JP2008211985A - Il−17産生抑制物質及びそのスクリーニング方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】NR4A2遺伝子の発現を抑制することができる物質を同定することにより、多発性硬化症や自己免疫性脳炎などのIL-17に起因する炎症を改善する物質、IL-17遺伝子発現抑制物質、およびCD4陽性T細胞の増殖抑制物質等をスクリーニングすることができる。また、同定されたNR4A2遺伝子発現抑制物質は、IL-17に起因する炎症の改善、IL-17遺伝子の発現抑制、およびCD4陽性T細胞の増殖抑制等に有用である。
【選択図】なし
Description
Current Opinion in Immunology 2006, vol.18: p.349-356 The Journal of Immunology 2006, vol.177: p.566-573 Ernst Schering Res Found Workshop. 2006, vol.56: p.129-153 Immunity. 2002, vol.17: p.375-87
このようにして、本発明者らは本発明を完成するに至った。
なお、前記物質は、例えば、NR4A2遺伝子の発現を抑制する物質である。
上述のように、NR4A2遺伝子の発現と、IL-17、IFN-γ、IL-2、TNFα、IL-10、IL-4等のサイトカイン遺伝子の発現、すなわちこれらのサイトカイン産生とが正の相関を示すことが明らかになり、NR4A2遺伝子が直接的あるいは間接的にこれらのサイトカイン遺伝子の正の発現制御に関わる可能性が示唆された。また、NR4A2遺伝子の発現を抑制することによりIL-17、IFN-γ、IL-2、TNFα、IL-10、IL-4等のサイトカインの産生、および、CD4陽性T細胞の増殖等を抑制できることが明らかになった。従って、IL-17産生T細胞においてNR4A2タンパク質の果たす機能を抑制することができる物質を同定することにより、IL-17に起因する炎症を改善する物質、IL-17産生を抑制する物質(IL-17遺伝子の発現抑制物質を含む。)、およびCD4陽性T細胞の増殖を抑制する物質等をスクリーニングすることができる。
上述のように、NR4A2タンパク質の果たす機能を抑制することによりIL-17、IFN-γ、IL-2、TNFα、IL-10、IL-4等のサイトカインの産生、および、CD4陽性T細胞の増殖等を抑制できることから、IL-17産生T細胞においてNR4A2タンパク質の果たす機能を抑制する物質は、IL-17に起因する炎症の改善、IL-17の産生抑制、CD4陽性T細胞の増殖抑制などに有用である。
NR4A2タンパク質の果たす機能を抑制する物質を有効成分として含有する組成物は、医薬品として、ヒト、ヒト以外の脊椎動物に投与してもよいし、試薬として実験用に用いてもよい。このような医薬品は、患部に直接投与してもよいし、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などの製剤にして経口投与してもよいし、注射剤などの製剤にして腹腔内や静脈内への注射により非経口投与してもよい。なお、医薬品の製剤化は、従来使用されている製剤添加物(例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、矯味矯臭剤、溶剤、安定剤など)を用いて常法により行うことができる。
まず、健常人との比較において、多発性硬化症(MS)患者由来の末梢血T細胞で選択的に高い発現亢進を示す遺伝子を同定した。
本実験例では、マウスに実験的自己免疫性脳脊髄炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis:EAE)を誘導し、誘導後のEAEの病態の発症と、脾臓(SPL)T細胞、所属リンパ節(dLN)T細胞、および中枢神経領域(CNS)に浸潤したT細胞におけるNR4A2遺伝子の発現レベルとの相関を調べた。
0:臨床症状なし、1:尾の緊張減少、2:尾の弛緩、3:後足の部分的な麻痺、4:後足全体の麻痺、5:、前足及び後足の麻痺
多発性硬化症(MS)の病態形成において、中枢神経領域に浸潤したIL-17産生性T細胞(Th17細胞)が病原性T細胞の本体であることが報告されている(Current Opinion in Immunology 2006, 18:349-356)。そこで、上述の脾臓細胞やCNS浸潤細胞において、IL-17が産生されているかどうかを調べた。
次に、NR4A2遺伝子の発現とIL-17産生との相関をレポーターアッセイにより解析した。
また、NR4A2タンパク質と感染の指標となるeGFPとを共発現するbicistronicレトロウイルスベクターを用いて、NR4A2遺伝子の発現とIL-17産生との相関を解析した。
本実施例では、ヒトNR4A2タンパク質が炎症性サイトカイン産生に及ぼす影響を解析するため、まず、ヒトNR4A2遺伝子の発現を抑制することができるsiRNAをスクリーニングした。
次に、MS患者由来末梢血T細胞にsiRNA-1(siRNA)を作用させてNR4A2遺伝子の発現を抑制することによって、各種サイトカイン産生量が減少するかどうかを調べた。
Claims (16)
- IL-17産生T細胞によるIL-17の産生を抑制する物質をスクリーニングする方法であって、
前記IL-17産生T細胞においてNR4A2タンパク質の果たす機能を抑制することができる物質を同定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法。 - 前記物質がIL-17に起因する炎症を改善することを特徴とする請求項1に記載のスクリーニング方法。
- 前記炎症が、自己免疫性関節炎、リウマチ様関節炎、接触型過敏症、遅延型過敏症、気道過敏症、多発性硬化症または自己免疫性脳炎であることを特徴とする請求項2に記載のスクリーニング方法。
- CD4陽性T細胞の増殖を抑制する物質をスクリーニングする方法であって、
IL-17産生T細胞においてNR4A2タンパク質の果たす機能を抑制することができる物質を同定する工程を含むことを特徴とするスクリーニング方法。 - 前記物質がNR4A2遺伝子の発現を抑制することを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載のスクリーニング方法。
- 脊椎動物に対して被検物質を投与し、
前記被検物質を投与した前記脊椎動物の前記IL-17産生T細胞におけるNR4A2遺伝子の発現量の変化を評価する工程を含むことを特徴とする請求項5に記載のスクリーニング方法。 - IL-17に起因する炎症の治療剤であって、
IL-17産生T細胞においてNR4A2タンパク質の果たす機能を抑制する抑制物質を有効成分として含有することを特徴とする治療剤。 - 前記抑制物質が、NR4A2遺伝子の発現を抑制することを特徴とする請求項7に記載の治療剤。
- 前記抑制物質が、NR4A2遺伝子の発現を抑制するsiNAであることを特徴とする請求項7または8に記載の治療剤。
- 前記炎症が自己免疫性関節炎、リウマチ様関節炎、接触型過敏症、遅延型過敏症、気道過敏症、多発性硬化症または自己免疫性脳炎であることを特徴とする請求項7〜9のいずれかに記載の治療剤。
- 細胞におけるIL17遺伝子の発現抑制剤であって、
前記細胞においてNR4A2タンパク質の果たす機能を抑制する抑制物質を有効成分として含有することを特徴とする発現抑制剤。 - 前記抑制物質が、NR4A2遺伝子の発現を抑制することを特徴とする請求項11に記載の発現抑制剤。
- 前記抑制物質が、NR4A2遺伝子の発現を抑制するsiNAであることを特徴とする請求項11または12に記載の発現抑制剤。
- CD4陽性T細胞に対する細胞増殖抑制剤であって、
IL-17産生T細胞においてNR4A2タンパク質の果たす機能を抑制する抑制物質を有効成分として含有することを特徴とする細胞増殖抑制剤。 - 前記抑制物質が、NR4A2遺伝子の発現を抑制することを特徴とする請求項14に記載の細胞増殖抑制剤。
- 前記抑制物質が、NR4A2遺伝子の発現を抑制するsiNAであることを特徴とする請求項14または15に記載の細胞増殖抑制剤。
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