は、５つの化合物をそれぞれ１００ｍｇ／ｌ含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、組成物の全体積を基準にして、１０〜３００ｍｇ／ｌの（Ｅ）−２−ヘキセナール、２０〜１５００ｍｇ／ｌの（Ｅ）−２−ヘキセン酸、１０〜３００ｍｇ／ｌの（Ｅ）−２−オクテナール、１０〜３０００ｍｇ／ｌの２−オクテン酸、および１０〜３００ｍｇ／ｌの２−ヘキサノンを含む。

本発明の第１の態様による組成物のいくつかの実施形態では、組成物の用量は、０．１〜１００ｇ、例えば０．５〜１０ｇ、例えば０．５〜３．５ｇの組成物、またはあるいは、組成物の用量は、０．１〜１００ｍｌ、例えば０．５〜１０ｍｌ、例えば０．５〜３．５ｍｌの組成物を含む。
実施例セクションに示すように、組成物の餌、すなわち用量がとりわけ０．９ｇの重量を有するこれらの用量は、トコジラミを誘引することができる。用量が多いほど、トコジラミをより長期間誘引するための５つの化合物の量が多くなる。
これらの実施形態では、組成物は好ましくは、上記のような担体を含む。
組成物の用量は、組成物の一部、すなわち餌を包含すると理解されるべきである。用語おとりはまた、組成物の用量または部分に対して使用され得る。用量の大きさは、とりわけ、トコジラミを誘引するのに用量が効果的であるべき期間、その用量が置かれる場所の大きさ、およびその場所の温度に依存する。適切な用量は、トコジラミが誘引されるべき場所に異なる用量を配置し、そして所望の効率および期間でトコジラミを誘引した用量を同定することによって選択され得る。

本発明の第１の態様による組成物のいくつかの実施形態では、２０℃の温度および１０１．３ｋＰａの標準大気圧で、組成物によって、好ましくは組成物の用量によって放出される揮発性物質は、０．００１〜３７．４％の（Ｅ）−２−ヘキセナール、０．０１〜２．２％の（Ｅ）−２−ヘキセン酸、４０．４〜９０．９％の（Ｅ）−２−オクテナール、０．００１〜２．８％の２−オクテン酸および５．９〜３９．８％の２−ヘキサノンを含み、ここで百分率の合計は、１００％未満であるまたは１００％と等しい。
好ましくは百分率の合計は、１００％に等しい、すなわちこれらの条件下で組成物から他の揮発性物質は放出されない。
あるいは、２０℃の温度および１０１．３ｋＰａの標準大気圧で、組成物によって、好ましくは組成物の用量によって放出される５つの化合物の割合は、０．００１〜３７．４％の（Ｅ）−２−ヘキセナール、０．０１〜２．２％の（Ｅ）−２−ヘキセン酸、４０．４〜９０．９％の（Ｅ）−２−オクテナール、０．００１〜２．８％の２−オクテン酸および５．９〜３９．８％の２−ヘキサノンを含み、ここで百分率の合計は１００％に等しい。
これらの値は、実施例１および４で測定した５つの化合物の割合の最小値および最大値に基づく。
組成物によって放出される揮発性物質は、例えば、上記の条件下で組成物の一部または用量を容器に入れること、容器からヘッドスペースを収集すること、およびガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）によってそのヘッドスペースの構成を決定することによって測定することができる。その部分または用量が容器に入れられてから２４０時間後にヘッドスペースを回収するべきである。ヘッドスペースは、質量分析計（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ５９７３ 質量選択検出器）に連結された極性キャピラリーカラム（Ｉｎｎｏｗａｘ；長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍおよび膜厚０．２５μｍ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＵＳＡ）を備えたガスクロマトグラフ（ＧＣ、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ６８９０シリーズ）を使用して分析することができる。インジェクター温度は２２５℃であってもよく、注入は分割されなくともよい。ＧＣ温度は、４０℃で２分間慣らし、続いて２２５℃まで８℃／分で徐々に上昇させ、その温度を５分間安定させた。

本発明の第１の態様による組成物の特定の一実施形態では、組成物は、殺虫剤をさらに含む。
殺虫剤は、例えば、ピレトリン、ピレスロイド乾燥剤（珪藻土（ＤＥ）など）、生化学的殺虫剤（コールドプレスニーム油など）、ピロール（クロルフェナピル）、ネオニコチノイド、および昆虫成長調節剤を含み得る。

本発明の第２の態様は、本発明の第１の態様による組成物として提供されるのが好ましい、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを含むかまたは含有する、トコジラミを捕まえるための罠に関する。
罠は、例えば、本出願人の国際特許出願第ＷＯ２０１３１１５７１９号のように構成することができる。あるいは、罠は、頂部に入り口を有する円錐形の本体と、内側に配置された本発明の第１の態様による組成物とを含む、落とし穴タイプであってもよく、それによりトコジラミを円錐形の外側から登らせ、入り口を通って円錐形の内部に落とさせる。

本発明の第１の態様による組成物は、トコジラミを誘引するために使用することができる。

したがって、本発明の第３の態様は、トコジラミを誘引する方法に関し、以下のステップを含む：
ｉ）トコジラミが存在する場所に、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを配置するステップ。
５つの化合物をその場所に配置することで、トコジラミを誘引し、５つの化合物に向かって移動させる。これによりトコジラミを捕獲および／または駆除することができる。
５つの化合物は、互いに離れていてもよく、例えば、５つの異なる組成物として、例えば、それぞれが担体と５つの化合物のうちの１つを含み得る。あるいは、２つ以上の化合物を１つの組成物中に組み合わせることができる。
しかしながら、好ましくは、５つの化合物は、本発明の第１の態様による組成物として、または本発明の第２の態様による罠として提供される。

本発明の第４の態様は、トコジラミを検出する方法に関し、以下のステップを含む：ｉ）トコジラミが存在すると疑われる場所に（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを配置するステップ。
５つの化合物は、互いに離れていてもよく、例えば、５つの異なる組成物として、例えば、それぞれが担体と５つの化合物のうちの１つを含み得る。あるいは、２つ以上の化合物を１つの組成物中に組み合わせることができる。
しかしながら、好ましくは、５つの化合物は、本発明の第１の態様による組成物として、または本発明の第２の態様による罠として提供される。
したがって、本発明の第１および第２の態様による組成物および罠を、トコジラミが存在する場所でトコジラミを誘引するために使用することができるだけでなく、さらに、組成物および罠は、トコジラミが存在するかどうかを検出する、すなわち存在するトコジラミを誘引するために使用することができる。
その場所は、ベッド、部屋、アパート、家、車、スーツケース、またはトコジラミが存在する、または存在することが疑われる任意の他の場所であり得る。
５つの化合物が本発明の第１の態様による組成物として提供される場合、組成物の一部を配置することができる。５つの化合物、組成物、組成物の一部または罠は、０〜２４時間、０〜７２時間、０〜１４４時間またはさらに最大３週間、その場所に配置することができる。
組成物の複数の部分、または複数の罠をその場所に配置してもよい。
トコジラミを誘引することは、トコジラミを組成物または罠に向かって移動させることを含み得る。
トコジラミを検出することは、罠内に捕獲されたトコジラミを観察すること、または組成物もしくは罠の近くなどでトコジラミを観察することを含み得る。
トコジラミの誘引および検出は、存在する全てのトコジラミの検出または誘引を含む必要はなく、むしろ少なくとも１匹のトコジラミが誘引または検出されれば十分である。

実施例１−トコジラミの個体群からの揮発性物質のヘッドスペース回収
この試験では、トコジラミを収容している試験容器のヘッドスペースから揮発性化合物を回収した。アリーナ試験におけるさらなる試験のために、いくつかの潜在的試験化合物を同定した（実施例２参照）。

１．１．材料および方法
実験ＩおよびＩＩＩで使用したトコジラミは、ヒツジ血液を与えられたＮａｔｔａｒｏの実験室培養物にもっぱら由来した一方、実験ＩＩ、ＩＶおよびＶは、イギリスのＣｉｍｅｘ店のＲ．Ｎａｙｌｏｒからの人間の血液を与えられた成虫とＮａｔｔａｒｏの培養の１齢および２齢若虫を含む。

蓋をねじで留めた６０ｍｌのプラスチック容器を、底部および蓋に直径１．８ｃｍの穴をあけることによって変更した。トコジラミが逃げるのを避けるために、穴の上に、容器を空気が通るように、細かい網目のプラスチック製の網を接着した。容器に収まるように数回折り畳まれた４５×８０ｍｍの濾紙を各容器に装着した。実験は６個の容器：最近餌を与えた６、１２、１８、２４または４８個の若虫（１齢および２齢）、オスおよびメスのトコジラミを含む５個の容器および昆虫のいない対照である１個の容器から構成した。
各容器からの排出物を受動的に集める（紙全体に浸透させる）ために、吸着剤を配置した開口部の上に追加の網を取り付けた。

アンフルラージュサンプル
実験の６つの容器すべてを一緒にして等しく処理した。トコジラミの据付けおよびアンフルラージュ回収のための吸着剤の添加の後、トコジラミは２５℃の気候室内で１日につき、８／１６時間の明／暗サイクルで静置した。６、７または８日後、各実験を実験室に持ち込み、蓋を外した。電池駆動ポンプを用いて、吸着剤をポンプの方の端部にグラスウール栓を備えたテフロン（登録商標）管に吸い上げた。吸着剤がテフロン（登録商標）管の中に入ったとき、もう一つのグラスウール栓をもう一方の端に挿入し、そしてサンプルを抽出する準備を整えた。

ダイナミックヘッドスペースサンプル
アンフルラージュサンプルを回収した後、吸着剤プラグを挿入した特別な蓋を使用して各容器からヘッドスペースを回収した。電池式膜ポンプを用いて暗条件下（実験１の最初のサンプルを除く）で、実験の全容器のヘッドスペースを同時に回収した。各容器を通る空気流を３５〜４０ｍｌ／分に調整した。ヘッドスペースサンプルは、最初の週の後、実験１〜３について、２時間回収したが、実験４および５と、第２週後は、すべての実験と回収について、４〜６時間に延長した。これは、最初のサンプルは非常に弱かったので、より多くの材料を確保するために行った。
ヘッドスペースおよびアンフルラージュの両方の回収のための吸着剤として、Ｔｅｎａｘ ＧＲ（メッシュサイズ６０〜８０ Ａｌｌｔｅｃｈ、米国）を使用した。使用前に全ての吸着剤を過剰のメタノール、アセトンおよびヘキサンで洗浄した。アンフルラージュについては、実験開始後の最初の週の間に６０ｍｇを使用し、続いて第２週および第３週の間に４０ｍｇを使用した。各プラグを４００μｌのハイグレードヘキサンで溶出した。ヘッドスペースサンプルは、１０ｍｇの吸着剤プラグを使用して実験の開始から１週間後および再び２週間後に集めた。ヘッドスペースプラグを２５０μｌのハイグレードヘキサンで溶出した。

分析
サンプルは回収後２４時間以内に溶出し、ほとんどのサンプルは回収直後に溶出した。定量目的のために、５０ｎｇのステアリン酸メチルを内部標準として全ての試料に添加した。分析前に２０〜５０μｌが残るまで、すべてのサンプルを室温で濃縮した。
試料を、質量分析計（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ５９７３ 質量選択検出器）に連結した極性キャピラリーカラム（Ｉｎｎｏｗａｘ；長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍおよび膜厚０．２５μｍ Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＵＳＡ）を備えたガスクロマトグラフ（ＧＣ、Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ６８９０シリーズ）で分析した。インジェクター温度は２２５℃であり、そして注入は分割しなかった。ＧＣ温度を４０℃で２分間慣らし、続いて２２５℃まで８℃／分で徐々に上昇させ、その温度を５分間一定に保った。化合物は、本物の参照化合物のスペクトルおよび保持時間に対して、またはいくつかの場合ではＡＤＡＭおよびＮＩＳＴ２０１１のスペクトルライブラリに対して同定した。
大部分の化合物は、主要イオンおよび特徴的なイオンの寄与を用いて手動で定量し、個々の化合物の量の概算を得るために、それらの面積を添加した内部標準のそれと比較した。

１．２．結果
実験のトコジラミを含む容器から回収したすべてのサンプルを、その実験の対照サンプルと比較した。対照サンプルと同量で生じた化合物は、バックグラウンド汚染と判断し、ここで、任意のサンプルにおいて、対照サンプルの化合物の量の５倍を超える量で生じた化合物は、トコジラミに起因すると示唆された。放出は異なる実験間で異なり：通常実験ＩＩとＶが最も多く放出し、次に実験ＩＶであった。実験ＩとＩＩＩは常に最小量の揮発性物質を放出した。密度１２では最初の週の間、５つの実験のうちの４つからの放出量が高く、週１の間は、他の密度よりも変動が少なかった。
（Ｅ）−２−オクテナールはすべてのサンプルに存在し、（Ｅ）−２−ヘキセナールはトコジラミを含むほとんどのサンプルに存在し、それらの対応する（Ｚ）−異性体はより強いサンプルで検出された。４−オキソ−（Ｅ）−２−オクテナールおよび４−オキソ−（Ｅ）−２−ヘキセナールは、（Ｅ）−２−オクテン酸および（Ｅ）−２−ヘキセン酸に当てはまるように、より高い密度のトコジラミを有するほとんどのサンプルにおいて検出されたのに対し、（Ｅ）−２−オクテン−１−オールのみが非常に多量の揮発性物質を含むサンプル中に検出された。他のいくつかの化合物が、対照サンプルに見られるものと等しい量で検出された。それらのうちの１つは２−ヘキサノンである。

以下の表１は、異なる密度で維持されたトコジラミからの相対（％）放出を示す。放出は３週間にわたってアンフルラージュを通して受動的に集めた。３週間（Ｗ１、Ｗ２、Ｗ３）の間、各週後に、各実験用容器の上の吸着剤を集め、きれいな吸着剤と交換した。トコジラミのない対照は、実験を通してサンプルと同じ容器に保存した。

＊表１中の化合物は最初にあらかじめ指定ａ＊、ｂ＊等を割り当てた。表を参照のこと。下記の理由から、実施例２に記載のアリーナ試験用に選択した試験化合物は、表１の化合物と異なる場合があった。そのため、実際の試験化合物は対応する名称を割り当てたが、＊は付さなかった。

表１に基づいて、以下の実施例２に記載されるように、いくつかの試験化合物をアリーナ試験のために選択した。

実施例２−トコジラミを誘引するための組成物の所望の含有量を決定するためのアリーナ試験。
これらの試験では、トコジラミをアリーナに置き、特にトコジラミが３つの異なるステーションのそれぞれの近くで過ごした時間を含めて、移動パターンを記録しながら、自由に動き回ることを可能にした。各ステーションは、餌（試験化合物）または対照を含む。

２．１．材料および方法
アリーナ
アリーナは、高さ３．８ｃｍの縁を有する円形（直径５２ｃｍ）の白く塗装された金属製のトレイから構成されていた。中心と周辺との間の途中に等間隔に３つの穴（直径３．４ｃｍ）を開けた。トコジラミの逃亡を防止するために、縁をＩｎｓｅｃｔ−ａ−Ｓｌｉｐ（＃２８７１Ｃ Ｆｌｕｏｎ、ＢｉｏＱｕｉｐ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｉｎｃ． ２３２１ Ｅ、Ｃｈａｄｗｉｃｋ Ｓｔ．、Ｒａｎｃｈｏ Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ、ＣＡ ９０２２０）で塗装し、トレイの縁に非多孔質の滑りやすい表面を得た。

それぞれ、底部に穴（直径１８ｍｍ）を覆う網を設けて空気流を可能にした３つのプラスチック製容器（直径３４ｍｍ×高さ７ｃｍ）を、粘土生地を用いてアリーナの下面の穴の下に取り付けた。実験の開始時に、化合物／餌および対照をアリーナの下の各容器に１つずつ入れた。通常１つの（香りのする）餌と２つの対照を使用したが、いくつかの実験では２つの香りのする餌を一緒に試験し、１つの対照のみを使用した。

各容器の上に円形の凸面ガラスシートを置いた（直径６．８ｃｍ）。各ガラス板を２つのプラスチック十字の上に置き、アリーナの表面から３ｍｍ上にそれらを持ち上げた。ガラスシートはその下の餌に従って番号付けした。

試験化合物
以下の試験化合物を使用した（実施例１からの揮発性物質の回収からの結果に基づく）。
ａ．（Ｅ）−２−ヘキセナール
ｂ．（Ｅ）−２−オクテナール
ｅ．（Ｅ）−２−ヘキセン酸
ｆ．２−オクテン酸
ｇ．２−ヘキサノン

ａおよびｂに関して、実施例１は、（Ｅ）−および（Ｚ）−異性体の両方がトコジラミからの揮発性物質として見出されたが、アリーナ試験では（Ｅ）−異性体のみが選択されたことを示す。

ｆに関して、実施例１は（Ｅ）−異性体が見出されたことを示した。しかしながら、アリーナ試験では、両方の異性体の市販の混合物を使用した。

実施例１はさらに（Ｅ）−２−オクテン−１−オールを同定したが、この化合物はアリーナ試験では使用しなかった。

実施例１はさらに以下を同定した：
ｃ．４−オキソ−（Ｅ）−２−ヘキセナール、および
ｄ．４−オキソ−（Ｅ）−２−オクテナール。
当初アリーナ試験での使用を意図していたが、これらの化合物を含有する餌（３重量％メチルセルロースを使用して処方された）が室温で直ちに分解し始めたことがすぐにわかった。このため、そしてこれらの化合物は幼虫にしか見られず、初期のアリーナ試験において魅力的な効果を示さなかった（対照以下の値を示す）ので、それらはアリーナ試験でさらに調査しなかった。

ｇに関して、この化合物は実施例１において少量同定された。しかしながら、ヘッドスペース中に見いだされた化合物の群からの少なくとも１つの化合物および対照の濃度の５倍未満の濃度のアンフルラージュサンプルを試験するために、アリーナ試験に含めた。

担体
最初の実験では、試験化合物の魅力的な組み合わせを見つけることを目的として、餌を形成するための化合物の担体として２種類のゼラチンを使用した。

ゼラチン餌および対応する対照を、それぞれ約０．８ｍｌのゼラチンと共に小さい蓋に置いた。ゼラチン餌は、アリーナ試験において試験された１つ以上の試験化合物のそれぞれ１００ｍｇ／ｌ（１０−４）または１０ｍｇ／ｌ（１０−５）のいずれかを含有していた。

結果セクションの表２および３を参照すると、初期試験は、試験化合物を脱塩水に溶解し、それを脱塩水に溶解したゼラチン（酸性骨ゼラチンブルーム２５０、３重量％）の冷却溶液（全体積の８０％）と混合することによって調製した。餌用化学物質および任意に抗酸化剤アスコルビン酸を、使用した水の全体積の２０％に溶解した。
ゼラチンを絶えず撹拌しながら約４０℃に加熱することにより水に溶解した。全てのゼラチンフレーク／顆粒が溶解したら、懸濁液を２０℃に冷却し、試験化合物を、抗酸化剤と共に又はなしで添加した。直後に、ゼラチン状溶液をピペットでバイアルに入れ、密封した／閉じた。対照として、アスコルビン酸を含むまたは含まない水およびゼラチンを含む同様の溶液を調製した。

アスコルビン酸に関して、この抗酸化剤はいくつかの餌に含まれていたが、それは代わりに餌を分解しそして餌の効率を低下させることがわかった。したがって、アスコルビン酸の含有はその後中止した。

結果セクションの表４および５を参照すると、後の試験は、初期試験に使用したゼラチンが予想外に利用できなかったために、家庭用の市販のゼラチンであるトルスレフゼラチンを使用して調製した。これらの餌は、固体化合物ｅを液体化合物ａ、ｂ、ｆおよびｇに溶解し、この溶液に全体積の２０％の水を添加した後、冷却した２重量％のトルスレフゼラチン溶液と混合することによって調製した。溶液を気密したアルミホイルチューブに注ぎ込み、使用するまで冷蔵庫に保存した。

結果セクションの表６および７を参照すると、超吸収性餌は、試験化合物を脱塩水に溶解し、それを脱塩水に溶解した０．５重量％の超吸収剤と混合することによって調製した。超吸収剤はリベロおむつから得た。試験化合物を、使用した水の全体積の２０％に溶解した。

２．２．調査設計
一度に１０匹のトコジラミを別々のバイアルに入れてアリーナの中央に置き、同時にビデオ録画を開始した。試験室を赤色光で照らし、遅い状態では赤外線光で照らした。トコジラミを３０分間追跡した。３０分の実験期間の終わりに、各容器内のトコジラミの数、および各容器の上の凸状ガラスシートの真下または縁にいるトコジラミの数を記録した。結果をトコジラミの最終分布と呼ぶ。初期の実験中に最終位置は記録しなかった。

各ビデオ記録を作業者が見て、３０分間に各ガラスシートの下に入ったトコジラミの数を数えた。個々のトコジラミを追跡することは不可能であり、したがって、同じトコジラミが２点以上で記録され、また、それが去って戻ってきた場合は、同じ位置で２回以上記録されることがあり得た。したがって、実験中の活性スコアは、擬似実験を排除しない。

２．３．統計
実験中の活動およびそれらが記録された時のトコジラミの最終位置について、餌および対照への平均訪問、それらの標準偏差およびそれらの９５％信頼区間（ＣＩ）を計算した。すべての図と表は、９５％信頼区間（ＣＩ）を含み、これは総数の保有性の尺度である。ＣＩの差は、５％レベルで統計的に有意な差を示す。

２．４．結果
以下の表２は、４つの異なる実験におけるアリーナ試験の３０分間のトルスレフゼラチン中に配合された餌に対するトコジラミの活性を示す（実験番号１〜４）。表３は、同じ餌についての実験終了時の分布を示す。
等量の試験化合物を使用した。各試験化合物の濃度は、１０^−４、すなわち１００ｍｇ／ｌであった。

＊同じ文字（ａ、ｂ）を共有していない行は、大幅に異なる。

＊同じ文字（ａ、ｂ）を共有していない行は、大幅に異なる。

表２および３から分かるように、対照（Ｈ２Ｏ）と比較してトコジラミの活動性における唯一の有意な差は、試験化合物のａｂｅｆ組合せの餌についての実験１および２において見られる。
トコジラミの最終的な分布については、ａｂの組み合わせを除くすべての餌は、対照に対して有意な差を示さない。
これらの実験では、ｅｆの組み合わせは誘引効果をもたらさなかった。

さらなる実験のために、化合物ｇ（２−ヘキサノン）をａｂｅｆ組合せに添加して、実施例１において非常に低い濃度でしか見出されなかったこの化合物が全く効果がないかどうかを調べた。

したがって、以下の表４は、４つの異なる実験におけるアリーナ試験の３０分間のトルスレフゼラチン中に配合された餌に対するトコジラミの活性を示す（実験番号５〜８）。
表５は、同じ餌についての実験終了時の分布を示す。
等量の試験化合物を使用した。各試験化合物の濃度は、１０^−４、すなわち１００ｍｇ／ｌであった。

＊同じ文字（ａ、ｂ）を共有していない行は、大幅に異なる。

＊同じ文字（ａ、ｂ）を共有していない行は、大幅に異なる。

表４および５から分かるように、トコジラミは、ａｂｅｆｇ、すなわち、本発明の第１の態様による組成物の５つの化合物を有する餌を、他の餌および対照よりも多い回数訪れた。
したがって、驚くべきことに、試験化合物ｇ（２−ヘキサノン）の添加は、この化合物が実施例１において低濃度でしか見出されないにもかかわらず、餌の魅力に強い影響を及ぼした。
試験化合物ａｂｅｆｇの組み合わせは、実験６、７および８について、対照と比較して統計的に有意な活性の差しか生じなかったが（表４）、対照と比較して統計的に有意な差が実験の終わりに全ての実験５〜８で観察された（表５）。
ａｂｅｆｇの組み合わせとａｂｅｆの組み合わせとの違いに関して、表４と５の実験ではどれもａｂｅｆの組み合わせがコントロールとの有意な違いを示さないことに留意する。

試験化合物のａｂｅｆｇの組み合わせを用いてさらなる試験をこのようにして行い、この組み合わせが他の担体においても製剤化され得ることを示した。
表６および７は、担体として超吸収剤を用いた餌の結果を示す。
等量の試験化合物を使用した。各試験化合物の濃度は１０^−４、すなわち１００ｍｇ／ｌであった。

＊同じ文字（ａ、ｂ、ｃ）を共有していない行は、大幅に異なる。

＊同じ文字（ａ、ｂ）を共有していない行は、大幅に異なる。

表６および７に見られるように、試験化合物のａｂｅｆｇの組み合わせは、超吸収剤が担体として使用された場合にも、トコジラミの誘引において、対照と比べて有意な効果をもたらした。

表４〜７の結果をまとめると、試験化合物のａｂｅｆｇの組み合わせが、オスおよびメスの両方のトコジラミに対して、対照に対して統計的に有意な誘引を表すことは注目に値する。

実施例２の２−追加の減法試験
２つの酸、（Ｅ）−２−ヘキセン酸（ｅ）および２−オクテン酸（ｆ）を餌組成物の最初の３つのベース化学物質（ａｂｇ）に添加することの効果を試験するために、減法試験を行った。トコジラミ餌／ルアーを、以下の組み合わせの１００ｍｇ／ｌの各化合物で調製した：ａｂｇ、ａｂｅｇ、ａｂｆｇ、そしてアリーナにおいて、これらの配合物のトコジラミに対する誘引性を試験した。
餌／ルアーは、以前のようにトルスレフゼラチンの２％溶液中で調製され、各組み合わせは化学物質を含まないゼラチン溶液の２つの対照サンプルに対して試験した。
これらの追加試験では、各３０分の試験の終わりのトコジラミの最終位置を観察した。上記の組み合わせの各試験を２０回繰り返し、各試験は１０匹のメスまたは１０匹のオスのトコジラミを含んだ。

統計：ポアソン分布計数データを用いた二元一般化線形モデル（ＧＬＭ）を、従属変数として餌に引き付けられたトコジラミの数、ならびに要因として香り／餌および性別を用いて計算した。性別と香りの両方の要因は統計的に有意であり（結果を参照）、さらにデータを探求するために従属変数として香り／餌を用いて各性別に対して別々にＧＬＭを実施した。
分析には全部で１６２行のデータを使用した：メスに関する８２行およびオスに関する８０行。組み合わせａｂｅｆｇに関連する４２行、および残りの組み合わせａｂｅｇ、ａｂｆｇ、およびａｂｇにそれぞれ４０行。

結果：
実験終了時の分布を以下の表５の２に示す。
両方の要因、性別（Wald Chi2（ｄｆ＝１）＝８．１９２、ｐ＝０．００４）および香り（Wald Chi2（ｄｆ＝３）１０．２８５、ｐ＝０．０１６）およびそれらの相互作用（Wald Chi2（ｄｆ＝３）＝１２．４１２、ｐ＝０．００６）は統計的に有意である。
メスに対する香りの影響は統計的に有意であり（Wald Chi2（ｄｆ＝３）＝２１．１３３、ｐ＜０．０００）、ａｂｇと、ａｂｅｇ、ａｂｆｇおよびａｂｅｆｇとのメスに対する比較は、ａｂｅｆｇとａｂｇに対する、すなわち、酸を含むおよび含まない餌／ルアーの間の誘引の統計的に有意な差を明らかにした。一方、ａｂｇとａｂｅｇおよびａｂｆｇ
の間に有意差はなかった、それぞれ、Wald Chi2（ｄｆ＝１）＝２．１７８、ｐ＝０．１４０およびWald Chi2（ｄｆ＝１）＝０．５１５、ｐ＝０．４７３である。
オスの場合、４つの餌への誘引に統計的に有意な差はなかった（Wald Chi2（ｄｆ＝３）＝１．４９３、ｐ＝０．６８４）。下記の表５の３を参照。

＊各例の中で同じ文字（ａ、ｂ）を共有していない行は、大きく異なる。

ディスカッション
メスは全体的に５つの要素すべてを含む餌／ルアーにより誘引される。上記の表５の２および５の３を参照。３０％から５５％多くのメスが、他のどの組み合わせよりも完全な餌（ａｂｅｆｇ）に誘引された。どちらか一方の酸（ｅまたはｆ）が欠けている試験は、メスを最も引き付けない。全体的にオスは酸の存在に無関心に見えるが、一方または両方の酸を含む餌にはわずかに高い数が引き付けられている。
（Ｅ）−２−ヘキセン酸および２−オクテン酸を含まないルアー（ａｂｇ）よりも、５つの化合物すべて（ａｂｅｆｇ）、ｅ：（Ｅ）−２−ヘキセン酸、ｆ：２−オクテン酸、ａ：（Ｅ）−２−ヘキセナール、ｂ：（Ｅ）−２−オクテナールおよびｇ：２−ヘキサノンを含む餌／ルアーについての統計的に有意なより大きい誘引（ｐ＝０．００８）は、試験したほかの餌と比べた、特にメスのトコジラミを誘引する酸の能力を支持する。

結論：
（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−オクテナール、２−ヘキサノン、（Ｅ）−２−ヘキセン酸および２−オクテン酸の組み合わせ（ａｂｅｆｇ）は、メスのトコジラミに対して最大の誘引を発揮し、そしてオスにもほぼ最大の誘引を発揮する。２つの酸は、メスには明らかな相乗効果を示すが、オスには示さない。しかし、１匹の妊娠したメスのトコジラミは、新しい個体群＝新たな望ましくない侵入を見つけるのに必要なものであり、したがって、他のどのトコジラミ（オスおよび若虫）よりもメスのトコジラミを誘引できることが望ましい。しかし、その餌/ルアーは、メスを誘引するのと同じくらいオスを誘引するのに効果的である。両方の酸（ｅｆ）を組み合わせないと、誘引の効率はメスでは著しく低下し、オスではやや低下する。

実施例３−ＰＥＧ餌の配合
この実施例は、どのように試験化合物のａｂｅｆｇの組み合わせをポリエチレングリコール、ＰＥＧ中に配合し得るかを記載する。

３．１．材料および方法
５つの化学物質ａ、ｂ、ｅ、ｆ、およびｇをＰＥＧ２００（５％）に溶解／分散させて、次いで溶融ＰＥＧ４０００（溶融温度６８℃）に混合し、ＰＥＧ餌を調製した。その化学物質を含むＰＥＧ２００とＰＥＧ４０００との良好な混合を達成するために、溶解した化学物質を含むＰＥＧ２００を密閉容器に添加し、溶融したＰＥＧ４０００を添加し、低速で強力な撹拌機を使用して２つの溶液を１分間混合した。その直後、ＰＥＧ餌が固化する前に、それをアイスキューブ型に注いだ。ＰＥＧ餌を有する型をフリーザー中で１０分間冷却し、その後それぞれ約３ｇの重量を有する餌キューブを気密なアルミホイルチューブに詰め、冷蔵庫に貯蔵した。
ＰＥＧ餌は、１００、２００または３００ｍｇ/ｌのいずれかのａ、ｂおよびｇ、ならびに１００、２００、３００、５００または１０００ｍｇ／ｌのｅおよびｆを含有した。

実施例４−餌からの揮発性物質の測定
アリーナ試験で使用した餌の１つを容器に入れ、実施例１に記載したようにダイナミックヘッドスペースを回収し、そしてガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）を使用して分析した。

ヘッドスペース中の異なる化合物の割合を表８に示す。

実施例５−トコジラミを誘引するための組成物の効率を決定するためのメソコスム試験
メソコスム試験では、本発明の第１の態様による組成物がトコジラミを誘引する能力を、メソコスム、すなわちトコジラミの自然の生息地をより良く模倣することを目的とする試験環境で試験した。メソコスム試験は、上記の実施例１で配合した５つの化合物を（１：１：１：１：１、各化合物の濃度１０^−４）の割合で含む２％トルスレフゼラチンゲルを用いて行った。

５．１ 材料および方法
メソコスムは、７８×５６×１８ｃｍの大きさであり、プラスチック製の蓋を備えたＩＫＥＡ「ＳＡＭＬＡ」５５リットルプラスチック収納庫に収容され、蓋は、細かいメッシュで覆われた通気孔（直径８ｃｍ、合計４）を蓋の各隅に有する。餌（２．５〜３．０ｇ）をＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠に入れ、これは、トコジラミが円錐形の囲いの上部の開口部を通ってその罠の内部に落下することを可能にするように構成された落とし穴タイプの罠であり、そこからそれらは去ることができない。餌は、１００ｍｇ／ｌ、すなわち１０^−４ｇ／ｌの化学物質ａｂｅｆｇをそれぞれ含有する２％ゼラチンゲルとして配合し、さらに抗酸化剤としてアスコルビン酸を含んでいた。ａｂｅｆｇを含まない対照餌も同様に配合した。餌および対照餌を上記のように製造した。各メソコスムは２つのＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠を含んでいた、一つは香りのする（ａｂｅｆｇ）餌、もう１つは香りのない対照餌である。対照餌の罠は、罠自体の誘引を決定するためのものである。罠に加えて、各メソコスムは、２〜３枚の木片（それぞれ約３０×５．５×１ｃｍ）と、色とサイズが異なる衣服の２つの小片（約１５×１５ｃｍの平均サイズ）からなる代替隠れ場所を含んでいた。木片も衣服片も、トコジラミにあらかじめ曝し、糞便の痕跡と初期の集積場所があった。木片と衣服片は、メソコスムでの実験前に、トコジラミが産んだ卵を殺すために約５０度に加熱し、または少なくとも２４時間凍結した。
脱繊維ヒツジ血液を与えたLondon Field Strain(Cimex lectularius L.）からのトコジラミを全ての実験に使用した。トコジラミはほとんど夜行性であり、我々はトコジラミの通常の概日リズムのそれに近づくように明サイクル（８：００〜２１：００の間の１３時間の明と２１：００〜８：００の間の１１時間の暗）を制御した。１０匹のトコジラミ、４匹のメスおよび６匹のオスを各実験において同時に放出した。この性比はメソで使用した。なぜならそれは自然の個体群で見られる分布に近い分布を反映しており、我々はそれがトコジラミの自然な行動を促進すると予想するからである。

５．２ 調査設計
トコジラミは、メソコスムの真ん中、対照と活性なＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠の両方から約３５〜４０ｃｍのところで解放した。２つの罠は、約７０〜８０ｃｍ離して、対角線上の角に配置し、中央に木材ストックと衣服片を置いた。メソコスム実験は、新しく開けたゲルを詰めたＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠を使って午後から始めた。トコジラミの導入および除去の時間を記録した。対照と活性罠の両方で捕獲されたトコジラミの数と性別は、定期的に、または新しいトコジラミをメソコスムに既に存在するものと置き換えたときに記録した。
餌から放出された揮発性物質の量の概算として、開始時と、メソコスムのトコジラミを新しいものに交換する毎回と、各実験の終了時に、ゲル充填罠を秤量することによって実験中にゲルから蒸発した液体の量を測定した。各実験後および再使用前に、罠を無香料洗剤で洗浄して乾燥させた。

香りの餌がどれほど効率的でどれだけの期間魅力的であったかを評価するために、６日間連続して同じ餌を使用した試験を開始した。この期間中に、我々は３箇所で新しいトコジラミを導入し、同時に我々は前の期間に導入されたトコジラミを取り除き、その位置と性別を記録した。新しく装填したゲルを含む罠を実験開始時および実験開始後２４、７２および１４４時間後に再び秤量した。ゲル充填罠の秤量とメソコスムへ戻すのと同時に１０匹のトコジラミを導入した。したがって、１０匹のトコジラミの最初の群は、メソコスムに、２４時間（新しく開けた香りの餌）、２番目の群は４８時間（２４〜７２時間の古さの餌）、そして３番目の群は７２時間（７２〜１４４時間の古さの餌）いた。

時間経過に関連して餌の効率を評価するとき、我々はメスとオスのトコジラミが異なる率で捕獲されたことに気づいた。Ｕｓｉｎｇｅｒ（１９６６）は、最適な条件下で、成虫のトコジラミと幼虫が、それらの前の血液食事および摂餌の約１週間後に食べ物を探し始め、幼虫が次の段階に成長し始めると報告した。しかし、実質的な合併を避けるために、本研究では幼虫を含めなかった。実験の７日未満前に摂餌した実験で使用したトコジラミは、満腹または摂餌されたとみなし、そうでなければそれらは非摂餌として記録した。この区分は、挙動の違いを探すときに使用される。

５．３．結果
表９は、餌の経時／長さに対するトコジラミの分布を示す。
活性罠内、対照罠内、およびメソコスムの外側では、トコジラミの分布に、餌の経時（０〜２４、２４〜７２、７２〜１４４時間）に関連した有意差はなかった。活性罠は、対照罠と比較して統計的に有意に多数のトコジラミを捕獲し（香り−対照差異０．３２１、ｐ＜０．００１^＊＊＊）、どちらの罠タイプよりも統計的に有意に多数のトコジラミがメソコスムの外側で見出された（外側−対照差異０．４００、ｐ＜０．００１^＊＊＊、および外側−香り差異０．０７９、ｐ＝０．０２^＊）。

餌の古さに関連したトコジラミの分布の二元配置分散分析のための^ａｂｃＴｕｋｅｙ ＨＳＤ事後検定。各期間の異なる文字は、その期間の終わりにトコジラミの位置間の統計的に有意な違いを示す。

したがって、表９は、香り罠、すなわち本発明による組成物を含有する罠が、対照罠よりも有意に多くのトコジラミを捕獲したことを示す。すべてのトコジラミが罠にかかったわけではない−トコジラミの大部分はメソコスムの外側にとどまっていた。
表８に示すように、本発明の第１の態様による組成物は、罠と一緒に使用した場合にも有効である。

表９は、トコジラミの全分布を示している、すなわちそれは罠で発見されたオスとメスの割合を特定していない。

上記で特定したように、各実験に６匹のオスおよび４匹のメスを用いた。表１０は、０〜２４、２４〜７２および７２〜１４４時間の間のメソコスムでのメスおよびオスのトコジラミの捕獲を示す。トコジラミの存在とその性別は３つの異なる位置で採点した：香りの餌を有するＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔの罠、香りのない餌を有するＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔの罠（対照）、およびトラップの外側のメソコスム。

性別で分類すると、メスとオスの両方のトコジラミは、３つすべての経時群において、対照罠と比較して、香りのあるＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠に捕まる傾向がかなりある。

したがって、本発明の第１の態様による組成物は、オスとメスの両方のトコジラミを誘引するのに有効である。オスでもメスでも、それがトコジラミを誘引する可能性を高めるため、これは重要である。そして、それによって性別にかかわらずトコジラミの存在の検出を可能にする。

トコジラミの摂餌／非摂餌状態の影響を評価するために、各実験の終了時での位置を、摂餌および非摂餌のオスおよびメスのトコジラミについて比較し、以下の表１１〜１３に示す。

ａｂｅｆｇ組成（香り）を用いた実験では、メスまたはオスのトコジラミが餌を与えたかどうかにかかわらず、既に確立された香りのあるＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔの効果に追加の効果はなかった。したがって、統計的には、本発明の第１の態様による組成物は、摂餌および非摂餌の両方のトコジラミを同様に誘引することができる。食物源、すなわちヒトが移動していなくなった場所でもトコジラミの検出のための組成物の使用を可能にするので、これは重要である。したがって、組成物は、駆除作業の後、例えば、駆除作業が進行中であるためにしばらくの間、地元または部屋／アパート／家が居住していない場合に、残っているトコジラミを検出するために使用できる。その場合、残っているトコジラミは、おそらく数日間摂餌する機会がなかったはずであり、したがって、組成物が摂餌および非摂餌の両方のトコジラミを誘引することができることが重要である。

有意な結果はないが、新しい香りの平均的な割合を検討すると、平均的な割合は、メス_{摂餌−香り}＝４３．８％、メス_{非摂餌−香り}＝５３．１％、オス_{摂餌−香り}＝４３．２％、オス_{非摂餌−香り}＝４３．８％、メス_{摂餌−対照}＝１８．０％、メス_{非摂餌−対照}＝１７．２％、オス_{摂餌−対照}＝５．２％、およびオス_{非摂餌−対照}＝８．３％であるため（表１１）、非摂餌のメスは、活性Ｎａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠と対照罠の両方に最も捕獲されやすい群である。これらの結果は、１日経過香りおよび３日経過香り実験の両方でも見られる。１日経過香り活性Ｎａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔでは、平均的な割合は、メス_{摂餌−香り}＝３７．５％、メス_{非摂餌−香り}＝５０．０％、オス_{摂餌−香り}＝１２．５％、オス_{非摂餌−香り}＝４１．７％、メス_{摂餌−対照}＝１５．６％、メス_{非摂餌−対照}＝２０．３％、オス_{摂餌−対照}＝３．１％、およびオス_{非摂餌−対照}＝１３．６％であった（表１２）。そして、３日経過香り活性Ｎａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔでは、平均的な割合は、メス_{摂餌−香り}＝２８．１％、メス_{非摂餌−香り}＝４５．３％、オス_{摂餌−香り}＝２４．０％、オス_{非摂餌−香り}＝４０．１％、メス摂餌−対照＝１２．５％、メス_{非摂餌−対照}＝１６．４％、オス_{摂餌−対照}＝０．０％、およびオス_{非摂餌−対照}＝１５．１％であった（表１３）。

しかしながら、トコジラミは７日以内に摂餌する機会を与えられたか、与えられなかっただけであり、この機会にすべてのトコジラミが摂餌したわけではなかったので、摂餌および非摂餌トコジラミの影響はある程度考慮に入れられるべきである。したがって、これらの結果は予備的な結果と見なすべきである。

新しい香りのある活性Ｎａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠について、少なくとも１匹のトコジラミが罠に発見された割合は、８９．５８％±４．４１であるのに対し、対照では５４．１７％±７．１９であり、１日経過香りでのヒット率は、９１．６７％±３．９９であるのに対し、対照では、５６．２５％±７．１６であり、３日経過香りでのヒット率は、９１．６７％±３．９９であるのに対し、対照では、４７．９２％±７．２１であった。以下の表１４を参照。

表１４は、すべての香りの古さで、ヒット率がａｂｅｆｇ組成の罠が、対照罠よりも有意に高かったことを示している。

５．４ 要約
実施例４を要約すると、メソコスム試験では、本発明の第１の態様による香り組成物ａｂｅｆｇ（１：１：１：１：１、各化合物濃度１００ｍｇ／ｌ、すなわち１０^−４）を餌としたＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠は、対照Ｎａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠よりも有意に多くのメスとオスの両方のトコジラミを誘引することが分かる。本発明者らが認識している、制御されたメソコスム研究において、合成香料混合物がトコジラミを誘引することができたのは一度だけであり（Ｇｒｉｅｓらの米国特許出願第１５／１０，６７６号）、そのケースでは、オスのトコジラミと新しく混合した香り混合物を使用した。我々の結果は、その香りゼラチン混合物が、２４〜７２時間経過香り群と７２〜１４４時間経過香り群の両方で、単にゼラチンを含む対照罠よりも良好に、メスとオスの両方のトコジラミをＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠に誘引したという非常に優位な結果を示す。

各設定で１０匹のトコジラミ（女性／男性比６：４）を含む３つの香り経時群すべてに４８のメソコスム実験があるので、その結果は、制御されたメソコスム設定において、香りゲル混合物がＮａｔｔａｒｏ Ｓｃｏｕｔ罠にトコジラミを誘引するために働くという非常に強い証拠であると考えられなければならない。

Claims (16)

1. トコジラミを誘引するための組成物であって、前記組成物は、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを含む、組成物。
2. 前記組成物が、０．５〜２部の（Ｅ）−２−ヘキセナールと、２〜５部の（Ｅ）−２−ヘキセン酸と、０．５〜２部の（Ｅ）−２−オクテナールと、１〜１０部の２−オクテン酸と、０．５〜２部の２−ヘキサノンとを含む、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物が、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノン以外の他の揮発性成分を含まない、請求項１または２に記載の組成物。
4. 前記組成物が、担体をさらに含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
5. 前記担体が、ゼラチンおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリアクリル酸ナトリウムなどの超吸収性ポリマー、鉱油、パラフィンおよび水からなる群から選択される、請求項４に記載の組成物。
6. 前記担体が、ＰＥＧ４０００を含む、請求項５に記載の組成物。
7. 前記組成物が、当該組成物の全体積を基準にして、１００〜３００ｍｇ/ｌの（Ｅ）−２−ヘキセナールと、１００〜１５００ｍｇ/ｌの（Ｅ）−２−ヘキセン酸と、１００〜３００ｍｇ/ｌの（Ｅ）−２−オクテナールと、１００〜３０００ｍｇ/ｌの２−オクテン酸と、１００〜３００ｍｇ/ｌの２−ヘキサノンとを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
8. 前記組成物の用量が、０．１〜１００ｇの前記組成物を含む、またはあるいは、前記組成物の用量が、０．１〜１００ｍｌの前記組成物を含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
9. ２０℃の温度および１０１．３ｋＰａの標準大気圧で、前記組成物によって放出される揮発性物質が、０．００１〜３７．４％の（Ｅ）−２−ヘキセナール、０．０１〜２．２％の（Ｅ）−２−ヘキセン酸、４０．４〜９０．９％の（Ｅ）−２−オクテナール、０．００１〜２．８％の２−オクテン酸および５．９〜３９．８％の２−ヘキサノンを含み、ここで百分率の合計は、１００％未満であるまたは１００％と等しい、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
10. 殺虫剤をさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
11. （Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを含むまたは含む、トコジラミを捕らえるための罠。
12. 請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物を含むまたは含む、請求項１１に記載の罠。
13. ｉ）トコジラミが存在する場所に、（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを配置するステップを含む、トコジラミを誘引する方法。
14. （Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンが、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物として、または請求項１１もしくは１２に記載の罠として、提供される、請求項１３に記載の方法。
15. ｉ）トコジラミが存在すると疑われる場所に（Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンを配置するステップを含む、トコジラミを検出する方法。
16. （Ｅ）−２−ヘキセナール、（Ｅ）−２−ヘキセン酸、（Ｅ）−２−オクテナール、２−オクテン酸および２−ヘキサノンが、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物として、または請求項１１もしくは１２に記載の罠として、提供される、請求項１５に記載の方法。