JP6937513B2 - 転写因子結合部位特異的なdna脱メチル化方法 - Google Patents
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Description
[1] 部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をコードする遺伝子を、細胞中で過剰発現させることを含む、細胞中のDNAにおける転写因子結合部位特異的な脱メチル化を増強する方法。
[2] 前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、MAFファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、GATAファミリー、及びTBXファミリーの転写因子からなる群から選択される、上記[1]に記載の方法。
[3] 前記転写因子をコードする遺伝子、並びにTET遺伝子及び/又はTDG遺伝子を細胞中で過剰発現させることを含む、上記[1]又は[2]に記載の方法。
[4] 前記転写因子が、RUNX1、RUNX3、CEBPA、CEBPB、MAFB、NR4A2、MYOD1、GATA2、及びTBX5からなる群から選択される、上記[1]〜[3]のいずれかに記載の方法。
[5] TET遺伝子がTET2遺伝子又はTET3遺伝子である、上記[3]に記載の方法。
[6] TET遺伝子が全長TETタンパク質又は酵素活性部位を含むその断片をコードする、上記[3]又は[5]に記載の方法。
[7] 転写因子をコードする遺伝子を細胞中で過剰発現させ、その細胞中のDNAにおいて脱メチル化された部位を同定し、同定された脱メチル化部位とその上流配列及び下流配列における転写因子結合モチーフの出現頻度分布をその脱メチル化部位からの距離を変数として求め、そこから、ランダムに選択されたメチレーション部位とその上流配列及び下流配列における転写因子結合モチーフの出現頻度分布を差し引き、得られるバックグラウンド補正された出現頻度分布が前記距離X=0付近を頂点としたピークを形成する転写因子を選抜することを含む、部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をスクリーニングする方法。
[8] 転写因子をコードする遺伝子、並びにTET遺伝子及び/又はTDG遺伝子を細胞中で過剰発現させる、上記[7]に記載の方法。
[9] TET遺伝子が全長TETタンパク質又は酵素活性部位を含むその断片をコードする、上記[8]に記載の方法。
[10] メチル化アレイを用いたメチローム解析により、脱メチル化された部位を同定する、上記[7]〜[9]のいずれかに記載の方法。
[11] 細胞が哺乳動物細胞である、上記[1]〜[10]のいずれかに記載の方法。
[12] 哺乳動物細胞がヒト細胞である、上記[11]に記載の方法。
[13] 上記[7]〜[10]のいずれかに記載の方法によって得られる部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をコードする遺伝子をプロモーターの制御下で導入した、形質転換細胞。
[14] 前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、MAFファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、GATAファミリー、及びTBXファミリーの転写因子からなる群から選択される、上記[13]に記載の形質転換細胞。
[15] 上記[13]又は[14]に記載の形質転換細胞を被験物質の存在下で培養し、その細胞中のDNAのメチル化状態を評価し、被験物質不在下の細胞と比較したメチル化状態の変動を検出することを含む、被験物質の脱メチル化活性の測定方法。
本発明は、第1に、そのような部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をスクリーニングする方法に関する。具体的には、転写因子をコードする遺伝子を細胞中で過剰発現させ、その細胞中のDNAにおいて脱メチル化されたメチレーション部位を同定し、同定された脱メチル化部位及びその近傍配列における転写因子結合モチーフの出現頻度のパターンに基づいて、部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子を選抜することにより、部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をスクリーニングすることができる。
上記のスクリーニングにより選抜される転写因子は、部位特異的なDNA脱メチル化を誘導することができる。そして、上記のようなスクリーニング方法により得られる部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子を用いれば、細胞中のDNAにおける転写因子結合部位特異的な脱メチル化を増強することができる。本発明はそのような部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をコードする遺伝子を、細胞中で過剰発現させ、それにより転写因子結合部位又はその近傍を標的とした能動的なDNA脱メチル化を高レベルに誘導し、その結果として細胞中のDNAにおける転写因子結合部位特異的な脱メチル化を増強する方法も提供する。
1)プラスミドベクターの構築
理研BRCの三好浩之博士から譲渡された第三世代自己不活化(self inactivating; SIN)レンチウイルスプラスミドベクターCSII-EF-RfAに転写因子遺伝子RUNX1と抗生物質耐性遺伝子をクローン化した発現ベクターを作製した。具体的には、抗生物質耐性遺伝子であるハイグロマイシン耐性遺伝子(NCBI RefSeq proteinアクセッション番号YP_009062988)及びピューロマイシン耐性遺伝子(RefSeq proteinアクセッション番号YP_006732174)を、ベクターpIREShyg3及びpIRESpuro3(Clontech)から、それぞれプライマーペアhyg(フォワード: 5'-AATATGGCCACAACCGCGGCCGCGACTCTAGAT-3'(配列番号1)及びリバース: 5'-TAGAGTCGCGGCCGCCTATTCCTTTGCCCTCGG-3'(配列番号2))、又はプライマーペアpuro(フォワード: 5'-AATATGGCCACAACCATGACCGAGTACAAGCCCACG-3'(配列番号3)及びリバース: 5'-TAGAGTCGCGGCCGCTCAGGCACCGGGCTTGCG-3'(配列番号4))を用いてKOD-plus DNAポリメラーゼ(Toyobo Co)により増幅した。得られたPCR産物をそれぞれ線状化pIRES2プラスミドDNAにIn-Fusion(登録商標)クローニング技術(Clontech)を用いて挿入及び連結し、組換えプラスミドpIRES2-hyg及びpIRES2-puroを作製した。なお線状化pIRES2プラスミドDNAは、pIRES2-DsRed-Express2(Clontech)のDsRed-Express2配列を除く全長配列をフォワードプライマー 5'-GCGGCCGCGACTCTAGATCATAATC-3'(配列番号5)及びリバースプライマー 5'-GGTTGTGGCCATATTATCATCGTGTTTTTC-3'(配列番号6)を用いて増幅することにより作製した。
レンチウイルスベクターの作製はSuzuki et al., PLos ONE, (2012) Vol.7, (3) e33474に記載の方法に従って行った。簡単に説明すると、293T細胞(4 x 106細胞)をポリ-D-リシンでコートした10cmディッシュ(Becton, Dickinson and Co., Franklin Lakes, NJ, USA)にトランスフェクションの24時間前に播種した。トランスフェクションの1時間前に培地を5%ウシ胎仔血清と25μM クロロキンを添加した新鮮培地(ペニシリン及びストレプトマイシンをそれぞれ最終濃度100 U/mL、100 μg/mLで添加したOpti-MEM(Thermo Fisher Scientific Inc.))に交換した。上記で作製したRUNX1遺伝子とピューロマイシン耐性遺伝子を含むレンチウイルス発現プラスミドベクターRUNX1-PuroRを、パッケージングプラスミドpCMV-VSV-G-RSV-Rev及びpCAG-HIVgp(いずれも理研BRCの三好浩之博士から譲渡)と共に、Fugene(登録商標) HDトランスフェクション試薬(Promega Corp., Madison, WI, USA)を用いて293T細胞へとトランスフェクションした。トランスフェクションの24時間後、培地を新鮮培地Opti-MEM(Thermo Fisher Scientific Inc.)に交換した。培地交換の24時間後及び48時間後にパッケージングされた偽型レンチウイルス粒子を含有する上清を回収した。取得した上清(偽型ウイルス原液)を0.45μmシリンジフィルター(NIPPON Genetics Co. Ltd, Tokyo, Japan)を用いてろ過し、20℃で2時間、50,000 x g(Beckman SW28ローターで19400 rpm)にて遠心分離した。ペレット化偽型ウイルス粒子(レンチウイルスベクターRUNX1-puroVP)を100μl HBSS中に再懸濁し、-80℃で保存した。
293T細胞(1 x 105細胞)を、ポリ-D-リシンでコートした6ウェル培養ディッシュ(Becton, Dickinson and Co.)にレンチウイルス感染の1日前に播種した。上記で作製したレンチウイルスベクターRUNX1-puroVP、又は空ベクターを、8μg/mLポリブレンを用いて1 MOI(Multiplicity Of Infection)で293T細胞に感染させ、形質導入することにより、293T-RUNX1細胞及び293T-mock細胞をそれぞれ作製した(図2A)。形質導入細胞は2μg/mLのピューロマイシンを添加した培地で7日間培養することにより選択した(図2A)。なお空ベクターは、ピューロマイシン耐性遺伝子を含むがRUNX1遺伝子を含まない点以外は上記と同じレンチウイルス発現プラスミドベクターを、上記パッケージングプラスミドと共に293T細胞へとトランスフェクションして得られたレンチウイルスベクター(偽型ウイルス粒子)である。得られた293T-RUNX1細胞はRUNX1を構成的(恒常的)に過剰発現する。
実施例1で作製した形質導入細胞について、Infinium(登録商標) HumanMethylation450 BeadsChip array(Illumina Inc.)を使用してゲノムワイドなDNAメチル化状態をプロファイルした。形質導入細胞からゲノムDNAを常法により抽出した。EZ DNA Methylation-GoldTM Kit(Zymo Research Corp.)で処理したゲノムDNAを製造業者の指示書に従ってメチル化アレイにハイブリダイズした。得られたメチル化アレイシグナルデータから、Illuminaマイクロアレイデータ処理用のBioconductorパッケージのlumiを用いてメチル化度を示すM値をメチル化アレイ上の各プローブについて算出した。
メチル化アレイ解析によるRUNX1媒介脱メチル化誘導の結果を確認し、かつそのDNA脱メチル化の部位特異性を解析するため、293T-RUNX1において脱メチル化された2つのプローブ(PTPN22遺伝子とRUNX3遺伝子にそれぞれ関連する)をランダムに選択し、それらプローブの近傍をバイサルファイトシークエンスによって解析した。
RUNX1は造血系遺伝子の発現調節において重要な役割を果たす(Zhang et al., (1996) Mol. Cell Biol. 16: p.1231-1240; Uchida et al., (1997) J. Immunol., 158: p.2251-2258; Huang et al., (2008) Nat. Genet. 40: p.51-61)。そこで、造血におけるRUNX1媒介DNA脱メチル化の生物学的意義を明らかにするため、ヒト胚性幹細胞(ESC)と造血系細胞について、上記で同定した脱メチル化部位におけるDNAメチル化状態を調べた。調査対象の脱メチル化部位は、293T-TET2-TDG-RUNX1細胞及び293T-TET3-TDG-RUNX1細胞で同定した451個の脱メチル化プローブ(以下、RUNX1標的プローブと称する)のCpGである。比較のため、アレイ上の全プローブにおけるDNAメチル化状態も調べた。
本実施例ではRUNX1以外の転写因子とTET及びTDGの共発現が脱メチル化に及ぼす影響を調べた。RUNX1遺伝子の代わりに他の転写因子をコードする遺伝子(表7)を用いる点、及びTET遺伝子として酵素活性部位を含むTET1部分断片(TET改変体;配列番号15の1402〜2136位に相当)をコードするTET遺伝子改変体(塩基配列:配列番号49、アミノ酸配列:配列番号50;配列番号14の4204〜6408位に相当)を用いる点以外は実施例1と同様にして、TET遺伝子及びTDG遺伝子を過剰発現する293T細胞(293T-TcdT)、及び各種ヒト転写因子をコードする遺伝子、ヒトTET遺伝子、及びヒトTDG遺伝子を過剰発現する293T細胞を作製した。なお用いたTDG遺伝子は実施例1と同じである。さらに実施例2と同様にしてInfinium(登録商標) HumanMethylation450 BeadsChip arrayを用いてメチル化アレイ解析を行い、各プローブのM値を算出し、上記細胞間でM値を比較することにより、脱メチル化が増強されたことを確認し、脱メチル化プローブを同定した。続いて、実施例3と同様に、各プローブの脱メチル化CpG部位から±5kbpの領域の塩基配列について、転写因子結合モチーフの検索を行った。さらに、各転写因子について、実施例3に記載の方法によって得られた転写因子結合モチーフの検索結果について統計学的解析を行った。具体的には、各転写因子をTDG及びTET若しくはTET改変体とともに293T細胞で過剰発現させた場合の、脱メチル化プローブ中の脱メチル化CpG部位の近傍配列(±5kbp)における転写因子結合モチーフの位置を中心とする標準正規分布を足し合わせた混合分布から、ランダムに選択されたプローブの近傍配列(±5kbp)における転写因子結合モチーフの位置を中心とする標準正規分布を足し合わせた混合分布を差し引いて、混合頻度分布を得た。この混合頻度分布は、脱メチル化プローブの近傍における転写因子結合モチーフのバックグラウンド補正された出現頻度分布である。また実施例3で転写因子結合モチーフの検索を行ったRUNX1についても同様の解析を行った。得られた混合頻度分布を、図8〜11に示した。一方、PAX4(NCBI RefSeq proteinアクセッション番号NP_006184)及びNKX2-5(NCBI RefSeq proteinアクセッション番号NP_004378)についても同様の転写因子結合モチーフの検索及び解析を行った。その結果を図12に示す。なお「293T-TcdT」はTET改変体(Tcd; TET catalytic domain)とTDG(T)を過剰発現する293T細胞を表す。また「293T-TcdT-RUNX1」はTET改変体とTDGとRUNX1を過剰発現する293T細胞を表す。他の転写因子遺伝子を過剰発現させた293T細胞も同様に表記する。
・RUNX1
フォワードプライマー:5'-GTGATGTTTTTGGATAGGTTAGGAG-3'(配列番号51)
リバースプライマー:5'-ATCACTCAATTTCATCATATTTCTCAA-3'(配列番号52)
・RUNX3
フォワードプライマー:5'-GGGTTAGGGGTTGAAGGAGTTATTA-3'(配列番号53)
リバースプライマー:5'-AAAACCACCACCTTAACAACAAAAA-3'(配列番号54)
・CEBPB
フォワードプライマー:5'-TTTAGTTGTTTGTGTTATTTTTTTTGT-3'(配列番号55)
リバースプライマー:5'-TAAATCATCCATTATTATATCACTCCTTAT-3'(配列番号56)
・CEBPA
フォワードプライマー:5'-AGTTTTTTTGTATGAGGGAAGTTTTTAAAA-3'(配列番号57)
リバースプライマー:5'-CTATATTCCCAAAAAACCTTACCCC-3'(配列番号58)
・MAFB
フォワードプライマー:5'-TGTTAGGTTTTAGATAGAAATATAATTGAG-3'(配列番号59)
リバースプライマー:5'-TCTAAAAATAAAAAAACTACATTCTCATAC-3'(配列番号60)
・NR4A2
フォワードプライマー:5'-GGTGGGTATTGTAAAGGTATTTG-3'(配列番号61)
リバースプライマー:5'-AAATTCACAATAAAAACAATAAAAAACTAA-3'(配列番号62)
・MYOD1
フォワードプライマー:5'-TTTGATAGTTGAGGGGGAAATT-3'(配列番号63)
リバースプライマー:5'-ACCTAACCAAAAACCTCTACAAAAC-3'(配列番号64)
・GATA2
フォワードプライマー:5'-GTTGTTATGGTTTAATATAAGGG-3'(配列番号65)
リバースプライマー:5'-AACCCATTTCACAAATAAAACTATC-3'(配列番号66)
・SPI1
フォワードプライマー:5'-TTGTTTTTATATAAGAGGAGGAAAATAGAG-3'(配列番号67)
リバースプライマー:5'-AAAAAACCAAATTCACAATCCATAC-3'(配列番号68)
バイサルファイトシークエンス解析の結果を図14〜22に示す。
RUNX1を過剰発現させた細胞においてゲノムDNAのSPI1遺伝子制御領域の脱メチル化を誘導した。具体的には、実施例1と同様にして、RUNX1を過剰発現する293T細胞及び陰性対照として空のレンチウイルスベクターを導入した293T細胞(形質導入細胞)を作製した。作製した形質導入細胞から実施例3と同様に、SPI1制御領域に対するプライマーペア(フォワード: 5'-GTTGGATATTTTTTTGAGGTTTGG-3'(配列番号69)、リバース: 5'-TAAAACCTAAAACTACTAAACCCA-3'(配列番号70))を用いてバイサルファイトシークエンスによりSPI1制御領域のメチル化状態を解析した。
転写因子TBX5(GenBankアクセッション番号Q99593)をコードする遺伝子を用いる点以外は、実施例5と同様にして、TET遺伝子及びTDG遺伝子を過剰発現する293T細胞(293T-TcdT)、及びヒトTBX5をコードする遺伝子、ヒトTET遺伝子、及びヒトTDG遺伝子を過剰発現する293T細胞を作製し、脱メチル化プローブを同定し、同定された脱メチル化CpG部位から±5kbpの領域の塩基配列について転写因子結合モチーフの検索を行い、その検索結果について統計学的解析を行った。得られた結果を図25に示す。ピーク最大値は173.200、(IQRx3)+Q3は71.141であった。図25に示されるように、TBX5を用いた場合でも、結合モチーフは脱メチル化CpG部位を中心に濃縮されていた。このことは、TBX5が部位特異的なDNA脱メチル化を誘導することを示している。
造血発生におけるDNAメチル化を全体的に解析するために、iPS細胞(iPSC)(iPSC-253G1; RIKEN Bio-resource Center(BRC), HPS0002)、CD34+造血前駆細胞(HPC)(Poietics, 2M-101c)、CD14+単球(MON)(Poietics Ltd, 2W-400C)、CD3+ T細胞(TC)(HemaCare BioResearch, PB03C-2)及びCD19+ B細胞(BC)(HemaCare BioResearch, PB19C-2)について、単一塩基分解DNAメチル化解析を行った。
配列番号11:RUNX1遺伝子の塩基配列
配列番号12:RUNX1アミノ酸配列
配列番号13:RUNX1のDNA結合ドメイン
配列番号14:TET1遺伝子の塩基配列
配列番号15:TET1アミノ酸配列
配列番号16:TET2遺伝子の塩基配列
配列番号17:TET2アミノ酸配列
配列番号18:TET3遺伝子の塩基配列
配列番号19:TET3アミノ酸配列
配列番号20及び21:プライマー
配列番号22:TDG遺伝子の塩基配列
配列番号23:TDGアミノ酸配列
配列番号24〜27:プライマー
配列番号28:RUNX3遺伝子の塩基配列
配列番号29:RUNX3アミノ酸配列
配列番号30:RUNX3のDNA結合ドメイン
配列番号31:MYOD1遺伝子の塩基配列
配列番号32:MYOD1アミノ酸配列
配列番号33:MYOD1のDNA結合ドメイン
配列番号34:CEBPA遺伝子の塩基配列
配列番号35:CEBPAアミノ酸配列
配列番号36:CEBPAのDNA結合ドメイン
配列番号37:CEBPB遺伝子の塩基配列
配列番号38:CEBPBアミノ酸配列
配列番号39:CEBPBのDNA結合ドメイン
配列番号40:GATA2遺伝子の塩基配列
配列番号41:GATA2アミノ酸配列
配列番号42:GATA2のDNA結合ドメイン
配列番号43:MAFB遺伝子の塩基配列
配列番号44:MAFBアミノ酸配列
配列番号45:MAFBのDNA結合ドメイン
配列番号46:NR4A2遺伝子の塩基配列
配列番号47:NR4A2アミノ酸配列
配列番号48:NR4A2のDNA結合ドメイン
配列番号49:酵素活性部位をコードするTET遺伝子改変体の塩基配列
配列番号50:TET遺伝子改変体にコードされるアミノ酸配列
配列番号51〜70:プライマー
配列番号71:SPI1遺伝子制御領域の塩基配列
配列番号72:TBX5遺伝子の塩基配列
配列番号73:TBX5アミノ酸配列
配列番号74:TBX5のDNA結合ドメイン
Claims (19)
- 部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をコードする遺伝子を、TET遺伝子及びTDG遺伝子を発現する細胞中で過剰発現させることを含む、細胞中のDNAにおける転写因子結合部位特異的な脱メチル化を増強する方法であって、前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、MAFファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、GATAファミリー、及びTBXファミリーの転写因子からなる群から選択される、方法。
- 前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、及びGATAファミリーの転写因子、並びにMAFB、及びTBX5からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記転写因子をコードする遺伝子、並びにTET遺伝子及び/又はTDG遺伝子を前記細胞中で過剰発現させることを含む、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記転写因子が、RUNX1、RUNX3、CEBPA、CEBPB、MAFB、NR4A2、MYOD1、GATA2、及びTBX5からなる群から選択される、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- TET遺伝子がTET2遺伝子又はTET3遺伝子である、請求項3に記載の方法。
- TET遺伝子が全長TETタンパク質又は酵素活性部位を含むその断片をコードする、請求項3又は5に記載の方法。
- 転写因子をコードする遺伝子を、TET遺伝子及びTDG遺伝子を発現する細胞中で過剰発現させ、その細胞中のDNAにおいて脱メチル化された部位を同定し、同定された脱メチル化部位とその上流配列及び下流配列における転写因子結合モチーフの出現頻度分布をその脱メチル化部位からの距離を変数として求め、そこから、ランダムに選択されたメチレーション部位とその上流配列及び下流配列における転写因子結合モチーフの出現頻度分布を差し引き、得られるバックグラウンド補正された出現頻度分布が前記距離X=0付近を頂点としたピークを形成する転写因子を選抜することを含む、部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をスクリーニングする方法。
- 前記転写因子をコードする遺伝子、並びにTET遺伝子及び/又はTDG遺伝子を前記細胞中で過剰発現させる、請求項7に記載の方法。
- TET遺伝子が全長TETタンパク質又は酵素活性部位を含むその断片をコードする、請求項8に記載の方法。
- TET遺伝子がTET2遺伝子又はTET3遺伝子である、請求項8又は9に記載の方法。
- メチル化アレイを用いたメチローム解析により、脱メチル化された部位を同定する、請求項7〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞が哺乳動物細胞である、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 哺乳動物細胞がヒト細胞である、請求項12に記載の方法。
- 請求項7〜13のいずれか1項に記載の方法によって得られる部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をコードする遺伝子、並びにTET遺伝子及び/又はTDG遺伝子をプロモーターの制御下で過剰発現するように導入した、形質転換細胞であって、前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、MAFファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、GATAファミリー、及びTBXファミリーの転写因子からなる群から選択される、形質転換細胞。
- 前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、及びGATAファミリーの転写因子、並びにMAFB、及びTBX5からなる群から選択される、請求項14に記載の形質転換細胞。
- 前記転写因子が、RUNX1、RUNX3、CEBPA、CEBPB、MAFB、NR4A2、MYOD1、GATA2、及びTBX5からなる群から選択される、請求項14又は15に記載の形質転換細胞。
- 請求項14〜16のいずれか1項に記載の形質転換細胞を被験物質の存在下で培養し、その細胞中のDNAのメチル化状態を評価し、被験物質不在下の細胞と比較したメチル化状態の変動を検出することを含む、被験物質の脱メチル化活性の検出方法。
- 部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をコードする遺伝子の、TET遺伝子及びTDG遺伝子を発現する細胞中のDNAにおける転写因子結合部位特異的な脱メチル化の増強のための使用であって、前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、MAFファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、GATAファミリー、及びTBXファミリーの転写因子からなる群から選択される、使用。
- 部位特異的なDNA脱メチル化を誘導する転写因子をコードする遺伝子、並びに、TET遺伝子及び/又はTDG遺伝子の、細胞中のDNAにおける転写因子結合部位特異的な脱メチル化の増強のための使用であって、前記転写因子が、RUNXファミリー、C/EBPファミリー、MAFファミリー、NR4Aファミリー、MYODファミリー、GATAファミリー、及びTBXファミリーの転写因子からなる群から選択される、使用。
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