JP6792268B2 - ナノシートを含むnmr測定用配向剤 - Google Patents
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Description
即ち、本発明は、次の発明を提供するものである。
ナノシートが、ヒドロキシ基、アミノ基、アミド基、カルボニル基、カルボキシル基、リン酸基、イミダゾール基及びグアニジン基から選ばれる少なくとも1種の官能基を1分子中に35個以上有し、かつ分子量1,500以上の化合物で被覆されているNMR測定用配向剤。
前記ナノシートの厚みが0.5〜3nm、前記ナノシートの大きさが100nm〜100μmである<1>記載のNMR測定用配向剤。
前記ナノシートが酸化チタン、酸化ニオブ及び酸化グラフェンから選ばれる少なくとも1種のナノシートである<1>又は<2>に記載のNMR測定用配向剤。
前記ヒドロキシ基、アミノ基、アミド基、カルボニル基、カルボキシル基、スルホ基、リン酸基、イミダゾール基及びグアニジン基から選ばれる少なくとも1種の官能基を1分子中に35個以上有し、かつ分子量1,500以上の化合物が、タンパク質、タンニン酸、ポリジアリルジメチルアミンクロライド及びコンドロイチン硫酸から選ばれる少なくとも1種である<1>〜<3>のいずれか1に記載のNMR測定用配向剤。
前記タンパク質が、カゼイン、リゾチーム及びアルブミンから選ばれる少なくとも1種である<4>に記載のNMR測定用配向剤。
タンパク質、タンニン酸、ポリジアリルジメチルアミンクロライド及びコンドロイチン硫酸から選ばれる少なくとも1種で被覆されている酸化チタンナノシート。
カゼインで被覆されている酸化ニオブナノシート。
カゼインで被覆されている酸化グラフェンナノシート。
本明細書において「ナノシート」とは、ナノスケールの厚みを持つシートを指す。ナノシートの厚みは、原理的には原子一つ分の厚みまで薄くすることができるが、一般的に0.5nm以下のナノシートは作製が難しい。本発明のナノシートの厚みは、後述するコーティング剤を含めないで0.5〜3.0nmが好ましく、1.0〜2.5nmがより好ましい。また、コーティング剤を含めたナノシートの厚みは10nm以下であることが好ましい。なお、本発明において、ナノシートの厚みは、原子間力顕微鏡(AFM)によって観察される任意の箇所の断面プロファイルから算出した値をいう。
本発明のナノシートの大きさは、磁場配向性の観点から100nm以上が好ましい。ナノシートの大きさは溶液に分散する限り大きいことが好ましいが、実際、上限値としては100μm程である。
なお、本発明において、ナノシートの大きさとは、ナノシートの広がり方向の大きさを意図するものであり、動的光散乱法によって測定した体積基準の頻度分布において累積頻度で50%となる粒径として算出された値をいう。
したがって、典型的なナノシートの大きさは数μm、厚みは数nmのオーダーであって、この場合、厚みに対する大きさのアスペクト比は約1:103である。
ナノシートの磁場配向は、ナノシートを構成する原子の磁化異方性の総和が溶液中の自由運動よりも上回ったときに起こる。異方性の大きさに差はあるものの、全てのナノシートは磁化異方性がある原子から構成されているため、ナノシートの大きさが十分に大きければ、理論上は構成する原子の種類や組成によらず、すべてナノシートは配向する。このため、本発明のナノシートとしては、磁場配向性を有するナノシートであればその種類や組成は問わないが、例えば、以下のものが挙げられる。
酸化チタンナノシートは二次元的なナノ構造を有し、層状チタン酸化合物の単結晶を、温和な条件にて化学処理し、結晶構造の基本最小単位である層1枚にまで剥離することにより得ることができる。酸化チタンナノシートは非常に大きい軸比の形状を持っており、例えばTi0.87□0.13O2(□:空孔)の結晶構造を有する酸化チタンは、厚さ約0.75nm、横幅が数μmとなる(図1を参照)。この種のナノシートは磁場による配向軸がナノシートの厚み方向であり、また高密度の負電荷を帯びて表面積も大きいため、シート間には強い静電反発力が働いている。このため、シート間の強い静電反発力のために分散性に優れており、外部磁場中にてナノシートが層状に配列する。
図2は磁場配向している酸化ニオブシートの概略図である。左図は側面図、右図は上面図を示す。記号Bは磁場を表し、記号Bの脇にある矢印及び中黒丸印は磁場の方向を示している。酸化ニオブナノシートは外部磁場の方向がシートの接線方向に一致するように配向するため、シートの接線方向となるナノシートの配向軸を中心に回転自在となっている。
酸化グラフェンナノシートは、酸化ニオブナノシートと同様に外部磁場の方向がシートの接線方向に一致するように配向するため、シートの接線方向となるナノシートの配向軸を中心に回転自在となっている。
本発明のナノシートはコーティング剤で被覆することによって、グルコース等の小分子のみならず、より分子量の大きなタンパク質を磁場配向させてNMR測定することができる。そして、ナノシート表面を被覆するコーティング剤をNMR測定対象分子に応じて選択することにより、ナノシートと測定対象分子の相互作用を最適に調節し、以ってタンパク質(測定対象分子)の非特異吸着等を抑制することができる。さらに、コーティング剤による被覆によってナノシートの分散性をpH及び塩の存在に大きく左右されずに保持することができる。
1分子中のヒドロキシ基、アミノ基、アミド基、カルボニル基、カルボキシル基、スルホ基、リン酸基、イミダゾール基及びグアニジン基から選ばれる少なくとも1種の官能基の数は、50個以上であることが好ましく、100個以上であることがより好ましい。該官能基の数の上限値は特に制限されないが、後述するタンパク質においては、通常100〜1000個程である。
なお、本発明において、該官能基の数は、上述した官能基を1つの官能基として数えるものとする。例えば、コーティング剤がその分子中にアミド基を有する場合、該アミド基をカルボニル基とアミノ基とに分けて官能基数2と数えるのではなく、1つのアミド基として官能基数1と数える。
コーティング剤の分子量の上限値は特に制限されないが、後述するタンパク質においては、通常一万〜十万程度である。
これらは単独重合体であっても、これら2種以上からなる共重合体であってもよく、共重合体である場合、各単量体の配列はランダム、ブロック、グラフトのいずれであってもよい。また、これらの重合体がイオン性電解質の場合は、その塩もコーティング剤として含まれる。
コーティング剤の選択に際しては、例えば、コーティング剤で被覆したナノシートと蛍光ラベルした測定対象分子とを混合し、共焦点レーザー顕微鏡により観察したとき強い蛍光が観察される場合は、コーティング剤として好ましくない。これは、コーティング剤で被覆したナノシート及び測定対象分子との相互作用が強く、その配向性の妨げになるためである。一方、同様に観察したとき弱い蛍光が観察される場合は、コーティング剤で被覆したナノシートの配向性が妨げられることなく、測定対象分子と共に良好に配向するため、コーティング剤として好ましい。
ナノシートの被覆は例えば以下の通り行うことができる。
1.ナノシートに対して過剰量のコーティング剤と、ナノシートとを、適当な溶媒中で混合する。
このとき用いる溶媒は、コーティング剤及びナノシートの組み合わせによって適宜選択される。すなわち、両者が溶解又は分散可能で、かつ両者と反応しない溶媒から適宜選択される。例えば、水、各種緩衝液、テトラメチルアンモニウム(TMA)、テトラブチルアンモニウム(TBA)等を用いることができる。過剰量のコーティング剤とは、通常ナノシートに対してコーティング剤を5倍重量以上とすれば十分である。
このときの静置時間は、コーティング剤及びナノシートの組み合わせ、すなわち両者の相互作用の強さにより適宜決定されるが、通常数分〜60分程である。
必要に応じて、遠心操作後に得られた沈殿物を適当な溶媒に再分散させてもよく、さらに遠心操作と再分散による洗浄を繰り返し行ってもよい。このときの遠心条件は、コーティング剤及びナノシートの種類によるが、通常15,000rpm、4℃で15分である。
コーティング剤は以下のものを用いた。
カゼイン:市販品(Wako社製)
アルブミン:市販品(Wako社製)
リゾチーム:市販品(Wako社製)
スキムミルク:市販品(Wako社製、カゼイン27重量%含有物)
タンニン酸:市販品(Aldrich社製)
ポリジアリルジメチルアミンクロライド:市販品(Aldrich社製、平均分子量36,000、極性官能基数222/1分子)
コンドロイチン硫酸:市販品(Wako社製、平均分子量144,000、極性官能基数1787/1分子)
PEG修飾カテコール:以下の方法により合成した。
0.025mmolのPEG-NHS(分子量10,000 g/mol、SUNBRIGHT社)と0.040 mmolのカテコール(東京化成)を0.070 mmolの4-Nメチルモルフォリン存在下、ジメチルホルムアミド(DMF)中において一晩反応させた。その後、透析処理によって未反応分子を除去し、反応生成物である下記式に示すPEG修飾カテコール(平均分子量10,153、極性官能基数3個/1分子)を得た。なお、PEG-NHSの分子量はゲルパーミエーションクロマトグラフィー(GPC)による、PEG換算により求めた。
n=223(平均値)
同様に、コンドロイチン硫酸の分子量は動的光散乱法(DLS)によって求めた平均粒径を求めたところ6.61 nmであり、同程度の粒子半径を有するPEGの分子量への換算により求めた。
装置:Zetasizer Nano ZSP(商品名、Malvern社製)
測定条件:室温
試料:酸化チタンナノシート重量が0.008重量%のナノシート分散液を測定に用いた。
装置:JEM-1230(商品名、JEOL社製)
測定条件:室温、真空環境下
試料:酸化チタンナノシート重量が0.008重量%のナノシート分散液を測定に用いた。
装置:CypherS(商品名、Asylum Research社製)
測定条件:室温
装置:Zetasizer Nano ZSP(商品名、Malvern社製)
測定条件:室温
試料:酸化チタンナノシート重量が0.008重量%のナノシート分散液を測定に用いた。
装置:BL45XU in SPring-8
試料:酸化チタンナノシート重量が0.4重量%のナノシート分散液を磁場で配向させた状態でハイドロゲル化によって固定し、測定に用いた。
装置:JNM-ECA-500(商品名、JEOL社製)
測定条件:0℃〜90℃、ナノシートによる重水の四極子相互作用の測定
試料:酸化チタンナノシート重量が0.1~3.0重量%のナノシート分散液の測定に用いた。
装置:ACANCE-500(商品名、Bruker社製)
測定条件:0℃〜50℃、タンパク質の1H−15NのHSQC解析
試料:酸化チタンナノシート重量が1.5重量%のナノシートおよび15NでラベルされたGB1タンパク(4 mg/mL)分散液の測定に用いた。
装置:ACANCE-600(商品名、Bruker社製)
測定条件:65℃〜80℃、タンパク質の1H−15NのHSQC解析
試料:酸化チタンナノシート重量が1.5重量%のナノシートおよび15NでラベルされたGB1タンパク(4 mg/mL)分散液の測定に用いた。
参考例、実施例及び比較例で用いたナノシートを表1にまとめた。各例のナノシートの製造方法を以下に示す。
既報(Tanaka T, Ebina Y, Takada K, Kurashima K, Sasaki T.(2003) Chem Mater;15:3564-3568)に従い酸化チタンナノシート(「TiNS」と表記する、組成Ti0.87O2)を製造した。以下特段の記載がない限り、TiNSはテトラメチルアンモニウム(TMA)溶液(1mM)に分散させたものを各種測定に用いた。
実施例1で製造したTiNSに対して超音波発生機(商品名XL−2000 MicrosonTM、Qsonica社製)で超音波処理を3分間行い、酸化チタンナノシート(「smallTiNS」と表記する)を製造した。以下特段の記載がない限り、smallTiNSはテトラメチルアンモニウム(TMA)溶液(1mM)に分散させたものを各種測定に用いた。
既報(Schaak RE, Mallouk T.(2002) Chem Mater 14:1455-1471)に従い酸化ニオブナノシート(「NbNS」と表記する、組成Ca2Nb3O10)を製造した。以下特段の記載がない限り、NbNSはテトラブチルアンモニウム(TBA)溶液(1mM)に分散させたものを各種測定に用いた。
2.0重量%のカゼインを含有するトリス塩酸緩衝液(1mM、pH8.0)を500μLと、0.4重量%の参考例1のTiNSを含有する水溶液500μLとの混合液を作製した。該混合液を60分間静置した後、該混合液に10秒間超音波処理を行った。
未吸着のカゼインを除去するため、遠心分離機(商品名CT15RE、HITACHI社製)を用いて遠心操作(15,000rpm)を4℃で15分行った。
生じた沈殿物を1mLのトリス塩酸緩衝液(1mM、pH7.7)に再分散させた。この遠心操作と再分散による洗浄操作を3回行い、最終沈殿物を500μLのトリス塩酸緩衝液(1mM、pH7.7)に再分散させ、カゼインコートチタンナノシート(TiNSCas)分散液を得た。なお、分散液におけるTiNSCasの濃度は、最終沈殿物を分散させる緩衝液量を調節して、各種測定に最適な濃度となるように調整した。また、以下特段の記載がない限り、TiNSCasは再分散時の緩衝液に分散させたものを各種測定に用いた。
2.0重量%のカゼインの代わりに2.0重量%のアルブミンを用いた以外は実施例1と同様にして、アルブミンコートチタンナノシート(TiNSAlb)分散液を得た。
2.0重量%のリゾチームを含有するテトラメチルアンモニウム(TMA)溶液(2mM)500μLと、0.1重量%の参考例1のTiNSを含有する水溶液500μLとの混合液を作製した。該混合液を60分間静置した後、実施例1と同様の遠心操作によって未吸着のリゾチームを取り除いた。沈殿物を500μLのトリス塩酸緩衝液(1mM、pH2.3)に分散させ、リゾチームコートチタンナノシート(TiNSLys)分散液を得た。
2.0重量%のカゼインの代わりに2.0重量%のスキムミルクを用いた以外は実施例1と同様にして、スキムミルクコートチタンナノシート(TiNSSkim)分散液を得た。
0.85重量%のタンニン酸を含有する水溶液1mLと、0.5重量%の参考例1のTiNSを含有する水溶液4mLとの混合液を作製した。該混合液を5分間静置した後、実施例1と同様の洗浄操作を再分散水溶液として純水を用いて10回行うことで、タンニン酸コートチタンナノシート(TiNSTan)分散液を得た。
0.1重量%のポリジアリルジメチルアミンクロライド(PDDA)を含有する水溶液1mLと、0.02重量%の参考例1のTiNSを含有する水溶液1mLとの混合液を作製した。該混合液を60分間静置した後、実施例3と同様の遠心操作によって未吸着のPDDAを取り除くことで、沈殿物を500μLのトリス塩酸緩衝液(1mM、pH2.3)に分散させ、PDDAコートチタンナノシート(TiNSPDDA)分散液を得た。
0.2重量%のコンドロイチン硫酸(Cho)を含有する水溶液1mLと、0.01重量%の参考例1のTiNSを含有する水溶液1mLとの混合液を作製した。該混合液を60分間静置した後、実施例1と同様の洗浄操作を再分散水溶液として純水を用いて3回行うことで、コンドロイチン硫酸コートチタンナノシート(TiNSCho)分散液を得た。
参考例1のTiNSの代わりに参考例3のNbNSを用いた以外は実施例1と同様にして、カゼインコートニオブナノシート(NbNSCas)分散液を得た。
参考例1のTiNSの代わりにGONS(商品名Rap eGO(TQ11)、NiSiNa material社製)を用いた以外は実施例1と同様にして、カゼインコート酸化グラフェンナノシート(GONSCas)分散液を得た。
0.2重量%のPEG修飾カテコールを含有する水溶液1mLと、0.8重量%の参考例1のTiNSを含有する水溶液1mLとの混合液を作製した。該混合液を60分間静置した後、実施例1と同様の洗浄操作を10回行うことで、PEG修飾カテコールコートチタンナノシート(TiNSCate)分散液を得た。
(1)分散液の観察
各例で得られたナノシート分散液(ナノシート濃度0.4重量%)の写真を図4Aに示す。いずれの実施例のナノシートも液中で分散していることが目視で確認できた。また、TiNSの分散液においてはTiNSのドメイン構造に由来する特徴的なもや状のテクスチャーがコート後の分散液においても確認できた。
コーティング剤なしのTiNSでは、ナノシートの沈殿が確認された。一方、コーティング剤でコートされたナノシートでは、塩存在下でもナノシートの分散性を保持できることが確認されたが、比較例1のTiNSCateは塩存在下で沈殿が生じたことから、本発明においてナノシートとコーティング剤との多点的な相互作用が重要であることが確認された。
本発明のコーティング剤でコートされたナノシートは、塩存在下においても安定に分散していることから、タンパク質の溶液NMR測定用配向剤としての利用が期待された。
コーティング剤なしのナノシートのDLSによる大きさ分布を図5Aに示す。DLSから算出される大きさは、TiNSは825nm、smallTiNSは295nm、NbNSは325nmであった。
次に、コーティング剤によるコート前後における大きさ分布を図5Bに示す。TiNS及びNbNS共にコーティング剤でコートされたナノシートの大きさがわずかに増大していることから、コーティング剤によってナノシートがコートされていることが示唆された。また、コーティング剤なしのナノシートと同様に、コーティング剤でコートされたナノシートも、溶液中で分散していることが確認できた。
コーティング剤なしのナノシートのTEM画像を図6Aに、コーティング剤でコートされたナノシートのTEM画像を図6Bに示す。TEM画像中の点線はナノシートの輪郭を強調するために記したものである。
いずれのナノシートも凝集することなく分散しており、大きさもDLSの測定値を支持するものであることが確認できた。
TiNSのAFM画像を図7に示す。AFM画像の点線における断面プロファイルから、ナノシートの平均厚さを算出した。コーティング剤によるコート後のナノシートでは、コーティング剤なしのナノシートと比較して厚さが1.0〜5.0nm程増加しており、コーティング剤がTiNS表面に吸着していることが強く示唆された。
以下に示す実施例のナノシート分散液のゼータ電位を測定した。結果を表2に示す。
同様に、ゼータ電位測定結果から、TiNSPDDAの表面にはカチオン性高分子であるポリジアリルジメチルアミンクロライドが、TiNSChoの表面にはアニオン性のコンドロイチン硫酸が、それぞれナノシート表面に吸着していることが示唆された。
(6)コーティング剤吸着確認
コーティング剤としてタンパク質を用いたナノシートにおいて、コートするタンパク質の量を変化させ(0〜2.0mg/mL)ナノシートを製造し、コート後のタンパク質の吸着量をCBB染色で定量した。その結果を図8に示す。
いずれのタンパク質を用いた場合もナノシート上への吸着量が飽和しており、シートの全面がタンパク質でコーティングされていることが支持された。
なお、上述した実施例のナノシートの製造方法において、本実験で確認された飽和吸着量以上のコーティング剤を用いてナノシートの製造を行った。
まず、TiNSCas(0.7重量%)をトリス塩酸緩衝液(1mM、pH7.7)に分散させ、該分散液を室温下静置した。ナノシートの製造から0.5、1、2、5日間静置した後の各分散液に対して、遠心分離機(商品名CT15RE、HITACHI社製)を用いて遠心操作(15,000rpm)を4℃で15分行った。上澄み液に含まれるタンパク質をCBB染色によって定量した。
ナノシート製造直後の上澄み液に含まれるタンパク質量から算出したナノシート上から乖離したタンパク質量を0%として、0.5、1、2、5日間静置した後のナノシート上から乖離したタンパク質の割合を算出し、100%からその割合を引くことでナノシート上に吸着したタンパク質の量を算出した。
同様に、TiNSLys(0.9重量%)のトリス塩酸緩衝液(1mM、pH2.3)についても、ナノシート上に吸着したタンパク質の割合を算出した。結果を図10に示す。
Cas及びLysは、いずれも5日後にもほとんどTiNS上から脱着しないことが確認された。
モデル化合物としては、アニオン性タンパク質として蛍光ラベルしたアルブミン(FLAlb)を、カチオン性タンパク質として蛍光ラベルしたリボヌクレアーゼA(FlRN−A)を用いた。
FLAlb(0.5mg/mL)をトリス塩酸緩衝液(1mM、pH7.7)中のTiNS(ナノシート濃度0.4重量%)と混合して、24時間後のナノシート分散液のCLSM画像を図11(A)に示す。また、ナノシートとしてトリス塩酸緩衝液(1mM、pH7.7)中のTiNSCasを用いた場合の結果を図11(B)、トリス塩酸緩衝液(1mM、pH2.3)中のTiNSLysを用いた場合の結果を図11(C)に示す。
同様に、FlRN−A(0.5mg/mL)を用いて、TiNS、TiNSCas又はTiNSLysと混合した場合の結果をそれぞれ図11(D)〜(F)に示す。
図11(B)及び(F)において蛍光強度が弱いことから、アニオン性のFLAlbは、マイナス電荷を有するTiNSCasへの吸着が大きく抑制されており、カチオン性のFlRN−Aはプラス電荷を有するTiNSLysへの吸着が大きく抑制されていることが確認できた。
NMR測定対象分子がナノシートと強く相互作用することは、その配向性の妨げになるため、好ましくない。このため、NMR測定対象分子とナノシートの選定にあたって、本結果の図11(B)及び(F)に示すような弱い蛍光強度が確認されるようなものの組み合わせとすることが好ましい。
(7)X線小角散乱(SAX)
コーティング剤でコートされたナノシートの磁場配向性を調べるため、TiNSCas、TiNSAlb及びTiNSLys(それぞれ0.4重量%)をジメチルアクリルアミドゲルに包埋した後にSAX解析を行った。
本発明のナノシートの磁場配向性を評価するにあたり、まず低分子である水を用いて、水の四極子分裂の分裂ピーク幅により評価した。このピーク幅が大きいほど、水分子が配向しており、配向性が高いことを表す。
各ナノシートの表3に示す溶液におけるD2O四極子相互作用の分裂ピークを図13に示す。
また、ナノシート濃度の上昇に伴いD2O四極子相互作用の分裂ピーク幅が大きいことから、濃度依存的に配向性が高くなることがわかった。さらに、測定温度によらず0℃〜90℃まで広い温度範囲でD2O四極子相互作用の分裂ピークがみられたことから、温度に対して安定的に配向性を有することがわかった。
続いて、TiNS又はNbNSを用いて、13Cラベルしたグルコースの13C−NMR測定を行った。
NMR測定試料は、TiNS(1.5重量%)のTMA(1mM)溶液又はNbNS(4.0重量%)のTBA(1mM)溶液に、3重量%のグルコースを添加して得た。結果を図15に示す。
図15(A)はナノシートを添加せずに13Cラベルしたグルコースの測定結果、(B)はTiNSを添加した測定結果、(C)はNbNSを添加した結果測定である。13Cのカップリングシフトから、TiNS及びNbNSのいずれを添加した場合も、ナノシートを添加しなかった場合に比べてシフトしており、βグルコース分子が配向していることが確認できた。
TiNSCas又はNbNSCasを用いて、15NラベルしたプロテインG β1ドメイン(15N−GB1)のNMR測定を行った。
NMR測定試料は、TiNSCas(2.5重量%)又はNbNSCas(4.1重量%)のトリス塩酸緩衝液(10mM、pH6.8)(D2O=10%)に、15N−GB1(4.0mg/mL)を添加して得た。TiNSCasは、5〜80℃の種々の測定温度で測定を行った。NbNSCasは35℃で測定を行った。
ナノシートの存在下でIPAP−HSQCスペクトル及びRDCが観察されることが確認された。
本発明のナノシートは、従来の配向剤に比べて、広い温度範囲でタンパク質のNMR測定用配向剤として機能することが明らかとなった。
同様に、TiNS(1.5重量%)と15N−GB1(4mg/ml)をトリス塩酸緩衝液(10mM、pH6.8)中で2時間混合し、遠心操作を行い、上澄み液を得た。
各上澄み液をSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)に供した。SDS−PAGEの結果を図19に示す。レーン1がタンパク質マーカーであり、レーン2が15N−GB1であり、レーン3がTiNSCasの上澄み液であり、レーン4がTiNSの上澄み液である。
本発明のコーティング剤ナノシートは、従来の配向剤では回収不可能であったNMR測定対象のタンパク質を簡便な遠心操作により回収でき、配向剤であるナノシート自体も再利用可能であることがわかった。
Claims (8)
- ナノシートが、ヒドロキシ基、アミノ基、アミド基、カルボニル基、カルボキシル基、スルホ基、リン酸基、イミダゾール基及びグアニジン基から選ばれる少なくとも1種の官能基を1分子中に35個以上有し、かつ分子量1,500以上の化合物で被覆されているNMR測定用配向剤。
- 前記ナノシートの厚みが0.5〜3nm、前記ナノシートの大きさが100nm〜100μmである請求項1記載のNMR測定用配向剤。
- 前記ナノシートが酸化チタン、酸化ニオブ及び酸化グラフェンから選ばれる少なくとも1種のナノシートである請求項1又は2に記載のNMR測定用配向剤。
- 前記ヒドロキシ基、アミノ基、アミド基、カルボニル基、カルボキシル基、スルホ基、リン酸基、イミダゾール基及びグアニジン基から選ばれる少なくとも1種の官能基を1分子中に35個以上有し、かつ分子量1,500以上の化合物が、タンパク質、タンニン酸、ポリジアリルジメチルアミンクロライド及びコンドロイチン硫酸から選ばれる少なくとも1種である請求項1〜3のいずれか1に記載のNMR測定用配向剤。
- 前記タンパク質が、カゼイン、リゾチーム及びアルブミンから選ばれる少なくとも1種である請求項4に記載のNMR測定用配向剤。
- タンパク質、タンニン酸、ポリジアリルジメチルアミンクロライド及びコンドロイチン硫酸から選ばれる少なくとも1種で被覆されている酸化チタンナノシート。
- カゼインで被覆されている酸化ニオブナノシート。
- カゼインで被覆されている酸化グラフェンナノシート。
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