JP6466350B2 - 免疫ロゼットおよび磁性粒子を用いて細胞を分離するための方法 - Google Patents
免疫ロゼットおよび磁性粒子を用いて細胞を分離するための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6466350B2 JP6466350B2 JP2015561844A JP2015561844A JP6466350B2 JP 6466350 B2 JP6466350 B2 JP 6466350B2 JP 2015561844 A JP2015561844 A JP 2015561844A JP 2015561844 A JP2015561844 A JP 2015561844A JP 6466350 B2 JP6466350 B2 JP 6466350B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- target
- cells
- antibody
- sample
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 85
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 title claims description 74
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 235
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 74
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 69
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 56
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 54
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 54
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 52
- 238000010187 selection method Methods 0.000 claims description 20
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 19
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 10
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 8
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 6
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 claims description 2
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 104
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 89
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 40
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 38
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 16
- 102100035716 Glycophorin-A Human genes 0.000 description 15
- 108091005250 Glycophorins Proteins 0.000 description 15
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 15
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 15
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 11
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 11
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 11
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 10
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 10
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 9
- 102000049320 CD36 Human genes 0.000 description 9
- 108010045374 CD36 Antigens Proteins 0.000 description 9
- 102100025470 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8 Human genes 0.000 description 9
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 9
- 101000914320 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8 Proteins 0.000 description 9
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 9
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 9
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 9
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 9
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 9
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 8
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000012468 concentrated sample Substances 0.000 description 7
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 7
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 6
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 6
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 6
- 238000003320 cell separation method Methods 0.000 description 5
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 4
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 4
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 4
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 4
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 102100035248 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Human genes 0.000 description 2
- 101001022185 Homo sapiens Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Proteins 0.000 description 2
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012388 gravitational sedimentation Methods 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 2
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 2
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 2
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000004375 physisorption Methods 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003851 biochemical process Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 244000078885 bloodborne pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 238000010382 chemical cross-linking Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000003318 immunodepletion Methods 0.000 description 1
- 238000003316 immunomagnetic separation method Methods 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000207 lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
- A23L2/52—Adding ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/07—Retinol compounds, e.g. vitamin A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid, pantothenic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid, pantothenic acid
- A61K31/198—Alpha-aminoacids, e.g. alanine, edetic acids [EDTA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
- A61K31/221—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin with compounds having an amino group, e.g. acetylcholine, acetylcarnitine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
- A61K31/355—Tocopherols, e.g. vitamin E
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/365—Lactones
- A61K31/375—Ascorbic acid, i.e. vitamin C; Salts thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
- A61K31/385—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having two or more sulfur atoms in the same ring
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4188—1,3-Diazoles condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. biotin, sorbinil
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4415—Pyridoxine, i.e. Vitamin B6
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/455—Nicotinic acids, e.g. niacin; Derivatives thereof, e.g. esters, amides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
- A61K31/51—Thiamines, e.g. vitamin B1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
- A61K31/525—Isoalloxazines, e.g. riboflavins, vitamin B2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
- A61K31/593—9,10-Secocholestane derivatives, e.g. cholecalciferol, i.e. vitamin D3
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7135—Compounds containing heavy metals
- A61K31/714—Cobalamins, e.g. cyanocobalamin, i.e. vitamin B12
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/04—Sulfur, selenium or tellurium; Compounds thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/06—Aluminium, calcium or magnesium; Compounds thereof, e.g. clay
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
- A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
- A61K33/30—Zinc; Compounds thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
- C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/40—Concentrating samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
- A23L33/12—Fatty acids or derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/15—Vitamins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/15—Vitamins
- A23L33/155—Vitamins A or D
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/16—Inorganic salts, minerals or trace elements
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/175—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
a.標的細胞と第2の標的の免疫ロゼット形成が可能な条件下で、(b)第2の標的に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)標的細胞に結合する少なくとも1つの抗体を含む一次抗体組成物と試料を接触させること、
b.免疫ロゼットおよび/または第2の標的への粒子の結合を可能にする条件下で、(b)粒子に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)第2の標的に単独でまたは免疫ロゼット内で結合する少なくとも1つの抗体を含む二次抗体組成物と試料を接触させること、ならびに
c.標的細胞について濃縮された試料を得るために、免疫ロゼット−粒子複合体および/または第2の標的−粒子複合体を試料から分離すること。
d.免疫ロゼット−磁性粒子複合体から標的細胞を分離すること、
をさらに含む。
d.免疫ロゼット中の赤血球の溶解、および
e.溶解した赤血球および磁性粒子からの標的細胞の分離、
をさらに含む。
本開示は、第2の標的と標的細胞を免疫ロゼット形成させ、その後、前記免疫ロゼットと第2の標的を粒子に結合させることにより、標的細胞、第2の標的および非標的細胞を含む試料から標的細胞と非標的細胞を分離するための方法に関する。
a)標的細胞と第2の標的の免疫ロゼット形成が可能な条件下で、(b)第2の標的に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)標的細胞に結合する少なくとも1つの抗体を含む一次抗体組成物と試料を接触させること、
b)免疫ロゼットおよび/または第2の標的への粒子の結合を可能にする条件下で、(b)粒子に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)第2の標的に単独でまたは免疫ロゼット内で結合する少なくとも1つの抗体を含む二次抗体組成物と試料を接触させること、ならびに
c)非標的細胞について濃縮された試料を得るために、免疫ロゼット−粒子複合体および/または第2の標的−粒子複合体を試料から分離すること。
a)不要な細胞と第2の標的の免疫ロゼット形成が可能な条件下で、(b)第2の標的に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)不要な細胞に結合する少なくとも1つの抗体を含む一次抗体組成物と試料を接触させること、
b)免疫ロゼットおよび/または第2の標的への粒子の結合を可能にする条件下で、(b)粒子に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)第2の標的に単独でまたは免疫ロゼット内で結合する少なくとも1つの抗体を含む二次抗体組成物と試料を接触させること、ならびに
c)所望の細胞について濃縮された試料を得るために、免疫ロゼット−粒子複合体および/または第2の標的−粒子複合体を試料から分離すること。
a)所望の細胞と第2の標的の免疫ロゼット形成が可能な条件下で、(b)第2の標的に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)所望の細胞に結合する少なくとも1つの抗体を含む一次抗体組成物と試料を接触させること、
b)免疫ロゼットおよび/または第2の標的への粒子の結合を可能にする条件下で、(b)粒子に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)第2の標的に単独でまたは免疫ロゼット内で結合する少なくとも1つの抗体を含む二次抗体組成物と試料を接触させること、ならびに
c)免疫ロゼット−粒子複合体内の所望の細胞について濃縮された試料を得るために、免疫ロゼット−粒子複合体および/または第2の標的−粒子複合体を試料から分離すること。
本開示は、本明細書に記載の方法で使用するための抗体と粒子の組成物を含む。一次抗体組成物は、(b)第2の標的に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)標的細胞上の抗原に結合する少なくとも1つの抗体を含む。
実施例1
四量体抗体複合体の調製
本開示の方法で使用するための四量体抗体複合体を調製するために、以下のプロトコルを使用することができる:(a)ロゼット形成させる細胞に特異的な抗体(例えば、抗CD8、CD16、CD19、CD36、CD56、CD66bなど)1mgを取る;(b)(赤血球に対する)抗グリコホリンA抗体3mgを添加する;十分に混合し、その後、(c)P9抗体4.0mgまたはP9F(ab’)2抗体断片2.72mgを添加する。37℃で一晩インキュベートする。P9抗体は、ステップ(a)および(b)で添加される抗体のFc部分に結合し、四量体抗体複合体をもたらす。二次抗体組成物については、以下のプロトコルを使用することができる:(a)赤血球に特異的な抗体(抗グリコホリンA)1mgを取る;(b)P9抗体1mgまたはP9F(ab’)2抗体断片0.68mgを添加する。もう1つの方法として、(a)赤血球に特異的な抗体(抗グリコホリンA)1mgを取る;(b)抗デキストラン抗体3mgを添加する;十分に混合し、その後、(c)P9抗体4.0mgまたはP9F(ab’)2抗体断片2.72mgを添加する。37℃で一晩インキュベートする。四量体の調製の詳細については、参照により本明細書に組み込まれるLansdorpの米国特許第4,868,109号を参照されたい。有核細胞上で発現する抗原に対する異なる抗体を組み込んだ四量体抗体複合体を別々に調製し、その後混合する。
四量体抗体複合体または第2の標的に対する抗体が結合した粒子の調製
本開示の方法で使用するための四量体抗体複合体が結合した粒子を調製するために、以下のプロトコルを使用することができる:(a)P9抗体200μgと共に、四量体抗体複合体に結合した抗グリコホリンA抗体200μgを取る;(b)カルボキシデキストラン磁性粒子80mgを添加し、(c)15℃〜37℃で一晩インキュベートする。その後、組成物を試料に1/20に希釈すると、抗グリコホリンA抗体の最終濃度は1〜10μg/mLになる。
磁性粒子に直接結合した第2の標的に特異的な単一特異的四量体抗体複合体を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼットの免疫磁気細胞分離法
磁気細胞分離を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼット形成細胞のネガティブ選択プロトコルを以下に記載する。
1.ヒト末梢全血1mL当たり一次抗体組成物50μLを添加する。
2.ヒト末梢全血1mL当たり磁性粒子に直接結合した二次抗体組成物50μLを添加する。
3.室温で5分間インキュベートする。
4.等量のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で試料を希釈し、穏やかに混合する。
5.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
6.室温で5分間インキュベートする。
7.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
8.ステップ2のように、磁性粒子に直接結合した等量の二次抗体組成物を希釈した濃縮試料に添加する。
9.室温で5分間インキュベートする。
10.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
11.室温で5分間インキュベートする。
12.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
磁性粒子上に予め添加した第2の標的および磁性粒子に特異的な四量体抗体複合体を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼットの免疫磁気細胞分離法
磁気細胞分離を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼット形成細胞のネガティブ選択プロトコルを以下に記載する。
1.ヒト末梢全血1mL当たり一次抗体組成物50μLを添加する。
2.ヒト末梢全血1mL当たり磁性粒子上に予め添加された二次抗体組成物50μLを添加する。
3.室温で5分間インキュベートする。
4.等量のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で試料を希釈し、穏やかに混合する。
5.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
6.室温で5分間インキュベートする。
7.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
8.ステップ2のように、磁性粒子上に予め添加した等量の二次抗体組成物を希釈した濃縮試料に添加する。
9.室温で5分間インキュベートする。
10.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
11.室温で5分間インキュベートする。
12.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
磁性粒子に化学的にコンジュゲートした第2の標的に特異的な抗体を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼットの免疫磁気細胞分離法
磁気細胞分離を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼット形成細胞のネガティブ選択プロトコルを以下に記載する。
1.ヒト末梢全血1mL当たり一次抗体組成物50μLを添加する。
2.ヒト末梢全血1mL当たり磁性粒子に化学的にコンジュゲートされた二次抗体組成物50μLを添加する。
3.ヒト末梢血1mL当たりデキストランコーティング磁性粒子50μLを添加する。
4.室温で10分間インキュベートする。
5.等量のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で試料を希釈し、穏やかに混合する。
6.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
7.室温で5分間インキュベートする。
8.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
9.ステップ3のように、等量のデキストランコーティング磁性粒子を希釈した濃縮試料に添加する。
10.室温で5分間インキュベートする。
11.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
12.室温で5分間インキュベートする。
13.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
カルボキシデキストランコーティング磁性粒子を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼットの免疫磁気細胞分離法
磁気細胞分離を用いたヒト末梢全血からの免疫ロゼット形成細胞のネガティブ選択プロトコルを以下に記載する。
1.ヒト末梢全血1mL当たり一次抗体組成物50μLを添加する。
2.ヒト末梢血1mL当たり二次抗体組成物50μLを添加する。
3.室温で10分間インキュベートする。
4.ヒト末梢血1mL当たりカルボキシデキストランコーティング磁性粒子50μLを添加する。
5.室温で5分間インキュベートする。
6.等量のリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で試料を希釈し、穏やかに混合する。
7.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
8.室温で5分間インキュベートする。
9.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
10.希釈した濃縮試料1mL当たりカルボキシデキストランコーティング磁性粒子5μLを添加する。
11.室温で5分間インキュベートする。
12.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
13.室温で5分間インキュベートする。
14.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
ヒト末梢血単核細胞(PBMC)からの免疫ロゼットの免疫磁気細胞分離法
磁気細胞分離を用いた赤血球枯渇ヒトPBMCからの免疫ロゼット形成細胞のネガティブ選択プロトコルを以下に記載する。
1.赤血球枯渇ヒトPBMC試料に同量以上の非磁性粒子を添加する。
2.試料1mL当たり一次抗体組成物50μLを添加する。
2.試料1mL当たり二次抗体組成物50μLを添加する。
4.室温で10分間インキュベートする。
5.試料1mL当たり磁性粒子50μLを添加する。
6.室温で5分間インキュベートする。
7.等量のPBS+2%FBSで試料を希釈し、穏やかに混合する。
8.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
9.室温で5分間インキュベートする。
10.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
11.希釈した濃縮試料1mL当たり磁性粒子5μLを添加する。
12.室温で5分間インキュベートする。
13.試料を含むチューブを磁石の中に置く。
14.室温で5分間インキュベートする。
15.試料チューブを磁石内に保持しながら、濃縮細胞を試料から除去する。
免疫ロゼットの密度勾配遠心分離または免疫磁気分離を用いた末梢全血からのヒトCD4+T細胞の濃縮
この実施例は、密度勾配遠心分離を用いて単離した免疫ロゼットを使用して濃縮したCD4+T細胞と比較して、実施例6に記載の方法を用いた末梢全血からのCD4+T細胞の濃縮を示す(表1)。CD8、CD16、CD19、CD36、CD56、CD66b、TCRγδおよびグリコホリンAに対する抗体を含む四量体抗体複合体のCD4+T細胞濃縮カクテルを調製した。グリコホリンAおよびデキストランに対する抗体を含む四量体の二次抗体複合体を作製した。表1に示す結果は、本開示の方法によると、24.7%の回収率で、CD4+T細胞の純度が92.6%になることを示す。比較して、免疫ロゼットの密度勾配遠心分離では、主に最終濃縮画分における残留赤血球の存在により、23.2%の回収率で、CD4+T細胞の純度は80.6%になる(84.5%対97.5%のCD45+純度)。
PEG化ポリスチレンビーズを用いたヒトPBMCからのヒトCD4+T細胞の濃縮
この実施例は、実施例7(図2)に記載の方法を用いた末梢全血からのCD4+T細胞の濃縮を示す。ポリエチレングリコール(PEG)で官能化した7μmのポリスチレンビーズを赤血球枯渇PBMC試料に1個の有核細胞に対して10個のビーズの最終比で添加した。CD8、CD16、CD19、CD36、CD56、CD66b、TCRγδおよびPEGに対する抗体を含む四量体抗体複合体のCD4+T細胞濃縮カクテルを調製した。PEGおよびデキストランに対する抗体を含む四量体の二次抗体複合体を調製した。A)フィコール処理したPBMCは、71.5%がCD45+細胞であり、約47.6%がCD3+CD4+T細胞である。B)7μmのPEGポリスチレンビーズを10倍過剰添加すると、CD45+画分は7.2%に低下し、83.6%はビーズである。シングレット画分中のCD3+CD4+T細胞の割合は44.4%でPBMC試料と同様である。C)実施例6に概説したように、本開示の方法に従うと、最終的なCD45+純度は96.6%であり、シングレットの96.3%がCD3+CD4+T細胞である。CD3+CD4+T細胞の回収率は23.6%であった。
免疫磁気細胞分離を用いた追加の赤血球枯渇がある場合とない場合におけるMACSxpressを用いたヒトCD3+CD4+T細胞の濃縮
この実施例は、製造業者により推奨される追加の赤血球免疫枯渇ステップを行った場合と行わなかった場合の、市販の赤血球凝集試薬および免疫磁気分離システム(MACSxpress(登録商標)、Miltenyi Biotech社)を用いたヒト末梢全血2mLからのCD3+CD4+T細胞のネガティブ濃縮を示す(図5)。試料を、抗ヒトCD4 FITC、CD3 PerCP−Cy5.5およびCD45 APCで染色し、フローサイトメトリーによって分析した。A)ヒト末梢全血中の赤血球を塩化アンモニウムを用いて溶解すると、85.0%のCD45+細胞が得られ、そのうちの29.0%はCD3+CD4+T細胞であった。A)製造業者により推奨される赤血球凝集および免疫磁気濃縮プロトコル後に、分離管の画像に示されるように、細胞懸濁液は明白に赤である。試料の分析時に、回収した細胞のわずか7.7%がCD45+であり、そのうちの72.1%がCD3+CD4+T細胞であった。B)製造業者の推奨による追加の免疫磁気赤血球枯渇プロトコル後には、細胞懸濁液には残留赤血球が無い。試料の分析時に、回収した細胞の98.6%はCD45+であり、そのうちの98.7%がCD3+CD4+T細胞であった。この実施例では、市販の赤血球凝集試薬および免疫磁気分離プラットフォームMACSxpressが共に、ヒト末梢全血から赤血球を完全に除去するために免疫磁気赤血球枯渇ステップを含む第2のステップと組み合わせて赤血球を沈降するための赤血球凝集試薬を必要とすることを示す。
免疫ロゼットの密度勾配もしくは免疫磁気分離、または赤血球凝集と免疫磁気分離を組み合わせた方法のいずれかを用いたヒト末梢全血からのヒトCD3+T細胞の濃縮
この実施例は、A)塩化アンモニウム溶解、B)免疫ロゼットと密度分離(RosetteSep、STEMCELL Technologies社)、C)赤血球凝集と免疫磁気分離(MACSxpress、Miltenyi Biotech社)、またはD)実施例3による免疫ロゼットと免疫磁気分離のいずれかを用いたヒト末梢全血(n=3)15mLからのCD3+T細胞のネガティブ濃縮を示す(図6)。A)ヒト末梢血の塩化アンモニウム溶解は、末梢血有核細胞の平均26.6%が、全血1mLあたり1×106細胞で存在するCD3+T細胞であることを示す。B)CD15、CD16、CD19、CD36、CD56、CD66b、およびグリコホリンAに対する抗体を含む四量体抗体複合体のカクテルからなる、CD3+T細胞の濃縮のための一次抗体組成物を調製した。米国特許第6448075B1号に従って免疫密度分離した後、残留赤血球を含む全細胞内のCD3+T細胞の平均の純度は88.7%であり、全血1mLあたり3.6×105個のCD3+T細胞を回収した。C)市販の赤血球凝集試薬および免疫磁気分離製品(MACSxpress、Miltenyi Biotech社)を用いたCD3+T細胞のネガティブ選択ならびに免疫磁気細胞分離(MACSxpress)を用いた追加の赤血球枯渇ステップ後では、残留赤血球を含む全細胞内のCD3+T細胞の平均の純度は98.5%であり、全血1mLあたり4.5×105個のCD3+T細胞を回収した。D)実施例3で開示した方法に従って、CD15、CD16、CD19、CD36、CD56、CD66b、およびグリコホリンAに対する抗体を含む四量体抗体複合体のカクテルからなるCD3+T細胞の濃縮のための一次抗体組成物を調製した。カルボキシデキストラン磁性粒子に結合したグリコホリンAに対する抗体を含む単一特異的四量体抗体複合体からなる二次抗体組成物を調製した。本開示の方法に従うと、残留赤血球を含む全細胞内のCD3+T細胞の平均純度は96.8%であり、全血1mLあたり3.6×105個のCD3+T細胞を回収した。方法C)とD)の間で純度またはCD3+T細胞回収率のいずれにおいても有意差はなかった。実施例3で開示した方法は、単に全ヒト末梢血からのCD3+T細胞の濃縮のための免疫磁気ネガティブ選択法であった。
1.R.E.Kontermann(編),Bispecific Antibodies(第1版,pp.47−63)ハイデルベルグ:スプリンガー ベルリンの中のEllerman,D.およびScheer,J.M.(2011).化学結合による2重特異的抗体の作製(Generation of Bispecific Antibodies by Chemical Conjugation).
2.R.E.Kontermann(編),Bispecific Antibodies(第1版,pp.29−46)ハイデルベルグ:スプリンガー ベルリンの中のMoldenhauer,G.(2011).ハイブリッドハイブリドーマ由来の2重特異性抗体(Bispecific Antibodies from Hybrid Hybridoma).
3.R.E.Kontermann(編),Bispecific Antibodies(第1版,pp.199−216)ハイデルベルグ:スプリンガー ベルリンの中のChang,C,Rossi,E.A.,およびSharkey,R.M.(2011).新規2重特異性抗体へのドックアンドロックアプローチ(The Dock−and−Lock(DNL)Approach to Novel Bispecific Antibodies).
4.P.Chames(編),抗体エンジニアリング:方法およびプロトコル(第2版,pp.237−245).ニューヨーク:Humana Press社の中のKim,J.H.,およびHong,H.J.(2012).CDR移植および特異性決定残基の移植によるヒト化(Humanization by CDR Grafting and Specificity−Determining Residue Grafting).
Claims (27)
- 標的細胞、第2の標的および非標的細胞を含む試料の中の標的細胞を非標的細胞から分離するための選択法であって:
a)前記標的細胞と前記第2の標的の免疫ロゼット形成が可能な条件下で、(b)前記第2の標的に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)前記標的細胞に結合する少なくとも1つの抗体を含む一次抗体複合体と前記試料を接触させること、
b)前記免疫ロゼットおよび/または前記第2の標的への粒子の結合を可能にする条件下で、
(i)(b)前記粒子に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)前記第2の標的に単独でまたは前記免疫ロゼット内で結合する少なくとも1つの抗体、
(ii)(b)前記第2の標的に結合する少なくとも1つの抗体に直接的または間接的に連結された(a)前記第2の標的に単独でまたは前記免疫ロゼット内で結合する少なくとも1つの抗体、を含む単一特異的抗体複合体であって、前記粒子に結合される単一特異的抗体複合体、または
(iii)前記粒子に直接結合された少なくとも1つの抗体であって前記第2の標的に結合する抗体、
を含む二次抗体複合体と前記試料を接触させること、ならびに
c)前記標的細胞を前記非標的細胞から分離するために、免疫ロゼット−粒子複合体および/または第2の標的−粒子複合体を前記試料から分離すること、
を含む方法。 - 前記二次抗体複合体が、前記試料との接触の前に前記粒子に結合される、請求項1に記載の方法。
- 前記粒子に結合した前記二次抗体複合体が、前記一次抗体複合体と前記試料を接触させる前に前記試料に添加される、請求項1または2に記載の方法。
- 前記第2の標的が赤血球である、請求項1に記載の方法。
- 前記第2の標的が顆粒球である、請求項1に記載の方法。
- 前記第2の標的がビーズである、請求項1に記載の方法。
- 前記ビーズがポリスチレンビーズである、請求項6に記載の方法。
- 前記ポリスチレンビーズがポリマーでコーティングされている、請求項7に記載の方法。
- 前記第2の標的が分離前に前記試料に添加される、請求項1に記載の方法。
- 前記粒子が磁性粒子である、請求項1に記載の方法。
- 前記粒子が非磁性粒子である、請求項1に記載の方法。
- 前記選択法が、所望の細胞を選択するためのポジティブ選択法であり、前記標的細胞が前記所望の細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記選択法が、前記試料から不要な細胞を除去するためのネガティブ選択法であり、前記標的細胞が前記不要な細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記第2の標的が細胞と類似の密度を有し、前記粒子が細胞とは異なる密度を有する、請求項1に記載の方法。
- 免疫ロゼット−磁性粒子複合体および/または第2の標的−磁性粒子複合体が、前記免疫ロゼット−磁性粒子複合体および/または前記第2の標的−磁性粒子複合体を前記試料から分離するのに十分な強度の磁場勾配に前記試料を置くことによって、ステップc)で前記試料から分離される、請求項10に記載の方法。
- 前記免疫ロゼット−粒子複合体が、密度分離によりステップc)で前記試料から分離される、請求項1に記載の方法。
- 前記免疫ロゼット−粒子複合体が、沈降によりステップc)で前記試料から分離される、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、
d)前記免疫ロゼット−磁性粒子複合体から前記標的細胞を分離すること
をさらに含む、請求項15に記載の方法。 - 前記標的細胞が、物理的、化学的、酵素的または熱による解離によって前記免疫ロゼット−磁性粒子複合体から分離される、請求項18に記載の方法。
- 前記方法が、
d.前記免疫ロゼット中での前記赤血球の溶解、および
e.前記溶解した赤血球および前記粒子からの前記標的細胞の分離、
をさらに含む、請求項4に記載の方法。 - 前記試料が、血液、全血、骨髄、胎児肝臓、臍帯血、バフィーコート懸濁液、白血球除去試料、胸膜および腹水、または胸腺細胞および脾臓細胞の試料である、請求項1に記載の方法。
- 前記標的細胞が、幹細胞、前駆細胞、単球、リンパ球または顆粒球である、請求項1に記載の方法。
- 前記リンパ球がT細胞、B細胞またはNK細胞である、請求項22に記載の方法。
- 前記顆粒球が、好中球、好塩基球または好酸球である、請求項22に記載の方法。
- 前記一次抗体複合体が、二重特異性四量体抗体複合体である、請求項1〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記二次抗体複合体が、単一特異的四量体抗体複合体である、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記単一特異的四量体抗体複合体が、赤血球に結合する抗体を含む、請求項26に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361788907P | 2013-03-15 | 2013-03-15 | |
US61/788,907 | 2013-03-15 | ||
US201461929674P | 2014-01-21 | 2014-01-21 | |
US61/929,674 | 2014-01-21 | ||
PCT/CA2014/000214 WO2014138887A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-03-12 | Method for separating cells using immunorosettes and magnetic particles |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016509846A JP2016509846A (ja) | 2016-04-04 |
JP6466350B2 true JP6466350B2 (ja) | 2019-02-06 |
Family
ID=51535660
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015561844A Active JP6466350B2 (ja) | 2013-03-15 | 2014-03-12 | 免疫ロゼットおよび磁性粒子を用いて細胞を分離するための方法 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10081793B2 (ja) |
EP (2) | EP2970906B1 (ja) |
JP (1) | JP6466350B2 (ja) |
CN (1) | CN105209608B (ja) |
BR (1) | BR112015022548A2 (ja) |
CA (1) | CA2906121C (ja) |
HK (1) | HK1213942A1 (ja) |
IL (1) | IL241479B (ja) |
WO (1) | WO2014138887A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3097187B1 (en) * | 2014-01-21 | 2018-07-04 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating target entities from a sample using a composition of mono-specific tetrameric antibody complexes coupled to a surface |
EP3037170A1 (en) * | 2014-12-27 | 2016-06-29 | Miltenyi Biotec GmbH | Multisort cell separation method |
CN107709366B (zh) | 2015-06-10 | 2021-10-26 | 干细胞技术公司 | 用于双功能免疫复合物的原位形成的方法 |
WO2018039637A1 (en) | 2016-08-26 | 2018-03-01 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of enumerating particles present in a cell composition |
US10463590B1 (en) * | 2018-12-20 | 2019-11-05 | Matthias W. Rath | Antiplaque and dental health oral formulation |
WO2020180744A1 (en) * | 2019-03-01 | 2020-09-10 | The Regents Of The University Of California | Natural killer cell induced cellular vesicles for cancer therapy |
US20210228557A1 (en) * | 2020-01-29 | 2021-07-29 | Healthy Directions, LLC | Therapeutic compositions comprising coenzyme q10 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4752582A (en) | 1982-12-17 | 1988-06-21 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Monoclonal antibodies to human glycophorin A and cell lines for the production thereof |
NL8501219A (nl) | 1985-04-29 | 1986-11-17 | Stichting Vrienden Van De Stic | Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan. |
CA2725132C (en) * | 1999-05-28 | 2013-07-16 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating cells using immunorosettes |
EP1185867B1 (en) | 1999-05-28 | 2005-03-30 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating cells using immunorosettes |
US6645727B2 (en) * | 2000-05-26 | 2003-11-11 | Stemcell Technologies Inc. | Antibody compositions for preparing enriched mesenchymal progenitor preparations |
CA2512295A1 (en) * | 2004-07-16 | 2006-01-16 | Stemcell Technologies Inc. | Magnetic target entity separation method |
US20110286916A1 (en) * | 2008-11-20 | 2011-11-24 | Jose Miguel Aste-Amezaga | Generation and characterization of anti-notch antibodies for therapeutic and diagnostic use |
JP2013546002A (ja) * | 2010-12-15 | 2013-12-26 | サイトセッド, インコーポレイテッド | 抗体連結型免疫沈降剤およびそれを使用してサンプルから標的を単離する方法 |
EP2597153B1 (en) * | 2011-11-25 | 2016-10-05 | Miltenyi Biotec GmbH | Cell separation method |
-
2014
- 2014-03-12 WO PCT/CA2014/000214 patent/WO2014138887A1/en active Application Filing
- 2014-03-12 JP JP2015561844A patent/JP6466350B2/ja active Active
- 2014-03-12 BR BR112015022548A patent/BR112015022548A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2014-03-12 US US14/775,987 patent/US10081793B2/en active Active
- 2014-03-12 EP EP14764294.6A patent/EP2970906B1/en active Active
- 2014-03-12 EP EP19188209.1A patent/EP3594326B1/en active Active
- 2014-03-12 CN CN201480024522.3A patent/CN105209608B/zh active Active
- 2014-03-12 CA CA2906121A patent/CA2906121C/en active Active
-
2015
- 2015-09-10 IL IL241479A patent/IL241479B/en active IP Right Grant
-
2016
- 2016-02-22 HK HK16101934.9A patent/HK1213942A1/zh unknown
-
2018
- 2018-08-22 US US16/108,707 patent/US11325984B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3594326B1 (en) | 2023-11-15 |
EP2970906A4 (en) | 2016-08-24 |
CA2906121A1 (en) | 2014-09-18 |
US10081793B2 (en) | 2018-09-25 |
WO2014138887A1 (en) | 2014-09-18 |
US11325984B2 (en) | 2022-05-10 |
EP2970906A1 (en) | 2016-01-20 |
CN105209608B (zh) | 2022-10-14 |
US20160187241A1 (en) | 2016-06-30 |
US20190040357A1 (en) | 2019-02-07 |
HK1213942A1 (zh) | 2016-07-15 |
IL241479A0 (en) | 2015-11-30 |
BR112015022548A2 (pt) | 2017-07-18 |
EP3594326A1 (en) | 2020-01-15 |
EP2970906B1 (en) | 2019-08-21 |
CA2906121C (en) | 2021-01-05 |
JP2016509846A (ja) | 2016-04-04 |
CN105209608A (zh) | 2015-12-30 |
IL241479B (en) | 2020-11-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6466350B2 (ja) | 免疫ロゼットおよび磁性粒子を用いて細胞を分離するための方法 | |
JP6126619B2 (ja) | 細胞分離方法 | |
US6117985A (en) | Antibody compositions for preparing enriched cell preparations | |
CN105734043B (zh) | 多分选细胞分离方法 | |
MXPA03009258A (es) | Composiciones y metodos para separacion celular. | |
CN106414725B (zh) | 使用与表面偶联的单特异性四聚抗体复合物组合物从样品中分离出靶实体的方法 | |
US10983114B2 (en) | Method for the in situ formation of bifunctional immunological complexes | |
CA2725132C (en) | Method for separating cells using immunorosettes | |
WO2019168681A1 (en) | Reagents and kits for enrichment of desired cells prior to fluorescence activated cell sorting |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20170302 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180130 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180427 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180814 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181019 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181211 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190109 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6466350 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |