JP6768253B2 - 対象者の男性型脱毛症に関する情報を取得する方法 - Google Patents

Description

本発明は、対象者が男性型脱毛症であるかどうかの判定やその発症の予測、治療薬の選択や有効性の判定などを行うために有益な情報を取得する方法に関する。

男性型脱毛症（ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｌｏｐｅｃｉａ：以下「ＡＧＡ」と略称する）は、頭髪が薄くなる進行性の疾患で、現代社会において悩みを抱えている男性が多いことは周知の通りであり、近年では女性の患者も増加している。ＡＧＡには様々な要因が関係しているが、その１つとして、男性ホルモンであるジヒドロテストステロンが毛根に作用して髪の成長を抑制することが挙げられている。ジヒドロテストステロンは、テストステロンが還元酵素である５αリダクターゼによって還元されて生成するが、５αリダクターゼにはＩ型とＩＩ型の２種類が存在することが知られており、ＡＧＡにはＩＩ型の５αリダクターゼが深く関与しているとされている。このため、ＩＩ型の５αリダクターゼを選択的に阻害することで、テストステロンがジヒドロテストステロンに還元されることを阻止するフィナステリドが、ＡＧＡの治療薬として使用されている（例えば特許文献１）。しかしながら、ＡＧＡの原因は未だ不明な部分も多いことから、ＡＧＡであるかどうかの判定やその発症の予測を行うことは困難であり、また、ＡＧＡの治療法についても、フィナステリドが有効でない患者が存在するといったことから、十分な提供がなされていない現状にある。近頃、Ｉ型とＩＩ型の両方の５αリダクターゼを非選択的に阻害する、前立腺肥大症治療薬として知られているデュタステリドが、ＡＧＡにも有効であることが指摘されているが、個々の患者に対してフィナステリドとデュタステリドを使い分けるための指標となる情報や有効性の判定を行うための情報は、これまでのところ知られていない。

特開２００８−２２０２８７公報

そこで本発明は、対象者がＡＧＡであるかどうかの判定やその発症の予測、治療薬の選択や有効性の判定などを行うために有益な情報を取得する方法を提供することを目的とする。

上記の点に鑑みてなされた本発明の対象者のＡＧＡの治療薬に関する情報を取得する方法は、請求項１記載の通り、対象者の頭部における、
（１）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量と、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率、および、
（２）ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量と、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率を算出し、
（Ａ）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値と同程度であるか低いが、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値よりも高い場合、治療薬としてフィナステリドが有効と判定
（Ｂ）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値よりも高いが、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値と同程度であるか低い場合、治療薬としてデュタステリドが有効と判定
する情報として取得することを特徴とする。

本発明によれば、対象者がＡＧＡであるかどうかの判定やその発症の予測、治療薬の選択や有効性の判定などを行うために有益な情報を取得することができる。

実施例による、ＡＧＡ患者の集団と健常人ボランティアの集団の、それぞれの前頭部と頭頂部における、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（（５Ａ１＋５Ａ２）／ＡＲ）の平均値を示すグラフである（遺伝子発現量はＲｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲによる増幅物の電気泳動バンドのシグナル強度に基づく）。 同、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（５Ａ１／ＡＲ）の平均値と、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（５Ａ２／ＡＲ）の平均値を示すグラフである（遺伝子発現量はＲｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲによる増幅物の電気泳動バンドのシグナル強度に基づく）。 同、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量（５Ａ１）の平均値、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量（５Ａ２）の平均値、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量（ＡＲ）の平均値を示すグラフである（遺伝子発現量はコピー数に基づく）。

本発明の対象者のＡＧＡに関する情報を取得する方法は、対象者の頭部における、
（１）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量
（２）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量
（３）ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量
の少なくとも１つと、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率を、情報として取得することを特徴とするものである。即ち、本発明においては、対象者の頭部において、毛根に作用して髪の成長を抑制するジヒドロテストステロンの生成環境がどのような状態にあるか、生成したジヒドロテストステロンが作用を発揮するための細胞の受け皿がどれだけ存在するかについて、前者を、（１）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量、（２）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量、（３）ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の少なくとも１つを指標とし、後者をアンドロゲン受容体の遺伝子発現量を指標として、両者の比率を対象者のＡＧＡに関する定量的な情報として利用する。

Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量と、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率は、例えばＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率として求めることができる。Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とアンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率は、例えばＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率として求めることができる。ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とアンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率は、例えばＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率として求めることができる。

頭部における、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量は、それぞれ頭部の毛包試料を用いてＲｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲなどによる方法によって測定することができる。本発明において、頭部には、前頭部、頭頂部、後頭部などが含まれる。毛包試料は、内毛根鞘、外毛根鞘、毛乳頭、バルジ領域などの毛周期に関与する組織を形成する細胞の一部または全部を含むものであればどのようなものであってもよく、例えば抜去された頭髪の根元に付着したものを用いることが簡便である。この場合、根元に毛包が付着した頭髪は、抜去してから１か月以内のものであることが望ましい。

例えば、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量／アンドロゲン受容体の遺伝子発現量）、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量／アンドロゲン受容体の遺伝子発現量）、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量／アンドロゲン受容体の遺伝子発現量）について、ＡＧＡ患者の集団の平均値と健常人の集団の平均値を比較した場合、いずれも、ＡＧＡ患者の集団の平均値の方が、健常人の集団の平均値よりも高い。従って、ＡＧＡ患者の集団の平均値と、健常人の集団の平均値を、予め基準値として設定しておき、これらの基準値と対象者の比率を対比し、対象者の比率がいずれの基準値に該当するか、あるいは近似するかを調べることで、対象者がＡＧＡであるかどうかの判定やその発症の予測を行うことができる。また、ＡＧＡ患者の集団の平均値と、健常人の集団の平均値から、両者の境界値を設定し、対象者の比率が境界値よりも高い時はＡＧＡであるかその発症リスクが多いと判定し、境界値よりも低い時はＡＧＡでないかその発症リスクが低いと判定するといったこともできる。

また、ＡＧＡ患者の中には、例えば、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値と同程度であるか低いが、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値よりも高いといった患者や、逆に、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値よりも高いが、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値と同程度であるか低いといった患者が存在する。こうした場合、前者の患者に対しては、ＩＩ型の５αリダクターゼを阻害するフィナステリドが有効であると見込まれるが、後者の患者に対しては、フィナステリドは有効でないと見込まれるので、Ｉ型の５αリダクターゼを阻害するデュタステリドを治療薬として選択するといったことが可能となる。

また、ＡＧＡ患者の、例えば、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率について、時間的推移をモニタリングし、比率の変動を調べることで、治療薬の有効性を判定するといったことが可能となる（例えば比率が低下して健常人の集団の平均値に近づいている場合には治療が奏功していると判定できる）。

なお、言うまでもないことであるが、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量と、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とアンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とアンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率は、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量を分子に、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量を分母にして求めてもよい。この場合、比率の高低の意味するところは、上記の説明と逆になる。

以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。

実施例１：
（実験方法）
未治療のＡＧＡ患者５０名（ＡＧＡであることの診断は頭髪外来の専門医によるハミルトン・ノーウッドの分類による症状の進行度の判定に基づく。以下同じ）の、前頭部と頭頂部のそれぞれの毛髪（抜去してから１か月以内の根元に毛包が付着したもの５〜１０本／人）を、実体顕微鏡下で２〜３ｍｍに細断し、アルカリ融解法を用いて全遺伝子ｃＤＮＡを回収した後、Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲを行い、Ｉ型の５αリダクターゼ、ＩＩ型の５αリダクターゼ、アンドロゲン受容体のそれぞれの遺伝子ｃＤＮＡを増幅させた。なお、Ｉ型の５αリダクターゼ遺伝子のｃＤＮＡを増幅させるために、全長１２２９ｂｐのヒト遺伝子の第１ｅｘｏｎ内で設計した、Ｆｏｒｗａｒｄプライマー：ａｃｃｃａｔｔｔｃｔｇａｔｇｃｇａｇｇａｇｇａａ（配列番号１）とＲｅｖｅｒｓｅプライマー：ｔｃａａｃａｔｇｃｃｃｇｔｔａａｃｃａｃａａｇｃ（配列番号２）を用いた（増幅物：１８６ｂｐ、参考文献：Ｄ．Ｗ．Ｒｕｓｓｅｌｌら、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｖｏｌ．６３，ｐｐ．２５−６１，１９９４）。ＩＩ型の５αリダクターゼ遺伝子のｃＤＮＡを増幅させるために、全長１５７３ｂｐのヒト遺伝子の第２ｅｘｏｎと第３ｅｘｏｎをまたぐ形で設計した、Ｆｏｒｗａｒｄプライマー：ｃｇｔｃｔｇｇｔｇｃｔｃｃａｔａａａｇｇ（配列番号３）とＲｅｖｅｒｓｅプライマー：ｇｔａｃａａｇａｃｃａｇｔｇｃｃｃｃａａｇ（配列番号４）を用いた（増幅物：１５４ｂｐ、参考文献：Ｌａｂｒｉｅ Ｆら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １９９２；１３１（３）：１５７１−１５７３）。アンドロゲン受容体遺伝子のｃＤＮＡを増幅させるために、全長８１１２ｂｐのヒト遺伝子のＮ末ドメイン内で設計した、Ｆｏｒｗａｒｄプライマー：ｃａｔｇｔｔｔｔｇｃｃｃａｔｔｇａｃｔａｔｔａｃ（配列番号５）とＲｅｖｅｒｓｅプライマー：ｃｔｃｔｔｔｔｇａａｇａａｇａｃｃｔｔｇｃａｇ（配列番号６）を用いた（増幅物：１２４ｂｐ、参考文献：Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ ＡＯら、Ｊ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８９；３４（１−６）：３０７−３１０）。Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲは、Ｒｏｔｏｒ−Ｇｅｎｅ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用い、Ｒｏｔｏｒ−ＧｅｎｅＱマニュアルに従って行った。それぞれの増幅物を１％アガロースにて電気泳動し、Ｃｈｅｍｉ−Ｄｏｃ ＸＲＳ＋（ＢＩＯ−ＲＡＤ）を用いてＧｅｌ−Ｒｅｄ蛍光強度を数値化することでバンドのシグナル強度を測定し、この測定値に基づいて、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量とＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量の合計量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（（５Ａ１＋５Ａ２）／ＡＲ）、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（５Ａ１／ＡＲ）、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率（５Ａ２／ＡＲ）を算出した。また、健常人ボランティア（６名）についても同様の実験を行った。

（実験結果）
未治療のＡＧＡ患者５０名と健常人ボランティア６名の、それぞれの前頭部と頭頂部における、（５Ａ１＋５Ａ２）／ＡＲ、５Ａ１／ＡＲ、５Ａ２／ＡＲの平均値を図１と図２に示す。図１と図２から明らかなように、前頭部と頭頂部のいずれにおいても、（５Ａ１＋５Ａ２）／ＡＲ、５Ａ１／ＡＲ、５Ａ２／ＡＲは、ＡＧＡ患者の平均値の方が健常人ボランティアの平均値よりも有意に高かった。ＡＧＡ患者５０名それぞれの前頭部と頭頂部における５Ａ１／ＡＲと５Ａ２／ＡＲに着目すると、前頭部および／または頭頂部における５Ａ１／ＡＲは健常人ボランティアの平均値と同程度であるか低いが、５Ａ２／ＡＲは健常人ボランティアの平均値よりも高い患者は２名存在し、逆に、前頭部および／または頭頂部における５Ａ１／ＡＲは健常人ボランティアの平均値よりも明らかに高いが、５Ａ２／ＡＲは健常人ボランティアの平均値よりと同程度であるか低い患者は２１名存在した。以上の結果から、（５Ａ１＋５Ａ２）／ＡＲ、５Ａ１／ＡＲ、５Ａ２／ＡＲは、ＡＧＡ患者と健常人の区別を可能にする定量的な指標であり、ＡＧＡであるかどうかの判定やその発症の予測、治療薬の選択や有効性の判定などを行うために有益な情報であることがわかった。

なお、未治療のＡＧＡ患者３８名と健常人ボランティア６名の、それぞれの前頭部と頭頂部における、Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量（５Ａ１）の平均値、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量（５Ａ２）の平均値、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量（ＡＲ）の平均値を、コピー数に基づいて求めたところ（Ｒｏｔｏｒ−ＧｅｎｅＱマニュアルに従って目的遺伝子の発現量を内部標準遺伝子（Ｂ−Ａｃｔｉｎ）の発現量による補正を行って算出）、５Ａ１とＡＲは、ＡＧＡ患者の平均値の方が健常人ボランティアの平均値よりも有意に高かったが、５Ａ２は、ＡＧＡ患者の平均値と健常人ボランティアの平均値で違いがほとんどなかった（図３）。以上の結果から、５Ａ１とＡＲの遺伝子発現量そのものは、ＡＧＡ患者と健常人の区別を可能にする定量的な指標になり得るが（よってこれらは本発明における補助的情報として利用可能である）、５Ａ２の遺伝子発現量そのものはなり得ないことがわかった。

本発明は、対象者がＡＧＡであるかどうかの判定やその発症の予測、治療薬の選択や有効性の判定などを行うために有益な情報を取得する方法を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。

Claims (1)

1. 対象者の男性型脱毛症の治療薬に関する情報を取得する方法であって、対象者の頭部における、
   （１）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量と、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率、および、
   （２）ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量と、アンドロゲン受容体の遺伝子発現量の比率を算出し、
   （Ａ）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値と同程度であるか低いが、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値よりも高い場合、治療薬としてフィナステリドが有効と判定
   （Ｂ）Ｉ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値よりも高いが、ＩＩ型の５αリダクターゼの遺伝子発現量のアンドロゲン受容体の遺伝子発現量に対する比率は、健常人の集団の平均値と同程度であるか低い場合、治療薬としてデュタステリドが有効と判定
   する情報として取得することを特徴とする方法。