JP6882440B2 - Anti-IL4-IL13 bispecific antibody - Google Patents

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Description

インターロイキン−4(IL−4)は、リンパ球BおよびT細胞、ならびに単球、内皮細胞および線維芽細胞を含めた多くの非リンパ球細胞に対し広域の生物学的効果を有する多面的サイトカインである。例えば、IL−4は、休止B細胞上でのクラスII主要組織適合複合体分子の発現を誘導し、ヒトB細胞によるIgG4およびIgEの分泌を増強する。IL−4は、Th2−型免疫応答に関連しており、Th2細胞によって産生され、Th2細胞の分化を促進する。IL−4は、アレルギーおよび喘息などのいくつかの疾患に関連づけられてきた。 Interleukin-4 (IL-4) is a multifaceted cytokine with broad biological effects on lymphocytes B and T cells, as well as many non-lymphocytes, including monocytes, endothelial cells and fibroblasts. Is. For example, IL-4 induces the expression of class II major histocompatibility complex molecules on resting B cells and enhances the secretion of IgG4 and IgE by human B cells. IL-4 is associated with the Th2-type immune response and is produced by Th2 cells to promote Th2 cell differentiation. IL-4 has been associated with several diseases such as allergies and asthma.

IL−13は、活性化後、活性化Tリンパ球、Bリンパ球およびマスト細胞によって分泌される112アミノ酸のサイトカインである(非特許文献1、および非特許文献2)。IL−4と共有されたその多数の生物学的性質に基づいて、IL−13は、IL−4様サイトカインとして報告されてきた。その活性は、B細胞(非特許文献3、非特許文献4、非特許文献5)、単球(非特許文献6、非特許文献7、非特許文献8、非特許文献9、非特許文献10)および他の非造血細胞(非特許文献11、および非特許文献12)に対するIL−4の活性と実に類似している。他方では、IL−4に反して、それは、休止または活性化T細胞に対し特定の効果を発揮しない(非特許文献13)。 IL-13 is a 112 amino acid cytokine secreted by activated T lymphocytes, B lymphocytes and mast cells after activation (Non-Patent Documents 1 and 2). Based on its numerous biological properties shared with IL-4, IL-13 has been reported as an IL-4-like cytokine. Its activity is B cells (Non-Patent Document 3, Non-Patent Document 4, Non-Patent Document 5), Monospheres (Non-Patent Document 6, Non-Patent Document 7, Non-Patent Document 8, Non-Patent Document 9, Non-Patent Document 10). ) And other non-hematopoietic cells (Non-Patent Document 11 and Non-Patent Document 12) are very similar to the activity of IL-4. On the other hand, contrary to IL-4, it has no particular effect on resting or activated T cells (Non-Patent Document 13).

単球/マクロファージ、Bリンパ球およびいくつかの造血前駆体に対するIL−13の様々な生物活性は、A.J.Mintyによって、およびIL−13に関する総説において詳細に報告されてきた。いくつかのデータは、さらに、このサイトカインが他の細胞型に対し多面的効果を有することを示している。IL−13によって直接影響されるこれらの非造血細胞は、内皮およびミクログリア細胞、ケラチノサイトならびに腎臓および結腸癌である。 The various biological activities of IL-13 on monocytes / macrophages, B lymphocytes and some hematopoietic precursors are described in A.I. J. It has been reported in detail by Minty and in a review article on IL-13. Some data further indicate that this cytokine has a multifaceted effect on other cell types. These non-hematopoietic cells that are directly affected by IL-13 are endothelial and microglial cells, keratinocytes and kidney and colon cancer.

細胞内の生物学的分子によって伝達されるシグナルの分析における段階の1つは、その膜受容体を同定することにある。この目的のために行われたIL−13受容体に関する調査研究は、IL−13およびIL−4が共通の受容体、または共通の受容体複合体の構成成分の少なくとも一部、および共通のシグナル伝達エレメントを有することを示した(非特許文献14、非特許文献15、非特許文献16、非特許文献17)。この受容体は、考慮される細胞型に応じて異なる数で、様々な細胞型の表面に存在する。IL−13およびIL−4受容体の比較分布は、非特許文献18によって示された。 One of the steps in the analysis of signals transmitted by intracellular biological molecules is to identify their membrane receptors. Research on IL-13 receptors conducted for this purpose has shown that IL-13 and IL-4 are common receptors, or at least some of the components of a common receptor complex, and common signals. It has been shown to have a transmission element (Non-Patent Document 14, Non-Patent Document 15, Non-Patent Document 16, Non-Patent Document 17). This receptor is present on the surface of various cell types in different numbers depending on the cell type considered. A comparative distribution of IL-13 and IL-4 receptors has been shown by Non-Patent Document 18.

細胞表面受容体および受容体複合体は、種々の親和性でIL−4および/またはIL−13に結合する。IL−4および/またはIL−13に結合する受容体および受容体複合体の主成分は、IL−4Rα、IL−13RαlおよびIL−13Rα2である。これらの鎖は、IL−4Rα/IL−13Rαl(II型IL−4R)またはIL−4Rα/c(I型IL−4R)のモノマーまたはヘテロダイマーとして細胞の表面上で発現される。IL−4RαモノマーおよびIL−4Rα/cヘテロダイマーは、IL−4に結合するが、IL−13に結合しない。IL−13Rα1およびIL−13Rα2モノマーは、IL−13に結合するが、IL−4に結合しない。IL−4Rα/IL−13Rα1ヘテロダイマーは、IL−4とIL−13の両方に結合する(非特許文献19)。 Cell surface receptors and receptor complexes bind IL-4 and / or IL-13 with various affinities. The main components of the receptor and receptor complex that bind to IL-4 and / or IL-13 are IL-4Rα, IL-13Rαl and IL-13Rα2. These chains are expressed on the cell surface as monomers or heterodimers of IL-4Rα / IL-13Rαl (type II IL-4R) or IL-4Rα / c (type I IL-4R). The IL-4Rα monomer and the IL-4Rα / c heterodimer bind to IL-4 but not IL-13. The IL-13Rα1 and IL-13Rα2 monomers bind to IL-13 but not IL-4. The IL-4Rα / IL-13Rα1 heterodimer binds to both IL-4 and IL-13 (Non-Patent Document 19).

Th2−型免疫応答は、抗体作製および液性免疫を促進し、細胞外病原体を撃退するように精巧に作り上げられている。Th2細胞は、Ig産生(液性免疫)のメディエーターであり、IL−4、IL−5、IL−6、IL−9、IL−10、およびIL−13を産生する(非特許文献20)。Th2−型免疫応答は、いくつかのサイトカイン(例えば、
IL−4、IL−13)および抗体の特定の型(IgE、IgG4)の産出によって特徴付けられ、涙目ならびに気道炎症および肺における気道筋細胞の収縮などの喘息症状をもたらし得るアレルギー反応の典型である。
The Th2-type immune response is elaborately crafted to promote antibody production and humoral immunity and repel extracellular pathogens. Th2 cells are mediators of Ig production (humoral immunity) and produce IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, and IL-13 (Non-Patent Document 20). The Th2-type immune response is associated with several cytokines (eg, for example.
Typical of allergic reactions characterized by the production of certain types of IL-4, IL-13) and antibodies (IgE, IgG4) that can lead to asthmatic symptoms such as watery eyes and airway inflammation and contraction of airway muscle cells in the lungs. Is.

IL−4とIL−13の両方は、それらの生物学的機能に基づいて、治療的に重要なサイトカインであり、多くの疾患において決定的役割を果たす。IL−4は、自己免疫疾患を阻害することができることが示され、IL−4およびIL−13は、どちらも、抗腫瘍免疫応答を増強する潜在力を示した。IL−4およびIL−13ならびにそれらの受容体の上昇は、特発性肺線維症(IPF)の発病と関連づけられた(非特許文献21)。文献における証拠は、TH2サイトカインIL−4およびIL−13が、この肺組織リモデリングおよび線維症のメディエーターとしてIPFの発病における複数の役割を果たすことを実証している。肺におけるTh2−型CD4+T細胞は、おそらくIL−4およびIL−13の主な供給源であり、細胞外マトリックスリモデリングの重要な制御因子として意味づけられているが(非特許文献22)、マスト細胞、好塩基球、好酸球、マクロファージおよび上皮細胞を含めた他の細胞型もこれらのサイトカインの潜在的な供給源とすることができる(非特許文献23)。IPF患者では、気管支肺胞洗浄液におけるIL−13およびIL−4レベルが正常対照と比較して上昇している。かかる証拠は、これらのサイトカインを抑えるまたは中和する能力がある療法がIPF患者における線維症の進行を遅延させる潜在力を有することを示唆している。両方のサイトカインがアレルギー性疾患または線維性疾患の発病に関与しているので、これらのサイトカインの阻害剤は、治療的利点を提供するであろう。 Both IL-4 and IL-13 are therapeutically important cytokines based on their biological function and play a decisive role in many diseases. IL-4 has been shown to be able to inhibit autoimmune diseases, and both IL-4 and IL-13 have shown the potential to enhance anti-tumor immune responses. Elevations of IL-4 and IL-13 and their receptors have been associated with the development of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) (Non-Patent Document 21). Evidence in the literature demonstrates that the TH2 cytokines IL-4 and IL-13 play multiple roles in the pathogenesis of IPF as mediators of this lung tissue remodeling and fibrosis. Th2-type CD4 + T cells in the lung are probably the major source of IL-4 and IL-13 and are implied as important regulators of extracellular matrix remodeling (Non-Patent Document 22), but mast cells. Other cell types, including cells, basophils, eosinophils, macrophages and epithelial cells, can also be potential sources of these cytokines (Non-Patent Document 23). In patients with IPF, IL-13 and IL-4 levels in bronchoalveolar lavage fluid are elevated compared to normal controls. Such evidence suggests that therapies capable of suppressing or neutralizing these cytokines have the potential to slow the progression of fibrosis in patients with IPF. Inhibitors of these cytokines will provide therapeutic benefits, as both cytokines are involved in the pathogenesis of allergic or fibrotic diseases.

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したがって、IL−4を阻害する、IL−13を阻害する改善された薬剤、および非免疫原性であり、かつヒトにおける使用に安全である、IL−4とIL−13の両方を阻害する単剤が必要である。 Thus, an improved drug that inhibits IL-4, an improved agent that inhibits IL-13, and a single that inhibits both IL-4 and IL-13, which is non-immunogenic and safe for use in humans. I need an agent.

本発明は、従来技術に優るいくつかの利点および進歩を提供する。一態様では、本発明は、IL−4およびIL−13に特異的に結合する二重V領域抗体様タンパク質(dual−V−region antibody−like protein)またはその断片のヒト対象における安全用量(safe dose)を提供し、ここで、用量は、抗体様タンパク質またはその断片最大約200mgを含む。一部の実施形態では、ヒト対象は、特発性肺線維症(IPF)を有する。一部の実施形態では、安全用量は、抗体様タンパク質またはその断片約200mgを含む。一部の実施形態では、安全用量は、抗体様タンパク質またはその断片約100mgを含む。一部の実施形態では、安全用量は、抗体様タンパク質またはその断片約50mgを含む。一部の実施形態では、安全用量は、週1回投与される。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与される。 The present invention offers some advantages and advances over prior art. In one aspect, the invention provides a safe dose (safe) of a dual-V-region antibody-like protein or fragment thereof in a human subject that specifically binds to IL-4 and IL-13. dose), where the dose comprises up to about 200 mg of an antibody-like protein or fragment thereof. In some embodiments, the human subject has idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). In some embodiments, the safe dose comprises about 200 mg of an antibody-like protein or fragment thereof. In some embodiments, the safe dose comprises about 100 mg of an antibody-like protein or fragment thereof. In some embodiments, the safe dose comprises about 50 mg of the antibody-like protein or fragment thereof. In some embodiments, the safe dose is administered once a week. In some embodiments, the safe dose is administered subcutaneously.

別の態様では、本発明は、ヒト対象に投与された二重V領域抗体様タンパク質またはその断片を含む用量がヒト対象内でIL−4またはIL−13に特異的に結合するかどうかを決定する方法であって、(a)用量をヒト対象に投与する工程;および(b)ヒト対象から抜き取られた血液、血漿、または血清サンプル中のTARC/CCL17タンパク質の量を測定する工程であって、用量が投与される前に測定された対象におけるTARC/CCL17の量と比較した、血液サンプル中のTARC/CCL17の量の減少がIL−4またはIL−13への二重V領域抗体様タンパク質またはその断片の結合を知らせる工
程を含む方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、工程(c):工程(b)において測定されたTARC/CCL17の減少の大きさに依存して用量を増加させるまたは減少させる工程をさらに含む。
In another aspect, the invention determines whether a dose containing a double V region antibody-like protein or fragment thereof administered to a human subject specifically binds IL-4 or IL-13 within a human subject. The steps of: (a) administering a dose to a human subject; and (b) measuring the amount of TARC / CCL17 protein in a blood, plasma, or serum sample drawn from a human subject. A reduction in the amount of TARC / CCL17 in the blood sample compared to the amount of TARC / CCL17 in the subject measured before the dose was administered is a double V region antibody-like protein to IL-4 or IL-13. Alternatively, a method including a step of notifying the binding of the fragments is provided. In some embodiments, the method further comprises step (c): increasing or decreasing the dose depending on the magnitude of the decrease in TARC / CCL17 measured in step (b).

一部の実施形態では、工程(c)は、工程(b)において測定されたTARC/CCL17の減少が閾値未満である場合、用量を増加させること、または工程(b)において測定されたTARC/CCL17の減少が閾値を超えている場合、用量を減少させることをさらに含む。一部の実施形態では、工程(c)の閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるTARC/CCL17の量と比較した、TARC/CCL17の量の約20%から約60%の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるTARC/CCL17の量と比較した、TARC/CCL17の量の約40%から約50%の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるTARC/CCL17の量と比較した、TARC/CCL17の量の約43%の減少である。 In some embodiments, step (c) increases the dose if the decrease in TARC / CCL17 measured in step (b) is below a threshold, or TARC / measured in step (b). If the reduction in CCL17 exceeds the threshold, further reduction of the dose is included. In some embodiments, the threshold of step (c) is about 20% to about 60% of the amount of TARC / CCL17 compared to the amount of TARC / CCL17 in the subject measured before the dose was administered. It is a decrease. In some embodiments, the threshold is a reduction of about 40% to about 50% of the amount of TARC / CCL17 compared to the amount of TARC / CCL17 in the subject measured before the dose was administered. In some embodiments, the threshold is a reduction of about 43% of the amount of TARC / CCL17 compared to the amount of TARC / CCL17 in the subject measured before the dose was administered.

決定する方法の一部の実施形態では、用量は、皮下投与される。一部の実施形態では、TARC/CCL17の量は、酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)によって工程(b)において検出される。一部の実施形態では、ヒト対象は、特発性肺線維症(IPF)を有する。 In some embodiments of the method of determination, the dose is administered subcutaneously. In some embodiments, the amount of TARC / CCL17 is detected in step (b) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In some embodiments, the human subject has idiopathic pulmonary fibrosis (IPF).

別の態様では、本発明は、ヒト対象におけるIL−4もしくはIL−13または両方への抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片の結合に関するタンパク質バイオマーカーを提供し、ここで、バイオマーカーは、TARC/CCL17である。一部の実施形態では、抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片は、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片である。一部の実施形態では、ヒト対象は、特発性肺線維症(IPF)を有する。 In another aspect, the invention provides a protein biomarker for the binding of an antibody or antibody-like binding protein or fragment thereof to IL-4 and / or IL-13 in a human subject, wherein the biomarker is TARC. / CCL17. In some embodiments, the antibody or antibody-like binding protein or fragment thereof is a double V region antibody-like binding protein or fragment thereof. In some embodiments, the human subject has idiopathic pulmonary fibrosis (IPF).

別の態様では、本発明は、特発性肺線維症(IPF)を処置する方法であって、IPFを有するヒト対象に二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片最大200mgを投与する工程を含む方法を提供する。一部の実施形態では、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、IL−4、IL−13、またはIL−4とIL−13の両方に結合する。一部の実施形態では、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、週1回投与される。一部の実施形態では、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、皮下投与される。 In another aspect, the invention is a method of treating idiopathic pulmonary fibrosis (IPF), comprising administering up to 200 mg of a double V region antibody-like binding protein or fragment thereof to a human subject with IPF. Provide a method. In some embodiments, the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof binds to IL-4, IL-13, or both IL-4 and IL-13. In some embodiments, the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof is administered once a week. In some embodiments, the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof is administered subcutaneously.

別の態様では、本発明は、特発性肺線維症(IPF)の処置のための二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片の安全用量の使用を提供する。一部の実施形態では、安全用量は、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片最大200mgである。一部の実施形態では、安全用量は、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片約50mg、または約100mg、または約200mgである。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与される。一部の実施形態では、安全用量は、週1回投与される。一部の実施形態では、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、IL−4、IL−13、またはIL−4とIL−13の両方に結合する。 In another aspect, the invention provides the use of safe doses of a double V region antibody-like binding protein or fragment thereof for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). In some embodiments, the safe dose is up to 200 mg of the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof. In some embodiments, the safe dose is about 50 mg, or about 100 mg, or about 200 mg of the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof. In some embodiments, the safe dose is administered subcutaneously. In some embodiments, the safe dose is administered once a week. In some embodiments, the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof binds to IL-4, IL-13, or both IL-4 and IL-13.

別の態様では、本発明は、特発性肺線維症(IPF)の処置のための二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片の安全用量を提供する。一部の実施形態では、安全用量は、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片最大200mgである。一部の実施形態では、安全用量は、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片約50mg、または約100mg、または約200mgである。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与される。一部の実施形態では、安全用量は、週1回投与される。一部の実施形態では、
二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、IL−4、IL−13、またはIL−4とIL−13の両方に結合する。
In another aspect, the invention provides a safe dose of a double V region antibody-like binding protein or fragment thereof for the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). In some embodiments, the safe dose is up to 200 mg of the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof. In some embodiments, the safe dose is about 50 mg, or about 100 mg, or about 200 mg of the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof. In some embodiments, the safe dose is administered subcutaneously. In some embodiments, the safe dose is administered once a week. In some embodiments
A double V-region antibody-like binding protein or fragment thereof binds to IL-4, IL-13, or both IL-4 and IL-13.

本発明の実施形態の以下の詳細な説明は、以下の図面と合わせて読めば最もよく理解される。 The following detailed description of embodiments of the present invention will best be understood when read in conjunction with the following drawings.

TARC/CCL17シグナル伝達とのIL−4およびIL−13の関係を示す図である。It is a figure which shows the relationship of IL-4 and IL-13 with TARC / CCL17 signal transduction. SAR156597の用量の増加と共にヒト対象の血液における低下したTARC/CCL17発現の傾向を示す図である。It is a figure which shows the tendency of decreased TARC / CCL17 expression in the blood of a human subject with the increase of the dose of SAR156597. SAR156597の最初の投与後18週のヒト対象の血液におけるTARC/CCL17発現の持続的な低下を示す図である。グラフは、SAR156597 50mg、100mg、または200mgをSCで週1回投与された患者の血液におけるTARC/CCL17の平均量対時間を示す。FIG. 5 shows a sustained reduction in TARC / CCL17 expression in the blood of human subjects 18 weeks after the first dose of SAR156597. The graph shows the mean dose vs. time of TARC / CCL17 in the blood of patients who received SAR156597 50 mg, 100 mg, or 200 mg once weekly with SC. 用量レベルによる経時的なSAR156597トラフ濃度を示す図である(n=6、100mgでのn=5を除く)。It is a figure which shows the SAR156597 trough concentration with time by a dose level (n = 6, except n = 5 at 100 mg). 図5A〜5Cは、FRA−2過剰発現トランスジェニックマウスの肺における経時的な線維性変化を示す図である。A.発達中の肺重量の増加;B.第16週での肺サイズの増加;C.Tg(FRA2)およびWt対照マウスの肺におけるヒドロキシプロリン含有量の増加。5A-5C are diagrams showing fibrotic changes over time in the lungs of FRA-2 overexpressing transgenic mice. A. Increased lung weight during development; B. Increased lung size at week 16; C.I. Increased hydroxyproline content in the lungs of Tg (FRA2) and Wt control mice. 9、14、および17週でのFRA−2過剰発現マウスの肺サンプルの画像を示す図である。It is a figure which shows the image of the lung sample of the FRA-2 overexpressing mouse at 9, 14, and 17 weeks. 野生型対照と比較した、13および16週でのFRA2マウスの皮膚における(ヒドロキシプロリンによって測定された)コラーゲン含有量を示す図である。FIG. 5 shows the collagen content (measured by hydroxyproline) in the skin of FRA2 mice at 13 and 16 weeks compared to wild-type controls. 野生型対照と比較した、8、13、および16週でのFRA2マウスからのサンプル中の増加した真皮厚さを示す図である。FIG. 5 shows increased dermal thickness in samples from FRA2 mice at 8, 13, and 16 weeks compared to wild-type controls. 発達しているかつ繊維化している肺および皮膚のサイトカインプロファイル分析を示す図である。It is a figure which shows the cytokine profile analysis of the developed and fibrotic lung and skin. 重要なシグナトリー線維性マーカーの増加を示している、FRA2マウスからの肺および皮膚の遺伝子発現分析を示す図である。FIG. 5 shows a lung and skin gene expression analysis from FRA2 mice showing an increase in important signature fibrous markers. IL−13抗体処置FRA2マウス肺におけるヒドロキシプロリンレベルを示す図である。It is a figure which shows the hydroxyproline level in the lung of IL-13 antibody-treated FRA2 mouse. FRA2および同腹仔対照肺の病理組織学分析を示す図である。It is a figure which shows the histopathological analysis of FRA2 and the litter control lung. FRA2および同腹仔対照肺の病理組織学分析の定量された結果を示す図である。It is a figure which shows the quantified result of the histopathological analysis of FRA2 and the litter control lung. IPFバイオマーカーFN1、SPDEF、およびMUC5Bに関するリアルタイムPCRによる転写分析を示す図である。FIG. 5 shows transcriptional analysis by real-time PCR for IPF biomarkers FN1, SPDEF, and MUC5B. プロフィブロティック(profibrotic)マーカーCCL2、CCL11、およびCCL22に関するリアルタイムPCRによる転写分析を示す図である。FIG. 5 shows transcriptional analysis by real-time PCR on profibrotic markers CCL2, CCL11, and CCL22. IL−6、ARG1、およびIL13Ra2に関するリアルタイムPCRによる転写分析を示す図である。It is a figure which shows the transcription analysis by the real-time PCR about IL-6, ARG1, and IL13Ra2. ELISAによって分析された、肺ホモジネートにおけるIL−13、IL−4、およびIL−17タンパク質発現レベルを示す図である。FIG. 5 shows IL-13, IL-4, and IL-17 protein expression levels in lung homogenates analyzed by ELISA. ELISAによって分析された、肺ホモジネートにおけるMCP−1(CCL2)、CCL17、およびYKL−40タンパク質発現レベルを示す図である。FIG. 5 shows the expression levels of MCP-1 (CCL2), CCL17, and YKL-40 proteins in lung homogenates analyzed by ELISA. 図19Aは、Eferlら,2008,Proc.Natl.Acad.Sci.105(30):10525−10530において使用されたin vivoでのFra−2の異所性発現に関するトランスジェニック構築物を示す図である。図19Bは、実施例5において記載された、本明細書で使用されたFra−2トランスジェニックベクターを示す図である。FIG. 19A shows Effer et al., 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. 105 (30): FIG. 6 shows a transgenic construct for ectopic expression of Fra-2 in vivo used in 10525-10530. FIG. 19B is a diagram showing the Fra-2 transgenic vector used herein as described in Example 5.

当業者は、図におけるエレメントが単純化および明確化のために例示され、必ずしも一定の縮尺で描かれたのではないことを理解することになる。例えば、図におけるエレメントのいくつかの寸法は、本発明の実施形態の理解を改善するのに役立つように、他のエレメントと比較して誇張されることがある。 Those skilled in the art will appreciate that the elements in the figure are illustrated for simplification and clarification and are not necessarily drawn to a constant scale. For example, some dimensions of an element in the figure may be exaggerated compared to other elements to help improve understanding of embodiments of the present invention.

他に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的かつ科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通例理解されるものと同じ意味を有する。 Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the present invention belongs.

本明細書で引用された、各刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、本開示と矛盾しない程度までその全体が参照によって明確に組み入れられる。 The publications, patent applications, patents, and other references cited herein are expressly incorporated by reference in their entirety to the extent that they are consistent with this disclosure.

本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されるように、単数形「a」、「an」、および「the」は、特に断りのない限り、ここでは複数形の参照を含むことに留意されたい。 As used herein and in the appended claims, it should be noted that the singular forms "a", "an", and "the" include plural references herein, unless otherwise noted. I want to be.

「好ましくは」、「通例」、および「典型的に」のような用語は、特許請求された発明の範囲を限定するためにまたはいくつかの特色が特許請求された発明の構造または機能に決定的、必須、または重要でさえもあることを暗示するために本明細書で利用されるのではないことに留意されたい。むしろ、これらの用語は、本発明の特定の実施形態において利用することができるまたはできない代替のまたは追加の特色を強調することが単に意図されている。 Terms such as "preferably," "usually," and "typically" determine the structure or function of the claimed invention to limit the scope of the claimed invention or with some features. It should be noted that it is not used herein to imply that it is objective, mandatory, or even important. Rather, these terms are merely intended to emphasize alternative or additional features that may or may not be available in certain embodiments of the invention.

本発明を記載するかつ定義する目的のために、「実質的に」という用語は、任意の定量的比較、値、測定、または他の表示に起因する不確実性の固有の程度を表すために本明細書で利用されることに留意されたい。「実質的に」という用語は、定量的表示が問題の主題の基本的な機能の変化をもたらすことなく、述べられた参照から変動し得る程度を表すためにも本明細書で利用される。 For the purposes of describing and defining the present invention, the term "substantially" is used to describe the inherent degree of uncertainty resulting from any quantitative comparison, value, measurement, or other indication. Note that it is used herein. The term "substantially" is also used herein to describe the extent to which a quantitative representation can vary from the references stated without resulting in a change in the underlying function of the subject matter in question.

さらに、本発明に従って、当技術分野の技術内である従来の分子生物学、微生物学、および組換えDNA技法を用いることができる。かかる技法は、文献において完全に説明されている。例えば、Sambrook,Fritsch&Maniatis,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Second Edition(1989)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York(本明細書では、“Sambrookら,1989”);DNA Cloning:A Practical Approach,Volumes I and II(D.N.Glover ed.1985);Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait ed.1984);Nucleic Acid Hybridization[B.D.Hames&S.J.Higgins eds.(1985)];Transcription And Translation[B.D.Hames&S.J.Higgins,eds.(1984)];Animal Cell Culture[R.I.Freshney,ed.(1986)];Immobilized Cells And Enzymes[IRL Press,(1986)];B.Perbal,A Practical Guide To Molecular Cloning(1984);F.M.Ausubelら(eds.),Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons
,Inc.(1994)を参照されたい。
Further, according to the present invention, conventional molecular biology, microbiology, and recombinant DNA techniques within the art of the art can be used. Such techniques are fully described in the literature. For example, Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, and Cold Spring Harbor. , Volumes I and II (DN Grover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (MJ Gait ed. 1984); Molecular Acid Hybridization [B. D. Hames & S. J. Highgins eds. (1985)]; Transcription And Translation [B. D. Hames & S. J. Higgins, eds. (1984)]; Animal Cell Culture [R. I. Freshney, ed. (1986)]; Immobilized Cells And Enzymes [IRL Press, (1986)]; Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); M. Ausubel et al. (Eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Ausubel & Sons
, Inc. (1994).

いくつかの用語およびフレーズの以下の非限定的な定義は、当業者を導くために提供される。 The following non-limiting definitions of some terms and phrases are provided to guide those skilled in the art.

本明細書では、「ポリペプチド」、「タンパク質」、および「ペプチド」という用語は、互換的であり、ペプチド結合によって連結したアミノ酸モノマーの鎖を表す。典型的に、ポリペプチド鎖は、分岐していない。本明細書では、「残基」および「タンパク質残基」という用語は、互換的であり、タンパク質内で1つまたはそれ以上のペプチド結合によって他のアミノ酸に結合しているアミノ酸を表す。 As used herein, the terms "polypeptide," "protein," and "peptide" are compatible and represent chains of amino acid monomers linked by peptide bonds. Typically, the polypeptide chain is unbranched. As used herein, the terms "residue" and "protein residue" are compatible and refer to amino acids that are bound to other amino acids by one or more peptide bonds within the protein.

「インターロイキン−4」(IL−4)は、天然にあるまたは内在性の哺乳動物IL−4タンパク質におよび天然にあるまたは内在性の相当する哺乳動物IL−4タンパク質のものと同じであるアミノ酸配列を有するタンパク質(例えば、組換えタンパク質、合成タンパク質(すなわち、有機合成化学の方法を使用して作製された))に関する。したがって、本明細書で定義されるように、この用語は、成熟IL−4タンパク質、多型または対立形質バリアント、およびIL−4の他のアイソフォームおよび前述のものの修飾または非修飾形(例えば、脂質付加された、グリコシル化された)を含む。天然にあるまたは内在性のIL−4は、成熟IL−4、多型または対立形質バリアントならびに哺乳動物(例えば、ヒト、非ヒト霊長類)において天然に生じる他のアイソフォームおよび変異形などの野生型タンパク質を含む。かかるタンパク質は、例えば、IL−4を天然に産生する供給源から回収または単離することができる。これらのタンパク質および天然にあるまたは内在性の相当するIL−4と同じアミノ酸配列を有するタンパク質は、相当する哺乳動物の名称で称される。例えば、相当する哺乳動物がヒトである場合、タンパク質は、ヒトIL−4と命名される。WO03/038041において開示されているものなどのいくつかの変異IL−4タンパク質が当技術分野で公知である。 "Interleukin-4" (IL-4) is an amino acid that is identical to that of the naturally occurring or endogenous mammalian IL-4 protein and that of the naturally occurring or endogenous equivalent mammalian IL-4 protein. With respect to proteins having sequences (eg, recombinant proteins, synthetic proteins (ie, made using methods of organic synthetic chemistry)). Thus, as defined herein, the term mature IL-4 protein, polymorphism or allelic variant, and other isoforms of IL-4 and modified or unmodified forms of those described above (eg, eg). Includes lipid-added, glycosylated). Natural or endogenous IL-4 is wild, such as mature IL-4, polymorphic or allelic variants and other naturally occurring isoforms and variants in mammals (eg, humans, non-human primates). Contains type proteins. Such proteins can be recovered or isolated, for example, from sources that naturally produce IL-4. These proteins and proteins having the same amino acid sequence as their native or endogenous equivalent IL-4 are referred to by their corresponding mammalian names. For example, if the corresponding mammal is human, the protein is named human IL-4. Several mutant IL-4 proteins, such as those disclosed in WO 03/038041, are known in the art.

「インターロイキン−13」(IL−13)は、天然にあるまたは内在性の哺乳動物IL−13タンパク質、および天然にあるまたは内在性の相当する哺乳動物IL−13タンパク質のものと同じであるアミノ酸配列を有するタンパク質(例えば、組換えタンパク質、合成タンパク質(すなわち、有機合成化学の方法を使用して作製された))を表す。したがって、本明細書で定義されるように、この用語は、成熟IL−13タンパク質、多型または対立形質バリアント、およびIL−13の他のアイソフォーム(例えば、選択的スプライシングまたは他の細胞プロセスによって生じた)、および前述のものの修飾または非修飾形(例えば、脂質付加、グリコシル化)を含む。天然にあるまたは内在性のIL−13は、成熟IL−13、多型または対立形質バリアントならびに哺乳動物(例えば、ヒト、非ヒト霊長類)において天然に生じる他のアイソフォームおよび変異形などの野生型タンパク質を含む。例えば、本明細書では、IL−13は、喘息(アトピー性および非アトピー性喘息)に関連する、成熟ヒトIL−13の位置110のArgがGin(成熟IL−13の位置110は、前駆タンパク質の位置130に相当する)で置き換えられているヒトIL−13バリアントおよびIL−13の他のバリアントを包含する。(Heinzmannら,Hum MoI Genet.(2000)9:549−559)。かかるタンパク質は、例えば、IL−13を天然に産生する供給源から回収または単離することができる。これらのタンパク質および天然にあるまたは内在性の相当するIL−13と同じアミノ酸配列を有するタンパク質は、相当する哺乳動物の名称で称される。例えば、相当する哺乳動物がヒトである場合、タンパク質は、ヒトIL−13と命名される。WO03/035847において開示されているものなどのいくつかの変異IL−13タンパク質が当技術分野で公知である。 "Interleukin-13" (IL-13) is an amino acid that is the same as that of the naturally occurring or endogenous mammalian IL-13 protein and the naturally occurring or endogenous equivalent mammalian IL-13 protein. Represents a protein having a sequence (eg, recombinant protein, synthetic protein (ie, made using methods of organic synthetic chemistry)). Thus, as defined herein, the term is by mature IL-13 protein, polymorphism or allelomorphic variant, and other isoforms of IL-13 (eg, by alternative splicing or other cellular processes. Includes (as a result), and modified or unmodified forms of those described above (eg, lipid addition, glycosylation). Natural or endogenous IL-13 is wild, such as mature IL-13, polymorphic or allelic variants and other naturally occurring isoforms and variants in mammals (eg, humans, non-human primates). Contains type proteins. For example, as used herein, IL-13 is associated with asthma (atopic and non-atopic asthma), where Arg at position 110 of mature human IL-13 is Gin (position 110 of mature IL-13 is a precursor protein). Includes the human IL-13 variant and other variants of IL-13 that have been replaced with (corresponding to position 130). (Heinzmann et al., Hum MoI Genet. (2000) 9: 549-559). Such proteins can be recovered or isolated, for example, from sources that naturally produce IL-13. These proteins and proteins having the same amino acid sequence as their native or endogenous equivalent IL-13 are referred to by their corresponding mammalian names. For example, if the corresponding mammal is human, the protein is named human IL-13. Several mutant IL-13 proteins, such as those disclosed in WO 03/0354847, are known in the art.

一部の態様では、本発明は、特発性肺線維症(IPF)の処置に関する。IL−4およ
びIL−13は、それらの生物学的機能に基づいて治療的に重要なサイトカインであり、喘息を含めた多くの疾患において決定的な役割を果たす(Curr Opin Allergy Clin Immunol 2005,Vo.5,161−166)。IL−4は、自己免疫疾患を阻害することができることが示され、IL−4およびIL−13は、どちらも抗腫瘍免疫応答を増強する潜在力を示した。IL−4およびIL−13ならびにそれらの受容体の上昇は、特発性肺線維症(IPF)の発病と関連づけられた(JakubzickC.ら,Am J Pathol.2004:164(6):1989−2001;Murray LAら Int J Biochem Cell Biol.2008:40(10):2174−82)。文献における証拠は、TH2サイトカインIL−4およびIL−13がこの肺組織リモデリングおよび線維症のメディエーターとしてIPFの発病における複数の役割を果たし(Wynn,TA,Naat.Rev.Immunol,4:583−594,2004)、マスト細胞、好塩基球、好酸球、マクロファージおよび上皮細胞を含めた他の細胞型もこれらのサイトカインの潜在的な源とすることができることを実証した(Gordon S and Martinez FO,Immunity Rev.32:593−604,2010)。IPF患者では、気管支肺胞洗浄液におけるIL−13およびIL−4レベルは、正常対照と比較して上昇している。かかる証拠は、これらのサイトカインを抑えるまたは中和する能力がある療法がIPF患者における線維症の進行を遅延させる潜在力を有することを示唆している。両方のサイトカインは、アレルギー性疾患または線維性疾患の発病に関与しているので、これらのサイトカインの阻害剤は、治療的利点を提供する。
In some aspects, the invention relates to the treatment of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). IL-4 and IL-13 are therapeutically important cytokines based on their biological function and play a decisive role in many diseases, including asthma (Curr Opin Allergy Clin Immunol 2005, Vo). .5,161-166). IL-4 has been shown to be able to inhibit autoimmune diseases, and both IL-4 and IL-13 have shown the potential to enhance anti-tumor immune responses. Elevation of IL-4 and IL-13 and their receptors was associated with the development of idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) (Jakubzikk C. et al., Am J Pathol. 2004: 164 (6): 1989-2001; Murray LA et al. Int J Biochem Cell Biol. 2008: 40 (10): 2174-82). The evidence in the literature is that the TH2 cytokines IL-4 and IL-13 play multiple roles in the pathogenesis of IPF as mediators of this lung tissue remodeling and fibrosis (Wynn, TA, Naat. Rev. Immunol, 4:583-. 594, 2004) demonstrated that other cell types, including mast cells, basophils, eosinophils, macrophages and epithelial cells, can also be potential sources of these cytokines (Gordon Sand Martinez FO). , Organization Rev. 32: 593-604,2010). In patients with IPF, IL-13 and IL-4 levels in bronchoalveolar lavage fluid are elevated compared to normal controls. Such evidence suggests that therapies capable of suppressing or neutralizing these cytokines have the potential to slow the progression of fibrosis in patients with IPF. Inhibitors of these cytokines provide therapeutic benefits, as both cytokines are involved in the pathogenesis of allergic or fibrotic diseases.

抗体鎖ポリペプチド配列に関する「実質的に同一」というフレーズは、参照ポリペプチド配列との少なくとも70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上の配列同一性を示す抗体鎖と解釈することができる。核酸配列に関する用語は、参照核酸配列との少なくとも約85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%またはそれ以上の配列同一性を示す一連のヌクレオチドと解釈することができる。同一性は、当業者が利用可能な任意のバイオインフォマティクスツールを使用することによって決定することができる。例えば、Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)が配列同一性を決定するために通例用いられる(Altschulら,JournaJ.Mol.Biol.(1990)215:403−410)。 The phrase "substantially identical" with respect to an antibody chain polypeptide sequence is at least 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more of the reference polypeptide sequence. It can be interpreted as an antibody chain showing sequence identity. The term for a nucleic acid sequence can be interpreted as a series of nucleotides exhibiting at least about 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% or more sequence identity with a reference nucleic acid sequence. it can. Identity can be determined by using any bioinformatics tool available to those of skill in the art. For example, the Basic Local Sequence Search Tool (BLAST) is commonly used to determine sequence identity (Altschul et al., Journa J. Mol. Biol. (1990) 215: 403-410).

「同一性」または「相同性」という用語は、配列全体に関する最大パーセント同一性を達成するために、必要な場合、配列を整列させ、ギャップを導入した後、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮せずに、それが比較される相当する配列の残基と同一である候補配列におけるヌクレオチド塩基またはアミノ酸残基の百分率を意味し得る。N末端またはC末端伸長も挿入も同一性または相同性を低下させると解釈されない。整列のための方法およびコンピュータープログラムが利用可能であり、当技術分野で公知である。配列同一性は、配列分析ソフトウェアを使用して測定することができる。 The term "identity" or "homologity" is used to align sequences, introduce gaps, and then preserve as part of sequence identity, if necessary, to achieve maximum percent identity for the entire sequence. It can mean the percentage of nucleotide base or amino acid residues in a candidate sequence that is identical to the residue of the corresponding sequence to which it is compared, without consideration of target substitution. Neither N-terminal or C-terminal extension nor insertion is interpreted as reducing identity or homology. Methods and computer programs for alignment are available and are known in the art. Sequence identity can be measured using sequence analysis software.

「置換」バリアントは、除去され、同じ位置でその場所に挿入された異なるアミノ酸で置き換えられた天然配列における少なくとも1つのアミノ酸残基を有するものである。置換は単一とすることができ、ここでは分子における1つのアミノ酸のみが置換されており、または置換は複数とすることができ、ここでは2つまたはそれ以上のアミノ酸が同じ分子において置換されている。複数の置換は、連続した部位において、とすることができる。また、1つのアミノ酸は、複数の残基で置き換えることができ、その場合、かかるバリアントが置換と挿入の両方を含む。「挿入」バリアントは、天然配列における特定の位置にあるアミノ酸に直接隣接した挿入された1つまたはそれ以上のアミノ酸を有するものである。アミノ酸に直接隣接したは、アミノ酸のα−カルボキシルまたはα−アミノ官能基に結合していることを意味する。「欠失」バリアントは、除去された天然アミノ酸配列に
おける1つまたはそれ以上のアミノ酸を有するものである。通常、欠失バリアントは、分子の特定の領域において欠失した1つまたは2つのアミノ酸を有することになる。
A "substitution" variant is one that has at least one amino acid residue in the natural sequence that has been removed and replaced with a different amino acid inserted at the same location. Substitutions can be single, where only one amino acid in the molecule is substituted, or substitutions can be multiple, where two or more amino acids are substituted in the same molecule. There is. Multiple substitutions can be made at contiguous sites. Also, one amino acid can be replaced by multiple residues, in which case such variant contains both substitutions and insertions. An "inserted" variant is one that has one or more inserted amino acids that are directly adjacent to the amino acid at a particular position in the native sequence. Directly adjacent to an amino acid means that it is attached to the α-carboxyl or α-amino functional group of the amino acid. A "deletion" variant is one that has one or more amino acids in the removed native amino acid sequence. Usually, the deletion variant will have one or two amino acids deleted in a particular region of the molecule.

「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、モノクローナル抗体(全長モノクローナル抗体を含めた)、ポリクローナル抗体、多特異的抗体(例えば、二重特異性抗体)、抗体断片またはポリペプチドが望ましい生物活性を示す限り、1つまたはそれ以上のCDRまたはCDR由来配列を有する合成ポリペプチドを特に包含する。抗体(Ab)および免疫グロブリン(Ig)は、同じ構造特徴を有する糖タンパク質である。一般に、抗体は、定義されたまたは認識された特異性を有するIgと考えられる。したがって、抗体が特定の標的への結合特異性を示す一方、免疫グロブリンは、抗体と、標的特異性を欠く他の抗体様分子の両方を含む。本発明の抗体は、任意のクラス(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgAなど)、またはサブクラス(例えば、IgG、IgG、IgG2a、IgG、IgG、IgA、IgAなど)のものとすることができる(「型」および「クラス」、ならびに「亜型」および「サブクラス」は、本明細書で互換的に使用される)。天然または野生型、つまり、集団の人工的に操作されていないメンバーから得られた、抗体および免疫グロブリンは、通常、2つの同一の軽(L)鎖および2つの同一の重(H)鎖からなる、約150,000ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各重鎖は、いくつかの定常ドメインが後に続く可変ドメイン(V)を一端に有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン(V)およびもう一方の端に定常ドメインを有する。「人工的に操作されていない」は、外来性抗原結合分子を含有するまたは発現するように処置されていないことを意味する。野生型は、突然変異誘発、抗原結合分子のアミノ酸を変化させるための組換え方法などの使用などの操作の形によって得られた対立遺伝子もしくは多型、またはバリアントもしくは誘導体と比較して、集団において見出される最も広く認められる対立遺伝子または種をまたは操作されていない動物から得られた抗体を表し得る。 The term "antibody" is used in the broadest sense, and organisms in which monoclonal antibodies (including full-length monoclonal antibodies), polyclonal antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies), antibody fragments or polypeptides are desired. As long as it exhibits activity, it particularly includes synthetic polypeptides having one or more CDRs or sequences derived from CDRs. Antibodies (Abs) and immunoglobulins (Ig) are glycoproteins with the same structural characteristics. Generally, an antibody is considered to be an Ig with a defined or recognized specificity. Thus, while antibodies exhibit binding specificity to a particular target, immunoglobulins contain both the antibody and other antibody-like molecules that lack target specificity. The antibodies of the invention can be of any class (eg, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA, etc.) or subclasses (eg, IgG 1 , IgG 2 , IgG 2a , IgG 3 , IgG 4 , IgA 1 , IgA 2, etc. ) ("Types" and "classes", as well as "subtypes" and "subclasses" are used interchangeably herein). Antibodies and immunoglobulins obtained from natural or wild-type, ie, non-artificially engineered members of the population, are usually from two identical light (L) chains and two identical heavy (H) chains. It is a heterotetrameric glycoprotein of about 150,000 daltons. Each heavy chain has a variable domain ( VH ) at one end, followed by several constant domains. Each light chain has a variable domain ( VL ) at one end and a constant domain at the other end. "Not artificially engineered" means that it has not been treated to contain or express a foreign antigen binding molecule. Wild-type is in the population compared to alleles or polymorphisms, or variants or derivatives obtained by means of manipulation such as mutagenesis, use of recombinant methods to alter the amino acids of antigen-binding molecules, etc. It may represent an antibody obtained from an unengineered animal or the most widely recognized allele or species found.

本明細書では、「抗IL−4抗体」は、その受容体へのIL−4の結合を阻害するもしくは実質的に低下させるまたはIL−4活性を阻害する分子を含むが、これらに限定されない、本明細書で定義されたIL−4に特異的に結合する抗体またはそこに由来するポリペプチド(誘導体)を意味する。 As used herein, "anti-IL-4 antibody" includes, but is not limited to, molecules that inhibit or substantially reduce the binding of IL-4 to its receptor or inhibit IL-4 activity. , Means an antibody that specifically binds to IL-4 as defined herein or a polypeptide (derivative) derived therein.

本明細書では、「抗IL−13抗体」は、その受容体へのIL−13の結合を阻害するもしくは実質的に低下させるまたはIL−13活性を阻害する分子を含むが、これらに限定されない、本明細書で定義されたIL−13に特異的に結合する抗体またはそこに由来するポリペプチド(誘導体)を意味する。 As used herein, "anti-IL-13 antibody" includes, but is not limited to, molecules that inhibit or substantially reduce the binding of IL-13 to its receptor or inhibit IL-13 activity. , Means an antibody that specifically binds to IL-13 as defined herein or a polypeptide (derivative) derived therein.

抗体の可変ドメインの文脈における「可変」という用語は、抗体間で配列が広範に異なり、その特定の標的に関する特定の抗体の特定の認識および結合において使用される関連する分子のいくつかの部分を表す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメインにわたって均等に分布していない。可変性は、軽鎖と重鎖可変ドメインの両方における、超可変領域としても公知である相補性決定領域(CDR;すなわち、CDR1、CDR2、およびCDR3)と称される3つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク(FR)領域または配列と称される。天然重鎖および軽鎖の可変ドメインは、β−シート構造を繋ぐループを形成する、場合によっては、β−シート構造の部分を形成する3つのCDRによって繋がれたβ−シート配置を主にとっている4つのFR領域をそれぞれ含む。各鎖におけるCDRは、しばしばFR領域によって接近して一緒に保持され、もう一方の鎖からのCDRと共に、抗体の標的(エピトープまたは決定基)結合部位の形成に寄与する(Kabatら Sequences of Proteins of Immunological Interest,National Institute of Health,Bethesda,MD(1987)を
参照されたい)。本明細書では、免疫グロブリンアミノ酸残基のナンバリングは、別段の指示がない場合、Kabatらの免疫グロブリンアミノ酸残基ナンバリングシステムに従って行われる。1つのCDRは、同族のエピトープに特異的に結合する能力を有し得る。
The term "variable" in the context of the variable domain of an antibody refers to some of the relevant molecules used in the particular recognition and binding of a particular antibody with respect to that particular target due to the wide range of sequences that differ between the antibodies. Represent. However, variability is not evenly distributed across the variable domains of the antibody. The variability is concentrated in three segments in both the light and heavy chain variable domains, also known as hypervariable regions, called complementarity determining regions (CDRs; ie, CDR1, CDR2, and CDR3). There are. The more highly conserved portion of the variable domain is referred to as the framework (FR) region or array. The variable domains of the natural heavy and light chains are predominantly in a β-sheet arrangement connected by three CDRs that form a loop connecting the β-sheet structures and, in some cases, form parts of the β-sheet structure. Each contains four FR regions. The CDRs in each strand are often held together in close proximity by the FR region and, together with the CDRs from the other strand, contribute to the formation of the target (epitope or determinant) binding site of the antibody (Kabat et al. Sequences of Proteins of). See Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, MD (1987)). As used herein, immunoglobulin amino acid residue numbering is performed according to the immunoglobulin amino acid residue numbering system of Kabat et al., Unless otherwise indicated. One CDR may have the ability to specifically bind to a cognate epitope.

「ヒンジ」または「ヒンジ領域」という用語は、本発明では、抗体の第1と第2の定常ドメイン間のアミノ酸を含む可動性ポリペプチドを表す。 The term "hinge" or "hinge region" in the present invention refers to a mobile polypeptide comprising amino acids between the first and second constant domains of an antibody.

抗体、抗原、または抗原結合タンパク質の「断片」、「機能的断片」、「バリアント」、「誘導体」、または「類似体」などのフレーズおよび用語、およびその語形は、目的の全長抗体または抗原と共通して定性的生物活性を有する化合物または分子である。例えば、抗IL−4抗体の機能的断片または類似体は、IL−4分子に結合し得る、またはリガンド、もしくはアゴニストもしくはアンタゴニスト抗体がIL−4に結合する能力を防ぎ得るまたは実質的に低下させ得るものである。 Phrases and terms such as "fragment", "functional fragment", "variant", "derivative", or "analog" of an antibody, antigen, or antigen-binding protein, and their word forms, are the full-length antibody or antigen of interest. Compounds or molecules that have qualitative biological activity in common. For example, a functional fragment or analog of an anti-IL-4 antibody may bind to an IL-4 molecule, or prevent or substantially reduce the ability of a ligand, or agonist or antagonist antibody, to bind to IL-4. What you get.

さらに、「断片」および「抗体断片」という用語は、インタクトなもしくは全長鎖または抗体の部分、一般に、標的結合または可変領域を表す。抗体断片の例は、Fab、Fab’、F(ab’)2およびF断片を含むが、これらに限定されない。例えば、抗IL−4および/またはIL−13抗体の断片または類似体は、受容体がリガンドに結合するまたはシグナル伝達を開始する能力を防ぎ得るまたは実質的に低下させ得るものである。本明細書では、「断片」、「機能的断片」、および「抗体断片」は、抗体に関して一般に同義であり、受容体がリガンドに結合するまたはシグナル伝達を開始する能力を防ぎ得るまたは実質的に低下させ得るF、Fab、F(ab’)2などの断片を表し得る。 In addition, the terms "fragment" and "antibody fragment" refer to intact or full-length chains or parts of the antibody, generally target binding or variable regions. Examples of antibody fragments include, but are not limited to, Fab , Fab' , F (ab') 2 and Fv fragments. For example, fragments or analogs of anti-IL-4 and / or IL-13 antibodies can prevent or substantially reduce the ability of a receptor to bind a ligand or initiate signal transduction. As used herein, "fragment", "functional fragment", and "antibody fragment" are generally synonymous with respect to an antibody and can prevent or substantially prevent the ability of a receptor to bind a ligand or initiate signal transduction. It can represent fragments such as F v , Fab , F (ab') 2 that can be reduced.

「F」断片は、非共有結合の1つの重鎖および1つの軽鎖可変ドメインの二量体(V−V二量体)からなる。その配置では、各可変ドメインの3つのCDRは、インタクトな抗体におけるように、相互作用して、V−V二量体の表面上の標的結合部位を規定する。集団的に、6つのCDRは、標的結合特異性をインタクトな抗体に与える。しかしながら、単一可変ドメイン(または標的に特異的な3つのCDRのみを含むFの半分)さえも、標的を認識し、これに結合する能力を有し得る。 The " Fv " fragment consists of a non-covalent heavy chain and a light chain variable domain dimer ( VH - VL dimer). In that arrangement, the three CDRs of each variable domain interact to define the target binding site on the surface of the VH - VL dimer, as in intact antibodies. Collectively, the six CDRs confer target binding specificity on intact antibodies. However, a single variable domain (or half of F v containing only specific three CDR target) even may have the ability to recognize and target, bind to it.

「単一鎖F」、「sF」または「scAb」抗体断片は、抗体のVおよびVドメインを含み、ここで、これらのドメインは、単一ポリペプチド鎖に存在する。一般に、Fポリペプチドは、VとVドメイン間のしばしば可動性分子であるポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、sFvが標的結合のための望ましい構造を形成することを可能にする。 "Single-chain F v", "sF v" or "scAb" antibody fragments comprise the V H and V L domains of antibody, wherein these domains are present in a single polypeptide chain. In general, F v polypeptide further comprises a polypeptide linker often mobile molecules between V H and V L domains which enables the sFv to form the desired structure for target binding.

「ダイアボディ」という用語は、同じポリペプチド鎖において軽鎖可変ドメイン(V)に結合している重鎖可変ドメイン(V)を含み得る、2つの抗原結合部位を有する抗体断片を表す。短すぎて同じ鎖上の2つの可変ドメイン間に対形成することができないリンカーを使用することによって、ダイアボディドメインは、別のペプチド鎖上の結合ドメインと対形成して、2つの抗原結合部位を作ることを強いられる。 The term "diabody" refers to an antibody fragment having two antigen binding sites that may include a heavy chain variable domain ( VH ) that is bound to a light chain variable domain (VL) in the same polypeptide chain. By using a linker that is too short to be paired between two variable domains on the same strand, the diabody domain is paired with a binding domain on another peptide strand and the two antigen binding sites. Is forced to make.

「Fab」断片は、軽鎖の可変および定常ドメインならびに重鎖の可変および第1の定常ドメイン(CH1)を含有する。Fab’断片は、抗体ヒンジ領域からの1つまたはそれ以上のシステインを含むようなCH1ドメインのカルボキシル終端での少しの残基の付加だけFab断片とは異なる。Fab’断片は、F(ab’)2ペプシン消化産物のヒンジシステインでのジスルフィド結合の切断によって作製することができる。抗体の追加的な酵素的および化学的処置は、目的の他の機能的断片をもたらし得る。 The " Fab " fragment contains a variable and constant domain of the light chain as well as a variable and first constant domain ( CH1 ) of the heavy chain. The Fab'fragment differs from the Fab fragment by the addition of a few residues at the carboxyl termination of the CH1 domain, such as containing one or more cysteines from the antibody hinge region. The Fab'fragment can be made by cleavage of the disulfide bond at the hinge cysteine of the F (ab') 2 pepsin digest. Additional enzymatic and chemical treatment of the antibody may result in other functional fragments of interest.

「直鎖状Fab」という用語は、Millerら(2003),J Immunol.
170:4854−4861によって報告された四価の抗体を表す。直鎖状Fabは、各CH1−VH位置で同一軽鎖と対形成した、同じCH1−VHドメインのタンデムからなる。これらの分子は、アビディティー効果を通してその機能的親和性を増強するための抗体の結合価を増加させるために開発されたが、それらは、単一特異性である。
The term "linear Fab" is used by Miller et al. (2003), J Immunol.
170: Represents the tetravalent antibody reported by 4854-4861. The linear Fab consists of tandems of the same CH1-VH domain paired with the same light chain at each CH1-VH position. These molecules have been developed to increase the valency of antibodies to enhance their functional affinity through the abidi effect, but they are unispecific.

モノクローナル抗体は、本明細書では、重鎖および/または軽鎖の部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラス(型もしくは亜型)に属する抗体における相当する配列と同一であるまたはこれと相同であり、鎖の残りは、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一であるまたはこれと相同である「キメラ」抗体、ならびにIL−4および/またはIL−13に結合するまたはIL−4および/もしくはIL−13活性もしくは代謝に影響する望ましい生物活性を示す限り、かかる抗体の断片を特に含む(U.S.Pat.No.4,816,567;およびMorrisonら(1984),Proc Natl Acad Sci USA 81:6851)。したがって、抗体の1つのクラスからのCDRは、異なるクラスまたはサブクラスの抗体のFR中に移植することができる。 Monoclonal antibodies are, herein, where the heavy and / or light chain portion is identical to the corresponding sequence in an antibody derived from a particular species or belonging to a particular antibody class or subclass (type or subtype). Or homologous to this, the rest of the chain is a "chimeric" antibody that is identical to or homologous to the corresponding sequence in an antibody derived from another species or belonging to another antibody class or subclass, as well as IL-. Such antibody fragments are particularly contained as long as they exhibit desirable biological activity that binds to 4 and / or IL-13 or affects IL-4 and / or IL-13 activity or metabolism (US Pat. No. 4). , 816,567; and Morrison et al. (1984), Proc Natl Acad Sci USA 81: 6851). Therefore, CDRs from one class of antibody can be transplanted into the FR of a different class or subclass of antibody.

モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一標的部位、エピトープまたは決定基に対するものである。さらに、抗原の種々の決定基(エピトープ)に対する種々の抗体を典型的に含む従来の(ポリクローナル)抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、標的上の単一決定基に対するものである。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、宿主細胞によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されておらず、有利であり、その鎖の抗体をコードする関連する遺伝子およびmRNAのクローニングを提供する。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示し、いかなる特定の方法による抗体の作製も必要とすると解釈されない。例えば、本発明での使用のためのモノクローナル抗体は、公知の技法を使用してファージ抗体ライブラリーから単離することができるまたはポリクローナル調製物から精製することができる。本発明に従って使用される親モノクローナル抗体は、Kohlerら(1975),Nature 256:495によって報告されたハイブリドーマ方法によって作製することができる、または当技術分野で公知の組換え方法によって作製することができる。 Monoclonal antibodies are highly specific and are for a single target site, epitope or determinant. Moreover, each monoclonal antibody is against a single determinant on the target, as opposed to conventional (polyclonal) antibody preparations that typically contain different antibodies against the various determinants (epitopes) of the antigen. .. In addition to their specificity, monoclonal antibodies are synthesized by the host cell, uncontaminated by other immunoglobulins, and are advantageous, providing cloning of the relevant genes and mRNAs encoding the antibodies in their strands. .. The modifier "monoclonal" indicates the characteristics of an antibody obtained from a substantially homogeneous population of antibodies and is not construed as requiring the production of the antibody by any particular method. For example, the monoclonal antibody for use in the present invention can be isolated from a phage antibody library using known techniques or purified from a polyclonal preparation. The parental monoclonal antibody used in accordance with the present invention can be made by the hybridoma method reported by Kohler et al. (1975), Nature 256: 495, or by a recombinant method known in the art. ..

「多価抗体」という用語は、本発明では、同時に同じまたは異なる構造を有し得る、2つまたはそれ以上の抗原結合部位を含み、したがって、2つまたはそれ以上の抗原に結合することができる抗体を表す。「二価の」という用語は、抗体が2つの抗原結合部位を含むことを意味する。「四価の」という用語は、抗体が4つの抗原結合部位を含むことを意味する。 The term "multivalent antibody" in the present invention comprises two or more antigen binding sites that may have the same or different structures at the same time and thus can bind two or more antigens. Represents an antibody. The term "divalent" means that an antibody contains two antigen binding sites. The term "tetravalent" means that an antibody contains four antigen binding sites.

「抗原結合部位」という用語は、本発明では、抗原の部分または全てに特異的に結合し、これと相補的である領域を含む抗体の部分を表す。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定の部分にのみ結合し得、その部分は、エピトープと称される。抗原結合ドメインは、1つまたはそれ以上の抗体可変ドメインによって提供される。好ましくは、抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変ドメイン(VL)および抗体重鎖可変ドメイン(VH)の結合からなる。 The term "antigen binding site" in the present invention refers to a portion of an antibody that comprises a region that specifically binds to or is complementary to a portion or all of the antigen. When the antigen is large, the antibody can bind only to a specific portion of the antigen, which portion is referred to as the epitope. Antigen binding domains are provided by one or more antibody variable domains. Preferably, the antigen binding domain consists of binding of an antibody light chain variable domain (VL) and an antibody heavy chain variable domain (VH).

「抗原」という用語は、本発明では、本発明の抗体によって結合される能力がある分子または分子の一部分を表す。抗原は、1つまたはそれ以上のエピトープを有し得る。本発明の抗体によって認識される抗原の例は、血清タンパク質、例えばIL−4、IL−5、IL−9およびIL−13などのサイトカイン、生理活性ペプチド、細胞表面分子、例えば受容体、トランスポーター、イオンチャネル、ウイルスおよび細菌タンパク質を含むが、これらに限定されない。 The term "antigen" in the present invention refers to a molecule or portion of a molecule capable of being bound by an antibody of the invention. The antigen may have one or more epitopes. Examples of antigens recognized by the antibodies of the invention are serum proteins such as cytokines such as IL-4, IL-5, IL-9 and IL-13, physiologically active peptides, cell surface molecules such as receptors, transporters. , Ion channels, viral and bacterial proteins, but not limited to these.

「単一特異性」という用語は、本発明では、本発明の多価抗体が1つの抗原、同一である全ての抗原結合部位のみを認識することを意味する。 The term "unispecificity" means that, in the present invention, the polyvalent antibody of the present invention recognizes only one antigen, all antigen-binding sites that are identical.

「二重特異性」という用語は、本発明では、本発明の多価抗体が同じまたは2つの異なる抗原上の2つの異なるエピトープを認識することを意味する。 The term "bispecific" means that, in the present invention, the polyvalent antibody of the invention recognizes two different epitopes on the same or two different antigens.

「二重特異性抗体」(BsAb)という用語は、単一分子内で2つの抗体の抗原結合部位を組み合わせた分子を表す。したがって、二重特異性抗体は、2つの異なる抗原を同時に結合することができる。診断目的の適用に加えて、BsAbは、強力なエフェクター系を患部に向け直すことによってまたは抗体の中和もしくは刺激活性を増加させることによって、新しい治療的適用の道を開く。 The term "bispecific antibody" (BsAb) refers to a molecule that combines the antigen binding sites of two antibodies within a single molecule. Therefore, the bispecific antibody can bind two different antigens at the same time. In addition to diagnostic applications, BsAb opens the way for new therapeutic applications by directing a potent effector system to the affected area or by increasing antibody neutralization or stimulatory activity.

単一分子内で2つの抗体の抗原結合部位を組み合わせた二重特異性抗体(BsAb)を作製することは興味深い。したがって、かかる分子は、2つの異なる抗原を同時に結合することができる。診断目的の適用に加えて、それらは、例えば、強力なエフェクター系を患部(抗体依存性細胞傷害(ADCC)または補体依存性細胞傷害(CDC)のように、癌細胞がモノクローナル抗体によってトリガされる正常な免疫応答を抑える機構をしばしば発達させる)に向け直すことによって、または抗体の中和もしくは刺激活性を増加させることによって、新しい治療的適用の道を開く。治療目的で種々の標的抗原に対する2つの全抗体の結合特異性をカップルする最初の試みは、化学的に融合したヘテロコンジュゲート(heteroconjugate)分子を利用した(Staerzら(1985),Nature 314:628−631)。 It is interesting to make bispecific antibodies (BsAbs) that combine the antigen binding sites of two antibodies within a single molecule. Therefore, such a molecule can bind two different antigens at the same time. In addition to diagnostic applications, they have a potent effector system in which cancer cells are triggered by monoclonal antibodies, such as affected areas (antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) or complement-dependent cellular cytotoxicity (CDC)). By re-directing (often developing mechanisms that suppress normal immune responses), or by increasing antibody neutralization or stimulatory activity, it opens the way for new therapeutic applications. The first attempt to couple the binding specificity of two total antibodies against various target antigens for therapeutic purposes utilized chemically fused heteroconjugate molecules (Staerz et al. (1985), Nature 314: 628). -631).

二重特異性抗体は、それぞれ異なる免疫グロブリンを作製することができる2つのハイブリドーマを融合することによって元々は作製された(Milstein and Cuello,1983,1984)が、細胞培養において生じる分子種の複雑さ(最大10の異なる分子種)により、精製は困難かつ高価である(George and Huston,1997)。上記の細胞融合物から作製されたヘテロコンジュゲートまたは二重特異性抗体を使用して得られた有望な結果にもかかわらず、いくつかの因子により、それらは、大規模な治療的適用に非実用的であった。かかる因子は、in vivoでのヘテロコンジュゲートの迅速なクリアランス、分子の両方の型を産出するのに必要な実験室集中的技法、ホモコンジュゲートまたは単一特異性抗体から隔たって、ヘテロコンジュゲートの広範な精製の必要性および一般に低い収量を含む。 Bispecific antibodies were originally produced by fusing two hybridomas capable of producing different immunoglobulins (Milstein and Cuello, 1983, 1984), but the complexity of the molecular species that occurs in cell culture. Due to (up to 10 different molecular species), purification is difficult and expensive (George and Huston, 1997). Despite the promising results obtained using heteroconjugates or bispecific antibodies made from the cell fusions described above, due to several factors, they are not suitable for large-scale therapeutic applications. It was practical. Such factors include rapid clearance of heteroconjugates in vivo, laboratory-intensive techniques required to produce both types of molecules, heteroconjugates apart from homoconjugates or monospecific antibodies. Includes extensive purification needs and generally low yields.

遺伝子工学は、結合性質およびエフェクター機能の望ましいセットを有する抗体または抗体誘導体を設計する、修飾する、かつ作製するために使用される頻度が増加している。いろいろな組換え方法が、抗体断片(Carterら(1995),J.Hematotherapy 4:463−470;Pluckthunら(1997)Immunotechology 3:83−105;Todorovskaら(2001)J.Immunol.Methods 248:47−66)と全長IgGフォーマット(Carter(2001)J.Immunol.Methods 248:7−15)の両方としてのBsAbの効率的な作製のために開発された。 Genetic engineering is increasingly being used to design, modify, and produce antibodies or antibody derivatives that have the desired set of binding properties and effector functions. Various recombination methods include antibody fragments (Carter et al. (1995), J. Hematotherapy 4: 463-470; Pluckthun et al. (1997) Immunotechnology 3: 83-105; Todorovska et al. (2001) J. Immunol. Methods 248: 47. -66) and for the efficient production of BsAbs as both a full-length IgG format (Carter (2001) J. Immunol. Methods 248: 7-15).

Abbottは、米国特許US7612181においてマウスDual−Variable−Domain IgG(DVD−IgG)二重特異性抗体を報告し、これは、Unilever特許(US5989830)において報告された二重−Fvフォーマットに基づいている。ヒト化二重特異性フォーマットは、その全体が参照によって本明細書に組み入れられているWO2009/052081(TBTI)において報告された。Dual−Fvのそれぞれの鎖への定常ドメインの付加(重鎖へのCH1−Fcおよび軽鎖へのカッパーまたはラムダ定常ドメイン)は、機能的二重特異性二重V領域抗体様結合タンパ
ク質をもたらした。
Abbott reported a mouse Dual-Variable-Domain IgG (DVD-IgG) bispecific antibody in US patent US7612181, which is based on the double-Fv format reported in Unilever patent (US5989830). The humanized bispecific format was reported in WO2009 / 052081 (TBTI), which is incorporated herein by reference in its entirety. Addition of constant domains to each strand of Dual-Fv (CH1-Fc to heavy chains and copper or lambda constant domains to light chains) results in a functional bispecific bispecific bi-V region antibody-like binding protein. It was.

IL−4およびIL−13に特異的に結合する4つの結合部位を有する二重特異性二重−可変−領域(二重−V−領域)抗体様結合タンパク質が、どちらもその全体が参照によって本明細書に組み入れられている、国際出願PCT/US2008/079787(WO2009/052081)およびPCT/US2012/029147(WO2012/125775)において報告された。 Bispecific bi-variable-region (double-V-region) antibody-like binding proteins with four binding sites that specifically bind to IL-4 and IL-13, both by reference in their entirety. It is reported in the international applications PCT / US2008 / 079787 (WO2009 / 052081) and PCT / US2012 / 029147 (WO2012 / 125775), which are incorporated herein.

本発明の実施形態は、同じまたは2つの異なる抗原上の2つの異なるエピトープに特異的に結合する二重V領域抗体様タンパク質またはその断片を含むように操作された二重特異性抗体である。本発明の実施形態は、IL−13およびIL−4に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、ここで、前記可変軽鎖ドメインは、アミノ酸配列の配列番号1および配列番号3を含む。本発明のさらなる実施形態は、IL−13およびIL−4に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、ここで、前記可変重鎖ドメインは、アミノ酸配列の配列番号2および配列番号5を含む。本発明の別の実施形態は、IL−13およびIL−4に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、ここで、前記可変重鎖ドメインは、アミノ酸配列の配列番号2および配列番号4を含む。本発明の実施形態は、IL−13およびIL−4に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、アミノ酸配列の配列番号1および配列番号3を含む可変軽鎖ドメイン、ならびにアミノ酸配列の配列番号2および配列番号4を含む可変重鎖ドメインを含む。本発明のさらなる実施形態は、IL−13およびIL−4に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片であり、ここで、前記二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片は、アミノ酸配列の配列番号1および配列番号3を含む可変軽鎖ドメイン、ならびにアミノ酸配列の配列番号2および配列番号4を含む可変重鎖ドメインを含み、ここで、ペプチドリンカーが配列番号1を配列番号3に連結し、ペプチドリンカーが配列番号2を配列番号4に連結する。 An embodiment of the invention is a bispecific antibody engineered to include a bi-V region antibody-like protein or fragment thereof that specifically binds to two different epitopes on the same or two different antigens. An embodiment of the present invention is a bispecific antibody or a bispecific antibody fragment thereof that specifically binds to IL-13 and IL-4, wherein the bispecific antibody or the bispecific antibody thereof is used. The sex antibody fragment comprises a variable light chain domain and a variable heavy chain domain, wherein the variable light chain domain comprises SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 3 of the amino acid sequence. A further embodiment of the present invention is a bispecific antibody or bispecific antibody fragment thereof that specifically binds to IL-13 and IL-4, wherein the bispecific antibody or bispecific thereof. The specific antibody fragment comprises a variable light chain domain and a variable heavy chain domain, wherein the variable heavy chain domain comprises SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 5 of the amino acid sequence. Another embodiment of the invention is a bispecific antibody or bispecific antibody fragment thereof that specifically binds to IL-13 and IL-4, wherein the bispecific antibody or two thereof. The heavy specific antibody fragment comprises a variable light chain domain and a variable heavy chain domain, wherein the variable heavy chain domain comprises SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4 of the amino acid sequence. An embodiment of the present invention is a bispecific antibody or a bispecific antibody fragment thereof that specifically binds to IL-13 and IL-4, wherein the bispecific antibody or the bispecific antibody thereof is used. The sex antibody fragment comprises a variable light chain domain comprising SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 3 of the amino acid sequence, and a variable heavy chain domain comprising SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4 of the amino acid sequence. A further embodiment of the invention is a bispecific antibody or bispecific antibody fragment thereof that specifically binds to IL-13 and IL-4, wherein the bispecific antibody or bispecific thereof. The specific antibody fragment comprises a variable light chain domain comprising SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 3 of the amino acid sequence, and a variable heavy chain domain comprising SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4 of the amino acid sequence, wherein the peptide linker is sequenced. No. 1 is linked to SEQ ID NO: 3, and the peptide linker links SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 4.

本発明の実施形態は、(a)配列番号1および配列番号3のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメイン;(b)配列番号2および配列番号4のアミノ酸配列を含む可変重鎖ドメイン;(c)配列番号1を配列番号3に連結するペプチドリンカー、および配列番号2を配列番号4に連結するペプチドリンカーであって、配列番号6からなるアミノ酸配列を有するペプチドリンカー;ならびに(d)定常領域ドメインを含む、IL−13およびIL−4に特異的に結合する二重特異性抗体またはその二重特異性抗体断片を含むhuTBTI3_2_1またはSAR156597である。 Embodiments of the invention are (a) a variable light chain domain comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 3; (b) a variable heavy chain domain comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4; (c). A peptide linker linking SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 3 and a peptide linker linking SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 4 and having an amino acid sequence consisting of SEQ ID NO: 6; and (d) a constant region domain. HuTBTI3_2_1 or SAR156597 comprising a bispecific antibody that specifically binds IL-13 and IL-4 or a bispecific antibody fragment thereof.

「多特異的」という用語は、本発明では、本発明の多価抗体が同じまたは複数の異なる抗原上の複数の異なるエピトープを認識することを意味する。 The term "multispecific" means that, in the present invention, the polyvalent antibody of the invention recognizes a plurality of different epitopes on the same or multiple different antigens.

「リンカー」という用語は、本発明では、本発明の抗体構築物の可変ドメインに結合するように適合させたペプチドを表す。ペプチドリンカーは、任意のアミノ酸を含有し得、アミノ酸グリシン(G)およびセリン(S)が好ましい。リンカーは、重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチド間ならびに内で互いに等しくてもまたは異なっていてもよい。さらに、リンカーは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20アミノ酸長を有し得る。軽鎖ドメインに関するように、重鎖ドメインに関する好ましいペプチドリンカー単位は、GGGGSである
。重鎖のおよび軽鎖のリンカー単位の数は、互いに等しくても(対称的序列)または異なっていても(非対称的序列)よい。
The term "linker" in the present invention refers to a peptide adapted to bind to the variable domain of the antibody construct of the present invention. The peptide linker can contain any amino acid, with amino acids glycine (G) and serine (S) being preferred. The linkers may be equal to or different from each other between and within heavy and light chain polypeptides. In addition, the linker may have a length of 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 or 20 amino acids. .. As with the light chain domain, the preferred peptide linker unit for the heavy chain domain is GGGGS. The number of heavy and light chain linker units may be equal to or different from each other (symmetrical order) or different (asymmetrical order).

ペプチドリンカーは、好ましくは、抗体部分が例えば、立体障害によって互いの活性に干渉することを防ぐ、適切なタンパク質折り畳みを可能にする、かつ、必要な場合、抗体分子が2つまたはそれ以上の、おそらく互いの間隔が広い、同じ細胞上の受容体と相互作用することを可能にする可動性の十分な程度を提供するのに十分長いが;それは、好ましくは、抗体部分が細胞において安定な状態を保つことを可能にするのに十分な程短い。 Peptide linkers preferably allow proper protein folding, preventing antibody moieties from interfering with each other's activities, for example due to steric hindrance, and, if necessary, two or more antibody molecules. Probably long enough to provide a sufficient degree of mobility that allows them to interact with receptors on the same cell, which are widely spaced; it is preferable that the antibody moiety is stable in the cell. Short enough to be able to keep.

したがって、ペプチドリンカーの長さ、組成および/または立体構造は、多価抗体の望ましい性質を最適化するために、当業者によって容易に選択される。 Therefore, the length, composition and / or conformation of the peptide linker is readily selected by one of ordinary skill in the art to optimize the desired properties of the multivalent antibody.

非ヒト(例えば、マウス)抗体の「ヒト化」形は、ヒト抗体と比較して、非ヒト免疫グロブリン由来の配列を含有する、(F、Fab、Fab’、F(ab’)2または抗体の他の標的結合サブ配列(subsequence)などの)キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはその断片である。一般に、ヒト化抗体は、1つ、典型的に2つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、ここで、CDR領域の全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、FR領域の全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン鋳型配列のものである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域(F)、典型的に、選択されたヒト免疫グロブリン鋳型のものの少なくとも一部分も含み得る。一般に、目標は、ヒトにおいて最小に免疫原性である抗体分子を有することである。したがって、IL−4および/またはIL−13への1つまたはそれ以上のCDRの特異的結合機能を実質的に最小化することなく、1つまたはそれ以上のCDRにおける1つまたはそれ以上のアミノ酸を、ヒト宿主に対して免疫原性がより低いものに変えることもできる可能性がある。代わりに、FRは、非ヒトとすることができるが、最も免疫原性のアミノ酸は、免疫原性がより低いもので置き換えられる。それにもかかわらず、上記のように、CDR移植は、ヒト化抗体を得るための唯一の方法ではない。例えば、フレームワーク残基がCDRループの三次元構造およびそのリガンドへの抗体の全体的な親和性を決定することにおける役割を有することは珍しくないので、CDR領域だけを修飾することは、不十分であり得る。したがって、非ヒト親抗体分子が修飾されて、ヒトに対して免疫原性がより低いものとなるように、任意の手段を実行することができ、ヒト抗体との包括的な配列同一性は、必ずしも必要であるとは限らない。したがって、ヒト化は、例えば、ほんの少数の残基、特に、抗体分子上で曝露され、分子内に埋められていない、したがって、宿主免疫系が容易に到達できないものの単なる置換によっても達成することができる。かかる方法は、抗体分子上の「移動性」または「可動性」残基を置換することに関して本明細書で教示されており、目標は、そのエピトープまたは決定基への抗体の特異性を含むことなく、結果として生じる分子の免疫原性を低下させるまたは鈍らせることである。例えば、Studnickaら,Prot Eng 7(6)805−814,1994;Mol Imm 44:1986−1988,2007;Simsら,J Immunol 151:2296(1993);Chothiaら,J Mol Biol 196:901(1987);Carterら,Proc Natl Acad Sci USA 89:4285(1992);Prestaら,J Immunol 151:2623(1993)、WO2006/042333およびU.S.Pat.No.5,869,619を参照されたい。 The "humanized" form of a non-human (eg, mouse) antibody contains a sequence derived from a non-human immunoglobulin as compared to a human antibody (F v , Fab , Fab' , F (ab'). 2 or chimeric immunoglobulins (such as subsequences of antibodies), immunoglobulin chains or fragments thereof. In general, humanized antibodies will contain substantially all of one, typically two variable domains, where all or substantially all of the CDR regions correspond to those of non-human immunoglobulins. However, all or substantially all of the FR regions are of human immunoglobulin template sequences. Humanized antibody, an immunoglobulin constant region (F c), typically, may also comprise at least a portion of that of a human immunoglobulin template chosen. In general, the goal is to have an antibody molecule that is minimally immunogenic in humans. Thus, one or more amino acids in one or more CDRs without substantially minimizing the specific binding function of one or more CDRs to IL-4 and / or IL-13. May also be transformed into one that is less immunogenic to the human host. Alternatively, FR can be non-human, but the most immunogenic amino acids are replaced by those with lower immunogenicity. Nevertheless, as mentioned above, CDR transplantation is not the only way to obtain humanized antibodies. Modifying only the CDR regions is inadequate, as it is not uncommon for framework residues to have a role in determining the three-dimensional structure of the CDR loop and the overall affinity of the antibody for its ligands. Can be. Thus, any means can be performed such that the non-human parent antibody molecule is modified to be less immunogenic to humans, and comprehensive sequence identity with human antibodies Not always necessary. Thus, humanization can be achieved, for example, by mere substitution of only a few residues, particularly those that are exposed on the antibody molecule and are not embedded within the molecule, and thus are not readily reachable by the host immune system. it can. Such methods are taught herein with respect to substituting "mobile" or "mobile" residues on an antibody molecule, the goal of which is to include the specificity of the antibody for its epitope or determinant. Instead, it reduces or blunts the immunogenicity of the resulting molecule. For example, Studnikka et al., Prot Eng 7 (6) 805-814, 1994; Mol Imm 44: 1986-1988, 2007; Sims et al., J Immunol 151: 2296 (1993); Chothia et al., J Mol Biol 196: 901 (1987). ); Carter et al., Proc Natl Acad Sci USA 89: 4285 (1992); Presta et al., J Immunol 151: 2623 (1993), WO 2006/042333 and U.S.A. S. Pat. No. See 5,869,619.

「抗体相同体」または「相同体」は、本明細書で教示された、IL−4および/またはIL−13を特異的に結合する任意の分子を表す。したがって、抗体相同体は、修飾されていてもまたはされていなくても、天然または組換え抗体、FabもしくはF分子などのIL−4またはIL−13に結合するなどの目的の生物学的性質を保持する抗体の部分、単鎖抗体、1つまたはそれ以上のCDR領域を有するポリペプチドなどを含む。相同体
のアミノ酸配列は、天然にある抗体のものと同一である必要はなく、増強されたまたは他の有利な性質を有するポリペプチドを得るために、置換アミノ酸、挿入アミノ酸、欠失アミノ酸、タンパク質において通常見出される20種以外のアミノ酸などを有するように改変または修飾することができる。
“Antibody homologue” or “homologue” refers to any molecule that specifically binds IL-4 and / or IL-13 as taught herein. Thus, antibody homologues, whether modified or unmodified, are biologically of interest, such as binding to IL-4 or IL-13, such as natural or recombinant antibodies, Fab or Fv molecules. Includes a portion of the antibody that retains its properties, a single chain antibody, a polypeptide having one or more CDR regions, and the like. The amino acid sequence of the homologue does not have to be identical to that of the naturally occurring antibody, but substituted amino acids, inserted amino acids, deleted amino acids, proteins to obtain polypeptides with enhanced or other advantageous properties. It can be modified or modified to have amino acids other than the 20 types usually found in.

相同配列を有する抗体は、IL−4、IL−13または本発明の二重特異性IL−4/IL−13抗体のアミノ酸配列と配列相同性を有するアミノ酸配列を有する抗体である。好ましくは、相同性は、本発明の抗体の可変領域のアミノ酸配列とである。本明細書でアミノ酸配列に適用される「配列相同性」は、例えば、Pearson&Lipman,Proc Natl Acad Sci USA 85,2444−2448(1988)に従ってFASTA探索方法によって決定される、別のアミノ酸配列との少なくとも約90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%の配列相同性を有する配列として定義される。 An antibody having a homology sequence is an antibody having an amino acid sequence having sequence homology with the amino acid sequence of IL-4, IL-13 or the bispecific IL-4 / IL-13 antibody of the present invention. Preferably, the homology is with the amino acid sequence of the variable region of the antibody of the invention. The "sequence homology" applied herein to an amino acid sequence is at least as determined by the FASTA search method according to, for example, Pearson & Lipman, Proc Natl Acad Sci USA 85, 2444-2448 (1988). It is defined as a sequence having about 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% or 99% sequence homology.

キメラ抗体は、種々の抗体、抗体の種々のクラス、種々の動物種などの種々の供給源由来の抗体の種々の部分を有するもの、例えば、ヒト免疫グロブリン定常領域と対形成したマウスモノクローナル抗体由来の可変領域を有する抗体などである。したがって、ヒト化抗体は、キメラ抗体の一種である。キメラ抗体を作製するための方法は、当技術分野で公知であり、例えば、Morrison,1985,Science 229:1202;Oiら,1986,BioTechniques 4:214;Gilliesら,1989,J Immunol Methods 125:191 202;ならびにU.S.Pat.Nos.5,807,715、4,816,567、および4,816,397を参照されたい。 Chimeric antibodies are those that have different parts of antibodies from different sources, such as different antibodies, different classes of antibodies, different animal species, etc., eg, derived from mouse monoclonal antibodies paired with human immunoglobulin constant regions. Such as an antibody having a variable region of. Therefore, humanized antibodies are a type of chimeric antibody. Methods for making chimeric antibodies are known in the art and are described, for example, in Morrison, 1985, Science 229: 1202; Oi et al., 1986, BioTechniques 4: 214; Gillies et al., 1989, J Immunol Methods 125: 191. 202; and U.S.A. S. Pat. Nos. See 5,807,715, 4,816,567, and 4,816,397.

人工抗体は、それぞれ抗原結合またはエピトープ結合能力を有する、scFv断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよび分子認識単位(mru)(Winter&Milstein,1991,Nature 349:293−299による総説;およびHudson,1999,Curr Opin Imm 11:548−557を参照されたい)を含む。単鎖F断片(scFv)では、抗体のVおよびVドメインは、可動性ペプチドによって連結されている。典型的に、リンカーは、約15アミノ酸のペプチドである。リンカーがはるかに小さい、例えば、5アミノ酸である場合、ダイアボディが形成される。抗体の最も小さい結合単位は、CDR、典型的に、十分な特異的認識および結合能力を有する重鎖のCDR2である。かかる断片は、分子認識単位またはmruと称される。いくつかのかかるmruは、短いリンカーペプチドで一緒に連結され、したがって、単一mruよりも高いアビディティーを有する人工結合タンパク質を形成する。 Artificial antibodies are described by scFv fragments, chimeric antibodies, diabodies, triabodies, tetrabodies and molecular recognition units (mru) (Winter & Milstein, 1991, Nature 349: 293-299; and) having antigen-binding or epitope-binding capabilities, respectively. Hudson, 1999, Curr Opin Imm 11: 548-557). In a single chain Fv fragment (scFv), the VH and VL domains of an antibody are linked by a mobile peptide. Typically, the linker is a peptide of about 15 amino acids. If the linker is much smaller, eg, 5 amino acids, a diabody is formed. The smallest binding unit of an antibody is a CDR, typically a heavy chain CDR2 with sufficient specific recognition and binding capacity. Such fragments are referred to as molecular recognition units or mru. Some such mru are linked together with a short linker peptide, thus forming an artificially bound protein with higher avidity than a single mru.

目的の抗体の機能的同等物も本発明の範囲内に含まれる。「機能的同等物」という用語は、相同配列を有する抗体、抗体相同体、キメラ抗体、人工抗体および修飾抗体を含み、例えば、ここで、各機能的同等物は、IL−4および/もしくはIL−13に結合する、IL−4および/もしくはIL−13シグナル伝達能力もしく機能を阻害する、またはその受容体へのIL−4および/もしくはIL−13の結合を阻害する能力によって定義される。当業者は、「抗体断片」と称される分子の群と「機能的同等物」と称される群において重複があることを理解することになる。IL−4および/またはIL−13結合能力を保持する機能的同等物を作製する方法は、当業者に公知であり、例えば、WO93/21319、EPO Ser.No.239,400、WO89/09622、EPO Ser.No.338,745およびEPO Ser.No.332,424において開示されている。 Functional equivalents of the antibody of interest are also included within the scope of the invention. The term "functional equivalent" includes antibodies having homologous sequences, antibody homologues, chimeric antibodies, artificial antibodies and modified antibodies, eg, where each functional equivalent is IL-4 and / or IL. Defined by the ability to bind IL-4 and / or IL-13, or to inhibit function, or to inhibit the binding of IL-4 and / or IL-13 to its receptor. .. Those skilled in the art will appreciate that there is overlap between the group of molecules referred to as "antibody fragments" and the group referred to as "functional equivalents". Methods of making functional equivalents that retain IL-4 and / or IL-13 binding capacity are known to those of skill in the art and are described, for example, in WO 93/21319, EPO Ser. No. 239,400, WO89 / 09622, EPO Ser. No. 338, 745 and EPO Ser. No. It is disclosed in 332,424.

本出願の機能的同等物は、修飾抗体、例えば、抗体への任意の型の分子の共有結合によ
って修飾された抗体も含む。例えば、修飾抗体は、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、アミド分解、リン酸化、アミド化、公知の保護/ブロック基による誘導体化、タンパク質切断、細胞リガンドへの連結、毒素もしくは細胞傷害性部分または他のタンパク質への連結などによって修飾されている抗体を含む。共有結合は、抗イディオタイプ応答を産出することを免れた抗体を必ずしももたらさない。修飾は、特定の化学的切断、アセチル化、ホルミル化、代謝合成などを含むが、これらに限定されない公知の技法によって達成することができる。さらに、修飾抗体は、1つまたはそれ以上の非古典的アミノ酸を含有し得る。
Functional equivalents of the present application also include modified antibodies, eg, antibodies modified by covalent attachment of any type of molecule to the antibody. For example, modified antibodies can be, for example, glycosylation, acetylation, pegation, amid degradation, phosphorylation, amidation, derivatization with known protective / blocking groups, protein cleavage, ligation to cellular ligands, toxins or cytotoxicity. Includes antibodies that have been modified, such as by linkage to a partial or other protein. Covalent binding does not necessarily result in antibodies that escape producing an anti-iditopic response. Modifications can be achieved by known techniques including, but not limited to, specific chemical cleavage, acetylation, formylation, metabolic synthesis, and the like. In addition, the modified antibody may contain one or more non-classical amino acids.

処置の目的に関する「哺乳動物」は、ヒト、家畜、非ヒト霊長類、およびイヌ、ウマ、ネコ、ウシなどの動物園の動物、運動競技用の動物またはペット動物を含めた哺乳動物に分類される任意の動物を表す。 "Mammals" for the purpose of treatment are classified as humans, domestic animals, non-human primates, and mammals including zoo animals such as dogs, horses, cats, cows, athletic animals or pet animals. Represents any animal.

「処置」という用語は、本発明では、療法の過程としての治療的処置と予防的(prophylactic)または予防的(preventative)措置の両方を表す。それは、疾患状況、疾患進行、疾患原因物質(例えば、細菌またはウイルス)または他の異常な状態の有害な効果を防ぐ、治癒する、元に戻す、減弱させる、軽減する、最小化する、抑えるまたは停止させることを表す。 The term "treatment" in the present invention refers to both therapeutic and prophylactic or prophylactic measures as a course of therapy. It prevents, cures, undoes, diminishes, reduces, minimizes, suppresses or suppresses the harmful effects of disease status, disease progression, disease-causing substances (eg, bacteria or viruses) or other abnormal conditions. Indicates to stop.

「単離」または「精製」抗体は、タンパク質が由来する細胞もしくは組織供給源もしくは培地からの細胞物質もしくは他の汚染タンパク質を実質的に含まない、または化学的に合成される場合、化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まない。「細胞物質を実質的に含まない」という用語は、ポリペプチド/タンパク質がそこから同じものが単離されるまたは組換えで作製される細胞の細胞構成成分から分離された抗体の調製物を含む。したがって、細胞物質を実質的に含まない抗体は、約30%、20%、10%、5%、2.5%または1%未満(乾燥重量で)の汚染タンパク質を有する抗体の調製物を含む。抗体が組換えで作製される場合、それは、培養培地も好ましくは実質的に含まない、すなわち、培養培地は、約20%、10%、5%、2.5%または1%未満のタンパク質調製物の体積に相当する。抗体が化学合成によって作製される場合、それは、化学的前駆体または他の化学物質および試薬を好ましくは実質的に含まない、すなわち、目的の抗体は、タンパク質の合成に関与している化学的前駆体または他の化学物質から分離されている。したがって、抗体のかかる調製物は、約30%、20%、10%、5%または1%未満(乾燥重量で)の目的の抗体以外の化学的前駆体または化合物を有する。本発明の好ましい実施形態では、抗体は、単離されているまたは精製されている。 An "isolated" or "purified" antibody is a chemical precursor if it is substantially free of cellular material or other contaminating proteins from the cell or tissue source or medium from which the protein is derived, or if it is chemically synthesized. Substantially free of body or other chemicals. The term "substantially free of cellular material" includes preparations of antibodies from which the same polypeptide / protein is isolated or isolated from the cellular constituents of cells made by recombination. Thus, antibodies that are substantially free of cellular material include preparations of antibodies with contaminating proteins of about 30%, 20%, 10%, 5%, 2.5% or less than 1% (by dry weight). .. When the antibody is made recombinantly, it is also preferably substantially free of culture medium, i.e. the culture medium is about 20%, 10%, 5%, 2.5% or less than 1% protein preparation. Corresponds to the volume of an object. When an antibody is made by chemical synthesis, it is preferably substantially free of chemical precursors or other chemicals and reagents, i.e. the antibody of interest is a chemical precursor involved in the synthesis of the protein. Separated from the body or other chemicals. Thus, such preparations with antibodies have about 30%, 20%, 10%, 5% or less than 1% (by dry weight) chemical precursors or compounds other than the antibody of interest. In a preferred embodiment of the invention, the antibody has been isolated or purified.

本明細書では、「治療薬」という用語は、異常なIL−4および/またはIL−13代謝および活性に関連する疾患、障害、疾病などの処置、管理または回復において使用することができる任意の薬剤を表す。 As used herein, the term "therapeutic agent" can be used in the treatment, management or recovery of diseases, disorders, diseases and the like associated with abnormal IL-4 and / or IL-13 metabolism and activity. Represents a drug.

本明細書では、「用量」は、異常なIL−4および/またはIL−13代謝および活性に関連する疾患、障害、疾病などの処置、管理または回復において使用することができる任意の薬剤の量を表す。 As used herein, "dose" is the amount of any agent that can be used in the treatment, management or recovery of diseases, disorders, diseases and the like associated with abnormal IL-4 and / or IL-13 metabolism and activity. Represents.

本明細書では、「安全用量」は、臨床的に容認できるベネフィット/リスクプロファイルを維持しながら、異常なIL−4および/またはIL−13代謝および活性に関連する疾患、障害、疾病などの処置、管理または回復において使用することができる任意の薬剤または任意の薬剤の用量を表す。本明細書で開示された二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片の安全用量は、10mg、20mg、40mg、50mg、80mg、100mg、150mg、200mg、および300mgからなる群から選択される。安全用量の実施形態は、約10mgから約300mgである。安全用量のさらなる実施形態は
、200mg、約200mg、最大200mgである、または約200mgを超えない任意の用量である。他の実施形態では、安全用量は、約50mg、または約100mg、または約200mgである。一部の実施形態では、安全用量は、週1回投与される。一部の実施形態では、安全用量は、皮下投与(SC)される。
As used herein, the "safe dose" refers to the treatment of diseases, disorders, diseases, etc. associated with abnormal IL-4 and / or IL-13 metabolism and activity while maintaining a clinically acceptable benefit / risk profile. , Represents any drug or dose of any drug that can be used in management or recovery. The safe dose of the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof disclosed herein is selected from the group consisting of 10 mg, 20 mg, 40 mg, 50 mg, 80 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, and 300 mg. Safe dose embodiments are from about 10 mg to about 300 mg. Further embodiments of safe doses are 200 mg, about 200 mg, up to 200 mg, or any dose not exceeding about 200 mg. In other embodiments, the safe dose is about 50 mg, or about 100 mg, or about 200 mg. In some embodiments, the safe dose is administered once a week. In some embodiments, the safe dose is administered subcutaneously (SC).

それらの細胞表面受容体とのIL−4およびIL−13のライゲーション後の細胞内シグナル伝達は、シグナル伝達分子シグナル伝達性転写因子6(Stat6)のリン酸化によって部分的に媒介される。 Post-ligation intracellular signaling of IL-4 and IL-13 with those cell surface receptors is partially mediated by phosphorylation of the signaling molecule signaling transcription factor 6 (Stat6).

ケモカイン(C−Cモチーフ)リガンド17(CCL17)は、CCケモカインファミリーに属する低分子サイトカインである。CCL17は、胸腺および活性化制御ケモカイン(TARC)としても公知である。TARCは、Stat6リン酸化を通してIL−4および/またはIL−13によって誘導される(Wirnsbergerら,(2006)Eur J Immunol.36:1882−91;Liddiardら,(2006)BMC Mol Biol.29:7:45;Monickら,(2007)J Immunol.179:1648−58)。したがって、例えば、IL−4/IL−13結合抗体様タンパク質によるIL−4および/またはIL−13媒介シグナル伝達の阻害は、TARC誘導の阻害と関連している。一部の実施形態では、本明細書で開示された方法は、対象に投与された抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片のIL−4および/またはIL−13への結合を検出する方法であって、(a)抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片を対象に投与する工程;および(b)対象から抜き取られた血液、血清、または血漿サンプル内のCCL17/TARCの量を決定する工程であって、抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片の投与前に対象から抜き取られたサンプルと比較した、サンプル中のCCL17/TARCの量の減少がIL−4および/またはIL−13への抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片の結合を知らせる工程を含む方法を含む。一部の実施形態では、対象は、ヒト対象である。一部の実施形態では、抗体もしくは抗体様結合タンパク質またはその断片は、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片である。一部の実施形態では、二重V領域抗体様結合タンパク質またはその断片は、IL−4またはIL−13に特異的である、またはIL−4およびIL−13に二重特異的である。一部の実施形態では、工程(c)は、工程(b)において測定されたTARC/CCL17の減少が閾値未満である場合(すなわちTARC/CCL17レベルが十分減少しない場合)、用量を増加させること、または工程(b)において測定されたTARC/CCL17の減少が閾値を超えている場合(すなわちTARC/CCL17が過剰に減少する場合)、用量を減少させることをさらに含む。一部の実施形態では、工程(c)の閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるTARC/CCL17の量と比較した、TARC/CCL17の量の約10%の減少、または約15%の減少、または約20%の減少、または約25%の減少、または約30%の減少、または約35%の減少、または約40%の減少、または約45%の減少、または約50%の減少、または約55%の減少、または約60%の減少、または約65%の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるTARC/CCL17の量と比較した、TARC/CCL17の量の約20%から約60%の減少、または約40%から約50%の減少である。一部の実施形態では、閾値は、用量が投与される前に測定された対象におけるTARC/CCL17の量と比較した、TARC/CCL17の量の約43%の減少である。例えば、200mg用量に関する43%の減少は、IL−4/IL−13への二重特異性抗IL−4/IL−13二重V領域抗体様結合タンパク質の200mg用量の結合を知らせる。 Chemokine (CC motif) ligand 17 (CCL17) is a low molecular weight cytokine belonging to the CC chemokine family. CCL17 is also known as thymus and activation control chemokine (TARC). TARC is induced by IL-4 and / or IL-13 through Stat6 phosphorylation (Wirnsberger et al., (2006) Eur J Immunol. 36: 1882-91; Liddiard et al., (2006) BMC Mol Biol. 29: 7). : 45; Monic et al. (2007) J Immunol. 179: 1648-58). Thus, for example, inhibition of IL-4 and / or IL-13-mediated signaling by IL-4 / IL-13 binding antibody-like proteins is associated with inhibition of TARC induction. In some embodiments, the method disclosed herein is a method of detecting the binding of an antibody or antibody-like binding protein or fragment thereof administered to a subject to IL-4 and / or IL-13. The step of administering the antibody or antibody-like binding protein or fragment thereof to the subject; and (b) determining the amount of CCL17 / TARC in the blood, serum, or plasma sample drawn from the subject. The reduction in the amount of CCL17 / TARC in the sample compared to the sample withdrawn from the subject prior to administration of the antibody or antibody-like binding protein or fragment thereof was an antibody or antibody to IL-4 and / or IL-13. Includes methods that include the step of signaling the binding of a like-binding protein or fragment thereof. In some embodiments, the subject is a human subject. In some embodiments, the antibody or antibody-like binding protein or fragment thereof is a double V region antibody-like binding protein or fragment thereof. In some embodiments, the double V region antibody-like binding protein or fragment thereof is specific for IL-4 or IL-13, or bispecific for IL-4 and IL-13. In some embodiments, step (c) increases the dose if the reduction in TARC / CCL17 measured in step (b) is below the threshold (ie, if the TARC / CCL17 level is not sufficiently reduced). , Or if the reduction in TARC / CCL17 measured in step (b) exceeds a threshold (ie, if TARC / CCL17 is excessively reduced), further include reducing the dose. In some embodiments, the threshold of step (c) is about a 10% reduction in or about 10% reduction in the amount of TARC / CCL17 compared to the amount of TARC / CCL17 in the subject measured before the dose was administered. 15% reduction, or about 20% reduction, or about 25% reduction, or about 30% reduction, or about 35% reduction, or about 40% reduction, or about 45% reduction, or about 50 % Reduction, or about 55% reduction, or about 60% reduction, or about 65% reduction. In some embodiments, the threshold is a reduction of about 20% to about 60%, or about 40, of the amount of TARC / CCL17 compared to the amount of TARC / CCL17 in the subject measured before the dose was administered. It is a decrease of about 50% from%. In some embodiments, the threshold is a reduction of about 43% of the amount of TARC / CCL17 compared to the amount of TARC / CCL17 in the subject measured before the dose was administered. For example, a 43% reduction for a 200 mg dose signals binding of a 200 mg dose of bispecific anti-IL-4 / IL-13 double V region antibody-like binding protein to IL-4 / IL-13.

「約」という用語は、数値に関連して使用された場合、示された数値よりも5%、10%、または15%小さい下限を有し、かつ示された数値よりも5%、10%、または15%大きい上限を有する範囲内の数値を包含するものとする。 The term "about" has a lower limit of 5%, 10%, or 15% less than the indicated number and 5%, 10% less than the indicated number when used in connection with the number. , Or values within the range with an upper limit 15% greater.

以下の例は、本発明の特定の実施形態、およびその様々な使用の例示である。それらは、説明目的でのみ記載され、本発明を限定すると解釈されるべきではない。 The following examples are examples of specific embodiments of the present invention and their various uses. They are described for explanatory purposes only and should not be construed as limiting the invention.

「huTBTI3_2_1」および「SAR156597」という用語は、互換的であり、アミノ酸配列の配列番号1および配列番号3を含む可変軽鎖ならびにアミノ酸配列の配列番号2および配列番号4を含む可変重鎖を含む同じ二重V領域抗体様タンパク質を表す。 The terms "huTBTI3_1" and "SAR156597" are compatible and include the same variable light chain comprising SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 3 of the amino acid sequence and the variable heavy chain comprising SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4 of the amino acid sequence. Represents a double V region antibody-like protein.

臨床研究フォーマット
多施設、無作為、二重盲検、プラセボ対照臨床試験を行って、特発性肺線維症(IPF)を有する患者の最大3回の連続的、漸増用量コホートにおいて6週間の期間にわたって週1回皮下(SC)投与されたSAR156597の反復用量の安全性および忍容性を評価した。IPFは、2から3年の生存期間中央値を有し、一様に致命的である、未知の原因の進行性、汎発性、かつ明瞭な慢性線維性間質性肺炎である。
Clinical Study Format A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial conducted over a 6-week period in up to 3 consecutive, increasing dose cohorts of patients with idiopathic pulmonary fibrosis (IPF). The safety and tolerability of repeated doses of SAR156597 administered subcutaneously (SC) once weekly were evaluated. IPF is a uniformly fatal, progressive, generalized, and well-defined chronic fibrous interstitial pneumonia with a median survival of 2-3 years.

各用量コホートでは、8人の患者(SAR156597を投与された6人およびプラセボを投与された2人)がSAR156597または対応するプラセボ対照の反復SC、週1回用量を投与された。第2のコホートをDMCによる第1のコホートの安全性の検討後に開始した。200mgの用量の第3のコホートを2つの先行するコホートの安全性の検討後に開始した。 In each dose cohort, 8 patients (6 who received SAR156597 and 2 who received placebo) received SAR156597 or a corresponding placebo-controlled repeated SC, once-weekly dose. The second cohort was initiated after the DMC's review of the safety of the first cohort. A third cohort with a dose of 200 mg was started after the safety studies of the two preceding cohorts.

各患者に関して、研究期間は、22週であり、以下の通りであった:4週のスクリーニング;6週の処置期間(7回の投与);12週の追跡調査。 For each patient, the study period was 22 weeks and was as follows: 4 weeks screening; 6 weeks treatment period (7 doses); 12 weeks follow-up.

第12週で、免疫原性に関する抗薬物抗体(ADA)が存在する場合、追加の追跡調査訪問を上昇したパラメーターを試験するために最初の投与後最低6ヶ月で行った。臨床治験の終わりは、最後の患者がプロトコールにおいて計画された最後の訪問を完了した日と定義した。 At week 12, if immunogenic anti-drug antibody (ADA) was present, additional follow-up visits were performed at least 6 months after the first dose to test the elevated parameters. The end of the clinical trial was defined as the date on which the last patient completed the last planned visit in the protocol.

研究集団の選択。患者を以下の基準に従って研究に含めた。 Selection of research group. Patients were included in the study according to the following criteria:

包含基準
− 成人(年齢>18歳)男性または女性患者。
− 現在のAMERICAN THORACIC SOCIETY(ATS)/THE
EUROPEAN RESPIRATORY SOCIETY(ERS)/THE JAPANESE RESPIRATORY SOCIETY(JRS)/THE LATIN AMERICAN THORACIC ASSOCIATION(ALAT)ガイドラインに従ったIPFの文書化された診断、すなわち、間質性肺疾患の他の公知の原因(例えば家庭内および職業環境的曝露、結合組織疾患、ならびに薬物毒性)の排除;および(1)外科的肺生検に供されていない患者における高解像度コンピューター断層撮影法(HRCT)における通常の間質性肺炎パターンの存在;または(2)外科的肺生検に供された患者におけるHRCTおよび外科的生検パターンの特定の組合せ。
− 研究に関連したあらゆる手順前に得られた、文書の、署名された、かつ日付のあるインフォームドコンセント。
Inclusion Criteria-Adult (age> 18 years) male or female patient.
-Current AMERICAN THORACIC SOCIETY (ATS) / THE
EUROPEAN RESPIRATORY SOCIETY (ERS) / THE JAPANESE RESPIRATORY SOCIETY (JRS) / THE LATIN AMERICAN THORACIC Elimination of domestic and occupational environmental exposure, connective tissue disease, and drug toxicity; and (1) normal interstitial on high-resolution computed tomography (HRCT) in patients not undergoing surgical lung biopsy. Presence of pneumonia patterns; or (2) Specific combinations of HRCT and surgical biopsy patterns in patients undergoing surgical lung biopsy.
-Documentary, signed, and dated informed consent obtained prior to any study-related procedure.

排除基準
− 努力肺活量<予測値の50%。
− 一酸化炭素拡散肺容量(ヘモグロビンに関して補正された)<35%予測値。
− 安静時(10分間の座位)に周囲空気を呼吸している間のパルスオキシメトリによる酸素飽和<90%。
− IPF以外の重要な呼吸障害(例えば、反応性亢進気道疾患、結核、サルコイドーシス、アスペルギルス症、肺気腫または慢性閉塞性肺疾患[COPD]、または嚢胞性線維症)の公知の診断。
− 活動性脈管障害または血管作用薬(例えば、ホスホジエステラーゼ4阻害剤、カルシニューリン阻害剤、タクロリムス、シクロスポリン)の使用。
− 公知のHIVまたは慢性ウイルス肝炎。
− 活動性結核または潜伏結核感染を有する患者(結核に関連した排除:活動性結核または不完全に処置された結核の病歴;スクリーニングでの陽性QuantiFERON−TB Gold(登録商標)試験(以前の処置状況にかかわらず);少なくとも後側−前面像を有する胸部X線写真に基づく以前の/活動性結核感染と一致した臨床的に重要な異常(X線写真は、スクリーニング訪問前の12週以内にまたはスクリーニング期間中に撮影しなければならない)。追加の側面像が推奨されるが、必須ではない。その後の適切な抗結核処置にかかわらず、以前の腫瘍壊死因子−α(TNF−a)−アンタゴニストまたは他の非抗TNF−α bioDMARD処置中に潜伏結核感染を再活性化した患者。肺外結核感染の疑い;活動性または潜伏結核を有する個体との密接な接触など、結核に罹患する高リスクにある患者。)。
− 研究者の判断における患者安全性に影響し得る、任意の臨床的に重要な、重度もしくは不安定、急性もしくは慢性的進行性の医学的(IPF以外)もしくは外科的疾患、または任意の状態の証拠。
− スクリーニングでの臨床的に重要な異常な心電図(ECG)(QTc≧500msを含めた)。
− スクリーニングでの臨床的に重要な実験室試験:アラニントランスアミナーゼ(ALT)またはアスパラギン酸トランスアミナーゼ(AST)>正常範囲の2倍の上限(ULN);男性ではヘモグロビン<12g/100mLおよび女性では<11g/100mL;好中球<1500/mm(アフリカ人の家系のものに関する<1000/mmを除く);血小板<150000/mm;クレアチニン≧150μmol/L。
− 物質および/またはアルコール乱用の現在の病歴。
− 授乳中である、または妊娠中である女性。
− スクリーニングで陽性尿ベータ−ヒト絨毛性ゴナドトロピン(β−HGC)妊娠検査を有し、避妊の容認できる形(例えば、経口避妊薬、子宮内避妊器具、植込錠、Depo−Provera(商標)の輸注、二重障壁法、禁欲、精管切除したパートナー−地方の保健機関によって容認されていない場合を除いて)を使用していない、出産の可能性がある(閉経後2年未満または外科的に不妊ではない)の女性。
− スクリーニング前4週間以内のIPFを処置することを目標とした任意の登録された治療薬の使用。
− スクリーニング前4週間以内のアザチオプリン、シクロホスファミド、メトトレキサートおよびシクロスポリンを含むが、これらに限定されない、任意の細胞傷害性/免疫抑制剤の使用。
− スクリーニングの12週間または5半減期(リツキシマブでは24週およびアレファセプトでは24ヶ月)以内の任意のサイトカインモジュレーター(エタネルセプト、アダリムマブ、エファリズマブ、インフリキシマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ、リツキシマブ)の使用。
− 公知である場合、スクリーニングの1ヶ月、または5半減期(いずれか長い方)以内の任意の治験薬の使用。
Exclusion Criteria-Effort Vital Capacity <50% of predicted value.
-Carbon monoxide diffusion lung volume (corrected for hemoglobin) <35% predicted value.
-Oxygen saturation by pulse oximetry <90% while breathing ambient air at rest (sitting for 10 minutes).
-Known diagnosis of significant respiratory disorders other than IPF (eg, hyperresponsive airway disease, tuberculosis, sarcoidosis, aspergillosis, emphysema or chronic obstructive pulmonary disease [COPD], or cystic fibrosis).
-Active vasculature or use of vasoactive agents (eg, phosphodiesterase 4 inhibitors, calcineurin inhibitors, tacrolimus, cyclosporine).
-Known HIV or chronic viral hepatitis.
-Patients with active or latent tuberculosis infection (tuberculosis-related exclusion: history of active or incompletely treated tuberculosis; positive QuantiFERON-TB Gold® trial in screening (previous treatment status) (Regardless of); clinically significant abnormalities consistent with previous / active tuberculosis infection based on chest X-ray photography with at least posterior-anterior view (X-ray photography within 12 weeks prior to screening visit or (Must be taken during the screening period). Additional side views are recommended, but not required. Despite subsequent appropriate anti-TB treatment, previous tumor necrosis factor-α (TNF-a) -antagonists Or patients who have reactivated latent tuberculosis infection during other non-anti-TNF-α bioDMARD treatment. Suspected extrapulmonary tuberculosis infection; high risk of contracting tuberculosis, such as close contact with individuals with active or latent tuberculosis Patients in.).
-Any clinically significant, severe or unstable, acute or chronic progressive medical (other than IPF) or surgical condition, or any condition that may affect patient safety in the judgment of the investigator. evidence.
-Clinically significant abnormal electrocardiogram (ECG) in screening (including QTc ≥ 500 ms).
-Clinically important laboratory studies in screening: alanine transaminase (ALT) or aspartate transaminase (AST)> twice the upper limit of the normal range (ULN); hemoglobin <12 g / 100 mL in men and <11 g / g in women 100 mL; neutrophils <1500 / mm 3 (excluding <1000 / mm 3 for African families); platelets <150,000 / mm 3 ; creatinine ≥ 150 μmol / L.
-Current medical history of substance and / or alcohol abuse.
-Women who are breastfeeding or pregnant.
-Positive urine beta on screening-Human chorionic gonadotropin (β-HGC) having a pregnancy test and in an acceptable form of contraception (eg, oral contraceptives, intrauterine devices, implantable tablets, Depo-Provera ™) Possibility of childbirth (less than 2 years postmenopausal or surgical) without infusion, double barrier method, abstinence, vasectomy partner-unless not permitted by local health care agency Not infertile) women.
-Use of any registered therapeutic agent aimed at treating IPF within 4 weeks prior to screening.
-Use of any cytotoxic / immunosuppressant, including, but not limited to, azathioprine, cyclophosphamide, methotrexate and cyclosporine within 4 weeks prior to screening.
-Use of any cytokine modulator (etanercept, adalimumab, efarizumab, infliximab, golimumab, ertolizumab, rituximab) within 12 weeks or 5 half-life of screening (24 weeks for rituximab and 24 months for alefacept).
-Use of any investigational drug within 1 month of screening, or 5 half-life (whichever is longer), if known.

治験医薬生成物(IMP)をSC用量溶液の調製のための凍結乾燥形でSAR156597として提供した。SAR156597 185mgおよび添加剤を含有する各バイア
ルを2℃から8℃(36°Fから46°F)で保管した。IMPを室温で1.7mLの無菌、非発熱性蒸留水で投薬の朝に(SC輸注前1時間を超えない)復元した。輸注のための復元後の溶液中の構成物の濃度は、以下であった:7.0の最終pHを有する6.3mmol/Lリン酸一ナトリウム、3.7mmol/Lトロメタミン、5%(重量/体積)スクロース、3%(w/V)プロリン、および0.2%(w/V)ポリソルベート80におけるSAR156597 100mg/mL。
The investigational drug product (IMP) was provided as SAR156597 in lyophilized form for the preparation of SC dose solutions. Each vial containing 185 mg of SAR156597 and additives was stored at 2 ° C to 8 ° C (36 ° F to 46 ° F). The IMP was restored on the morning of dosing (not more than 1 hour prior to SC infusion) with 1.7 mL of sterile, non-pyrogenic distilled water at room temperature. Concentrations of the constituents in the reconstituted solution for infusion were as follows: 6.3 mmol / L monosodium phosphate, 3.7 mmol / L tromethamine, 5% (weight) with a final pH of 7.0. / Volume) SAR156597 100 mg / mL in sucrose, 3% (w / V) proline, and 0.2% (w / V) polysorbate 80.

プラセボには、復元されたSAR156597製剤に関するものと同じ濃度で同じ添加剤を含有する液体2mLを含有する各バイアルを提供した。 Placebo was provided with each vial containing 2 mL of liquid containing the same additives at the same concentration as for the restored SAR156597 formulation.

1mLシリンジを1.0mL以下の体積を送達するために使用し;2から3mLを送達するように目盛りづけされたシリンジを、1mLを超える体積を送達するために使用した。様々な計画された用量レベルに必要な要求された体積の要約を表1に示す。 A 1 mL syringe was used to deliver a volume of 1.0 mL or less; a syringe graduated to deliver 2-3 mL was used to deliver a volume greater than 1 mL. A summary of the required volumes required for various planned dose levels is shown in Table 1.

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IMP(SAR156597またはプラセボ)を臍周囲SC輸注として投与した。復元の1時間以内に、用量を腰のくびれの上の左または右腹部における臍から4から10cmの範囲において投与した。 IMP (SAR156597 or placebo) was administered as periumbilicus SC infusion. Within 1 hour of restoration, the dose was administered in the range 4-10 cm from the navel in the left or right abdomen above the waist.

研究における用量の選択
SAR156597は、IL−4とIL−13の両方に結合し中和する、操作されたヒト化二重特異性免疫グロブリンG(IgG)−4抗体である。SAR156597は、ヒトとカニクイザルの両方からのIL−4およびIL−13への高親和性を示す。
Dose Selection in the Study SAR156597 is an engineered humanized bispecific immunoglobulin G (IgG) -4 antibody that binds and neutralizes both IL-4 and IL-13. SAR156597 shows high affinity for IL-4 and IL-13 from both humans and cynomolgus monkeys.

各患者に関して、6週間の週1回のSC用量を投与し(合計7回の投与)、コホート1から3における用量漸増を以下のように行った:全て対応するプラセボと共に、コホート1は50mg(0.5mL)でのSAR156597、コホート2は100mg(1mL)でのSAR156597、およびコホート3は200mg(2.0mL)でのSAR156597。 For each patient, a weekly SC dose for 6 weeks (7 doses in total) was administered and dose escalation in cohorts 1 to 3 was performed as follows: Cohort 1 was 50 mg (with all corresponding placebos). SAR156597 at 0.5 mL), SAR156597 at 100 mg (1 mL) for cohort 2, and SAR156597 at 200 mg (2.0 mL) for cohort 3.

薬力学(PD)評価
SAR156597の反復漸増用量の効果を肺機能試験(PFT)、呼吸器症状において、および選択されたバイオマーカーにおいて評価した。より具体的には、以下のPD変数を評価した:
1.肺機能試験(PFT):ヘモグロビンに関して補正された、一酸化炭素拡散容量(DLCO);努力(呼気性)肺活量(FVC);1秒にわたる努力呼気量(FEV1);総肺気量(ボディプレチスモグラフィー)(TLC);残気量(ボディプレチスモグラフィー)(RV)。2回のPFTを投薬前3週間以内に行った。第1のPFTを行って、患者
をスクリーニングし、第2のPFT(無作為化訪問での)からのデータを第1のものと平均して、ベースライン値を確立した;これらの試験を別々の日に行った。PFTを第8訪問(第6週)/処置の終わり(EOT)および第14訪問(第18週/研究処置の最後の投与後12週)でも行った。
2.酸素飽和をスクリーニングでのSpO2、ベースラインを使用して、第6週/EOT、および第18週(研究処置の最後の投与後12週)で評価した。第1のSpO2測定をスクリーニングで行い、第2の測定からのデータを第1のものと平均してベースライン値を確立した;これらの試験を別々の日に行った。
3.クオリティオブライフ(QoL)に対するIPFの影響を、ベースライン、第6週/EOT、および第18週(研究処置の最後の投与後12週)で、St.George’s
Respiratory Questionnaire(SGRQ)を使用して評価した。
4.全血からの選択されたバイオマーカーをスクリーニング、ベースライン、第6週/EOTで、および追跡調査期間の終わり(第18週)で評価した。血清および血漿サンプルをスクリーニング、ベースライン(第1の投薬前)、第6週/EOTで、および追跡調査期間の終わり(第18週)で収集した。サンプル調製および分析の手法は、以下の通りであった:各血清サンプルに関して、血液3mLを、血餅活性化因子を有さない乾燥チューブ中に採取した。室温での1時間後、チューブを3000gで15分間、+4℃で遠心分離し、血清をアリコートし、使用まで−70℃で保管した。各血漿サンプルに関して、血液4.5mLをクエン酸ナトリウムチューブにおいて収集し、チューブを10回緩やかに反転することによってすぐに混合した。チューブを2000gで15分間遠心分離し、血漿をアリコートし、使用まで−70℃で保管した。TARCをキットマニュアルの説明に従って、R&D Systems製のヒトCCL17/TARC Quantikine
ELISAキットを使用して定量した。このアッセイに関して、定量下限は、31.2pg/mLであり、定量上限は、2000pg/mLであった。いくつかのアーカイブサンプルを調製し、研究の完了後に行う可能性がある、アッセイを使用することによってバイオマーカーに関するより多くの知識を得る将来の使用のために保管した。タンパク質バイオマーカーには、ケモカイン[C−Cモチーフ]リガンド18[CCL−18]、Krebs von den Lundgen 6[KL−6]、サーファクタントタンパク質A[SP−A]、サーファクタントタンパク質D[SP−D]、哺乳動物キチナーゼ様タンパク質[YKL−40]、IL−4、IL−13、IL−8、免疫グロブリンE[IgE]、エオタキシン、細胞間接着分子1[ICAM1]、ペリオスチン、胸腺および活性化制御ケモカイン[TARC]CCL−17、マトリックスメタロプロテイナーゼ−7[MMP7]、およびRNA(mRNA、ミクロRNA)発現が含まれた。
Pharmacodynamic (PD) Evaluation The effect of repeated escalating doses of SAR156597 was evaluated in lung function tests (PFT), respiratory symptoms, and in selected biomarkers. More specifically, the following PD variables were evaluated:
1. 1. Pulmonary Function Testing (PFT): Diffusing Capacity for Carbon Monoxide (DLCO) corrected for hemoglobin; Vital Capacity (FVC); Forced Exhalation Volume over 1 Second (FEV1); -) (TLC); Vital capacity (body plethysmography) (RV). Two PFTs were performed within 3 weeks prior to dosing. A first PFT was performed, patients were screened, and data from the second PFT (at randomized visits) were averaged with the first to establish baseline values; these trials were separated. I went on that day. PFT was also performed at 8th visit (6th week) / end of treatment (EOT) and 14th visit (18th week / 12 weeks after the last dose of study treatment).
2. Oxygen saturation was assessed at Week 6 / EOT, and Week 18 (12 weeks after the last dose of the study procedure) using SpO2 at screening, baseline. The first SpO2 measurement was screened and the data from the second measurement was averaged with the first to establish a baseline value; these tests were performed on separate days.
3. 3. The effects of IPF on quality of life (QoL) at baseline, Week 6 / EOT, and Week 18 (12 weeks after the last dose of the study procedure), St. George's
Evaluation was performed using the Respiratory Questionnaire (SGRQ).
4. Selected biomarkers from whole blood were evaluated at screening, baseline, week 6 / EOT, and at the end of the follow-up period (week 18). Serum and plasma samples were collected at screening, baseline (before first dosing), week 6 / EOT, and at the end of the follow-up period (week 18). Techniques for sample preparation and analysis were as follows: For each serum sample, 3 mL of blood was collected in a dry tube without clot activator. After 1 hour at room temperature, the tube was centrifuged at 3000 g for 15 minutes at + 4 ° C., serum was aliquoted and stored at −70 ° C. until use. For each plasma sample, 4.5 mL of blood was collected in a sodium citrate tube and mixed immediately by gently reversing the tube 10 times. The tube was centrifuged at 2000 g for 15 minutes, plasma was aliquoted and stored at −70 ° C. until use. Follow the instructions in the kit manual for TARC, Human CCL17 / TARC Quantikine from R & D Systems.
Quantified using an ELISA kit. For this assay, the lower limit of quantification was 31.2 pg / mL and the upper limit of quantification was 2000 pg / mL. Several archived samples were prepared and stored for future use to gain more knowledge about biomarkers by using the assay, which may be performed after the study is completed. Protein biomarkers include chemokine [CC motif] ligand 18 [CCL-18], Krebs von den Lundgen 6 [KL-6], surfactant protein A [SP-A], surfactant protein D [SP-D], Mammalian chytinase-like protein [YKL-40], IL-4, IL-13, IL-8, immunoglobulin E [IgE], eotaxin, intercellular adhesion molecule 1 [ICAM1], periostin, thoracic gland and activation control chemokine [ TARC] CCL-17, matrix metalloproteinase-7 [MMP7], and RNA (mRNA, microRNA) expression were included.

薬力学的結果
PDエンドポイント:5つのPFT(FVC、FEV1、TLC、DLCO、およびRV)におけるベースラインからの変化を分析した。処置の終わり(第8訪問、第6週でのEOT)で、処置群間で比較可能であった主要パラメーター(パーセント予測FVCおよびパーセント予測DLCO)のベースラインからの平均変化によって明らかなように、患者肺機能は、全体的に見て変化していなかった。EOT後12週で、%予測FVCおよび%予測DLCOのベースラインからの平均変化は、肺機能が全ての処置群において変化しないままであったことを示した。
Pharmacodynamic Results PD endpoints: Changes from baseline in 5 PFTs (FVC, FEV1, TLC, DLCO, and RV) were analyzed. At the end of treatment (8th visit, EOT at 6th week), as evidenced by the mean change from baseline in the key parameters (percentage predicted FVC and percentage predicted DLCO) that were comparable between treatment groups. Patient lung function was not changed overall. At 12 weeks post-EOT, mean changes in% predicted FVC and% predicted DLCO from baseline showed that lung function remained unchanged in all treatment groups.

二次的PDエンドポイント:二次的PD変数(SpO2、タンパク質/RNAバイオマーカー、およびSGRQ)を6週処置の終わりおよび処置後追跡調査期間に測定した。これらのPD結果は、研究のサンプルサイズの小ささおよび短い処置期間により、決定的ではなかった。 Secondary PD endpoints: Secondary PD variables (SpO2, protein / RNA biomarkers, and SGRQ) were measured at the end of 6-week treatment and during the post-treatment follow-up period. These PD results were not conclusive due to the small sample size of the study and the short treatment period.

SAR156597の用量の増加と共に血液における低下したTARC(CCL−17
)発現の傾向があった(図2)。低下したTARC発現は、EOT後続いた(図3)。
Decreased TARC (CCL-17) in blood with increasing dose of SAR156597
) There was a tendency for expression (Fig. 2). Decreased TARC expression was followed by EOT (Fig. 3).

安全性データの分析
安全性評価は、個々の値(臨床的に重要な異常)の検討、記述統計量(要約表、グラフィックス)に基づいた。全ての安全性分析を、安全性集団(safety population)を使用して行った。
Analysis of safety data The safety assessment was based on the examination of individual values (clinically significant abnormalities) and descriptive statistics (summary table, graphics). All safety analyzes were performed using a safety population.

全ての安全性データに関して、観察期間を3段階に分けた:
− 患者がインフォームドコンセントを示した時とIMP投与の最初の用量間の時間として定義された処置前段階。
− IMP投与の最初の用量から第18週訪問(含まれた)までの時間として定義されたオントリートメント(on−treatment)段階。
− 第18週訪問(除外された)後の時間として定義された処置後段階。
The observation period was divided into three stages for all safety data:
-Pretreatment stage defined as the time between when the patient presented informed consent and the first dose of IMP administration.
-On-treatment stage defined as the time from the first dose of IMP administration to the 18th week visit (included).
-Post-treatment stage defined as the time after the 18th week visit (excluded).

有害事象をバージョン16.1を使用してMedical Dictionary for Regulatory Activities(MedDRA)に従ってコード化した。 Adverse events were encoded using version 16.1 according to the Medical Dictionary for Regency Activities (MedDRA).

臨床実験のために、バイタルサイン、およびECGパラメーター、および潜在的に臨床的に重要な異常(PCSA)を表2に示されたPCSAリストを使用して分析した。 For clinical trials, vital signs, ECG parameters, and potentially clinically significant abnormalities (PCSA) were analyzed using the PCSA list shown in Table 2.

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有害事象
有害事象(AE)を経時的基準に従って予め定義された標準的カテゴリーに分類した:
Adverse Events Adverse events (AEs) have been categorized into pre-defined standard categories according to time-based criteria:

処置前有害事象:処置前段階中に発生したまたは悪化したAE;
処置中有害事象(TEAE):オントリートメント段階中に発生したまたは悪化したAE;
処置後有害事象:処置後段階中に発生したまたは悪化したAE。
Pretreatment adverse events: AEs that occurred or worsened during the pretreatment phase;
In-treatment adverse events (TEAEs): AEs that occur or worsen during the on-treatment phase;
Post-Treatment Adverse Events: AEs that occur or worsen during the post-treatment phase.

TEAEをAE発生時に投与されたIMPに割り当てた。 TEAE was assigned to the IMP administered at the time of AE development.

少なくとも1つのTEAE、重度のTEAE、重篤なTEAE、死につながるTEAE、および持続的な処置中止につながるTEAEを有する患者の数および百分率を処置群に
よって要約した。
The number and percentage of patients with at least one TEAE, severe TEAE, severe TEAE, death-leading TEAE, and TEAE leading to persistent discontinuation were summarized by treatment group.

全てのTEAEを要約し、プライマリー器官別大分類(SOC)および基本語(PT)によって一覧表にした。さらに、全てのAEを一覧表にし、患者および発生日時によって分別した。 All TEAEs were summarized and listed by primary organ classification (SOC) and basic term (PT). In addition, all AEs were listed and sorted by patient and date of occurrence.

臨床実験評価
生化学および血液学
この研究におけるベースライン値は、第1日投与前評価中に収集された値であった。
Clinical Trial Evaluation Biochemistry and Hematology Baseline values in this study were those collected during the first day pre-dose evaluation.

実験室レンジおよび/または異常基準を有するパラメーター(PCSA)に関して、「オントリートメント」分析を、再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に行われた全てのポストベースライン(postbaseline)評価を使用して行った。 For parameters with laboratory range and / or anomalous criteria (PCSA), an "on-treatment" analysis was performed using all postbaseline assessments performed during the on-treatment phase, including rechecked values. I went there.

血管炎、血清学、および検尿の補足試験
全ての個々のデータを処置群、患者、および訪問によって一覧表にした。
Supplemental studies of vasculitis, serology, and urinalysis All individual data were listed by treatment group, patient, and visit.

体重および肥満度指数:体重を生パラメーター値およびベースラインからのパーセント変化として分析した。個々の肥満度指数を生値として分析した。ベースライン値は、第1日に収集された投与前値であった。全てのパラメーターに関して、「オントリートメント」分析を、全ての再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に収集された全てのポストベースライン値を使用して行った。 Body Weight and Obesity Index: Body weight was analyzed as raw parameter values and percentage changes from baseline. Individual obesity indexes were analyzed as raw values. Baseline values were pre-dose values collected on day 1. For all parameters, an "on-treatment" analysis was performed using all post-baseline values collected during the on-treatment phase, including all rechecked values.

バイタルサイン:
心拍数および血圧。心拍数および血圧(収縮期および拡張期血圧)を生パラメーター値(利用可能な仰臥位および立位に関する)、ベースラインからの変化(仰臥位のみに関する)として、および起立性パラメーター(立位−仰臥位パラメーター値)として分析した。ベースライン値は、第1日に収集された投与前値であった。全てのパラメーターに関して、「オントリートメント」分析を、全ての計画外のおよび再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に収集された全てのポストベースライン値を使用して行った。
vital signs:
Heart rate and blood pressure. Heart rate and blood pressure (systolic and diastolic blood pressure) as raw parameter values (for available supine and standing), changes from baseline (for supine only), and orthostatic parameters (standing-supine) Position parameter value) was analyzed. Baseline values were pre-dose values collected on day 1. For all parameters, an "on-treatment" analysis was performed using all post-baseline values collected during the on-treatment phase, including all unplanned and rechecked values.

体温:体温を生パラメーター値およびベースラインからの変化として分析した。ベースライン値は、第1日に収集された投与前値であった。 Body temperature: Body temperature was analyzed as raw parameter values and changes from baseline. Baseline values were pre-dose values collected on day 1.

心電図:心拍数、PR−、QRS−、QT−、および補正QT−間隔(QTc)を生パラメーター値およびベースラインからの変化として分析した。ベースライン値は、第1日に収集された投与前値であった。全てのパラメーターに関して、「オントリートメント」分析を、全ての再チェックされた値を含めたオントリートメント段階中に収集された全てのポストベースライン値を使用して行った。 ECG: Heart rate, PR-, QRS-, QT-, and corrected QT-interval (QTc) were analyzed as raw parameter values and changes from baseline. Baseline values were pre-dose values collected on day 1. For all parameters, an "on-treatment" analysis was performed using all post-baseline values collected during the on-treatment phase, including all rechecked values.

他の関連する安全性パラメーター(IMP輸注部位での局所的忍容性):紅斑サイズおよび浮腫サイズをパラメーター、処置群、および時点によって記述統計量で要約した。現在の痛み強度、紅斑、浮腫、かゆみ、丘疹、小胞化、および膿疱グレードの最も極端な定性的評価を有する患者の数(%)を研究全体にわたって処置群で要約した。 Other relevant safety parameters (local tolerability at IMP infusion site): Erythema size and edema size were summarized in descriptive statistics by parameter, treatment group, and time point. The number (%) of patients with the most extreme qualitative assessment of current pain intensity, erythema, edema, itch, papules, cystification, and pustule grade was summarized in the treatment group throughout the study.

曝露の程度
大多数の患者は、各処置群において7回全てのIMP輸注を受けた。各SAR156597用量群における1人の患者は、研究薬物の7回全ての用量を受けなかった。SAR156597 50mgおよび200mg用量群のそれぞれにおける1人の患者は、増加し
たhsCRPに関する評価に関連した用量妨害を有し、SAR156597 100mg用量群における1人の患者は、結核のSAEにより研究処置を中止した。
Degree of Exposure The majority of patients received all 7 IMP infusions in each treatment group. One patient in each SAR156597 dose group did not receive all 7 doses of the study drug. One patient in the SAR156597 50 mg and 200 mg dose groups each had dose nuisance associated with an assessment of increased hsCRP, and one patient in the SAR156597 100 mg dose group discontinued study treatment due to SAE for tuberculosis.

有害事象
全体的に見て、処置中有害事象(TEAE)の数は、処置群にわたって偏りがなかった。大多数のTEAEは、強度が軽度から中程度であり、3つの事象のみが重度として報告された:プラセボ用量群における耳感染の1つの事象、SAR156597 50mg用量群における大腿骨骨折の1つの事象、およびSAR156597 200mg用量群におけるIPFの1つの事象。3人の患者は、少なくとも1つの重篤な有害事象(SAE)を経験した:SAR156597処置群のそれぞれにおける1人の患者(表3)。
Adverse events Overall, the number of adverse events (TEAEs) during treatment was not biased across treatment groups. The majority of TEAEs were mild to moderate in intensity and only three events were reported as severe: one event of ear infection in the placebo dose group, one event of femoral fracture in the SAR156957 50 mg dose group, And one event of IPF in the SAR156597 200 mg dose group. Three patients experienced at least one serious adverse event (SAE): one patient in each of the SAR156597 treatment groups (Table 3).

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最も一般に報告されたAEは、感染症であり、その頻度は、処置群間で比較可能であった(プラセボ、SAR156597 50mgおよびSAR156597 100mg用量群のそれぞれにおいて6人中3人の患者;SAR156597 200mg用量群において6人中2人の患者)(表4)。転倒事故の4つの症例がTEAEとして報告された。SAR156597 50mg用量群において重篤として報告された転倒の1つの事象は、その後、大腿骨骨折のSAEをもたらし、SAR156597 200mg用量群において報告された3つの他の症例は、強度が軽度であった。 The most commonly reported AE was infectious disease, the frequency of which was comparable between treatment groups (3 out of 6 patients in each of the placebo, SAR156597 50 mg and SAR156597 100 mg dose groups; SAR156597 200 mg dose. 2 out of 6 patients in the group) (Table 4). Four cases of fall accidents were reported as TEAEs. One event of the fall reported as severe in the SAR156597 50 mg dose group subsequently resulted in a SAE of the femoral fracture, and the three other cases reported in the SAR156597 200 mg dose group were mild in intensity.

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3人の患者が少なくとも1つのSAEを経験した(SAR156597処置群のそれぞ
れにおける1人):SAR156597 50mg用量群における転倒および大腿骨骨折のSAEを有する1人の患者、SAR156597 100mg用量群における結核のSAEを有する1人の患者、およびSAR156597 200mg用量群における細菌性肺炎およびIPF悪化のSAEを有する1人の患者。1人の患者は、結核の処置中SAEによりSAR156597 100mg用量群における研究処置を中止した。
Three patients experienced at least one SAE (one in each of the SAR156597 treatment group): one patient with a fall and femoral fracture SAE in the SAR156597 50 mg dose group, SAE for tuberculosis in the SAR156597 100 mg dose group. One patient with SAE with bacterial pneumonia and exacerbation of IPF in the SAR156597 200 mg dose group. One patient discontinued study treatment in the SAR156597 100 mg dose group due to SAE during tuberculosis treatment.

特定の興味の有害事象(AESI):>10mg/Lかつ>ベースライン値の2×であるhsCRPの持続性の上昇(少なくとも72時間)または他の臨床所見に基づく血管炎の疑いがこの研究におけるAESIであった。この研究において報告された増加したC反応性タンパク質の3つの症例があった。潜在的血管炎に関する初期疑いとして報告された上昇したhsCRPのこれらの症例では、いずれも血管炎であると確認されず、これらのhsCRP増加の大多数は、感染症も生じた時間枠においてである(hsCRPによってトリガされた1つのAESIは、精巣上体感染と関連しており、1つの事象は、細菌性肺炎と関連しており、1つの事象は、感染性結膜炎と関連していた)かまたは研究者によって臨床的に重要ではないと考えられた。 Adverse events of particular interest (AESI):> 10 mg / L and> 2 x baseline value, increased persistence of hsCRP (at least 72 hours) or suspected vasculitis based on other clinical findings in this study It was AESI. There were three cases of increased C-reactive protein reported in this study. None of these cases of elevated hsCRP, reported as early suspicion of potential vasculitis, were identified as vasculitis, and the majority of these hsCRP increases were in the time frame during which the infection also occurred. (One hsCRP-triggered AESI was associated with supraclavicular infection, one event was associated with bacterial pneumonia, and one event was associated with infectious conjunctivitis)? Or considered by researchers to be clinically insignificant.

SAR156597 200mg用量群では、1人の患者は、血管炎と潜在的に関連していると研究者によって疑われた線状出血の初期報告を有した。さらなる評価で、この事象は、その後、爪ジストロフィーと診断され、血管炎の疑いは、最終的に無視された。 In the SAR156597 200 mg dose group, one patient had an initial report of splint hemorrhage suspected by researchers to be potentially associated with vasculitis. Upon further evaluation, the event was subsequently diagnosed with nail dystrophy, and suspicion of vasculitis was ultimately ignored.

血液学的パラメーター:プラセボ群と比較してSAR156597処置群において少し多くの患者が0.1Giga/Lを超える好塩基球数のPCSAを有したことを除いて、血液学パラメーターの著しい変化は検出されなかった。 Hematological parameters: Significant changes in hematological parameters were detected, except that slightly more patients in the SAR156597 treatment group had a PCSA with a basophil count above 0.1 Giga / L compared to the placebo group. There wasn't.

生化学パラメーター:3つのSAR156597処置群のそれぞれにおける1人の患者は、この研究中にhsCRPの一過性の上昇を有した。 Biochemical parameters: One patient in each of the three SAR156597 treatment groups had a transient increase in hsCRP during this study.

バイタルサイン:起立性SBPおよび起立性DBPを有する患者の数は、プラセボ群と比較してSAR156597処置群においてより高かった。 Vital signs: The number of patients with orthostatic SBP and orthostatic DBP was higher in the SAR156597 treatment group compared to the placebo group.

心電図:QTcB延長を有する患者の数は、プラセボ群と比較して処置群においてより高かった。この研究中にQTcB延長を有した4人の患者(SAR156597 50mg群における1人の患者、SAR156597 100mg群における2人の患者、およびSAR156597 200mg群における1人の患者)があった。 ECG: The number of patients with QTcB prolongation was higher in the treatment group compared to the placebo group. There were 4 patients with QTcB prolongation during this study (1 patient in the SAR156597 50 mg group, 2 patients in the SAR156597 100 mg group, and 1 patient in the SAR156597 200 mg group).

輸注部位忍容性:報告された局所的輸注部位反応はほとんどなく、事象の大多数は、重症度が軽度であった。 Infusion site tolerability: There were few reported local infusion site reactions, and the majority of events were mild in severity.

個々の臨床的に関連する異常:PCSAに関する基準を満たしたバイタルサインのいずれも、全て他の同定可能な、潜在的に寄与している因子を有した、起立性SBPの4つの症例および起立性DBPの5つの症例を含めた、いずれの臨床的に関連する徴候とも関連していなかった。PCSAに関する基準を満たしたECG結果のいずれも、補正処置を必要とするいずれの臨床的に関連する徴候とも関連していなかった。 Individual clinically relevant abnormalities: 4 cases of orthostatic SBP and orthostatic, all of which meet the criteria for PCSA, all with other identifiable, potentially contributing factors It was not associated with any clinically relevant signs, including 5 cases of DBP. None of the ECG results that met the criteria for PCSA were associated with any clinically relevant sign requiring corrective action.

安全性結論
結核のSAEにより、研究薬物の3用量の投与後に研究処置を中止しなければならなかったSAR156597 100mg SC毎週用量群における1人の患者を除いて、全ての患者が6週間の処置期間を完了した。
Safety Conclusions All patients had a 6-week treatment period, except for one patient in the SAR156957 100 mg SC weekly dose group, who had to discontinue study treatment after administration of 3 doses of the study drug due to SAE of tuberculosis. Completed.

少なくとも1つのTEAEを有する患者の数は、処置群間で比較可能であり(プラセボ
および200mg群における6人中5人の患者、50mgおよび100mg群における6人中6人の患者)、大多数のTEAEは、強度が軽度から中程度であった。最も一般的に報告されたTEAEは、感染症であり、これは、処置群間で偏りがなかった(プラセボ、50mg、および200mg群における6人中3人の患者、100mg群における6人中2人の患者)。
The number of patients with at least one TEAE is comparable between treatment groups (5 out of 6 patients in the placebo and 200 mg groups, 6 out of 6 patients in the 50 mg and 100 mg groups) and the majority. TEAEs were mild to moderate in intensity. The most commonly reported TEAE was an infection, which was not biased between treatment groups (3 out of 6 patients in the placebo, 50 mg, and 200 mg groups, 2 out of 6 in the 100 mg group). Human patients).

重篤な有害事象(SAE)は、3つのSAR156597用量群のそれぞれにおける1人(50mg用量群における転倒および大腿骨骨折のSAEを有する1人の患者、100mg用量群における結核のSAEを有する1人の患者、および200mg用量群における細菌性肺炎のSAEを有する1人の患者)である、3人の患者において報告された。 Serious adverse events (SAEs) were 1 patient in each of the 3 SAR156597 dose groups (1 patient with a fall and femoral fracture SAE in the 50 mg dose group, 1 patient with tuberculosis SAE in the 100 mg dose group). And one patient with SAE of bacterial pneumonia in the 200 mg dose group).

研究期間のいずれの時においても死亡は報告されなかった。 No deaths were reported at any time during the study period.

血液学および生化学実験結果、バイタルサイン、ならびにECGからのPCSAのいずれも、いずれの臨床徴候とも関連していなかった。hsCRPの一過性の上昇を有する全ての患者は、感染症などの臨床事象と関連していた、または臨床的に関連していないと研究者によって判断された。この研究において血管炎の確認された症例はなかった。 Neither hematology and biochemical experimental results, vital signs, nor PCSA from the ECG were associated with any clinical signs. All patients with a transient increase in hsCRP were determined by researchers to be associated with or not clinically associated with clinical events such as infections. No cases of vasculitis were confirmed in this study.

全体的に見て、3つの異なる用量レベル(50、100、および200mg SC)で6週間毎週SC投与されたSAR156597は、一般的に安全かつ忍容性がよかった。 Overall, SAR156597, which was SC-administered weekly for 6 weeks at three different dose levels (50, 100, and 200 mg SC), was generally safe and well tolerated.

薬物動態(PK)評価
PK分析のサンプルを第2から第8訪問中の投与前(各用量投与前2時間以内)に収集した。第9/早期中止(ET)、第11、および第14訪問中の薬物動態サンプルを午前中に収集した。抗SAR156597抗体(ADA)サンプルを、第2、第9/ET、第11、および第14訪問でPKサンプルとほぼ同じ時に収集した。第12週で、免疫原性に関するADAが存在する場合、追加の追跡調査訪問を上昇したパラメーターを試験するために最初の投与後最低6ヶ月で行った。
Pharmacokinetic (PK) Evaluation Samples of PK analysis were collected before dosing (within 2 hours before each dose) during the 2nd to 8th visits. Pharmacokinetic samples during the 9th / Early Discontinuation (ET), 11th, and 14th visits were collected in the morning. Anti-SAR156597 antibody (ADA) samples were collected at approximately the same time as the PK samples at the 2nd, 9th / ET, 11th, and 14th visits. At week 12, if immunogenic ADA was present, additional follow-up visits were performed at least 6 months after the first dose to test the elevated parameters.

SAR156597血漿濃度を、Bertin Pharma(L.E.M.M.[Laboratoire d’Etude du Metabolisme des Medicaments],DSV/iBiTec−S/SPI,CEA−Saclay,Gif sur Yvette Cedex,France)の責任の下で0.05μg/mLの定量下限(LLOQ)で、検証された酵素結合免疫吸着検定(ELISA)方法(DOH0850)を使用して決定した。生化学分析研究からの全ての生データは、試験場所で使用されている手順に従ってBertin Pharmaで保管されている。 SAR156597 plasma concentration under Bertin Pharma (LE.M.M. [Laboratore d'Etude du Metabolisme des Medicines], DSV / iBittec-S / SPI, CEA-Saclay, Gif Was determined using the verified enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method (DOH0850) at a lower limit of quantification (LLOQ) of 0.05 μg / mL. All raw data from biochemical analytical studies are stored in Bertin Pharma according to the procedures used at the test site.

血漿中のADAをDisposition,Safety&Animal Research Operational Center of Montpellier(Biomarker and Biological Assays group)、Sanofiの責任の下で検証されたELISA方法(DOH0851)を使用してアッセイした。全てのサンプルをスクリーニングアッセイを使用して最初に評価した。次いで、スクリーニングアッセイにおいて陽性であると見出されたサンプルを確認アッセイにおいて試験した。陽性であることが確認されたサンプルに関してのみ力価を報告した。生化学分析研究からの全ての生データは、試験場所で使用されている手順に従ってsanofi−aventis,Montpellier,Franceで保管されている。 Plasma ADA was validated under the responsibility of Disposation, Safety & Animal Research Operational Center of Montpellier (Biomarker and Biological Assays group), Sanofi-Responsible ELISA Method. All samples were initially evaluated using a screening assay. Samples found to be positive in the screening assay were then tested in the confirmation assay. Titers were reported only for samples that were confirmed to be positive. All raw data from biochemical analytical studies are stored at sanofi-aventis, Montpellier, France according to the procedures used at the test site.

薬物動態学的パラメーターを母集団PK(ベイジアン)手法を使用して推定し、表5に示す。 Pharmacokinetic parameters are estimated using the population PK (Bayesian) method and are shown in Table 5.

Figure 0006882440
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ベイジアン分析をマルチプロセッサーコンピューターのLINUXクラスター上で作動するNONMEM(登録商標)コンピュータープログラム(バージョン7.1.2)で行った。 Bayesian analysis was performed on a NONMEM® computer program (version 7.1.2) running on a LINUX cluster of multiprocessor computers.

ベイジアンデータセットを3つのコホート(用量50、100、および200mg)のデータを使用して構築した。NONMEMソフトウェア(バージョン7.1.2)を使用して、データを分析した。POH0338研究において得られた最終母集団PKモデル(以前の研究からのPKデータを使用して構築された)を個々のパラメーターおよび濃度予測の評価に関する事前の推定値としてそのパラメーター推定値を用いてベイジアンデータセットに適用した。推定工程を、最終母集団PKモデルにおいて得られたθ(モデル、すなわち、PKパラメーターの固定効果)、ω(個人間変動)、およびσ(個人内変動)の最終母集団推定値に基づいて個々の推定値をコンピューター処理するために選択MAXEVAL=0を使用して省略した。 Bayesian datasets were constructed using data from three cohorts (dose 50, 100, and 200 mg). Data were analyzed using NONMEM software (version 7.1.2). Bayesian using the final population PK model obtained in the POH0338 study (constructed using PK data from previous studies) as a preliminary estimate for the evaluation of individual parameters and concentration predictions. Applied to the dataset. The estimation process is performed individually based on the final population estimates of θ (model, ie, fixed effect of PK parameters), ω (inter-individual variation), and σ (individual variation) obtained in the final population PK model. The estimated value of was omitted using selection MAXEVAL = 0 for computer processing.

薬物動態学的データの分析
全てのPK分析を母集団PK手法を使用して行った。以下のPKパラメーターをこの研究において決定した:
観察されたSAR156597血漿トラフ濃度(Ctrough);
最初および最後の投与後の個々の予測Cmax、および予測AUC0−168h
最後の投与後の個々の予測t1/2z
Analysis of pharmacokinetic data All PK analyzes were performed using the population PK method. The following PK parameters were determined in this study:
Observed SAR156597 plasma trough concentration (C trough );
Individual predicted C max and predicted AUC 0-168h after the first and last dose;
Individual predictions t 1 / 2z after the last dose.

統計分析
アッセイされたSAR156597 Ctrough濃度および予測Cmax、AUC0−168h、およびt1/2zを、Disposition,Safety&Animal Research,Sanofiの責任の下で各処置群に関する記述統計量(算術および幾何平均、中央値、SD、変動係数[CV%]、最小値、最大値、中央値、ならびに利用可能な観察値の数)によって要約した。定常状態評価、t1/2zに対する用量効果および用量比例性などの他の統計分析をBiostatistics,Sanofiの責任の下で行った。
Statistical analysis assayed SAR156597 C trough concentrations and predicted C max, AUC 0-168h, and t 1 / 2z, Disposition, Safety & Animal Research, descriptive statistics for each treatment group under the responsibility of Sanofi (arithmetic and geometric mean, Median, SD, coefficient of variation [CV%], minimum, maximum, median, and number of observations available). Other statistical analyzes such as steady-state evaluation, dose effect on t 1 / 2z and dose proportionality were performed under the responsibility of Biostatistics, Sanofi.

全ての統計分析前に、Cmax、AUC0−168h、およびt1/2zを対数変換した。 Prior to all statistical analysis, C max , AUC 0-168h , and t 1 / 2z were logarithmically transformed.

定常状態の出現を、SAS NLMIXED手順を使用してCtrough値を非線形混合効果モデルに当てはめることによって評価した。 The appearance of steady state was evaluated by fitting the Evaluation value to a nonlinear mixed effect model using the SAS NLMIXED procedure.

1/2zの用量効果を線形固定効果モデルで評価した。 The dose effect of t 1 / 2z was evaluated using a linear fixed effects model.

maxおよびAUC0−168hの用量比例性を、パワーモデルを使用して評価した。 Dose proportionality of C max and AUC 0-168h was evaluated using a power model.

薬物動態学的データ取扱いおよびデータ品質保証:SAR156597に関する0.05μg/mLのLLOQ未満の血漿薬物濃度を平均値の計算においてゼロとして処理した。平均値およびそれらの関連する統計値を四捨五入していない数から産出し、これらは、四捨五入された数を使用して決定された値とはわずかに異なり得る。いったん最終PK分析を行うと、PKパラメーターをさらなる統計分析のためにBiostatistics
Departmentに電子的に転送した。濃度およびPKパラメーター値を3有効数字に四捨五入した。
Pharmacokinetic data handling and data quality assurance: Plasma drug concentrations below 0.05 μg / mL LLOQ for SAR156597 were treated as zero in the calculation of mean values. The averages and their associated statistics are derived from unrounded numbers, which can differ slightly from the values determined using the rounded numbers. Once the final PK analysis is performed, the PK parameters are biostatistics for further statistical analysis.
Electronically transferred to Department. Concentration and PK parameter values were rounded to 3 significant figures.

薬物動態評価
血漿濃度:SAR156597に無作為化された18人全ての患者をSAR156597に曝露した。SAR156597は、6人のプラセボ患者からの血漿において検出されなかった。100mgでの1人の患者は、投与された用量数が不十分であったためPK分析から除外した。SAR156597トラフ濃度を図4に図で示す。
Pharmacokinetic Evaluation Plasma Concentration: All 18 patients randomized to SAR156597 were exposed to SAR156597. SAR156597 was not detected in plasma from 6 placebo patients. One patient at 100 mg was excluded from PK analysis due to inadequate doses administered. The SAR156597 trough concentration is shown graphically in FIG.

週1回投与されたSAR156597の100mgおよび200mg用量に関して、定常状態の90%に達する時間中央値は、第34日あたりであった。週1回投与されたSAR156597の50mg用量に関して、統計分析は、101日あたりで定常状態に達する予想外の時間中央値を提供する。50mg用量群における定常状態推定値までの上記の時間は、低い血漿トラフ濃度のために、信頼できない可能性がある。したがって、非線形混合効果モデルは、50mg用量群に関する初期傾斜パラメーターを正しく評価することに明らかに失敗し、この用量レベルでの定常状態までの時間の過大評価につながった。 For 100 mg and 200 mg doses of SAR156597 administered once weekly, the median time to reach 90% of steady state was around day 34. For a 50 mg dose of SAR156597 administered once weekly, statistical analysis provides an unexpected median time to reach steady state per 101 days. The above time to steady-state estimates in the 50 mg dose group may be unreliable due to low plasma trough concentrations. Therefore, the nonlinear mixed-effects model clearly failed to correctly evaluate the initial gradient parameters for the 50 mg dose group, leading to an overestimation of the time to steady state at this dose level.

そのうえ、ベイジアンPK分析は、AUC0−168ssの定常状態に、第6週でのSAR156597の7回目の投与後に50mg用量群に関して89%、100mg用量群に関して94.8%、および200mg用量群に関して93.7%で達すると予測した。 Moreover, Basian PK analysis showed 89% for the 50 mg dose group, 94.8% for the 100 mg dose group, and 93 for the 200 mg dose group after the 7th dose of SAR156597 at week 6 to steady state of AUC 0-168ss. Predicted to reach at 0.7%.

薬物動態学的パラメーター:第1週でのSAR156597の単回SC投与後に得られたSAR156597のPKパラメーターの記述統計量を表6に要約する。 Pharmacokinetic parameters: Table 6 summarizes the descriptive statistics of the PK parameters of SAR156597 obtained after a single SC administration of SAR156597 in the first week.

Figure 0006882440
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第6週でのSAR156597の毎週の反復SC投与後に得られたSAR156597のPKパラメーターの記述統計量を表7に要約する。 Table 7 summarizes the descriptive statistics of the PK parameters of SAR156597 obtained after weekly repeated SC administration of SAR156597 at week 6.

Figure 0006882440
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90%CIを有するSAR156597 t1/2z推定値を表8に示す。t1/2zは、260時間(約11日)から348時間(約15日)にわたり、t1/2zに対し予想外の有意な用量効果があった(p=0.049)。 Table 8 shows SAR156597 t 1 / 2z estimates with 90% CI. t 1 / 2z had an unexpectedly significant dose effect on t 1 / 2z from 260 hours (about 11 days) to 348 hours (about 15 days) (p = 0.049).

Figure 0006882440
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用量比例性評価を第1週および第6週に行い、それぞれ、表9および10に示す。 Dose proportional assessments were performed at Weeks 1 and 6, respectively, as shown in Tables 9 and 10, respectively.

Figure 0006882440
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第1週および第6週で、SAR156597曝露は、用量をわずかに超えて比例的に増加した。SAR156597用量の4倍の増加は、Cmaxの5.21から5.92倍の増加およびAUC0−168の5.17から5.83倍の増加を実証した。 At weeks 1 and 6, SAR156597 exposure increased proportionally, slightly above the dose. A 4-fold increase in SAR156597 dose demonstrated a 5.21 to 5.92-fold increase in C max and a 5.17 to 5.83-fold increase in AUC 0-168.

免疫原性:血漿中のADA決定。ADA結果の要約を表11に示す。 Immunogenicity: ADA determination in plasma. A summary of the ADA results is shown in Table 11.

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2人の患者がADA陽性サンプルを有した。SAR156597 200mg処置群における1人の患者(患者番号152003002)は、第1日での処置前サンプルにおいてADA反応性を示したが、ADA反応性は、第18週までの全てのサンプルにおいて陰性であった。第2の患者(患者番号484002003)は、プラセボ処置においてであり、第12週および第18週にADA陽性であった。したがって、ADAは、SAR156597 PKパラメーター推定値への影響を有さないと考えられた。 Two patients had ADA positive samples. One patient in the SAR156597 200 mg treatment group (patient number 152003002) showed ADA responsiveness in the pretreatment sample on day 1, but ADA responsiveness was negative in all samples up to week 18. It was. The second patient (patient number 484002003) was on placebo treatment and was ADA positive at weeks 12 and 18. Therefore, ADA was considered to have no effect on the SAR156597 PK parameter estimates.

200mg処置群における1人の患者(患者番号124003001)に関しては、サンプルが利用できないために、処置後ADA分析は行わなかった(サンプルが収集されなかった)。 For one patient in the 200 mg treatment group (patient number 124003001), no post-treatment ADA analysis was performed (no sample was collected) due to the availability of samples.

薬物動態学的結論
SAR156597に無作為化された17人全ての患者をSAR156597に曝露した。SAR156597は、6人のプラセボ患者からの血漿において検出されなかった。
Pharmacokinetic conclusions All 17 patients randomized to SAR156597 were exposed to SAR156597. SAR156597 was not detected in plasma from 6 placebo patients.

ベイジアンPK分析は、定常状態の89%から94.7%が第6週でのSAR156597の7回の投与後に到達されると予測した。 Bayesian PK analysis predicted that 89% to 94.7% of the steady state would be reached after 7 doses of SAR156597 at week 6.

1/2zは、260時間(約11日)から348時間(約15日)にわたり、t1/2zに対し予想外の有意な用量効果があった(p=0.049)。 t 1 / 2z had an unexpectedly significant dose effect on t 1 / 2z from 260 hours (about 11 days) to 348 hours (about 15 days) (p = 0.049).

第1週および第6週で、SAR156597曝露は、用量をわずかに超えて比例的に増加した。SAR156597用量の4倍の増加は、Cmaxの5.21から5.92倍の増加およびAUC0−168の5.17から5.83倍の増加を実証した。 At weeks 1 and 6, SAR156597 exposure increased proportionally, slightly above the dose. A 4-fold increase in SAR156597 dose demonstrated a 5.21 to 5.92-fold increase in C max and a 5.17 to 5.83-fold increase in AUC 0-168.

SAR156597での処置の結果として、著しい処置中ADA反応性は発達しなかった。 As a result of treatment with SAR156597, ADA responsiveness did not develop during significant treatment.

IL−13は、FRA−2トランスジェニックマウスモデルにおいて肺線維症を駆動するものである
間質性肺疾患(ILD)は、間質に影響する200を超える肺疾患の大きな群を表す。強皮症患者の著しいサブセットは、間質性肺異常および易感染性肺機能をもたらす実質性肺障害を有する肺徴候を示す。この致命的な末期状態は、間質性肺炎および瘢痕によって特徴付けられる。
IL-13 drives pulmonary fibrosis in the FRA-2 transgenic mouse model Interstitial lung disease (ILD) represents a large group of over 200 lung diseases affecting the interstitium. A significant subset of scleroderma patients show signs of lung with interstitial pulmonary abnormalities and parenchymal pulmonary disorders resulting in susceptible lung function. This deadly terminal condition is characterized by interstitial pneumonia and scarring.

転写因子のAP−1ファミリーは、いろいろな細胞機能を制御するいくつかの標的遺伝子の発現を調節する。AP−1複合体は、JunおよびFosタンパク質からなる。タンパク質のFosファミリーのメンバーである、Fos様抗原2、FRA−2は、調節機能を有するAP−1複合体形成に関与する。 The AP-1 family of transcription factors regulates the expression of several target genes that control various cellular functions. The AP-1 complex consists of Jun and Fos proteins. Fos-like antigen 2, FRA-2, which is a member of the Fos family of proteins, is involved in the formation of AP-1 complexes with regulatory functions.

Eferlらは、トランスジェニックマウスにおけるFRA−2の過剰発現がいくつかの器官において線維症を引き起こしたが、肺組織および皮膚に主に影響したことを以前実証した(Eferlら,2008,Proc.Natl.Acad.Sci.105(30):10525−10530)。 Effer et al. Previously demonstrated that overexpression of FRA-2 in transgenic mice caused fibrosis in some organs, but predominantly affected lung tissue and skin (Eferrl et al., 2008, Proc. Natl). .Acad.Sci.105 (30): 10525-10530).

この例は、Fra−2遺伝子を過剰発現するトランスジェニックマウスの新しい系統の特徴付けを説明する。これらのマウスは、第13週で開始する、発達中の肺の線維症を示した。線維症の発達は、循環および肺Th2サイトカインの上昇したレベルと一致する。 This example illustrates the characterization of a new strain of transgenic mice that overexpress the Fra-2 gene. These mice exhibited developing pulmonary fibrosis starting at week 13. The development of fibrosis is consistent with elevated levels of circulatory and pulmonary Th2 cytokines.

Eferlらによって作製された導入遺伝子では、EGFP遺伝子を導入遺伝子発現の可視化を可能にするための構築物に操作した。全長FRA2遺伝子を導入遺伝子の遍在性発現をもたらすH2kbプロモーターによって駆動した。Eferlトランスジェニック構築物を図19Aに示し、これは、H2Kbプロモーター、ゲノムFra−2座、レポーターIRES−EGFP配列、およびポリアデニル化シグナル(pA)をもつLTR配列からなる。E1〜E4は、Fra−2のエキソン1〜4であり;サザンブロット分析に使用されるHindIII(H)制限部位およびプローブ位置(P)を示す。 In the transgene produced by Effer et al., The EGFP gene was engineered into a construct to allow visualization of transgene expression. The full-length FRA2 gene was driven by the H2kb promoter, which results in ubiquitous expression of the transgene. The Efer transgenic construct is shown in FIG. 19A, which consists of an H2Kb promoter, a genomic Fra-2 locus, a reporter IRES-EGFP sequence, and an LTR sequence with a polyadenylation signal (pA). E1 to E4 are exons 1 to 4 of Fra-2; indicating the HindIII (H) restriction site and probe position (P) used for Southern blot analysis.

対照的に、図19Bは、マウスH2Kbプロモーター駆動マウスFra−2遺伝子およびT2A−EGFP−polyA−loxP−hUBp−EM7−Neo−loxPカセット(4,898bp)を含有する、ここで使用されたトランスジェニックベクターの概略図を示す。導入遺伝子の4から8つのコピーを宿主染色体に無作為に組み込んだ。FRA2を過剰発現する5つの樹立トランスジェニック系統を産出し;3つの系統を導入遺伝子発現に基づいて、さらなる特徴付けのために選別した。断片のゲノム座標は、以下の通りであった:H2Kb(H2−K1)プロモーター:Chr17:Morelloら,1986,EMBO J.5(8):1877−83の後34,137,222−34,139,244(−);Fra−2(FosI2)遺伝子(ストップなし):Chr5:32,438,859−32,455,559。 In contrast, FIG. 19B contains the mouse H2Kb promoter-driven mouse Fra-2 gene and the T2A-EGFP-polyA-loxP-hUBp-EM7-Neo-loxP cassette (4,898 bp), the transgenic used herein. A schematic diagram of the vector is shown. Four to eight copies of the transgene were randomly integrated into the host chromosome. Five established transgenic lines overexpressing FRA2 were produced; three lines were selected for further characterization based on transgene expression. The genomic coordinates of the fragment were as follows: H2Kb (H2-K1) promoter: Chr17: Morello et al., 1986, EMBO J. et al. 5 (8): 34,137,222-34,139,244 (-) after 1877-83; Fra-2 (FosI2) gene (without stop): Chr5: 32,438,859-32,455,559 ..

予備観察研究では、発達中の導入遺伝子の影響を第8、14および16週に研究した。野生型対照とFRA2マウス間にこの期間中に体重または死亡率の差はなかった。この観察は、Eferlらによる第16週での50%の死亡率の観察と対照的であった。 Preliminary observational studies studied the effects of developing transgenes at weeks 8, 14 and 16. There was no difference in body weight or mortality during this period between wild-type controls and FRA2 mice. This observation was in contrast to Effer et al.'S observation of a 50% mortality rate at week 16.

FRA−2過剰発現トランスジェニックマウスは、ヒドロキシプロリン含有量によって測定されるコラーゲンの増加した沈着を伴う、年齢と共に増加する肺重量を示した(図5)。 FRA-2 overexpressing transgenic mice showed age-increasing lung weight with increased collagen deposition as measured by hydroxyproline content (Fig. 5).

このモデルでは、肺中への炎症性細胞の流入を有する初期炎症性段階があった(図6)。組織学的分析も肺サンプル中のコラーゲンの時間と共に増加した沈着を示し、これは、
以下のように行われた。安楽死後、肺に固定圧力下で固定液を吹き込んだ。次いで、肺を除去し、固定液中に置いた。固定が完了した後、肺を1%寒天液中に包埋し、3mm厚さ段階切片にトランスアジタルに(transsagitally)スライスした。プロセシング後、全ての切片をパラフィンブロック中に包埋した。全てのパラフィンブロックを4μmでミクロトームし、コラーゲン沈着(青)を実証するためのMasson’s Trichrome染色および全体的な形態を示すためのH&E染色を使用して染色した(図6)。
In this model, there was an early inflammatory stage with an influx of inflammatory cells into the lungs (Fig. 6). Histological analysis also showed increased deposition of collagen in lung samples over time, which
It was done as follows. After euthanasia, the lungs were infused with a fixed solution under fixed pressure. The lungs were then removed and placed in a fixed solution. After immobilization was complete, the lungs were embedded in 1% agar solution and transagitially sliced into 3 mm thick step sections. After processing, all sections were embedded in paraffin blocks. All paraffin blocks were microtomeed at 4 μm and stained using Masson's Trichrome staining to demonstrate collagen deposition (blue) and H & E staining to show overall morphology (FIG. 6).

同様に、皮膚では、野生型対照と比較して、皮膚におけるコラーゲン沈着と類似して、経時的なFRA2マウスの真皮厚さの増加があった(図7および8)。 Similarly, in the skin, there was an increase in dermis thickness in FRA2 mice over time, similar to collagen deposition in the skin, compared to wild-type controls (FIGS. 7 and 8).

このモデルでは、肺中への炎症性細胞の流入およびTh2サイトカイン様IL−4&IL−13の上方調節を有する初期炎症性段階があった。肺および皮膚における線維性遺伝子(ECMタンパク質&メディエーター)の上方調節がある場合、後期線維性段階が続く。 In this model, there was an early inflammatory stage with influx of inflammatory cells into the lung and upregulation of Th2-cytokine-like IL-4 & IL-13. If there is upregulation of fibrous genes (ECM proteins & mediators) in the lungs and skin, the late fibrous stage follows.

発達しているかつ繊維化している肺のサイトカインプロファイル分析は、Th2サイトカインプロファイル(IL−4、IL−5およびIL−13)の増加を示した(図9)。IL−4およびIL−13レベルの著しい増加を発達の第13週までに観察し、これは、これらの動物における肺線維症の発達に類似する第17週にわたって上昇したままであった。 Cytokine profile analysis of the developing and fibrotic lung showed an increase in Th2 cytokine profiles (IL-4, IL-5 and IL-13) (FIG. 9). Significant increases in IL-4 and IL-13 levels were observed by week 13 of development, which remained elevated over week 17 similar to the development of pulmonary fibrosis in these animals.

発生遺伝子調節研究におけるFRA2マウスからの肺および皮膚の遺伝子発現分析は、TGF−b経路転写物、IL−4、IL−13、STAT6、プロフィブロティックケモカイン、およびLOXを含めた、重要なシグナトリー線維性マーカーの増加を示した(図10)。 Analysis of lung and skin gene expression from FRA2 mice in developmental gene regulation studies has included key signature fibers including TGF-b pathway transcripts, IL-4, IL-13, STAT6, profibrotic chemokines, and LOX. An increase in sex markers was shown (Fig. 10).

この発生肺線維症マウスモデルを使用して、線維症におけるIL−4およびIL−13の役割を研究した。最初に、線維症を促進することにおけるIL−13の役割を、FRA2マウスモデルにおいて中和活性を有する検証された代理マウスIL−13抗体(げっ歯類におけるSAR156597の交差反応性がないため)を使用して評価した。13週齢FRA2マウスに代理マウスIL−13抗体を、29日間週2回、ip経路によって投与された10mpkで投薬した。10mpkでのラットIgG1アイソタイプを対照として類似のFRA2マウスに投薬した。同様に、FRA2マウスの第3の群に第2の対照群として生理食塩水を投与した。以下の表は、研究において使用された種々の処置群を示す。 This mouse model of developing pulmonary fibrosis was used to study the role of IL-4 and IL-13 in fibrosis. First, the role of IL-13 in promoting fibrosis was described by a verified surrogate mouse IL-13 antibody with neutralizing activity in the FRA2 mouse model (because of the lack of cross-reactivity of SAR156597 in rodents). Used and evaluated. 13-week-old FRA2 mice were dosed with surrogate mouse IL-13 antibody twice weekly for 29 days at 10 mpk administered by the ip route. Similar FRA2 mice were dosed with a rat IgG1 isotype at 10 mpk as a control. Similarly, a third group of FRA2 mice was administered saline as a second control group. The table below shows the various treatment groups used in the study.

Figure 0006882440
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研究の終わりに、マウスを安楽死させ、それらの肺を除去し、プロセシングして、(1)タンパク質分析のための肺ホモジネート、(2)RNA調製物、および(3)1つの肺葉を提供し、1つの肺葉を縛り、通気し、切除し、組織学的分析のために固定した。肺ホモジネートを使用して、コラーゲンの量を定量した。図11に示すように、FRA2マウス肺のヒドロキシプロリン含有量は、wt同腹仔対照と比較して増加した。IL−13抗体処置FRA2マウス肺におけるヒドロキシプロリンレベルは、有意に減少した。 At the end of the study, mice were euthanized, their lungs removed and processed to provide (1) lung homogenate for protein analysis, (2) RNA preparation, and (3) one lobe. One lobe was tied, aerated, excised and fixed for histological analysis. Lung homogenate was used to quantify the amount of collagen. As shown in FIG. 11, the hydroxyproline content in FRA2 mouse lungs was increased compared to wt litter control. Hydroxyproline levels in IL-13 antibody-treated FRA2 mouse lungs were significantly reduced.

この観察をFRA2および同腹仔対照肺の病理組織学分析によって細胞レベルで確認した(図12)。トリクローム青染色肺切片は、相当する野生型マウスと比較して、FRA2マウス対照群(生理食塩水およびアイソタイプ対照処置)における増加したコラーゲン沈着を示した。低下したコラーゲン含有量を反映するトリクローム青染色の減少を抗IL−13抗体処置マウス肺において観察した(図13において定量した)。これらの結果は、コラーゲン沈着を通して肺線維症を促進することにおけるIL−13の役割および代理抗IL−13抗体がコラーゲン沈着を阻害する能力を明瞭に実証している。 This observation was confirmed at the cellular level by histopathological analysis of FRA2 and litter control lungs (Fig. 12). Trichrome blue-stained lung sections showed increased collagen deposition in the FRA2 mouse control group (saline and isotype control treatment) compared to the corresponding wild-type mice. A decrease in trichrome blue staining, reflecting a reduced collagen content, was observed in the lungs of anti-IL-13 antibody-treated mice (quantified in FIG. 13). These results clearly demonstrate the role of IL-13 in promoting pulmonary fibrosis through collagen deposition and the ability of surrogate anti-IL-13 antibodies to inhibit collagen deposition.

リアルタイムPCRによる転写分析を使用して、IL−13によって調節されるいろいろな線維性マーカー、プロフィブロティックメディエーターおよび遺伝子の発現を追跡した。IPFバイオマーカーFN1、SPDEF、およびMUC5Bの結果を図14に示す。プロフィブロティックマーカーCCL2およびCCL11の結果を図15に示す。IL−6、ARG1、およびIL13Ra2の結果を図16に示す。 Transcriptional analysis by real-time PCR was used to track the expression of various fibrous markers, profibrotic mediators and genes regulated by IL-13. The results of the IPF biomarkers FN1, SPDEF, and MUC5B are shown in FIG. The results of the profibrotic markers CCL2 and CCL11 are shown in FIG. The results of IL-6, ARG1, and IL13Ra2 are shown in FIG.

IL−13調節タンパク質発現をELISAによって肺ホモジネートにおいてさらに研究した。IL−13、IL−4およびIL−17レベルは、野生型肺と比較してFRA2肺ホモジネートにおいて増加し、これらのサイトカインレベルは、抗IL−13抗体処置後に減弱した(図17)。減少したIL−13レベルは、4週処置後の肺における抗体負荷を確認した(図17)。 IL-13 regulatory protein expression was further studied in lung homogenates by ELISA. IL-13, IL-4 and IL-17 levels were increased in FRA2 lung homogenates compared to wild-type lungs, and these cytokine levels were attenuated after anti-IL-13 antibody treatment (FIG. 17). Decreased IL-13 levels confirmed antibody loading in the lung after 4 weeks of treatment (Fig. 17).

MCP−1(CCL2)は、肺線維症と関連するよく特徴付けられたケモカインであり、IL−13によって調節される。同様に、CCL17/TARCおよびYKL−40は、IL−13調節タンパク質である。代理抗体処置後、CCL2、CCL17およびYKL−40は、著しく阻害された(図18)。 MCP-1 (CCL2) is a well-characterized chemokine associated with pulmonary fibrosis and is regulated by IL-13. Similarly, CCL17 / TARC and YKL-40 are IL-13 regulatory proteins. After surrogate antibody treatment, CCL2, CCL17 and YKL-40 were significantly inhibited (Fig. 18).

全体的に見て、これらの結果は、FRA2マウスモデルにおける肺線維症を促進することにおけるIL−13の役割を実証している。IL−13発現の阻害は、肺コラーゲン含
有量および肺線維症関連バイオマーカーの減少と関連している。
Overall, these results demonstrate the role of IL-13 in promoting pulmonary fibrosis in the FRA2 mouse model. Inhibition of IL-13 expression is associated with a decrease in lung collagen content and pulmonary fibrosis-related biomarkers.

本発明を詳細に、その特定の実施形態を参照することによって記載したが、変更形態および変形形態が添付の特許請求の範囲において定義された本発明の範囲から逸脱することなく、可能であることが明らかとなろう。より具体的には、本発明の一部の態様が特に有利であると本明細書で同定されたが、本発明は、本発明のこれらの特定の態様に必ずしも限定されないことが企図される。 The present invention has been described in detail by reference to its particular embodiment, but modifications and variations are possible without departing from the scope of the invention as defined in the appended claims. Will become clear. More specifically, although some aspects of the invention have been identified herein to be particularly advantageous, it is contemplated that the invention is not necessarily limited to these particular aspects of the invention.

Claims (3)

ヒト対象に投与された用量中に含まれる二重V領域抗体様タンパク質またはその断片が、該ヒト対象内でIL−4またはIL−13に特異的に結合するかどうかを決定する方法であって:
(a) 二重V領域抗体様タンパク質またはその断片が投与される前に、該ヒト対象から抜き取られた血液、血漿、または血清サンプル中のTARC/CCL17タンパク質の量を測定する工程
(b) 二重V領域抗体様タンパク質またはその断片を投与した後に、該ヒト対象から抜き取られた血液、血漿、または血清サンプル中のTARC/CCL17タンパク質の量を測定する工程、
(c) (b)で測定されたTARC/CCL17タンパク質の量を(a)で測定されたTARC/CCL17の量と比較する工程、
(d) (a)のTARC/CCL17の量と比較して(b)のTARC/CCL17の量の減少が見られた場合、該ヒト対象に投与された二重V領域抗体様タンパク質またはその断片は、該ヒト対象内のIL−4またはIL−13に特異的に結合したと決定する工程
を含
前記二重V領域抗体様タンパク質は、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインを含み、
前記可変軽鎖ドメインは、配列番号1および配列番号3のアミノ酸配列を含み、
前記可変重鎖ドメインは、配列番号2および配列番号4のアミノ酸配列を含む、
前記方法。
There a way to determine whether a double V region antibody-like protein, or fragment contained in the administered dose which the human subject is, specifically binds to IL-4 or IL-13 in the human subject hand:
(A) A step of measuring the amount of TARC / CCL17 protein in a blood, plasma, or serum sample drawn from a human subject prior to administration of the dual V region antibody-like protein or fragment thereof .
(B) A step of measuring the amount of TARC / CCL17 protein in a blood, plasma, or serum sample extracted from a human subject after administration of a double V region antibody-like protein or a fragment thereof.
(C) A step of comparing the amount of TARC / CCL17 protein measured in (b) with the amount of TARC / CCL17 measured in (a).
(D) If a decrease in the amount of TARC / CCL17 in (b) is observed compared to the amount of TARC / CCL17 in (a), the double V region antibody-like protein or fragment thereof administered to the human subject. is seen including a step <br/> determining the bound specifically to IL-4 or IL-13 in the human subject,
The double V region antibody-like protein comprises a variable light chain domain and a variable heavy chain domain.
The variable light chain domain comprises the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 3.
The variable heavy chain domain comprises the amino acid sequences of SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 4.
The method.
TARC/CCL17の量が酵素結合免疫吸着検定法(ELISA)によって検出される、請求項1に記載の方法。 The method of claim 1, wherein the amount of TARC / CCL17 is detected by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). ヒト対象がIL−4および/またはIL−13媒介性疾患を有する、請求項1または2に記載の方法。 The method of claim 1 or 2, wherein the human subject has IL-4 and / or IL-13-mediated disease.
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