JP6595460B2 - Glycoclusters and their use as antibacterial agents - Google Patents

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Description

発明の分野
本発明は、末端にガラクトース残基を有した糖鎖クラスター型の新規化合物（Ｉ）又は（ＩＩ）に関する。かかる化合物は、緑膿菌（シュードモナス・エルギノーサ、Pseudomonas aeruginosa）の病原因子であるレクチン１と十分な親和性を示す。本発明は、これらの化合物を調製する簡単かつ効果的な方法を提供する。また、本発明は、緑膿菌による感染の阻害剤としての、具体的には緑膿菌による毒性の阻害剤としての、化合物（Ｉ）又は（ＩＩ）の医薬の使用も対象とする。 The present invention relates to a novel sugar chain cluster type compound (I) or (II) having a galactose residue at the terminal. Such a compound exhibits sufficient affinity for lectin 1, which is a virulence factor of Pseudomonas aeruginosa. The present invention provides a simple and effective method for preparing these compounds. The present invention is also directed to the use of a medicament of compound (I) or (II) as an inhibitor of infection by Pseudomonas aeruginosa, specifically as an inhibitor of toxicity by Pseudomonas aeruginosa.

発明の背景
緑膿菌（ＰＡ）は、院内感染に対するその影響とともに、嚢胞性線維症患者の死亡率に対する影響により、重大な公衆衛生問題である。緑膿菌（ＰＡ）は、グラム陰性で好気性のグルコース非発酵菌であり、極単毛(polar monotrichous flagellum)により移動性である。緑膿菌は、その長期間の生存能とともに、最小栄養要求及び環境変化に対する高い耐性により、院内感染に関係することが多い、臨床的に重要な日和見病原菌である。緑膿菌は、院内感染の１０〜３０％の原因である（Floret, N. et al., (2009), Pathol. Biol. 57, 9-12）。また、緑膿菌は、慢性炎症及び嚢胞性線維症患者の呼吸器官の低下を次第にもたらす、最も頻度の高い病原菌でもある（Lyczak, J. B. et al., (2002) Clinical Microbiology Reviews 15, 194-222）。現在、抗生物質の使用が、緑膿菌の感染に対して有効となり得る唯一の解決策である。しかしながら、この点で、バイオフィルム構造中の細菌増殖によって、病原体に選択的有利性をもたらすと考えられる（Stewart, P. S., and Costerton, J. W. (2001) Lancet 358, 135-138. Landry, R. M. et al., (2006) Mol. Microbiol. 59, 142-151）。
その結果、ほとんどの病原菌、特に緑膿菌の抗生物質に対する耐性の出現に関しては、耐性又は新しい作用形式のメカニズムを回避することができる新しい抗菌剤の開発が急務となっており、感染症を治療するか又は予防することが重大な研究課題である。したがって、緑膿菌に基づく感染に対処する代替戦略として、緑膿菌による毒性の阻害が提案されている。 BACKGROUND OF THE INVENTION Pseudomonas aeruginosa (PA) is a serious public health problem due to its impact on nosocomial infections as well as its mortality in cystic fibrosis patients. Pseudomonas aeruginosa (PA) is a gram-negative, aerobic, non-fermentative glucose bacterium that is mobile by polar monotrichous flagellum. Pseudomonas aeruginosa is a clinically important opportunistic pathogen that is often associated with nosocomial infections due to its long-term viability, as well as high tolerance to minimal nutritional requirements and environmental changes. Pseudomonas aeruginosa is responsible for 10-30% of nosocomial infections (Floret, N. et al., (2009), Pathol. Biol. 57, 9-12). Pseudomonas aeruginosa is also the most common pathogen that progressively leads to chronic inflammation and reduced respiratory organs in patients with cystic fibrosis (Lyczak, JB et al., (2002) Clinical Microbiology Reviews 15, 194-222 ). Currently, the use of antibiotics is the only solution that can be effective against P. aeruginosa infections. However, in this regard, bacterial growth in the biofilm structure is thought to provide a selective advantage for pathogens (Stewart, PS, and Costerton, JW (2001) Lancet 358, 135-138. Landry, RM et al (2006) Mol. Microbiol. 59, 142-151).
As a result, with regard to the emergence of resistance to antibiotics of most pathogenic bacteria, especially Pseudomonas aeruginosa, the development of new antibacterial agents that can circumvent resistance or new modes of action is urgently needed to treat infection Doing or preventing is a major research question. Therefore, inhibition of toxicity by Pseudomonas aeruginosa has been proposed as an alternative strategy to address infections based on Pseudomonas aeruginosa.

緑膿菌由来のガラクトース結合レクチンであるＰＡ‐ＩＬは、その毒性に関与する。緑膿菌レクチン１（ＰＡ‐ＩＬ、Ｌｅｃ Ａ）は、長辺上に７１Å及び短辺上に３２Å離れた結合部位を有する、ほぼ矩形状の四価のレクチンである（Cioci, G. et al., (2003) FEBS Lett. 555, 297-301; Imberty, A., et al., (2004) Microb. Infect. 6, 221-228）。一価ガラクトシドに対するＰＡ‐ＩＬの結合は、マイクロモルの範囲に及び（フェニル‐β‐Ｇａｌに対して最も高い親和性を有する。）、アグリコンの構造による影響を受ける（Garber, N. et al., (1992) Biochim. Biophys. Acta 1116, 331-333; Chen, C. P. et al., (1998) Glycobiology 8, 7-16）。
いわゆるクラスター効果を利用する場合、ＰＡ‐ＩＬの結合はナノモル範囲に達し得る（Lis, H., and Sharon, N. (1998) Chem. Rev. 98, 637-674; Lundquist, J. J., and Toone, E. J. (2002) Chem. Rev. 102, 555-578; Lee, Y. C., and Lee, R. T. (1995) Acc. Chem. Res. 28, 321-327）。多価炭水化物リガンドは、一価リガンドと比較して、炭水化物残基ごとの標的レクチンに対して結合の増強を示し得る。この増強の程度は、とりわけ、残基がレクチンの複数の部位に適合する必要があるので、トポロジーの関数である。 PA-IL, a galactose-binding lectin from Pseudomonas aeruginosa, is involved in its toxicity. Pseudomonas aeruginosa lectin 1 (PA-IL, Lec A) is an approximately rectangular tetravalent lectin with binding sites 71 上 on the long side and 32 Å on the short side (Cioci, G. et al , (2003) FEBS Lett. 555, 297-301; Imberty, A., et al., (2004) Microb. Infect. 6, 221-228). The binding of PA-IL to monovalent galactosides is in the micromolar range (having the highest affinity for phenyl-β-Gal) and is affected by the structure of aglycone (Garber, N. et al. (1992) Biochim. Biophys. Acta 1116, 331-333; Chen, CP et al., (1998) Glycobiology 8, 7-16).
When utilizing the so-called cluster effect, the binding of PA-IL can reach the nanomolar range (Lis, H., and Sharon, N. (1998) Chem. Rev. 98, 637-674; Lundquist, JJ, and Toone, EJ (2002) Chem. Rev. 102, 555-578; Lee, YC, and Lee, RT (1995) Acc. Chem. Res. 28, 321-327). Multivalent carbohydrate ligands can exhibit enhanced binding to target lectins per carbohydrate residue compared to monovalent ligands. The degree of this enhancement is a function of topology, among other things, because residues need to fit into multiple sites on the lectin.

S. Cecioniらの文献（Chem. Eur. J. 2009, 15, 13232-13240）には、ＰＡ‐ＩＬを標的とするカリックス［４］アレーン複合糖質が開示されている。しかしながら、カリックスアレーン複合体は、ジアステレオ異性体の潜在的な形成及びカリックスアレーンの潜在的な毒性により、調製するのが困難である。F. Perticiらの文献（Chem. Commun., 2012, 48, 4008-4010）には、緑膿菌レクチンLecAの強力な二価阻害剤として、ジガラクトース誘導体が開示されている。これらの化合物の調製方法は、長く複雑である。A. Imbertiらの文献（Chem. Eur. J. 2008, 14, 7490-7499）には、糖鎖クラスター、及び大腸菌(E. Coli)のFimH又は緑膿菌(Pseudomonas aeruginosea)のＰＡ‐ＩＩＬに対するその親和性が開示されている。I. Deguiseらの文献（New J. Chem., 2007, 31, 1321-1331）には、フコシド残基とガラクトシド残基をともに含有するグリコデンドリマーの合成、並びに、緑膿菌由来のＰＡ‐ＩＬ及びＰＡ‐ＩＩＬレクチンに対するその結合特性が開示されている。Angewの文献（Chem. Int. Ed. 2011, 50, 10631-10635）には、レクチンＬｅｃＡ及び緑膿菌のバイオフィルムの糖ペプチドデンドリマー阻害剤が開示されている。この文献には、ＰＡ‐ＩＬ接着の阻害は言及されていない。   S. Cecioni et al. (Chem. Eur. J. 2009, 15, 13232-13240) discloses calix [4] arene glycoconjugates that target PA-IL. However, calixarene complexes are difficult to prepare due to the potential formation of diastereoisomers and the potential toxicity of calixarene. F. Pertici et al. (Chem. Commun., 2012, 48, 4008-4010) discloses digalactose derivatives as potent divalent inhibitors of Pseudomonas aeruginosa lectin LecA. The methods for preparing these compounds are long and complex. A. Imberti et al. (Chem. Eur. J. 2008, 14, 7490-7499) include glycan clusters and E. Coli FimH or Pseudomonas aeruginosea PA-IIL. Its affinity is disclosed. I. Deguise et al. (New J. Chem., 2007, 31, 1321-1331) describes the synthesis of glycodendrimers containing both fucoside and galactoside residues, as well as PA-IL derived from Pseudomonas aeruginosa. And its binding properties to PA-IIL lectins are disclosed. Angew (Chem. Int. Ed. 2011, 50, 10631-10635) discloses lectin LecA and glycopeptide dendrimer inhibitors of Pseudomonas aeruginosa biofilms. This document does not mention inhibition of PA-IL adhesion.

S. Cecioni et al., Chem .Eur. J. 2009, 15, 13232-13240S. Cecioni et al., Chem .Eur. J. 2009, 15, 13232-13240 F. Pertici et al., Chem. Commun., 2012, 48, 4008-4010F. Pertici et al., Chem. Commun., 2012, 48, 4008-4010 A. Imberti et al., Chem. Eur. J. 2008, 14, 7490-7499A. Imberti et al., Chem. Eur. J. 2008, 14, 7490-7499 I. Deguise et al., New J. Chem., 2007, 31, 1321-1331I. Deguise et al., New J. Chem., 2007, 31, 1321-1331 Angew., Chem. Int. Ed. 2011, 50, 10631-10635Angew., Chem. Int. Ed. 2011, 50, 10631-10635

細胞表面複合糖質と有効に競合するために、擬似糖質(glycomimetic)は、その標的と強い親和性を示す必要がある。レクチン‐炭水化物相互作用の低い親和性は、生物学的に活性のある擬似糖化合物の開発における障壁であり、多価によって、この困難性を部分的に克服することができた。しかしながら、先行技術の結果は、緑膿菌接着の防止、並びに細菌感染の予防及び治療の使用に対する擬似糖質(glycomimetic)の大きな可能性を確認する場合には、ＰＡ‐ＩＬとの高い親和性を有する分子の必要性が依然として存在している。   In order to compete effectively with cell surface glycoconjugates, glycometics need to show strong affinity with their targets. The low affinity of the lectin-carbohydrate interaction was a barrier in the development of biologically active pseudo-sugar compounds, and this difficulty could be partially overcome by the multivalent nature. However, prior art results show high affinity with PA-IL when confirming the great potential of glycomimetic for the use of Pseudomonas aeruginosa adhesion and the prevention and treatment of bacterial infections There remains a need for molecules having

かかる化合物の設計及び合成は容易ではなく、レクチンに対する擬似糖質(glycomimectic)の親和性は、分子によって示される炭水化物基の数だけでなく、レクチンＰＡ‐ＩＬと相互作用する可能性によって異なる。また、この擬似糖質の親和性は分子内のその配置、炭水化物基を分子の他の部分に結合するリンカーアームの性質、長さ及び柔軟性によっても異なる。さらに、複雑な合成により、多くの先行技術の擬似糖質は、少量のみで利用可能である。   The design and synthesis of such compounds is not easy, and the affinity of glycomectic for lectins depends not only on the number of carbohydrate groups exhibited by the molecule, but also on the possibility of interacting with lectin PA-IL. The affinity of this pseudosaccharide also depends on its location in the molecule, the nature of the linker arm that connects the carbohydrate group to the rest of the molecule, length and flexibility. Furthermore, due to the complex synthesis, many prior art pseudosaccharides are only available in small amounts.

病原菌レクチン、特にＰＡ‐ＩＬに対して強い親和性を示す分子の必要性が依然として存在している。特に、緑膿菌の接着を阻害することによって、緑膿菌のバイオフィルムの形成を阻害することができる分子の必要性が依然として存在している。かかる分子は、薬剤への利用を提供するために簡単かつ効果的な方法によって製造できる必要がある。   There remains a need for molecules that exhibit strong affinity for pathogenic lectins, particularly PA-IL. In particular, there remains a need for molecules that can inhibit Pseudomonas aeruginosa biofilm formation by inhibiting Pseudomonas aeruginosa adhesion. Such molecules need to be able to be produced by a simple and effective method to provide pharmaceutical applications.

発明の概要
本発明の目的は、上述した欠点を少なくとも部分的に軽減することである。 Summary of the invention The object of the present invention is to at least partially alleviate the above-mentioned drawbacks.

本発明は、病原菌レクチン、特にＰＡ‐ＩＬに対して強い親和性を示す分子を提供する。具体的には、本発明は、ＰＡ‐ＩＬを阻害するためのＰＡ‐ＩＬに対する合成リガンドを対象とする。具体的には、本発明は、ＰＡ接着の阻害を目的とする化合物を対象とする。単糖類が中心にあるクラスター及び櫛状クラスターは、コアとガラクトシル残基を分離するアリール基を有した種々のリンカーによって合成された。これらの化合物を調製する簡単かつ効果的な方法が開示される。かかる方法は、産業規模の場合を容易に推定することができた。   The present invention provides molecules that exhibit a strong affinity for pathogenic lectins, particularly PA-IL. Specifically, the present invention is directed to synthetic ligands for PA-IL to inhibit PA-IL. Specifically, the present invention is directed to compounds aimed at inhibiting PA adhesion. Clusters centered on monosaccharides and comb clusters were synthesized by various linkers with aryl groups separating the core and galactosyl residues. A simple and effective method for preparing these compounds is disclosed. This method could easily estimate the case of industrial scale.

本目的は、次の式（Ｉ）に対応する分子によって達成される。
式中、
ｎは、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択される整数であり、
Ｇａｌは、次式に示す、ガラクトピラノシル、１‐チオガラクトピラノシル、１‐メチレンガラクトピラノシル、１‐Ｎ‐アセチル‐ガラクトピラノシルから選択される基を表し、
Ｋは、次のものから選択される、３〜６個のリン酸基又はチオリン酸基又はホスホルアミダート基（Ｐｈｏ）を含む式（ＫＩ）又は（ＫＩＩ）の分子を表し、
式中、ＸはＯ若しくはＳを表し、
リン酸基の１若しくは２個の酸素原子は、共有結合によってＬ１リンカーアームに結合しており、
リン酸基若しくはチオリン酸基若しくはホスホルアミダート基Ｐｈｏのいずれかは、以下の式（ＫＩ）に表されているように、同一の中心Ｋ’にすべて結合しており、
Ｋ’は、４〜２４個の炭素原子と、０〜１２個の酸素原子と、対応する数の水素原子とを含む分子を表し、
Ｐｈｏの１個の酸素原子は、共有結合によってＫ’に結合しており、
ｘは１若しくは２であるか、
又は
リン酸基若しくはチオリン酸基若しくはホスホルアミダート基は、以下の式（ＫＩＩ）に表されているように、鎖を形成し
式中、Ｋ”は、４〜１２個の炭素原子と、０〜６個の酸素原子と、０〜６個の窒素原子と、対応する数の水素原子とを含む分子を表し、
Ｅは、０〜１２個の炭素原子と、０〜６個の酸素原子と、０〜６個の窒素原子と、対応する数の水素原子とを含む末端基を表し、
ｍは、２、３、４、５から選択される整数を表し、
Ｐｈｏの２個の酸素原子は、共有結合によってＫ”基若しくはＥに結合しており、
Ｌ１は、
１つ又は複数のエーテル架橋‐Ｏ‐を含む可能性がある、直鎖、分岐又は環状Ｃ１‐Ｃ１８アルキルジラジカル、
２〜６つのエチレングリコール単位を含むポリ（エチレングリコール）ジラジカル、
２〜６つのプロピレングリコール単位を含むポリピレングリコール(polypyleneglycol)ジラジカル
から選択されるリンカーアームを表し、
Ｔは、
トリアゾールジラジカル
チオ架橋‐Ｓ‐
から選択される連結基を表し、
Ｌ２は、以下の式に表される式‐Ｌ２１‐Ａｒ‐Ｌ２２‐に対応するリンカーアームを表す。
式中、
Ｌ２１は、アミド架橋‐ＣＯ‐ＮＨ‐、エーテル架橋‐Ｏ‐、チオ架橋‐Ｓ‐、アミン架橋‐ＮＨ‐から選択される１個又は複数の基を含む可能性がある、直鎖、分岐又は環状Ｃ１‐Ｃ１２アルキルジラジカルを表し、
Ａｒは、必要に応じて１〜６個のヘテロ原子を含むＣ６‐Ｃ１８芳香族ジラジカルを表し、
Ｌ２２は共有結合を表すか、又は、Ｇａｌがガラクトピラノシル、１‐チオガラクトピラノシルを表す場合、Ｌ２２は‐ＣＨ２‐基であり得る。 This object is achieved by a molecule corresponding to the following formula (I):
Where
n is an integer selected from 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10;
Gal represents a group selected from galactopyranosyl, 1-thiogalactopyranosyl, 1-methylenegalactopyranosyl, 1-N-acetyl-galactopyranosyl represented by the following formula:
K represents a molecule of formula (KI) or (KII) comprising 3 to 6 phosphate groups or thiophosphate groups or phosphoramidate groups (Pho), selected from:
In which X represents O or S;
1 or 2 oxygen atoms of the phosphate group are bonded to the L1 linker arm by a covalent bond,
Any of the phosphoric acid group, the thiophosphoric acid group, or the phosphoramidate group Pho is bonded to the same center K ′ as represented by the following formula (KI):
K ′ represents a molecule comprising 4 to 24 carbon atoms, 0 to 12 oxygen atoms and a corresponding number of hydrogen atoms,
One oxygen atom of Pho is bonded to K ′ by a covalent bond,
x is 1 or 2;
Or a phosphate group, a thiophosphate group, or a phosphoramidate group forms a chain as represented by the following formula (KII):
Where K ″ represents a molecule comprising 4 to 12 carbon atoms, 0 to 6 oxygen atoms, 0 to 6 nitrogen atoms, and a corresponding number of hydrogen atoms,
E represents a terminal group containing 0 to 12 carbon atoms, 0 to 6 oxygen atoms, 0 to 6 nitrogen atoms, and a corresponding number of hydrogen atoms;
m represents an integer selected from 2, 3, 4, and 5;
The two oxygen atoms of Pho are bonded to the K ″ group or E by a covalent bond,
L 1 is
A linear, branched or cyclic C1-C18 alkyl diradical, which may contain one or more ether bridges —O—
A poly (ethylene glycol) diradical containing 2 to 6 ethylene glycol units,
Represents a linker arm selected from polypyleneglycol diradicals containing 2 to 6 propylene glycol units,
T is
Triazole diradical
Thio bridge -S-
Represents a linking group selected from
L 2 represents a linker arm corresponding to the formula -L 21 -Ar-L 22 -represented by the following formula.
Where
L 21 is linear, branched, which may contain one or more groups selected from amide bridged —CO—NH—, ether bridged —O—, thio bridged —S—, amine bridged —NH— Or a cyclic C1-C12 alkyl diradical,
Ar represents a C6-C18 aromatic diradical optionally containing 1-6 heteroatoms;
L 22 represents a covalent bond, or when Gal represents galactopyranosyl, 1-thiogalactopyranosyl, L 22 can be a —CH 2 — group.

好適な実施形態は、次に示す特徴のうちの１つ以上を含む。
式（Ｉ）に対応する分子であって、次に示す条件のうちの１つ又は複数が確認される分子。
Ｇａｌが、β‐Ｄ‐ガラクトピラノシル基、又はβ‐Ｄ‐チオ‐１‐ガラクトピラノシル基を表し、β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルを表すことが好ましく、
Ｔがトリアゾールジラジカルを表し、
Ｌ１が、直鎖Ｃ２‐Ｃ６アルキル鎖、１，１，１‐（トリスヒドロキシメチル）エタン、２〜４つのエチレングリコール単位を含むポリ（エチレングリコール）ジラジカルから選択されるリンカーアームを表し、
Ｌ２１が、末端においてＡｒ基に結合している１個のアミド官能基‐ＣＯ‐ＮＨ‐を含むＣ１‐Ｃ１２直鎖アルキル鎖を表し、
ＡｒがＣ６‐Ｃ１２の芳香族ジラジカルを表し、Ａｒは、フェニル、ナフタレニル、１，４‐ビフェニルから選択される基を表すことが好ましく、Ａｒはフェニルであることが更により好ましく、
Ｌ２２が共有結合を表す。 Preferred embodiments include one or more of the following features.
A molecule corresponding to formula (I), wherein one or more of the following conditions are confirmed:
Gal preferably represents a β-D-galactopyranosyl group or a β-D-thio-1-galactopyranosyl group, and preferably represents β-D-galactopyranosyl,
T represents a triazole diradical,
L 1 represents a linker arm selected from a linear C2-C6 alkyl chain, 1,1,1- (trishydroxymethyl) ethane, a poly (ethylene glycol) diradical containing 2 to 4 ethylene glycol units;
L 21 represents a C1-C12 linear alkyl chain comprising one amide functional group —CO—NH— bonded to the Ar group at the end;
Ar represents a C6-C12 aromatic diradical, Ar preferably represents a group selected from phenyl, naphthalenyl, 1,4-biphenyl, and even more preferably Ar is phenyl;
L 22 represents a covalent bond.

式（Ｉ）に対応する分子であって、Ｋが式（ＫＩ）によって表され、ｘが１であり、Ｋが、次式に示す３〜５個のＰｈｏ懸垂基(pending group)を含み、
Ｋ’が、ピラノース及びフラノースから選択される炭水化物を表す分子。 A molecule corresponding to formula (I), wherein K is represented by formula (KI), x is 1, and K comprises 3 to 5 pending groups as shown in the following formula:
A molecule in which K ′ represents a carbohydrate selected from pyranose and furanose.

式（Ｉ）に対応する分子であって、Ｋ’が、マンノース、ガラクトース、グルコース、アラビノース、キシロース、リボース及びラクトースから選択される炭水化物を表す分子。   A molecule corresponding to formula (I), wherein K 'represents a carbohydrate selected from mannose, galactose, glucose, arabinose, xylose, ribose and lactose.

式（Ｉ）に対応する分子であって、Ｋが式（ＫＩＩ）によって表され、Ｋ”が、４〜１０個の炭素原子を含む、直鎖、分岐又は環状アルカン(alcane)ジイル基を表し、Ｐｈｏが
である（式中、ＸがＯ、Ｓである。）分子。 A molecule corresponding to formula (I), wherein K is represented by formula (KII) and K ″ represents a linear, branched or cyclic alkane diyl group containing 4 to 10 carbon atoms. , Pho
(Wherein X is O, S).

式（Ｉ）に対応する分子であって、Ｋ”が、１，４‐ジメチルシクロヘキシル、１，４‐ジエチルシクロヘキシルを表す分子。   A molecule corresponding to formula (I), wherein K ″ represents 1,4-dimethylcyclohexyl or 1,4-diethylcyclohexyl.

次のものから選択される式（Ｉ）に対応する分子。
（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）５
Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｇａｌ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｇｌｃ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８
Ｍａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４
式中、ＤＭＣＨはジメチルシクロヘキサンを表し、Ｍａｎはマンノースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、Ｇｌｃはグルコースを表し、
Ｐｒｏは１，３‐ｎ‐プロピルを表し、Ｈｅｘは１，６‐ｎ‐ヘキシルを表し、ＥＧ２Ｍはジエチレングリコールメチレンを表し、ＴＨＭＥはトリス‐（ヒドロキシメチル）エタンを表し、
Ｔｚはトリアゾール
を表し、
ＥＧ２はジエチレングリコールを表し、
ＡｃＮＰｈｅはアセトアミドフェニル
を表し、
Ｍはメチレンを表し、
Ｇａｌはガラクトピラノシルを表し、
ＰＮはホスホルアミダート結合を表し、
ＰＯはリン酸結合を表す。 A molecule corresponding to formula (I) selected from:
(DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 3
(DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 4
(DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 5
Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4
Gal (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4
Glc (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 8
Man [POTHME (MTzAcNPhe-O-Gal) 2 ] 4
Where DMCH represents dimethylcyclohexane, Man represents mannose, Gal represents galactose, Glc represents glucose,
Pro represents 1,3-n-propyl, Hex represents 1,6-n-hexyl, EG 2 M represents diethylene glycol methylene, THME represents tris- (hydroxymethyl) ethane,
Tz is triazole
Represents
EG 2 represents diethylene glycol,
AcNPhe is acetamidophenyl
Represents
M represents methylene,
Gal represents galactopyranosyl,
PN represents a phosphoramidate bond,
PO represents a phosphate bond.

また、本発明は、一般式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の少なくとも１つの化合物、又は医薬として許容し得るその塩と、医薬として許容し得る担体及び／又は賦形剤と、を含む医薬組成物も対象とする。   The present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising at least one compound of the general formula (I) or (II), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient. Also targeted.

好適な実施形態によれば、医薬組成物は、呼吸器官内に吸入又は滴下されるように製剤化される。   According to a preferred embodiment, the pharmaceutical composition is formulated for inhalation or instillation into the respiratory tract.

好適な実施形態によれば、医薬組成物は、少なくとも１つ以上の他の抗菌剤、又は１つ以上の他の抗病原性剤(antivirulence agent)、又は宿主の先天免疫を強化する１つ以上の薬剤を更に含む。   According to preferred embodiments, the pharmaceutical composition comprises at least one or more other antibacterial agents, or one or more other antivirulence agents, or one that enhances the host's innate immunity. The above medicine is further included.

また、本発明は、微生物病原体、具体的には病原菌による感染の予防、遅延、弱化及び治療的処置に用いる、式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）に対応する化合物も対象とする。   The present invention is also directed to compounds corresponding to formula (I) or (II) for use in the prevention, delay, attenuation and therapeutic treatment of infection by microbial pathogens, specifically pathogens.

好適な実施形態によれば、化合物は、緑膿菌からの感染を治療するか、遅延させるか、弱化させるか又は予防するためのものである。   According to a preferred embodiment, the compound is for treating, delaying, weakening or preventing infection from Pseudomonas aeruginosa.

好適な実施形態によれば、化合物は、嚢胞性線維症患者又は呼吸補助下にある患者に投与するためのものである。   According to a preferred embodiment, the compound is for administration to cystic fibrosis patients or patients on respiratory support.

本発明の別の目的は、次の式（ＩＩ）に対応する分子である。
式中、
Ｋ、ｎ、Ｇａｌ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２は請求項１と同じ定義を有し、ｙは、ＤＮＡ配列又は蛍光色素などのマーカーを表す。 Another object of the present invention is a molecule corresponding to the following formula (II):
Where
K, n, Gal, T, L 1 and L 2 have the same definition as in claim 1, and y represents a marker such as a DNA sequence or a fluorescent dye.

本発明は、病原菌レクチン、特にＰＡ‐ＩＬに対して強い親和性を示す分子を提供することができる。具体的には、本発明は、ＰＡ‐ＩＬを阻害するためのＰＡ‐ＩＬに対する合成リガンドであって、ＰＡ接着の阻害を目的とする化合物を提供することができる。単糖類が中心にあるクラスター及び櫛状クラスターは、コアとガラクトシル残基を分離するアリール基を有した種々のリンカーによって合成された。これらの化合物を調製する簡単かつ効果的な方法を提供することができる。かかる方法は、産業規模の場合を容易に推定することができた。   The present invention can provide molecules that exhibit a strong affinity for pathogenic lectins, particularly PA-IL. Specifically, the present invention can provide a synthetic ligand for PA-IL for inhibiting PA-IL, which is intended to inhibit PA adhesion. Clusters centered on monosaccharides and comb clusters were synthesized by various linkers with aryl groups separating the core and galactosyl residues. A simple and effective method of preparing these compounds can be provided. This method could easily estimate the case of industrial scale.

一部のマンノースが中心にあるガラクトクラスター(galactocluster)の一般的な構造と、そのリンカーの性質及び長さを示す。左側では、リンカーは足場に結合している。右側では、リンカーはガラクトシル残基に結合している。The general structure of a galactocluster centered on some mannose and the nature and length of its linker are shown. On the left side, the linker is attached to the scaffold. On the right side, the linker is attached to the galactosyl residue. ガラクトクラスターを合成するための構成単位の構造を示す。The structure of the structural unit for synthesize | combining a galacto cluster is shown. 糖鎖クラスター１７ａ〜ｅ及び１８の合成を示すスキームである。Ｌ２は、図２の説明文中に説明されている。It is a scheme which shows the synthesis | combination of sugar chain cluster 17a-e and 18. L2 is described in the explanatory text of FIG. 糖鎖クラスター１７ａ〜ｅ及び１８の合成を示すスキームである。Ｌ２は、図２の説明文中に説明されている。It is a scheme which shows the synthesis | combination of sugar chain cluster 17a-e and 18. L2 is described in the explanatory text of FIG. 負の糖鎖クラスター対照（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｍａｎ）３ Ｃ１と、正の糖鎖クラスター対照（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｃ２の構造を示す。The structures of the negative glycan cluster control (DMCH-PNMTzEG 3 -O-Man) 3 C1 and the positive glycan cluster control (DMCH-PNMTzEG 3 -O-Gal) 4 C2 are shown. マイクロアレイ上でAlexa 647‐ＰＡ‐ＩＬと結合した糖鎖クラスターＣ１、Ｃ２、１７ａ〜ｅ及び１８の蛍光強度（任意単位ｕ．ａ．）を示すグラフである。It is a graph which shows the fluorescence intensity (arbitrary unit ua) of sugar chain cluster C1, C2, 17a-e and 18 couple | bonded with Alexa 647-PA-IL on the microarray. 式（ＫＩ）に対応するＫを有した構造（Ｉ）への合成経路を示すスキームである。FIG. 6 is a scheme showing a synthetic route to structure (I) having a K corresponding to formula (KI). 式（ＫＩＩ）に対応するＫを有した構造（Ｉ）への合成経路を示すスキームである。ホスホルアミダート結合の構築を示す。FIG. 5 is a scheme showing a synthetic route to structure (I) having a K corresponding to formula (KII). The construction of phosphoramidate bonds is shown. 式（ＫＩＩ）に対応するＫを有した構造（Ｉ）への合成経路を示すスキームである。ホスホトリエステル結合又はチオノホスホトリエステル(thionophosphotriester)結合の構築を示す。FIG. 5 is a scheme showing a synthetic route to structure (I) having a K corresponding to formula (KII). Figure 3 shows the construction of a phosphotriester bond or a thionophosphotriester bond. 直鎖（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２‐５（２２〜２５）クラスター、及び（ｄＴ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２６）クラスターの合成を示すスキームである。It is a scheme showing the synthesis of linear (DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 2-5 (22-25) cluster and (dT-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 4 (26) cluster. マンノースコア（１７ｄ、１８）、ガラクトースコア（２７、２９）及びグルコースコア（２８、３０）から合成されたヘキソースが中心にある６つのテトラガラクトクラスターと、モノ‐ＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐ガラクトース（３１）複合体の構造を表す。Six tetragalacto clusters centered on hexose synthesized from mannosecore (17d, 18), galactose score (27,29) and glucose core (28,30) and mono-TzAcNPhe-O-galactose (31) complex Represents the structure of the body. Alexa 647‐ＰＡ‐ＩＬと結合した、直鎖でヘキソースが中心にある糖鎖クラスター、（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｍａｎ）３ Ｃ１、（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ３Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｃ２、（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｎｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２‐５（２２〜２５）、（ｄＴ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２６）、Ｍａｎ‐（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（１７ｄ）、Ｇａｌ‐（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２７）、Ｇｌｃ‐（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２８）、Ｍａｎ‐（ＨｅｘＴｚＭ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（１８）、Ｇａｌ‐（ＨｅｘＴｚＭ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２９）、及びＧｌｃ‐（ＨｅｘＴｚＭ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３０）の蛍光任意単位（ａ．ｕ．）。A straight chain hexose-centered sugar chain cluster linked to Alexa 647-PA-IL, (DMCH-PNMTzEG 3 -O-Man) 3 C1, (DMCH-PNMTzEG 3 O-Gal) 4 C2, (DMCH- PNMTzAcNPne-O-Gal) 2-5 (22-25), (dT-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 4 (26), Man- (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 (17d), Gal- (POProTzAcNPhe-O- Gal) 4 (27), Glc- (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 (28), Man- (HexTzM-O-Gal) 4 (18), Gal- (HexTzM-O-Gal) 4 (29), and Glc- (HexTzM-O-Gal) fluorescence arbitrary units 4 (30) (a u.). プロパルギルジエチレングリコール又はプロパルギルテトラエチレングリコール１ａ、１ｂ、ビス‐ペント‐４‐イニル１ｃ、及び２，２‐（ビス‐プロパルギルオキシメチル）プロピル１ｄホスホラミダイトの構造。Structures of propargyl diethylene glycol or propargyl tetraethylene glycol 1a, 1b, bis-pent-4-ynyl 1c, and 2,2- (bis-propargyloxymethyl) propyl 1d phosphoramidite. Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３６）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３２）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３３）、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８（３４）、Ｍａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４（３５）、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）４（３７）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）４（３８）、及びＭａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）２］４（３９）の合成スキーム。Man (POEG 2 MTzEG 3 -O-Gal) 4 (36), Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (32), Man (POEG 4 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (33), Man (POProTzAcNPh O-Gal) 8 (34), Man [POTHME (MTzAcNPhe-O-Gal) 2 ] 4 (35), Man (POProTzBuT-Gal) 4 (37), Man (POEG 2 MTzBuT-Gal) 4 (38), And Man [POTHME (MTzBuT-Gal) 2 ] 4 (39). Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３６）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３２）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３３）、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８（３４）、Ｍａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４（３５）、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）４（３７）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）４（３８）、及びＭａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）２］４（３９）の構造。Man (POEG 2 MTzEG 3 -O-Gal) 4 (36), Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (32), Man (POEG 4 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (33), Man (POProTzAcNPh O-Gal) 8 (34), Man [POTHME (MTzAcNPhe-O-Gal) 2 ] 4 (35), Man (POProTzBuT-Gal) 4 (37), Man (POEG 2 MTzBuT-Gal) 4 (38), And the structure of Man [POTHME (MTzBuT-Gal) 2 ] 4 (39). Ｎ３‐（４‐アジド‐ブチル）‐Ｎ１‐（２’，３’，４’，６’‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐ガラクトース）‐チミン４ｆの合成スキーム。Synthesis scheme of N 3- (4-azido-butyl) -N 1- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-tetra-O-acetyl-galactose) -thymine 4f. Alexa 647‐ＰＡ‐ＩＬと結合した直鎖でヘキソースが中心にある糖鎖クラスターの蛍光任意単位（ａ．ｕ．）。Fluorescent arbitrary unit (au) of a sugar chain cluster that is linked to Alexa 647-PA-IL and is centered on a hexose. Ｇ１ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）、Ｇ２ （Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）、及びＧ３ （Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）の合成スキーム。G1 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ), G2 (Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 ), and G3 (Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 ). 擬似ガラクト(galactomimetic)Ｇ１（▲）、Ｇ２（●）、Ｇ３（×）、並びに単量体Ｇａｌ‐Ｏ‐Ｍｅ（■）及びＧａｌ‐Ｏ‐Ｐｈｅ‐ＮＯ２（◆）のＥＬＬＡ曲線。阻害％（縦軸）‐濃度（横軸、ｍＭ）。ELLA curves of galactomimetic G1 (▲), G2 (●), G3 (x), and monomers Gal-O-Me (■) and Gal-O-Phe-NO 2 (♦). Percent inhibition (vertical axis) -concentration (horizontal axis, mM). マイクロカロリメトリーのデータ。ＩＴＣプロット（ＶＰ‐ＩＴＣ（Microcal社製）によって測定）は、擬似糖質Ｇ２〜３を含むＰＡ‐ＩＬの滴定から求めた。下のパネルのプロットは、上のパネルに示されている滴定に対する総リガンド濃度の関数としての、放出された総熱量を示す。実線は、１点モデルを用いた実験データに最良な最小二乗適合を表す。注入剤（縦軸）のｋｃａｌ／モル‐濃度（モル比）。Microcalorimetric data. The ITC plot (measured by VP-ITC (manufactured by Microcal)) was determined from the titration of PA-IL containing pseudosaccharides G2-3. The lower panel plot shows the total heat released as a function of total ligand concentration for the titration shown in the upper panel. The solid line represents the best least squares fit to experimental data using a one point model. Kcal / mole-concentration (molar ratio) of injectant (vertical axis). マイクロカロリメトリーのデータ。ＩＴＣプロット（ＶＰ‐ＩＴＣ（Microcal社製）によって測定）は、擬似糖質Ｇ１を含むＰＡ‐ＩＬの滴定から求めた。下のパネルのプロットは、上のパネルに示されている滴定に対する総リガンド濃度の関数としての、放出された総熱量を示す。実線は、１点モデルを用いた実験データに最良な最小二乗適合を表す。注入剤（縦軸）のｋｃａｌ／モル‐濃度（モル比）。Microcalorimetric data. The ITC plot (measured by VP-ITC (manufactured by Microcal)) was obtained from the titration of PA-IL containing pseudo-carbohydrate G1. The lower panel plot shows the total heat released as a function of total ligand concentration for the titration shown in the upper panel. The solid line represents the best least squares fit to experimental data using a one point model. Kcal / mole-concentration (molar ratio) of injectant (vertical axis). 細菌接着アッセイ。擬似ガラクトＧ１（Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）阻害剤の濃度変化に伴うＮＣＩ‐Ｈ２９２細胞に対する緑膿菌（ＰＡＯ１）接着の阻害率。阻害％（縦軸）‐濃度（横軸、μΜ）。Bacterial adhesion assay. Percentage inhibition of Pseudomonas aeruginosa (PAO1) adhesion to NCI-H292 cells with changes in concentration of pseudo-galacto G1 (Man (POProTzPhe-O-Gal) 4 ) inhibitor. % Inhibition (vertical axis) -concentration (horizontal axis, μΜ). Ｏ‐ビフェニル(biphenyle)、Ｏ‐ナフチル(naphthyle)ガラクトシド５及び６の合成を示すスキームである。1 is a scheme showing the synthesis of O-biphenyle and O-naphthyle galactosides 5 and 6. Ｓ‐ビフェニル、Ｓ‐ナフチルガラクトシド５Ｓ及び６Ｓの合成を示すスキームである。It is a scheme showing the synthesis of S-biphenyl, S-naphthylgalactoside 5S and 6S. 糖鎖クラスターＧ１〜Ｇ２４の合成を示すスキームである。It is a scheme which shows the synthesis | combination of sugar chain cluster G1-G24.

本発明の更なる特徴及び利点は、以下に挙げられている添付図面を参照し、非限定的な例として示されている本発明の実施形態の次の説明から明らかになる。   Further features and advantages of the present invention will become apparent from the following description of embodiments of the invention, given by way of non-limiting example, with reference to the accompanying drawings listed below.

発明の詳細な説明
本発明は、次の式（Ｉ）に対応する分子を提供する。
式中、
ｎは、３、４、５、６、７、８、９、１０から選択される整数であり、
Ｇａｌは、次式に示す、ガラクトピラノシル、１‐チオガラクトピラノシル、１‐メチレンガラクトピラノシル、１‐Ｎ‐アセチル‐ガラクトピラノシルから選択される基を表し、
Ｋは、次のものから選択される、３〜６個のリン酸基又はチオリン酸基又はホスホルアミダート基（Ｐｈｏ）を含む式（ＫＩ）又は（ＫＩＩ）の分子を表す。
式中、ＸはＯ又はＳを表し、
リン酸基の１又は２個の酸素原子は、共有結合によってＬ１リンカーアームに結合しており、
第１の実施形態によれば、式（Ｉ）の分子はコアが中心にあるクラスターであり、
リン酸基又はチオリン酸基又はホスホルアミダート基Ｐｈｏのいずれかは、以下の式（ＫＩ）に表されているように、同一の中心Ｋ’にすべて結合しており、
Ｋ’は、４〜２４個の炭素原子と、０〜１２個の酸素原子と、対応する数の水素原子とを含む分子を表し、
Ｐｈｏの１個の酸素原子は、共有結合によってＫ’に結合している。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION The present invention provides molecules corresponding to the following formula (I):
Where
n is an integer selected from 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10;
Gal represents a group selected from galactopyranosyl, 1-thiogalactopyranosyl, 1-methylenegalactopyranosyl, 1-N-acetyl-galactopyranosyl represented by the following formula:
K represents a molecule of the formula (KI) or (KII) containing 3 to 6 phosphate groups or thiophosphate groups or phosphoramidate groups (Pho) selected from:
In which X represents O or S;
1 or 2 oxygen atoms of the phosphate group are covalently bonded to the L1 linker arm,
According to a first embodiment, the molecule of formula (I) is a cluster centered on the core,
Either a phosphate group or a thiophosphate group or a phosphoramidate group Pho is all bonded to the same center K ′ as represented by the following formula (KI):
K ′ represents a molecule comprising 4 to 24 carbon atoms, 0 to 12 oxygen atoms and a corresponding number of hydrogen atoms,
One oxygen atom of Pho is bonded to K ′ by a covalent bond.

Ｋ’に結合するＰｈｏ基の数は、１〜９に及び得る。例示のみの目的で、５個のＰｈｏ基が図（ＫＩ）に表されている。   The number of Pho groups attached to K 'can range from 1-9. For illustrative purposes only, five Pho groups are represented in the figure (KI).

（ＫＩ）では、Ｐｈｏ基は、１つのリン酸又はチオリン酸結合によってコアＫ’に結合し、次のものから選択される。
In (KI), the Pho group is linked to the core K ′ by one phosphate or thiophosphate linkage and is selected from:

（ＫＩ）では、リン酸基又はチオリン酸基は、リンカーアーム‐Ｌ１‐Ｔ‐Ｌ２‐を介して１又は２個のＧａｌ基に結合することができるので、ｘは１又は２であり、
第２の実施形態によれば、式（Ｉ）の分子は櫛状クラスターであり、
リン酸基若しくはチオリン酸基若しくはホスホルアミダート基は、以下の式（ＫＩＩ）に表されているように、鎖を形成する。
式中、Ｋ”は、４〜１２個の炭素原子と、０〜６個の酸素原子と、０〜６個の窒素原子と、対応する数の水素原子とを含む分子を表し、
Ｅは、０〜１２個の炭素原子と、０〜６個の酸素原子と、０〜６個の窒素原子と、対応する数の水素原子とを含む末端基を表す。 In (KI), x is 1 or 2 because the phosphate or thiophosphate group can be linked to 1 or 2 Gal groups via the linker arm -L1-T-L2-.
According to a second embodiment, the molecule of formula (I) is a comb cluster,
The phosphate group, thiophosphate group, or phosphoramidate group forms a chain as represented by the following formula (KII).
Where K ″ represents a molecule comprising 4 to 12 carbon atoms, 0 to 6 oxygen atoms, 0 to 6 nitrogen atoms, and a corresponding number of hydrogen atoms,
E represents a terminal group containing 0 to 12 carbon atoms, 0 to 6 oxygen atoms, 0 to 6 nitrogen atoms, and a corresponding number of hydrogen atoms.

本実施形態によれば、Ｋ”及びＥは、例えば、アルカン又はシクロアルカンジラジカル、アルキレングリコールジラジカル、炭水化物ジラジカル又はヌクレオチドジラジカル、芳香環とＰｈｏの‐Ｏ‐との間に少なくとも２個の‐ＣＨ２‐基を含むアラルキルジラジカルであってもよく、
ＥもＨであってもよく、
ｍは、２、３、４、５、６、７、８、９から選択される整数を表し、
Ｐｈｏの２個の酸素原子は、共有結合によってＫ”基又はＥに結合しており、
Ｐｈｏは次のものから選択され、
式中、ＸはＯ又はＳである。
Ｌ１は、
１つ又は複数のエーテル架橋‐Ｏ‐を含む可能性がある、直鎖、分岐又は環状Ｃ１‐Ｃ１８アルキルジラジカル、
２〜６つのエチレングリコール単位を含むポリ（エチレングリコール）ジラジカル、
２〜６つのプロピレングリコール単位を含むポリ（プロピレングリコール）ジラジカル
から選択されるリンカーアームを表し、
Ｔは、
トリアゾールジラジカル
チオ架橋‐Ｓ‐
から選択される連結基を表し、
Ｌ２は、以下の式に表される式‐Ｌ２１‐Ａｒ‐Ｌ２２‐に対応するリンカーアームを表す。
式中、
Ｌ２１は、アミド架橋‐ＣＯ‐ＮＨ‐、エーテル架橋‐Ｏ‐、チオ架橋‐Ｓ‐、アミン架橋‐ＮＨ‐から選択される１個又は複数の基を含む可能性がある、直鎖、分岐又は環状Ｃ１‐Ｃ１２アルキルジラジカルを表し、
Ａｒは、必要に応じて１〜６個のヘテロ原子を含むＣ６‐Ｃ１８芳香族ジラジカルを表し、
Ｌ２２は共有結合を表すか、又は、Ｇａｌがガラクトピラノシル、１‐チオガラクトピラノシルを表す場合、Ｌ２２は‐ＣＨ２‐基であり得る。 According to this embodiment, K ″ and E are, for example, at least two —CH 2 between an aromatic ring and Pho —O—, eg, an alkane or cycloalkane diradical, an alkylene glycol diradical, a carbohydrate diradical or a nucleotide diradical. -May be an aralkyl diradical containing a group,
E may be H,
m represents an integer selected from 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9;
The two oxygen atoms of Pho are covalently bonded to the K ″ group or E,
Pho is selected from:
In the formula, X is O or S.
L1 is
A linear, branched or cyclic C1-C18 alkyl diradical, which may contain one or more ether bridges —O—
A poly (ethylene glycol) diradical containing 2 to 6 ethylene glycol units,
Represents a linker arm selected from poly (propylene glycol) diradicals containing 2 to 6 propylene glycol units;
T is
Triazole diradical
Thio bridge -S-
Represents a linking group selected from
L 2 represents a linker arm corresponding to the formula -L 21 -Ar-L 22 -represented by the following formula.
Where
L 21 is linear, branched, which may contain one or more groups selected from amide bridged —CO—NH—, ether bridged —O—, thio bridged —S—, amine bridged —NH— Or a cyclic C1-C12 alkyl diradical,
Ar represents a C6-C18 aromatic diradical optionally containing 1-6 heteroatoms;
L 22 represents a covalent bond, or when Gal represents galactopyranosyl, 1-thiogalactopyranosyl, L 22 can be a —CH 2 — group.

好適な変形例によれば、Ｇａｌは、β‐Ｄ‐ガラクトピラノシル基、又はβ‐Ｄ‐チオ‐１‐ガラクトピラノシル基を表す。Ｇａｌは、式（Ｉ）において、β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルを表すことが好ましい。   According to a preferred variant, Gal represents a β-D-galactopyranosyl group or a β-D-thio-1-galactopyranosyl group. Gal preferably represents β-D-galactopyranosyl in formula (I).

好適な変形例によれば、Ｔはトリアゾールジラジカルを表す。   According to a preferred variant, T represents a triazole diradical.

トリアゾール基は非対称である。式（Ｉ）において、トリアゾール環の窒素原子はＬ１に結合することができ、炭素原子はＬ２に結合しているか、又は、窒素原子はＬ２に結合することができ、炭素原子はＬ１に結合している。 Triazole groups are asymmetric. In formula (I), the nitrogen atom of the triazole ring can be bonded to L 1 and the carbon atom can be bonded to L 2 or the nitrogen atom can be bonded to L 2 and the carbon atom is L 1

実験の部に開示されている分子に示されているように、結合は、次に示すものであることが好ましい。
As shown in the molecules disclosed in the experimental part, the binding is preferably as follows:

好適な変形例によれば、Ｌ１は、直鎖Ｃ２‐Ｃ６アルキル鎖、２，２‐ビス（メチルオキシメチル）エチル、２〜４つのエチレングリコール単位を含むポリ（エチレングリコール）ジラジカルから選択されるリンカーアームを表す。   According to a preferred variant, L1 is selected from a linear C2-C6 alkyl chain, 2,2-bis (methyloxymethyl) ethyl, a poly (ethylene glycol) diradical containing 2 to 4 ethylene glycol units. Represents a linker arm.

好適な変形例によれば、Ｌ２１は、末端においてＡｒ基に結合している１個のアミド官能基‐ＣＯ‐ＮＨ‐を含むＣ１‐Ｃ１２直鎖アルキル鎖を表す。アミド結合を介する結合は、アルキル‐ＣＯ‐ＮＨ‐Ａｒ又はＡｒ‐ＣＯ‐ＮＨ‐アルキルであり得る。実験の部に示されているように、結合はアルキル‐ＣＯ‐ＮＨ‐Ａｒであることが好ましい。 According to a preferred variant, L 21 represents a C1-C12 linear alkyl chain comprising one amide function —CO—NH— which is bonded to the Ar group at the end. The bond via the amide bond can be alkyl-CO-NH-Ar or Ar-CO-NH-alkyl. As shown in the experimental part, the bond is preferably alkyl-CO-NH-Ar.

好適な変形例によれば、ＡｒはＣ６‐Ｃ１２芳香族ジラジカルを表し、Ａｒは、フェニル、ナフタレニル、１，４‐ビフェニルから選択される基を表すことが好ましく、Ａｒはフェニルであり、１，４位において置換されていることが更に好ましい。   According to a preferred variant, Ar represents a C6-C12 aromatic diradical, Ar preferably represents a group selected from phenyl, naphthalenyl, 1,4-biphenyl, Ar is phenyl, More preferably, it is substituted at the 4-position.

好適な変形例によれば、Ｌ２２は共有結合を表す。 According to a preferred variant, L 22 represents a covalent bond.

第１の実施形態によれば、Ｋは式（ＫＩ）によって表される。本変形例によれば、Ｋは、次に示すＰｈｏ懸垂基を３、４又は５個含むことが好ましい。
According to the first embodiment, K is represented by the formula (KI). According to this modification, K preferably includes 3, 4 or 5 Pho pendant groups as shown below.

本変形例によれば、ｘは１であり、Ｋは、次に示すＰｈｏ懸垂基を３、４又は５個含むことが更により好ましい。
According to this variation, x is 1, and it is even more preferable that K includes 3, 4 or 5 Pho pendant groups as shown below.

Ｋ’は、直鎖、分岐又は環状アルカンポリラジカルを表し得る。Ｋ’は、直鎖、分岐又は環状アルカノール(alcanol)ポリラジカルを表し得る。また、Ｋ’は、直鎖、分岐又は環状炭水化物ポリラジカルも表し得る。   K 'may represent a linear, branched or cyclic alkane polyradical. K 'may represent a linear, branched or cyclic alkanol polyradical. K 'may also represent a linear, branched or cyclic carbohydrate polyradical.

本変形例によれば、Ｋ’は、ピラノース及びフラノースから選択される炭水化物を表すことが有利である。本変形例によれば、Ｋ’は、マンノース、ガラクトース、グルコース、アラビノース、キシロース、リボース及びラクトースから選択される炭水化物を表すことが更により好ましい。   According to this variant, K ′ advantageously represents a carbohydrate selected from pyranose and furanose. According to this variant, it is even more preferred that K ′ represents a carbohydrate selected from mannose, galactose, glucose, arabinose, xylose, ribose and lactose.

別の実施形態によれば、Ｋは式（ＫＩＩ）によって表される。本変形例によれば、Ｋ”は、４〜１０個の炭素原子を含む、直鎖、分岐又は環状アルカンジイル基を表し、Ｐｈｏは、
であることが好ましい。 According to another embodiment, K is represented by formula (KII). According to this variant, K ″ represents a linear, branched or cyclic alkanediyl group containing 4 to 10 carbon atoms, Pho is
It is preferable that

本変形例によれば、Ｋ”は、１，４‐ジメチルシクロヘキシル、１，４‐ジエチルシクロヘキシルから選択される基を表すことが更により好ましい。   According to this variant, it is even more preferred that K ″ represents a group selected from 1,4-dimethylcyclohexyl, 1,4-diethylcyclohexyl.

本発明の目的は、次の式（ＩＩ）に対応する分子によっても達成される。
式中、
Ｋは、マンノース、ガラクトース、グルコース、アラビノース、キシロース、リボース及びラクトースからなる群より選択される炭水化物を表し、
Ｐｈｏは、
からなる群より選択されるリン酸基(phosphorous group)を表す。
式中、ＸはＯ又はＳを表し、
リン酸基の１又は２個の酸素原子は、共有結合によってＬ１リンカーアームに結合しており、
Ｌ１は、
直鎖又は分岐Ｃ１‐Ｃ３アルキルジラジカル、直鎖、分岐又は環状Ｃ４‐Ｃ６アルキルジラジカル、１つ又は複数のエーテル架橋‐Ｏ‐を含む可能性がある、直鎖、分岐又は環状Ｃ７‐Ｃ１２アルキルジラジカル、
２、３、４、５又は６つのエチレングリコール単位を含むポリ（エチレングリコール）ジラジカル、
２、３、４、５又は６つのプロピレングリコール単位を含むポリピレングリコールジラジカル、
からなる群より選択されるリンカーアームを表す。
Ｔは、
トリアゾ−ルジラジカル
からなる群より選択される連結基を表し、
Ｌ２は、
（式中、ｎ及びｍは、１、２、３、４又は５から選択される整数を表す。）
からなる群より選択されるリンカーアームを表し、
Ａｒは、フェニル、ナフタレニル及び１，４‐ビフェニル
からなる群より選択され、
Ｌ３はＯ、Ｓ又は‐ＣＨ２を表し、
Ｇａｌは、次式のβ‐Ｄ‐ガラクトピラノシル基を表す。
The object of the present invention is also achieved by a molecule corresponding to the following formula (II).
Where
K represents a carbohydrate selected from the group consisting of mannose, galactose, glucose, arabinose, xylose, ribose and lactose;
Pho is
Represents a phosphoric group selected from the group consisting of
In which X represents O or S;
1 or 2 oxygen atoms of the phosphate group are covalently bonded to the L 1 linker arm,
L 1 is
Linear, branched or cyclic C 1 -C 3 alkyl diradical, linear, branched or cyclic C 4 -C 6 alkyl diradical, which may contain one or more ether bridges —O— 7 -C 12 alkyl diradical,
A poly (ethylene glycol) diradical containing 2, 3, 4, 5 or 6 ethylene glycol units,
A polypyrene glycol diradical containing 2, 3, 4, 5 or 6 propylene glycol units;
Represents a linker arm selected from the group consisting of
T is
Triazol diradical
Represents a linking group selected from the group consisting of
L 2 is
(In the formula, n and m represent an integer selected from 1, 2, 3, 4 or 5.)
Represents a linker arm selected from the group consisting of
Ar is phenyl, naphthalenyl and 1,4-biphenyl
Selected from the group consisting of
L 3 represents O, S or —CH 2 ,
Gal represents a β-D-galactopyranosyl group of the following formula.

‐Ｏ‐基はＬ３に相当することに留意する必要がある。
ｚは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０から選択される整数である。 It should be noted that the —O— group corresponds to L 3 .
z is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10.

好適な変形例によれば、Ｋは、Ｄ‐マンノピラノシル形態下のマンノースを表す。   According to a preferred variant, K represents mannose under the D-mannopyranosyl form.

好適な変形例によれば、Ｌ１は、Ｐｒｏ（１，３‐ｎ‐プロピル）基、ＥＧ２Ｍ（ジエチレングリコールメチレン）、ＥＧ３Ｍ（トリエチレングリコールメチレン）、ＥＧ４Ｍ（テトラエチレングリコールメチレン）を表す。 According to a preferred variant, L 1 represents a Pro (1,3-n-propyl) group, EG2M (diethylene glycol methylene), EG3M (triethylene glycol methylene), EG4M (tetraethylene glycol methylene).

好適な変形例によれば、Ａｒはフェニル基である。   According to a preferred variant, Ar is a phenyl group.

好適な変形例によれば、ｚは３又は４である。   According to a preferred variant, z is 3 or 4.

式（Ｉ）又は（ＩＩ）に対応する好ましい分子を以下に挙げる。
（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）５
Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｇａｌ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｇｌｃ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８
Ｍａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４

Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４

Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４

Ｍａｎ（ＰＳＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４

Ｍａｎ（ＰＳＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４

Ｍａｎ（ＰＳＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４

Ｍａｎ（ＰＳＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４

（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）５
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）５
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）５
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）５
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）５
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）５
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）５
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）３
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）５
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈ‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈ‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈ‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈ‐ＳＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ３ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ３ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ２ＭＴｚ ＡｃＮＰｈ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ３ＭＴｚ ＡｃＮＰｈ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ２ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＥＧ２ＭＴｚｐｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４

（ＤＭＣＨ‐ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＤＭＣＨＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＤＭＣＨＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＤＭＣＨＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＤＭＣＨＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＢｉｓｐｈｅ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＰｒｏＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＯＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＳＧａｌ）４
（ＤＭＣＨ‐ＰＳＤＭＣＨＭＴｚＰｒｏＮＣＯＮａｐｈｔ‐ＳＧａｌ）４

式中、ＤＭＣＨは１，４‐ジメチルシクロヘキシルを表し、Ｍａｎはマンノースを表し、Ｇｌｃはグルコースを表し、
Ｐｒｏは１，３‐ｎ‐プロピルを表し、Ｈｅｘは１，６‐ｎ‐ヘキシルを表し、ＴＨＭＥはトリス‐（ヒドロキシメチル）エタンを表し、
Ｔｚはトリアゾールを表し、
ＰＮはホスホルアミダート結合を表し、
ＰＯはリン酸結合を表し、
ＰＳはホスホロチオアート結合を表し、
ＥＧ２はジエチレングリコールを表し、
ＥＧ３はトリエチレングリコールを表し、
ＥＧ４はテトラエチレングリコールを表し、
ＡｃＮＰｈｅは次式のアセトアミドフェニルを表し、
Ｍはメチレンを表し、
‐Ｏ‐Ｇａｌはガラクトピラノシルを表し、
Ｓ‐Ｇａｌは１‐チオガラクトピラノシルを表し、
‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌは、１‐メチレンガラクトピラノシルを表し、
‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌは、１‐メチレンチオガラクトピラノシルを表し、
‐ＮＡｃ‐Ｇａｌは、１‐Ｎ‐アセチルガラクトピラノシルを表す。 Preferred molecules corresponding to formula (I) or (II) are listed below.
(DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 3
(DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 4
(DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 5
Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4
Gal (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4
Glc (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (POEG 3 MTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (POEG 4 MTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 8
Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 8
Man (POEG 3 MTzAcNPhe-O-Gal) 8
Man [POTHME (MTzAcNPhe-O-Gal) 2 ] 4

Man (POProTzAcNPhe-S-Gal) 4
Man (POEG 2 MTzAcNPhe-S-Gal) 4
Man (POEG 3 MTzAcNPhe-S-Gal) 4
Man (POEG 4 MTzAcNPhe-S-Gal) 4
Man (POProTzAcNPhe-CH 2 -O- Gal) 4
Man (POEG 2 MTzAcNPhe-CH 2 -O-Gal) 4
Man (POEG 3 MTzAcNPhe-CH 2 -O-Gal) 4
Man (POEG 4 MTzAcNPhe-CH 2 -O-Gal) 4

Man (POProTzAcNPhe-CH 2 -S- Gal) 4
Man (POEG 2 MTzAcNPhe-CH 2 -S-Gal) 4
Man (POEG 3 MTzAcNPhe-CH 2 -S-Gal) 4
Man (POEG 4 MTzAcNPhe-CH 2 -S-Gal) 4

Man (PSProTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (PSEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (PSEG 3 MTzAcNPhe-O-Gal) 4
Man (PSEG 4 MTzAcNPhe-O-Gal) 4

Man (PSProTzAcNPhe-S-Gal) 4
Man (PSEG 2 MTzAcNPhe-S-Gal) 4
Man (PSEG 3 MTzAcNPhe-S-Gal) 4
Man (PSEG 4 MTzAcNPhe-S-Gal) 4

Man (PSProTzAcNPhe-CH 2 -O- Gal) 4
Man (PSEG 2 MTzAcNPhe-CH 2 -O-Gal) 4
Man (PSEG 3 MTzAcNPhe-CH 2 -O-Gal) 4
Man (PSEG 4 MTzAcNPhe-CH 2 -O-Gal) 4

Man (PSProTzAcNPhe-CH 2 -S- Gal) 4
Man (PSEG 2 MTzAcNPhe-CH 2 -S-Gal) 4
Man (PSEG 3 MTzAcNPhe-CH 2 -S-Gal) 4
Man (PSEG 4 MTzAcNPhe-CH 2 -S-Gal) 4

(DMCH-POMTzAcNPhe-O-Gal) 3
(DMCH-POMTzAcNPhe-O-Gal) 4
(DMCH-POMTzAcNPhe-O-Gal) 5
(DMCH-POMTzAcNPhe-S-Gal) 3
(DMCH-POMTzAcNPhe-S-Gal) 4
(DMCH-POMTzAcNPhe-S-Gal) 5
(DMCH-POMTzAcNPhe-CH 2 -O -Gal) 3
(DMCH-POMTzAcNPhe-CH 2 -O -Gal) 4
(DMCH-POMTzAcNPhe-CH 2 -O -Gal) 5
(DMCH-POMTzAcNPhe-CH 2 -S -Gal) 3
(DMCH-POMTzAcNPhe-CH 2 -S -Gal) 4
(DMCH-POMTzAcNPhe-CH 2 -S -Gal) 5
(DMCH-PSMTzAcNPhe-O-Gal) 3
(DMCH-PSMTzAcNPhe-O-Gal) 4
(DMCH-PSMTzAcNPhe-O-Gal) 5
(DMCH-PSMTzAcNPhe-S-Gal) 3
(DMCH-PSMTzAcNPhe-S-Gal) 4
(DMCH-PSMTzAcNPhe-S-Gal) 5
(DMCH-PSMTzAcNPhe-CH 2 -O -Gal) 3
(DMCH-PSMTzAcNPhe-CH 2 -O -Gal) 4
(DMCH-PSMTzAcNPhe-CH 2 -O -Gal) 5
(DMCH-PSMTzAcNPhe-CH 2 -S -Gal) 3
(DMCH-PSMTzAcNPhe-CH 2 -S -Gal) 4
(DMCH-PSMTzAcNPhe-CH 2 -S -Gal) 5
Man (PSEG2MTzAcNPhe-CH 2 -Gal) 4
Man (PSEG3MTzAcNPhe-CH 2 -Gal) 4
Man (EG2MTzAcNPhe-CH 2 -Gal) 4
Man (EG3MTzAcNPhe-CH 2 -Gal) 4
Man (EG2MTzAcNPhe-CH 2 -SGal) 4
Man (EG3MTzAcNPhe-CH 2 -SGal) 4
Man (PSEG3MTzAcNPh-Gal) 4
Man (PSEG3MTzAcNPhe-CH 2 -SGal) 4
Man (PSEG2MTzAcNPhe-CH 2 -SGal) 4
Man (PSEG3MTzAcNPh-SGal) 4
Man (PSEG2MTzAcNPh-Gal) 4
Man (PSEG2MTzAcNPh-SGal) 4
Man (EG2MTzAcNPh-SGal) 4
Man (EG3MTzAcNPh-SGal) 4
Man (EG3MTzproNCONaphth-OGal) 4
Man (EG3MTzproNCOBisphere-OGal) 4
Man (PSEG3MTzproNCOBisphere-OGal) 4
Man (PSEG2MTzproNCOBisphere-OGal) 4
Man (EG2MTz AcNPh-Gal) 4
Man (PSEG3MTzproNCONaphth-OGal) 4
Man (EG3MTz AcNPh-Gal) 4
Man (PSEG2MTzproNCONaphth-OGal) 4
Man (EG2MTzproNCOBisphere-OGal) 4
Man (EG2MTzproNCONaphth-OGal) 4

(DMCH-POProTzAcNPhe-OGal) 4
(DMCH-PSProTzAcNPhe-OGal) 4
(DMCH-PODMCHMTzAcNPNPhe-OGal) 4
(DMCH-PSDMCHMTzAcNPNPhe-OGal) 4
(DMCH-POProTzAcNPhe-SGal) 4
(DMCH-PSProTzAcNPhe-SGal) 4
(DMCH-PODMCHMTzAcNPNPhe-SGal) 4
(DMCH-PSDMCHMTzAcNPNPhe-SGal) 4
(DMCH-POProTzProNCOBisphere-OGal) 4
(DMCH-PSProTzProNCOBisphere-OGal) 4
(DMCH-PODMCHMTzProNCO Bisphe-OGal) 4
(DMCH-PSDMCHMTzProNCOBisphere-OGal) 4
(DMCH-POProTzProNCO Bisphe-SGal) 4
(DMCH-PSProTzProNCOBisphere-SGal) 4
(DMCH-PODMCHMTzProNCO Bisphe-SGal) 4
(DMCH-PSDMCHMTzProNCOBisphere-SGal) 4
(DMCH-POProTzProNCONaphth-OGal) 4
(DMCH-PSProTzProNCONaphth-OGal) 4
(DMCH-PODMCHMTzProNCONaphth-OGal) 4
(DMCH-PSDMCHMTzProNCONaphth-OGal) 4
(DMCH-POProTzProNCONaphth-SGal) 4
(DMCH-PSProTzProNCONapht-SGal) 4
(DMCH-PODMCHMTzProNCONapht-SGal) 4
(DMCH-PSDMCHMTzProNCONaphth-SGal) 4

Where DMCH represents 1,4-dimethylcyclohexyl, Man represents mannose, Glc represents glucose,
Pro represents 1,3-n-propyl, Hex represents 1,6-n-hexyl, THME represents tris- (hydroxymethyl) ethane,
Tz represents triazole,
PN represents a phosphoramidate bond,
PO represents a phosphate bond,
PS represents a phosphorothioate bond,
EG2 represents diethylene glycol,
EG3 represents triethylene glycol,
EG4 represents tetraethylene glycol,
AcNPhe represents acetamidophenyl of the formula:
M represents methylene,
-O-Gal represents galactopyranosyl,
S-Gal represents 1-thiogalactopyranosyl,
-CH 2 -O-Gal represents a 1-methylene-galactopyranosyl,
-CH 2 -S-Gal represents a 1-methylene-thio-galactopyranosyl,
-NAc-Gal represents 1-N-acetylgalactopyranosyl.

直鎖（ＤＭＣＨ）糖鎖クラスターはホスホルアミダート結合（ＰＮ）、ホスホトリエステル結合（ＰＯ）又はチオノホスホトリエステル結合（ＰＳ）を有し、また、ヘキソースが中心にある糖鎖クラスター（Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｇｌｃ）は、リン酸結合（ＰＯ）又はチオリン酸(thionophosphate)結合（ＰＳ）を有する。   A linear (DMCH) sugar chain cluster has a phosphoramidate bond (PN), a phosphotriester bond (PO) or a thionophosphotriester bond (PS), and a sugar chain cluster ( Man, Gal, Glc) has a phosphate bond (PO) or a thionophosphate bond (PS).

これらの分子の調製は、以下の実験の部に詳細に開示されている。   The preparation of these molecules is disclosed in detail in the experimental section below.

図６は、Ｋが式（ＫＩ）によって表されているコア構造である式（Ｉ）に対応する分子の調製スキームを示している。概略的に、ＯＨ官能化コアＫ’は、工程１）において、固体支持体
上にグラフト化される。ただし、この工程は必須ではなく、合成は溶液中で達成することができる。その後、工程２）において、ＨＣ≡Ｃ官能化リンカーＬ１Ｐｈｏ基は、Ｋ’が有するヒドロキシル官能基にグラフト化される。図６にはＰｈｏ基ごとに１つのみのグラフトが示されているが、１又は２つのグラフトをＰｈｏ上で操作することができる。工程３）において、
によってクリック化学反応が達成される。
式中、Ｇａｌ＊は、ＯＨ官能基上に保護基を有するＧａｌ残基を表す。詳細な操作方式は、図１及び実験の部に示されている。あるいは、保護基のないＧａｌ残基を用いることができる。トリアゾールＴｚは、次に示す置換基とのこの反応によって形成される。
FIG. 6 shows the preparation scheme of the molecule corresponding to formula (I), where K is the core structure represented by formula (KI). In general, the OH functionalized core K ′ is a solid support in step 1).
Grafted on top. However, this step is not essential and the synthesis can be accomplished in solution. Thereafter, in step 2), the HC≡C functionalized linker L 1 Pho group is grafted to the hydroxyl functional group possessed by K ′. Although only one graft per Pho group is shown in FIG. 6, one or two grafts can be manipulated on Pho. In step 3)
A click chemistry is achieved.
In the formula, Gal * represents a Gal residue having a protecting group on the OH functional group. The detailed operation method is shown in FIG. 1 and the experimental part. Alternatively, a Gal residue without a protecting group can be used. Triazole Tz is formed by this reaction with the substituents shown below.

逆の置換は、Ｎ３とアルキン(alcyne)残基の反転によって行うことができる。   The reverse substitution can be made by inversion of N3 and an alkyne residue.

チオエーテル結合は、チオールをハロゲン（特に、臭素）と反応させて、公知の方法でＴｚを置換することにより得ることができる。   The thioether bond can be obtained by reacting thiol with halogen (particularly bromine) and substituting Tz by a known method.

工程５）において、保護基は、存在する場合、Ｇａｌから除去され、必要に応じて、固体支持体との結合が切断される。   In step 5), the protecting group, if present, is removed from the Gal and, if necessary, the bond with the solid support is cleaved.

図７ａ及び７ｂは、Ｋが式（ＫＩＩ）によって表されている櫛状構造である式（Ｉ）に対応する分子の調製スキームを示している。   Figures 7a and 7b show the preparation scheme of the molecule corresponding to formula (I), where K is a comb-like structure represented by formula (KII).

図７ａでは、概略的に、Ｈ‐ホスホネート断片Ｋ”を、工程１）において、固体支持体
の末端基Ｅと反応させる。その後、工程２）において、Ｋ”の保護基Ｒ（ジメトキシトリチル）が除去される。工程３）において、第２のＨ‐ホスホネート断片Ｋ”を反応させ、工程４）において、Ｒ基が除去される。工程３）、４）は、所望の（ｍ）値を得るように繰り返される。工程５）において、ＨＣ≡Ｃ官能化リンカーＬ１がＰｈｏ基上にグラフト化され、リン酸塩がホスホルアミダートに変換される。工程６）において、
によってクリック化学反応が達成される。
式中、Ｇａｌ＊は、ＯＨ官能基上に保護基を有するＧａｌ残基を表す。あるいは、保護基のないＧａｌ残基を用いることができる。トリアゾールＴｚは、次に示す置換基とのこの反応によって形成される。
In FIG. 7a, schematically, the H-phosphonate fragment K ″ is converted into a solid support in step 1).
Reaction with the terminal group E. Thereafter, in step 2) the protecting group R (dimethoxytrityl) of K ″ is removed. In step 3) the second H-phosphonate fragment K ″ is reacted and in step 4) the R group is removed. The Steps 3) and 4) are repeated to obtain the desired (m) value. In step 5), the HC≡C functionalized linker L 1 is grafted onto the Pho group and the phosphate is converted to a phosphoramidate. In step 6)
A click chemistry is achieved.
In the formula, Gal * represents a Gal residue having a protecting group on the OH functional group. Alternatively, a Gal residue without a protecting group can be used. Triazole Tz is formed by this reaction with the substituents shown below.

逆の置換は、Ｎ３とアルキン残基の反転によって行うことができる。   The reverse substitution can be made by inversion of N3 and the alkyne residue.

あるいは(alternately)、チオエーテル結合は、チオールをハロゲン（特に、臭素）と反応させて、公知の方法でＴｚを置換することにより得ることができる。   Alternatively, a thioether bond can be obtained by reacting a thiol with a halogen (particularly bromine) and substituting Tz in a known manner.

工程７）において、保護基は、存在する場合、Ｇａｌから除去され、固体支持体との結合が加水分解される。   In step 7), if present, the protecting group is removed from the Gal and the bond with the solid support is hydrolyzed.

変形例によれば、図７ｂに記載されているように、Ｋ”アルキン‐Ｌ１官能化ホスホラミダイトを用いて、固体支持体上で合成を達成することができる。工程１）において、Ｋ”アルキン誘導体を末端基固体支持体と反応させ、リン酸トリエステル又はチオリン酸トリエステルに酸化させる。工程２）において、Ｒ保護基は除去され、工程３）において、第２のＫ”アルキン誘導体を加えて酸化させ、工程４）でのＲ除去後、工程３）及び４）は、所望の（ｍ）値を得るように繰り返される。工程５）において、
によってクリック化学反応が達成される。
式中、Ｇａｌ＊は、ＯＨ官能基上に保護基を有するＧａｌ残基を表す。あるいは、保護基のないＧａｌ残基を用いることができる。トリアゾールＴｚは、次に示す置換基とのこの反応によって形成される。
According to a variant, synthesis can be achieved on a solid support using K "alkyne-L 1 functionalized phosphoramidite as described in FIG. 7b. In step 1), K" alkyne. The derivative is reacted with a terminal group solid support and oxidized to a phosphate triester or thiophosphate triester. In step 2), the R protecting group is removed, in step 3) a second K ″ alkyne derivative is added to oxidize, and after removal of R in step 4), steps 3) and 4) are performed in the desired ( m) repeated to obtain a value, in step 5)
A click chemistry is achieved.
In the formula, Gal * represents a Gal residue having a protecting group on the OH functional group. Alternatively, a Gal residue without a protecting group can be used. Triazole Tz is formed by this reaction with the substituents shown below.

逆の置換は、Ｎ３とアルキン残基の反転によって行うことができる。この場合、ブロモホスホラミダイト又はトシルホスホラミダイトが最初に調製され、次いで、アジド反応物による置換によってアジドホスホラミダイトに変換される。   The reverse substitution can be made by inversion of N3 and the alkyne residue. In this case, a bromophosphoramidite or tosylphosphoramidite is first prepared and then converted to an azidophosphoramidite by displacement with an azide reactant.

あるいは、チオエーテル結合は、チオールをハロゲン（特に、臭素）と反応させて、公知の方法でＴｚを置換することにより得ることができる。   Alternatively, the thioether bond can be obtained by reacting a thiol with a halogen (particularly bromine) and substituting Tz by a known method.

工程６）において、保護基は、（必要に応じて）Ｇａｌから除去され、固体支持体との結合が加水分解される。   In step 6), the protecting group is removed from Gal (if necessary) and the bond with the solid support is hydrolyzed.

好適な変形例によれば、固体支持体上で鎖の第１のＫ”基を先にグラフト化することによって、固体支持体上で合成を達成することができる。   According to a preferred variant, synthesis can be achieved on the solid support by first grafting the first K "group of the chain on the solid support.

本発明は、次の式（ＩＩ）に対応する分子も提供する。
式中、
Ｋ、ｎ、Ｇａｌ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２は、上述したものと同じ意味を有し、ｙはマーカーを表す。マーカーは、例えば、ＤＮＡ配列又は蛍光色素であってもよい。 The present invention also provides molecules corresponding to the following formula (II).
Where
K, n, Gal, T, L 1 and L 2 have the same meaning as described above, and y represents a marker. The marker may be, for example, a DNA sequence or a fluorescent dye.

かかる分子は、試験目的、特に診断目的に用いることができる。   Such molecules can be used for testing purposes, particularly diagnostic purposes.

本発明の別の目的は、一般式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の少なくとも１つの化合物、又は医薬として許容し得るその塩と、医薬として許容し得る担体及び／又は賦形剤と、を含む医薬組成物である。   Another object of the present invention is a medicament comprising at least one compound of general formula (I) or (II), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient. It is a composition.

かかる賦形剤は、技能を有する専門家に周知であり、投与形式に応じて、幾つかあるパラメータの中で特に適している。   Such excipients are well known to skilled professionals and are particularly suitable among several parameters depending on the mode of administration.

かかる医薬組成物は、経口、局所、経皮、舌下、直腸下で、静脈内、筋肉内、腹腔内及び皮下経路を含む非経口経路で、治療される患者に適切な個々の用量により投与されるように製剤化されることが有利である。薬剤は、呼吸器官又は肺を介して投与されることが好ましい。   Such pharmaceutical compositions are administered by individual doses appropriate to the patient to be treated, by oral, topical, transdermal, sublingual, rectal, parenteral routes including intravenous, intramuscular, intraperitoneal and subcutaneous routes. It is advantageous to formulate as The drug is preferably administered via the respiratory tract or lung.

これらの化合物（Ｉ）又は（ＩＩ）及びこれらを含む医薬組成物は、特に嚢胞性線維症患者、又は院内感染の犠牲者であることが多い呼吸補助下にある患者において、緑膿菌からの感染を治療又は予防するために、呼吸器官内に吸入又は滴下されるように製剤化される。   These compounds (I) or (II) and pharmaceutical compositions comprising them have been obtained from Pseudomonas aeruginosa, particularly in patients with cystic fibrosis, or in patients with respiratory assistance who are often victims of nosocomial infections. Formulated to be inhaled or instilled into the respiratory tract to treat or prevent infection.

あるいは、化合物（Ｉ）又は（ＩＩ）及びこれらを含む医薬組成物は、特に熱傷又は褥瘡において、緑膿菌からの感染を予防又は治療するために、手当用品又は包帯の中か又はこれらの下に局所的に用いることができる。   Alternatively, compound (I) or (II) and a pharmaceutical composition comprising them can be used in or under a dressing or dressing to prevent or treat infection from Pseudomonas aeruginosa, particularly in burns or pressure ulcers. Can be used locally.

本発明に係る組成物は、固体、溶液、エマルジョン若しくは懸濁液を含む液体、又はゲル／クリームの形態であり、ヒトの医学において一般に用いられる医薬の形態、例えば、溶液、エマルジョン、素錠又は糖衣錠、ゼラチンカプセル、顆粒、坐剤、注入可能な製剤、軟膏、クリーム、ゲルにより提供することができ、これらは、通常の方法によって調製される。有効成分は、これらの医薬組成物に通常用いられる賦形剤、例えば、タルク、アラビアゴム、ラクトース、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、水性又は非水性ビヒクル、動物又は植物由来の脂肪性物質、パラフィン誘導体、グリコール、種々の湿潤剤、分散剤又は乳化剤、保存剤を用いて、組み込むことができる。   The composition according to the present invention is in the form of a solid, solution, emulsion or suspension, or gel / cream, in the form of pharmaceuticals commonly used in human medicine, for example solutions, emulsions, uncoated tablets or Dragees, gelatin capsules, granules, suppositories, injectable preparations, ointments, creams, gels can be provided and are prepared by conventional methods. The active ingredients are excipients usually used in these pharmaceutical compositions, such as talc, gum arabic, lactose, starch, magnesium stearate, aqueous or non-aqueous vehicles, fatty substances derived from animals or plants, paraffin derivatives, Glycols, various wetting agents, dispersing or emulsifying agents, preservatives can be used.

単回用量又は分割用量により投与される、本発明に係る使用における化合物の総一日量は、例えば、毎日体重１ ｋｇ当たり０．００１からおよそ１００ ｍｇの量であってもよい。   The total daily dose of the compound in the use according to the invention administered in a single dose or in divided doses may be, for example, in an amount of 0.001 to approximately 100 mg per kg body weight daily.

特定の患者に対する特定の用量レベルは、体重、健康状態、性別、食事、投与時間及び経路、腸吸収及び再吸収及び排泄のレベル、他の薬剤との併用、並びに治療される特定の症状の重症度を含む、種々の要因によって異なる。   Specific dose levels for specific patients include weight, health status, gender, diet, time and route of administration, levels of intestinal absorption and reabsorption and excretion, combinations with other drugs, and severity of specific symptoms being treated It depends on various factors, including the degree.

化合物（Ｉ）又は（ＩＩ）及びこれらを含む医薬組成物は、微生物病原体による感染、具体的には、感染の第一段階においてレクチンを利用する病原菌による感染、より具体的には細菌である緑膿菌による感染を予防し、遅延させ、弱化させ、治療的処置をする抗菌剤として有用である。   Compound (I) or (II) and a pharmaceutical composition comprising them may be used for infection by microbial pathogens, specifically infection by pathogens utilizing lectins in the first stage of infection, more specifically green, which is a bacterium. It is useful as an antibacterial agent to prevent, delay, attenuate, and therapeutically treat Pseudomonas aeruginosa infections.

本発明は、緑膿菌による毒性を予防し、遅延させ、弱化させ及び／又は阻害するのに用いる、式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の化合物又はこれを含む医薬組成物を対象とする。   The present invention is directed to a compound of formula (I) or (II) or a pharmaceutical composition comprising the same used to prevent, delay, attenuate and / or inhibit toxicity caused by Pseudomonas aeruginosa.

具体的には、本発明は、細菌である緑膿菌によるバイオフィルムの形成を予防し、遅延させ、弱化させ及び／又は阻害するのに用いる、式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の化合物又はこれを含む医薬組成物を対象とする。   Specifically, the present invention relates to a compound of formula (I) or (II) used for preventing, delaying, weakening and / or inhibiting the formation of a biofilm by Pseudomonas aeruginosa A pharmaceutical composition comprising

さらに、本発明は、一般式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の少なくとも１つの化合物、又は医薬として許容し得るその塩と、医薬として許容し得る担体及び／又は賦形剤と、少なくとも１つ以上の他の抗菌剤、又は１つ以上の他の抗病原性剤、又は宿主の先天免疫を強化する１つ以上の薬剤と、を含む医薬組成物を対象とする。   Furthermore, the present invention relates to at least one compound of general formula (I) or (II), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient, and at least one or more Pharmaceutical compositions comprising other antimicrobial agents, or one or more other anti-pathogenic agents, or one or more agents that enhance the host's innate immunity are intended.

より具体的には、本発明は、一般式（Ｉ）若しくは（ＩＩ）の少なくとも１つの化合物、又は医薬として許容し得るその塩と、医薬として許容し得る担体及び／又は賦形剤と、少なくとも１つの抗生物質と、を含む医薬組成物を更に対象とする。   More specifically, the present invention relates to at least one compound of general formula (I) or (II), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient, Further targeted is a pharmaceutical composition comprising an antibiotic.

本発明の別の目的は、１つ以上の薬剤、より具体的には１つ以上の抗菌剤、又は１つ以上の病原性剤、又は宿主の先天免疫を強化する１つ以上の薬剤と共同による、ヒト又は動物の細菌感染の予防、遅延、弱化及び治療における化合物（Ｉ）の使用である。   Another object of the invention is in conjunction with one or more agents, more specifically one or more antimicrobial agents, or one or more pathogenic agents, or one or more agents that enhance the host's innate immunity. The use of compound (I) in the prevention, delay, attenuation and treatment of bacterial infections in humans or animals.

一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）の少なくとも１つの化合物を含む組成物は、緑膿菌を捕捉することが可能な材料に用いることができる。   The composition comprising at least one compound of the general formula (I) or (II) can be used as a material capable of capturing Pseudomonas aeruginosa.

実験
命名法：
実験の部に示されている糖鎖クラスターに用いられる命名法：糖鎖クラスターはそれぞれ、足場（Ｋ）と、第１のリンカー（Ｌ１）と、連結基（Ｔ）と、第２のリンカー（Ｌ２）と、ガラクトース誘導体（Ｇａｌ）：Ｋ‐（‐Ｌ１‐Ｔ‐Ｌ２‐Ｇａｌ）ｎと、から構成される。 Experiment
Nomenclature:
The nomenclature used for the glycan clusters shown in the experimental part: the glycan clusters are respectively scaffold (K), first linker (L1), linking group (T) and second linker ( L2) and a galactose derivative (Gal): K-(-L1-T-L2-Gal) n.

用いられる足場は、ＤＭＣＨ（ジメチルシクロヘキサン）、Ｍａｎ（マンノース）、Ｇａｌ（ガラクトース）、Ｇｌｃ（グルコース）又はｄＴ（チミジン）であり、
ＰＮはホスホルアミダート結合を表し、
ＰＯはリン酸結合を表し、
ＰＳはホスホロチオアート結合を表す。
Ｌ１：Ｐｒｏ（１，３‐ｎ‐プロピル）、Ｈｅｘ（１，６‐ヘキシル）、ＥＧ２Ｍ（ジエチレングリコールメチレン）、ＥＧ３Ｍ（トリエチレングリコールメチレン）、ＥＧ４Ｍ（テトラエチレングリコールメチレン）、ＴＨＭＥ（トリス‐（ヒドロキシメチル）エタン）、
Ｔ：トリアゾールＴｚ、
Ｌ２：Ｐｒｏ（１，３‐ｎ‐プロピル）、ＥＧ２（ジエチレングリコール）、ＥＧ３（トリエチレングリコール）、ＤＭＣＨ（１，４‐ジメチルシクロヘキサン）、ＡｃＮＰｈｅ（アセトアミドフェニル(acetamidephenyl)）、Ｍ（メチレン）、ＢｕＴ（Ｎ３‐ブチル‐チミン）。
‐Ｏ‐Ｇａｌはガラクトピラノシルを表し、
‐Ｓ‐Ｇａｌは１‐チオガラクトピラノシルを表し、
‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌは、１‐メチレンガラクトピラノシルを表し、
‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌは、１‐メチレンチオガラクトピラノシルを表し、
‐ＮＡｃ‐Ｇａｌは、１‐Ｎ‐アセチルガラクトピラノシルを表す。 The scaffold used is DMCH (dimethylcyclohexane), Man (mannose), Gal (galactose), Glc (glucose) or dT (thymidine),
PN represents a phosphoramidate bond,
PO represents a phosphate bond,
PS represents a phosphorothioate bond.
L1: Pro (1,3-n-propyl), Hex (1,6-hexyl), EG2M (diethylene glycol methylene), EG3M (triethylene glycol methylene), EG4M (tetraethylene glycol methylene), THME (tris- (hydroxy) Methyl) ethane),
T: Triazole Tz,
L2: Pro (1,3-n-propyl), EG2 (diethylene glycol), EG3 (triethylene glycol), DMCH (1,4-dimethylcyclohexane), AcNPhe (acetamidephenyl), M (methylene), BuT (N3-butyl-thymine).
-O-Gal represents galactopyranosyl,
-S-Gal represents 1-thiogalactopyranosyl,
-CH 2 -O-Gal represents a 1-methylene-galactopyranosyl,
-CH 2 -S-Gal represents a 1-methylene-thio-galactopyranosyl,
-NAc-Gal represents 1-N-acetylgalactopyranosyl.

直鎖（ＤＭＣＨ）糖鎖クラスターはホスホルアミダート結合（ＰＮ）、ホスホトリエステル結合（ＰＯ）又はチオノホスホトリエステル結合（ＰＳ）を有し、また、ヘキソースが中心にある糖鎖クラスター（Ｍａｎ、Ｇａｌ、Ｇｌｃ）は、リン酸結合（ＰＯ）又はチオリン酸結合（ＰＳ）を有する。   A linear (DMCH) sugar chain cluster has a phosphoramidate bond (PN), a phosphotriester bond (PO) or a thionophosphotriester bond (PS), and a sugar chain cluster ( Man, Gal, Glc) has a phosphate bond (PO) or a thiophosphate bond (PS).

Ｉ‐実験‐一般的手順
ホスホラミダイト１(Meyer, A. et al., (2010) J. Org. Chem. 75, 6689-6692)、２(Lietard, J. et al., (2008) J. Org. Chem. 73, 191-200; Lietard, J. et al., Meyer, A., Vasseur, J. J., and Morvan, F. (2007) Tetrahedron Lett. 48, 8795-8798)、１ａ及び１ｄ(Gerland, B. et al., (2012) Bioconjugate Chem. 23, 1534-1547)、並びに、１ｅ(Ligeour, C. et al., (2012) Eur. J. Org. Chem., 1851-1856)と、アジド固体支持体５(Pourceau, G. et al., (2009) J. Org. Chem. 74, 6837-6842)の合成は、過去に報告されている。炭水化物誘導体３(Hasegawa, T. et al., (2007) Org. Biomol. Chem. 5 (15), 2404-2412)、４ａ(Joosten, J. A. F. et al., (2004) J. Med. Chem. 47, 6499-6508)、４ｂ(Szurmai, Z. et al., (1989) Acta Chimica Hungarica-Models in Chemistry 126, 259-269)、４ｃ(Pourceau, G. et al., (2009) J. Org. Chem. 74, 1218-1222)、４ｄ(Cecioni, S. et al., (2012) Chem. Eur. J. 18, 6250-6263)、４ｅ(Szurmai, Z. et al., (1989))、６(Hasegawa, T., et al. (2007))、１‐プロパギル‐Ｏ‐ガラクトピラノース及びグルコピラノース(Mereyala, H. B., and Gurrala, S. R. (1998) Carbohydr. Res. 307, 351-354)は、文献に従って調製した。 I- Experiment-General Procedure Phosphoramidite 1 (Meyer, A. et al., (2010) J. Org. Chem. 75, 6689-6692), 2 (Lietard, J. et al., (2008) J. Org Chem. 73, 191-200; Lietard, J. et al., Meyer, A., Vasseur, JJ, and Morvan, F. (2007) Tetrahedron Lett. 48, 8795-8798), 1a and 1d (Gerland, B. et al., (2012) Bioconjugate Chem. 23, 1534-1547), and 1e (Ligeour, C. et al., (2012) Eur. J. Org. Chem., 1851-1856) and azide The synthesis of solid support 5 (Pourceau, G. et al., (2009) J. Org. Chem. 74, 6837-6842) has been reported in the past. Carbohydrate derivatives 3 (Hasegawa, T. et al., (2007) Org. Biomol. Chem. 5 (15), 2404-2412), 4a (Joosten, JAF et al., (2004) J. Med. Chem. 47 , 6499-6508), 4b (Szurmai, Z. et al., (1989) Acta Chimica Hungarica-Models in Chemistry 126, 259-269), 4c (Pourceau, G. et al., (2009) J. Org. Chem. 74, 1218-1222), 4d (Cecioni, S. et al., (2012) Chem. Eur. J. 18, 6250-6263), 4e (Szurmai, Z. et al., (1989)), 6 (Hasegawa, T., et al. (2007)), 1-propargyl-O-galactopyranose and glucopyranose (Mereyala, HB, and Gurrala, SR (1998) Carbohydr. Res. 307, 351-354) Prepared according to literature.

３，６，９，１２‐テトラオキサ‐ペンタデカン‐１４‐イン‐１‐イル ２‐シアノエチルＮ，Ｎ‐ジイソプロピルホスホラミダイト(3,6,9,12-Tetraoxa-pentadecan-14-yn-1-yl 2-cyanoethyl N,N-diisopropyl phosphoramidite)1c：２‐シアノエチル‐Ｎ，Ｎ‐ジイソプロピルクロロホスホラミダイト（７２０ ｍｇ、３．０ ｍｍｏｌ）を、３，６，９，１２‐テトラオキサ‐ペンタデカン‐１４‐イン‐１‐オール（６００ ｍｇ、２．６ ｍｍｏｌ）の溶液、３Å分子ふるい、及び無水ジクロロメタン（４０ ｍＬ）中Ｎ，Ｎ’‐ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１．３ ｍＬ、７．４ ｍｍｏｌ）に加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、２ ｍＬのＨ２Ｏを加えた後、この溶液を蒸発させた。乾燥した残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（３％トリエチルアミンを含むシクロヘキサン中８０％ＥｔＯＡｃ）によって精製し、透明な油として表題化合物１ｃ（９０１ ｍｇ、８１％）を得た。Ｒｆ：０．９（ＥｔＯＡｃ）。1H NMR 13C NMR 31P NMR及びHR-ESI-QToF MSが、その構造と一致している。 3,6,9,12-Tetraoxa-pentadecan-14-in-1-yl 2-cyanoethyl N, N-diisopropylphosphoramidite (3,6,9,12-Tetraoxa-pentadecan-14-yn-1-yl 2-cyanoethyl N, N-diisopropyl phosphoramidite) 1c: 2-cyanoethyl-N, N-diisopropylchlorophosphoramidite (720 mg, 3.0 mmol) was added to 3,6,9,12-tetraoxa-pentadecane-14- A solution of in-1-ol (600 mg, 2.6 mmol), 3 molecular sieves, and N, N′-diisopropylethylamine (DIEA) (1.3 mL, 7.4 mmol) in anhydrous dichloromethane (40 mL) Added to. The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours, 2 mL of H 2 O was added and the solution was evaporated. The dried residue was purified by silica gel column chromatography (80% EtOAc in cyclohexane containing 3% triethylamine) to give the title compound 1c (901 mg, 81%) as a clear oil. Rf: 0.9 (EtOAc). 1 H NMR 13 C NMR 31 P NMR and HR-ESI-QToF MS are consistent with the structure.

（２’，３’，４’，６’‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシル）‐チミン２０：
Ｎ，Ｏ‐ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（ＢＳＡ）（１．５ ｍＬ、６．１ ｍｍｏｌ）を、チミン（３２７ ｍｇ、２．６ ｍｍｏｌ）の懸濁液、及びジクロロエタン（２５ ｍＬ）中ガラクトースペンタ‐Ｏ‐アセテート（１．０９ｇ、２．５６ ｍｍｏｌ）に加えた。この混合物を、アルゴン下、常温で２０分間撹拌した。ＴＭＳＯＴｆ（２．２ ｍＬ、１２．１ ｍｍｏｌ）を加えた後、この反応混合物を還流下で２時間３０分加熱した。得られた混合物を常温まで冷却し、溶媒を減圧下で蒸発させ油を得て、これを酢酸エチル（１００ ｍＬ）中で希釈し、ＮａＨＣＯ３（１００ ｍＬ）の飽和水溶液及びブライン（１００ ｍＬで２回）によって洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４によって乾燥させた後、ろ過し濃縮し、得られた油をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン、８：２、ｖ／ｖ）によって精製し、白い泡としての所望の化合物２０（７８２ ｍｇ、６７％）を得た。1H NMR 13C NMR及びHR-ESI-QToF MSが、その構造と一致している。 (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-Tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyl) -thymine 20:
N, O-bis (trimethylsilyl) acetamide (BSA) (1.5 mL, 6.1 mmol) was added to a suspension of thymine (327 mg, 2.6 mmol) and galactose penta- in dichloroethane (25 mL). O-acetate (1.09 g, 2.56 mmol) was added. The mixture was stirred at room temperature for 20 minutes under argon. After adding TMSOTf (2.2 mL, 12.1 mmol), the reaction mixture was heated at reflux for 2 h 30 min. The resulting mixture was cooled to ambient temperature and the solvent was evaporated under reduced pressure to give an oil that was diluted in ethyl acetate (100 mL), saturated aqueous NaHCO 3 (100 mL) and brine (100 mL). Washed twice). After drying over Na 2 SO 4 , filtration and concentration, the resulting oil is purified by silica gel column chromatography (EtOAc / cyclohexane, 8: 2, v / v) to give the desired compound 20 (white foam) 782 mg, 67%). 1 H NMR 13 C NMR and HR-ESI-QToF MS are consistent with the structure.

１‐（２’，３’，４’，６’‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシル）‐３‐（４‐ブロモブチル）チミン２１：
無水ジメチルホルムアミド（４ ｍＬ）中（２’，３’，４’，６’‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシル）‐チミン２０（３５０ ｍｇ、０．７７ ｍｍｏｌ）の溶液を、炭酸カリウム（３１８ ｍｇ、２．３０ ｍｍｏｌ）とともに、５分間撹拌した。次いで、１，４‐ジブロモブタン（９１９ μＬ、７．７０ ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を、還流下で４時間及び７０℃で一晩煮沸させた。その後、反応混合物を濃縮し油を得て、これをジクロロメタン（２０ ｍＬ）中で希釈し、ＮａＨＣＯ３（２０ ｍＬ）の飽和水溶液及びブライン（２０ ｍＬで２回）によって洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／シクロヘキサン、４：６）によって精製し、淡黄色の泡として所望の化合物２１（２７０ ｍｇ、５９％）を得た。1H NMR 13C NMR及びHR-ESI-QToF MSが、その構造と一致している。 1- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyl) -3- (4-bromobutyl) thymine 21:
A solution of (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyl) -thymine 20 (350 mg, 0.77 mmol) in anhydrous dimethylformamide (4 mL) Was stirred with potassium carbonate (318 mg, 2.30 mmol) for 5 minutes. 1,4-Dibromobutane (919 μL, 7.70 mmol) was then added and the mixture was boiled under reflux for 4 hours and at 70 ° C. overnight. The reaction mixture was then concentrated to give an oil which was diluted in dichloromethane (20 mL) and washed with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 (20 mL) and brine (2 × 20 mL). The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated. The crude product was purified by silica gel column chromatography (EtOAc / cyclohexane, 4: 6) to give the desired compound 21 (270 mg, 59%) as a pale yellow foam. 1 H NMR 13 C NMR and HR-ESI-QToF MS are consistent with the structure.

１‐（２’，３’，４’，６’‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシル）‐３‐（４‐アジドブチル）チミン４ｆ：
無水ジメチルホルムアミド（３ ｍＬ）中化合物２１（２３１ ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）の溶液を、アジ化ナトリウム（２０３ ｍｇ、３．１２ ｍｍｏｌ）とともに、１００℃で２４時間撹拌した。ジクロロメタン（１０ ｍＬ）を加えた後、この反応物をブライン（２０ ｍＬで３回）によって洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し濃縮し、無色の油として所望の生成物（２１４ ｍｇ、９９％）を得た。1H NMR 13C NMR及びHR-ESI-QToF MSが、その構造と一致している。 1- (2 ′, 3 ′, 4 ′, 6′-Tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyl) -3- (4-azidobutyl) thymine 4f:
A solution of compound 21 (231 mg, 0.39 mmol) in anhydrous dimethylformamide (3 mL) was stirred with sodium azide (203 mg, 3.12 mmol) at 100 ° C. for 24 hours. After adding dichloromethane (10 mL), the reaction was washed with brine (3 × 20 mL). The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated to give the desired product (214 mg, 99%) as a colorless oil. 1 H NMR 13 C NMR and HR-ESI-QToF MS are consistent with the structure.

Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキンアジド１，３‐双極環状付加による１‐Ｏ‐プロパルギルヘキソースのアジド固体支持体５への固定。１‐Ｏ‐プロパルギルヘキソース（α‐マンノース６、β‐ガラクトース、β‐グルコース）（１００ ｍＭ、１７５ μＬ）の水溶液、ＣｕＳＯ４の新たに調製した水溶液（１００ ｍＭ、１４ μＬ）及びアスコルビン酸ナトリウムの新たに調製した水溶液（５００ ｍＭ、１４ μＬ）、水（１４７ μＬ）、並びにＭｅＯＨ（３５０ μＬ）を、３．５ μｍｏｌのアジド固体支持体５に加えた。得られた混合物を、マイクロ波シンセサイザーによって６０℃で４５分間（予備混合時間：３０秒）、封管中で処理した。内部赤外線プローブによって温度をモニタリングした。溶液を除去し、ＣＰＧビーズを、Ｈ２Ｏ（２ ｍＬで３回）、ＭｅＯＨ（２ ｍＬで３回）及びＣＨ３ＣＮ（２ ｍＬで３回）によって洗浄し、乾燥させ、固体支持ヘキソースを得た。 Immobilization of 1-O-propargyl hexose to azide solid support 5 by Cu (I) catalyzed alkyne azide 1,3-dipolar cycloaddition. Of 1-O-propargyl hexose (α-mannose 6, β-galactose, β-glucose) (100 mM, 175 μL), a freshly prepared aqueous solution of CuSO 4 (100 mM, 14 μL) and sodium ascorbate. Freshly prepared aqueous solution (500 mM, 14 μL), water (147 μL), and MeOH (350 μL) were added to 3.5 μmol azide solid support 5. The resulting mixture was processed in a sealed tube with a microwave synthesizer at 60 ° C. for 45 minutes (premix time: 30 seconds). Temperature was monitored by an internal infrared probe. The solution is removed and the CPG beads are washed with H 2 O (3 × 2 mL), MeOH (3 × 2 mL) and CH 3 CN (3 × 2 mL), dried and the solid supported hexose is removed. Obtained.

ヘキソースヒドロキシルへのアルキニルホスホラミダイト又はブロモヘキシルホスホラミダイト導入の一般的手順。固体支持ヘキソース誘導体（１ μｍｏｌ規模）を、ホスホラミダイト化学作用によってＤＮＡシンセサイザーで、アルキニルホスホラミダイト又は６‐ブロモヘキシルホスホラミダイト２とともに処理した。カップリング工程及び酸化工程のみを実行した。カップリング工程では、ベンジルメルカプトテトラゾールを活性剤（無水ＣＨ３ＣＮ中０．３Ｍ）として用い、ホスホラミダイト１、２又は１ａ〜ｅ（無水ＣＨ３ＣＮ中０．２Ｍ）を、１８０秒のカップリング時間により３回（１２０ μｍｏｌ）導入した。市販ヨウ化物溶液（０．１Ｍ Ｉ２、ＴＨＦ／ピリジン／水９０：５：５）とともに１５秒間、酸化を実行した。 General procedure for alkynyl phosphoramidite or bromohexyl phosphoramidite introduction into hexose hydroxyl. Solid supported hexose derivatives (1 μmol scale) were treated with alkynyl phosphoramidite or 6-bromohexyl phosphoramidite 2 on a DNA synthesizer by phosphoramidite chemistry. Only the coupling and oxidation steps were performed. In the coupling step, benzylmercaptotetrazole is used as an activator (0.3M in anhydrous CH 3 CN) and phosphoramidite 1, 2 or 1a-e (0.2M in anhydrous CH 3 CN) with a coupling time of 180 seconds. Was introduced three times (120 μmol). Commercial iodide solution (0.1 M I 2, THF / pyridine / water 90: 5: 5) for 15 seconds to run the oxidation.

アジド化の一般的手順。テトラブロモヘキシルヘキソース（１ μｍｏｌ）を有する固体支持オリゴヌクレオチドを、ＴＭＧＮ３（３１．６ ｍｇ、２００当量）の溶液、ＤＭＦ（１ ｍＬ）中ＮａＩ（３０ ｍｇ、２００当量）によって、６５℃で１時間処理した。ビーズを、ＤＭＦ（２ ｍＬで３回）、Ｈ２Ｏ（２ ｍＬで３回）及びＣＨ３ＣＮ（２ ｍＬで３回）によって洗浄した後、アルゴンにより洗い流して乾燥させた。 General procedure for azidation. Solid supported oligonucleotide with tetrabromohexyl hexose (1 μmol) was added at 65 ° C. with a solution of TMGN 3 (31.6 mg, 200 eq), NaI (30 mg, 200 eq) in DMF (1 mL). Time processed. The beads were washed with DMF (3 × 2 mL), H 2 O (3 × 2 mL) and CH 3 CN (3 × 2 mL), then flushed with argon and dried.

ＤＮＡ配列の伸長及びＣｙ３による標識の一般的手順。ＤＮＡ配列を、標準ホスホラミダイト化学作用によって、ＤＮＡシンセサイザー(ABI 394)で、固体支持足場上で１ μｍｏｌ規模により合成した。カップリング工程では、活性剤としてベンジルメルカプトテトラゾール（無水ＣＨ３ＣＮ中０．３Ｍ）を用い、市販ヌクレオシドホスホラミダイト（無水ＣＨ３ＣＮ中０．０９Ｍ）を、２０秒のカップリング時間により導入し、また、Ｃｙ３アミダイト（無水ＣＨ３ＣＮ中０．０６Ｍ）を１８０秒のカップリング時間により導入した。市販溶液（キャップＡ：Ａｃ２Ｏ／ピリジン／ＴＨＦ、１０：１０：８０、及びキャップＢ：ＴＨＦ中１０％ Ｎ‐メチルイミダゾール）を用いて、無水酢酸とともに、キャッピング工程を１５秒間実行した。酸化をそれぞれ１５秒間実行した。ＣＨ２Ｃｌ２中２．５％ ＤＣＡとともに３５秒間、脱トリチル化を実行した。 General procedure for DNA sequence extension and Cy3 labeling. The DNA sequence was synthesized on a 1 μmol scale on a solid support scaffold with a DNA synthesizer (ABI 394) by standard phosphoramidite chemistry. In the coupling step, benzylmercaptotetrazole (0.3 M in anhydrous CH 3 CN) was used as the activator, and a commercially available nucleoside phosphoramidite (0.09 M in anhydrous CH 3 CN) was introduced with a coupling time of 20 seconds. Cy3 amidite (0.06M in anhydrous CH 3 CN) was also introduced with a coupling time of 180 seconds. The capping step was performed for 15 seconds with acetic anhydride using commercially available solutions (cap A: Ac 2 O / pyridine / THF, 10:10:80, and cap B: 10% N-methylimidazole in THF). Oxidation was performed for 15 seconds each. Detritylation was performed for 35 seconds with 2.5% DCA in CH 2 Cl 2 .

固体支持オリゴヌクレオチド脱保護の一般的手順。修飾オリゴヌクレオチドを有するＣＰＧビーズを４ ｍＬのスクリュートップバイアルに移し、２ ｍＬの濃アンモニア水によって室温で１５時間処理し、５５℃まで２時間加温した。それぞれの化合物について、上清を回収し、蒸発させて乾燥させた。残渣を水中に溶解した。   General procedure for solid support oligonucleotide deprotection. CPG beads with modified oligonucleotides were transferred to 4 mL screw top vials, treated with 2 mL concentrated aqueous ammonia at room temperature for 15 hours, and warmed to 55 ° C. for 2 hours. For each compound, the supernatant was collected and evaporated to dryness. The residue was dissolved in water.

水素ホスホネート(hydrogenophosphonate)化学作用による伸長の一般的手順
１，３‐プロパンジオール固体支持体（１ μｍｏｌ）から開始するＨ‐ホスホネート化学作用サイクルを用い、ＤＮＡシンセサイザー(ABI 394)で伸長を実行した。ＣＨ２Ｃｌ２中２．５％ ＤＣＡとともに３５秒間、脱トリチル化工程を実行した。次いで、ジメタノールシクロヘキサン（ＤＭＣＨ）Ｈ‐ホスホネートモノエステル９(Bouillon et al. (2006), J. Org. Chem. 71, 4700-4702)、又は市販チミジンＨ‐ホスホネートモノエステル（無水ＣＨ３ＣＮ／Ｃ５Ｈ５Ｎ １：１ ｖ／ｖ中６０ ｍＭ）、及び活性剤としての塩化ピバロイル（無水ＣＨ３ＣＮ／Ｃ５Ｈ５Ｎ １：１ ｖ／ｖ中２００ ｍＭ）を、カラムに６回又は５秒間（３０モル過剰）通した。必要に応じてサイクルを繰り返し、２〜５つのＤＭＣＨモチーフ又は４つのｄＴモチーフを有する所望の足場を得た。 General Procedure for Elongation by Hydrogenophosphonate Chemistry Elongation was performed on a DNA synthesizer (ABI 394) using an H-phosphonate chemistry cycle starting from a 1,3-propanediol solid support (1 μmol). The detritylation step was performed for 35 seconds with 2.5% DCA in CH 2 Cl 2 . Then, dimethanolcyclohexane (DMCH) H-phosphonate monoester 9 (Bouillon et al. (2006), J. Org. Chem. 71, 4700-4702), or commercially available thymidine H-phosphonate monoester (anhydrous CH 3 CN / C 5 H 5 N 1: 1 60 mM in 1: 1 v / v) and pivaloyl chloride (200 mM in anhydrous CH 3 CN / C 5 H 5 N 1: 1 v / v) as activator 6 times on the column Or passed for 5 seconds (30 molar excess). The cycle was repeated as necessary to obtain the desired scaffold with 2-5 DMCH motifs or 4 dT motifs.

アミド化的酸化(amidative oxidation)の一般的手順
２つのシリンジを用いて、ＣＣｌ４／Ｃ５Ｈ５Ｎ（１：１ ｖ／ｖ）中１０％プロパルギルアミンの溶液２ ｍＬにより３０分間、固体支持Ｈ‐ホスホネートジエステル足場（１ μｍｏｌ）を端から端まで処理した。ＣＰＧビーズを、Ｃ５Ｈ５Ｎ（２ ｍＬで２回）及びＣＨ３ＣＮ（２ ｍＬで３回）によって洗浄し、次いで、アルゴンにより洗い流して乾燥させた。その後、上述したようにホスホラミダイト化学作用によって、オリゴヌクレオチドの伸長及びＣｙ３による標識を実行した。 General procedure for amidative oxidation Solid support with 2 mL of a solution of 10% propargylamine in CCl 4 / C 5 H 5 N (1: 1 v / v) using two syringes for 30 minutes H-phosphonate diester scaffold (1 μmol) was treated end to end. CPG beads were washed with C 5 H 5 N (2 mL 2 ×) and CH 3 CN (2 mL 3 ×), then flushed with argon and dried. Thereafter, oligonucleotide extension and Cy3 labeling were performed by phosphoramidite chemistry as described above.

ＣｕＡＡＣ反応の一般的手順
アジドＤ‐ガラクトース誘導体４ａ〜ｆ導入の手順：５’‐蛍光‐３’‐アルキンオリゴヌクレオチド（１００ μＬのＨ２Ｏ中１００ ｎｍｏｌ）の溶液に、アジドガラクトース(azid galacose)４ａ〜ｆ（アルキン官能基当たり３当量、ＭｅＯＨ中１００ ｍＭ）、１ ｍｇのＣｕ（０）ナノ粉末、トリエチルアンモニウム酢酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．７）（２５ μＬ）、水及びＭｅＯＨを加え、２５０ μＬの最終量（水ＭｅＯＨ、１：１、ｖ／ｖ）を得た。得られた調製物を収容したチューブを密封し、Biotage社製のマイクロ波シンセサイザーイニシエーターに６０℃で６０分間（３０秒間の予備混合時間）置いた。 General procedure for CuAAC reaction Procedure for introduction of azido D-galactose derivatives 4a-f: In a solution of 5′-fluorescent-3′-alkyne oligonucleotide (100 nmol in 100 μL H 2 O), azido galactose 4a-f (3 eq per alkyne functional group, 100 mM in MeOH), 1 mg Cu (0) nanopowder, triethylammonium acetate buffer (0.1 M, pH 7.7) (25 μL), water and MeOH. In addition, a final volume of 250 μL (water MeOH, 1: 1, v / v) was obtained. The tube containing the resulting preparation was sealed and placed in a Biotage microwave synthesizer initiator at 60 ° C. for 60 minutes (30 seconds premixing time).

１‐Ｏ‐プロパルギル‐Ｄ‐ガラクトース３導入の手順：５’‐蛍光‐３’‐ヘキソースが中心にあるテトラアジドヘキシルオリゴヌクレオチド（１００ μＬのＨ２Ｏ中１００ ｎｍｏｌ）の溶液に、１‐Ｏ‐プロパルギル２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐Ｄ‐ガラクトース３（アジド官能基当たり５当量、ＭｅＯＨ中１００ ｍＭ）、１ ｍｇのＣｕ（０）ナノ粉末、トリエチルアンモニウム酢酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．７）（２５ μＬ）、水及びＭｅＯＨを加え、２５０ μＬの最終量（水ＭｅＯＨ、１：１、ｖ／ｖ）を得た。得られた調製物を収容したチューブを密封し、油浴中に入れ、６０℃で６０分間磁気撹拌した。 Procedure for 1-O-propargyl-D-galactose 3 introduction: 1-O into a solution of tetraazidohexyl oligonucleotide (100 nmol in 100 μL H 2 O) centered on 5′-fluorescent-3′-hexose -Propargyl 2,3,4-tri-O-acetyl-D-galactose 3 (5 equivalents per azide functional group, 100 mM in MeOH), 1 mg Cu (0) nanopowder, triethylammonium acetate buffer (0. 1M, pH 7.7) (25 μL), water and MeOH were added to give a final volume of 250 μL (water MeOH, 1: 1, v / v). The tube containing the resulting preparation was sealed, placed in an oil bath and magnetically stirred at 60 ° C. for 60 minutes.

１‐（４‐ニトロ‐ベンジル）‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド８：窒素雰囲気下、０℃で、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（１．５ ｍＬ、１２ ｍｍｏｌ）を、β‐Ｄ‐ガラクトースペンタアセテート（１．５６１ｇ、４ ｍｍｏｌ）の溶液、及び２０ ｍＬ ＣＨ２Ｃｌ２中ｐ‐ニトロベンジルアルコール（１．２２５ｇ、８ ｍｍｏｌ）に滴下して加えた。数分後、この混合物を加熱して還流し、７時間撹拌し続けた。次いで、この反応物を水によってクエンチし、ＣＨ２Ｃｌ２によって抽出した。ＣＨ２Ｃｌ２層を回収し、Ｎａ２ＳＯ４によって乾燥させ、減圧下で濃縮した。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン中０〜１５％のＡｃＯＥｔ）によって精製し、白色の固体としての生成物（１．１４８ｇ、５９％）を得た。Ｒｆ＝０．３６（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、１：１、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.21 (d, J = 8.9 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.47 (d, J = 8.9 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.42 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.32 (dd, J = 10.5 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.04 (dd, J = 10.5 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.02-4.72 (2xd, J = 13.2 Hz, 2H, H-7), 4.60 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.21 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 4.15 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.94 (dt, J = 0.8 and 6.5 Hz, 1H, H-5), 2.17 (s, 3H, CH3CO), 2.06 (s, 6H, 2xCH3CO), 1.99 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5 (4 x CO-Ac), 147.7 (C-11), 144.6 (C-8), 127.7 (C-9), 123.8 (C-10), 100.8 (C-1), 71.1 (C-5), 70.9 (C-3), 69.6 (C-7), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 61.4 (C-6), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7(4 x CH3-Ac). HRMS (ESI+) : calculated for C21H25NO12Na [M + Na]+ 506.1274, found 506.1282. [α]D20 = -19.1° (c 0.9, MeOH)。 1- (4-Nitro-benzyl) -2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 8: boron trifluoride diethyl etherate (at 0 ° C. under nitrogen atmosphere) 1.5 mL, 12 mmol) to a solution of β-D-galactose pentaacetate (1.561 g, 4 mmol) and p-nitrobenzyl alcohol (1.225 g, 8 mmol) in 20 mL CH 2 Cl 2. Added dropwise. After a few minutes, the mixture was heated to reflux and kept stirring for 7 hours. The reaction was then quenched with water and extracted with CH 2 Cl 2 . The CH 2 Cl 2 layer was collected, dried over Na 2 SO 4 and concentrated under reduced pressure. The resulting residue was purified by silica gel column chromatography (0-15% AcOEt in cyclohexane) to give the product (1.148 g, 59%) as a white solid. Rf = 0.36 (AcOEt / cyclohexane, 1: 1, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.21 (d, J = 8.9 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.47 (d, J = 8.9 Hz, 2H, H-9, H-13) , 5.42 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.32 (dd, J = 10.5 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.04 (dd, J = 10.5 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.02-4.72 (2xd, J = 13.2 Hz, 2H, H-7), 4.60 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.21 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 4.15 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.94 (dt, J = 0.8 and 6.5 Hz, 1H, H-5), 2.17 (s, 3H, CH3CO ), 2.06 (s, 6H, 2xCH3CO), 1.99 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5 (4 x CO-Ac), 147.7 (C- 11), 144.6 (C-8), 127.7 (C-9), 123.8 (C-10), 100.8 (C-1), 71.1 (C-5), 70.9 (C-3), 69.6 (C-7 ), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 61.4 (C-6), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 x CH3-Ac) .HRMS (ESI +): calculated for C21H25NO12Na [M + Na ] + 506.1274, found 506.1282. [Α] D20 = -19.1 ° (c 0.9, MeOH).

水素化分解の一般的手順（方法Ａ）。化合物８又は９１、２又は１０３、４を蒸留ＣＨ２Ｃｌ２中に溶解し、これに、炭（１０％ ｗ／ｗ）上にある１０％パラジウムを加えた。ＴＬＣで判断されるように、出発物質が消失するまで、反応混合物に水素ガスをバブリングした。反応混合物をセライトパッド上でろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２によって洗浄した。粗生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た。 General procedure for hydrocracking (Method A). Compound 8 or 91, 2 or 103, 4 was dissolved in distilled CH 2 Cl 2 and to this was added 10% palladium on charcoal (10% w / w). Hydrogen gas was bubbled through the reaction mixture until the starting material disappeared, as judged by TLC. The reaction mixture was filtered over a celite pad and washed with CH 2 Cl 2 . The crude product was purified by silica gel flash column chromatography to give the desired product.

４‐ブロモアセトアミド‐アリール‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド合成の一般的手順（方法Ｂ）。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２中化合物１１又は１２（１当量）の溶液を、アルゴンにより洗い流し、０℃まで冷却し、Ｅｔ３Ｎ（１．４当量）を加えた。ブロモアセチルブロミド（１．３当量）を滴下して加え、この混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物を室温まで１時間加温した。ＣＨ２Ｃｌ２中粗混合物を、１Ｎ ＨＣｌ（２５ ｍＬで２回）、水（２５ ｍＬで２回）及びブライン（２５ ｍＬ）によって洗浄した。乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を完全に除去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た。 General procedure for the synthesis of 4-bromoacetamido-aryl-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside (Method B). A solution of compound 11 or 12 (1 eq) in distilled CH 2 Cl 2 was flushed with argon, cooled to 0 ° C. and Et 3 N (1.4 eq) was added. Bromoacetyl bromide (1.3 eq) was added dropwise and the mixture was stirred at 0 ° C. for 1 h. The mixture was warmed to room temperature for 1 hour. The crude mixture in CH 2 Cl 2 was washed with 1N HCl (2 × 25 mL), water (2 × 25 mL) and brine (25 mL). After drying (Na 2 SO 4 ) and concentration under reduced pressure to completely remove CH 2 Cl 2 , the residue was purified by silica gel column chromatography to give the desired product.

４‐アジドアセトアミド(azidooacetamido)‐アリール‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド合成の一般的手順（方法Ｃ）。化合物１４、１５又は１６（１当量）の溶液及び無水ＣＨ３ＣＮ中ＴＭＧＮ３（３当量）を、マイクロ波支援下、８０℃で１５分間撹拌した。減圧下で濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た。 General procedure for the synthesis of 4-azidooacetamido-aryl-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside (Method C). A solution of compound 14, 15 or 16 (1 eq) and TMGN3 (3 eq) in anhydrous CH 3 CN were stirred at 80 ° C. for 15 min with microwave assistance. After concentration under reduced pressure, the residue was purified by silica gel column chromatography to give the desired product.

炭水化物脱アセチル化の一般的手順（方法Ｄ）。アセチル化されたグリコシド（４‐（アジドアセトアミド）フェニル‐β‐Ｄ‐ガラクトシド、５、１７〜１９及び２８〜２９）を、ＭｅＯＨ又は１，４‐ジオキサン中に懸濁させ、３０％アンモニア溶液を加えた（１：１、ｖ／ｖ）。この混合物を、アルゴン下、室温で６時間から１日撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させ、所望の生成物を得た。   General procedure for carbohydrate deacetylation (Method D). The acetylated glycoside (4- (azidoacetamido) phenyl-β-D-galactoside, 5, 17-19 and 28-29) is suspended in MeOH or 1,4-dioxane and a 30% ammonia solution is added. Added (1: 1, v / v). The mixture was stirred at room temperature for 6 hours to 1 day under argon. The solvent was evaporated under reduced pressure to give the desired product.

グリコシド化の一般的手順（方法Ｅ）。０℃で、化合物７（１当量）、２２又は２３（２当量）の溶液、及びＣＨ２Ｃｌ２中テトラブチルアンモニウム水素スルファート（１当量）に、１ＭのＮａＯＨ水溶液を加えた。二相混合物を室温で３６時間撹拌し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２によって希釈し、１Ｍ ＮａＯＨ（３０ ｍＬで２回）によって洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た。 General procedure for glycosidation (Method E). At 0 ° C., a solution of compound 7 (1 eq), 22 or 23 (2 eq), and tetrabutylammonium hydrogen sulfate (1 eq) in CH 2 Cl 2 were added with 1 M aqueous NaOH. The biphasic mixture was stirred at room temperature for 36 hours, then diluted with CH 2 Cl 2 , washed with 1M NaOH (2 × 30 mL), and dried over Na 2 SO 4 . The solvent was removed under reduced pressure and the crude product was purified by silica gel column chromatography to give the desired product.

ビアリールガラクトピラノシドアジド化の一般的手順（方法Ｆ）。化合物２６又は２７（１当量）を無水ＤＭＦ中に溶解し、続いて、１‐エチル‐３‐（３’‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）（１．６当量）、及びヒドロキシベンゾトリアゾール（１．１当量）を加えた。３‐アジドプロピルアミン（２当量）を加え、この反応物を室温で１２時間撹拌した。反応物を濃縮した後、水によってクエンチし、ＤＣＭによって抽出した。有機層を硫酸ナトリウムによって乾燥させ、濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、所望の生成物を得た。   General procedure for biaryl galactopyranoside azidation (Method F). Compound 26 or 27 (1 eq) is dissolved in anhydrous DMF, followed by 1-ethyl-3- (3′-dimethylaminopropyl) carbodiimide) (1.6 eq), and hydroxybenzotriazole (1.1 eq). Equivalent) was added. 3-Azidopropylamine (2 eq) was added and the reaction was stirred at room temperature for 12 hours. The reaction was concentrated then quenched with water and extracted with DCM. The organic layer was dried over sodium sulfate, concentrated and purified by silica gel column chromatography to give the desired product.

１‐（４‐アミノ‐ベンジル）‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１１。白色の固体として（４１２ ｍｇ、４５％）次の方法Ａにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（３０ ｍＬ）中化合物８（９６８ ｍｇ、２．００ ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（９６．８ ｍｇ）。この混合物を後処理し、水層をＣＨ２Ｃｌ２によって抽出し、粗生成物をシリカゲル（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％のＭｅＯＨ）上で精製し、純粋な生成物を得た。Ｒｆ＝０．４３（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、６：４、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.02 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-10, H-12), 6.60 (d, J = 8.1, 2H, H-9, H-13), 5.32 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.18 (dd, J = 10.4 and 8.3 Hz, 1H, H-2), 4.91 (dd, J = 10.4, 3.3, 1H, H-3), 4.71-4.46 (2xd, J = 11.9, 2H, H-7), 4.42 (d, J =7.9, 2H, H-1), 4.15 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 4.10 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.81 (t, J = 6.5, 1H, H-5), 2.09 (s, 3H, CH3CO), 2.01 (s, 3H, CH3CO), 1.94 (s, 3H, CH3CO), 1.91 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.4, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 146.6 (C-11), 129.8 (C-8), 126.3 (C-9), 115.0 (C-10), 99.2 (C-1), 71.1 (C-5), 70.8 (C-3), 70.7 (C-7), 69.0 (C-2), 67.3 (C-4), 61.5 (C-6), 20.8, 20.8, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI+) : calculated for C21H28NO10 [M + H]+454.1713, found 454.1718. [α]D20 = -25.0° (c 0.4, MeOH)。 1- (4-amino-benzyl) -2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 11. Obtained by the following method A as a white solid (412 mg, 45%). Compound 8 (968 mg, 2.00 mmol), 10% Pd / C (96.8 mg) in distilled CH 2 Cl 2 (30 mL). The mixture was worked up and the aqueous layer was extracted with CH 2 Cl 2, the crude product was purified on on silica gel (CH 2 Cl 2 0-5% of the MeOH), to give the pure product. Rf = 0.43 (AcOEt / cyclohexane, 6: 4, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.02 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-10, H-12), 6.60 (d, J = 8.1, 2H, H-9, H-13), 5.32 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.18 (dd, J = 10.4 and 8.3 Hz, 1H, H-2), 4.91 (dd, J = 10.4, 3.3, 1H, H-3) , 4.71-4.46 (2xd, J = 11.9, 2H, H-7), 4.42 (d, J = 7.9, 2H, H-1), 4.15 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6) , 4.10 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.81 (t, J = 6.5, 1H, H-5), 2.09 (s, 3H, CH3CO), 2.01 (s, 3H, CH3CO ), 1.94 (s, 3H, CH3CO), 1.91 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.4, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 146.6 (C-11) , 129.8 (C-8), 126.3 (C-9), 115.0 (C-10), 99.2 (C-1), 71.1 (C-5), 70.8 (C-3), 70.7 (C-7), 69.0 (C-2), 67.3 (C-4), 61.5 (C-6), 20.8, 20.8, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C21H28NO10 [M + H] +454.1713, found [Α] D20 = -25.0 ° (c 0.4, MeOH).

４‐アミノ‐ベンジル‐１‐チオ‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１２。無色の油として（３１４ ｍｇ、７９％）次の方法Ａにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１５ ｍＬ）中化合物９（４２５ ｍｇ、０．８５１ ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（４２．５ ｍｇ）。この混合物を後処理し、水層をＣＨ２Ｃｌ２によって抽出し、粗生成物をシリカゲル（ＣＨ２Ｃｌ２中０〜５％のＭｅＯＨ）上で精製し、純粋な生成物を得た。Ｒｆ＝０．２６（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、６：４、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.08 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-9, H-13), 6.63 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-10, H-12), 5.40 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.26 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H2), 4.96 (dd, J = 9.9 and 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.27 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.3 and 6.6 Hz, 1H, H-6), 4.11 (dd, J = 11.3 and 6.6 Hz, 1H, H-6), 3.86 (d, J = 12.9 Hz, 1H, H-7), 3.81 (t, J = 6.6 Hz, 1H, H-5), 3.75 (d, J = 12.9 Hz, 1H, H-7), 2.14 (s, 3H, CH3CO), 2.06 (s, 3H, CH3CO), 2.01 (s, 3H, CH3CO), 1.96 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.4, 170.2, 169.7 (4 CO Ac), 145.8 (C-11), 130.3 (C-9), 126.5 (C-8), 115.3 (C-10), 82.5 (C-1), 74.5 (C-5), 72.0 (C-3), 67.5 (C-4), 67.3 (C-2), 61.8 (C-6), 33.7 (7), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI+): calculated for C21H28NO9S [M + H]+ 470.1485, found 470.1489. [α]D20 = -73.8° (c 1.0, MeOH) 4-Amino-benzyl-1-thio-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 12. Obtained by the following method A as a colorless oil (314 mg, 79%). Compound 9 (425 mg, 0.851 mmol), 10% Pd / C (42.5 mg) in distilled CH 2 Cl 2 (15 mL). The mixture was worked up and the aqueous layer was extracted with CH 2 Cl 2, the crude product was purified on on silica gel (CH 2 Cl 2 0-5% of the MeOH), to give the pure product. Rf = 0.26 (AcOEt / cyclohexane, 6: 4, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.08 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-9, H-13), 6.63 (d, J = 8.1 Hz, 2H, H-10, H-12) , 5.40 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.26 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H2), 4.96 (dd, J = 9.9 and 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.27 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.3 and 6.6 Hz, 1H, H-6), 4.11 (dd, J = 11.3 and 6.6 Hz, 1H, H-6) , 3.86 (d, J = 12.9 Hz, 1H, H-7), 3.81 (t, J = 6.6 Hz, 1H, H-5), 3.75 (d, J = 12.9 Hz, 1H, H-7), 2.14 (s, 3H, CH3CO), 2.06 (s, 3H, CH3CO), 2.01 (s, 3H, CH3CO), 1.96 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.4, 170.2, 169.7 (4 CO Ac), 145.8 (C-11), 130.3 (C-9), 126.5 (C-8), 115.3 (C-10), 82.5 (C-1), 74.5 (C-5) , 72.0 (C-3), 67.5 (C-4), 67.3 (C-2), 61.8 (C-6), 33.7 (7), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI +) : calculated for C21H28NO9S [M + H] + 470.1485, found 470.1489. [α] D20 = -73.8 ° (c 1.0, MeOH)

４‐ブロモアセトアミドベンジル‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１４。淡黄色の油として（２３８ ｍｇ、７９％）次の方法Ｂにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（３０ ｍＬ）中化合物１１（２３９ ｍｇ、０．５２７ ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（０．１０３ ｍＬ、０．７３８ ｍｍｏｌ）、ブロモアセチルブロミド（０．０５９ ｍＬ、０．６８５ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜６０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．３１（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、６：４、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.23 (s, 1H, H-14), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.37 (dd, J = 3.4 and 0.9 Hz, 1H, H-4), 5.25 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 4.97 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.85-4.59 (2xd, J = 12.2 Hz, 2H, H-7), 4.50 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.19 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 4.13 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.99 (s, 2H, H-16), 3.88 (dt, J = 0.9 and 6.5 Hz, 1H, H-5), 2.13 (s, 3H, CH3CO), 2.04 (s, 3H, CH3CO), 2.00 (s, 3H, CH3CO), 1.96 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm : 170.6, 170.4, 170.3, 169.6 (4 x CO-Ac), 163.8 (C-15), 137.0 (C-11), 133.7 (C-8), 128.7 (C-9), 120.2 (C-10), 100.0 (C-1), 71.1 (C-3), 71.0 (C-5), 70.4 (C-7), 69.0 (C-2), 67.3 (C-4), 61.5 (C-6), 29.6 (C-16), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 x CH3-Ac). HRMS (ESI+): calculated for C23H29BrNO11 [M + H]+ 574.0924, found 574.0933. [α]D20 = -13.1° (c 2.6, MeOH)。 4-Bromoacetamidobenzyl-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 14. Obtained by the following Method B as a pale yellow oil (238 mg, 79%). Distilled CH 2 Cl 2 (30 mL) in the compound 11 (239 mg, 0.527 mmol) , Et3N (0.103 mL, 0.738 mmol), bromoacetyl bromide (0.059 mL, 0.685 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-60% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.31 (AcOEt / cyclohexane, 6: 4, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.23 (s, 1H, H-14), 7.51 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.26 (d, J = 8.4 Hz , 2H, H-9, H-13), 5.37 (dd, J = 3.4 and 0.9 Hz, 1H, H-4), 5.25 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 4.97 ( dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.85-4.59 (2xd, J = 12.2 Hz, 2H, H-7), 4.50 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.19 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 4.13 (dd, J = 11.2 and 6.5 Hz, 1H, H-6), 3.99 (s, 2H, H-16), 3.88 (dt , J = 0.9 and 6.5 Hz, 1H, H-5), 2.13 (s, 3H, CH3CO), 2.04 (s, 3H, CH3CO), 2.00 (s, 3H, CH3CO), 1.96 (s, 3H, CH3CO) 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.6, 170.4, 170.3, 169.6 (4 x CO-Ac), 163.8 (C-15), 137.0 (C-11), 133.7 (C-8), 128.7 ( C-9), 120.2 (C-10), 100.0 (C-1), 71.1 (C-3), 71.0 (C-5), 70.4 (C-7), 69.0 (C-2), 67.3 (C -4), 61.5 (C-6), 29.6 (C-16), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 x CH3-Ac). HRMS (ESI +): calculated for C23H29BrNO11 [M + H] + 574.0924, found [Α] D20 = −13.1 ° (c 2.6, MeOH).

４‐ブロモアセトアミドベンジル‐１‐チオ‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１５：黄色の油として（３６７ ｍｇ、９３％）次の方法Ｂにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１０ ｍＬ）中化合物１２（３１４ ｍｇ、０．６６９ ｍｍｏｌ）、Ｅｔ３Ｎ（０．１３０ ｍＬ、０．９３７ ｍｍｏｌ）、ブロモアセチルブロミド（０．０７５ ｍＬ、０．８６９ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜４０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．２８（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、１：１、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.23 (s, 1H, H-14), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.26 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.37 (dd, J = 3.3 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.23 (t, J = 10.0 Hz, 1H, H-2), 4.94 (dd, J = 10.0 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.25 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H-1), 4.12 (dd, J = 11.4 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.05 (dd, J = 11.4 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 3.98 (s, 2H, H-16), 3.90, 3.81 (2 x d, J = 13.0 Hz, each 1H, H-7), 3.78 (m, 1H, H-5), 2.12 (s, 3H, CH3CO), 2.03 (s, 3H, CH3CO), 1.99 (s, 3H, CH3CO), 1.93 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.6, 170.4, 170.2, 169.8 (4 CO Ac), 163.74 (C-15), 136.4 (C-11), 133.9 (C-8), 130.0 (C-9), 120.3 (C-10), 82.6 (C-1), 74.6 (C-5), 72.0 (C-3), 67.5 (C-4), 67.3 (C-2), 61.7 (C-6), 33.4 (C-7), 29.6 (C-16), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI+): calculated for C23H29NO10BrS [M + H]+ 590.0696, found 590.0688. [α]D20 = -56.7° (c 2.0, MeOH)。 4-Bromoacetamidobenzyl-1-thio-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 15: as a yellow oil (367 mg, 93%) by the following method B Obtained. Distilled CH 2 Cl 2 (10 mL) in the compound 12 (314 mg, 0.669 mmol) , Et3N (0.130 mL, 0.937 mmol), bromoacetyl bromide (0.075 mL, 0.869 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-40% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.28 (AcOEt / cyclohexane, 1: 1, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.23 (s, 1H, H-14), 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.26 (d, J = 8.5 Hz , 2H, H-9, H-13), 5.37 (dd, J = 3.3 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.23 (t, J = 10.0 Hz, 1H, H-2), 4.94 (dd, J = 10.0 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.25 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H-1), 4.12 (dd, J = 11.4 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.05 ( dd, J = 11.4 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 3.98 (s, 2H, H-16), 3.90, 3.81 (2 xd, J = 13.0 Hz, each 1H, H-7), 3.78 (m , 1H, H-5), 2.12 (s, 3H, CH3CO), 2.03 (s, 3H, CH3CO), 1.99 (s, 3H, CH3CO), 1.93 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.6, 170.4, 170.2, 169.8 (4 CO Ac), 163.74 (C-15), 136.4 (C-11), 133.9 (C-8), 130.0 (C-9), 120.3 (C- 10), 82.6 (C-1), 74.6 (C-5), 72.0 (C-3), 67.5 (C-4), 67.3 (C-2), 61.7 (C-6), 33.4 (C-7 ), 29.6 (C-16), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C23H29NO10BrS [M + H] + 590.0696, found 590.0688. [Α] D20 = -56.7 ° (c 2.0, MeOH).

４‐ブロモアセトアミドフェニル‐１‐チオ‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１６：無水ＣＨ２Ｃｌ２（２０ ｍＬ）中化合物１０（４９７ ｍｇ、１．０２ ｍｍｏｌ）の溶液を脱気し、次いで、１０％のＰｄ／Ｃ（４９．７ ｍｇ）を加えた。この溶液を水素雰囲気に供し、室温で３日間撹拌した。出発物質が完全に消失した後、化合物１３の混合物をアルゴンにより洗い流し、０℃まで冷却し、Ｅｔ３Ｎ（０．０４３ ｍＬ、０．３０８ ｍｍｏｌ）を加えた。ブロモアセチルブロミド（０．０２５ ｍＬ、０．２８６ ｍｍｏｌ）を滴下して加え、この混合物を０℃で１時間撹拌した。混合物を室温まで１時間加温し、次いで、セライトのプラグを通してろ過し、ＣＨ２Ｃｌ２によって洗浄した。粗混合物を、１Ｎ ＨＣｌ（２５ ｍＬで２回）、水（２５ ｍＬで２回）及びブライン（２５ ｍＬ）によって洗浄した。乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を完全に除去した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン中０〜３０％のＡｃＯＥｔ）によって精製し、黄色の油としての生成物（全５０５．６ ｍｇ、８６％）を得た。Ｒｆ＝０．３３（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、６：４、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.15 (s, 1H, H-13), 7.52 (m, 2H, H-9, H-11), 7.51 (m, 2H, H-8, H-12), 5.40 (dd, J = 3.3 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.19 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H-2), 5.04 (dd, J = 9.9 and 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.65 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.11 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.01 (s, 2H, H-15), 3.91 (dt, J = 0.8 and 6.9 Hz 1H, H-5), 2.11 (s, 3H, CH3CO), 2.09 (s, 3H, CH3CO), 2.05 (s, 3H, CH3CO), 1.96 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 163.5 (C-14), 137.4 (C-10), 134.3 (C-8), 128.2 (C-7), 120.3 (C-9), 86.7 (C-1), 74.7 (C-5), 72.1 (C-3), 67.4 (C-4), 61.7 (C-6), 29.5 (C-15), 21.0, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI+): calculated forC22H26NO10NaSBr [M + Na]+ 598.0358, found 598.0360. [α]D20 = -13.0° (c 2.2, MeOH) 4-Bromoacetamidophenyl-1-thio-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 16: Compound 10 (497 mg in anhydrous CH 2 Cl 2 (20 mL)) 1.02 mmol) was degassed and then 10% Pd / C (49.7 mg) was added. This solution was subjected to a hydrogen atmosphere and stirred at room temperature for 3 days. After complete disappearance of the starting material, the mixture of compound 13 was flushed with argon, cooled to 0 ° C. and Et 3 N (0.043 mL, 0.308 mmol) was added. Bromoacetyl bromide (0.025 mL, 0.286 mmol) was added dropwise and the mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour. The mixture was warmed to room temperature for 1 h, then filtered through a plug of celite and washed with CH 2 Cl 2 . The crude mixture was washed with 1N HCl (2 × 25 mL), water (2 × 25 mL) and brine (25 mL). After drying (Na 2 SO 4 ) and concentration under reduced pressure to remove CH 2 Cl 2 completely, the residue was purified by silica gel column chromatography (0-30% AcOEt in cyclohexane) as a yellow oil Product (total 505.6 mg, 86%). Rf = 0.33 (AcOEt / cyclohexane, 6: 4, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.15 (s, 1H, H-13), 7.52 (m, 2H, H-9, H-11), 7.51 (m, 2H, H-8, H-12 ), 5.40 (dd, J = 3.3 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.19 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H-2), 5.04 (dd, J = 9.9 and 3.3 Hz, 1H, H -3), 4.65 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.11 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H , H-6), 4.01 (s, 2H, H-15), 3.91 (dt, J = 0.8 and 6.9 Hz 1H, H-5), 2.11 (s, 3H, CH3CO), 2.09 (s, 3H, CH3CO ), 2.05 (s, 3H, CH3CO), 1.96 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 163.5 (C-14) , 137.4 (C-10), 134.3 (C-8), 128.2 (C-7), 120.3 (C-9), 86.7 (C-1), 74.7 (C-5), 72.1 (C-3), 67.4 (C-4), 61.7 (C-6), 29.5 (C-15), 21.0, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated forC22H26NO10NaSBr [M + Na] + 598.0358, found 598.0360 [α] D20 = -13.0 ° (c 2.2, MeOH)

４‐アジドアセトアミドベンジル‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１７。白色の固体として（１４８ ｍｇ、９４％）次の方法Ｃにより得られた。無水ＣＨ３ＣＮ（４ ｍＬ）中化合物１４（１６８ ｍｇ、０．２９２ ｍｍｏｌ）、ＴＭＧＮ３（１３８．６ ｍｇ、０．８７６ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜４０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．２８（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、１：１、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.05 (s, 1H, H-14), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.24 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.35 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.23 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 4.95 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.83 (d, J = 12.2 Hz, 1H, H-7), 4.57 (d, J = 12.2 Hz, 1H, H-7), 4.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.2 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.13 (dd, J = 11.2 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.10 (s, 2H, H-16), 3.85 (t, J = 6.4 Hz, 1H, H-5), 2.12 (s, 3H, CH3CO), 2.03 (s, 3H, CH3CO), 1.98 (s, 3H, CH3CO), 1.94 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.4, 170.3, 170.1, 169.4 (4 CO Ac), 164.6 (C-15), 136.6 (C-11), 133.4 (C-8), 128.6 (C-9), 120.0 (C-10), 99.8 (C-1)), 70.9 (C-3), 70.8 (C-5), 70.2 (C-7), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 61.3 (C-6), 53.0 (C-16), 20.8, 20.7, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI+): calculated for C23H29N4O11 [M + H]+ 537.1833, found 537.1840. [α]D20 = -18.0° (c 1.0, MeOH)。 4-Azidoacetamidobenzyl-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 17. Obtained by the following method C as a white solid (148 mg, 94%). Anhydrous CH 3 CN (4 mL) in a compound 14 (168 mg, 0.292 mmol) , TMGN3 (138.6 mg, 0.876 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-40% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.28 (AcOEt / cyclohexane, 1: 1, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.05 (s, 1H, H-14), 7.50 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.24 (d, J = 8.8 Hz , 2H, H-9, H-13), 5.35 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.23 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 4.95 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.83 (d, J = 12.2 Hz, 1H, H-7), 4.57 (d, J = 12.2 Hz, 1H, H-7), 4.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.17 (dd, J = 11.2 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.13 (dd, J = 11.2 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.10 ( s, 2H, H-16), 3.85 (t, J = 6.4 Hz, 1H, H-5), 2.12 (s, 3H, CH3CO), 2.03 (s, 3H, CH3CO), 1.98 (s, 3H, CH3CO ), 1.94 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.4, 170.3, 170.1, 169.4 (4 CO Ac), 164.6 (C-15), 136.6 (C-11), 133.4 (C-8), 128.6 (C-9), 120.0 (C-10), 99.8 (C-1)), 70.9 (C-3), 70.8 (C-5), 70.2 (C-7), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 61.3 (C-6), 53.0 (C-16), 20.8, 20.7, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C23H29N4O11 [M + H] + 537.1833, found 537.1840. [Α] D20 = −18.0 ° (c 1.0, MeOH).

４‐アジドアセトアミドベンジル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド３。HRMS (ESI+): calculated for C15H21N4O7 [M + H]+ 369.1410, found 369.1411。   4-Azidoacetamidobenzyl-β-D-galactopyranoside 3. HRMS (ESI +): calculated for C15H21N4O7 [M + H] + 369.1410, found 369.1411.

４‐アジドアセトアミドベンジル‐１‐チオ‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド１８。淡褐色の結晶として（９９ ｍｇ、９４％）次の方法Ｃにより得られた。無水ＣＨ３ＣＮ（５ ｍＬ）中化合物１５（１１２ ｍｇ、０．１９０ ｍｍｏｌ）、ＴＭＧＮ３（９０．２ ｍｇ、０．５７０ ｍｍｏｌ）により開始する。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜４０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．２６（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、１：１、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.20 (s, 1H, H-14), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.27 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-9, H-13), 5.39 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.25 (t, J = 10.0 Hz, 1H, H2), 4.96 (dd, J = 10.0 and 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.28 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H-1), 4.13 (dd, J = 11.4 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.10 (s, 2H, H-16), 4.07 (dd, J = 11.4 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 3.92, 3.81 (2xd, J = 13.0 Hz, each 1H, H-7), 3.80 (d, J = 6.7 Hz, 1H, H-5), 2.14 (s, 3H, CH3CO), 2.05 (s, 3H, CH3CO), 2.01 (s, 3H, CH3CO), 1.95 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.4, 170.3, 170.1, 169.7 (4CO Ac), 164.9 (C-15), 136.1 (C-11), 133.6 (C-8), 129.8 (C-9), 120.2 (C-10), 82.4 (C-1), 74.4 (C-5), 71.2 (C-3), 67.4 (C-4), 67.09 (C-2), 61.6 (C-6), 52.90 (C-16), 33.3 (C-7), 20.8, 20.7, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI+): calculated for C23H29N4O10S [M + H]+ 553.1604, found 553.1621. [α]D20 = -53.4° (c 1.0, MeOH)。 4-Azidoacetamidobenzyl-1-thio-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside 18. Obtained by the following Method C as pale brown crystals (99 mg, 94%). Start with compound 15 (112 mg, 0.190 mmol), TMGN3 (90.2 mg, 0.570 mmol) in anhydrous CH 3 CN (5 mL). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-40% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.26 (AcOEt / cyclohexane, 1: 1, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.20 (s, 1H, H-14), 7.50 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-10, H-12), 7.27 (d, J = 8.4 Hz , 2H, H-9, H-13), 5.39 (d, J = 3.3 Hz, 1H, H-4), 5.25 (t, J = 10.0 Hz, 1H, H2), 4.96 (dd, J = 10.0 and 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.28 (d, J = 10.0 Hz, 1H, H-1), 4.13 (dd, J = 11.4 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.10 (s, 2H, H-16), 4.07 (dd, J = 11.4 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 3.92, 3.81 (2xd, J = 13.0 Hz, each 1H, H-7), 3.80 (d, J = 6.7 Hz , 1H, H-5), 2.14 (s, 3H, CH3CO), 2.05 (s, 3H, CH3CO), 2.01 (s, 3H, CH3CO), 1.95 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.4, 170.3, 170.1, 169.7 (4CO Ac), 164.9 (C-15), 136.1 (C-11), 133.6 (C-8), 129.8 (C-9), 120.2 (C-10 ), 82.4 (C-1), 74.4 (C-5), 71.2 (C-3), 67.4 (C-4), 67.09 (C-2), 61.6 (C-6), 52.90 (C-16) , 33.3 (C-7), 20.8, 20.7, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C23H29N4O10S [M + H] + 553.1604, found 553.1621. [Α] D20 = -53.4 ° (c 1.0 , MeOH).

４‐アジドアセトアミドベンジル‐１‐チオ‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド４。HRMS (ESI+): calculated for C15H21N4O6S [M + H]+ 385.1182, found 385.1185。   4-Azidoacetamidobenzyl-1-thio-β-D-galactopyranoside 4. HRMS (ESI +): calculated for C15H21N4O6S [M + H] + 385.1182, found 385.1185.

４‐アジドアセトアミドフェニル‐１‐チオ‐２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド（１９）。無色の油として（５６ ｍｇ、５５％）次の方法Ｃにより得られた。無水ＣＨ３ＣＮ（４ ｍＬ）中化合物１６（１０９ ｍｇ、０．１８９ ｍｍｏｌ）、ＴＭＧＮ３（８９．７ ｍｇ、０．５６７ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜４０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．２８（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、６：４、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.08 (s, 1H, H-13), 7.51 (m, 2H, H-9, H-11), 7.49 (m, 2H, H-8, H-12), 5.39 (dd, J = 3.3 and 0.9 Hz, 1H, H-4), 5.18 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H-2), 5.03 (dd, J = 9.9 and 3.3 Hz, 1H, H-3), 4.64 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.16 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.13 (s, 2H, H-15), 4.09 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H, H-6), 3.90 (dt, J = 0.8 and 6.69 Hz, 1H, H-5), 2.10 (s, 3H, CH3CO), 2.08 (s, 3H, CH3CO), 2.03 (s, 3H, CH3CO), 1.95 (s, 3H, CH3CO). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.1, 169.5 (4 CO Ac), 164.7 (C-14), 137.3 (C-10), 134.2 (C-8), 128.0 (C-7), 120.4 (C-9), 86.7 (C-1), 74.6 (C-5), 72.1 (C-3), 67.4 (C-4), 61.7 (C-6), 53.08 (C-15), 20.9, 20.8, 20.7, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI+): calculated for C22H27N4O10S [M + H]+ 539.1448, found 539.1450. [α]D20 = -12.3° (c 1.3, MeOH)。 4-Azidoacetamidophenyl-1-thio-2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranoside (19). Obtained by the following method C as a colorless oil (56 mg, 55%). Anhydrous CH 3 CN (4 mL) in a compound 16 (109 mg, 0.189 mmol) , TMGN3 (89.7 mg, 0.567 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-40% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.28 (AcOEt / cyclohexane, 6: 4, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.08 (s, 1H, H-13), 7.51 (m, 2H, H-9, H-11), 7.49 (m, 2H, H-8, H-12 ), 5.39 (dd, J = 3.3 and 0.9 Hz, 1H, H-4), 5.18 (t, J = 9.9 Hz, 1H, H-2), 5.03 (dd, J = 9.9 and 3.3 Hz, 1H, H -3), 4.64 (d, J = 9.9 Hz, 1H, H-1), 4.16 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H, H-6), 4.13 (s, 2H, H-15), 4.09 (dd, J = 11.4 and 6.9 Hz, 1H, H-6), 3.90 (dt, J = 0.8 and 6.69 Hz, 1H, H-5), 2.10 (s, 3H, CH3CO), 2.08 (s, 3H, CH3CO), 2.03 (s, 3H, CH3CO), 1.95 (s, 3H, CH3CO) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.1, 169.5 (4 CO Ac), 164.7 (C-14 ), 137.3 (C-10), 134.2 (C-8), 128.0 (C-7), 120.4 (C-9), 86.7 (C-1), 74.6 (C-5), 72.1 (C-3) , 67.4 (C-4), 61.7 (C-6), 53.08 (C-15), 20.9, 20.8, 20.7, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C22H27N4O10S [M + H] + 539.1448, found 539.1450. [α] D20 = −12.3 ° (c 1.3, MeOH).

４‐アジドアセトアミドフェニル‐１‐チオ‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド２。HRMS (ESI+): calculated for C14H19N4O6S [M + H]+ 371.1025, found 371.1031。   4-Azidoacetamidophenyl-1-thio-β-D-galactopyranoside 2. HRMS (ESI +): calculated for C14H19N4O6S [M + H] + 371.1025, found 371.1031.

４’‐（２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐ビフェニル‐４‐カルボン酸ベンジル２４。白色の固体として（２．１８９ｇ、９９％）次の方法Ｅにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１５ ｍＬ）、１ＭのＮａＯＨ水溶液（５ ｍＬ）中化合物７（１．４３９ｇ、３．５ ｍｍｏｌ）、４’‐ヒドロキシ‐ビフェニル‐４‐カルボン酸ベンジル２２６（２．４６４ｇ、７．０５ ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウム水素スルファート（１．１８８ｇ、３．５ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜３０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．３９（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、１：１、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.13 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-12, H-16), 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 2H, H-22, H-26), 7.40 (t, J = 7.2 Hz, 2H, H-23, H-25), 7.34 (t, J = 7.2 Hz, 1H, H-24), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-8, H-18), 5.52 (dd, J = 10.4 and 8.0 Hz, 1H, H-2), 5.48 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.39 (s, 2H, H-20), 5.14 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H, H-1), 4.25 (dd, J = 11.2 and 7.0 Hz, 1H, H-6), 4.18 (dd, J = 11.2 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.09 (ddd, J = 7.0 and 6.4 and 0.8 Hz, 1H, H-5), 2.19 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.07 (s, 3H, COCH3), 2.02 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm:170.4, 170.3, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 166.4 (C-19), 157.2 (C-7), 145.1 (C-11), 136.3 (C-21), 135.3 (C-10), 130.4 (C-13), 128.9 (C-14), 128.7 (C-23), 128.6 (C-9), 128.4 (C-24), 128.3 (C-22), 126.9 (C-12), 117.5 (C-8), 99.7 (C-1), 71.3 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 66.8 (C-20), 61.5 (C-6), 20.9, 20.8, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI+) : calculated for C34H34O12Na [M + Na]+ 657.1948, found 657.1948. [α]D20 = +6.0° (c 1.2, 1,4-dioxane)。 Benzyl 24 '-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -biphenyl-4-carboxylate. Obtained by the following method E as a white solid (2.189 g, 99%). Distilled CH 2 Cl 2 (15 mL), Compound 7 (1.439 g, 3.5 mmol), 1 ′ NaOH aqueous solution (5 mL), benzyl 4′-hydroxy-biphenyl-4-carboxylate 226 (2.464 g, 7.05 mmol), tetrabutylammonium hydrogen sulfate (1.188 g, 3.5 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-30% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.39 (AcOEt / cyclohexane, 1: 1, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.13 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.60 (d, J = 8.5 Hz, 2H, H-12, H-16) , 7.56 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.46 (d, J = 7.2 Hz, 2H, H-22, H-26), 7.40 (t, J = 7.2 Hz, 2H, H-23, H-25), 7.34 (t, J = 7.2 Hz, 1H, H-24), 7.10 (d, J = 8.8 Hz, 2H, H-8, H-18), 5.52 (dd , J = 10.4 and 8.0 Hz, 1H, H-2), 5.48 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.39 (s, 2H, H-20), 5.14 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.11 (d, J = 8.0 Hz, 1H, H-1), 4.25 (dd, J = 11.2 and 7.0 Hz, 1H, H-6), 4.18 (dd, J = 11.2 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.09 (ddd, J = 7.0 and 6.4 and 0.8 Hz, 1H, H-5), 2.19 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3 ), 2.07 (s, 3H, COCH3), 2.02 (s, 3H, COCH3) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.4, 170.3, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 166.4 (C-19) , 157.2 (C-7), 145.1 (C-11), 136.3 (C-21), 135.3 (C-10), 130.4 (C-13), 128.9 (C-14), 128.7 (C-23), 128.6 (C-9), 128.4 (C-24), 128.3 (C-22), 126.9 (C-12), 117.5 (C-8), 99.7 (C-1), 71.3 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 66.8 (C-20), 61.5 (C-6), 20.9, 20.8, 20.7, 20.6 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C34H34O12Na [M + Na] + 657.1948, found 657.1948. [Α] D20 = + 6.0 ° (c 1.2, 1,4-dioxane).

４’‐（２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐ビフェニル‐４‐カルボン酸２６。白色の固体として（６９１ ｍｇ、３７％）次の方法Ａにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（３０ ｍＬ）中化合物２４（２．１８９ｇ、３．４５ ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（２１９ ｍｇ）。この混合物を後処理し、水層をＣＨ２Ｃｌ２によって抽出し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜５０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．４４（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２、１：９、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-12, H-16), 7.58 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.11 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-8, H-18), 5.53 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.48 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.15 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.26 (dd, J = 11.4 and 7.0 Hz, 1H, H-6), 4.19 (dd, J = 11.4 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.11 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.09 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.03 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 171.3 (C-19), 170.5, 170.4, 170.3, 169.5 (4 CO Ac), 157.3 (C-7), 145.8 (C-11), 135.2 (C-10), 131.0 (C-13), 128.7 (C-9), 127.9 (C-14), 127.0 (C-12), 117.5 (C-8), 99.7 (C-1), 71.3 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.5 (C-6), 20.9, 20.8, 20.7, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI+) : calculated for C27H28O12Na [M + Na]+ 567.1478, found 567.1489. [α]D20 = +6.6° (c 1.1, 1,4-dioxane)。 4 ′-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -biphenyl-4-carboxylic acid 26. Obtained by the following method A as a white solid (691 mg, 37%). Distilled CH 2 Cl 2 (30 mL) in the compound 24 (2.189g, 3.45 mmol), 10% of Pd / C (219 mg). And the mixture was worked up, and the aqueous layer was extracted with CH 2 Cl 2, the crude product was purified on silica gel (0-50% AcOEt in cyclohexane) to afford the desired product. Rf = 0.44 (MeOH / CH 2 Cl 2, 1: 9, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.17 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 2H, H-12, H-16) , 7.58 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.11 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-8, H-18), 5.53 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.48 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.15 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 4.26 (dd, J = 11.4 and 7.0 Hz, 1H, H-6), 4.19 (dd, J = 11.4 and 6.4 Hz, 1H, H-6), 4.11 (m, 1H , H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.09 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.03 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 171.3 (C-19), 170.5, 170.4, 170.3, 169.5 (4 CO Ac), 157.3 (C-7), 145.8 (C-11), 135.2 (C-10), 131.0 (C-13) , 128.7 (C-9), 127.9 (C-14), 127.0 (C-12), 117.5 (C-8), 99.7 (C-1), 71.3 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.5 (C-6), 20.9, 20.8, 20.7, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C27H28O12Na [M + Na] + 567.1478, found 567.1489. [Α] D20 = + 6.6 ° (c 1.1, 1,4-dioxane).

４’‐（２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐ビフェニル‐４‐カルボン酸ベンジル３‐アジド‐プロピル‐アミド(Benzyl 4’-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy)-biphenyl-4-carboxylic acid 3-azido-propyl-amide)２８。白色の固体として（４７ ｍｇ、７４％）次の方法Ｆにより得られた。無水ＤＭＦ（５ ｍＬ）中化合物２６（１３１ ｍｇ、０．１０２ ｍｍｏｌ）、１‐エチル‐３‐（３’‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（２５．３ ｍｇ、０．１６３ ｍｍｏｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（１５．１ ｍｇ、０．１１２ ｍｍｏｌ）、３‐アジドプロピルアミン（２０．４ ｍｇ、０．２０４ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜５０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．３４（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２、２：９８、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.81 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H-12, H-16), 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.06 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-8, H-18), 6.46 (t, J = 5.7 Hz, 1H, H-20), 5.49 (dd, J = 10.4 and 8.0 Hz, 1H, H-2), 5.45 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.11 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.08 (d, J = 8.0, 1H, H-1), 4.22 (dd, J = 11.3 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.15 (dd, J = 11.3 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.08 (t, J = 6.7 Hz, 1H, H-5), 3.56 (q, J = 6.4 Hz, 2H, H-21), 3.44 (t, J = 6.4 Hz, 2H, H-23), 2.17 (s, 3H, COCH3), 2.06 (s, 3H, COCH3), 2.04 (s, 3H, COCH3), 2.00 (s, 3H, COCH3), 1.91 (p, J = 6.4 Hz, 2H, H-22). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5(4 CO Ac), 167.4 (C-19), 157.1 (C-7), 143.6 (C-11), 135.3 (C-10), 133.0 (C-14), 128.5 (C-9), 127.6 (C-13), 127.1 (C-12), 117.4 (C-8), 99.7 (C-1), 71.2 (C-5), 70.9 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.5 (C-6), 49.8 (C-23), 38.0 (C-21), 28.9 (C-22), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI+): calculated for C30H35N4O11 [M + H]+ 627.2302, found 627.2304. [α]D20 = +3.8° (c 3.2, 1,4-dioxane) 4 '-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -biphenyl-4-carboxylic acid benzyl 3-azido-propyl-amide (Benzyl 4'-(2 , 3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -biphenyl-4-carboxylic acid 3-azido-propyl-amide) 28. Obtained by the following Method F as a white solid (47 mg, 74%). Compound 26 (131 mg, 0.102 mmol), 1-ethyl-3- (3′-dimethylaminopropyl) carbodiimide (25.3 mg, 0.163 mmol), hydroxybenzotriazole (5 mL) in anhydrous DMF (5 mL) 15.1 mg, 0.112 mmol), 3-azidopropylamine (20.4 mg, 0.204 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-50% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.34 (MeOH / CH 2 Cl 2, 2: 98, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.81 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H-13, H-15), 7.58 (d, J = 8.2 Hz, 2H, H-12, H-16) , 7.52 (d, J = 8.6 Hz, 2H, H-9, H-17), 7.06 (d, J = 8.7 Hz, 2H, H-8, H-18), 6.46 (t, J = 5.7 Hz, 1H, H-20), 5.49 (dd, J = 10.4 and 8.0 Hz, 1H, H-2), 5.45 (d, J = 3.4 Hz, 1H, H-4), 5.11 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 5.08 (d, J = 8.0, 1H, H-1), 4.22 (dd, J = 11.3 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.15 (dd, J = 11.3 and 6.7 Hz, 1H, H-6), 4.08 (t, J = 6.7 Hz, 1H, H-5), 3.56 (q, J = 6.4 Hz, 2H, H-21), 3.44 (t, J = 6.4 Hz , 2H, H-23), 2.17 (s, 3H, COCH3), 2.06 (s, 3H, COCH3), 2.04 (s, 3H, COCH3), 2.00 (s, 3H, COCH3), 1.91 (p, J = 6.4 Hz, 2H, H-22) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.3, 170.2, 169.5 (4 CO Ac), 167.4 (C-19), 157.1 (C-7), 143.6 ( C-11), 135.3 (C-10), 133.0 (C-14), 128.5 (C-9), 127.6 (C-13), 127.1 (C-12), 117.4 (C-8), 99.7 (C -1), 71.2 (C-5), 70.9 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.5 (C-6), 49.8 (C-23), 38.0 (C- 21), 28.9 (C-22), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO) .HRMS (ESI +): c alculated for C30H35N4O11 [M + H] + 627.2302, found 627.2304. [α] D20 = + 3.8 ° (c 3.2, 1,4-dioxane)

４’‐（β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐ビフェニル‐４‐カルボン酸ベンジル３‐アジドプロピル‐アミド(Benzyl 4’-(β-D-galactopyranosyloxy)-biphenyl-4-carboxylic acid 3-azidopropyl-amide)５。HRMS (ESI+) : calculated for C22H27N4O7 [M + H]+ 459.1880, found 459.1884。   4 '-(β-D-galactopyranosyloxy) -biphenyl-4-carboxylic acid benzyl 3-azidopropyl-amide (Benzyl 4'-(β-D-galactopyranosyloxy) -biphenyl-4-carboxylic acid 3-azidopropyl -amide) 5. HRMS (ESI +): calculated for C22H27N4O7 [M + H] + 459.1880, found 459.1884.

ベンジル‐６‐ヒドロキシ‐２‐ナフトアート２３：９０％水性メタノール（２０ ｍＬ）中６‐ヒドロキシ‐２‐ナフトエ酸（１．８８２ｇ、１０ ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３（１．６２９ｇ、５ ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で３０分間撹拌した。溶媒を減圧下で蒸発させ、次いで、トルエン（１０ ｍＬで２回）によって共蒸発させた。得られたセシウム塩を無水ＤＭＦ（１０ ｍＬ）中に懸濁させ、０℃まで冷却し、ベンジルブロミド（１．１９ ｍＬ、１０ ｍｍｏｌ）を加えた。１時間撹拌した後、溶液を室温まで加温し、撹拌を更に１０時間続けた後、溶媒を減圧下で除去した。残渣に水（２０ ｍＬで２回）を吸収させた後、ＡｃＯＥｔ（２００ ｍＬ）によって抽出し、合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で脱水し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シクロヘキサン中０〜３０％のＡｃＯＥｔ）によって精製し、白色の固体として生成物（２．０９５ｇ、７５％）を得た。Ｒｆ＝０．４７（シクロヘキサン／ＡｃＯＥｔ、１：１、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.57 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-5), 8.05 (dd, J = 8.6 and 1.7 Hz, 1H, H-7), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H, H-4), 7.69 (d, J = 8.6 Hz, 1H, H-8), 7.50 (d, J = 7.3 Hz, 1H, H-14), 7.42 (t, J = 7.3 Hz, 1H, H-15), 7.36 (t, J = 7.3 Hz, 1H, H-16), 7.18 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 8.8 and 2.4 Hz, 1H, H-3), 5.63 (s, 1H, OH), 5.43 (s, 2H, H-12). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm : 167.1 (C-11), 155.9 (C-2), 137.4 (C-9), 136.3 (C-13), 131.7 (C-4), 131.4 (C-5), 128.8 (C-15), 128.4 (C-16), 128.4 (C-14), 128.0 (C-11), 126.7 (C-8), 126.2 (C-7), 125.2 (C-16), 118.9 (C-3), 109.7 (C-1), 67.1 (C-12). HRMS (ESI+) :calcd. for C18H15O3 [M + H]+ 279.1021; found 279.1024。 Benzyl-6-hydroxy-2-naphthoate 23: To a solution of 6-hydroxy-2-naphthoic acid (1.882 g, 10 mmol) in 90% aqueous methanol (20 mL) was added Cs 2 CO 3 (1.629 g, 5 mmol) was added. The solution was stirred at room temperature for 30 minutes. The solvent was evaporated under reduced pressure and then coevaporated with toluene (2 × 10 mL). The resulting cesium salt was suspended in anhydrous DMF (10 mL), cooled to 0 ° C., and benzyl bromide (1.19 mL, 10 mmol) was added. After stirring for 1 hour, the solution was warmed to room temperature and stirring was continued for another 10 hours before the solvent was removed under reduced pressure. The residue was taken up with water (2 × 20 mL) and then extracted with AcOEt (200 mL), the combined organic layers were dried over Na 2 SO 4 and the solvent was removed under reduced pressure. The crude product was purified by silica gel column chromatography (0-30% AcOEt in cyclohexane) to give the product (2.095 g, 75%) as a white solid. Rf = 0.47 (cyclohexane / AcOEt, 1: 1, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.57 (d, J = 1.7 Hz, 1H, H-5), 8.05 (dd, J = 8.6 and 1.7 Hz, 1H, H-7), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H, H-4), 7.69 (d, J = 8.6 Hz, 1H, H-8), 7.50 (d, J = 7.3 Hz, 1H, H-14), 7.42 (t, J = 7.3 Hz, 1H, H-15), 7.36 (t, J = 7.3 Hz, 1H, H-16), 7.18 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 8.8 and 2.4 Hz, 1H, H-3), 5.63 (s, 1H, OH), 5.43 (s, 2H, H-12) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 167.1 (C-11), 155.9 (C-2), 137.4 (C-9), 136.3 (C-13), 131.7 (C-4), 131.4 (C-5), 128.8 (C-15), 128.4 (C-16), 128.4 (C-14), 128.0 (C-11), 126.7 (C-8), 126.2 (C-7), 125.2 (C-16), 118.9 (C-3), 109.7 (C-1), 67.1 (C-12) .HRMS ( ESI +): calcd. For C18H15O3 [M + H] + 279.1021; found 279.1024.

ベンジル‐６‐（２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐２‐ナフトアート２５。白色の固体として（１．２３９ ｍｇ、７７％）次の方法Ｅにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１５ ｍＬ）、１ＭのＮａＯＨ水溶液（５ ｍＬ）中化合物７（１．０８２ｇ、２．６３ ｍｍｏｌ）、化合物２３（１．４６４ｇ、５．２６ ｍｍｏｌ）、テトラブチルアンモニウム水素スルファート（０．８２３ｇ、２．６３ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜３０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．３８（ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン、１：１、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm:8.59 (d, J = 1.6 Hz, 1H, H-12), 8.09 (dd, J = 8.7 and 1.6 Hz, 1H, H-10), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H, H-13), 7.76 (d, J = 8.7 Hz, 1H, H-9), 7.49 (d, J = 7.2 Hz, 2H, H-20, H-24), 7.41 (t, J = 7.2 Hz, 2H, H-21, H-23), 7.37 (d, J = 2.4, 1H, H-8), 7.36 (m, 1H, H-22), 7.24 (dd, J = 8.8 and 2.4 Hz, 1H, H-14), 5.56 (dd, J = 10.4 and 7.9, 1H, H-2), 5.50 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.42 (s, 2H, H-18), 5.24 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 5.17 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.27 (dd, J = 11.1 and 6.8 Hz, 2H, H-6), 4.18-4.15 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.07 (s, 3H, COCH3), 2.03 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.4, 170.3, 169.6 (4 CO Ac), 166.70 (C-17), 156.7 (C-7), 136.9 (C-15), 136.3 (C-19), 131.5 (C-13), 131.2 (C-12), 129.3 (C-16), 128.9 (C-21), 128.50 (C-20), 127.5 (C-9), 126.6 (C-10), 126.5 (C-11), 119.8 (C-14), 111.2 (C-8), 99.5 (C-1), 71.5 (C-5), 71.0 (C-3), 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 67.1 (C-18), 61.8 (C-6), 20.9, 20.9, 20.9, 20.8 (4 CH3 CO). HRMS (ESI+) : calculated for C32H32O12Na [M + Na]+ 631.1791, found 631.1788. [α]D20 = -11.2° (c 1.1, MeOH) Benzyl-6- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -2-naphthoate 25. Obtained by the following method E as a white solid (1.239 mg, 77%). Compound 7 (1.082 g, 2.63 mmol), Compound 23 (1.464 g, 5.26 mmol), tetrabutylammonium hydrogen sulfate in distilled CH 2 Cl 2 (15 mL), 1 M aqueous NaOH (5 mL). (0.823 g, 2.63 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-30% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.38 (AcOEt / cyclohexane, 1: 1, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.59 (d, J = 1.6 Hz, 1H, H-12), 8.09 (dd, J = 8.7 and 1.6 Hz, 1H, H-10), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 1H, H-13), 7.76 (d, J = 8.7 Hz, 1H, H-9), 7.49 (d, J = 7.2 Hz, 2H, H-20, H-24), 7.41 (t , J = 7.2 Hz, 2H, H-21, H-23), 7.37 (d, J = 2.4, 1H, H-8), 7.36 (m, 1H, H-22), 7.24 (dd, J = 8.8 and 2.4 Hz, 1H, H-14), 5.56 (dd, J = 10.4 and 7.9, 1H, H-2), 5.50 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.42 (s, 2H, H-18), 5.24 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 5.17 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.27 (dd, J = 11.1 and 6.8 Hz, 2H, H-6), 4.18-4.15 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.07 (s, 3H, COCH3), 2.03 (s, 3H, COCH3) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.4, 170.3, 169.6 (4 CO Ac), 166.70 (C-17), 156.7 (C-7), 136.9 (C- 15), 136.3 (C-19), 131.5 (C-13), 131.2 (C-12), 129.3 (C-16), 128.9 (C-21), 128.50 (C-20), 127.5 (C-9 ), 126.6 (C-10), 126.5 (C-11), 119.8 (C-14), 111.2 (C-8), 99.5 (C-1), 71.5 (C-5), 71.0 (C-3) , 68.9 (C-2), 67.1 (C-4), 67.1 (C-18), 61.8 (C-6) , 20.9, 20.9, 20.9, 20.8 (4 CH3 CO). HRMS (ESI +): calculated for C32H32O12Na [M + Na] + 631.1791, found 631.1788. [Α] D20 = -11.2 ° (c 1.1, MeOH)

６‐（２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐２‐ナフトエ酸２７。白色の固体として（８０６ ｍｇ、７６％）次の方法Ａにより得られた。蒸留ＣＨ２Ｃｌ２（１５ ｍＬ）中化合物２５（１．２３９ｇ、２．０４ ｍｍｏｌ）、１０％のＰｄ／Ｃ（１２４ ｍｇ）。この混合物を後処理し、水層をＣＨ２Ｃｌ２によって抽出し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜５０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．４４（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２、６：９４、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.66 (d, J = 1.6 Hz, 1H, H-12), 8.11 (dd, J = 8.6 and 1.6 Hz, 1H, H-10), 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 1H, H-13), 7.80 (d, J = 8.6 Hz, 1H, H-9), 7.39 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-8), 7.27 (dd, J = 9.0 and 2.4 Hz, 1H, H-14), 5.57 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.51 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-4), 5.26 (d, J = 7.8 Hz, 1H, H-1), 5.18 (dd, J = 10.4 and 3.5 Hz, 1H, H-3), 4.30-4.19 (m, 2H, H-6), 4.19-4.17 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.09 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.04 (s, 3H, COCH3). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 171.6 (C-17), 170.6, 170.4, 170.3, 169.6 (4 CO Ac), 157.0 (C-7), 137.3 (C-15), 132.14 (C-12), 131.7 (C-13), 129.3 (C-16), 127.6 (C-9), 126.6 (C-10), 125.6 (C-11), 119.9 (C-14), 111.2 (C-8), 99.5 (C-1), 71.6 (C-5), 71.1 (C-3), 68.9 (C-2), 67.2 (C-4), 61.8 (C-6), 21.0, 20.9, 20.9, 20.8 (4 CH3CO). HRMS (ESI-) : calculated for C25H25O12 [M - H]- 517.1346, found 517.1344. [α]D20 = -6.4° (c 1.1, MeOH) 6- (2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -2-naphthoic acid 27. Obtained by the following method A as a white solid (806 mg, 76%). Distilled CH 2 Cl 2 (15 mL) in the compound 25 (1.239g, 2.04 mmol), 10% of Pd / C (124 mg). And the mixture was worked up, and the aqueous layer was extracted with CH 2 Cl 2, the crude product was purified on silica gel (0-50% AcOEt in cyclohexane) to afford the desired product. Rf = 0.44 (MeOH / CH 2 Cl 2, 6: 94, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 8.66 (d, J = 1.6 Hz, 1H, H-12), 8.11 (dd, J = 8.6 and 1.6 Hz, 1H, H-10), 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 1H, H-13), 7.80 (d, J = 8.6 Hz, 1H, H-9), 7.39 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-8), 7.27 (dd, J = 9.0 and 2.4 Hz, 1H, H-14), 5.57 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.51 (d, J = 3.5 Hz, 1H, H-4), 5.26 (d, J = 7.8 Hz, 1H, H-1), 5.18 (dd, J = 10.4 and 3.5 Hz, 1H, H-3), 4.30-4.19 (m, 2H, H-6), 4.19-4.17 (m, 1H, H-5), 2.20 (s, 3H, COCH3), 2.09 (s, 3H, COCH3), 2.08 (s, 3H, COCH3), 2.04 (s, 3H, COCH3) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 171.6 (C-17), 170.6, 170.4, 170.3, 169.6 (4 CO Ac), 157.0 (C-7), 137.3 (C-15), 132.14 (C-12), 131.7 (C-13), 129.3 (C-16), 127.6 (C-9), 126.6 (C-10), 125.6 (C-11), 119.9 (C-14), 111.2 (C-8), 99.5 (C-1), 71.6 (C-5), 71.1 (C-3), 68.9 (C-2), 67.2 (C-4), 61.8 (C-6), 21.0, 20.9, 20.9, 20.8 (4 CH3CO). HRMS (ESI- ): calculated for C25H25O12 [M-H]-517.1346, found 517.1344. [α] D20 = -6.4 ° (c 1.1, MeOH)

６‐（２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐２‐ナフトエ酸３‐アジド‐プロピル‐アミド(6-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy)-2-naphthoic acid 3-azido-propyl-amide)２９。白色の固体として（１８２ ｍｇ、７９％）次の方法Ｆにより得られた。無水ＤＭＦ（５ ｍＬ）中化合物２７（２００ ｍｇ、０．３８６ ｍｍｏｌ）、１‐エチル‐３‐（３’‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（９６ ｍｇ、０．６１８ ｍｍｏｌ）、ヒドロキシベンゾトリアゾール（５７．４ ｍｇ、０．４２５ ｍｍｏｌ）、３‐アジドプロピルアミン（７７．３ ｍｇ、０．７７２ ｍｍｏｌ）。この混合物を後処理し、粗生成物をシリカゲル（シクロヘキサン中０〜５０％のＡｃＯＥｔ）上で精製し、所望の生成物を得た。Ｒｆ＝０．３２（ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２、２：９８、ｖ／ｖ）。1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.83 (d, J = 9.0 Hz, 1H, H-13), 7.80 (dd, J = 8.5 and 1.5 Hz, 1H, H-10), 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H, H-9), 7.33 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-8), 7.22 (dd, J = 9.0 and 2.4 Hz, 1H, H-14), 6.52 (t, J = 5.7 Hz, 1H, NH), 5.53 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.47 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.19 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 5.13 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.24 (dd, J = 11.2 and 7.1 Hz, 1H, H-6), 4.16 (dd, J = 11.2 and 6.0 Hz, 1H, H-6), 4.14 (dd, J = 6.0 and 0.8 Hz, 1H, H-5), 3.59 (quad, J = 6.1 Hz, 2H, H-19), 3.46 (t, J = 6.1 Hz, 2H, H-21), 2.17 (s, 3H, COCH3), 2.05 (s, 3H, COCH3), 2.05 (s, 3H, COCH3), 2.01 (s, 3H, COCH3), 1.93 (p, J = 6.1 Hz, 2H, H-20). 13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm:170.5, 170.4, 170.3, 169.5 (5 CO ester), 167.6 (C-17), 156.1 (C-7), 135.9 (C-15), 130.9 (C-13), 130.7 (C-11), 129.4 (C-16), 127.7 (C-9), 127.4 (C-12), 124.5 (C-10), 119.9 (C-14), 111.1 (C-8), 99.5 (C-1), 71.4 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C-4), 61.6 (C-6), 49.8 (C-21), 38.1 (C-19), 29.0 (C-20), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI+) : calculated for C28H33N4O11 [M + H]+ 601.2146, found 601.2150. [α]D20 = -7.0° (c 1.1, MeOH) 6- (2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -2-naphthoic acid 3-azido-propyl-amide (6- (2,3,4,6 -tetra-O-acetyl-β-D-galactopyranosyloxy) -2-naphthoic acid 3-azido-propyl-amide) 29. Obtained by the following Method F as a white solid (182 mg, 79%). Compound 27 (200 mg, 0.386 mmol), 1-ethyl-3- (3′-dimethylaminopropyl) carbodiimide (96 mg, 0.618 mmol), hydroxybenzotriazole (57. 4 mg, 0.425 mmol), 3-azidopropylamine (77.3 mg, 0.772 mmol). The mixture was worked up and the crude product was purified on silica gel (0-50% AcOEt in cyclohexane) to give the desired product. Rf = 0.32 (MeOH / CH 2 Cl 2, 2: 98, v / v). 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ ppm: 7.83 (d, J = 9.0 Hz, 1H, H-13), 7.80 (dd, J = 8.5 and 1.5 Hz, 1H, H-10), 7.76 (d, J = 8.5 Hz, 1H, H-9), 7.33 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-8), 7.22 (dd, J = 9.0 and 2.4 Hz, 1H, H-14), 6.52 (t, J = 5.7 Hz, 1H, NH), 5.53 (dd, J = 10.4 and 7.9 Hz, 1H, H-2), 5.47 (dd, J = 3.4 and 0.8 Hz, 1H, H-4), 5.19 (d, J = 7.9 Hz, 1H, H-1), 5.13 (dd, J = 10.4 and 3.4 Hz, 1H, H-3), 4.24 (dd, J = 11.2 and 7.1 Hz, 1H, H-6), 4.16 (dd , J = 11.2 and 6.0 Hz, 1H, H-6), 4.14 (dd, J = 6.0 and 0.8 Hz, 1H, H-5), 3.59 (quad, J = 6.1 Hz, 2H, H-19), 3.46 (t, J = 6.1 Hz, 2H, H-21), 2.17 (s, 3H, COCH3), 2.05 (s, 3H, COCH3), 2.05 (s, 3H, COCH3), 2.01 (s, 3H, COCH3) , 1.93 (p, J = 6.1 Hz, 2H, H-20) .13C NMR (151 MHz, CDCl3) δ ppm: 170.5, 170.4, 170.3, 169.5 (5 CO ester), 167.6 (C-17), 156.1 ( C-7), 135.9 (C-15), 130.9 (C-13), 130.7 (C-11), 129.4 (C-16), 127.7 (C-9), 127.4 (C-12), 124.5 (C -10), 119.9 (C-14), 111.1 (C-8), 99.5 (C-1), 71.4 (C-5), 71.0 (C-3), 68.8 (C-2), 67.0 (C- 4), 61.6 (C-6), 49.8 (C- 21), 38.1 (C-19), 29.0 (C-20), 20.9, 20.8, 20.8, 20.7 (4 CH3CO). HRMS (ESI +): calculated for C28H33N4O11 [M + H] + 601.2146, found 601.2150. ] D20 = -7.0 ° (c 1.1, MeOH)

６‐（β‐Ｄ‐ガラクトピラノシルオキシ）‐２‐ナフトエ酸３‐アジド‐プロピル‐アミド６。HRMS (ESI+) : calculated for C20H25N4O7 [M + H]+ 433.1723, found 433.1722。   6- (β-D-galactopyranosyloxy) -2-naphthoic acid 3-azido-propyl-amide 6. HRMS (ESI +): calculated for C20H25N4O7 [M + H] + 433.1723, found 433.1722.

Ｏ‐２‐シアノエチル‐Ｏ’‐（３，６，９‐トリオキサドデカン‐１１‐イニル）‐Ｎ，Ｎ‐ジイソプロピルホスホラミダイト３３。
４Å分子ふるいの存在下及びアルゴン下で、乾燥ジクロロメタン（２０ ｍＬ）中３，６，９‐トリオキサドデカン‐１１‐イン‐１‐オール３１（３７６ ｍｇ、２ ｍｍｏｌ）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（５２０ μｌ、３ ｍｍｏｌ）を加え、次いで、Ｏ‐（２‐シアノエチル）‐Ｎ，Ｎ‐ジイソプロピル‐クロロホスホラミダイト（４８０ μｌ、２ ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。室温で２時間撹拌した後、１ ｍＬの水を加えた。１０分後、溶液をジクロロメタン（４０ ｍＬ）によって希釈した後、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７５ ｍＬ）によって洗浄した。有機層をジクロロメタン（１００ ｍＬで２回）によって抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、減圧下で蒸発させ乾燥させた。粗生成物をシリカゲル、４％ Ｅｔ３Ｎを含むシクロヘキサン中０〜５０％酢酸エチル上でクロマトグラフィーにかけ、無色のシロップとして５６３ ｍｇ、７３％の化合物３３を得た。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５５シクロ／ＡｃＯＥｔ／Ｅｔ３Ｎ ５：４：１、ｖ／ｖ／ｖ。1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ1.14 (dd, 12H, J = 6.8 Hz, Isopropyl), 2.36 (t, 1H, J = 2.4 Hz, -CCH), 2.59 (t, 2H, J = 6.5 Hz, -CH2-CN), 3.5-3.81 (m, 16H, -CH-, -O-CH2-CH2-O-, -O-CH2-P), 4.14 (d, 2H, J = 2.5 Hz, HCC-CH2). 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz): δ18.17, 18.26, 22.4, 22.4, 22.5, 22.6, 40.9, 41, 56.3, 56.5, 60.4, 60.6, 67, 68.3, 68.5, 68.6, 69, 69.2, 72.4, 77.5, 115.6. 31P-NMR (CDCl3, 121 MHz): δ148.67 ppm. HRMS TOF-ES positive mode calculated for C18H36N2O6P [M+H2O+H]+ 407.2311 found 407.2270。 O-2-cyanoethyl-O ′-(3,6,9-trioxadodecan-11-ynyl) -N, N-diisopropyl phosphoramidite 33.
To a solution of 3,6,9-trioxadodecan-11-in-1-ol 31 (376 mg, 2 mmol) in dry dichloromethane (20 mL) in the presence of 4 molecular sieves and argon, diisopropylethylamine ( 520 μl, 3 mmol) was added, followed by the dropwise addition of O- (2-cyanoethyl) -N, N-diisopropyl-chlorophosphoramidite (480 μl, 2 mmol). After stirring at room temperature for 2 hours, 1 mL of water was added. After 10 minutes, the solution was diluted with dichloromethane (40 mL) and then washed with saturated aqueous NaHCO 3 (75 mL). The organic layer was extracted with dichloromethane (2 × 100 mL), dried over Na 2 SO 4 and evaporated to dryness under reduced pressure. The crude product was chromatographed on silica gel, 0-50% ethyl acetate in cyclohexane containing 4% Et3N to give 563 mg, 73% of compound 33 as a colorless syrup. TLC: Rf = 0.55 cyclo / AcOEt / Et3N 5: 4: 1, v / v / v. 1H-NMR (CDCl3, 300 MHz): δ1.14 (dd, 12H, J = 6.8 Hz, Isopropyl), 2.36 (t, 1H, J = 2.4 Hz, -CCH), 2.59 (t, 2H, J = 6.5 Hz, -CH2-CN), 3.5-3.81 (m, 16H, -CH-, -O-CH2-CH2-O-, -O-CH2-P), 4.14 (d, 2H, J = 2.5 Hz, HCC 13C-NMR (CDCl3, 100 MHz): δ18.17, 18.26, 22.4, 22.4, 22.5, 22.6, 40.9, 41, 56.3, 56.5, 60.4, 60.6, 67, 68.3, 68.5, 68.6, 69, 69.2, 72.4, 77.5, 115.6. 31P-NMR (CDCl3, 121 MHz): δ148.67 ppm. HRMS TOF-ES positive mode calculated for C18H36N2O6P [M + H2O + H] + 407.2311 found 407.2270.

マンノースが中心にある芳香族ガラクトシドオリゴヌクレオチド複合体の合成
Ｃｕ（Ｉ）触媒アルキンアジド１，３‐双極環状付加によるプロパルギルマンノシドのアジド固体支持体３５への固定。プロパルギルα‐マンノピラノシド３４７（１００ ｍＭ、１７５ μＬ）の水溶液、ＣｕＳＯ４の新たに調製した水溶液（１００ ｍＭ、１４ μＬ）及びアスコルビン酸ナトリウムの新たに調製した水溶液（５００ ｍＭ、１４ μＬ）、水（１４７ μＬ）、並びにＭｅＯＨ（３５０ μＬ）を、３．５ μｍｏｌのアジド固体支持体３５．８に加えた。得られた混合物を、マイクロ波シンセサイザー（monowave 300、Anton Paar社製）を用いて６０℃で４５分間、封管中で加熱した。内部赤外線プローブによって温度をモニタリングした。溶液を除去し、ＣＰＧビーズを、Ｈ２Ｏ（２ ｍＬで３回）、ＭｅＯＨ（２ ｍＬで３回）及びＣＨ３ＣＮ（２ ｍＬで３回）によって洗浄し、乾燥させ、固体支持マンノシド３６を得た。 Synthesis of aromatic galactoside oligonucleotide complexes centered on mannose Immobilization of propargyl mannoside to azide solid support 35 by Cu (I) catalyzed alkyne azide 1,3-dipolar cycloaddition. An aqueous solution of propargyl α-mannopyranoside 347 (100 mM, 175 μL), a freshly prepared aqueous solution of CuSO 4 (100 mM, 14 μL) and a freshly prepared aqueous solution of sodium ascorbate (500 mM, 14 μL), water ( 147 μL), as well as MeOH (350 μL), was added to 3.5 μmol azide solid support 35.8. The resulting mixture was heated in a sealed tube at 60 ° C. for 45 minutes using a microwave synthesizer (monowave 300, manufactured by Anton Paar). Temperature was monitored by an internal infrared probe. The solution was removed and the CPG beads were washed with H 2 O (3 × 2 mL), MeOH (3 × 2 mL) and CH 3 CN (3 × 2 mL), dried and solid supported mannoside 36 Got.

マンノースヒドロキシルへのアルキニルホスホラミダイト導入の一般的手順。固体支持マンノシド３６（１ μｍｏｌ規模）を、ホスホラミダイト化学作用によってＤＮＡシンセサイザー(ABI 394)で、アルキニルホスホラミダイト３２９又は３３とともに処理した。カップリング工程及び酸化工程のみを実行した。カップリング工程では、ベンジルメルカプトテトラゾール（ＢＭＴ）を活性剤（無水ＣＨ３ＣＮ中０．３Ｍ）として用い、ホスホラミダイト×１又は×２（無水ＣＨ３ＣＮ中０．２Ｍ）を、１８０秒のカップリング時間（１８０秒で３回）により３回（４０ μｍｏｌで３回）導入した。市販ヨウ化物溶液（０．１Ｍ Ｉ２、ＴＨＦ／ピリジン／水９０：５：５）とともに１５秒間酸化を実行し、ホスホトリエステル(phophostriester)を形成し、又は３Ｈ‐１，２‐ベンゾジチオール‐３‐オン‐１，１‐ジオキシド（乾燥アセトニトリル中０．０５Ｍ Ｂｅａｕｃａｇｅ試薬）１０とともに６０秒間酸化を実行し、チオノホスホトリエステルを形成した。 General procedure for the introduction of alkynyl phosphoramidites to mannose hydroxyls. Solid supported mannoside 36 (1 μmol scale) was treated with alkynyl phosphoramidite 329 or 33 on a DNA synthesizer (ABI 394) by phosphoramidite chemistry. Only the coupling and oxidation steps were performed. In the coupling step, benzylmercaptotetrazole (BMT) was used as the activator (0.3M in anhydrous CH 3 CN) and phosphoramidite x1 or x2 (0.2M in anhydrous CH 3 CN) was coupled for 180 seconds. It was introduced 3 times (3 times at 40 μmol) depending on the time (3 times at 180 seconds). Oxidation is carried out with commercial iodide solution (0.1 M I 2 , THF / pyridine / water 90: 5: 5) for 15 seconds to form phosphophostriester or 3H-1,2-benzodithiol- Oxidation was performed with 3-one-1,1-dioxide (0.05M Beaucage reagent in dry acetonitrile) 10 for 60 seconds to form the thionophosphotriester.

ＤＮＡ配列の伸長及びＣｙ３による標識の一般的手順。ＤＮＡ配列を、標準ホスホラミダイト化学作用によって、ＤＮＡシンセサイザー(ABI 394)で、固体支持テトラアルキニル足場上で１ μｍｏｌ規模により合成した。カップリング工程では、活性剤としてＢＭＴ（無水ＣＨ３ＣＮ中０．３Ｍ）を用い、市販ヌクレオシドホスホラミダイト（無水ＣＨ３ＣＮ中０．０７５Ｍ）を、２０秒のカップリング時間により導入し、また、Ｃｙ３アミダイト（無水ＣＨ３ＣＮ中０．０６７Ｍ）を１８０秒のカップリング時間により導入した。市販溶液（キャップＡ：Ａｃ２Ｏ／ピリジン／ＴＨＦ、１０：１０：８０、及びキャップＢ：ＴＨＦ中１０％ Ｎ‐メチルイミダゾール）を用いて、無水酢酸とともに、キャッピング工程を１５秒間実行した。０．１Ｍ Ｉ２、ＴＨＦ／ピリジン／水９０：５：５を用いて、酸化を１５秒間実行した。ＣＨ２Ｃｌ２中２．５％ ＤＣＡとともに３５秒間、脱トリチル化を実行した。 General procedure for DNA sequence extension and Cy3 labeling. The DNA sequence was synthesized on a 1 μmol scale on a solid supported tetraalkynyl scaffold with a DNA synthesizer (ABI 394) by standard phosphoramidite chemistry. In the coupling step, BMT (0.3 M in anhydrous CH 3 CN) was used as the activator, and a commercially available nucleoside phosphoramidite (0.075 M in anhydrous CH 3 CN) was introduced with a coupling time of 20 seconds, and Cy3 amidite (0.067M in anhydrous CH 3 CN) was introduced with a coupling time of 180 seconds. The capping step was performed for 15 seconds with acetic anhydride using commercially available solutions (cap A: Ac 2 O / pyridine / THF, 10:10:80, and cap B: 10% N-methylimidazole in THF). 0.1 M I 2, THF / pyridine / water 90: 5: 5 was used to perform the oxidation for 15 seconds. Detritylation was performed for 35 seconds with 2.5% DCA in CH 2 Cl 2 .

固体支持オリゴヌクレオチド脱保護の一般的手順。修飾オリゴヌクレオチドを有するＣＰＧビーズを４ ｍＬのスクリュートップバイアルに移し、２ ｍＬの濃アンモニア水によって室温で１５時間処理し、５５℃まで２時間加温した。それぞれの化合物について、上清を回収し、蒸発させて乾燥させた。後の分析及び特性評価のために、残渣を水中に溶解した。   General procedure for solid support oligonucleotide deprotection. CPG beads with modified oligonucleotides were transferred to 4 mL screw top vials, treated with 2 mL concentrated aqueous ammonia at room temperature for 15 hours, and warmed to 55 ° C. for 2 hours. For each compound, the supernatant was collected and evaporated to dryness. The residue was dissolved in water for later analysis and characterization.

ＣｕＡＡＣ反応の一般的手順
アジド官能化Ｄ‐ガラクトシド誘導体１〜６導入の手順：５’‐蛍光‐３’‐アルキンオリゴヌクレオチド（１００ μＬのＨ２Ｏ中１００ ｎｍｏｌ）の溶液に、アジド官能化ガラクトシド１〜６（アルキン官能基当たり３当量、ＭｅＯＨ中１００ ｍＭ）、〜０．１ ｍｇのＣｕ（０）ナノ粉末、トリエチルアンモニウム酢酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．７）（２５ μＬ）、水及びＭｅＯＨを加え、２５０ μＬの最終量（水ＭｅＯＨ、１：１、ｖ／ｖ）を得た。得られた調製物を収容したチューブを密封し、Anton Paar社製のマイクロ波シンセサイザーMonowave 300に６０℃で６０分間置いた。 General Procedure for CuAAC Reaction Procedure for Azide Functionalized D-Galactoside Derivatives 1-6 Introduction: Azide functionalized galactoside in a solution of 5′-fluorescent-3′-alkyne oligonucleotide (100 nmol in 100 μL H 2 O) 1-6 (3 equivalents per alkyne functional group, 100 mM in MeOH), -0.1 mg Cu (0) nanopowder, triethylammonium acetate buffer (0.1 M, pH 7.7) (25 μL), water And MeOH were added to give a final volume of 250 μL (water MeOH, 1: 1, v / v). The tube containing the resulting preparation was sealed and placed in a microwave synthesizer Monowave 300 manufactured by Anton Paar at 60 ° C. for 60 minutes.

ＣｕＡＡＣ反応及びＨＰＬＣ精製の後処理
ＥＤＴＡ（４００ μＬ）を混合物に加え、遠心分離後、上清を回収しＣｕ（０）を除去し、ＮＡＰ１０上でサイズ排除クロマトグラフィーによって脱塩した。蒸発後、５’‐蛍光‐３’‐アセチル擬似糖質オリゴヌクレオチドを水中に溶解し、逆相分取ＨＰＬＣによって精製した。濃アンモニア水（３ ｍＬ）によって室温で２時間純粋な化合物を処理し、アセチル基を除去し、蒸発させ乾燥させた（純度９７％超）。ＴＥＡＡｃ緩衝液（ｐＨ７）中８％〜３２％のアセトニトリル直線勾配を用いる逆相分取ＨＰＬＣによって、２０分間、最終化合物を再度精製した。後の分析のために残渣を水中に溶解した。 Post-treatment of CuAAC reaction and HPLC purification EDTA (400 μL) was added to the mixture and after centrifugation, the supernatant was collected to remove Cu (0) and desalted by size exclusion chromatography on NAP10. After evaporation, the 5′-fluorescent-3′-acetyl pseudosaccharide oligonucleotide was dissolved in water and purified by reverse phase preparative HPLC. The pure compound was treated with concentrated aqueous ammonia (3 mL) at room temperature for 2 hours to remove the acetyl group and evaporated to dryness (purity> 97%). The final compound was purified again by reverse phase preparative HPLC using an 8% to 32% acetonitrile linear gradient in TEAAc buffer (pH 7) for 20 minutes. The residue was dissolved in water for later analysis.

ＤＤＩマイクロアレイの作製
微細構造スライドの作製：微細構造スライドは、４０平方ウェル（３ ｍｍの幅、６０±１ μｍの深さ、それぞれのマイクロリアクター間で４．５ ｍｍの間隔）が特徴である。フォトリソグラフィ及びウェットエッチング法によって、マイクロリアクターを平らなガラススライド上に作製した。これらの方法は、他に詳述されている(Mazurczyk, R. et al., (2008) Sens. Actuators, B 128, 552-559; Vieillard, J. et al., (2007) J. Chromatogr. B 845, 218-225)。 Fabrication of DDI microarrays Fabrication of microstructure slides: The microstructure slides are characterized by 40 square wells (3 mm width, 60 ± 1 μm depth, 4.5 mm spacing between each microreactor). Microreactors were fabricated on flat glass slides by photolithography and wet etching methods. These methods are described in detail elsewhere (Mazurczyk, R. et al., (2008) Sens. Actuators, B 128, 552-559; Vieillard, J. et al., (2007) J. Chromatogr. B 845, 218-225).

ガラススライドのシラン化：Dugasら((2003) J. Colloid Interface Sci. 264, 354-36; (2004) Sens. Actuators, B 101, 112-121; (2004) Sens. Actuators, B 101, 112-121)によって開発されたプロトコールに従って、スライドを次のように官能化した。ピラニア処理後、スライドを、１５０℃で２時間、乾燥窒素下で加熱した。次に、乾燥ペンタン及びｔｅｒｔ‐ブチル‐１１‐（ジメチルアミノ）シリルウンデカノアートを室温で加えた。２時間のインキュベーション後、ペンタンを蒸発させ、スライドを１５０℃で一晩加熱した。ＴＨＦ中で洗浄し水中で洗い流した後、官能化されたスライドを得た。室温で７時間、ギ酸を用いて、エステル官能基を対応する酸に変換させた。酸基を有するスライドを、乾燥ＴＨＦ中Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミド（０．１Ｍ）及びジ（イソプロピル）カルボジイミド（０．１Ｍ）とのアミンカップリングのために、室温で一晩活性化させた。そして、スライドを、ＴＨＦ及びジクロロメタン中で、超音波下で１０分間洗い流した。   Silanization of glass slides: Dugas et al. ((2003) J. Colloid Interface Sci. 264, 354-36; (2004) Sens. Actuators, B 101, 112-121; (2004) Sens. Actuators, B 101, 112- According to the protocol developed by 121), the slides were functionalized as follows. After piranha treatment, the slides were heated at 150 ° C. for 2 hours under dry nitrogen. Next, dry pentane and tert-butyl-11- (dimethylamino) silylundecanoate were added at room temperature. After 2 hours of incubation, the pentane was evaporated and the slide was heated at 150 ° C. overnight. After washing in THF and rinsing in water, a functionalized slide was obtained. The ester functional group was converted to the corresponding acid using formic acid at room temperature for 7 hours. Slides with acid groups were activated overnight at room temperature for amine coupling with N-hydroxysuccinimide (0.1M) and di (isopropyl) carbodiimide (0.1M) in dry THF. The slides were then washed out in THF and dichloromethane for 10 minutes under ultrasound.

アミノ修飾オリゴヌクレオチドの固定：４つのアミノ修飾オリゴヌクレオチドをEurogentec社から購入した。スポット形成ロボット、Scienion社製sciFLEX ARRAYER s3を用いるそれぞれの反応器の底部における２５ μＭ ＰＢＳ１０Ｘ （ｐＨ８．５）の対応するオリゴヌクレオチドによる０．３ ｎＬのスポット形成（１ウェル当たり６４スポット）。置換反応を室温で一晩、水飽和雰囲気下で実行し、次いで、水を徐々に蒸発させた。ＳＤＳ０．１％によって７０℃で３０分間、そして脱イオン水によって簡単にスライドの洗浄を実行した。 Immobilization of amino modified oligonucleotides: Four amino modified oligonucleotides were purchased from Eurogentec. Spot formation of 0.3 nL with a corresponding oligonucleotide of 25 μM PBS 10X (pH 8.5) at the bottom of each reactor using a spot forming robot, sciFLEX ARRAYER s3 from Scienion (64 spots per well). The displacement reaction was carried out overnight at room temperature under a water saturated atmosphere and then the water was slowly evaporated. Wash slides with SDS 0.1% at 70 ° C. for 30 minutes and briefly with deionized water.

表１：ＤＮＡアンカープラットフォーム作製に用いられるＤＮＡ配列の主な特性。ＧＣ％及びＴｍは、オンラインソフトウェアDINAMeltウェブサーバ(http://mfold.rna.albany.edu/?q=DINAMelt/Two-state-melting)によってＰＢＳ１Ｘ中［Ｎａ＋］＝１３７ ｍＭ、［ＣＺｉｐ］＝１ μＭ及びＴ＝３７℃で算出した。
 Table 1: Main characteristics of the DNA sequences used to make the DNA anchor platform. GC% and Tm are [Na + ] = 137 mM, [CZip] in PBS 1X by online software DINAMelt web server (http://mfold.rna.albany.edu/?q=DINAMelt/Two-state-melting) = 1 μM and T = 37 ° C.

ブロッキング工程：ハイブリダイゼーション工程時に非特異的吸着を防ぐために、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）によってすべてのスライドをブロッキングした。ブロッキングを、３７℃で２時間、ＰＢＳ１Ｘ（ｐＨ７．４）中ＢＳＡの４％溶液によって実行した。ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎ０．０５％中で３分３回、続いてＰＢＳ１Ｘ中で３分３回の洗浄工程を実行し、そして、ガラスを脱イオン水によって洗い流した後、遠心分離によって乾燥させた。 Blocking step: All slides were blocked with bovine serum albumin (BSA) to prevent non-specific adsorption during the hybridization step. Blocking was performed with a 4% solution of BSA in PBS 1X (pH 7.4) for 2 hours at 37 ° C. Washing steps were performed 3 times 3 minutes in PBS-Tween 0.05% , followed by 3 minutes 3 times in PBS 1X , and the glass was rinsed with deionized water and then dried by centrifugation.

擬似糖質のハイブリダイゼーション
ハイブリダイゼーション工程：ＤＮＡタグを有するそれぞれの複合糖質の２μＬ溶液を、ＰＢＳ１Ｘ（ｐＨ７．４）中１ μＭで、対応するウェルの底部に入れ、水蒸気飽和室内で、室温で一晩ハイブリダイゼーションさせた。試料を塩水‐クエン酸ナトリウム中で２回（ＳＳＣ２Ｘ）、ＳＤＳ０．１％中で、５１℃で１分間洗浄し、続いて、ＳＳＣ２Ｘ中で、室温で更に５分間洗浄し、そして、脱イオン水によって洗い流した後、遠心分離によって乾燥させた。 Pseudosaccharide hybridization Hybridization process: 2 μL of each glycoconjugate with DNA tag at 1 μM in PBS 1X (pH 7.4) is placed in the bottom of the corresponding well and placed in a steam saturated chamber at room temperature. Hybridization overnight. Samples were washed twice in brine-sodium citrate (SSC 2X ) in SDS 0.1% for 1 minute at 51 ° C., followed by an additional 5 minutes at room temperature in SSC 2X , and After rinsing with deionized water, it was dried by centrifugation.

ブロッキング工程：ハイブリダイゼーション後、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）によってすべてのスライドを再度ブロッキングした。ブロッキングを、３７℃で１時間、ＰＢＳ１Ｘ（ｐＨ７．４）中ＢＳＡの４％溶液によって実行した。洗浄工程：ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎ０．０５％中で３分３回、続いてＰＢＳ１Ｘ中で３分３回実行し、脱イオン水によって簡単に洗い流した後、遠心分離によって乾燥させた。 Blocking step: After hybridization, all slides were again blocked with bovine serum albumin (BSA). Blocking was performed with a 4% solution of BSA in PBS 1X (pH 7.4) for 1 hour at 37 ° C. Washing step: performed 3 times 3 minutes in PBS-Tween 0.05% , then 3 times 3 minutes in PBS 1X , rinsed briefly with deionized water and then dried by centrifugation.

レクチン標識
ＰＡ‐ＩＬレクチンのAlexa 647標識：ＰＡ‐ＩＬレクチンを、Invitrogen社製のAlexa Fluor（登録商標）647マイクロスケールタンパク質標識キット(A30009)によって標識した。要約すると、１ ｍｇ／ｍｌのＰＡ‐ＩＬ溶液（ＭＷ：５１ ｋＤａ、ＰＡ‐ＩＬは、Anne Imberty博士(CERMAV、グルノーブル(Grenoble))により快く提供された。）をＰＢＳ１Ｘ（ｐＨ７．４）中で希釈し、この１００ μｌを、１０ μＬの１Ｍ重炭酸ナトリウム（ｐＨ８．３）と混合した。７．９４ ｎｍｏｌ／μＬの反応性色素溶液の適切な量を、ｐＨ調整タンパク質を収容した反応チューブに移した。反応混合物を室温で１５分間混合した後、スピンカラム（ゲル樹脂容器）上で精製し、反応しない色素から標識されたタンパク質を分離した。 Lectin labeling Alexa 647 labeling of PA-IL lectin: PA-IL lectin was labeled with Alexa Fluor® 647 microscale protein labeling kit (A30009) from Invitrogen. In summary, a 1 mg / ml PA-IL solution (MW: 51 kDa, PA-IL was kindly provided by Dr. Anne Imberty (CERMAV, Grenoble).) In PBS 1X (pH 7.4). And 100 μl of this was mixed with 10 μL of 1M sodium bicarbonate (pH 8.3). An appropriate amount of 7.94 nmol / μL of reactive dye solution was transferred to a reaction tube containing pH adjusted protein. The reaction mixture was mixed at room temperature for 15 minutes and then purified on a spin column (gel resin container) to separate the labeled protein from unreacted dye.

レクチン濃度及びレクチンに対する色素の比率を、２８１ ｎｍ及び６５０ ｎｍの吸光度を読み取るSafas Monaco UV mc2分光光度計を組み合わせたトレイセル(tray cell)システムを用い、吸光度によって推定した。ＰＡ‐ＩＬの濃度は、四量体ＰＡ‐ＩＬに対する色素の標識度０．２０により、１３．５３ μΜと推定された。 The lectin concentration and the ratio of dye to lectin were estimated by absorbance using a tray cell system combined with a Safas Monaco UV mc 2 spectrophotometer reading the absorbance at 281 nm and 650 nm. The concentration of PA-IL was estimated to be 13.53 μΜ with a degree of dye labeling of 0.20 for tetrameric PA-IL.

「オンチップ」生物学的認識によるＩＣ５０の決定
インキュベーション溶液の調製：レクチンＰＡ‐ＩＬ（最終濃度０．１２ μＭ）、ＢＳＡ（最終濃度２％）及びＣａＣｌ２（最終濃度１ μｇ／ｍＬ）を、ＰＢＳ１Ｘ（ｐＨ＝７．４）中で希釈した。それぞれのマイクロチューブ内に、所望の最終濃度（０；１．１０−５；１．１０−４；５．１０−４；１．１０−３；５．１０−３；１．１０−２；５．１０−２；０．１；１；５；１０；５０；１０２；５．１０２；１０３；５．１０３；１０４；１０５；３．１０５）の阻害剤ラクトース乳糖を加えた。 Determination of IC 50 by “on-chip” biological recognition Preparation of incubation solution: Lectin PA-IL (final concentration 0.12 μM), BSA (final concentration 2%) and CaCl 2 (final concentration 1 μg / mL) , Diluted in PBS 1X (pH = 7.4). In each microtube, the desired final concentration (0; 1.10 −5 ; 1.10 −4 ; 5.10 −4 ; 1.10 −3 ; 5.10 −3 ; 1.10 −2 ; 5.10 -2; 0.1; 1; 5; 10; 50; 10 2; 5.10 2; 10 3; 5.10 3; 10 4; 10 5; 3.10 5) inhibitors lactose lactose Was added.

マイクロリアクターにおける複合糖質‐レクチン複合体のインキュベーション：それぞれの溶液の２ μＬを対応するマイクロウェルに入れ、スライドを水蒸気飽和室内で、３７℃で３時間インキュベートした。洗浄工程：ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎ０．０２％で、４℃で５分、次いで、脱イオン水中で簡単に実行した後、遠心分離によって乾燥させた。 Incubation of glycoconjugate-lectin complexes in the microreactor: 2 μL of each solution was placed in the corresponding microwell and the slides were incubated for 3 hours at 37 ° C. in a steam saturated chamber. Washing step: PBS-Tween 0.02% , 5 min at 4 ° C., then briefly performed in deionized water and then dried by centrifugation.

蛍光走査：マイクロアレイスキャナ、GenePix 4100Aソフトウェアパッケージ（Axon Instruments社製；λｅｘ ５３２／６３５ ｎｍ及びλｅｍ ５７５／６７０ ｎｍ）によって、スライドを５３２ ｎｍ、次いで６３５ ｎｍで走査した。６４のスポットの中間蛍光シグナルの平均値として、それぞれの複合体の蛍光シグナルを決定した。 Fluorescence scanning: Slides were scanned at 532 nm and then 635 nm with a microarray scanner, GenePix 4100A software package (Axon Instruments; λ ex 532/635 nm and λ em 575/670 nm). The fluorescence signal of each complex was determined as the mean value of the intermediate fluorescence signal of 64 spots.

「BioDataFit 1.02プログラム」を用いてＩＣ５０値を決定した。選択されたモデルは、次式の「シグモイド(Sigmoidal)」であった。
Y=a+(b-a)/[1+10^(x-c)]
式中、a=FImin、b=FImax、x=log[PA-IL]及びc=log(IC50)。FImin/maxは、擬似ガラクトにおいてみられる最小／最大Alexa-647蛍光シグナルである。 IC 50 values were determined using the “BioDataFit 1.02 program”. The model selected was “Sigmoidal” with the following formula:
Y = a + (ba) / [1 + 10 ^ (xc)]
In the formula, a = FI min , b = FI max , x = log [PA-IL] and c = log (IC 50 ). FI min / max is the minimum / maximum Alexa-647 fluorescence signal found in pseudogalact.

ＩＩ‐糖鎖クラスター１７ａ〜ｅ及び１８の合成、及びＰＡ‐ＩＬに対するこれらの結合効率の決定：
ＩＩ‐Ａ 合成：
マンノースが中心にある糖鎖クラスター１７ａ〜ｅ及び１８を合成し、ＰＡ‐ＩＬへの認識に対する擬似糖質における６つの異なるリンカーの影響を検討した。種々の長さ（９〜１４個の原子）及び溶媒和容量(solvation capacity)に及ぶ(spam)ように、リンカーを選択した（アルキル、芳香族又はエチレングリコール）（図１）。 Synthesis of II- glycan clusters 17a-e and 18 and determination of their binding efficiency to PA-IL:
II-A Synthesis:
Glycan clusters 17a-e and 18 centered on mannose were synthesized, and the effects of six different linkers in pseudosaccharides on recognition to PA-IL were examined. The linker was chosen (alkyl, aromatic or ethylene glycol) to span various lengths (9-14 atoms) and solvation capacity (FIG. 1).

本目的を達成するために、ホスホラミダイト化学作用によって糖鎖クラスターを構築することが可能なプロパギルガラクトース３及び種々のガラクトアジド誘導体４ａ〜ｅと組み合わせて、２つのホスホラミダイト（すなわち、ペント‐４‐イニル１及び６‐ブロモヘキシル２）を用いた(Beaucage, S. L., and Caruthers, M. H. (1981) Tetrahedron Lett. 22, 1859- 1862) and copper catalyzed azide alkyne cycloaddition (CuAAC) “click” chemistry (Rostovtsev, V. V. et al., (2002) Angew. Chem. Int. Ed. 41, 2596-2599; Tornoe, C. W., Christensen, C., and Meldal, M. (2002) J. Org. Chem. 67, 3057-3064)（図２）。   To achieve this goal, two phosphoramidites (ie, pent-4-ynyl 1) are combined with propargyl galactose 3 and various galactoazide derivatives 4a-e capable of building sugar chain clusters by phosphoramidite chemistry. And 6-bromohexyl 2) (Beaucage, SL, and Caruthers, MH (1981) Tetrahedron Lett. 22, 1859- 1862) and copper catalyzed azide alkyne cycloaddition (CuAAC) “click” chemistry (Rostovtsev, VV et al (2002) Angew. Chem. Int. Ed. 41, 2596-2599; Tornoe, CW, Christensen, C., and Meldal, M. (2002) J. Org. Chem. 67, 3057-3064) (Fig. 2).

文献のプロトコールに従って、プロパルギルガラクトース３及びガラクトースアジド誘導体４ａ〜ｅを調製した。Hasegawa, T. et al., (2007) Org. Biomol. Chem. 5 (15), 2404-2412; Joosten, J. A. F. et al., (2004) J. Med. Chem. 47, 6499-6508; Szurmai, Z. et al., (1989) Acta Chimica Hungarica-Models in Chemistry 126, 259-269; Pourceau, G. et al., (2009) J. Org. Chem. 74, 1218-1222; Mereyala, H. B., and Gurrala, S. R. (1998) Carbohydr. Res. 307, 351-354)。   Propargyl galactose 3 and galactose azide derivatives 4a-e were prepared according to literature protocols. Hasegawa, T. et al., (2007) Org. Biomol. Chem. 5 (15), 2404-2412; Joosten, JAF et al., (2004) J. Med. Chem. 47, 6499-6508; Szurmai, Z. et al., (1989) Acta Chimica Hungarica-Models in Chemistry 126, 259-269; Pourceau, G. et al., (2009) J. Org. Chem. 74, 1218-1222; Mereyala, HB, and Gurrala, SR (1998) Carbohydr. Res. 307, 351-354).

最近報告された戦略に従って、マンノースが中心にある糖鎖クラスター１７ａ〜ｅ及び１８を調製した(Pourceau, G. et al., (2010) Bioconjugate Chem. 21, 1520-1529)。基本的に、ＣｕＡＡＣによって、マンノースプロパルギル６をアジド固体支持体５上に固定し、次いで、リン酸化によって４つのヒドロキシルにペント‐４‐イニル１又はブロモヘキシル２ホスホラミダイトを導入し、４つのペンチニルホスファート又は４つのブロモヘキシルホスファート基を有するマンノースコアを得た（図３）。オリゴヌクレオチドを伸長させ、蛍光色素（Ｃｙ３）によって標識し、化合物８及び９を得た。化合物９については、４個の臭素原子をテトラメチルグアニジンアジド(tetramethylguanidine azide)（ＴＭＧ Ｎ３）と置換し、テトラアジドオリゴヌクレオチド１０を得た。アンモニア処理後、Ｃｕ（０）を用い溶液中ＣｕＡＡＣによって、化合物１１及び１２をそれぞれガラクトース誘導体４ａ〜ｅ及び３と結合させ、マンノースが中心にあるテトラ‐ガラクトースオリゴヌクレオチド複合体１５ａ〜ｅ及び１６を得た。逆相ＨＰＬＣ、及びガラクトース部分のアセチル基を加水分解するアンモニアによる最終的な処理によって、純粋な複合体を単離し、種々のリンカーの存在を示す６つの予想されたガラクトクラスター１７ａ〜ｅ及び１８を得た。 According to a recently reported strategy, glycan clusters 17a-e and 18 centered on mannose were prepared (Pourceau, G. et al., (2010) Bioconjugate Chem. 21, 1520-1529). Basically, mannose propargyl 6 was immobilized on the azide solid support 5 by CuAAC, and then pento-4-ynyl 1 or bromohexyl 2 phosphoramidite was introduced into the four hydroxyls by phosphorylation, and four pentynyl phosphines were introduced. Mannoscore with furt or 4 bromohexyl phosphate groups was obtained (FIG. 3). Oligonucleotides were extended and labeled with a fluorescent dye (Cy3) to give compounds 8 and 9. For compound 9, four bromine atoms were replaced with tetramethylguanidine azide (TMG N 3 ) to obtain tetraazide oligonucleotide 10. After ammonia treatment, compounds 11 and 12 are coupled with galactose derivatives 4a-e and 3 by CuAAC in solution using Cu (0), respectively, and tetra-galactose oligonucleotide complexes 15a-e and 16 centered on mannose are obtained. Obtained. Pure complex was isolated by reverse phase HPLC and final treatment with ammonia hydrolyzing the acetyl group of the galactose moiety, and the six expected galacto clusters 17a-e and 18 indicating the presence of various linkers were Obtained.

ＩＩ‐Ｂ 生物学的試験プロトコール：
直接蛍光走査によるＤＮＡに基づくグリコアレイ(glycoarray)を用いて、ＰＡ‐ＩＬへの擬似ガラクト１７ａ〜ｅ及び１８の結合効率を決定／測定した(Chevolot, Y. et al., (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46, 2398-2402)。ガラクトクラスターに対するＰＡ‐ＩＬの特異的な結合を示す負の対照として、直鎖トリマンノシルクラスター（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｍａｎ）３（Ｃ１、Chevolotらの文献（2007）に開示）を用い、直鎖テトラガラクトシルクラスター（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（Ｃ２、Chevolot, Y. et al., (2011) Chem. Comm. 47, 8826-8828）を正の対照及び比較に用いた（図４）。本目的上、糖鎖クラスターをすべて、ＤＮＡタグによるＤＮＡ指向固定(DNA directed Immobilisation)（ＤＤＩ）によってＤＮＡアレイ上に固定した。次いで、alexa 647‐ＰＡ‐ＩＬを加え、３時間インキュベートし、洗浄後、蛍光強度を６３５ ｎｍで読み取り、結合強度についての相対的情報を得た（図５）。 II-B Biological Testing Protocol:
The binding efficiency of pseudogalacts 17a-e and 18 to PA-IL was determined / measured using a DNA-based glycoarray with direct fluorescence scanning (Chevolot, Y. et al., (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46, 2398-2402). As a negative control showing specific binding of PA-IL to galactocluster, linear trimannosyl cluster (DMCH-PNMTzEG 3 -O-Man) 3 (disclosed in C1, Chevolot et al. (2007)), Linear tetragalactosyl cluster (DMCH-PNMTzEG-O-Gal) 4 (C2, Chevolot, Y. et al., (2011) Chem. Comm. 47, 8826-8828) was used for positive control and comparison (Figure 4). For this purpose, all sugar chain clusters were immobilized on the DNA array by DNA directed immobilisation (DDI) with a DNA tag. Alexa 647-PA-IL was then added, incubated for 3 hours, and after washing, the fluorescence intensity was read at 635 nm to obtain relative information about binding intensity (FIG. 5).

ＩＩ‐Ｃ 試験結果：
直鎖トリマンノース（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｍａｎ）３ Ｃ１クラスターはＰＡ‐ＩＬに結合せず、選択的な認識、及びマイクロアレイ上での非特異結合の欠如を示した。直鎖テトラガラクトースクラスター（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｃ２は、３１００前後の任意単位（ａ．ｕ．）の蛍光を示した。 II-C test results:
Linear trimannose (DMCH-PNMTzEG 3 -O-Man) 3 C1 cluster did not bind to PA-IL, indicating selective recognition and lack of non-specific binding on the microarray. The linear tetragalactose cluster (DMCH-PNMTzEG-O-Gal) 4 C2 showed an arbitrary unit (au) fluorescence of around 3100.

データは、結合効率に対して、ガラクトース部分とマンノースコアとの間のリンカーの長さに明らかな相関が存在しないことを示した。   The data showed that there was no obvious correlation between the linker length between the galactose moiety and the mannose core for the binding efficiency.

これとは対照的に、ガラクトース部分付近の芳香族基を有する擬似ガラクト（１７ｄ及び１８）は、高い結合を示し、トリアゾールメチレン（ＴＺＭ）モチーフ（１８）と比較して、フェニル（ＡｃＮＰｈｅ）のもの（１７ｄ）が優位であると考えられた。１７ａ、１７ｂ、１７ｅ及び１７ｃ間の結合の差は有意ではなく、このことは、エチレングリコール（ＥＧ２若しくはＥＧ３）又は脂肪族（Ｐｒｏ若しくはＤＭＣＨ）リンカーが、さらに、ＰＡ‐ＩＬのアミノ酸残基と相互作用しないことを示唆していた。 In contrast, pseudogalacto (17d and 18) with an aromatic group near the galactose moiety show high binding and that of phenyl (AcNPhe) compared to the triazolemethylene (TZM) motif (18). (17d) was considered dominant. The difference in binding between 17a, 17b, 17e and 17c is not significant, indicating that the ethylene glycol (EG 2 or EG 3 ) or aliphatic (Pro or DMCH) linker is further linked to the amino acid residue of PA-IL. Suggested not to interact with.

ＩＩＩ‐糖鎖クラスター２２〜３１の合成、及びＰＡ‐ＩＬに対するこれらの結合効率の決定：
一方では、種々の足場、２〜５個の残基（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２‐５の存在を示すＤＭＣＨ足場（化合物２２〜２５）などの直鎖足場、又は４個のガラクトース残基（ｄＴ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（図８）の存在を示すデオキシチミジン(desoxythymidine)足場（２６）への導入に対する、ＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐ガラクトース部分の影響を調査し、他方では、ＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐ガラクトース部分を、ガラクトースが中心にある足場（２７）及びグルコースが中心にある足場（２８）（図９）に導入した。比較のために、ガラクトースが中心にある足場（２９）及びグルコースが中心にある足場（３０）（図９）に構築されたガラクトクラスターによるＨｅｘＴｚＭガラクトース部分の影響も検討した。 Synthesis of III- glycan clusters 22-31 and determination of their binding efficiency to PA-IL:
On the one hand, various scaffolds, linear scaffolds such as DMCH scaffolds (compounds 22-25) indicating the presence of 2-5 residues (DMCH-PNMTzAcNPNPhe-O-Gal) 2-5 , or 4 galactose residues The effect of the AcNPhe-O-galactose moiety on the introduction into the deoxythymidine scaffold (26) indicating the presence of the group (dT-PNMTzAcNPNPhe-O-Gal) 4 (FIG. 8) was investigated, while AcNPhe- The O-galactose moiety was introduced into a scaffold (27) centered on galactose and a scaffold (28) centered on glucose (FIG. 9). For comparison, the effect of the HexTzM galactose moiety by galactoclusters constructed on a galactose-centric scaffold (29) and a glucose-centric scaffold (30) (FIG. 9) was also examined.

ＩＩＩ‐Ａ 合成：
活性剤として塩化ピバロイルを用いＨ‐ホスホネート化学作用によってＤＭＣＨ Ｈ‐ホスホネートモノエステル(Chevolot, Y. et al., (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46, 2398-2402; Bouillon, C. et al, (2006) J. Org. Chem. 71, 4700-4702)が２〜５回結合した、プロパンジオール固体支持体から開始し、直鎖ＤＭＣＨガラクトクラスターを合成した（図８）。得られたＨ‐ホスホネートジエステル結合を、アルキン官能基を導入可能なプロパルギルアミンの存在下で四塩化炭素によって酸化した。次いで、オリゴヌクレオチドを集め、ホスホラミダイト化学作用によってＣｙ３標識した。アンモニア処理によって脱保護され固体支持体から放出された後、２〜５つのアルキンの存在を示す得られた修飾オリゴヌクレオチドを、ＣｕＡＡＣによって４ｄと結合させた。ＨＰＬＣ精製後、アンモニアによってアセチル基を加水分解し、これによって、直鎖ＤＭＣＨガラクトクラスター（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２‐５（２２〜２５）に結合したオリゴヌクレオチドが生じた。固体支持体上に４回導入した市販ＤＭＴｒ‐チミジンＨ‐ホスホネートを用いて、デオキシチミジン足場（ｄＴ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２６）上に直鎖テトラ‐ガラクトースを同様に合成した。 III-A Synthesis:
DMCH H-phosphonate monoester (Chevolot, Y. et al., (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46, 2398-2402; Bouillon, C. et. al, (2006) J. Org. Chem. 71, 4700-4702) was synthesized from a propanediol solid support bound 2-5 times to synthesize linear DMCH galacto clusters (FIG. 8). The resulting H-phosphonate diester bond was oxidized with carbon tetrachloride in the presence of propargylamine capable of introducing an alkyne functional group. Oligonucleotides were then collected and Cy3 labeled by phosphoramidite chemistry. After deprotection by ammonia treatment and release from the solid support, the resulting modified oligonucleotide showing the presence of 2-5 alkynes was coupled to 4d by CuAAC. After HPLC purification, the acetyl group was hydrolyzed with ammonia, resulting in oligonucleotides bound to the linear DMCH galactocluster (DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 2-5 (22-25). Linear tetra-galactose was similarly synthesized on a deoxythymidine scaffold (dT-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 4 (26) using commercial DMTr-thymidine H-phosphonate introduced four times on a solid support.

ガラクトースが中心にある（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２７）及びグルコースが中心にある（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（２８）、ガラクトースが中心にある（ＨｅｘＴｚＭ‐Ｇａｌ）４（２９）、並びにグルコースが中心にある（ＨｅｘＴｚＭ‐Ｇａｌ）４（３０）の合成を、マンノース足場に関する上述したものと同じプロトコールであるがプロパルギル‐ガラクトース又はプロパルギル‐グルコースを用いて、進行させた。これらを、最初に、アジド固体支持体５上に固定した。比較目的で、１つのみのＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフの存在を示すオリゴヌクレオチド複合体（３１）を合成した（図９）。本目的を達成するために、ＣｕＡＡＣによって４ｄと結合したモノ‐アルキン固体支持体からＣｙ３オリゴヌクレオチドを合成した（ＳＩを参照）。 Galactose is central (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 (27) and glucose is central (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 (28), galactose is central (HexTzM-Gal) 4 (29), and The synthesis of glucose-centered (HexTzM-Gal) 4 (30) proceeded using the same protocol as described above for the mannose scaffold but using propargyl-galactose or propargyl-glucose. These were first immobilized on the azide solid support 5. For comparison purposes, an oligonucleotide complex (31) was synthesized that showed the presence of only one TzAcNPhe-O-Gal motif (FIG. 9). To achieve this goal, Cy3 oligonucleotides were synthesized from a mono-alkyne solid support coupled to 4d by CuAAC (see SI).

ＩＩＩ‐Ｂ 生物学的試験プロトコール：
‐試験１：
ＰＡ‐ＩＬに対するこれらのガラクトクラスターの結合特性を、グリコアレイを提供するＤＤＩを用いて検討した。チップ上にこれらを固定した後、alexa 647‐ＰＡ‐ＩＬを加え、洗浄後、それぞれの糖鎖クラスターの蛍光強度を読み取った（図１０）。Alexa 647蛍光シグナル（励起６３５ ｎｍ及び発光６７５ ｎｍ）は、ＰＡ‐ＩＬ結合に相関していた。 III-B Biological Test Protocol:
-Test 1:
The binding properties of these galactoclusters to PA-IL were investigated using DDI providing a glycoarray. After fixing them on the chip, alexa 647-PA-IL was added, and after washing, the fluorescence intensity of each sugar chain cluster was read (FIG. 10). Alexa 647 fluorescence signal (excitation 635 nm and emission 675 nm) correlated with PA-IL binding.

‐試験２：
既に報告されている(Moni, L. et al., (2009) ChemBioChem 10, 1369-1378; Zhang, J. et al., (2009) Biosens. Bioelectron. 24, 2515-2521)ように、蛍光強度のダイナミックレンジは幾分限定されているので、阻害剤としてラクトースを用いて糖鎖クラスターのＩＣ５０値を決定し（表１）、効力を算出した。本例では、ラクトース濃度に対応するＩＣ５０値は、糖鎖クラスターからＰＡ‐ＩＬの５０％を置換するのに必要である。したがって、最も高いＩＣ５０値は、ＰＡ‐ＩＬに対して最も高い糖鎖クラスターの親和性である。よって、ＩＣ５０値をＩＣ５０Ｌａｃと称した。 -Test 2:
As already reported (Moni, L. et al., (2009) ChemBioChem 10, 1369-1378; Zhang, J. et al., (2009) Biosens. Bioelectron. 24, 2515-2521) Since the dynamic range of is somewhat limited, the IC 50 value of the sugar chain cluster was determined using lactose as an inhibitor (Table 1), and the efficacy was calculated. In this example, an IC 50 value corresponding to the lactose concentration is necessary to replace 50% of PA-IL from the glycan cluster. Therefore, the highest IC 50 value is the affinity of the highest glycan cluster for PA-IL. Therefore, the IC 50 value was referred to as IC 50Lac .

ＩＩＩ‐Ｃ 試験結果：
‐試験１：
直鎖ＤＭＣＨ糖鎖クラスターの蛍光シグナルは、ガラクトース残基の数とともに上昇し、結合効率に対する糖モチーフの増加という利益を示した。ＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフを有するテトラクラスターは、ＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフを有するその類似体よりも約５倍低い蛍光シグナルを示し、芳香族ガラクトースの良好な結合を確認した。ＤＭＣＨ又はチミジン足場を有する両方の四量体直鎖糖鎖クラスターは、ＤＭＣＨ三量体クラスターよりも高い結合を示したが、ＤＭＣＨを有するクラスターが優位であった。ヘキソースが中心にあるテトラ‐ガラクトクラスターに関しては、データは、ヘキソースコアであればどれでも、ＨｅｘＴｚＭ‐Ｇａｌモチーフに対してＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフの存在を示すガラクトクラスターの良好な結合を確認した。両方のファミリーでは、マンノースコア及びグルコースコアから構築された糖鎖クラスターは、同様の蛍光シグナルを示し、ガラクトースコアから構築されたものは低いシグナルを示した（図１０）。 III-C Test results:
-Test 1:
The fluorescence signal of the linear DMCH glycan cluster increased with the number of galactose residues, indicating the benefit of increasing the sugar motif on the binding efficiency. Tetracluster with MTzEG 3 -O-Gal motif showed a fluorescent signal about 5 times lower than its analog with TzAcNPhe-O-Gal motif, confirming good binding of aromatic galactose. Both tetrameric linear sugar chain clusters with DMCH or thymidine scaffolds showed higher binding than DMCH trimer clusters, but clusters with DMCH were dominant. For tetra-galacto clusters centered on hexose, the data confirmed good binding of galacto clusters indicating the presence of the ProTzAcNPNPhe-O-Gal motif to the HexTzM-Gal motif for any hexose core. In both families, glycan clusters built from mannose and glucose cores showed similar fluorescent signals, and those built from galactose scores showed low signals (FIG. 10).

４つのＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフを有する直鎖糖鎖クラスターとヘキソースが中心にある糖鎖クラスターとの比較は、次に示すように蛍光シグナルを増加させる。Ｇａｌ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４≦（ｄＴ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４＜（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４＜Ｇｌｃ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４≦Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４。このデータは、直鎖ＤＭＣＨペンタ‐ガラクトースよりも良好な全糖鎖クラスターのうち、マンノースが中心にある及びグルコースが中心にある糖鎖クラスターの良好な結合を示した。 Comparison of a linear sugar chain cluster with four ProTzAcNPhe-O-Gal motifs and a sugar chain cluster centered on hexose increases the fluorescence signal as shown below. Gal (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ≦ (dT-PNMTzAcNPNPhe-O-Gal) 4 <(DMCH-PNMTzAcNPHe-O-Gal) 4 <Glc (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ≦ ManC 4 . This data showed better binding of glycan clusters centered on mannose and glucose in the center of all glycan clusters better than linear DMCH penta-galactose.

‐試験２：
５及び１６ ｍＭのＩＣ５０Ｌａｃ値をそれぞれ有する、モノガラクトースＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚ‐ＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ(Chevolot, Y. et al., (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46, 2398-2402)とＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌの比較は、芳香族ガラクトース（項目１及び２）に対する結合が３．２倍の増加を示し、これは、酵素結合レクチンアッセイによりCeccioniらによって行われた観察(Cecioni, S. et al., (2012) Chem. Eur. J. 18, 6250-6263)に類似していた。直鎖ガラクトクラスターでは、２〜３個の残基間の閾値効果による残基の数の増加とともに、ＰＡ‐ＩＬに対する良好な結合に対応するＩＣ５０Ｌａｃ値の増加がみられた（表１、項目４及び５）。ＭＴｚＥＧ３リンカーに対するＰＮＭＴｚＡｃＮＡｒリンカーの利益が確認された（（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｃ２、項目３：ＩＣ５０Ｌａｃ＝７７３ μＭに対して、（ＤＭＣＨ‐ＰＮＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ ２４、項目６：ＩＣ５０Ｌａｃ＝１０５６ μＭ）。この傾向は、マンノースが中心にある糖鎖クラスターにおいて強調された（項目９：１７ｄ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４においてＩＣ５０Ｌａｃ＝２８２６ μＭに対して、項目８：Ｇ３ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４においてＩＣ５０Ｌａｃ＝２９ μＭ）。結果は、マンノースが中心にあるトポロジーを有するＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフの優位性を示し、モノ芳香族ガラクトースと比較して１７７倍効力が増加し、ＥＧ３‐Ｏ‐ガラクトース（項目９）と比較して５６５倍効力が増加し、ＰＡ‐ＩＬに対する高い結合を獲得した。これらの結果は、リンカーの性質と空間的配置の組合せが親和性に対して強い影響があることを示す。 -Test 2:
Monogalactose DMCH-PNMTz-EG 3 -O-Gal (Chevolot, Y. et al., (2007) Angew. Chem. Int. Ed. 46, 2398-2402) with IC 50Lac values of 5 and 16 mM, respectively. And DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal showed a 3.2-fold increase in binding to aromatic galactose (items 1 and 2), which was observed by Ceccioni et al. By the enzyme-linked lectin assay (Cecioni et al. , S. et al., (2012) Chem. Eur. J. 18, 6250-6263). In the linear galactocluster, an increase in the number of residues due to the threshold effect between 2-3 residues, with an increase in IC 50Lac values corresponding to good binding to PA-IL (Table 1, entry). 4 and 5). The benefits of the PNMTzAcNAr linker over the MTzEG 3 linker were confirmed ((DMCH-PNMTzEG 3 -O-Gal) 4 C2, item 3: IC 50Lac = 773 μM, (DMCH-PNMTzAcNPhe-O-Gal) 4 24, Item 6: IC 50Lac = 1056 μM). This trend was emphasized in glycan clusters centered on mannose (Item 9: 17d Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 vs. IC 50 Lac = 2826 μM, Item 8: G3 Man (POProTzEG 3 -O -Gal ) 4 IC 50 Lac = 29 μM). The results show the superiority of the TzAcNPhe-O-Gal motif with a topology centered on mannose, a 177-fold increase in potency compared to monoaromatic galactose, compared with EG 3 -O-galactose (item 9) 565-fold increased potency and acquired high binding to PA-IL. These results indicate that the combination of linker properties and spatial configuration has a strong impact on affinity.

データは、ＰＡ‐ＩＬへの結合に対するヘキソースコアの影響が、ガラクトース‐リンカーの性質によって異なることを示した（表２）。テトラガラクトクラスターに関しては、ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＡｒリンカーによって、最良の結合は、マンノースコア１７ｄ、次いで、グルコースコア及びガラクトースコアでみられた（項目９〜１１）。これとは対照的に、ＨｅｘＴｚＭリンカーによって、最良の結合は、グルコースコア、次いで、ガラクトースコア及びマンノースコアを有するクラスターでみられた（項目１２〜１４）。   The data showed that the effect of hexose core on binding to PA-IL depends on the nature of the galactose-linker (Table 2). For the tetragalacto cluster, with POProTzAcNAr linker, the best binding was seen with mannose score 17d, followed by glucose core and galactose score (items 9-11). In contrast, with the HexTzM linker, the best binding was seen in the glucose core followed by clusters with galactose and mannose scores (items 12-14).

表２：ラクトースとの競合によって決定された糖鎖クラスターのＩＣ５０Ｌａｃ値。 Table 2: IC 50 Lac values of sugar chain clusters determined by competition with lactose.

ＩＶ‐糖鎖クラスター３２〜３９の合成、及びＰＡ‐ＩＬに対するこれらの結合効率の決定：
一部の変化を伴い、マンノースコアとＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフとを含む化合物を調製した。一方では、ペンチニルのものの代わりに、ジエチレングリコール又はテトラエチレングリコールプロパルギルホスホラミダイト１ａ〜ｂを用いて、マンノースコアとトリアゾールとの間の長さ／柔軟性を増加させ、他方では、ビス‐ペンチニルホスホラミダイト１ｃ、又は２，２‐（ビス‐プロパルギルオキシメチル）プロピルホスホラミダイト１ｄ（図１１）のいずれかを用いて、８個のアルキニル基を導入した。このように、マンノースが中心にある新しいテトラガラクトクラスター、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３２）、及びＭａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３３）は、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ １７ｄの１３個の原子というリンカー長さの代わりに、１７個の原子及び２３個の原子というリンカー長さをそれぞれ示す。マンノースが中心にあるオクタガラクトクラスター、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８（３４）及びＭａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４（３５）は、マンノースコアのそれぞれのヒドロキシル上に２個の残基の存在を示す（図１２）。このため、結合特性に対するリンカー長さの影響及び残基の数の影響を評価することができた。比較のために、ＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐ＧａｌモチーフがＥＧ３‐Ｇａｌモチーフに置換された類似体Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３６）も合成した（図１２）。 Synthesis of IV- glycan clusters 32-39 and determination of their binding efficiency to PA-IL:
With some changes, compounds containing mannauscore and TzAcNPhe-O-Gal motif were prepared. On the one hand, diethylene glycol or tetraethylene glycol propargyl phosphoramidite 1a-b is used instead of that of pentynyl to increase the length / flexibility between mannose core and triazole, while on the other hand bis-pentynylphospho Eight alkynyl groups were introduced using either lamidite 1c or 2,2- (bis-propargyloxymethyl) propyl phosphoramidite 1d (FIG. 11). Thus, a new tetragalacto cluster centered on mannose, Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (32), and Man (POEG 4 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (33), Man (POProTzAcNPhe- Instead of the linker length of 13 atoms of O-Gal) 4 17d, the linker lengths of 17 atoms and 23 atoms are shown, respectively. Two octagalactoclusters, Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 8 (34) and Man [POTHME (MTzAcNPhe-O-Gal) 2 ] 4 (35), centered on mannose, are on each hydroxyl of the mannose score. The presence of residues is shown (FIG. 12). This allowed us to evaluate the effect of linker length and the number of residues on binding properties. For comparison, an analog Man (POEG 2 MTzEG 3 -O-Gal) 4 (36) in which the AcNPhe-O-Gal motif was replaced with the EG 3 -Gal motif was also synthesized (FIG. 12).

そして、「芳香効果」のより多くの洞察を得るために、Ｏ‐フェニルがチミン（Ｔ‐Ｇａｌ）に置換されたガラクトースモチーフの存在を示す新しい糖鎖クラスター（３７、３８、３９）を合成した。これらの類似体は、チミンのヘテロ原子とレクチンのアミノ酸との水素結合を形成することができるように設計され、これによって、可能な限り良好な親和性がもたらされた。   And in order to gain more insight into the “fragrance effect”, we synthesized new glycan clusters (37, 38, 39) indicating the presence of galactose motif in which O-phenyl was replaced by thymine (T-Gal) . These analogs were designed to be able to form hydrogen bonds between thymine heteroatoms and lectin amino acids, which resulted in the best possible affinity.

ＩＶ‐合成：
ＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフの存在を示す新しい糖鎖クラスターを合成するために、プロパルギルジエチレングリコール（１ａ）若しくはテトラエチレングリコール（１ｂ）ホスホラミダイト、ビス‐ペント‐４‐イニルホスホラミダイト（１ｃ）又は２，２‐（ビス‐プロパルギルオキシメチル）プロピルホスホラミダイト（１ｄ）によって、固体支持マンノース７をリン酸化した。そして、オリゴヌクレオチド伸長及び標識後、テトラ／オクタアルキン構造体（１９ａ〜ｄ）を化合物４ｄに結合させ、マンノースが中心にある予想されたテトラ／オクタガラクトクラスターオリゴヌクレオチド複合体、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３２）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ４ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３３）、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８（３４）、及びＭａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４（３５）をそれぞれ得た（図１２）。同様に、プロパルギルジエチレンエチレングリコールリンカーを有するテトラアルキン１９ａも４ｅに結合させ、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（３６）を得た。 IV-synthesis:
Propargyl diethylene glycol (1a) or tetraethylene glycol (1b) phosphoramidite, bis-pent-4-ynyl phosphoramidite (1c) or 2 to synthesize new sugar clusters indicating the presence of the AcNPhe-O-Gal motif , 2- (Bis-propargyloxymethyl) propyl phosphoramidite (1d) phosphorylated the solid support mannose 7. Then, after oligonucleotide extension and labeling, the tetra / octaalkyne structure (19a-d) is coupled to compound 4d and the expected tetra / octagalactocluster oligonucleotide complex centered on mannose, Man (POEG 2 MTzAcNPhe -O-Gal) 4 (32), Man (POEG 4 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (33), Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 8 (34), and Man [POTHME (MTzAcNPhe-O-Gal) 2 ] 4 (35) were obtained, respectively (Figure 12). Similarly, tetraalkyne 19a having a propargyl diethylene ethylene glycol linker was also coupled to 4e to obtain Man (POEG 2 MTzEG 3 -O-Gal) 4 (36).

Ｔ‐Ｇａｌモチーフの存在を示す糖鎖クラスターの合成に関しては、アジド誘導体４ｆを、グルコース‐チミジンの合成について文献に記載されているプロトコール(Gillaizeau, I. et al., (2003) Eur. J. Org. Chem., 666-671)に従って調製した。本目的を達成するために、１，２，３，４，６‐ペンタ‐Ｏ‐アセチル‐ガラクトースを、２，４‐ビス‐Ｏ‐トリメチルシリル‐チミンによってグリコシル化し、２’，３’，４’，６’‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐ガラクトピラノース‐Ｎ１‐チミン２０（Ｔ‐Ｇａｌ）（又は２，３，４，６‐テトラ‐Ｏ‐アセチル‐Ｎ１‐チミン‐β‐Ｄ‐ガラクトピラノシド）を得た（図１３）。これを、炭酸カリウムの存在下で、チミン部分のＮ３上で１，４‐ジブロモブタンによってアルキル化し、そして、臭素原子をアジ化ナトリウムによって置換し、対応するアジドＮ‐チミン‐ガラクトース誘導体４ｆを得た。 Regarding the synthesis of a sugar chain cluster indicating the presence of the T-Gal motif, the azide derivative 4f was synthesized using the protocol described in the literature for the synthesis of glucose-thymidine (Gillaizeau, I. et al., (2003) Eur. J. Org. Chem., 666-671). To achieve this goal, 1,2,3,4,6-penta-O-acetyl-galactose is glycosylated with 2,4-bis-O-trimethylsilyl-thymine and 2 ′, 3 ′, 4 ′. , 6'-tetra -O- acetyl - galactopyranose -N 1 - thymine 20 (T-Gal) (or 2,3,4,6-tetra -O- acetyl -N 1 - thymine-beta-D-Garakutopira Noside) was obtained (FIG. 13). This is alkylated with 1,4-dibromobutane on N 3 of the thymine moiety in the presence of potassium carbonate and the bromine atom is replaced with sodium azide to give the corresponding azido N-thymine-galactose derivative 4f. Obtained.

Ｇａｌ‐Ｔアジド誘導体４ｆを、ＰｒｏＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ又はＥＧ２ＭＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌモチーフをそれぞれ有するテトラクラスター、及びＴＨＭＥＭＴｚＢｕＴＧａｌモチーフを有するオクタガラクトクラスターをもたらす、先に調製した、４つのペンチニル（１１）、４つのプロパルギルジエチレングリシル（１９ａ）又は４つのビス‐プロパルギル‐オキシメチルプロピル（１９ｄ）の存在を示すＣｙ３‐オリゴヌクレオチドマンノースコアに導入し、マンノースが中心にある予想されたテトラ／オクタガラクトクラスターオリゴヌクレオチド複合体、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）４（３７）、Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）４（３８）、及びＭａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＢｕＴ‐Ｇａｌ）２］４（３９）を得た（図１２）。 The previously prepared four pentynyl (11), four propargyls yielding the Gal-T azide derivative 4f yielding a tetracluster having a ProTzBuT-Gal or EG 2 MTzBuT-Gal motif, respectively, and an octagalacto cluster having a THMEMTZBuTGal motif. Expected tetra / octagalactocluster oligonucleotide complex centered on mannose, introduced into a Cy3-oligonucleotide mannose core indicating the presence of diethyleneglycyl (19a) or four bis-propargyl-oxymethylpropyl (19d) , Man (POProTzBuT-Gal) 4 (37), Man (POEG 2 MTzBuT-Gal) 4 (38), and Man [POTHME (MTzBuT-Gal) 2 ] 4 (39) was obtained (FIG. 12).

ＩＶ‐Ｂ 生物学的試験プロトコール：
試験１：
得られた９つの糖鎖クラスターのＰＡ‐ＩＬに対する結合を、上述したように、ＤＤＩマイクロアレイによって決定した（ＩＩ‐Ｂを参照）。 IV-B Biological Testing Protocol:
Test 1:
The binding of the resulting 9 sugar chain clusters to PA-IL was determined by DDI microarray as described above (see II-B).

試験２：
結合特性についての十分な理解のために、糖鎖クラスターのＩＣ５０Ｌａｃ値を測定した（表１、項目１５〜１８に報告されている結果）。 Test 2:
In order to fully understand the binding properties, IC 50Lac values of sugar chain clusters were measured (results reported in Table 1, items 15 to 18).

ＩＶ‐Ｃ 試験結果：
試験１の結果は図１４に示されており、ＰｒｏからＥＧ２Ｍまでのリンカー長さの増加によって、芳香族モチーフ（ＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）を有する糖鎖クラスターに対する良好な親和性を常に有する、ＴｚＥＧ３‐Ｏ‐ＧａｌモチーフとＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフの両方によって親和性が増加した。これとは対照的に、ＥＧ２ＭからＥＧ４Ｍまでのリンカー長さの増加によって、低い蛍光シグナルを有する糖鎖クラスターがもたらされ、このことは、非常に高い柔軟性を有し非常に長いリンカーが、ＰＡ‐ＩＬに対する結合に悪影響を及ぼすことを示唆していた。 IV-C test results:
The results of Test 1 are shown in FIG. 14 and always have good affinity for glycan clusters with aromatic motifs (TzAcNPhe-O-Gal) with increasing linker length from Pro to EG 2 M The affinity was increased by both the TzEG 3 -O-Gal motif and the TzAcNPhe-O-Gal motif. In contrast, an increase in linker length from EG 2 M to EG 4 M results in a glycan cluster with a low fluorescence signal, which is very flexible and very It has been suggested that long linkers adversely affect binding to PA-IL.

Ｍａｎ‐（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＡｒ）クラスターでは、４個から８個に残基の数が増加すると、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８ ３４に対してＭａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４又は１７ｄの蛍光シグナルが増加した。オクタクラスターの蛍光シグナルは、ＥＧ２Ｍリンカーを有するテトラクラスターの蛍光シグナルと類似していた。これとは対照的に、他のオクタクラスター、Ｍａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４ ３５は、２つの最良のテトラクラスターよりも低い蛍光シグナルを示した。Ｇａｌ‐Ｔから製造されるガラクトクラスターに関しては、負の対照に非常に類似している、約４５ ａ．ｕ．の６３５の蛍光シグナルを観察した。ガラクトシド残基の数が８個まで増加すると、結合は改善しなかった。チミンがガラクトピラノースのＣ１に直接結合するので、チミンガラクトシドクラスターについてのＰＡ‐ＩＬに対する結合阻害の理由は、立体障害に関係していると考えられた。この知見は、ガラクトースクラスターに対するＰＡ‐ＩＬの結合がトリアゾール環付近で低下するというMoniらの知見に類似している。実際に、本研究では、トリアゾール環は、Ｃ‐ガラクトシドのアノマー炭素に直接結合した(Moni, L. et al., (2009) ChemBioChem 10, 1369-1378)。 The Man- (POProTzAcNAr) cluster, the number of residues from four to eight increases, Man (POProTzAcNPhe-O-Gal ) 8 34 against Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 or 17d fluorescent signal of Increased. The octacluster fluorescence signal was similar to the tetracluster fluorescence signal with the EG 2 M linker. In contrast, the other octacluster, Man [POTHME (MTzAcNPhe-O-Gal) 2 ] 4 35, showed a lower fluorescence signal than the two best tetraclusters. For galacto clusters produced from Gal-T, very similar to the negative control, approximately 45 a. u. 635 fluorescence signals were observed. Increasing the number of galactoside residues to 8 did not improve binding. Since thymine directly binds to C1 of galactopyranose, the reason for inhibition of binding to PA-IL for the thymine galactoside cluster was thought to be related to steric hindrance. This finding is similar to that of Moni et al. That the binding of PA-IL to galactose clusters is reduced near the triazole ring. In fact, in this study, the triazole ring was directly attached to the anomeric carbon of C-galactoside (Moni, L. et al., (2009) ChemBioChem 10, 1369-1378).

オクタガラクトクラスター、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）８ ３４は、多くのガラクトースモチーフによりこれまで良好なクラスター効果を示すことが報告されている、すべての構造のうちで最も高い結合を示した。 The octagalacto cluster, Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 8 34, showed the highest binding of all structures reported so far with many galactose motifs.

試験２：
表１の項目１５〜１８に示されているように、それぞれのガラクトクラスターの効力を、モノ‐ＥＧ３‐Ｏ‐ガラクトース及びモノ‐芳香族ガラクトースによって算出した。ＩＣ５０Ｌａｃ値は、直接蛍光走査によってみられた傾向を確認し、ＴｚＥＧ３‐Ｏ‐ＧａｌからＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフ（項目１６に対して項目１５）が良好な結合であり、ＰｒｏからＥＧ２Ｍがリンカーの伸長により良好な結合であり（項目１５に対する項目８、及び項目１６に対する項目９）、ＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌモチーフを有するオクタ糖鎖クラスターに対する結合が最も高かった（ＩＣ５０Ｌａｃ＝６８０３、項目１７）。第２のオクタガラクトクラスターは、低いＩＣ５０Ｌａｃ値である１８０７ μＭを示し（項目１８）、空間的配置が結合に対して強い効果を有することを示した。 Test 2:
As shown in Table 1 of the item 15 to 18, the efficacy of each of galactomannans cluster, mono -EG 3 -O- galactose and mono - calculated by aromatic galactose. The IC 50Lac value confirms the trend seen by direct fluorescence scanning, TzEG 3 -O-Gal to TzAcNPhe-O-Gal motif (item 15 versus item 16) is a good binding, and Pro to EG 2 M was a good bond due to the extension of the linker (item 8 for item 15 and item 9 for item 16), and the bond to the octasaccharide chain cluster with the ProTzAcNPhe-O-Gal motif was the highest (IC 50Lac = 6803, Item 17). The second octagalacto cluster showed a low IC 50 Lac value of 1807 μM (item 18), indicating that the spatial arrangement has a strong effect on binding.

Ｖ‐溶液中Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ） ４ ）Ｇ１及び（Ｍａｎ（ＰＯＥＧ ２ ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ） ４ ）Ｇ２の合成及び試験：
生物物理学及び生物学研究のために、優位な糖鎖クラスターＧ１及びＧ２、並びに、分子を含有する非芳香族のものとして、ＤＮＡタグのない擬似ガラクトに相当するＭａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３Ｇａｌ）４ Ｇ３を、〜１００ ｍｇ規模により溶液中で合成した（図１５）。血球凝集抑制アッセイ（ＨＩＡ）、酵素結合レクチンアッセイ(Enzyme Linked Lectin Assay)（ＥＬＬＡ）、等温熱量測定（ＩＴＣ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）及びＤＤＩグリコアレイを用いて、ＰＡ‐ＩＬに対するこれらの特性を評価した。これらのうち最も強力なものについて、上皮細胞系ＮＣＩ‐Ｈ２９２（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １８４８）に対するＰＡ接着のこれらの阻害も決定した。 Synthesis and testing of Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ) G1 and (Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 ) G2 in V- solution :
For biophysics and biological research, Man (POProTzEG 3 Gal) 4 G3, which corresponds to a pseudo-galacto without DNA tag as the preferential glycan cluster G1 and G2, and non-aromatic containing molecules Was synthesized in solution on a ~ 100 mg scale (Figure 15). Using hemagglutination inhibition assay (HIA), Enzyme Linked Lectin Assay (ELLA), isothermal calorimetry (ITC), surface plasmon resonance (SPR) and DDI glycoarray, Characteristics were evaluated. Of these, the most potent of these also determined their inhibition of PA adhesion to the epithelial cell line NCI-H292 (ATCC CRL 1848).

Ｖ‐Ａ 合成：
糖鎖クラスターＧ１（Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）、Ｇ２（Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）、及びＧ３（Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）の合成
１‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マンノース：メタノール（３０ ｍＬ）中α‐Ｄ‐マンノース（２．０ｇ）の溶液を、DOWEX‐50W X8樹脂、Ｈ＋形態（４．０ｇ）の存在下で、還流下で２７時間煮沸させた。ろ過し濃縮して乾燥させた後、粗生成物をエタノール中で再結晶させ、白色の固体として１‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マンノース（１．５８ｇ、７３％）を得た。分析データは文献のデータ（Cadotte, J. E. et al., (1952) J. Am. Chem. Soc.74, 1501-1504）と一致していた。 VA synthesis:
Synthesis of Glycan Cluster G1 (Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ), G2 (Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 ), and G3 (Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 ) 1-O -Methyl-α-D-mannose: A solution of α-D-mannose (2.0 g) in methanol (30 mL) under reflux in the presence of DOWEX-50W X8 resin, H + form (4.0 g) And boiled for 27 hours. After filtration, concentration and drying, the crude product was recrystallized in ethanol to give 1-O-methyl-α-D-mannose (1.58 g, 73%) as a white solid. Analytical data were consistent with literature data (Cadotte, JE et al., (1952) J. Am. Chem. Soc. 74, 1501-1504).

リン酸化の一般的手順：
無水ジメチルホルムアミド／アセトニトリル（１：１．５、ｖ／ｖ）中１‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マンノース（５０ ｍｇ、０．２６ ｍｍｏｌ、１当量）の溶液を、分子ふるい（３Å）とともに１時間３０分撹拌した。次いで、アルキンホスホラミダイト４６ａ〜ｂ（１．３０ ｍｍｏｌ、５当量）、及びテトラゾール溶液（無水ＣＨ３ＣＮ中０．４Ｍ、６．４ ｍＬ、２．６０ ｍｍｏｌ、１０当量）を加えた。この混合物を３０℃で２時間撹拌し、Ｈ２Ｏによって反応を停止した。Ａ２６（ＩＯ４ −）樹脂（１．０ｇ、２．５０ ｍｍｏｌ、９．６当量）を加え、この混合物を２時間撹拌した。樹脂をろ過し、ジクロロメタン（４０ ｍＬ）を加えた後、この反応物を、ＮａＨＣＯ３（６０ ｍＬ）の飽和水溶液及びブライン（６０ ｍＬ）によって洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し濃縮し、所望のテトラアルキンマンノース誘導体４７ａ〜ｂを得た。 General procedure for phosphorylation:
A solution of 1-O-methyl-α-D-mannose (50 mg, 0.26 mmol, 1 eq) in anhydrous dimethylformamide / acetonitrile (1: 1.5, v / v) was added with molecular sieve (3Å). Stir for 1 hour 30 minutes. Then, alkyne phosphoramidites 46a~b (1.30 mmol, 5 eq), and tetrazole solution (anhydrous CH 3 CN in 0.4M, 6.4 mL, 2.60 mmol, 10 eq) was added. The mixture was stirred at 30 ° C. for 2 hours and quenched with H 2 O. A 26 (IO 4 − ) resin (1.0 g, 2.50 mmol, 9.6 equiv) was added and the mixture was stirred for 2 hours. After the resin was filtered and dichloromethane (40 mL) was added, the reaction was washed with a saturated aqueous solution of NaHCO 3 (60 mL) and brine (60 mL). The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated to give the desired tetraalkyne mannose derivatives 47a-b.

４７ａ：淡黄色の油として得られた（２０８ ｍｇ、８１％）。1H NMR (300 MHz, D2O) δ4.98 (d, J=21.0 Hz, 1H, H-1), 4.87-4.57 (m, 3H, H-2, H-5, H-6), 4.37-4.12 (m, 16H, OCH2CH2CN, POCH2CH2), 3.94-3.89 (m, 1H, H-6), 3.45 (s, 4H, OCH3, H-3), 3.40 (m, 1H, H-4), 2.88-2.78 (m, 8H, CH2CN), 2.39-2.34 (m, 4H, CH2CH2CCH), 2.08-1.90 (m, 8H, POCH2CH2), 1.73-1.64 (m, 4H, CH2CCH).31P NMR (162 MHz, CDCl3)d -1.65-3.01 (m, 1P). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ115.5 (CN) 98.3 (C-1), 81.5 (OCH2CCH), 68.5 (CH2CCH, C-2, C-5, C-6), 65.6 (C-3, C-4), 60.9 (2s, POCH2), 55.7 (OCH3), 27.7 (POCH2CH2), 18.7 (CH2CN), 13.1 (CH2CH2CCH). MS MALDI-TOF+m/z calcd for C39H55N4O18P4[M+H]+= 991.76 found 991.86. HR-ESI-QToF MS (positive mode): m/z calcd for C39H55N4O18P4[M+H]+=991.2465 found 991.2462。 47a: Obtained as a pale yellow oil (208 mg, 81%). 1 H NMR (300 MHz, D 2 O) δ4.98 (d, J = 21.0 Hz, 1H, H-1), 4.87-4.57 (m, 3H, H-2, H-5, H-6), 4.37-4.12 (m, 16H, OCH 2 CH 2 CN, POCH 2 CH 2 ), 3.94-3.89 (m, 1H, H-6), 3.45 (s, 4H, OCH 3 , H-3), 3.40 (m , 1H, H-4), 2.88-2.78 (m, 8H, CH 2 CN), 2.39-2.34 (m, 4H, CH 2 CH 2 CCH), 2.08-1.90 (m, 8H, POCH 2 CH 2 ), 1.73-1.64 (m, 4H, CH 2 CCH). 31 P NMR (162 MHz, CDCl 3 ) d -1.65-3.01 (m, 1P). 13 C NMR (100 MHz, CDCl 3 ) δ115.5 (CN) 98.3 (C-1), 81.5 (OCH 2 CCH), 68.5 (CH 2 CCH, C-2, C-5, C-6), 65.6 (C-3, C-4), 60.9 (2s, POCH 2 ), 55.7 (OCH 3 ), 27.7 (POCH 2 CH 2 ), 18.7 (CH 2 CN), 13.1 (CH 2 CH 2 CCH). MS MALDI-TOF + m / z calcd for C 39 H 55 N 4 O 18 P 4 [M + H] + = 991.76 found 991.86. HR-ESI-QToF MS (positive mode): m / z calcd for C 39 H 55 N 4 O 18 P 4 [M + H] + = 991.2465 found 991.2462.

４７ｂ：無色の油として得られた（２７９ ｍｇ、８７％）。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ4.93 (d, J=24.2 Hz, 1H, H-1), 4.84-4.79 (m, 1H, H-6), 4.73-4.59 (m, 2H, H-2, H-5), 4.37-4.18 (m, 16H, POCH2CH2CN, POCH2CH2), 4.17-4.12 (m, 8H, OCH2CCH), 3.86-3.80 (m, 1H, H-6), 3.68 (m, 8H, POCH2CH2), 3.63 (s, 17H, OCH2CH2O, H-3), 3.61-3.57 (m, 1H, H-4), 3.38 (s, 3H, OCH3), 2.82-2.74 (m, 8H, CH2CN), 2.46 (m, 4H, OCH2CCH).31P NMR (162 MHz, CDCl3)d -1.67--3.11 (m, 1P). 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ117.1 (CN) 98.3 (C-1), 79.6 (OCH2CCH), 74.9 (CH2CCH, C-2, C-5, C-6), 70.2-69.7 (2m, POCH2CH2, C-3, C-4), 69.1 (OCH2CH2O), 67.8-62.3 (5m, POCH2), 58.3 (OCH2CCH), 55.7 (OCH3), 19.5 (CH2CN). MALDI-TOF+m/z calcd for C47H71N4O26P4[M+H]+= 1231.96 found 1231.19. HR-ESI-QToF MS (positive mode): m/z calcd for C47H71N4O26P4[M+H]+=1231.3297 found 1231.3307。 47b: Obtained as a colorless oil (279 mg, 87%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ4.93 (d, J = 24.2 Hz, 1H, H-1), 4.84-4.79 (m, 1H, H-6), 4.73-4.59 (m, 2H, H -2, H-5), 4.37-4.18 (m, 16H, POCH 2 CH 2 CN, POCH 2 CH 2 ), 4.17-4.12 (m, 8H, OCH 2 CCH), 3.86-3.80 (m, 1H, H -6), 3.68 (m, 8H, POCH 2 CH 2 ), 3.63 (s, 17H, OCH 2 CH 2 O, H-3), 3.61-3.57 (m, 1H, H-4), 3.38 (s, 3H, OCH 3 ), 2.82-2.74 (m, 8H, CH 2 CN), 2.46 (m, 4H, OCH 2 CCH). 31 P NMR (162 MHz, CDCl 3 ) d -1.67--3.11 (m, 1P 13 C NMR (100 MHz, CDCl 3 ) δ117.1 (CN) 98.3 (C-1), 79.6 (OCH 2 CCH), 74.9 (CH 2 CCH, C-2, C-5, C-6) , 70.2-69.7 (2m, POCH 2 CH 2 , C-3, C-4), 69.1 (OCH 2 CH 2 O), 67.8-62.3 (5m, POCH 2 ), 58.3 (OCH 2 CCH), 55.7 (OCH 3 ), 19.5 (CH 2 CN). MALDI-TOF + m / z calcd for C 47 H 71 N 4 O 26 P 4 [M + H] + = 1231.96 found 1231.19. HR-ESI-QToF MS (positive mode) : m / z calcd for C 47 H 71 N 4 O 26 P 4 [M + H] + = 1231.3297 found 1231.3307.

１，３‐双極環状付加及び炭水化物脱アセチル化の一般的手順：
アルキン官能化化合物（４７ａ若しくは４７ｂ）１．０当量、及びアジドテトラアセチルガラクトース誘導体４８ａ(Bouillon, C. et al., (2006) J. Org. Chem.71, 4700-4702)又は化合物４８ｂ（４〜４．８当量）を、トリエチルアンモニウム酢酸緩衝液（１７５ μＬ、０．１Ｍ、ｐＨ７．７）及びナノ粉末銅（２ ｍｇ）を含むジオキサン中に溶解した。得られた混合物を７０℃で一晩撹拌した。次いで、この反応物をＣＨ２Ｃｌ２（１５ ｍＬ）中に希釈し、ブライン（１５ ｍＬで３回）によって洗浄した。有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、ろ過し濃縮し乾燥させた。得られた生成物をアセトン（５ ｍＬ）中に溶解し、濃アンモニア溶液（３０％）を加えた（２０ ｍＬ）。この混合物を室温で１時間撹拌した。蒸発後、粗生成物をミリＱ水中に溶解し、この溶液を、DOWEX‐50W X8樹脂、Ｎａ＋形態を充填したカラムに通した。濃縮後、残渣を、Ｃ１８フラッシュカラムクロマトグラフィー（４０ｇ）（水(eau)／ＣＨ３ＣＮ／トリエチルアンモニウム酢酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ７．７）、９７／０／３〜４７／５０／３）によって精製し、所望の複合糖質を得た。 General procedure for 1,3-dipolar cycloaddition and carbohydrate deacetylation:
Alkyne-functionalized compound (47a or 47b) 1.0 equivalent and azidotetraacetylgalactose derivative 48a (Bouillon, C. et al., (2006) J. Org. Chem. 71, 4700-4702) or compound 48b (4 ˜4.8 equivalents) was dissolved in dioxane containing triethylammonium acetate buffer (175 μL, 0.1 M, pH 7.7) and nanopowdered copper (2 mg). The resulting mixture was stirred at 70 ° C. overnight. The reaction was then diluted in CH 2 Cl 2 (15 mL) and washed with brine (3 × 15 mL). The organic layer was dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated to dryness. The resulting product was dissolved in acetone (5 mL) and concentrated ammonia solution (30%) was added (20 mL). The mixture was stirred at room temperature for 1 hour. After evaporation, the crude product was dissolved in MilliQ water and this solution was passed through a column packed with DOWEX-50W X8 resin, Na + form. After concentration, the residue was purified by C18 flash column chromatography (40 g) (water / eau / CH 3 CN / triethylammonium acetate buffer (0.1 M, pH 7.7), 97/0/3 to 47/50 / Purification by 3) gave the desired glycoconjugate.

Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｇ１：淡黄色の油として得られた（１４１ ｍｇ、６４％）：４７ａ（１００ ｍｇ、０．１ ｍｍｏｌ、１当量）、４８ａ（２１１ ｍｇ、０．４ ｍｍｏｌ、４当量）、ジオキサン（２．０ ｍＬ）。1H NMR (300 MHz, D2O) δ7.82-7.72 (4s, 4H, H-triaz), 7.34-7.27 (m, 8H, H-ar), 7.04-6.99 (m, 8H, H-ar), 5.30-5.19 (4s, 8H, C(O)CH2N-triaz), 4.92-4.89 (m, 5H, H-1 gal, H-1 man), 4.86-4.84 (m, 2H, H-2 man, H-3 man), 4.74-4.72 (m, 2H, H-4 man, H-5 man), 3.95-3.93 (m, 10H, H-6 man, OCH2CH2), 3.85-3.68 (m, 24H, H-2 gal, H-3 gal, H-4 gal, H-5 gal, H-6 gal), 3.30 (s, 3H, OCH3), 2.75-2.67 (m, 8H, CH2CH2C-triaz), 1.95-1.81 (m, 8H, CH2CH2CH2) ppm. 31P NMR (121 MHz, D2O)d 0.86 (s), -0.262 (t) ppm. 13C NMR (100 MHz, D2O) d 165.3 (C=O), 153.6 (Cq-ar), 147.2 (Cq-triaz), 130.8 (Cq-ar), 124.1 (CH-triaz), 122.5(C-ar), 116.4 (C-ar), 100.4 (C-1 gal), 98.3 (C-1 man), 74.78, 72.0, 70.0 (3s, 3C, C-2 gal, C-3 gal, C-4 gal, C-5 gal), 67.9 (OCH2CH2), 64.7, 64.1 (C-2 man, C-3 man, C-4 man, C-5 man, C-6 man), 60.1 (C6 gal), 51.3 (C(O)CH2N-triaz, OCH3), 29.5 (CH2CH2CH2), 28.8 (CH2C-triaz). HPLCtR= 11.25 min. MS MALDI-TOF-m/z calcd for C83H113N16O46P4[M-H]-= 2194.76 found 2194.84 HR-ESI-QToF MS (positive mode): m/z calcd for C83H116N16O46P4[M+2H]++=1098.3090 found 1098.3064。 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 G1: obtained as a pale yellow oil (141 mg, 64%): 47a (100 mg, 0.1 mmol, 1 eq), 48a (211 mg, 0.4 mmol) 4 eq), dioxane (2.0 mL). 1 H NMR (300 MHz, D 2 O) δ7.82-7.72 (4s, 4H, H-triaz), 7.34-7.27 (m, 8H, H-ar), 7.04-6.99 (m, 8H, H-ar ), 5.30-5.19 (4s, 8H, C (O) CH 2 N-triaz), 4.92-4.89 (m, 5H, H-1 gal, H-1 man), 4.86-4.84 (m, 2H, H- 2 man, H-3 man), 4.74-4.72 (m, 2H, H-4 man, H-5 man), 3.95-3.93 (m, 10H, H-6 man, OCH 2 CH2), 3.85-3.68 ( m, 24H, H-2 gal, H-3 gal, H-4 gal, H-5 gal, H-6 gal), 3.30 (s, 3H, OCH 3 ), 2.75-2.67 (m, 8H, CH 2 CH 2 C-triaz), 1.95-1.81 (m, 8H, CH 2 CH 2 CH 2 ) ppm. 31 P NMR (121 MHz, D2O) d 0.86 (s), -0.262 (t) ppm. 13 C NMR ( 100 MHz, D 2 O) d 165.3 (C = O), 153.6 (C q -ar), 147.2 (C q -triaz), 130.8 (C q -ar), 124.1 (CH-triaz), 122.5 (C- ar), 116.4 (C-ar), 100.4 (C-1 gal), 98.3 (C-1 man), 74.78, 72.0, 70.0 (3s, 3C, C-2 gal, C-3 gal, C-4 gal , C-5 gal), 67.9 (OCH 2 CH 2 ), 64.7, 64.1 (C-2 man, C-3 man, C-4 man, C-5 man, C-6 man), 60.1 (C 6 gal ), 51.3 (C (O) CH 2 N-triaz, OCH 3 ), 29.5 (CH 2 CH 2 CH 2 ), 28.8 (CH 2 C-triaz). HPLCt R = 11.25 min. MS MALDI-TOF - m / z calcd for C 83 H 113 N 16 O 46 P 4 [MH] - = 2194.76 found 2194.84 HR-ESI-QToF MS (positive mode): m / z calcd for C 83 H 116 N 16 O 46 P 4 [M + 2H] ++ = 1098.3090 found 1098.3064.

Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｇ２：淡い色の油として得られた（１９０ ｍｇ、９５％）：４７ｂ（１００ ｍｇ、０．０８２ ｍｍｏｌ、１当量）、４８ａ（２０４ ｍｇ、０．４ ｍｍｏｌ、４．８当量）、ジオキサン（２．８ ｍＬ）。1H NMR (600 MHz, D2O) δ8.19-8.15 (m, 4H, H-triaz), 7.46-7.44 (m, 8H, H-ar), 7.17-7.15 (m, 8H, H-ar), 5.45-5.43 (m, 8H, C(O)CH2N-triaz), 5.05-5.03 (m, 4H, H-1 gal), 4.99 (m, 1H, H-1 man), 4.74 (d, J= 2.4 Hz, 8H, OCH2C-triaz), 4.45-4.32 (m, 3H, H-2 man, H-3 man, H-5 man), 4.17-4.10 (m, 6H,3/4 POCH2CH2), 4.06 (d, J= 2.4 Hz, 1H, H-4 man), 4.04 (d, J= 2.0 Hz, 4H, H-4 gal), 3.89-3.74 (m, 50H, H-2 gal, H-3 gal, H-5 gal, H-6 gal,1/4 POCH2CH2, OCH2CH2), 3.69-3.67 (m, 2H, H-6 man), 3.39 (s, 3H, OCH3) ppm. 13C NMR (150 MHz, D2O) d 166.1 (C=O), 154.4 (Cq-ar), 144.4 (Cq-triaz), 131.6 (Cq-ar), 126.7 (CH-triaz), 123.4 (C-ar), 117.2 (C-ar), 101.1 (C-1 gal), 98.8 (C-1 man), 75.5, 72.7, 70.7 (3s, 3C, C-2 gal, C-3 gal, C-5 gal), 70.3, 69.7, (2m, 5C, C-2 man, C-3 man, C-4 man, C-5 man, C-6 man), 69.1 (C-4 gal), 68.6 (OCH2CH2), 64.9 (POCH2CH2), 63.2 (OCH2C-triaz), 60.9 (C6 gal), 52.6 (C(O)CH2N-triaz, OCH3). HPLCtR= 14.32 min. MS MALDI-TOF-m/z calcd for C91H129N16O54P4[M-H]-: 2431.95 found 2432.18. HR-ESI-QToF MS (positive mode): m/z calcd for C91H132N16O54P4[M+2H]++=1218.3513 found 1218.3436。 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 G2: obtained as a pale oil (190 mg, 95%): 47b (100 mg, 0.082 mmol, 1 eq), 48a (204 mg, 0. 4 mmol, 4.8 equiv), dioxane (2.8 mL). 1 H NMR (600 MHz, D 2 O) δ8.19-8.15 (m, 4H, H-triaz), 7.46-7.44 (m, 8H, H-ar), 7.17-7.15 (m, 8H, H-ar ), 5.45-5.43 (m, 8H, C (O) CH 2 N-triaz), 5.05-5.03 (m, 4H, H-1 gal), 4.99 (m, 1H, H-1 man), 4.74 (d , J = 2.4 Hz, 8H, OCH 2 C-triaz), 4.45-4.32 (m, 3H, H-2 man, H-3 man, H-5 man), 4.17-4.10 (m, 6H, 3/4 POCH 2 CH 2 ), 4.06 (d, J = 2.4 Hz, 1H, H-4 man), 4.04 (d, J = 2.0 Hz, 4H, H-4 gal), 3.89-3.74 (m, 50H, H- 2 gal, H-3 gal, H-5 gal, H-6 gal, 1/4 POCH 2 CH 2, OCH 2 CH 2), 3.69-3.67 (m, 2H, H-6 man), 3.39 (s, 3H, OCH 3 ) ppm. 13 C NMR (150 MHz, D 2 O) d 166.1 (C = O), 154.4 (C q -ar), 144.4 (C q -triaz), 131.6 (C q -ar), 126.7 (CH-triaz), 123.4 (C-ar), 117.2 (C-ar), 101.1 (C-1 gal), 98.8 (C-1 man), 75.5, 72.7, 70.7 (3s, 3C, C-2 gal, C-3 gal, C-5 gal), 70.3, 69.7, (2m, 5C, C-2 man, C-3 man, C-4 man, C-5 man, C-6 man), 69.1 ( C-4 gal), 68.6 (OCH 2 CH 2 ), 64.9 (POCH 2 CH 2 ), 63.2 (OCH 2 C-triaz), 60.9 (C 6 gal), 52.6 (C (O) CH 2 N-triaz, OCH 3 ). HPLCt R = 14.32 min. MS MALDI-TOF - m / z calcd fo r C 91 H 129 N 16 O 54 P 4 [MH] - : 2431.95 found 2432.18.HR-ESI-QToF MS (positive mode): m / z calcd for C 91 H 132 N 16 O 54 P 4 [M + 2H ] ++ = 1218.3513 found 1218.3436.

Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｇ３：淡黄色の油として得られた（６６ ｍｇ、６２％）：４７ａ（５０ ｍｇ、０．０５０ ｍｍｏｌ、１当量）、４８ｂ（１０１ ｍｇ、０．２００ ｍｍｏｌ、４当量）、ジオキサン（１．５ ｍＬ）。1H NMR (600 MHz, D2O) δ8.00-7.92 (m, 4H, H-triaz), 5.01 (m, 1H, H-1 man), 4.62-4.64 (m, 8H, CH2N-triaz), 4.48 (dd, J=1.8 Hz, J=7.8 Hz, 3H, H-2 man, H-3 man, H-5 man), 4.45 (d, J=7.8 Hz, 4H, H-1 gal), 4.14-4.12 (m, 4H, 1/2 GalOCH2), 3.98 (m, 9H, H-6 man, OCH2CH2N-triaz), 3.91-3.88 (m, 5H, H-6 man, H-4 gal), 3.85-3.77 (m, 20H, 1/2 GalOCH2, POCH2CH2, H-6 gal), 3.76-3.67 (m, 32H, H-2 gal, H-5 gal, OCH2CH2O), 3.61-3.56 (m, 5H, H-3 gal, H-4 man), 3.47 (s, 3H, OCH3), 2.91-2.78 (m, 8H, CH2CH2C-triaz), 1.97 (CH2CH2C-triaz). 13C NMR (150 MHz, D2O) 103.7 (C-1 gal, C-1 man), 76.0 (POCH2CH2), 75.9, 73.6, 71.6 (3s, 3C, C-2 gal, C-3 gal, C-5 gal), 70.6, 70.5, 70.4, 70.3, 70.2 (C-2 man, C-3 man, C-4 man, C-5 man, C-6 man, OCH2CH2O), 70.0 (OCH2CH2N-triaz), 69.5 (C-4 gal, GalOCH2), 61.8 (d, C-6 gal)), 51.0 (CH2N-triaz), 44.0 (CH2CH2C-triaz), 30.4 (CH2CH2C-triaz). MS MALDI-TOF-m/z calcd for C75H133N12O50P4[M-H]-=2126.80 found 2126.54. HR-ESI-QToF MS (positive mode): m/z calcd for C75H136N12O50P4[M+2H]++= 1064.3709 found 1064.3835。 Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 G3: as a pale yellow oil (66 mg, 62%): 47a (50 mg, 0.050 mmol, 1 equiv), 48b (101 mg, 0.200 mmol, 4 eq), dioxane (1.5 mL). 1 H NMR (600 MHz, D 2 O) δ8.00-7.92 (m, 4H, H-triaz), 5.01 (m, 1H, H-1 man), 4.62-4.64 (m, 8H, CH 2 N- triaz), 4.48 (dd, J = 1.8 Hz, J = 7.8 Hz, 3H, H-2 man, H-3 man, H-5 man), 4.45 (d, J = 7.8 Hz, 4H, H-1 gal ), 4.14-4.12 (m, 4H, 1/2 GalOCH 2), 3.98 (m, 9H, H-6 man, OCH 2 CH 2 N-triaz), 3.91-3.88 (m, 5H, H-6 man, H-4 gal), 3.85-3.77 ( m, 20H, 1/2 GalOCH 2, POCH 2 CH 2, H-6 gal), 3.76-3.67 (m, 32H, H-2 gal, H-5 gal, OCH 2 CH 2 O), 3.61-3.56 (m, 5H, H-3 gal, H-4 man), 3.47 (s, 3H, OCH 3 ), 2.91-2.78 (m, 8H, CH 2 CH 2 C-triaz ), 1.97 (CH 2 CH 2 C-triaz). 13 C NMR (150 MHz, D 2 O) 103.7 (C-1 gal, C-1 man), 76.0 (POCH 2 CH 2 ), 75.9, 73.6, 71.6 (3s, 3C, C-2 gal, C-3 gal, C-5 gal), 70.6, 70.5, 70.4, 70.3, 70.2 (C-2 man, C-3 man, C-4 man, C-5 man , C-6 man, OCH 2 CH 2 O), 70.0 (OCH 2 CH 2 N-triaz), 69.5 (C-4 gal, GalOCH 2 ), 61.8 (d, C-6 gal)), 51.0 (CH 2 N-triaz), 44.0 (CH 2 CH 2 C-triaz), 30.4 (CH 2 CH 2 C-triaz). MS MALDI-TOF - m / z calcd for C 75 H 133 N 12 O 50 P 4 [MH] - = 2126.80 found 212 6.54. HR-ESI-QToF MS (positive mode): m / z calcd for C 75 H 136 N 12 O 50 P 4 [M + 2H] ++ = 1064.3709 found 1064.3835.

Ｖ‐Ｂ 生物学的試験：
ウサギ赤血球に対するＰＡ‐ＩＬ結合のガラクトクラスターによる阻害能（血球凝集抑制アッセイ、ＨＩＡ）、又は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、酵素結合アッセイ（ＥＬＬＡ）のいずれかによる、表面結合ガラクトシル修飾ポリアクリルアミドに対するＰＡ‐ＩＬ結合のガラクトクラスターによる阻害能として、ガラクトクラスターに対するＰＡ‐ＩＬの結合を調査した。阻害を競合アッセイによって測定した。ＨＩＡ実験では、最小阻止濃度（ＭＩＣ）は、レクチンの存在下でウサギ赤血球の血球凝集を抑制する、ガラクトクラスターの最小濃度である。低いＭＩＣでは、レクチンに対するガラクトクラスターの結合が最も高かった。ＩＣ５０値を決定するのにＳＰＲ及びＥＬＬＡを用いた。ＩＣ５０は、表面結合ｇａｌ‐ＰＡＡに対するＰＡ‐ＩＬの結合を５０％阻害する、ガラクトクラスターの濃度である。ＳＰＲ（ＳＰＲＩＣ５０）及びＥＬＬＡ（ＥＬＬＡＩＣ５０）によって決定されるように、低いＩＣ５０値では、ガラクトクラスターに対するＰＡ‐ＩＬの結合が最も高かった。 VB biological test:
The ability of galactocluster to inhibit PA-IL binding to rabbit erythrocytes (hemagglutination inhibition assay, HIA) or PA to surface-bound galactosyl-modified polyacrylamide by either surface plasmon resonance (SPR) or enzyme-linked assay (ELLA) As the ability of galactocluster to inhibit -IL binding, the binding of PA-IL to galactocluster was investigated. Inhibition was measured by a competitive assay. In HIA experiments, the minimum inhibitory concentration (MIC) is the minimum concentration of galactocluster that suppresses haemagglutination of rabbit erythrocytes in the presence of lectins. At low MIC, galactocluster binding to lectins was highest. SPR and ELLA were used to determine IC 50 values. IC 50 is the concentration of galactocluster that inhibits the binding of PA-IL to surface bound gal-PAA by 50%. As determined by SPR ( SPR IC 50 ) and ELLA ( ELLA IC 50 ), at low IC 50 values, PA-IL binding to galacto clusters was highest.

参照リガンドとして、１‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐ガラクトシド（ＧａｌＯＭｅ）、及び１‐Ｏ‐ｐ‐ニトロフェニル‐β‐Ｄ‐ガラクトシド（ＧａｌＯＡｒＮＯ２）を用いた。これらの２つの参照リガンドによって、結合及びグルコシドクラスター効果に対するフェニルアグリコンの影響を分離することができる。βＭｅ及びβＡｒはそれぞれ、ＧａｌＯＭｅ及びＧａｌＯＡｒＮＯ２に対するガラクトクラスターの相対的効力である。 As reference ligands 1-O-methyl-β-D-galactoside (GalOMe) and 1-Op-nitrophenyl-β-D-galactoside (GalOArNO 2 ) were used. These two reference ligands can separate the influence of phenyl aglycone on binding and glucoside cluster effects. Each beta Me and beta Ar, a relative potency of galactomannans clusters for GalOMe and GalOArNO 2.

血球凝集抑制アッセイ（ＨＩＡ）：血球凝集抑制アッセイ（ＨＩＡ）を、Ｕ字型９６ウェルマイクロタイタープレートにおいて実行した。ウサギ赤血球をBiomerieux社から購入し、更なる洗浄をせずにこれを用いた。赤血球をＮａＣｌ（１００ ｍＭ）中８％溶液に希釈した。３ μＭのＰＡ‐ＩＬ溶液を、２０ ｍＭトリス‐ＨＣｌ（トリス＝トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、１００ ｍＭのＮａＣｌ及び１００ ｍＭのＣａＣｌ２中で調製した。一定分量（５０ μＬ）の連続（２回）レクチン希釈物に４％赤血球溶液（５０ μＬ）を加えて、血球凝集単位（ＨＵ）を最初に得た。この混合物を２５℃で３０分間インキュベートした。血球凝集観察に必要な最小レクチン濃度として、ＨＵを測定した。レクチン阻害アッセイでは、４ ＨＵのレクチン濃度を用いた。ＰＡ‐ＩＬでは、この濃度は３ μＭであることが分かった。次いで、糖鎖クラスターの連続希釈物（５０ μＬ）、単量体分子及び対照にレクチン溶液（２５ μＬの必要濃度）を加えて、後の阻害アッセイを実行した。これらの溶液を３７℃で３０分間インキュベートした後、８％の赤血球溶液（２５ μＬ）を加え、続いて、３７℃で１時間更にインキュベートした。それぞれの分子の最小阻止濃度を反復して決定した。 Hemagglutination inhibition assay (HIA): The hemagglutination inhibition assay (HIA) was performed in a U-shaped 96-well microtiter plate. Rabbit erythrocytes were purchased from Biomerieux and used without further washing. Red blood cells were diluted to 8% solution in NaCl (100 mM). A 3 μM PA-IL solution was prepared in 20 mM Tris-HCl (Tris = Tris (hydroxymethyl) aminomethane), 100 mM NaCl and 100 mM CaCl 2 . A 4% red blood cell solution (50 μL) was added to an aliquot (50 μL) of a continuous (twice) lectin dilution to obtain hemagglutinating units (HU) first. This mixture was incubated at 25 ° C. for 30 minutes. HU was measured as the minimum lectin concentration required for hemagglutination observation. In the lectin inhibition assay, a lectin concentration of 4 HU was used. For PA-IL, this concentration was found to be 3 μM. The lectin solution (25 μL required concentration) was then added to serial dilutions (50 μL) of glycan clusters, monomer molecules and controls, and subsequent inhibition assays were performed. These solutions were incubated at 37 ° C. for 30 minutes, then 8% red blood cell solution (25 μL) was added, followed by further incubation at 37 ° C. for 1 hour. The minimum inhibitory concentration for each molecule was determined iteratively.

ＥＬＬＡを用いるレクチン濃度の決定：９６ウェルマイクロタイタープレート(Nunc Maxisorb)に、ＰＡ‐ＩＬ用のα‐ＰＡＡ‐Ｇａｌ（ＰＡＡ＝ポリアクリルアミド（Lectinity Holding, Inc.社製）：炭酸塩緩衝液（ｐＨ９．６）中５ μｇ．ｍＬ−１ １００ μＬを３７℃で１時間被覆し、次いで、１ウェル当たり、リン酸緩衝液溶液（ＰＢＳ）中３％（ｗ／ｖ）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）１００ μＬによって、３７℃で１時間ブロッキングした。レクチン溶液（７５ μＬ）を３０ μｇ．ｍＬ−１から開始し希釈した（１：２）。３７℃で１時間インキュベートし、Ｔ‐ＰＢＳ（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含むＰＢＳ）によって３回洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）‐ストレプトアビジン複合体（１００ μＬ；希釈２：８０００；Boehringer-Mannheim社製)を加え、３７℃で１時間放置した。１ウェル当たり、ｏ‐フェニレンジアミンジヒドロクロリド（０．４ μｇ．ｍＬ−１）及び尿素過酸化水素（０．４ ｍｇ．ｍＬ−１）を含む０．０５％リン酸／クエン酸緩衝液（ＯＰＤキット、Sigma-Aldrich社製)１００ μLを用いて、着色を１５分間進行させ、硫酸（５０ μＬ、３０％）によってこれを停止した。次いで、マイクロタイタープレートリーダー(BioRad 680)を用い、吸光度を４９０ ｎｍで読み取った。レクチン濃度に対する相対的吸光度をプロットすることによって、ビオチン化されたレクチンの濃度を決定した。後の阻害実験のために、標準レクチン濃度として、線形領域において最も高い応答をもたらす濃度を選択した。最終濃度は、ＰＡ‐ＩＬで０．５ μｇ．ｍＬ−１であった。 Determination of lectin concentration using ELLA : α-PAA-Gal (PAA = polyacrylamide (manufactured by Lectinity Holding, Inc.) for PA-IL): carbonate buffer (pH 9) on 96-well microtiter plate (Nunc Maxisorb) .6) 5 μg · mL −1 100 μL coated at 37 ° C. for 1 hour, then 3% (w / v) bovine serum albumin (BSA) in phosphate buffer solution (PBS) per well Blocked with 100 μL for 1 hour at 37 ° C. Lectin solution (75 μL) was diluted starting from 30 μg · mL −1 (1: 2), incubated for 1 hour at 37 ° C. and T-PBS (0. After three washes with PBS containing 05% Tween 20, horseradish peroxidase (HRP) -streptavidin complex (100 μL; dilution 2:80 0; Boehringer-Mannheim Co.) was added per .1 well was allowed to stand for 1 hour at 37 ° C., o-phenylenediamine dihydrochloride (0.4 μg.mL -1) and urea hydrogen peroxide (0.4 mg. The coloration was allowed to proceed for 15 minutes using 100 μL of 0.05% phosphate / citrate buffer (OPD kit, Sigma-Aldrich) containing mL −1 ) and this with sulfuric acid (50 μL, 30%). The absorbance was then read at 490 nm using a microtiter plate reader (BioRad 680.) The concentration of biotinylated lectin was determined by plotting relative absorbance against lectin concentration. For inhibition experiments, the standard lectin concentration was chosen to give the highest response in the linear region, with a final concentration of 0.5 μg · mL for PA-IL. -1 .

等温滴定マイクロカロリメトリー（ＩＴＣ）：組換え凍結乾燥ＰＡ‐ＩＬを、緩衝液（０．１Ｍトリス‐ＨＣｌ、６ μＭ ＣａＣｌ２、ｐＨ７．５）中に溶解し、脱気した。２８０００の理論モル吸光係数を用い吸光度を測定することによって、タンパク質濃度（リガンド親和性によって５０〜２７０ μＭ）を確認した。炭水化物リガンドを同じ緩衝液中に直接溶解し、脱気し、これを注入シリンジ（濃度：１７５ μＭ）に入れた。MicroCal Incorporated社製のVP-ITC MicroCalorimeterを用いて、ＩＴＣを実行した。ＰＡ‐ＩＬを、２５℃で１．４４７８ ｍＬの試料セルに入れた。３００秒ごとに炭水化物リガンドを１０ μＬ注入して滴定を実行した。標準手順に従って、MicroCal Origin 7ソフトウェアを用い、「１点モデル」を用いてデータを適合させた。適合させたデータによって、化学量論（ｎ）、結合定数（Ｋａ）及び結合のエンタルピー（ΔＨ）を得た。式ΔＧ＝ΔＨ−ＴΔＳ＝−ＲＴｌｎＫａ（式中、Ｔは絶対温度であり、Ｒ＝８．３１４ Ｊ．ｍｏｌ−１．Ｋ−１である。）から、他の熱力学パラメータ（すなわち、自由エネルギーの変化ΔＧ及びエントロピーΔＳ）を算出した。試験したそれぞれのリガンドについて、２又は３つの独立した滴定を実行した。 Isothermal titration microcalorimetry (ITC): Recombinant lyophilized PA-IL was dissolved in buffer (0.1 M Tris-HCl, 6 μM CaCl 2 , pH 7.5) and degassed. The protein concentration (50-270 μM depending on ligand affinity) was confirmed by measuring the absorbance using a theoretical molar extinction coefficient of 28000. The carbohydrate ligand was dissolved directly in the same buffer, degassed and placed in an injection syringe (concentration: 175 μM). ITC was performed using VP-ITC MicroCalorimeter manufactured by MicroCal Incorporated. PA-IL was placed in a 1.4478 mL sample cell at 25 ° C. Titration was performed by injecting 10 μL of carbohydrate ligand every 300 seconds. Data was fitted using a “one-point model” using MicroCal Origin 7 software according to standard procedures. The fitted data yielded stoichiometry (n), binding constant (K a ) and binding enthalpy (ΔH). From the equation ΔG = ΔH−TΔS = −RTlnK a , where T is the absolute temperature and R = 8.314 J.mol −1 .K −1 , from other thermodynamic parameters (ie free The energy change ΔG and entropy ΔS) were calculated. Two or three independent titrations were performed for each ligand tested.

表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）：２５℃でBiacore 3000機器を用いて、ＳＰＲ阻害実験を実行した。固定された２つの糖を備えた２つのチャネル、α‐Ｌ‐フコース（チャネル１）及びα‐Ｄ‐ガラクトース（チャネル２）において測定を実行した。５ ｍＬ．ｍｉｎ−１で泳動緩衝液（ＨＢＳ）を用いて、糖の固定を２５℃で実行した。それぞれのチャネル（ＣＭ５チップ）において、次に示すように、固定を独立して実行した。最初に、ＥＤＣ／ＮＨＳの新しい混合物を注入して（３５ μＬ、４２０秒）、チャネルを活性化させた。次いで、ストレプトアビジンの溶液（０．１ ｍＭ ＡｃＯＮａ緩衝液（ｐＨ５）中１００ ｍｇ．ｍＬ−１）を注入した（５０ μＬ、６００秒）。溶液にエタノールアミン（１Ｍ、３５ μＬ、４２０秒）を注入して、他の反応種をクエンチした。そして、所望のビオチン化ポリアクリルアミド‐糖の溶液（Lectinity社製、２００ ｍｇ．ｍＬ−１）を、ストレプトアビジン‐ビオチン相互作用によって表面に被覆した（５０ μＬ、６００秒）。この手順によって、チャネル１及び２に８０４ ＲＵ（共鳴単位）（フコシド）及び７９６ ＲＵ（ガラクトシド）の糖がそれぞれ固定された。ガラクトシル化チャネル２によって阻害実験を実行し、プロットは減算されたデータ（チャネル２−チャネル１）を表す。ＰＡ‐ＩＬ実験の泳動緩衝液は、１０ ｍｍ ＨＥＰＥＳ、１５０ ｍＭ ＮａＣｌ、１０ ｍＭ ＣａＣｌ２、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ Ｐ２０（ｐＨ７．４）であった。阻害試験は、ＰＡ‐ＩＬ（５ ｍｍ）のインキュベートされた（１時間超、室温）混合物の注入（１５０ μＬ、１０ μＬ．ｍｉｎ−１、解離１２０秒）と、種々の濃度の阻害剤（２倍のカスケード希釈物）と、からなる。それぞれの阻害アッセイでは、阻害剤を含まないＰＡ‐ＩＬ（５ μＭ）を注入し、糖被覆面に対するレクチンの十分な接着（０％阻害）がみられた。ｄ‐ガラクトースを連続的に注入して（泳動緩衝液中３０ μＬで２回、１００ ｍｍ）、完全にＣＭ５チップを再生した。ブランクの減算後、経時的にＲＵとして結合を測定し、その後、ＢＩＡ評価ソフトウェアバージョン４．１を用いてデータを評価した。ＩＣ５０評価では、応答（Ｒｅｑ適合）は、特定された濃度の阻害剤存在下で平衡状態において炭水化物被覆面に結合したレクチンの量であると考えられた。Origin 7.0ソフトウェア（OriginLab Corp.社製）を用い、阻害剤濃度（対数目盛で）に対する阻害割合をプロットすることによって、阻害曲線を求め、阻害曲線のシグモイド適合からＩＣ５０値を抽出した。 Surface Plasmon Resonance (SPR): SPR inhibition experiments were performed using a Biacore 3000 instrument at 25 ° C. Measurements were performed in two channels with two immobilized sugars, α-L-fucose (channel 1) and α-D-galactose (channel 2). 5 mL. Sugar immobilization was performed at 25 ° C. using running buffer (HBS) at min −1 . In each channel (CM5 chip), fixation was performed independently as follows. Initially, a new mixture of EDC / NHS was injected (35 μL, 420 seconds) to activate the channel. Then, a solution of streptavidin (100 mg · mL −1 in 0.1 mM AcONa buffer (pH 5)) was injected (50 μL, 600 seconds). Ethanolamine (1M, 35 μL, 420 seconds) was injected into the solution to quench other reactive species. Then, a desired biotinylated polyacrylamide-sugar solution (Lectinity, 200 mg · mL −1 ) was coated on the surface by the streptavidin-biotin interaction (50 μL, 600 seconds). By this procedure, 804 RU (resonance unit) (fucoside) and 796 RU (galactoside) sugars were immobilized on channels 1 and 2, respectively. Inhibition experiments were performed with galactosylated channel 2 and the plot represents the subtracted data (channel 2-channel 1). The running buffer for the PA-IL experiment was 10 mm HEPES, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl 2 , 0.005% Tween P20 (pH 7.4). Inhibition studies consisted of infusion (150 μL, 10 μL.min −1 , dissociation 120 seconds) of an incubated (over 1 hour, room temperature) mixture of PA-IL (5 mm) and various concentrations of inhibitor (2 Double cascade dilution). In each inhibition assay, PA-IL (5 μM) containing no inhibitor was injected, and sufficient adhesion of the lectin to the sugar-coated surface (0% inhibition) was observed. d-Galactose was continuously injected (twice with 30 μL in running buffer, 100 mm) to completely regenerate the CM5 chip. After blank subtraction, binding was measured as RU over time, after which the data was evaluated using BIA evaluation software version 4.1. In the IC 50 assessment, the response (R eq fit) was considered to be the amount of lectin bound to the carbohydrate coated surface at equilibrium in the presence of the specified concentration of inhibitor. Using Origin 7.0 software (OriginLab Corp.), the inhibition curve was determined by plotting the inhibition percentage against the inhibitor concentration (log scale), and IC 50 values were extracted from the sigmoidal fit of the inhibition curve.

マイクロアレイ
マイクロアレイの作製
他に詳述されている(Mazurczyk, R. et al., (2008) Sens. Actuators, B128, 552-559; Vieillard, J. et al., (2007) J. Chromatogr. B845, 218-225; Vieillard, J. et al., (2008) Microelectron. Eng.85, 465-469)標準フォトリソグラフィ及びウェットエッチング法を用いて、微細構造ホウケイ酸ガラススライド（NexterionガラスD、Schott社（ドイツ）製）を作製した。微細構造スライドは、４０平方ウェル（３ ｍｍの幅、６０±１ μｍの深さ）が特徴であった。 Microarray Production of microarrays is described in detail elsewhere (Mazurczyk, R. et al., (2008) Sens. Actuators, B128, 552-559; Vieillard, J. et al., (2007) J. Chromatogr. B845, 218-225; Vieillard, J. et al., (2008) Microelectron. Eng. 85, 465-469) Using standard photolithography and wet etching techniques, microstructured borosilicate glass slides (Nexterion Glass D, Schott ( Made in Germany). The microstructure slide was characterized by 40 square wells (3 mm wide, 60 ± 1 μm deep).

Dugas, V., and Chevalier, Y. (2003) J. Colloid Interface Sci.264, 354-361; Dugas, V. et al, (2004) Sens. Actuators, B101, 112-121; Phaner-Goutorbe, M. et al., (2011) Materials Science & Engineering C-Materials for Biological Applications 31, 384-390に報告されているプロトコールに従って、作製スライドを官能化した。スライドを、新たに調製したピラニア中で洗浄し、脱イオン（ＤＩ）水中で洗い流し、窒素下で、１５０℃で２時間乾燥させた。室温に戻した後、乾燥ペンタン中ｔｅｒｔ‐ブチル‐１１‐（ジメチルアミノ）シリルウンデカノアートを、ガラススライド表面と反応させた（室温）。ペンタン蒸発後、スライドを１５０℃で一晩加熱し、そして、ＴＨＦ及び水中で洗浄した。ｔｅｒｔ‐ブチルエステル官能基をＮＨＳエステルに変換させた。あるいは、スライドを気相中で官能化することができる。洗浄手順は同様である。   Dugas, V., and Chevalier, Y. (2003) J. Colloid Interface Sci. 264, 354-361; Dugas, V. et al, (2004) Sens. Actuators, B101, 112-121; Phaner-Goutorbe, M et al., (2011) Materials slides were functionalized according to the protocol reported in Materials Science & Engineering C-Materials for Biological Applications 31, 384-390. The slides were washed in freshly prepared piranha, rinsed in deionized (DI) water, and dried at 150 ° C. for 2 hours under nitrogen. After returning to room temperature, tert-butyl-11- (dimethylamino) silylundecanoate in dry pentane was reacted with the glass slide surface (room temperature). After pentane evaporation, the slides were heated at 150 ° C. overnight and washed in THF and water. The tert-butyl ester functional group was converted to an NHS ester. Alternatively, the slide can be functionalized in the gas phase. The washing procedure is similar.

アミノ修飾オリゴヌクレオチドをEurogentec社から購入した。それぞれの反応器の底部における２５ μＭ ＰＢＳ １０Ｘ （ｐＨ８．５）の種々のオリゴヌクレオチドによる０．３ ｎＬのスポット形成（１ウェル当たり６４スポット）。置換反応を室温で一晩、水飽和雰囲気下で実行し、次いで、水を徐々に蒸発させた。ＳＤＳ（０．１％）によって７０℃で３０分間、そして脱イオン水によって簡単にスライドの洗浄を実行した。   Amino modified oligonucleotides were purchased from Eurogentec. Spot formation of 0.3 nL with various oligonucleotides of 25 μM PBS 10X (pH 8.5) at the bottom of each reactor (64 spots per well). The displacement reaction was carried out overnight at room temperature under a water saturated atmosphere and then the water was slowly evaporated. Wash slides with SDS (0.1%) at 70 ° C. for 30 minutes and briefly with deionized water.

スライドをすべて、ＰＢＳ １Ｘ中４％ ＢＳＡ溶液（ｐＨ７．４、３７℃、２時間）によってブロッキングし、ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎ ２０（０．０５％）、ＰＢＳ １Ｘ（ｐＨ７．４）及び脱イオン（ＤＩ）水中で連続的に洗浄した後、遠心分離によって乾燥させた。   All slides were blocked with 4% BSA solution (pH 7.4, 37 ° C., 2 hours) in PBS 1 ×, PBS-Tween 20 (0.05%), PBS 1 × (pH 7.4) and deionized (DI) After continuous washing in water, it was dried by centrifugation.

レクチン標識：ＰＡ‐ＩＬレクチンのAlexa 647標識：ＰＡ‐ＩＬレクチンを、Invitrogen社製のAlexa Fluor（登録商標）647マイクロスケールタンパク質標識キット(A30009)によって標識した。標識レクチンの濃度及びレクチンに対する色素の比率を、マイクロキュベット（Hellma社製、５ μｌ、１ ｍｍの光学距離）を備える二重ビーム分光計(Safas社製)を用いて読み取られた(reaud out)吸光度によって推定した。２８１ ｎｍ及び６５０ ｎｍの吸光度を測定した。ＰＡ‐ＩＬの濃度は、四量体ＰＡ‐ＩＬに対する色素の標識度０．５１により、１１．５８ μΜと推定された。   Lectin labeling: Alexa 647 labeling of PA-IL lectin: PA-IL lectin was labeled with Alexa Fluor® 647 microscale protein labeling kit (A30009) from Invitrogen. The concentration of labeled lectin and the ratio of dye to lectin were read out using a dual beam spectrometer (Safas) equipped with a micro cuvette (Hellma, 5 μl, 1 mm optical distance). Estimated by absorbance. Absorbance at 281 nm and 650 nm was measured. The concentration of PA-IL was estimated to be 11.58 μM with a degree of labeling of the dye to tetrameric PA-IL of 0.51.

「インソリューション(In solution)」生物学的認識：Ｋｄ及びＩＣ５０値を決定する方法は、過去に報告されている(Gerland, B. et al., (2012) Bioconjugate Chem.23, 1534-1547; Zhang, J. et al., (2009) Chem. Comm., 6795-6797 ; Zhang, J. et al., (2009) Biosens. Bioelectron.24, 2515-2521)。 “In solution” biological recognition: methods for determining K d and IC 50 values have been reported previously (Gerland, B. et al., (2012) Bioconjugate Chem. 23, 1534- 1547; Zhang, J. et al., (2009) Chem. Comm., 6795-6797; Zhang, J. et al., (2009) Biosens. Bioelectron. 24, 2515-2521).

Ｋｄの決定：擬似化合物Ｇ１ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４、又は３２ Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４（最終濃度１ μＭ）を、０．０２％ ＰＢＳ‐２％ Ｔｗｅｅｎ２０溶液中で希釈した。ＣａＣｌ２（最終濃度１ μｇ／ｍＬ）を加えた。次いで、所望の最終濃度のＰＡ‐ＩＬを加えた。２ μＬのそれぞれの溶液（所望のＰＡ‐ＩＬ濃度に相当）を、対応するマイクロウェル内に注入した。スライドを水蒸気飽和室内でインキュベートし（３時間、３７℃）、そして、ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎ ２０中で洗浄し（０．０２％、５分、４℃）、乾燥させた。マイクロアレイスキャナ、GenePix 4100Aソフトウェアパッケージ（Axon Instruments社製；λｅｘ ５３２／６３５ ｎｍ及びλｅｍ ５７５／６７０ ｎｍ）を、両方のフルオロフォア（Ｃｙ３とAlexa 647）の蛍光像に用いた。８つのスポットから中間蛍光シグナルの平均を算出した。スキャッチャードプロットを用いて、得られたラングミュア等温式を直線化し、縦軸切片(ordonnate intercept)でＫｄ値を得た。 Determination of K d : Pseudocompound G1 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 or 32 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 (final concentration 1 μM) in 0.02% PBS-2% Tween 20 solution Dilute in. CaCl 2 (final concentration 1 μg / mL) was added. The desired final concentration of PA-IL was then added. 2 μL of each solution (corresponding to the desired PA-IL concentration) was injected into the corresponding microwell. Slides were incubated in a steam saturated room (3 hours, 37 ° C.) and washed in PBS-Tween 20 (0.02%, 5 minutes, 4 ° C.) and dried. A microarray scanner, GenePix 4100A software package (Axon Instruments; λ ex 532/635 nm and λ em 575/670 nm) was used for fluorescence images of both fluorophores (Cy3 and Alexa 647). The average of the intermediate fluorescence signal was calculated from 8 spots. Using the Scatchard plot, the obtained Langmuir isotherm was linearized and the K d value was obtained by the vertical axis intercept.

細胞への接着試験
細菌及び細胞培養。ヒト肺粘液性類表皮癌由来の上皮細胞系ＮＣＩ‐Ｈ２９２（ＡＴＣＣ ＣＲＬ １８４８）を、１０％ウシ胎児血清（Boehringer社製）を添加し抗生物質を含まないＲＰＭＩ １６４０培地（Gibco）を収容した２５ ｃｍ２組織培養フラスコ（Nunc）中に維持した。以下、この培地を維持培地と称する。細胞を１：６の分裂比で毎週２回継代した。すべての細胞培養物を、５％のＣＯ２を含む雰囲気下で、３７℃でインキュベートした。トリパンブルー染色後に光学顕微鏡によって、細胞数及び生存率を決定した。緑膿菌参照株ＰＡＯ１を、３７℃で１６時間、Ｌｕｒｉａ‐Ｂｅｒｔａｎｉ培地中で増殖させた。細胞を、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）溶液中で２回洗浄し、これを希釈し、およそ５．１０６ ＣＦＵ／ｍＬの細胞密度を得た。 Cell adhesion test Bacteria and cell culture. An epithelial cell line NCI-H292 (ATCC CRL 1848) derived from human pulmonary mucinous epidermoid carcinoma was supplemented with 10% fetal bovine serum (Boehringer) and contained RPMI 1640 medium (Gibco) without antibiotics. Maintained in cm 2 tissue culture flasks (Nunc). Hereinafter, this medium is referred to as a maintenance medium. Cells were passaged twice weekly at a 1: 6 division ratio. All cell cultures were incubated at 37 ° C. in an atmosphere containing 5% CO 2 . Cell number and viability were determined by light microscopy after trypan blue staining. Pseudomonas aeruginosa reference strain PAO1 was grown in Luria-Bertani medium at 37 ° C. for 16 hours. Cells were washed twice in Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS) solution and diluted to obtain a cell density of approximately 5.10 6 CFU / mL.

細菌接着アッセイ。細菌接着アッセイでは、ＮＣＩ‐Ｈ２９２細胞を、１ ｍＬの維持培地を収容した２４ウェルマイクロタイタープレートに、集密的な単層（１ウェル当たり５．１０５の細胞）まで培養した。あらかじめ３７℃まで加温した、１ ｍＬのダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）（１３７ ｍＭ ＮａＣｌ、８ ｍＭ Ｎａ２ＰＯ４、１．５ ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、２．６ ｍＭ ＫＣｌ）によって、プレートを２回洗浄し、ＤＰＢＳ中０．５％（ｗｔ／ｖｏｌ）のウシ血清アルブミンとともに３７℃で１時間インキュベートすることによって、非特異的結合をブロックした。細菌と相互作用させる前に、調製物を、あらかじめ加温したＤＰＢＳによって再度２回洗い流した。次いで、１００ μＬの細菌懸濁液をそれぞれのウェルに加え、１のＭＯＩ（５．１０５ ＣＦＵ／ｍＬ／５．１０５細胞）を得た。その後、プレートを３７℃で２時間インキュベートした。ＤＰＢＳによって調製物を５回洗い流すことによって、非接着細菌を除去した。０．２％（ｖ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ‐１００溶液により３７℃で３０分間インキュベートして、細胞を溶解した。ＤＰＢＳを用いて連続希釈物を調製し、１００ μＬの一定分量をＬＢプレートに３回反復してまき、３７℃で２４時間インキュベートした。 Bacterial adhesion assay. The bacterial adhesion assay, NCI-H292 cells, in 24-well microtiter plates containing maintenance medium 1 mL, and cultured until a confluent monolayer (1 well per 5.10 5 cells). With 1 mL Dulbecco's phosphate buffered saline (DPBS) (137 mM NaCl, 8 mM Na 2 PO 4 , 1.5 mM KH 2 PO 4 , 2.6 mM KCl) pre-warmed to 37 ° C. Non-specific binding was blocked by washing the plate twice and incubating with 0.5% (wt / vol) bovine serum albumin in DPBS for 1 hour at 37 ° C. Prior to interacting with the bacteria, the preparation was washed again twice with pre-warmed DPBS. Then 100 μL of bacterial suspension was added to each well to obtain 1 MOI (5.15 5 CFU / mL / 5.10 5 cells). The plates were then incubated for 2 hours at 37 ° C. Non-adherent bacteria were removed by rinsing the preparation 5 times with DPBS. Cells were lysed by incubation with 0.2% (v / v) Triton X-100 solution at 37 ° C. for 30 minutes. Serial dilutions were prepared using DPBS, 100 μL aliquots were plated on LB plates three times and incubated at 37 ° C. for 24 hours.

接着阻害では、擬似ガラクトＧ１（Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）のみ試験した。擬似ガラクトＧ１を０〜２ ｍＭの範囲の最終濃度でウェルに加えた。 For adhesion inhibition, only pseudo-galacto G1 (Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ) was tested. Pseudogalacto G1 was added to the wells at final concentrations ranging from 0 to 2 mM.

Ｖ‐Ｃ 結果
ＨＩＡアッセイでは、Ｇ２ Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４は、擬似化合物のうち最も低いＭＩＣを示し、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｇ３は最も高いＭＩＣを示した。擬似化合物Ｇ１ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４は、中間ＭＩＣを有していた（表３）。ＧａｌＯＭｅに対する擬似化合物Ｇ１、Ｇ２及びＧ３の相対的効力はそれぞれ、１２８、５１３及び４である。したがって、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４ Ｇ３の増加は、依然として制限される。実際に、ガラクトース残基当たりのＭＩＣは同じである。これとは対照的に、擬似化合物Ｇ１及びＧ２は、ガラクトース残基とマンノースコアとの間に最も長いリンカーを有するＧ２の顕著な利益によって、大きな効力の増加を示す。擬似化合物Ｇ１及びＧ２の１６及び６５のＧａｌ‐ＯＡｒＮＯ２に対する算出された効力はそれぞれ、４及び１６の残基当たりの増加によって、糖鎖クラスター効果を明らかに示していた。したがって、効力の増加は、芳香環の存在だけでなく、多価効果にも関連している。 VC Results In the HIA assay, G2 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 showed the lowest MIC among pseudo compounds, and Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 G3 showed the highest MIC . The pseudo-compound G1 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 had an intermediate MIC (Table 3). The relative potencies of the pseudo-compounds G1, G2 and G3 against GalOMe are 128, 513 and 4 respectively. Therefore, an increase in Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 G3 is still limited. In fact, the MIC per galactose residue is the same. In contrast, the pseudo-compounds G1 and G2 show a large increase in potency due to the significant benefit of G2, which has the longest linker between the galactose residue and the mannose core. The calculated potency of the pseudo-compounds G1 and G2 against 16 and 65 Gal-OArNO 2 clearly showed a glycan cluster effect with increases per 4 and 16 residues, respectively. Thus, the increase in potency is related not only to the presence of aromatic rings, but also to multivalent effects.

表３：血球凝集抑制アッセイ（ＨＩＡ）。ＭＩＣは最小阻止濃度を表す。効力（β）：βＭｅ又はβＡｒは、考慮される分子のＭＩＣに対するＧａｌ‐ＯＭｅ又はＧａｌ‐ＯＡｒＮＯ２のＭＩＣの比率に相当する。 Table 3: Hemagglutination inhibition assay (HIA). MIC represents the minimum inhibitory concentration. Efficacy (β): β Me or β Ar corresponds to the ratio of the MIC of Gal-OMe or Gal-OArNO 2 to the MIC of the molecule under consideration.

ＥＬＬＡＩＣ５０及びＳＰＲＩＣ５０では、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４の効力は、ＨＩＡとは逆に、Ｇａｌ‐Ａｒよりもわずかに良好である（表４）。これは、実際に、２つの分子の効力が類似していることを示唆する。ＥＬＬＡＩＣ５０とＳＰＲＩＣ５０はともに、Ｇ１ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４、及びＧ２ Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４が、一価のリガンド及びＭａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４と比較して、効力が向上していることを確認した。また、Ｇ２ Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４が最良のリガンドであることも確認した。ただし、これらの向上の範囲は、アッセイによって異なっていた。実際に、擬似化合物１〜３のＧａｌ‐ＡｒＮＯ２に対する効力は、ＥＬＬＡによって決定されたＩＣ５０値では１２７、５５０及び１．２であり、ＳＰＲによって決定されたＩＣ５０値では２．０、７．４及び１．７であった。したがって、ＳＰＲＩＣ５０の場合では、多価クラスターの明確な効力は、実証することができない。グリコシドによるクラスター効果範囲のかかる不一致は、文献に既に報告されている(Lundquist, J. J., and Toone, E. J. (2002) Chem. Rev.102, 555-578)。 In ELLA IC 50 and SPR IC 50 , the efficacy of Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 is slightly better than Gal-Ar, contrary to HIA (Table 4). This actually suggests that the potency of the two molecules is similar. Both ELLA IC 50 and SPR IC 50 are G1 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 and G2 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 are monovalent ligands and Man (POProTzEG 3 -O-Gal). Compared with 4 , it was confirmed that the efficacy was improved. It was also confirmed that G2 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 is the best ligand. However, the extent of these improvements varied from assay to assay. Indeed, potency against Gal-ArNO2 2 pseudo compounds 1-3, the IC 50 values determined by ELLA is 127,550 and 1.2, the IC 50 values determined by SPR 2.0,7 .4 and 1.7. Thus, in the case of SPR IC 50 , the clear potency of the multivalent cluster cannot be demonstrated. Such inconsistencies in the cluster effect range due to glycosides have already been reported in the literature (Lundquist, JJ, and Toone, EJ (2002) Chem. Rev. 102, 555-578).

表４：酵素結合レクチン(Lectine)アッセイ（ＥＬＬＡ）及び表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定されたガラクトシル化リガンドのＩＣ５０値。βＭｅは、考慮される分子のＩＣ５０値に対するＧａｌ‐ＯＭｅのＩＣ５０値の比率である。同様に、βＡｒは、考慮される分子のＩＣ５０値に対するＧａｌ‐ＡｒＮＯ２のＩＣ５０値の比率である。 Table 4: IC 50 values of galactosylated ligands determined by enzyme-linked lectin assay (ELLA) and surface plasmon resonance (SPR). β Me is the ratio of the IC 50 value of Gal-OMe to the IC 50 value of the molecule considered. Similarly, β Ar is the ratio of the IC 50 value of Gal-ArNO 2 to the IC 50 value of the molecule considered.

マイクロタイタープレートをＰＡＡ‐ガラクトースによって修飾した。スライドを、ガラクトシル化リガンドの濃度を増加させながら、インキュベートした。ＩＣ５０は、ガラクトース‐ＰＡＡ修飾表面に対するＰＡ‐ＩＬの初期接着の５０％を置き換えることができる擬似ガラクトの濃度である。決定された最も低いＩＣ５０では、検討された分子のＰＡ‐ＩＬに対する結合が最も強い。ＥＬＬＡ：このＩＣ５０は、後述するＥＬＬＡＩＣ５０である。ＳＰＲ：このＩＣ５０は、後述するＳＰＲＩＣ５０である。 Microtiter plates were modified with PAA-galactose. Slides were incubated with increasing concentrations of galactosylated ligand. IC 50 is the concentration of pseudo-galacto that can replace 50% of the initial adhesion of PA-IL to the galactose-PAA modified surface. At the lowest IC 50 determined, the molecule studied has the strongest binding to PA-IL. ELLA: This IC 50 is an ELLA IC 50 described later. SPR: This IC 50 is an SPR IC 50 described later.

３つの擬似化合物のＩＣ５０値は、参照一価リガンドとして用いた化合物３１と比較して、１７ｄ、３２及びＣ３を用いたＤＮＡ指向固定グリコアレイを用い、先に決定された（図６）(Zhang, J. et al., (2009) Biosens. Bioelectron.24, 2515-2521; Goudot, A. et al., (2013) Biosens. Bioelectron.40 153-160)。この場合、ＩＣ５０値は、表面結合クラスターとのＰＡ‐ＩＬ相互作用の５０％を阻害するのに必要なラクトース濃度に相当する。したがって、最も高いＩＣ５０値では、結合は良好である。１７７、２６４及び１．８の相対的効力を決定した。ＥＬＬＡによって決定された本ＩＣ５０値は、種々の擬似化合物間の同じ桁のグリコアレイによって決定されたものと一致している。 IC 50 values for the three pseudo-compounds were previously determined using a DNA-directed immobilized glycoarray using 17d, 32 and C3 compared to compound 31 used as the reference monovalent ligand (FIG. 6). Zhang, J. et al., (2009) Biosens. Bioelectron. 24, 2515-2521; Goudot, A. et al., (2013) Biosens. Bioelectron. 40 153-160). In this case, the IC 50 value corresponds to the lactose concentration required to inhibit 50% of PA-IL interaction with the surface-bound clusters. Thus, at the highest IC 50 value, the coupling is good. The relative potency of 177, 264 and 1.8 was determined. The IC 50 values determined by ELLA are consistent with those determined by the same order glycoarray between the various pseudo-compounds.

表６：阻害剤としてラクトースを用いたＤＤＩ‐グリコアレイによって決定されたＤＮＡ‐擬似ガラクトのＩＣ５０値。 Table 6: IC 50 values of DNA-pseudogalact determined by DDI-glycoarray using lactose as inhibitor.

ＰＡ‐ＩＬと３つのガラクトクラスターＧ１、Ｇ２、Ｇ３との間の相互作用の等温マイクロカロリメトリー測定を行い、ＧａｌＯＭｅによって先に得られたデータと比較した（表７）(Chabre, Y. M. et al., (2011) Chem. Eur. J.17, 6545-6562)。Ｇ３ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４の場合、８．５倍のＧａｌＯＭｅに対する効力の中程度の増加に対応する１１ μＭのＫｄ値が測定された。化学量論(stoechiometry)（０．２８）は、４個のガラクトース残基がＰＡ‐ＩＬ単量体に結合することを示唆する。したがって、本結果は、相互作用に対してエントロピー損失がエンタルピーの考慮によって償われず、これによって、多価Ｇ３ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４と一価のＧａｌ‐Ａｒの両方に同様のＫｄがもたらされることを示唆した。擬似ガラクトＧ１及びＧ２はそれぞれ、４８５倍及び５９９倍の効力の強い増加を示した。Ｇ１ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４、又はＧ２ Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４の化学量論は類似しており（それぞれ、０．４６及び０．５２）、このことは、２個のガラクトース残基がＰＡ‐ＩＬ単量体とともに同時に関与していることを示唆していた。両方の分子のエントロピー損失は、Ｇ３ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＥＧ３‐Ｏ‐Ｇａｌ）４でみられたものよりも約３〜４倍低い。両方の分子は同様のエンタルピー寄与をし、芳香族一価リガンドによるCeccioniらの文献(Cecioni, S. et al., (2012) Chem. Eur. J.18, 6250-6263)によってみられた−５３ ＫＪｍｏｌ−１とはそれほど異ならない。しかしながら、驚くべきことに、ジエチレングリコールアームによる、より柔軟なリンカーの存在にもかかわらず、Ｇ２ Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４のエントロピー損失は、Ｇ１ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４でみられたものよりも低かった。この理由は、Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４のリンカーの疎水性によるものであると考えられ、これによって、脱水エントロピー損失を非常に増加させる。 Isothermal microcalorimetric measurements of the interaction between PA-IL and the three galactoclusters G1, G2, G3 were performed and compared with data previously obtained by GalOMe (Table 7) (Chabre, YM et al., (2011) Chem. Eur. J. 17, 6545-6562). In the case of G3 Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 , a Kd value of 11 μM was measured, corresponding to a modest increase in potency against 8.5 times GalOMe. Stoichiometry (0.28) suggests that 4 galactose residues bind to PA-IL monomers. Thus, the results show that the entropy loss for the interaction is not compensated by enthalpy considerations, which results in similar Kd for both multivalent G3 Man (POProTzEG 3 -O-Gal) 4 and monovalent Gal-Ar. Suggested that Pseudogalacto G1 and G2 showed a strong increase in potency of 485 and 599, respectively. The stoichiometry of G1 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 or G2 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 is similar (0.46 and 0.52 respectively), which means that 2 It suggested that one galactose residue was simultaneously involved with PA-IL monomer. Entropy loss of both molecules, G3 Man (POProTzEG 3 -O- Gal) about 3 to 4 fold lower than that seen at 4. Both molecules have similar enthalpy contributions, as seen by Ceccioni et al. (Cecioni, S. et al., (2012) Chem. Eur. J. 18, 6250-6263) with aromatic monovalent ligands − It is not so different from 53 KJmol- 1 . Surprisingly, however, the entropy loss of G2 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 in G1 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 despite the presence of a more flexible linker due to the diethylene glycol arm. It was lower than what was seen. The reason for this is believed to be due to the hydrophobic nature of the Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 linker, which greatly increases dehydration entropy loss.

並行して、１７ｄ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４のＫｄを、ラングミュア等温式を用いてマイクロアレイ上で測定し、ＩＴＣによって測定されたものと同様に１９６ ｎＭのＫｄ値が得られた。しかしながら、３２ Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４の測定されたＫｄ値は、ＩＴＣによって測定されたものとは異なり、同じ桁の範囲内の８３であった。 In parallel, the Kd of 17d Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 was measured on a microarray using the Langmuir isotherm and a Kd value of 196 nM was obtained, similar to that measured by ITC. However, the measured Kd value of 32 Man (POEG 2 MTzAcNPhe-O-Gal) 4 was 83, within the same order of magnitude, as measured by the ITC.

表７：ＰＡ‐ＩＬと擬似ガラクトＧ１、Ｇ２、Ｇ３との間の相互作用の滴定マイクロカロリメトリーデータ。ａＫｄ値は、１７ｄ、３２及びＣ３から決定した。 Table 7: Titration microcalorimetric data of the interaction between PA-IL and pseudogalacto G1, G2, G3. a Kd value was determined from 17d, 32 and C3.

物理化学(physic-chemical)特性評価実験によりＰＡ‐ＩＬに対して強い結合を示したので、細胞レベルにおいて、唯一の擬似ガラクトＧ１（Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）の接着阻害効果を評価した。ＮＣＩ‐Ｈ２９２細胞に対する緑膿菌の接着は、擬似ガラクト阻害剤の有無による２時間のインキュベーション後に評価した（図１８）。 Since physical-chemical (physic-chemical) evaluation experiments showed strong binding to PA-IL, evaluation of adhesion inhibition effect of only pseudo-galacto G1 (Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ) at the cellular level did. Adhesion of Pseudomonas aeruginosa to NCI-H292 cells was assessed after a 2 hour incubation with or without pseudo-galacto inhibitors (FIG. 18).

接着細菌の数は、培地中の擬似ガラクト濃度の増加とともに徐々に減少する。５０ μＭ未満の濃度では有意な阻害はみられなかった。図１８は、培地中のＧ１（Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）濃度の関数としての、ＮＣＩ‐Ｈ２９２細胞に対する緑膿菌の接着阻害割合を表す。接着ＩＣ５０（ａｄｈＩＣ５０）は、図に決定されているように９５．２５ μＭであった。 The number of adherent bacteria gradually decreases with increasing pseudogalacto concentration in the medium. There was no significant inhibition at concentrations below 50 μM. FIG. 18 represents the percentage inhibition of Pseudomonas aeruginosa adhesion to NCI-H292 cells as a function of G1 (Man (POProTzPhe-O-Gal) 4 ) concentration in the medium. The adhesion IC 50 ( adh IC 50 ) was 95.25 μM as determined in the figure.

細菌接着アッセイは、Ｇ１ Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４が細菌接着の阻害剤であることを示す。細菌接着アッセイは、宿主細胞に対するＰＡの接着をガラクトクラスターによって阻害できることを実証する。 Bacterial adhesion assay shows that G1 Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 is an inhibitor of bacterial adhesion. Bacterial adhesion assays demonstrate that PA adhesion to host cells can be inhibited by galactoclusters.

少量のレクチンのみが細菌細胞上に露出することは周知である(Glick and Garber et al., 1983)。それにもかかわらず、この接着におけるＰＡ‐ＩＬの直接的な意義がまだ実証されていなくても、この少量は宿主上皮細胞への細菌の接着を促進するのに十分である(Plotkowski et al., 1989; Laughlin et al., 2000; Chemani et al., 2009)。複数の研究グループは、宿主組織へのＰＡの接着阻害、ＰＡに感染させた動物モデルにおける肺コロニー形成の減少又は肺クリアランスの増加、及びＰＡ‐ＩＬを標的とする種々のガラクトシドによる連続的な処理について既に説明している(Chemani et al., 2009 ;Gilboa-Garber N, 2011 ; Gustke et al., 2012)。ＰＡ‐ＩＬに対する擬似ガラクトは、宿主組織へのＰＡ接着の新しいクラスの阻害剤に相当し、ＰＡ感染を予防する有望な将来に相当すると考えられる。   It is well known that only small amounts of lectins are exposed on bacterial cells (Glick and Garber et al., 1983). Nevertheless, even if the direct significance of PA-IL in this adhesion has not yet been demonstrated, this small amount is sufficient to promote bacterial adhesion to host epithelial cells (Plotkowski et al., 1989; Laughlin et al., 2000; Chemani et al., 2009). Several research groups have shown that PA adherence to host tissue, reduced lung colonization or increased lung clearance in animal models infected with PA, and sequential treatment with various galactosides targeting PA-IL Have already been described (Chemani et al., 2009; Gilboa-Garber N, 2011; Gustke et al., 2012). Pseudo-galacto for PA-IL represents a new class of inhibitors of PA adhesion to host tissue and is considered to represent a promising future to prevent PA infection.

ＰＡ‐ＩＬに対する糖鎖クラスターＧ２５〜Ｇ４８の親和性をグリコアレイによって評価した。   The affinity of the sugar chain clusters G25 to G48 for PA-IL was evaluated by glycoarray.

化合物Ｇ２５〜Ｇ３０の予想されるＫｄ値は１〜５０ ｎＭであり、５０〜１００ ｎＭが好ましく、また、化合物Ｇ３１〜Ｇ４８では、Ｋｄ値は１〜５０ ｎＭであり、１〜１００ ｎＭが好ましい。   The expected Kd value of compounds G25 to G30 is 1 to 50 nM, preferably 50 to 100 nM. In compounds G31 to G48, the Kd value is 1 to 50 nM, and preferably 1 to 100 nM.

ＶＩ‐結論：
宿主組織のＰＡコロニー形成、及びバイオフィルム形成によって、抗生物質治療に対して細菌に選択的有利性が提供される。ＰＡ‐ＩＬは、ＰＡ接着に関与することが疑われる病原因子である。多価のガラクトシル化分子によるＰＡ‐ＩＬ阻害は、ＰＡ接着を阻害する手段として予測される。本明細書において、ＰＡ‐ＩＬに対するガラクトースクラスターの親和性を、５つの異なる方法を用いて評価した。最終的に、５つの方法は、擬似ガラクトＧ１（Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４）がＰＡ‐ＩＬに対して強い結合を有することを実証した。１００ μＭ未満のＩＣ５０によって、ＮＣＩ‐Ｈ２９２へのＰＡ接着を阻害することができた。 VI- Conclusion:
Host tissue PA colonization and biofilm formation provide a selective advantage for bacteria over antibiotic therapy. PA-IL is a virulence factor suspected to be involved in PA adhesion. PA-IL inhibition by multivalent galactosylated molecules is expected as a means of inhibiting PA adhesion. Herein, the affinity of galactose clusters for PA-IL was evaluated using five different methods. Finally, the five methods demonstrated that pseudogalacto G1 (Man (POProTzAcNPhe-O-Gal) 4 ) has strong binding to PA-IL. An IC 50 of less than 100 μM was able to inhibit PA adhesion to NCI-H292.

両方の方法（ＩＣ５０とＫｄ）は、同様の親和性を提供した。最良の糖鎖クラスターは、１４〜４８ ｎＭのＫｄ値を示す、Ｏ‐ナフチル（Ｇ２１〜Ｇ２４）、Ｏ‐ビフェニル（Ｇ１７〜Ｇ２０）及びＯ‐フェニル（Ｇ１及びＧ３）を有するものであった。Ｓ‐ベンジル（Ｇ１３〜Ｇ１６）及びホスホロチオアートＥＧ２ Ｏ‐フェニル（Ｇ２）を有する糖鎖クラスターは低い親和性で、４９〜７０ ｎＭのＫｄ値であり、続いて、Ｓ‐ベンジル（Ｇ１３〜Ｇ１６）及びホスホロチオアートＥＧ３ Ｏ‐フェニル（Ｇ４）であり、７１〜８５ ｎＭのＫｄ値であった。そして、Ｏ‐ベンジル（Ｇ５〜Ｇ８）を有する糖鎖クラスターは最も低い親和性を示し、８５〜１７０ ｎＭのＫｄ値であった。 Both methods (IC 50 and Kd) provided similar affinity. The best glycan clusters were those with O-naphthyl (G21-G24), O-biphenyl (G17-G20) and O-phenyl (G1 and G3) showing Kd values of 14-48 nM. Glycan clusters with S-benzyl (G13-G16) and phosphorothioate EG2 O-phenyl (G2) have low affinity and a Kd value of 49-70 nM, followed by S-benzyl (G13- G16) and phosphorothioate EG3 O-phenyl (G4) with a Kd value of 71-85 nM. And the sugar chain cluster which has O-benzyl (G5-G8) showed the lowest affinity, and was Kd value of 85-170 nM.

本発明は、好適な実施形態を参照して説明してきた。ただし、本発明の範囲内で多くの変形が可能である。   The invention has been described with reference to the preferred embodiments. However, many variations are possible within the scope of the present invention.

Claims (12)

次の式（ＩＩ）に対応する分子であって、
式中、
Ｋは、マンノース、ガラクトース、グルコース、アラビノース、キシロース、リボース及びラクトースからなる群より選択される炭水化物を表し、
Ｐｈｏは、
からなる群より選択されるリン酸基を表し、
式中、ＸはＯ又はＳを表し、
リン酸基の１又は２個の酸素原子は、共有結合によってＬ１リンカーアームに結合しており、
Ｌ１は、
直鎖又は分岐Ｃ１‐Ｃ３アルキルジラジカル、直鎖、分岐又は環状Ｃ４‐Ｃ６アルキルジラジカル、１つ又は複数のエーテル架橋‐Ｏ‐を含む可能性がある、直鎖、分岐又は環状Ｃ７‐Ｃ１２アルキルジラジカル、
２、３、４、５又は６つのエチレングリコール単位を含むポリ（エチレングリコール）ジラジカル、
２、３、４、５又は６つのプロピレングリコール単位を含むポリピレングリコールジラジカル、
からなる群より選択されるリンカーアームを表す。）、
Ｔは、
トリアゾ−ルジラジカル
からなる群より選択される連結基を表し、
Ｌ２は、
式中、ｎ及びｍは、１、２、３、４又は５から選択される整数を表す。）
からなる群より選択されるリンカーアームを表し、
Ａｒは、フェニル、ナフタレニル及び１，４‐ビフェニル
からなる群より選択され、
Ｌ３はＯ、Ｓ又は‐ＣＨ２を表し、
Ｇａｌは、次式のβ‐Ｄ‐ガラクトピラノシル基を表し、
ｚは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０から選択される整数であることを特徴とする前記分子。 A molecule corresponding to the following formula (II),
Where
K represents a carbohydrate selected from the group consisting of mannose, galactose, glucose, arabinose, xylose, ribose and lactose;
Pho is
Represents a phosphate group selected from the group consisting of
In which X represents O or S;
1 or 2 oxygen atoms of the phosphate group are covalently bonded to the L 1 linker arm,
L 1 is
Linear, branched or cyclic C 1 -C 3 alkyl diradical, linear, branched or cyclic C 4 -C 6 alkyl diradical, which may contain one or more ether bridges —O— 7 -C 12 alkyl diradical,
A poly (ethylene glycol) diradical containing 2, 3, 4, 5 or 6 ethylene glycol units,
A polypyrene glycol diradical containing 2, 3, 4, 5 or 6 propylene glycol units;
Represents a linker arm selected from the group consisting of ),
T is
Triazol diradical
Represents a linking group selected from the group consisting of
L 2 is
In the formula, n and m represent an integer selected from 1, 2, 3, 4 or 5. )
Represents a linker arm selected from the group consisting of
Ar is phenyl, naphthalenyl and 1,4-biphenyl
Selected from the group consisting of
L 3 represents O, S or —CH 2 ,
Gal represents a β-D-galactopyranosyl group of the formula:
z is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10; Ｋが、Ｄ‐マンノピラノシル形態下のマンノースを表すことを特徴とする、請求項１に記載の分子。   Molecules according to claim 1, characterized in that K represents mannose in the form of D-mannopyranosyl. Ｌ１が、Ｐｒｏ（１，３‐ｎ‐プロピル）基、ＥＧ２Ｍ（ジエチレングリコールメチレン）、ＥＧ３Ｍ（トリエチレングリコールメチレン）、ＥＧ４Ｍ（テトラエチレングリコールメチレン）を表すことを特徴とする、請求項１又は２に記載の分子。 L 1 represents a Pro (1,3-n-propyl) group, EG2M (diethylene glycol methylene), EG3M (triethylene glycol methylene), EG4M (tetraethylene glycol methylene) Molecule described in 1. Ａｒがフェニル基であることを特徴とする、請求項１〜３のうちのいずれか１項に記載の分子。   The molecule according to claim 1, wherein Ar is a phenyl group. ｚが３又は４であることを特徴とする、請求項１〜４のうちのいずれか１項に記載の分子。   5. A molecule according to any one of claims 1 to 4, characterized in that z is 3 or 4. Ｍａｎ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｇａｌ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｇｌｃ（ＰＯＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ[ＰＯ（ＰｒｏＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２]４
Ｍａｎ［ＰＯＴＨＭＥ（ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）２］４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐ＣＨ２‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｏ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ２ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＯＥＧ３ＭＴｚＡｃＮＰｈｅ‐Ｓ‐Ｇａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＰｒｏＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＢｉｓＰｈｅ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＰｒｏＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＢｉｓＰｈｅ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ３ＭＴｚＰｒｏＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
Ｍａｎ（ＰＳＥＧ２ＭＴｚＰｒｏＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎａｐｈｔ‐ＯＧａｌ）４
（式中、Ｍａｎはマンノースを表し、Ｇａｌはガラクトースを表し、Ｇｌｃはグルコースを表し、Ｐｈｅはフェニルを表し、Ｎａｐｈｔはナフチルを表し、ＢｉｓＰｈｅはビフェニルを表し、ＰＯはホスホジエステルを表し、ＰＳはホスホロチオアートを表し、Ｐｒｏは１，３‐ｎ‐プロピルを表し、ＴＨＭＥはトリス‐（ヒドロキシメチル）エタンを表し、Ｔｚはトリアゾール：
を表し、
ＥＧ２はジエチレングリコールを表し、ＥＧ３はトリエチレングリコールを表し、ＡｃＮＰｈｅはアセトアミドフェニル：
を表し、Ｍはメチレンを表す。）
からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜５のうちのいずれか１項に記載の分子。 Man (POProTzAcN Phe- O-Gal) 4
Gal (POProTzAcN Phe- O-Gal) 4
Glc (POProTzAcN Phe- O-Gal) 4
Man (POEG 2 MTzAcN Phe -O-Gal) 4
Man [ PO (ProTzAcN Phe- O-Gal) 2 ] 4
Man [POTHME (MTzAcN Phe- O-Gal) 2 ] 4
Man (PSEG2MTzAcN Phe -CH 2 -O- Gal) 4
Man (PSEG3MTzAcN Phe -CH 2 -O- Gal) 4
Man (POEG2MTzAcN Phe -CH 2 -O- Gal) 4
Man (POEG3MTzAcN Phe -CH 2 -O- Gal) 4
Man (POEG2MTzAcN Phe -CH 2 -S - Gal) 4
Man (POEG3MTzAcN Phe -CH 2 -S - Gal) 4
Man (PSEG3MTzAcNPh e -O-Gal) 4
Man (PSEG3MTzAcN Phe -CH 2 -S- Gal) 4
Man (PSEG2MTzAcN Phe -CH 2 -S- Gal) 4
Man (PSEG3MTzAcN Phe- S-Gal) 4
Man (PSEG2MTzAcN Phe- O-Gal) 4
Man (PSEG2MTzAcNP he- S-Gal) 4
Man (POEG2MTzAcN Phe- S-Gal) 4
Man (POEG3MTzAcN Phe- S-Gal) 4
Man (PSEG3MTz P ro NH-C (= O) - Bis Phe -OGal) 4
Man (PSEG2MTz P ro NH-C (= O) - Bis Phe -OGal) 4
Man (PSEG3MTz P ro NH-C (= O) - Napht-OGal) 4
Man (PSEG2MTz P ro NH-C (= O) - Napht-OGal) 4
(In the formula, Man represents mannose, Gal represents galactose, Glc represents glucose, Phe represents phenyl, Napht represents naphthyl, Bis Phe represents biphenyl, PO represents phosphodiester, PS represents Represents phosphorothioate, Pro represents 1,3-n-propyl, THME represents tris- (hydroxymethyl) ethane, and Tz represents triazole:
Represents
EG2 represents diethylene glycol, EG3 represents triethylene glycol, and AcNPhe represents acetamidophenyl:
And M represents methylene. )
The molecule according to any one of claims 1 to 5, characterized in that it is selected from the group consisting of: 請求項１〜６のうちのいずれか１項に記載の少なくとも１つの分子、又は医薬として許容し得るその塩と、医薬として許容し得る担体及び／又は賦形剤と、を含むことを特徴とする医薬組成物。 At least one molecule according to any one of claims 1 to 6, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient. A pharmaceutical composition. 呼吸器官内に吸入又は滴下されるように製剤化されることを特徴とする、請求項７に記載の医薬組成物。   The pharmaceutical composition according to claim 7, wherein the pharmaceutical composition is formulated so as to be inhaled or dripped into a respiratory organ. 少なくとも１つ以上の他の抗菌剤、又は１つ以上の他の抗病原性剤、又は宿主の先天免疫を強化する１つ以上の薬剤を更に含むことを特徴とする、請求項７又は８に記載の医薬組成物。   9. The method according to claim 7, further comprising at least one or more other antibacterial agents, or one or more other anti-pathogenic agents, or one or more agents that enhance innate immunity of the host. A pharmaceutical composition according to 1. 微生物病原体、具体的には病原菌による感染の予防、遅延、弱化及び治療的処置に用いることを特徴とする、請求項７〜９のうちのいずれか１項に記載の医薬組成物。   10. A pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 9, characterized in that it is used for the prevention, delay, attenuation and therapeutic treatment of microbial pathogens, in particular infections caused by pathogenic bacteria. 緑膿菌(Pseudomonas aeruginosa)からの感染を治療するか、遅延させるか、弱化させるか又は予防するための、請求項１０に記載の医薬組成物。   11. A pharmaceutical composition according to claim 10 for treating, delaying, weakening or preventing infection from Pseudomonas aeruginosa. 緑膿菌を捕捉することが可能な材料に用いることを特徴とする、請求項１〜６のうちのいずれか１項に記載の少なくとも１つの分子を含む組成物。 A composition comprising at least one molecule according to any one of claims 1 to 6, characterized in that it is used for a material capable of capturing Pseudomonas aeruginosa.
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