JP6746794B2

JP6746794B2 - 重水素化３−（４，５−置換アミノピリミジン）フェニル誘導体及びその使用

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Publication number: JP6746794B2
Application number: JP2019536634A
Authority: JP
Inventors: 永強朱; 兆剛劉; 超馮; 詩合胡; 浩陳; 恩赫白; 佳王; 晶▲ミャオ▼ 石
Original assignee: Nanjing Chuangte Pharmaceutical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Chuangte Pharmaceutical Technology Co Ltd
Priority date: 2016-09-19
Filing date: 2017-09-18
Publication date: 2020-08-26
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Description

本発明は、抗腫瘍薬技術分野に属し、具体的には、重水素化３−（４，５−置換アミノピリミジン）フェニル誘導体及び抗腫瘍薬の調製におけるその使用に関する。

従来の癌治療において、化学療法は主な治療手段である。化学療法薬は、細胞の分裂を非特異的に遮断して細胞を死滅させるものであり、腫瘍細胞を死滅させると同時に、人体の正常細胞の成長も大きく破壊し、たくさんの不良反応をもたらす。多くの人は、化学療法の重大な副作用を懸念し、悲観的に考えてしまい治療を諦め、それに化学療法薬の薬物耐性が加わり、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の化学療法の効果は楽観的ではない。しかし、ただし化学療法の周期を延長することでは、副作用が増えるだけで、治療効果は上がらない。また、非小細胞肺癌の癌細胞は、化学療法、一般化学療法に敏感ではなく、総緩和率も２５％程度にとどまり、これらの原因により、非小細胞肺癌患者の５年の生存率は２０％未満である。

５０％〜８０％のＮＳＣＬＣ患者にとって、彼らの上皮成長因子受容体（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＧＦＲ）は、いずれも過剰に発現するため、発癌を引き起こす。標的ＥＧＦＲ薬物は、主に、受容体の細胞内領域に働く小分子チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）と、受容体の外領域に働くモノクローナル抗体（ＭＡｂ）と２種類がある。すでにイレッサ、エルロチニブ、ラパチニブなどのような第１世代のＥＧＦＲ阻害剤を臨床に応用することで、ＮＳＣＬＣ肺癌の治療において大きな成功が収められ、非小細胞肺癌患者の５年の生存率が向上した。また、これらは化学療法に比べ、骨髄抑制、吐気及び神経毒性などの副作用が生じないという利点がある。しかし、これらは単独治療時に薬効が低く、且つ非常に目立った発疹や下痢などの副作用があり、さらに一年後、患者は薬剤に対し薬物耐性が生じる。研究によればＥＧＦＲ遺伝子Ｔ７９０Ｍ変異は、この類の薬物の耐性の要因であり、臨床事例データによると、約５０％の患者に薬物耐性が生じる原因はＴ７９０Ｍ変異にある。さらなる研究によれば、ＥＧＦＲ遺伝子Ｔ７９０Ｍ変異により、コーディングされたスレオニンがメチオニンに変換されるため、空間障害が生じ阻害剤とＡＴＰとの結合領域での結合を阻害し、その結果、阻害剤の活性を喪失させる。現在、また他の研究によれば、Ｔ７９０Ｍ変異が阻害剤とＥＧＦＲとの親和性を直接影響することではなく、変異によりＥＧＦＲとＡＴＰとの親和性が大幅に高まるため、それによって阻害剤とＥＧＦＲとの親和性が大幅に低下する（阻害剤とＡＴＰとは競合的な結合である）。アファチニブ、Ｄａｃｏｍｉｔｉｎｉｂなどのような第二世代の阻害剤は、ＥＧＦＲへの認識性が高いため、腫瘍細胞と正常細胞とを判別することができ、したがって副作用が軽減するという特徴が第一世代に比べての利点である。しかし、これらの分子は、ＥＧＦＲのＴ７９０Ｍ変異体への選択性が低く、薬物臨床耐量が低く、その最大耐量（ＭＴＤ）において、薬物が体内でその有効濃度に到達できないため、薬物耐性を持つ多くの患者には効き目がない。

つまり、現在のＥＧＦＲ−ＴＫＩは、薬物耐性による臨床ニーズを解決できず、また、従来の薬物は、キナゾリン又はキノリンアミン類を基本母核としたＥＧＦＲ可逆的又は不可逆的阻害剤であり、野生型細胞への選択性が低いことによる副作用も避けられない。したがって、臨床的には新型、特に新規骨格の化合物により薬物耐性、低選択性などの問題を解消する必要がある。

本発明の目的は、重水素化３−（４，５−置換アミノピリミジン）フェニル誘導体を提供することにある。

本発明の目的は以下の手段により達成される。

本発明の重水素化３−（４，５−置換アミノピリミジン）フェニル誘導体は、式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩であり、

ここで、Ｒ_１、Ｒ_２は−ＣＨ_３又は−ＣＤ_３からなり、Ｒ_３及びＲ_４は−ＣＨ_３、ＣＤ_３又はＨからなり、且つＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４のうち、少なくとも１つは−ＣＤ_３である。

さらに、前記の式（Ｉ）の構造を有する化合物において、Ｒ_１は−ＣＨ_３であることが好ましい。

本発明の化合物又はその薬学的に許容される塩において、一部の具体的な化合物は以下のいずれかである。

一般式（Ｉ）を有する化合物の調製経路は以下に示す通りである。

上記調製経路の具体的なステップは以下の通りである。

ステップ１、化合物ＩＩと２，４−ジクロロピリミジンとを溶媒に溶かし、ルイス酸の存在下で、求核置換反応によりＩＩＩを取得する。ここで溶媒はエチレングリコールジメチルエーテル（ＤＭＥ）、トルエン、クロロベンゼン又はそれらの混合物であり、ルイス酸は三塩化アルミニウム又は三フッ化ホウ素である。

ステップ２、中間体ＩＩＩと４−フルオロ−２−メトキシ−５−ニトロアニリンとを溶媒に溶かし、ｐ−トルエンスルホン酸の作用の下でＩＶを取得する。ここで、溶媒は１，４−ジオキサン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又はそれらの混合物である。

ステップ３、中間体ＩＶと有機アミンとを溶媒に溶かし、ＤＩＰＥＡの作用の下で反応し中間体Ｖが得られる。ここで、溶媒はアジピン酸ジメチル（ＤＭＡ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又はそれらの混合物である。

ステップ４、中間体Ｖを溶媒に溶かし、Ｐｄ／Ｃを還元剤として中間体Ｖを中間体ＶＩに還元する。ここで、溶媒はメタノール又はエタノールである。

ステップ５、テトラヒドロフラン／水を溶媒とし、中間体ＶＩとクロロプロピオニルクロリドとを反応させて中間化合物を取得し、分離せず、そのまま水酸化ナトリウムを加え反応させて式（Ｉ）の構造を有する化合物を取得する。

本発明における化合物が形成可能な塩も本発明の範囲に属する。なお、本発明における化合物は、他の説明がなければ、その塩類を含むものとして理解される。例えば、一般式（Ｉ）の化合物を一定量、例えば当量の酸又はアルカリと反応させ、媒体から塩析したもの、若しくは水溶液中で凍結乾燥して取得されたものを含む。本発明における化合物に含有される塩基性セグメントは、アミンやピリジンやイミダゾール環を含み、ただしそれに限定せず、有機や無機酸と塩を形成する可能性がある。形成可能な代表的な塩としては、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンファー塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグリコール酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート塩、グリセリンリン酸塩、エナント酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、水素臭素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホナート塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩を含む。

本発明における化合物は、連続調製、分離精製により取得された該化合物の重量含有率が９０％以上、例えば９５％以上、９９％以上（「非常に純粋な」化合物）であり、本文において記述する。ここで、このような「非常に純粋」な本発明の化合物も本発明の一部とされる。

本発明は、腫瘍を予防するための薬物の調製における、前記一般式（Ｉ）を有する化合物又はその薬学的に許容される塩の応用をさらに開示する。

前記腫瘍は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細胞癌、胃腸間質腫、白血病、組織細胞性リンパ癌、鼻咽頭癌を含むが、それに限定しない。

本発明の一態様において、ＥＧＦＲにより誘導される、又は活性化変異体若しくは耐性変異体の形態のＥＧＦＲにより誘導される疾患、障害、乱れ又は病態を治療又は予防するために用いられる式（Ｉ）の化合物を提供する。

ＥＧＦＲにより誘導される、又は活性化変異体若しくは耐性変異体の形態のＥＧＦＲにより誘導される疾患、障害、乱れ又は病態は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細胞癌、胃腸間質腫、白血病、組織細胞性リンパ癌又は鼻咽頭癌を含むが、それに限定しない。

前記活性化変異体又は耐性変異体の形態のＥＧＦＲは、Ｌ８５８Ｒ活性化変異体、Ｅｘｏｎ１９欠失活性化変異体及びＴ７９０Ｍ耐性変異体を含むが、それに限定しない。

本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、既存の治療又は類似病状を改善する他の薬物と併用してもよい。併用して投薬する際には、既存の薬物の投与形態及び投与量を維持したまま、同時若しくはその後に式（Ｉ）の化合物を服用する。式（Ｉ）の化合物を他の１種類又は数種類の薬物と一緒に服用する場合には、１種類又は数種類の既存の薬物と式（Ｉ）の化合物とが含まれた薬用組成物を用いることが好ましい。薬物の併用は、重なる時間帯に式（Ｉ）の化合物と他の１種類又は数種類の既存の薬物とを服用することも含む。式（Ｉ）の化合物を他の１種類又は数種類の薬物と薬物併用を行う場合、式（Ｉ）の化合物や既存の薬物の投与量はこれらを単独で投与する場合よりも投与量が少ない可能性がある。式（Ｉ）の化合物と薬物併用が可能な薬物又は活性成分は、以下のものを含むが、それに限定しない。

エストロゲン受容体調整剤、アンドロゲン受容体調整剤、網膜受容体調整剤、細胞毒素／細胞阻害剤、抗増殖剤、プロテイントランスフェラーゼ阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、血管生成阻害剤、細胞増殖及び生存信号阻害剤、細胞周期のチェックポイントを干渉する薬物及び細胞アポニン誘導剤、細胞毒系薬物、チロシン蛋白質阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、セリン／スレオニンプロテイン阻害剤、Ｂｃｒ−Ａｂｌ阻害剤、ｃ−Ｋｉｔ阻害剤、Ｍｅｔ阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＭＭＰ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、ＣＤＫ阻害剤、Ｂｃｌ−２ファミリー蛋白質阻害剤、ＭＤＭ２ファミリー蛋白質阻害剤、ＩＡＰファミリー蛋白質阻害剤、ＳＴＡＴファミリー蛋白質阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＡＴＫ阻害剤、インテグリン遮断剤、インターフェロン、インターロイキン１２、ＣＯＸ−２阻害剤、Ｐ５３、Ｐ５３アクチベーター、ＶＥＧＦ抗体及びＥＧＦ抗体など。

１つの実施の形態において、式（Ｉ）の化合物と薬物併用が可能な薬物又は活性成分は、以下のものを含むが、それに限定しない。アルデスロイキン、アレンドロン酸、インターフェロン、アリトレチノイン、アロプリノール、ナトリウムアロプリノール、パロノセトロン塩酸塩、アルトレタミン、アミノグルテチミド、アミホスチン、アムルビシン、アムサクリン、アナストロゾール、ドラセトロン、ａｒａｎｅｓｐ、ａｒｇｌａｂｉｎ、三酸化ヒ素、アロマシン、５−アザシチジン、アザチオプリン、ＢＣＧワクチン又はｔｉｃｅＢＣＧワクチン、ベスタチン、酢酸ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム阻害剤、ベキサロテン、硫酸ブレオマイシン、ブロモウリジン、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブ、ブスルファン、カルシトニン、アレムツズマブ注射剤、カペシタビン、カルボプラチン、カソデックス、ｃｅｆｅｓｏｎｅ、セルモロイキン、ダウノルビシン、クロラムブシル、シスプラチン、クラドリビン、クロドロン酸、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシンリポソーム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾン、吉草酸エストラジオール、デニロイキン・ディフティトックス２、デポ・メドロール、デスロレリン、デクスラゾキサン、ジエチルスチルベストロール、ジフルカン、ドセタキセル、ドキシフルリジン、ドキソルビシン、ドロナビノール、ホルミウム−１６６−キトサン複合体、ｅｌｉｇｒａｎｄ、ラスブリカーゼ、エピルビシン塩酸塩、アプレピタント、エピルビシン、エポエチン−アルフア、エリスロポエチン、エプタプラチン、レバミゾール、エストラジオール阻害剤、１７−β−エストラジオール、エストラムスチンリン酸エステルナトリウム、エチニルエストラジオール、アミホスチン、リン酸ヒドロキシ、エトポホス、エトポシド、ファドロゾール、タモキシフェン製剤、フィルグラスチム、フィナステリド、フロクスウリジン、フルコナゾール、フルダラビン、５−フルオロ−デオキシウリジン一リン酸、５−フルオロウラシル、フルオキシメステロン、フルタミド、フォルメスタン、１−ピリミジン、リボフラノースシチジン−５フランステアリン酸、フォテムスチン、フルベストラント、γ−グロブリン、ゲムシタビン、ゲムツズマブ、メシル酸イマチニブ、カルムスチンライスペーパーカプセル、ゴセレリン、グラニセトロン塩酸塩、トポテカン塩酸塩、ヒドロコルチゾン、エリスロヒドロキシノニルアデニン、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イブリツモマブチウキセタン、イホスファミド、インターロイキン−２、イントロンＡ、イレッサ、イリノテカン、カイトリル、レンチナン硫酸、レトロゾール、ロイコボリン、ロイプロリド、酢酸リュープロリド、レバミソール、レボホリナートカルシウム塩、レボチロキシンナトリウム、レボチロキシンナトリウム製剤、ロムスチン、ロニダミン、ドロナビノール、ナイトロジェンマスタード、メコバラミン、メドロキシプロゲステロンアセタート、酢酸メゲストロール、メルファラン、エステル化エストロゲン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキサート、アミノレブリン酸メチル、ミルテホシン、ミノサイクリン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ミトキサントロン、トリロスタン、クエン酸ドキソルビシンリポソーム、ネダプラチン、ペグフィルグラスチム、オプレルベキン、ｎｅｕｐｏｇｅｎ、ニルタミド、タモキシフェン、ＮＳＣ−６３１５７０、組換えヒトインターロイキン１−群、オクトレオチド、オンダンセトロン塩酸、プレドニゾロン内用液剤、オキサリプラチン、パクリタキセル、リン酸プレドニゾンナトリウム製剤、ペグアスパルガーゼ、ペガシス、ペントスタチン、ピシバニール、塩酸ピロカルピン、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プレドニムスチン、プレドニゾロン（prednisolone steaglate）、プレドニゾン、プレマリン、プロカルバジン、組換えヒトエリスロポエチン、ラルチトレキセド、レビフ、レニウム１８６エチドロネート、リッキシマブ、レドックス−Ａ、ロムルチド、塩酸ピロカルピン錠剤、オクトレオチド、サルグラモスチム、セムスチン、シゾフィラン、ソブゾキサン、メチルプレドニゾロンコハク酸エステルナトリウム、スパルホシン酸、幹細胞治療、ストレプトゾトシン、塩化ストロンチウム、レボチロキシンナトリウム、タモキシフェン、タムスロシン、タソネルミン、ｔａｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ、タキソテール、テセロイキン、テモゾロミド、テニポシド、テストステロンプロピオン酸エステル、チオグアニン、チオテパ、甲状腺刺激ホルモン、チルドロネート、トポテカン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレオスルファン、レチノイン酸、メトトレキサート錠剤、トリメチルメラミン、トリメトレキサート、酢酸トリプトレリン、トリプトレリンパモ酸塩、ＵＦＴ、ウリジン、バルルビシン、ベスナリノン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ｖｉｒｕｌｉｚｉｎ、デクスラゾキサン、ジノスタチンスチマラマー、オンダンセトロン、パクリタキセル蛋白質安定剤、アコルビフェン、ａｆｆｉｎｉｔａｋ、アミノプテリン、アルゾキシフェン、アソプリスニル、アタメスタン、ＢＡＹ４３−９００６、アバスチン、ＣＣＩ−７７９、ＣＤＣ−５０１、セレブレックス、セツキシマブ、クリスナトール、シプロテロンアセタート、デシタビン、ＤＮ−１０１／ドキソルビシン−ＭＴＣ、ｄＳＬＩＭ、デュタステリド、エドテカリン、エフロル二チン、エキサテカン、フェンレチニド、ヒスタミン、ヒストレリンハイドロゲルインプラント、ホルミウム−１６６ＤＯＴＭＰ、イバンドロネート、イクサベピロン、キーホールリンペットヘモシアニン、Ｌ−６５１５８２、ランレオチド、ラソフォキシフェン、ｌｉｂｒａ、ｌｏｎａｆａｍｉｂ、ミプロキシフェン、ミノドロネート（minodronate）、ＭＳ−２０９、リポソームＭＥＰ−ＰＥ、ＭＸ−６、ナファレリン、ネモルビシン、Ｎｅｏｖａｓｔａｔ、ノラトレキミド、オブリメルセン、ｏｎｃｏ−ＴＣＳ、ｏｓｉｄｅｍ、ポリグルタメート化パクリタキセル、パミドロン酸、ＰＮ−４０１、ＯＳ−２１、クアゼパム、Ｒ−１５４９、ラロキシフェン、ランピルナーゼ、１３−ｃｉｓ−レチノイン酸、オキサリプラチン、セオカルシトール、Ｔ−１３８０６７、ｔａｒｃｅｖａ、パクリタキセルドコサヘキサエン酸、チモシンα、チアゾフリン、ｔｉｐｉｆａｒｎｉｂ、チラパザミン、ＴＬＫ−２８６、トレミフェン、トランスＭＩＤ−ｌｏ７Ｒ、バルスポダール、バプレオチド、ｖａｔａｌａｎｏｂ、ベルテポルフィン、ビンフルニン、Ｚ−１００及びゾレドロン酸又はこれらの組み合わせ。

本発明は、前記式（Ｉ）の化合物又はその薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される補助剤又は担体を含む薬物組成物をさらに提供する。ここで、「薬学的に許容される補助剤又は担体」とは、薬学的に許容される材料、成分又は媒体、例えば、液体若しくは固体フィラー、希釈剤、補助剤、溶剤又は封止材料を指し、１つの器官又は身体のある部分から他の器官又は身体のある部分まで携帯若しくは輸送する主な薬学的試薬を含む。各担体は、「許容される」、他の形態の薬物成分を許容可能であり、患者に傷害を与えないものであるべきである。薬学的に許容される担体として、乳糖、グルコース及びショ糖などの糖、小麦澱粉、ジャガイモ澱粉などの澱粉、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、酢酸セルロース、トラガント末、モルト、ゼラチン、タルクなどのセルロース及びその誘導体、カカオ脂及び坐剤用ワックスなどの補助剤、ピーナッツ油、コットン油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及び豆油などの油、ブチレングリコールなどのエチレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコールなどのポリオール、オレイン酸エチル、ラウリン酸エチルなどのエステル、寒天、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウムなどの緩衝剤、アルギン酸、無熱原水、生理食塩水、リンガー液、エタノール、リン酸塩緩衝液、並びに薬物製剤に応用される他の無毒の互換性物質が挙げられる。

本発明の化合物は、薬剤としてヒト及び動物を治療する際に、それ自体又は薬物組成物として投与してもよい。例えば、０．１％〜９９．５％（好ましくは０．５％〜９０％）の活性成分と薬学的に許容される担体とを含む。

本発明の化合物は、静脈注射、筋肉注射、腹腔注射、皮下注射、外用、内服、又は他の許容可能な方法により疾患を治療してもよい。

本発明は、本発明のうちの１つまたは複数の成分からなる薬物組み合わせを含有する１つ又は複数の包装を含む薬品包装若しくはキットをさらに提供する。好ましくは、このような包装を政府機関により公開の形で標準的に生産し、生産法に許容された公開方法で薬品又は生物製品を使用若しくは販売し、ヒトへの治療製剤を使用若しくは販売する。

従来技術に比べ、本発明の有益な効果は以下の通りである。

本発明の重水素化化合物は、ＡＺＤ９２９１に近い酵素及び細胞レベルの生物活性を有し、より低い心臓毒性を有する。本発明の重水素化化合物は新型の抗腫瘍薬のためにより多くの選択肢を提供し、薬品の使用にとって良好な見通しを有する。

以下の代表的な例は本発明を説明するためのものであり、意図的に本発明を限定するものではなく、本発明を限定すると解釈すべきでもない。事実上、ここに記述されたものの他、ここで引用された技術文献や特許の例、及びこれらに基づく各種修正やさらなる多くの変更を始め、本発明の書類中のすべての内容は、当業者にとって明確である。さらに分かるべきことは、これらの参照文献の引用は、本明細書の内容を記述するのに役に立つ。

実施例１

合成経路は以下の通りである。

化合物１

２５０ｍＬの一口フラスコにＮ−メチルエタノールアミン（１０ｇ、１３３．１ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（２６．９ｇ、２６６．３ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１００ｍＬ）をそれぞれ加え、そして塩化ベンジル（２３．９ｇ、１３９．８ｍｍｍｏｌ）を０℃で反応液に徐々に滴下し、且つ室温で１ｈ撹拌し続け、ＴＬＣで原料の残留が無いことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が９５．５％の無色液体の化合物１を２１ｇ取得する。

化合物２

２５０ｍＬのナス型フラスコに化合物１（２１ｇ、１２７．１ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（２５．７ｇ、２５４．２ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（１００ｍｌ）を加え、そして０℃でＭｓＣｌ（１４．６ｇ、１２７．１ｍｍｏｌ）を滴下する。反応液を室温で３ｈ撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないこと（既にないこと）をモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が８５．６％の薄い黄色の液体の化合物２を２０ｇ取得する。

化合物３

５００ｍＬのシールドチューブに化合物２（２０ｇ、１０８．９ｍｍｏｌ）、アンモニア水２１５ｍＬを加え、混合液を４０℃で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、カラムクロマトグラフィー精製により収率が８４％の無色液体の化合物３を１５ｇ取得する。

化合物４

５００ｍＬのナス型フラスコに化合物３（１５ｇ、９１．３ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（２００ｍＬ）を加え、室温でＢｏｃ_２Ｏ（１９．９ｇ、９１．３ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、滴下終了後、混合液を室温で３ｈ撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が８７％の白色固体の化合物４を２１ｇ取得する。

化合物５

１００ｍＬのナス型フラスコに化合物４（１０ｇ、３７．８ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（４０ｍＬ）を加え、そして複数回に分けてＮａＨ（２．３ｇ、５６．７ｍｍｏｌ）を加え、３０ｍｉｎｓ撹拌し、ＴｓＯＣＤ_３（７．９ｇ、４１．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液を加え、そして室温で３ｈ撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、１５０ｍＬのＨ_２Ｏを加えてクエンチングし、ＥＡ（５０ｍＬ＊３）で抽出し、有機相を合併し、ｂｒｉｎｅで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が８０％の白色固体の化合物５を８．５ｇ取得する。

化合物６

２５０ｍＬのナス型フラスコに化合物５（８．５ｇ、３０．１８ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（８０ｍｌ）を加え、氷浴下で複数回に分けてＬｉＡｌＨ_４（３．４ｇ、９０．５９ｍｍｏｌ）を加え、そして６０℃まで加熱して一晩寝かせ、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、Ｎａ_２ＳＯ_４・１０Ｈ_２Ｏを徐々に加えてクエンチングし、濾過して固体を除去し、濾液を収集し、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が７６．３％の無色液体の化合物６を４．５ｇ取得する。

化合物７

１００ｍＬのナス型フラスコに化合物６（４．５ｇ、２３ｍｍｏｌ）、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（２００ｍｇ）をそれぞれ加え、真空抽出により水素を３回吸引し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、Ｐｄ（ＯＨ）_２／Ｃを濾過除去し、そして反応液ｐＨ値を酸性に調節し、減圧蒸留により溶媒を除去して収率が８５．９％の白色固体の化合物７を２．８ｇ取得する。

化合物８

２５０ｍＬのナス型フラスコに２，４−ジクロロピリミジン（１１．３７ｇ、７６．３３ｍｍｏｌ）、三塩化アルミニウム（１０．１８ｇ、７６．３３ｍｍｏｌ）及び１００ｍＬのエチレングリコールジメチルエーテル（ＤＭＥ）をそれぞれ加え、室温で２０ｍｉｎ撹拌し、そして複数回に分けて化合物ＩＩ（１０．００ｇ、６３．６１ｍｍｏｌ）を加え、８０度まで上げて６ｈ反応させる。反応を停止させて室温まで冷却し、１００ｍＬの水を加え、２ｈ撹拌し、濾過し、固体をエタノールで洗浄し、真空乾燥により収率が９０．１％の赤色粗品の化合物ＩＩＩを１５．４６ｇ取得する。

５００ｍＬのナス型フラスコに３００ｍＬの１，４−ジオキサンを加え、化合物ＩＩＩ（２０．００ｇ、８２．０７ｍｍｏｌ）、化合物４−フルオロ−２−メトキシ−５−ニトロアニリン（１６．８０ｇ、９０．２８ｍｍｏｌ）及びｐ−トルエンスルホン酸（１７．１７ｇ、９０．２８ｍｍｏｌ）をそれぞれ加える。８５度まで上げて８ｈ反応させ、室温まで冷却し、水を加えて攪拌し、ｐＨ＝９になるまで４０％の水酸化ナトリウムを滴下して濾過し、固体をエタノールで洗浄し、真空乾燥により収率が９２．９％の黄色固体の化合物８を３０．００ｇ取得する。

化合物９

１２０ｍＬのシールドチューブに化合物８（２ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）、化合物７（８１０ｍｇ、５．７２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｇ、９．５４ｍｍｏｌ）、ＤＭＡ（１０ｍＬ）を加え、そしてシールドチューブを１４０℃で６ｈ反応させ、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、反応液を室温まで冷却し、２０ｍＬの水を加え、固体を析出し、濾過し、そして濾過ケーク（cakes）が加えられた２ｍＬのメタノールを加えて叩解して洗浄し、濾過し、乾燥により収率が７０．６％の赤色固体の化合物９を１．７ｇ取得する。

化合物１０

２５０ｍＬの一口フラスコに化合物９（１．７ｇ、３．３７ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ）、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を加え、真空抽出により水素を３回吸引し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、濾過してＰｄ／Ｃを除去し、減圧蒸留により溶媒を除去して黄緑色の固体を取得し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ＝２０：１：０．１）で溶出し、収率が７５％の黄緑色固体の化合物１０を１．２ｇ取得する。

化合物１１

２０ｍＬの一口フラスコに化合物１０（５００ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（３０ｍＬ）を加え、そして３-クロロプロピオニルクロリド（１３３．７ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を、０℃で反応液に徐々に滴下し、室温で３０ｍｉｎ撹拌し続け、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、そしてＮａＯＨ（１６８ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加え、６５℃まで上げて一晩撹拌し、ＨＰＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で溶出して、収率が５０．４％の薄い黄色固体の化合物１１を２８０ｍｇ取得する。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ １０．１９（ｓ，１Ｈ），９．８８（ｓ，１Ｈ），９．１２（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．２６ - ７．１４（ｍ，２Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．４９（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，２．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，９．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７３（ｄｄ，Ｊ＝９．８，２．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４９ - ４．３２（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９５ - ２．８７（ｍ，２Ｈ），２．７３（ｓ，３Ｈ），２．３９ - ２．２３（ｍ，７Ｈ），１．８２（ｓ，３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋５２８．７

実施例２

合成経路は以下の通りである。

化合物１２

１２０ｍＬのシールドチューブに化合物８（５００ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルエタノールアミン（１０７．２６ｍｇ、１．４２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３０７．５９ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）、ＤＭＡ（５ｍＬ）を加える。そしてチューブを封し１４０℃で６ｈ反応させ、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、反応液を室温まで冷却し、２０ｍＬの水を加え、固体を析出し、濾過し、そして濾過ケークが加えられた２ｍＬのメタノールを加えて叩解して洗浄し、濾過し、乾燥により収率が８５％の赤茶色固体の化合物１２を４８０ｍｇ取得する。

化合物１３

２０ｍＬのナス型フラスコに化合物１２（４５０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（１５９．３９ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（５ｍｌ）を加える。０℃でＭｓＣｌ（１２０．２８ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、滴下終了後、当該温度で攪拌し、１ｈ後にＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が５５．１５％の赤色固体の化合物１３を３２０ｍｇ取得する。

化合物１４

５ｍＬのシールドチューブに化合物１３（２２０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）、重水素化ジメチルアミン（１７５．１６ｍｍｇ、２ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１０３．３９ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（２ｍＬ）を加える。８０℃で一晩攪拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去して赤色固体を取得し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ＝４０：１：０．１）で溶出し、収率が４４．３２％の赤色固体の化合物１４を９０ｍｇ取得する。

化合物１５

２５０ｍＬの一口フラスコに化合物１４（９０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（３０ｍｇ）、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を加え、真空抽出により水素を３回吸引し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、濾過によりＰｄ／Ｃを除去し、減圧蒸留により溶媒を除去して黄緑色の固体を取得し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ＝２０：１：０．１）で溶出し、収率が４６．５３％の黄緑色の固体の化合物１５を４０ｍｇ取得する。

化合物１６

１０ｍＬの一口フラスコに化合物１５（４０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（４ｍＬ）を加え、そして３-クロロプロピオニルクロリド（１０．６３ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を０℃で反応液に徐々に滴下し、室温で３０ｍｉｎ撹拌し続け、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、そしてＮａＯＨ（１６ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）を加え、６５℃まで上げて一晩攪拌し、ＨＰＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ＝４０：１：０．１）で溶出して、収率が８９．３４％の薄い黄色固体の化合物１６を３８ｍｇ取得する。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ １０．１２（ｓ，１Ｈ），９．８８（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｄｄ，Ｊ＝１７．１，６．５Ｈｚ，２Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），６．４６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），５．７３（ｄｄ，Ｊ＝８．６，３．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５１ - ４．２８（ｍ，２Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．９８ - ２．８７（ｍ，２Ｈ），２．７２（ｓ，３Ｈ），２．３１（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，１１．２Ｈｚ，４Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋５３１．７

実施例３

合成経路は以下の通りである。

化合物１７

２Ｌの三口フラスコにＣＤ_３ＯＨ（１５ｇ、４１５．８ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（６００ｍＬ）をそれぞれ加える。そしてｎ−ＢｕＬｉ（１７４．６ｍＬ、４３６．６ｍｍｏｌ）を−４０℃で徐々に滴下する。１ｈ撹拌後、ＴｓＣｌ（７９．３ｇ、４１５．８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン溶液を滴下し、滴下終了後、３ｈ撹拌し続け、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングする。６００ｍＬのＨ_２Ｏを加えてクエンチングし、ＥＡ（２００ｍＬ＊３）抽出し、ｂｒｉｎｅで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、有機相を混合し、減圧蒸留により溶媒を除去して粗化合物を取得し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が９２．７％の白色固体の化合物１７を７３ｇ取得する。

化合物１８

２５０ｍＬのナス型フラスコに化合物１７（８ｇ、４２．３ｍｍｏｌ）、Ｎ−ベンジルエタノールアミン（５．３ｇ、３５．２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（９．８ｍｌ、７０．４ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）をそれぞれ加える。混合液は還流下で８ｈ反応し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が８４．４％の無色増粘液体の化合物１８を５ｇ取得する。

化合物１９

５０ｍＬのナス型フラスコに化合物１８（３ｇ、１５．８７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３．２ｇ、３１．７４ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２０ｍＬ）をそれぞれ加え、そして０℃でメタンスルホニルクロリドメタンスルホニルクロリド（２．１８ｇ、１９．０５ｍｍｏｌ）を徐々に滴下し、反応液を室温で３ｈ撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去して薄い黄色の増粘液体を取得し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が７１．６％の薄い黄色液体の化合物１９を２．８ｇ取得する。

化合物２０

１０ｍＬのシールドチューブに化合物１９（２．８ｇ、１１．３７ｍｍｏｌ）、ジメチルアミン溶液（１．５ｍＬ）、ＴＨＦ（３ｍＬ）をそれぞれ加える。混合液は８０℃で５ｈ撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングする。５ｍＬの水を加えて希釈し、酢酸エチル（５ｍＬ＊３）を加え、有機相を合併し、飽和食塩水で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、減圧蒸留により溶媒を除去し、中圧精製により収率が７５％の無色液体の化合物２０を２ｇ取得する。

化合物２１

１００ｍＬのナス型フラスコに化合物２０（２ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）、１０％パラジウム炭素（５００ｍｇ）、メタノール（３０ｍＬ）をそれぞれ加え、３５℃の水素下で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、固体を濾過し、ｐＨが酸性になるように濾液にＨＣｌ（ｉｎＥＡ）を加え、減圧蒸留により溶媒を除去して収率が６２．３％の白色固体の化合物２１を９００ｍｇ取得する。

化合物２２

１２０ｍＬのシールドチューブに化合物８（９６５ｍｇ、２．３ｍｍｏｌ）、化合物２１（４６７ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（１．１８ｇ、９．２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡ（５ｍＬ）を加える。そしてチューブを封し１４０℃で６ｈ反応させ、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、反応液を室温まで冷却し、２０ｍＬの水を加え、固体を析出し、濾過し、そして濾過ケークが加えられた２ｍＬのメタノールで叩解して洗浄し、濾過、乾燥により、収率が７７．５％の赤色固体の化合物２２を９００ｍｇ取得する。

化合物２３

２５０ｍＬの一口フラスコに化合物２２（９００ｍｇ、１．７８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（３００ｍｇ）、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）を加え、真空抽出により水素を３回吸引し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、Ｐｄ／Ｃを濾過して除去し、減圧蒸留により溶媒を除去して黄緑色の固体を取得し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＮＨ_３Ｈ_２Ｏ＝２０：１：０．１）で溶出し、収率が７１％の黄緑色固体の化合物２３を６００ｍｇ取得する。

化合物２４

２０ｍＬの一口フラスコに化合物２３（３００ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（６ｍＬ）及びＨ_２Ｏ（１ｍＬ）を加え、そして３-クロロプロピオニルクロリド（８０．３６ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）を０℃で反応液に徐々に滴下し、室温で３０ｍｉｎ撹拌し続け、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、そしてＮａＯＨ（１００．８ｍｇ、２．５２ｍｍｏｌ）を加え、６５℃まで上げて一晩攪拌し、ＨＰＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）で溶出し、収率が５１％の薄い黄色固体の化合物２４を１７０ｍｇ取得する。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ １０．０７（ｓ，１Ｈ），９．８７（ｓ，１Ｈ），９．１０（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．７５（ｓ，１Ｈ），７．２５ - ７．１４（ｍ，２Ｈ），７．００（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．８０（ｓ，１Ｈ），６．５７ - ６．３８（ｍ，２Ｈ），５．７４（ｄｄ，Ｊ＝８．２，３．８Ｈｚ，１Ｈ），４．４９ - ４．３０（ｍ，２Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．０５（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．９８ - ２．８９（ｍ，２Ｈ），２．４２ - ２．２１（ｍ，１３Ｈ）．ＬＣ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］^＋５２８．７

実施例４

合成経路は以下の通りである。

化合物２５

１Ｌの一口フラスコにＮ−メチルエタノールアミン（４０．０ｇ、０．５３２ｍｏｌ）、トリエチルアミン（８０．８ｇ、０．８ｍｏｌ）、ジクロロメタン（５００ｍＬ）をそれぞれ加え、そして塩化ベンジル（６７．４ｇ、０．５ｍｏｌ）を０℃で反応液に徐々に滴下し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、２００ｍＬの水を加えて分液を抽出し、１００ｍＬのジクロロメタンで水相を抽出する。有機相飽和食塩水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が８３．１％の無色液体の生成物２５を７３ｇ取得する。

化合物２６

１Ｌの一口フラスコに化合物２５（７１．０ｇ、０．４ｍｏｌ）、ジクロロメタン（４００ｍＬ）をそれぞれ加え、水浴下で塩化スルホキシド（７６．７ｇ、０．６ｍｏｌ）を徐々に滴下し、室温で１２ｈ反応させ、ＴＬＣで反応液に原料の残留がないことをモニタリングする。減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が７６．１％の薄い黄色液体の生成物２６を６０．０ｇ取得する。

化合物２７

２Ｌの一口フラスコに２６（６０．０ｇ、０．３ｍｏｌ）、アンモニア水（１Ｌ）をそれぞれ加え、混合液を４０℃で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングする。減圧濃縮し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が７４．７％の無色液体の生成物２７を４０．０ｇ取得する。

化合物２８

１Ｌのナス型フラスコに化合物２７（４０．０ｇ、０．３ｍｏｌ）、ジクロロメタン（２５０ｍＬ）を加え、室温でＢｏｃ_２Ｏ（５５．２ｇ、０．３ｍｏｌ）を徐々に滴下し、滴下終了後、混合液を室温で３ｈ撹拌し続け、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が８６．７％の無色液体の生成物２８を５８．０ｇ取得する。

化合物２９

５００ｍＬのナス型フラスコに化合物２８（２６．０ｇ、９８．３ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加え、氷浴下で複数回に分けてＮａＨ（５．９ｇ、１４７．５ｍｍｏｌ）を加え、３０ｍｉｎ撹拌し、ＴｓＯＣＤ_３（２７．９ｇ、１４７．５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）溶液を加え、そして室温で３ｈ撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、３００ｍＬの水でクエンチングし、酢酸エチル（１００ｍＬ＊３）を抽出し、有機相を合併し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製により収率が７５．９％の白色固体の生成物２９を２１．０ｇ取得する。

化合物３０

２５０ｍＬのナス型フラスコに化合物２９（２１．０ｇ、７４．７ｍｍｏｌ）、メタノール（１００ｍＬ）、Ｐｄ／Ｃ（４．２ｇ）をそれぞれ加え、真空抽出により水素を３回吸引し、４０℃で一晩反応させ、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、収率が８４．０％の白色固体の生成物３０を１２．０ｇ取得する。

化合物３１

１２０ｍＬのシールドチューブに化合物８（６．１ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）、化合物３０（５ｇ、２６．１ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．８ｇ、２９ｍｍｏｌ）、ＤＭＡｃ（３０ｍＬ）を加え、そしてチューブを封し１４０℃で６ｈ反応させ、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、反応液を室温まで冷却し、６０ｍＬの水を加え、固体を析出し、濾過し、そして濾過ケークが加えられた２０ｍＬのメタノールで叩解して洗浄し、濾過、乾燥により収率が８１．７％の赤色固体の生成物３１を７．０ｇ取得する。

化合物３２

２５０ｍＬの一口フラスコに化合物３１（７．０ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ／Ｃ（１．４ｇ）、メタノール（１００ｍＬ）を加え、真空抽出により水素を３回吸引し、室温で一晩撹拌し、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、Ｐｄ／Ｃを濾過し、減圧蒸留により溶媒を除去して黄緑色の固体を取得し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ジクロロメタン：メタノール：アンモニア水＝２０：１：０．１）で溶出し、収率が５０．９％の黄緑色固体の生成物３２を３．５ｇ取得する。

化合物３３

１００ｍＬの一口フラスコに、化合物３２（１．１ｇ、２．０ｍｍｏｌ）、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）、水（３ｍＬ）を加え、０℃で３-クロロプロピオニルクロリド（２７４ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）を反応液に徐々に滴下し、室温で１ｈ撹拌し続け、ＴＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、ＮａＯＨ（１．３ｇ、３１．４ｍｍｏｌ）を加え、６５℃まで上げ一晩撹拌し、ＨＰＬＣで原料の残留がないことをモニタリングし、減圧蒸留により溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィー精製し、溶離剤（ジクロロメタン：メタノール：アンモニア水＝４０：１：０．１）で溶出し、収率が６６．４％の薄い黄色固体の生成物３３を８００ｍｇ取得する。

化合物３４

２５ｍＬの一口フラスコに化合物３３（３２０ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（３ｍＬ）、水（３ｍＬ）を加え、室温で０．３ｍＬのメタンスルホン酸を反応液に徐々に滴下し、１ｈ攪拌し続け、減圧蒸留によりジクロロメタンを除去し、そして１２．５ｍＬの酢酸エチル及び２．５ｍＬのエタノールを加え、超音波、室温で撹拌晶析し、吸引濾過し、濾過ケークである酢酸エチル（２ｍＬ＊２）で洗浄し、濾過ケークを乾燥させ、収率が７１．８％の黄色固体の生成物３４を３００ｍｇ取得する。
^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ） δ ９．５２（ｓ，１Ｈ），８．８３（ｓ，１Ｈ），８．６４（ｓ，２Ｈ），８．３５（ｓ，１Ｈ），８．２０（ｓ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），７．０６（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，３Ｈ），６．８６（ｄｄ，Ｊ＝１６．９，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３８−４．２３（ｍ，２Ｈ），３．８４（ｓ，３Ｈ），３．２９（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ），３．２１−３．１８（ｍ，２Ｈ），２．９７−２．９２（ｍ，２Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），２．１９−２．１１（ｍ，２Ｈ），２．４１（ｓ，９Ｈ）．

実施例５：調製された化合物の生物活性試験

１）このような化合物によるＥＧＦＲ野生型、ＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ）両変異型及びＥＧＦＲ（Ｌ８５８Ｒ）単変異型に対するキナーゼ活性ＩＣ_５０の試験である。上記キナーゼは、英▲ウェイ▼（ウェイはさんずいに維）（ＨＵＡＩ）捷基（上海）貿易有限会社から購入されたものである。

均一性時間分解蛍光法（ＨＴＲＦ）により、ＥＧＦＲ野生型、ＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ，Ｌ８５８Ｒ）両変異型及びＥＧＦＲ（Ｌ８５８Ｒ）単変異型のキナーゼ活性検出方法を確立し、化合物の阻害活性を測定する。１×ｅｎｚｙｍａｔｉｃｂｕｆｆｅｒ（Ｃｉｓｂｉｏ、ＨＴＲＦＫｉｎＥＡＳＥ^ＴＭ−ＴＫ）、５ｍＭＭｇＣｌ２、１ｍＭＭｎＣｌ２、１ｍＭＤＴＴ、０．５μＭＴＫｓｕｂｓｔｒａｔｅ−ｂｉｏｔｉｎ（Ｃｉｓｂｉｏ、ＨＴＲＦＫｉｎＥＡＳＥＴＭ−ＴＫ）１０μＭＡＴＰ、勾配濃度の化合物及び０．０４ｎｇ／μＬのＥＧＦＲ又は０．０２５ｎｇ／μＬのＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ）又はＥＧＦＲ（Ｌ８５８Ｒ）を含む反応液を８ｕＬ配置する。化合物の反応濃度は１０００ｎＭから３倍希釈による９つの濃度である。反応系中のＤＭＳＯ濃度は２％である。酵素及び化合物を１５分間プレインキュベートし、そしてＡＴＰ及び基質を加えて反応させる。全ての酵素触媒反応は、２５℃で６０分間行う。酵素触媒反応終了後、反応液に４μＬのＴＫａｎｔｉｂｏｄｙ−ｃｒｙｐｔａｔｅ及び４μＬのｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＸＬ６６５（反応濃度は６２．５ｎＭ）を加え、２５℃で６０分間インキュベートし続ける。インキュベート終了後、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ（ＢＭＧＬＡＢＴＥＣＨ）上でＨＴＲＦ蛍光値を検出し、且つＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５．０でＩＣ_５０を算出する。
表１：体外酵素活性試験データ（ＩＣ_５０，ｎＭ）

本発明の重水素化化合物は、ＡＺＤ９２９１に近い酵素生物活性を有する。

２）ＥＧＦＲ野生型、ＥＧＦＲＥｘｏｎ１９欠失（活性化単変異体）及びＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ）双変異型の細胞リン酸化試験

試験１：ＥＧＦＲ野生型細胞リン酸化試験

野生型ＥＧＦＲを発現するヒトの皮膚の鱗状の細胞癌の細胞系Ａ４３１は、中国科学院細胞庫から購入する。Ａ４３１を１０％のウシ胎児血清を含有するＥＭＥＭ培地内に保持する。細胞を５％のＣＯ_２を有する加湿インキュベーター内で３７℃で成長させる。Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲＨＴＲＦｋｉｔ（Ｃｉｓｂｉｏ、品番＃６４ＨＲ１ＰＥＧ）に記述された案により、細胞溶解液中の内因性ｐ−ＥＧＦＲを検出する。１００μＬの細胞を９６オリフィス板（５００００細胞／穴）に接種し、３７℃で、５％のＣＯ_２を有する細胞インキュベーターで一晩培養する。連続的に４倍希釈した化合物を細胞に加え、反応最高濃度は１０μＭである。引き続き２時間培養した後、１００ｎｇ／穴のＥＧＦを３７℃で１０分間培養し、そして培養液を取り除き、直ちに２５μＬ／穴のライセートを加え、室温で細胞を１０分間分裂させ、そして１２μＬ／穴をＧｒｅｉｎｅｒ白色低体積３８４のオリフィス板に加え、検出用抗体（Ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏＥＧＦＲ−ｄ２及びＡｎｔｉ−ＥＧＦＲ−Ｔｂ）を加え、２５℃で６０分間インキュベートする。インキュベート終了後、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ（ＢＭＧＬＡＢＴＥＣＨ）上でＨＴＲＦ蛍光値を検出し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５．０でＩＣ_５０を算出する。

試験２：Ｅｘｏｎ１９欠失ＥＧＦＲ（活性化単変異体）細胞リン酸化試験

ヒト非小細胞肺癌細胞系ＨＣＣ８２７（Ｅｘｏｎ１９欠失ＥＧＦＲ、活性化単変異体）は、中国科学院細胞庫から購入する。ＨＣＣ８２７を１０％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地内に保持する。細胞を５％のＣＯ_２を有する加湿インキュベーター内で３７°Ｃで成長させる。Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲＨＴＲＦｋｉｔ（Ｃｉｓｂｉｏ、品番＃６４ＨＲ１ＰＥＧ）に記述された案により、細胞溶解液中の内因性ｐ−ＥＧＦＲを検出する。１００μＬの細胞を９６オリフィス板（５００００細胞／穴）に接種し、３７℃で、５％のＣＯ_２を有する細胞インキュベーターで一晩培養する。連続的に４倍希釈した化合物を細胞に加え、反応最高濃度は１０μＭである。引き続き２時間培養した後、培養液を取り除き、直ちに２５μＬ／穴のライセートを加え、室温で細胞を１０分間分裂させ、そして１２μＬ／穴をＧｒｅｉｎｅｒ白色低体積の３８４オリフィス板に加え、検出用抗体（Ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏＥＧＦＲ−ｄ２及びＡｎｔｉ−ＥＧＦＲ−Ｔｂ）を加え、２５℃で６０分間インキュベートする。インキュベート終了後、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ（ＢＭＧＬＡＢＴＥＣＨ）上でＨＴＲＦ蛍光値を検出し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５．０でＩＣ_５０を算出する。

試験３：ＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ，Ｌ８５８Ｒ）双変異型細胞リン酸化試験

ＥＧＦＲ（Ｔ７９０Ｍ、Ｌ８５８Ｒ）双変異型を発現するヒト非小細胞肺癌細胞系ＮＣＩ−Ｈ１９７５は、中国科学院細胞庫から購入する。ＮＣＩ−Ｈ１９７５を１０％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地内に保持する。細胞を５％のＣＯ_２を有する加湿インキュベーター内で３７℃で成長させる。Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲＨＴＲＦｋｉｔ（Ｃｉｓｂｉｏ、品番＃６４ＨＲ１ＰＥＧ）に記述された案により、細胞溶解液中の内因性ｐ−ＥＧＦＲを検出する。１００μＬの細胞を９６オリフィス板（５００００細胞／穴）に接種し、３７℃で、５％のＣＯ_２を有する細胞インキュベーターで一晩培養する。連続的に４倍希釈した化合物を細胞に加え、反応最高濃度は１０μＭである。引き続き２時間培養した後、培養液を取り除き、直ちに２５μＬ／穴のライセートを加え、室温で細胞を１０分間分裂させ、そして１２μＬ／穴をＧｒｅｉｎｅｒ白色低体積の３８４オリフィス板に加え、検出用抗体（Ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏＥＧＦＲ−ｄ２及びＡｎｔｉ−ＥＧＦＲ−Ｔｂ）を加え、２５℃で６０分間インキュベートする。インキュベート終了後、ＣＬＡＲＩＯｓｔａｒ（ＢＭＧＬＡＢＴＥＣＨ）上でＨＴＲＦ蛍光値を検出し、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ５．０でＩＣ_５０を算出する。
表２：細胞レベルＥＧＦＲ野生及び変異体リン酸化試験（ＩＣ_５０、ｎＭ）

本発明の重水素化化合物は、ＡＺＤ９２９１に近い細胞レベル生物活性を有する。

調製された化合物のｈＥＲＧカリウムイオンチャネルに対する試験

ｈＥＲＧチャネル発現を安定させるＨＥＫ２９３細胞を３５ｍｍのペトリ皿で培養し、３７℃で５％のＣＯ_２のインキュベーターに少なくとも２４時間放置した後、実験に用いる。細胞培地は、１０％のウシ胎児血清及び２５０μｇ／ｍＬのＧ４１８を含有するＤＭＥＭである。

全細胞パッチクランプ試験に用いた細胞外液の成分（ｍＭ）は、ＮａＣｌ，１３７、ＫＣｌ，４、ＣａＣｌ２，１．８、ＭｇＣｌ２，１、ＨＥＰＥＳ，１０、ｇｌｕｃｏｓｅ１０、ｐＨ７．４（ＮａＯＨ滴定）である。全ての試験用化合物及びコントロール用化合物溶液は、いずれも０．３％のＤＭＳＯを含有する。細胞内液（ｍＭ）は、ＫＡｓｐａｒｔａｔｅ，１３０、ＭｇＣｌ２，５，ＥＧＴＡ５，ＨＥＰＥＳ，１０、Ｔｒｉｓ−ＡＴＰ４、ｐＨ７．２（ＫＯＨ滴定）である。

毎回の試験に１つのペトリ皿を取り出し、細胞外液で２回洗浄し、倒立顕微鏡ステージ上に置く。全細胞パッチクランプ試験は室温で行い、用いたホウケイ酸ガラスマイクロ電極チップ抵抗は３〜５ＭΩである。全細胞のモードを記録した後、膜電位を−８０ｍＶにクランプし、脱分極させるために細胞に３０ｓ毎に＋５０ｍＶの電圧刺激を与え、２ｓ持続した後に−５０ｍＶに再分極させ、３ｓ続行すれば、ｈＥＲＧテール電流を引き出すことができる。脱分極させるための電圧刺激を行う前に、まず再分極させるための５０ｍｓ、−５０ｍＶ電圧を与え、該電圧で記録した電流をｈＥＲＧテール電流の算出ベースラインとする。化合物を加える前に、ｈＥＲＧテール電流は細胞外液で少なくとも３分間安定的に記録される。灌流投与後、ｈＥＲＧテール電流振幅変化が＜５％である場合、薬物作用が安定状態に達したと考えられる。データ収集及び解析は、ｐＣＬＡＭＰ１０．１ソフトウェアプログラムを用いる。化合物を加える前の電流が安定状態にある４〜５個のｓｗｅｅｐを選択し、ピーク平均値を算出し、対照電流振幅とする。化合物を加えた後の電流が安定状態にある４〜５個のｓｗｅｅｐを選択し、ピーク平均値を算出し、電流が阻害された残存振幅とする。被測定化合物のｈＥＲＧ電流に対する阻害率は、以下の式に従って算出する。
％阻害率＝｛１−（電流残存振幅）／（対照電流振幅）｝×１００
上記の計算方法により、複数濃度の被測定化合物のｈＥＲＧ電流に対する阻害率（平均値±標準偏差）を算出した後、ロジスティック方程式でデータフィッティングを行い、ＩＣ_５０を算出する。
表３：細胞レベルでｈＥＲＧカリウムイオンチャネルを阻害する化合物のＩＣ_５０（μＭ）

本発明の重水素化化合物は、ＡＺＤ９２９１に比べより低い心臓毒性を有する。

［付記］
［付記１］

Ｒ_１、Ｒ_２は−ＣＨ_３又は−ＣＤ_３からなり、Ｒ_３及びＲ_４は−ＣＨ_３、−ＣＤ_３又は−Ｈからなり、且つＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３及びＲ_４のうち、少なくとも１つは−ＣＤ_３である、式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩。

［付記２］
Ｒ_１が−ＣＨ_３である、付記１に記載の式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩。

［付記３］

の中から選択される化合物又はその薬学的に許容される塩。

［付記４］
薬学的に許容される塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンファー塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグリコール酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート塩、グリセリンリン酸塩、エナント酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、水素臭素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホナート塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、またはチオシアン酸塩からなる、ことを特徴とする付記１〜３のいずれか一つに記載の式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩。

［付記５］
付記１〜４のいずれか一つに記載の式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される補助剤を含む、薬物組成物。

［付記６］
付記１〜４のいずれか一つに記載の式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩の、腫瘍を治療又は予防する薬物の調製における使用。

［付記７］
前記腫瘍は非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細胞癌、胃腸間質腫、白血病、組織細胞性リンパ癌又は鼻咽頭癌のいずれかである、ことを特徴とする付記６に記載の使用。

［付記８］
ＥＧＦＲにより誘導される、又は活性化変異体若しくは耐性変異体の形態のＥＧＦＲにより誘導される疾患、障害、乱れ又は病態の治療又は予防のための薬物の調製における、付記１〜４のいずれか一つに記載の式（Ｉ）の構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。

［付記９］
ＥＧＦＲにより誘導される、又は活性化変異体又は耐性変異体の形態のＥＧＦＲにより誘導される前記疾患、障害、乱れ又は病態は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細胞癌、胃腸間質腫、白血病、組織細胞性リンパ癌又は鼻咽頭癌のいずれかである、ことを特徴とする付記８に記載の使用。

［付記１０］
前記活性化変異体又は耐性変異体の形態のＥＧＦＲは、Ｌ８５８Ｒ活性化変異体、Ｅｘｏｎ１９欠失活性化変異体及びＴ７９０Ｍ耐性変異体のいずれかである、ことを特徴とする付記８に記載の使用。

Claims

以下の式

の中から選択される構造を有する化合物又はその薬学的に許容される塩。
薬学的に許容される塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、硫酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、カンファー塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグリコール酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルセプテート塩、グリセリンリン酸塩、エナント酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、水素臭素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホナート塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、またはチオシアン酸塩からなる、ことを特徴とする請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩。
請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される補助剤を含む、薬物組成物。
請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の、腫瘍を治療又は予防する薬物の調製における使用。
前記腫瘍は非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細胞癌、胃腸間質腫、白血病、組織細胞性リンパ癌又は鼻咽頭癌のいずれかである、ことを特徴とする請求項４に記載の使用。
ＥＧＦＲにより誘導される、又は活性化変異体若しくは耐性変異体の形態のＥＧＦＲにより誘導される疾患、障害、乱れ又は病態の治療又は予防のための薬物の調製における、請求項１に記載の化合物又はその薬学的に許容される塩の使用。
ＥＧＦＲにより誘導される、又は活性化変異体若しくは耐性変異体の形態のＥＧＦＲにより誘導される前記疾患、障害、乱れ又は病態は、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、膵臓癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌、皮膚癌、上皮細胞癌、胃腸間質腫、白血病、組織細胞性リンパ癌又は鼻咽頭癌のいずれかである、ことを特徴とする請求項６に記載の使用。
前記活性化変異体又は耐性変異体の形態のＥＧＦＲは、Ｌ８５８Ｒ活性化変異体、Ｅｘｏｎ１９欠失活性化変異体及びＴ７９０Ｍ耐性変異体のいずれかである、ことを特徴とする請求項６に記載の使用。