JP6871181B2 - 電場における単一分子の分析 - Google Patents
電場における単一分子の分析 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6871181B2 JP6871181B2 JP2017568430A JP2017568430A JP6871181B2 JP 6871181 B2 JP6871181 B2 JP 6871181B2 JP 2017568430 A JP2017568430 A JP 2017568430A JP 2017568430 A JP2017568430 A JP 2017568430A JP 6871181 B2 JP6871181 B2 JP 6871181B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carrier
- sample
- nucleic acid
- molecule
- individual
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000005684 electric field Effects 0.000 title claims description 40
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title claims description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 165
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 157
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 157
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 76
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 47
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 33
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 33
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 24
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 17
- 239000004020 conductor Substances 0.000 claims description 14
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000009826 distribution Methods 0.000 claims description 6
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 50
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 49
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 46
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 41
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 30
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 27
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 17
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 16
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 16
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 11
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 11
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 10
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 10
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 10
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 9
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 5
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 5
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 5
- -1 cyclic nucleic acid Chemical class 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 4
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 4
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 4
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 238000001069 Raman spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 3
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005281 excited state Effects 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 229910052752 metalloid Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000002738 metalloids Chemical class 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 3
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 2
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 2
- 108010008286 DNA nucleotidylexotransferase Proteins 0.000 description 2
- 102100029764 DNA-directed DNA/RNA polymerase mu Human genes 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N indium;oxotin Chemical compound [In].[Sn]=O AMGQUBHHOARCQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 229910000510 noble metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 2
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 230000005653 Brownian motion process Effects 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 101900234631 Escherichia coli DNA polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 108010007577 Exodeoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 241000721701 Lynx Species 0.000 description 1
- 108010010677 Phosphodiesterase I Proteins 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 101710086015 RNA ligase Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical group [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012896 Statistical algorithm Methods 0.000 description 1
- YDHWWBZFRZWVHO-UHFFFAOYSA-H [oxido-[oxido(phosphonatooxy)phosphoryl]oxyphosphoryl] phosphate Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O YDHWWBZFRZWVHO-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000000181 anti-adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003911 antiadherent Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- QTPILKSJIOLICA-UHFFFAOYSA-N bis[hydroxy(phosphonooxy)phosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O QTPILKSJIOLICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005537 brownian motion Methods 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000011370 conductive nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000023077 detection of light stimulus Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000000609 electron-beam lithography Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 108010086271 exodeoxyribonuclease II Proteins 0.000 description 1
- 108010052305 exodeoxyribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 238000002060 fluorescence correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010055863 gene b exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 235000019689 luncheon sausage Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 239000011807 nanoball Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000004893 oxazines Chemical class 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000012175 pyrosequencing Methods 0.000 description 1
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 238000004557 single molecule detection Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 108010068698 spleen exonuclease Proteins 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- XOLBLPGZBRYERU-UHFFFAOYSA-N tin dioxide Chemical compound O=[Sn]=O XOLBLPGZBRYERU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001887 tin oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 238000007740 vapor deposition Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
- C12Q1/6874—Methods for sequencing involving nucleic acid arrays, e.g. sequencing by hybridisation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/508—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above
- B01L3/5085—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes rigid containers not provided for above for multiple samples, e.g. microtitration plates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/645—Specially adapted constructive features of fluorimeters
- G01N21/648—Specially adapted constructive features of fluorimeters using evanescent coupling or surface plasmon coupling for the excitation of fluorescence
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0645—Electrodes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
- B01L2300/0819—Microarrays; Biochips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
- G01N2001/4038—Concentrating samples electric methods, e.g. electromigration, electrophoresis, ionisation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1006—Investigating individual particles for cytology
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N2015/1028—Sorting particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
- G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6408—Fluorescence; Phosphorescence with measurement of decay time, time resolved fluorescence
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Description
− 分析対象の単一分子(single molecule)を担持体(support)に配置するための少なくとも1つの試料域(sample spot)を有する担持体、
− 担持体表面の少なくとも1つの単一分子の位置で、少なくとも1つの照射された体積要素(例えば、共焦点体積要素(confocal volume element))を提供する光源、特に、多点レーザー(multipoint laser)、および
− 担持体表面の個別の単一分子から単一の光子を検出することができる検出器、特に多画素検出器(multipixel detector)。
(a)担持体(support)であって、少なくとも1つの個別の試料域(sample spot)をその上に含む担持体を、提供するステップ、ここで、前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(b)前記担持体を、分析対象である少なくとも1つの単一分子を含む液体媒体(liquid medium)と接触させるステップ、これによって、前記試料域上の液体媒体の反応空間を形成する、
(c)前記反応空間に電場を印加するステップ、これによって、分析対象である前記少なくとも1つの単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、および
(d)前記少なくとも1つの単一分子を、個別に分析するステップ。
(a)担持体であって、複数の個別の試料域をその上に含む担持体を、提供するステップ、ここで前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(b)前記担持体を、分析対象である複数の単一分子を含む液体媒体と接触させるステップ、これによって、前記試料域上の少なくとも1つの反応空間を形成する、
(c)前記反応空間に電場を印加するステップ、これによって、分析対象である前記単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、および
(d)前記単一分子を、個別に分析するステップ。
− 個別の試料域にある単一分子に光源を個別に照射するステップ、ここで前記光源は、複数の個別の照射体積要素(individual illuminated volume elements)を前記試料域で提供する、
− 光検出器で前記単一分子から発した光を個別に検出するステップ、ここで、前記検出器は複数の検出画素を含み、前記検出画素は、好ましくは約0.5μm〜50μmの範囲の直径を有し、前記検出画素間の距離が検出画素の直径の好ましくは少なくとも約2倍、より好ましくは約3〜10倍である、および
− 個別の検出画素から検出された光を、個別の試料域に位置する単一分子と関連づけられる事象と相関させるステップ。
− 担持体の個別の試料域に、(i)単一の核酸分子、(ii)核酸合成酵素分子および/または核酸分解酵素分子、および(iii)遊離形態の蛍光標識ヌクレオチド構成単位(nucleotide building blocks)および/または前記核酸分子に組み込まれた蛍光標識ヌクレオチド構成単位を提供するステップ、
− 酵素反応を行うステップ、ここで、ヌクレオチド構成単位を前記単一の核酸分子に組み込み、かつ/または前記単一の核酸分子から切断する、および
− ヌクレオチド構成単位が前記単一の核酸分子に組み込まれる、かつ/または前記単一の核酸分子から切断される際に生じる蛍光の経時的変化に基づいて、個別に核酸分子の塩基配列を決定するステップ。
(a)固定された形態の少なくとも1つの核酸合成酵素分子、遊離した形態の環状または線状の核酸鋳型、前記鋳型にアニールされた、あるいは前記核酸鋳型にアニーリングすることができるプライマー、および蛍光標識ヌクレオチド構成単位を提供するステップ、
(b)前記固定した核酸合成酵素分子で触媒されたプライマー伸長において、前記ヌクレオチド構成単位が組み込まれた核酸鋳型分子の配列に相補的な核酸分子を生成するステップ、
(c)場合によっては、前記生成された核酸分子を核酸分解酵素分子と接触させ、前記核酸分解酵素分子で触媒されたヌクレアーゼ消化において前記生成された核酸分子から個別のヌクレオチド構成単位を切断するステップ、および
(d)ヌクレオチド構成単位がプライマー伸長時に組み込まれる、かつ/またはヌクレアーゼ消化時に切断される時に生じる蛍光の経時的変化に基づいて、前記核酸鋳型分子の塩基配列を決定するステップ。
(a)固定された形態の少なくとも1つの核酸分解酵素分子、および蛍光標識ヌクレオチド構成単位を含む遊離形態の核酸分子を準備するステップ、
(b)前記核酸分解酵素分子を前記核酸分子と接触させ、前記核酸分解酵素分子で触媒されたヌクレアーゼ消化において前記核酸分子から個別のヌクレオチド構成単位を切断するステップ、および
(c)ヌクレアーゼ消化時にヌクレオチド構成単位を切断する際に生じる蛍光の経時的変化に基づいて、前記核酸分子の塩基配列を決定するステップ。
(i)少なくとも1つの個別の試料域をその上に含む担持体、ここで、前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(ii)前記担持体を、分析対象である少なくとも1つの単一分子を含む液体媒体と、接触させるのに適した手段、
(iii)前記担持体を前記液体媒体に接触させる際に形成される反応空間に、電場を印加するのに適した手段、
(iv)個別の試料域の単一分子を、個別に照射するための光源であって、少なくとも1つの照射された個別の体積要素を、前記担持体表面の1つの試料域に提供する光源、および
(v)個別の試料域で単一分子から発せられる光を、個別に検出する光検出器、を含む。
(i)複数の個別の試料域をその上に含む担持体、ここで、前記試料域が少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(ii)前記担持体を、分析対象である複数の単一分子を含む液体媒体と、接触させるのに適した手段、
(iii)前記担持体を前記液体媒体と接触させる際に形成される反応空間に、電場を印加するのに適した手段、
(iv)個別の試料域の単一分子を、個別に照射するための光源であって、少なくとも1つの照射された個別の体積要素を、前記担持体表面の1つの試料域に提供する光源、および
(v)個別の試料域で複数の単一分子から発せられた光を、個別に並行して検出する光検出器、を含む。
さらに、本発明は以下の各項目に記載の態様を含むものである。
[項目1]
以下のステップを含む、単一分子を分析するための方法:
(a)少なくとも1つの個別の試料域をその上に含む担持体を、提供するステップ、ここで、前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(b)前記担持体を、分析対象である少なくとも1つの単一分子を含む液体媒体と接触させるステップ、これによって、前記試料域上の液体媒体の反応空間を形成する、
(c)前記反応空間に電場を印加するステップ、これによって、分析対象である前記少なくとも1つの単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、および
(d)前記少なくとも1つの単一分子を、個別に分析するステップ。
[項目2]
以下の工程を含む、複数の単一分子を分析するための方法:
(a)複数の個別の試料域をその上に含む担持体を、提供するステップ、ここで前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(b)前記担持体を、分析対象である複数の単一分子を含む液体媒体と接触させるステップ、これによって、前記試料域上の少なくとも1つの反応空間を形成する、
(c)前記反応空間に電場を印加するステップ、これによって、分析対象である前記単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、および
(d)前記単一分子を、個別に分析するステップ。
[項目3]
単一の核酸分子、特に複数の単一の核酸分子の配列を決定する、項目1または2に記載の方法。
[項目4]
試料域が、約1〜20nmの範囲の直径を有し、個別の試料域と試料域との間の距離が、前記試料域の直径の少なくとも約2倍、好ましくは約3〜500倍である、項目1〜3のいずれかに記載の方法。
[項目5]
前記担持体は、平坦な表面または構造化された表面を有する、項目1〜4のいずれかに記載の方法。
[項目6]
前記担持体は、個別の試料域と試料域と間の領域に導電性の表面を有する、項目1〜5のいずれかに記載の方法。
[項目7]
前記試料域の表面は、金属、例えば、Au、Ag、Cr、Ni、またはAl、特にAuである、項目1〜6のいずれかに記載の方法。
[項目8]
前記試料域の表面には、核酸合成酵素および/または核酸分解酵素が結合している、項目1〜7のいずれかに記載の方法。
[項目9]
前記電場は、約1〜5000V/cm、特に約10〜2000V/cm、より特に約20〜200V/cmの電場強度を有する、項目1〜8のいずれかに記載の方法。
[項目10]
前記電場は、前記担持体表面とさらなる電極との間に印加され、前記電極は光学測定装置の導電性構造または導電性のマイクロウェル壁であってもよい、項目1〜9のいずれかに記載の方法。
[項目11]
項目1〜10のいずれかに記載の方法の、配列集団の部分配列の頻度および/または分布の決定のための使用。
[項目12]
前記集団は、少なくとも10 2 個、少なくとも10 3 個、または少なくとも10 4 個の個別の構成要素を含む、項目11に記載の使用。
[項目13]
(i)少なくとも1つの個別の試料域をその上に含む担持体、ここで、前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(ii)前記担持体を、分析対象である少なくとも1つの単一分子を含む液体媒体と、接触させるのに適した手段、
(iii)前記担持体を前記液体媒体に接触させる際に形成される反応空間に、電場を印加するのに適した手段、
(iv)個別の試料域の単一分子を、個別に照射するための光源であって、少なくとも1つの照射された個別の体積要素を、前記担持体表面の1つの試料域に提供する光源、および
(v)個別の試料域で単一分子から発せられる光を、個別に検出する光検出器
を含む、少なくとも1つの個別の単一分子を分析する装置であって、例えば、少なくとも1つの単一の核酸分子の配列を決定する、装置。
[項目14]
(i)複数の個別の試料域をその上に含む担持体、ここで、前記試料域が少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(ii)前記担持体を、分析対象である複数の単一分子を含む液体媒体と、接触させるのに適した手段、
(iii)前記担持体を前記液体媒体と接触させる際に形成される反応空間に、電場を印加するのに適した手段、
(iv)個別の試料域の単一分子を、個別に照射するための光源であって、少なくとも1つの照射された個別の体積要素を、前記担持体表面の1つの試料域に提供する光源、および
(v)個別の試料域で複数の単一分子から発せられた光を、個別に並行して検出する光検出器
を含む、複数の個別の単一分子を並行分析する装置であって、例えば、複数の単一の核酸分子の配列を並行して決定する、装置。
さらに、以下の図は本発明を例示するものである。
図1は、本発明による装置の第一の態様を示す。光学的に透明な担持体(10)は、非導電性の基材(例えば、ガラスまたは石英)でできた板(12)を含む。この板は、例えば、酸化インジウムスズ(ITO)でできた導電層(14)で覆われている。平坦な担持体表面には、導電性試料域(16)が配置されている。これら試料域は、第一の金属(例えば、Cr)でできた下部層(18)、および第二の金属(例えば、Auなどの貴金属)でできた第二の(上部)層(20)を含む。導電性試料域(16)と第二の電極(22)の間に電場を印加する。第二の電極(22)は、光学測定装置の部分、例えば、金属ケースおよび/または光学対物レンズの先端であってもよい。
図2は、本発明による装置のさらなる態様を示す。ここでは、複数のマイクロウェル(32a、32b)を含む担持体(30)が、提供されている。担持体は光学的に透明であることが好ましい。マイクロウェルは、例えば上述のような、金属層(18)および(20)を含む導電性試料域(16)を含む。導電性試料域(16)とマイクロウェルの壁に設けられた電極(34a、34b)との間に、電場を印加する。導電性試料域(16)と電極(34a、34b)との間に電場を印加して、ウェル(32a、32b)内の個別の反応空間に存在する単一分子(28)を、核酸合成酵素分子および/または核酸分解酵素分子(26)が固定されている導電性試料域(16)に濃縮させる。
Claims (24)
- 以下のステップを含む、単一分子を分析するための方法であって:
(a)少なくとも1つの個別の試料域をその上に含む担持体を、提供するステップ、ここで、前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(b)前記担持体を、分析対象である少なくとも1つの単一分子を含む液体媒体と接触させるステップ、これによって、前記試料域上の液体媒体の反応空間を形成する、
(c)前記反応空間に電場を直流電圧で印加するステップ、これによって、分析対象である前記少なくとも1つの単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、および
(d)前記少なくとも1つの単一分子を、個別に分析するステップ、
ここで、個別の試料域の前記単一分子は、照射体積要素を提供する光源によって照射され、前記体積要素は全反射によって生成されるエバネセント場であり、前記反応空間は、その上に前記試料域が設けられた前記担持体に形成された単一の反応空間であり、反応が前記単一の反応空間で行われる、
方法。 - 以下の工程を含む、複数の単一分子を分析するための方法であって:
(a)複数の個別の試料域をその上に含む担持体を、提供するステップ、ここで前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(b)前記担持体を、分析対象である複数の単一分子を含む液体媒体と接触させるステップ、これによって、前記試料域上の少なくとも1つの反応空間を形成する、
(c)前記反応空間に電場を直流電圧で印加するステップ、これによって、分析対象である前記単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、および
(d)前記単一分子を、個別に分析するステップ、
ここで、複数の個別の試料域の前記複数の単一分子は、照射体積要素を提供する光源によって照射され、前記体積要素は全反射によって生成されるエバネセント場であり、前記反応空間は、その上に前記試料域が設けられた前記担持体に形成された単一の反応空間であり、反応が前記単一の反応空間で行われる、
方法。 - 単一の核酸分子の配列を決定する、請求項1または2に記載の方法。
- 複数の単一の核酸分子の配列を決定する、請求項3に記載の方法。
- 試料域が、1〜20nmの範囲の直径を有し、個別の試料域と試料域との間の距離が、前記試料域の直径の少なくとも2倍である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 試料域が、1〜20nmの範囲の直径を有し、個別の試料域と試料域との間の距離が、前記試料域の直径の3〜500倍である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記担持体は、平坦な表面または構造化された表面を有する、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記担持体は、個別の試料域と試料域と間の領域に導電性の表面を有する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料域の表面は、金属である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料域の表面は、Au、Ag、Cr、Ni、またはAlである、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料域の表面は、Auである、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記試料域の表面には、核酸合成酵素および/または核酸分解酵素が結合している、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記電場は、1〜5000V/cmの電場強度を有する、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記電場は、10〜2000V/cmの電場強度を有する、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記電場は、20〜200V/cmの電場強度を有する、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記電場は、前記担持体表面とさらなる電極との間に印加され、前記電極は光学測定装置の導電性構造または導電性のマイクロウェル壁であってもよい、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法の、配列集団の部分配列の頻度および/または分布の決定のための使用。
- 前記集団は、少なくとも102 個の個別の構成要素を含む、請求項17に記載の使用。
- 前記集団は、少なくとも10 3 個の個別の構成要素を含む、請求項17に記載の使用。
- 前記集団は、少なくとも10 4 個の個別の構成要素を含む、請求項17に記載の使用。
- (i)少なくとも1つの個別の試料域をその上に含む担持体、ここで、前記試料域が、少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(ii)前記担持体を、分析対象である少なくとも1つの単一分子を含む液体媒体と、接触させるのに適した手段、
(iii)前記担持体を前記液体媒体に接触させる際に形成される反応空間に、電場を直流電圧で印加するのに適した手段、これによって、分析対象である前記少なくとも1つの単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、
(iv)個別の試料域の単一分子を、個別に照射するための光源であって、少なくとも1つの照射された個別の体積要素を、前記担持体表面の1つの試料域に提供する光源、および
(v)個別の試料域で単一分子から発せられる光を、個別に検出する光検出器
を含む、少なくとも1つの個別の単一分子を分析する装置であって、
ここで、前記少なくとも1つの照射された個別の体積要素は全反射によって生成されるエバネセント場であり、前記接触させるのに適した手段が、その上に前記試料域が設けられた前記担持体に、単一の反応空間を形成するのに適している、
装置。 - 少なくとも1つの単一の核酸分子の配列を決定する、請求項21に記載の装置。
- (i)複数の個別の試料域をその上に含む担持体、ここで、前記試料域が少なくとも部分的には導電性材料でできている、
(ii)前記担持体を、分析対象である複数の単一分子を含む液体媒体と、接触させるのに適した手段、
(iii)前記担持体を前記液体媒体と接触させる際に形成される反応空間に、電場を直流電圧で印加するのに適した手段、これによって、分析対象である前記単一分子の、前記試料域での濃縮を達成する、
(iv)個別の試料域の単一分子を、個別に照射するための光源であって、少なくとも1つの照射された個別の体積要素を、前記担持体表面の1つの試料域に提供する光源、および
(v)個別の試料域で複数の単一分子から発せられた光を、個別に並行して検出する光検出器
を含む、複数の個別の単一分子を並行分析する装置であって、
ここで、前記少なくとも1つの照射された個別の体積要素は全反射によって生成されるエバネセント場であり、前記接触させるのに適した手段が、その上に前記試料域が設けられた前記担持体に、単一の反応空間を形成するのに適している、
装置。 - 複数の単一の核酸分子の配列を並行して決定する、請求項23に記載の装置。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP15174524.7A EP3112841A1 (en) | 2015-06-30 | 2015-06-30 | Single molecule analysis in an electrical field |
EP15174524.7 | 2015-06-30 | ||
PCT/EP2016/065019 WO2017001407A1 (en) | 2015-06-30 | 2016-06-28 | Single molecule analysis in an electrical field |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018526979A JP2018526979A (ja) | 2018-09-20 |
JP2018526979A5 JP2018526979A5 (ja) | 2020-11-26 |
JP6871181B2 true JP6871181B2 (ja) | 2021-05-12 |
Family
ID=53524606
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017568430A Active JP6871181B2 (ja) | 2015-06-30 | 2016-06-28 | 電場における単一分子の分析 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11519030B2 (ja) |
EP (2) | EP3112841A1 (ja) |
JP (1) | JP6871181B2 (ja) |
CN (1) | CN108124455A (ja) |
WO (1) | WO2017001407A1 (ja) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3092314B1 (en) * | 2014-01-10 | 2019-12-11 | Gnothis Holding AG | Single molecule analysis with high accuracy |
EP4379378A1 (en) | 2022-11-29 | 2024-06-05 | Gnothis Holding AG | Selective-area coated protein resistant surface |
WO2024099959A1 (en) | 2022-11-07 | 2024-05-16 | Gnothis Holding Ag | Selective-area coated protein resistant surface |
WO2024110463A1 (en) | 2022-11-21 | 2024-05-30 | Gnothis Holding Ag | Multiple molecular binding sites |
EP4375644A1 (en) | 2022-11-22 | 2024-05-29 | Gnothis Holding AG | Fingerprint analysis of single molecule events |
EP4379355A1 (en) | 2022-11-29 | 2024-06-05 | Gnothis Holding AG | High throughput analysis of single molecule events |
EP4382614A1 (en) * | 2022-12-06 | 2024-06-12 | Gnothis Holding AG | High yield support |
CN116626011B (zh) * | 2023-07-24 | 2023-10-03 | 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 | 一种用于单分子动力学检测的纳米光学器件 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6017696A (en) * | 1993-11-01 | 2000-01-25 | Nanogen, Inc. | Methods for electronic stringency control for molecular biological analysis and diagnostics |
ATE164943T1 (de) | 1993-01-18 | 1998-04-15 | Evotec Biosystems Gmbh | Verfahren und vorrichtung zur bewertung der fitness von biopolymeren |
US7172864B1 (en) * | 1993-11-01 | 2007-02-06 | Nanogen | Methods for electronically-controlled enzymatic reactions |
DE10031842A1 (de) | 2000-06-30 | 2002-01-31 | Gnothis Holding Sa Ecublens | Multiplex-Sequenzierungsverfahren |
DE10126083A1 (de) | 2001-05-29 | 2002-12-05 | Gnothis Holding Sa Ecublens | Verwendung von optischen Diffraktionselementen in Nachweisverfahren |
DE10162536A1 (de) | 2001-12-19 | 2003-07-17 | Gnothis Holding Sa Ecublens | Evaneszenz-basierendes Multiplex-Sequenzierungsverfahren |
EP1556506A1 (en) * | 2002-09-19 | 2005-07-27 | The Chancellor, Masters And Scholars Of The University Of Oxford | Molecular arrays and single molecule detection |
DE102004038359A1 (de) | 2004-08-06 | 2006-03-16 | Rudolf Rigler | Paralleles Hochdurchsatz-Einzelmolekül-Sequenzierungsverfahren |
US9410889B2 (en) * | 2005-06-10 | 2016-08-09 | Applied Biosystem, Llc | Method and system for multiplex genetic analysis |
CN101317086B (zh) * | 2005-10-04 | 2013-08-14 | 海德威技术公司 | 分析物的微观流体检测 |
EP2823056B1 (en) | 2012-03-06 | 2019-05-15 | Gnothis Holding AG | Cyclic single molecule sequencing process |
EP3092314B1 (en) * | 2014-01-10 | 2019-12-11 | Gnothis Holding AG | Single molecule analysis with high accuracy |
-
2015
- 2015-06-30 EP EP15174524.7A patent/EP3112841A1/en not_active Ceased
-
2016
- 2016-06-28 CN CN201680039883.4A patent/CN108124455A/zh active Pending
- 2016-06-28 EP EP16732652.9A patent/EP3317637B8/en active Active
- 2016-06-28 WO PCT/EP2016/065019 patent/WO2017001407A1/en active Application Filing
- 2016-06-28 US US15/740,903 patent/US11519030B2/en active Active
- 2016-06-28 JP JP2017568430A patent/JP6871181B2/ja active Active
-
2022
- 2022-11-02 US US18/052,004 patent/US20230304087A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20230304087A1 (en) | 2023-09-28 |
EP3317637A1 (en) | 2018-05-09 |
EP3317637B8 (en) | 2024-02-21 |
CN108124455A (zh) | 2018-06-05 |
EP3317637C0 (en) | 2024-01-17 |
EP3112841A1 (en) | 2017-01-04 |
US20180187258A1 (en) | 2018-07-05 |
US11519030B2 (en) | 2022-12-06 |
WO2017001407A1 (en) | 2017-01-05 |
JP2018526979A (ja) | 2018-09-20 |
EP3317637B1 (en) | 2024-01-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6871181B2 (ja) | 電場における単一分子の分析 | |
US11788140B2 (en) | Single molecule analysis with high accuracy | |
US10590481B2 (en) | Cyclic single molecule sequencing process | |
US11739371B2 (en) | Arrays for single molecule detection and use thereof | |
US7754427B2 (en) | Parallel high throughput single molecule sequencing process | |
JP2013523131A (ja) | ナノ細孔解離依存核酸配列決定のためのツールおよび方法 | |
US20220205036A1 (en) | Single-channel sequencing method based on self-luminescence | |
US20220010370A1 (en) | Method for sequencing polynucleotides | |
WO2024110463A1 (en) | Multiple molecular binding sites | |
EP4379355A1 (en) | High throughput analysis of single molecule events | |
WO2023081653A1 (en) | Nucleic acid polymerase for incorporating labeled nucleotides | |
WO2024120959A1 (en) | High yield support | |
WO2023278744A1 (en) | Detecting methylcytosine using a modified base opposite to the methylcytosine | |
JP2011188774A (ja) | キャピラリー電気泳動を利用する高精度一塩基多型変異の検出法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180719 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190618 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190618 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20200330 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200414 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200706 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200910 |
|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20201013 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210323 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210415 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6871181 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |