JP6427988B2 - Cell culture vessel - Google Patents

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JP6427988B2 JP2014130788A JP2014130788A JP6427988B2 JP 6427988 B2 JP6427988 B2 JP 6427988B2 JP 2014130788 A JP2014130788 A JP 2014130788A JP 2014130788 A JP2014130788 A JP 2014130788A JP 6427988 B2 JP6427988 B2 JP 6427988B2
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Description

本発明は、少量の培養液を用いたマイクロドロップ法による細胞培養のためのウェルを備える細胞培養容器に関する。   The present invention relates to a cell culture vessel provided with a well for cell culture by a microdrop method using a small amount of culture solution.

培養系で精子と卵子とを体外受精させて受精卵(接合子)を作製して、さらに受精卵を卵割、桑実胚、胚盤胞の段階を経て、透明帯から孵化した脱出胚盤胞の段階まで培養することが可能となり、この卵割から胚盤胞の段階にある受精卵を子宮に移植して産子を得る補助的生殖技術(ART)が、家畜領域のみならずヒトの不妊医療でも確立されている。   The in vitro fertilized egg (zygote) is produced by fertilizing sperm and ovum in a culture system, and the fertilized egg goes through the cleavage, morula, and blastocyst stages, and then emerges from the zona pellucida It is possible to culture up to the blastocyst stage. Assistive reproductive technology (ART) to transfer a fertilized egg from the cleavage to the blastocyst stage to the uterus to give birth to a baby is not limited to the livestock region. Established in infertility medicine.

体外受精においては、容器中に培養液のドロップを作り、この中に受精卵を入れて体外培養するマイクロドロップ法が用いられることが多い。従来、このマイクロドロップ法には、細胞培養容器として、底面が単一平面であり、直径が30〜60mmのシャーレが使用され、シャーレの底面に、培養液のドロップを、間隔をあけて複数個作製する方法が使用されてきた。   In in vitro fertilization, a microdrop method is often used in which a culture solution is dropped in a container, and a fertilized egg is placed in the container and cultured in vitro. Conventionally, in this microdrop method, a petri dish having a single flat bottom and a diameter of 30 to 60 mm is used as a cell culture container, and a plurality of drops of culture solution are placed on the bottom of the petri dish at intervals. The method of making has been used.

この培養液ドロップの作製については、定められた手段は確立されておらず、培養液の使用量も各クリニックや病院の経験に基づき、多様な培養液量が用いられている。そのため、用いられている培養液量の範囲は、数十μl〜数百μlとかなりの幅がある。しかし、そのような多様な培養液量にそれぞれ対応する細胞培養容器を準備するのはコストの点で問題があり、通常のシャーレで多様な大きさのドロップを作成しているのが現状である。   No specific means has been established for the production of the culture medium drop, and the amount of culture medium used is based on various clinics and hospital experiences. Therefore, the range of the amount of culture solution used has a considerable range of several tens to several hundreds of μl. However, it is problematic in terms of cost to prepare cell culture vessels corresponding to such various culture volumes, and the current situation is that drops of various sizes are created in ordinary petri dishes. .

一方、通常のシャーレでドロップを作成するとドロップ形成位置が定まらず、振動等でドロップがずれてしまうといった問題があった。ドロップがずれてしまうと、その中で培養して観察していた受精卵の特定が難しくなるという問題があった。また、複数のドロップが合流してしまうと、さらに受精卵の特定が難しくなるという問題があった。したがって、ドロップの位置が制御でき、受精卵培養作業時や培養時の振動による影響を抑制できる手段が求められていた。   On the other hand, when a drop is created with a normal petri dish, there is a problem that the drop formation position is not determined and the drop is displaced due to vibration or the like. When the drop is shifted, there is a problem that it becomes difficult to identify a fertilized egg cultured and observed in the drop. In addition, when a plurality of drops merge, there is a problem that it becomes more difficult to identify a fertilized egg. Therefore, there has been a demand for means that can control the position of the drop and suppress the influence of vibration during fertilized egg culturing work or culturing.

培養液の個々のマイクロドロップを、窪み形状を有するマイクロウェル中に形成して培養を行えば上記の問題は解消できる。特許文献1では、窪み形状を有する細胞培養用のマイクロウェルを開示している。これらの文献に開示されているマイクロウェルは、その底面がすり鉢状に傾斜し、培養細胞が最も低い中央部に保持できる構造を有する。   The above problem can be solved by culturing by forming individual microdrops of the culture solution in microwells having a hollow shape. Patent Document 1 discloses a microwell for cell culture having a hollow shape. The microwells disclosed in these documents have a structure in which the bottom surface is inclined in a mortar shape and the cultured cells can be held at the lowest central portion.

特許第5143227号公報Japanese Patent No. 5143227

特許文献1等に開示されている従来の細胞培養用のウェルは、図7に示すように、ウェル底面110の最深部115が、ウェル70の中央にあり、細胞Cはウェル中央に保持される。このためピペット200で培養中の細胞Cを取り扱う場合、ウェルの周壁面106の上端にピペット200が干渉し易く、ピペット200の操作角度の範囲が制約されるという課題があった。   As shown in FIG. 7, in the conventional well for cell culture disclosed in Patent Document 1 or the like, the deepest portion 115 of the well bottom surface 110 is at the center of the well 70, and the cell C is held at the center of the well. . For this reason, when handling the cell C in culture with the pipette 200, the pipette 200 easily interferes with the upper end of the peripheral wall surface 106 of the well, and there is a problem that the range of the operation angle of the pipette 200 is restricted.

そこで本発明では、
細胞培養容器であって、
細胞及び培養液を収容するための内部空間を有する少なくとも1つのウェルを備え、
前記ウェルの前記内部空間を形成する壁面は、ウェル底面と、該ウェル底面の周縁から起立し前記内部空間を囲うウェル周壁面とを含み、
前記ウェル底面には窪み部が形成されており、
前記ウェル底面のうち、前記ウェルの深さ方向に沿って前記窪み部の窪みが最も深い部分を最深部としたとき、前記ウェル底面を、前記深さ方向に垂直な仮想平面に投影して形成される領域において、前記最深部を前記仮想平面に投影した部分が、該領域の重心から外れた位置となるように、前記ウェル底面が形成されており、
前記最深部は前記ウェル底面において1つのみ存在する
ことを特徴とする、
細胞培養容器を提供する。
Therefore, in the present invention,
A cell culture container,
Comprising at least one well having an internal space for containing cells and culture medium;
The wall surface forming the internal space of the well includes a well bottom surface and a well peripheral wall surface that stands up from a peripheral edge of the well bottom surface and surrounds the internal space,
A depression is formed on the bottom of the well,
Formed by projecting the well bottom surface onto a virtual plane perpendicular to the depth direction when the deepest portion of the well portion along the depth direction of the well is the deepest portion of the well portion. In the region to be formed, the well bottom surface is formed such that a portion where the deepest portion is projected onto the virtual plane is located away from the center of gravity of the region,
There is only one deepest portion on the bottom surface of the well,
A cell culture container is provided.

本発明によれば、ウェルの最深部がウェルの重心位置から偏心された位置にあるため、ウェル内に収容された培養液ドロップ中の細胞をピペットにより操作する際に、ピペットがウェル周壁面を含む壁部の上端に干渉し難く操作が容易となる。   According to the present invention, since the deepest part of the well is in a position that is eccentric from the center of gravity of the well, when the cells in the culture medium drop accommodated in the well are manipulated by the pipette, the pipette The operation is easy because it does not easily interfere with the upper end of the wall portion.

本発明の細胞培養容器の好ましい実施形態では、前記ウェル底面は、前記周縁から前記最深部に近づく従い、前記ウェルの深さ方向に沿って前記窪み部の窪みが深くなるように形成された傾斜面を含む。   In a preferred embodiment of the cell culture container of the present invention, the well bottom surface is inclined so as to approach the deepest portion from the peripheral edge, and the depression of the depression portion is deepened along the depth direction of the well. Including face.

この実施形態によれば、収容された細胞が重力を駆動力として最深部に移動し易く、定位置で保持され易い。   According to this embodiment, the accommodated cells are easily moved to the deepest part using gravity as a driving force, and are easily held at a fixed position.

本発明の細胞培養容器の好ましい実施形態では、
前記細胞培養容器は、容器底部と、該容器底部の周縁から上方に向け立設された容器側壁部とを備え、
前記容器底部の中央部に、細胞及び培養液を収容するための内部空間を有する収容部が形成されており、
前記容器底部の、前記収容部と容器側壁部との間の部分に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されている。
In a preferred embodiment of the cell culture container of the present invention,
The cell culture container includes a container bottom and a container side wall erected upward from the periphery of the container bottom,
In the central part of the bottom of the container, an accommodating part having an internal space for accommodating cells and culture solution is formed,
At least one of the wells is formed in a portion of the container bottom between the container and the container side wall.

この実施形態によれば、中央部の収容部の内部空間での細胞培養と、周辺に配置された各ウェルの内部空間での細胞培養とを並行して進めることが可能になる。   According to this embodiment, it is possible to proceed in parallel with cell culture in the internal space of the central accommodating portion and cell culture in the internal space of each well arranged in the periphery.

前記実施形態の更に好ましい実施形態では、
前記細胞培養容器の上面視において、
前記収容部の外縁と接し、前記収容部を挟む、互いに平行な一対の仮想直線をそれぞれ第一直線及び第二直線とし、前記容器側壁部の、前記第一直線と前記第二直線とにより挟まれた一対の部分をそれぞれ第一部分及び第二部分とし、
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第一部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第一底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第二部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第二底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、
前記第一底部及び前記第二底部に形成された各ウェルは、前記最深部が、前記ウェル底面の重心よりも前記容器側壁部に近い位置となるように形成されている。
In a further preferred embodiment of said embodiment,
In a top view of the cell culture container,
A pair of parallel virtual lines that are in contact with the outer edge of the container and sandwich the container are defined as a first straight line and a second straight line, respectively, and are sandwiched between the first straight line and the second straight line of the container side wall. A pair of parts is a first part and a second part,
At least one of the wells is formed on the first bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the first portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Formed,
At least one of the wells on a second bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the second portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Is formed,
Each well formed in the first bottom portion and the second bottom portion is formed so that the deepest portion is closer to the container side wall than the center of gravity of the well bottom surface.

この更に好ましい実施形態によれば、2つの対向する側(例えば左右両側)からそれぞれ利用しやすい位置に少なくとも1つのウェルを配置することができ好ましい。   According to this further preferred embodiment, it is preferable that at least one well can be disposed at a position where it can be easily used from two opposing sides (for example, both left and right sides).

前記実施形態の更に好ましい実施形態では、
前記細胞培養容器の上面視において、
前記収容部の外縁と接し、前記収容部を挟む、互いに平行な一対の仮想直線をそれぞれ第一直線及び第二直線とし、前記容器側壁部の、前記第一直線と前記第二直線とにより挟まれた一対の部分をそれぞれ第一部分及び第二部分とし、
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第一部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第一底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第二部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第二底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、
前記第一底部に形成された各ウェルは、前記最深部が、前記ウェル底面の重心よりも前記容器側壁部に近い位置となるように形成されており、
前記第二底部に形成された各ウェルは、前記最深部が、前記ウェル底面の重心よりも前記収容部に近い位置となるように形成されている。
In a further preferred embodiment of said embodiment,
In a top view of the cell culture container,
A pair of parallel virtual lines that are in contact with the outer edge of the container and sandwich the container are defined as a first straight line and a second straight line, respectively, and are sandwiched between the first straight line and the second straight line of the container side wall. A pair of parts is a first part and a second part,
At least one of the wells is formed on the first bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the first portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Formed,
At least one of the wells on a second bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the second portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Is formed,
Each well formed in the first bottom is formed so that the deepest part is closer to the container side wall than the center of gravity of the well bottom,
Each well formed in the second bottom portion is formed such that the deepest portion is closer to the accommodating portion than the center of gravity of the well bottom surface.

この更に好ましい実施形態によれば、一方の側からピペットを操作する場合に、各ウェルが利用しやすい位置に配置されるため好ましい。   According to this further preferred embodiment, when operating the pipette from one side, it is preferable because each well is arranged at a position where it can be used easily.

前記実施形態の他の更に好ましい実施形態では、
前記収容部の内部空間の容量が、前記ウェルの内部空間の容量よりも大きい。
In another more preferred embodiment of the above embodiment,
The capacity of the internal space of the accommodating part is larger than the capacity of the internal space of the well.

この実施形態に係る細胞培養容器は、複数の細胞を前記収容部に収容して培養を行いながら、その中から一部の細胞を取り出して前記ウェルに移し、該一部の細胞については該ウェル中で別途培養を継続するという用い方が可能である。   In the cell culture container according to this embodiment, a plurality of cells are accommodated in the accommodating portion and cultured, and a part of the cells is taken out and transferred to the well. It can be used in such a manner that the culture is continued separately.

本発明の細胞培養容器の他の好ましい実施形態では、
前記ウェル底面及び前記ウェル周壁面の水接触角は60°以下である。
In another preferred embodiment of the cell culture container of the present invention,
The water contact angle between the well bottom surface and the well peripheral wall surface is 60 ° or less.

この実施形態では、前記ウェル底面及び前記ウェル周壁面の水溶液に対する濡れ性が高いため、前記ウェルの内部空間に水溶液である培養液を収容することが容易である。前記ウェルの内部空間を囲う前記ウェル周壁面が存在しない表面上(例えば、平坦な基板表面上)において水溶液である培養液のドロップを形成しようとする場合に前記表面の水接触角が60°以下であるとドロップは前記表面上で形状を保持できず崩れやすいが、本発明のように前記ウェル周壁面により内部空間が囲われたウェルを用いれば、そのような問題もない。   In this embodiment, since the wettability with respect to the aqueous solution of the well bottom surface and the peripheral wall surface of the well is high, it is easy to accommodate a culture solution that is an aqueous solution in the internal space of the well. When a drop of a culture solution that is an aqueous solution is to be formed on a surface (for example, on a flat substrate surface) where the peripheral wall surface of the well surrounding the internal space of the well does not exist, the water contact angle of the surface is 60 ° or less. In this case, the drop cannot maintain its shape on the surface and is liable to collapse. However, if a well whose inner space is surrounded by the well peripheral wall surface as in the present invention is used, such a problem does not occur.

本発明の細胞培養容器の他の好ましい実施形態では、
前記ウェルの内部空間の容量が5〜50μlである。
In another preferred embodiment of the cell culture container of the present invention,
The volume of the internal space of the well is 5 to 50 μl.

この容量のウェルは、1個の受精卵を培養液のドロップで培養するのに適しており好ましい。   This capacity of the well is suitable and preferable for culturing one fertilized egg by dropping the culture solution.

本発明の細胞培養容器が備えるウェルは、最深部に細胞を保持することができ、且つ、保持された細胞のピペットを用いた操作が容易である。   The well provided in the cell culture container of the present invention can hold cells in the deepest portion and can be easily operated using a pipette of the held cells.

本発明の細胞培養容器1の第1実施形態の平面図の模式図を示す。The schematic diagram of the top view of 1st Embodiment of the cell culture container 1 of this invention is shown. 図1Aに示す細胞培養容器1におけるI−I’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the I-I 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 1A is shown. 図1Aに示す細胞培養容器1におけるII−II’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the II-II 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 1A is shown. 図1Aに示す細胞培養容器1におけるIII−III’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the III-III 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 1A is shown. 図1Aに示す細胞培養容器1におけるIV−IV’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the IV-IV 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 1A is shown. 第1実施形態に係る細胞培養容器1のウェル底面101を、図1Bに示す仮想平面Bに投影して形成される領域Fの模式図である。It is a schematic diagram of the area | region F formed by projecting the well bottom face 101 of the cell culture container 1 which concerns on 1st Embodiment on the virtual plane B shown to FIG. 1B. 本発明の細胞培養容器1の第1実施形態を用いて細胞Cを培養し、細胞Cをピペット200の先端で操作する際の、ピペット200の状態を示す模式図である。It is a schematic diagram which shows the state of the pipette 200 at the time of culture | cultivating the cell C using 1st Embodiment of the cell culture container 1 of this invention, and operating the cell C with the front-end | tip of the pipette 200. FIG. 本発明の細胞培養容器1の第2実施形態の平面図の模式図を示す。The schematic diagram of the top view of 2nd Embodiment of the cell culture container 1 of this invention is shown. 図3Aに示す細胞培養容器1におけるI−I’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the I-I 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 3A is shown. 図3Aに示す細胞培養容器1におけるII−II’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the II-II 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 3A is shown. 図3Aに示す細胞培養容器1におけるIII−III’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the III-III 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 3A is shown. 図3Aに示す細胞培養容器1におけるIV−IV’断面の模式図を示す。The schematic diagram of the IV-IV 'cross section in the cell culture container 1 shown to FIG. 3A is shown. 第2実施形態に係る細胞培養容器1のウェル底面101を、図3Bに示す仮想平面Bに投影して形成される領域Fの模式図である。It is a schematic diagram of the area | region F formed by projecting the well bottom face 101 of the cell culture container 1 which concerns on 2nd Embodiment on the virtual plane B shown to FIG. 3B. 本発明の細胞培養容器1の第3実施形態のうちウェル100’の近傍の平面図の模式図を示す。The schematic diagram of the top view of the vicinity of well 100 'among 3rd Embodiment of the cell culture container 1 of this invention is shown. 図4Aに示すウェル100’の近傍におけるI−I’断面の模式図を示す。FIG. 4B is a schematic diagram of the I-I ′ cross section in the vicinity of the well 100 ′ shown in FIG. 4A. 図4Aに示すウェル100’の近傍におけるII−II’断面の模式図を示す。FIG. 4B is a schematic diagram of a II-II ′ cross section in the vicinity of the well 100 ′ shown in FIG. 4A. 第3実施形態に係る細胞培養容器1のウェル底面101を、図4Bに示す仮想平面Bに投影して形成される領域Fの模式図である。It is a schematic diagram of the area | region F formed by projecting the well bottom face 101 of the cell culture container 1 which concerns on 3rd Embodiment on the virtual plane B shown to FIG. 4B. 本発明の細胞培養容器1の第4実施形態のうちウェル100’’の近傍の平面図の模式図を示す。The schematic diagram of the top view of the vicinity of well 100 '' among 4th Embodiment of the cell culture container 1 of this invention is shown. 図5Aに示すウェル100’’の近傍におけるI−I’断面の模式図を示す。FIG. 5B is a schematic diagram of the I-I ′ cross section in the vicinity of the well 100 ″ shown in FIG. 5A. 図5Aに示すウェル100’’の近傍におけるII−II’断面の模式図を示す。FIG. 5B is a schematic diagram of a II-II ′ cross section in the vicinity of the well 100 ″ illustrated in FIG. 5A. 第4実施形態に係る細胞培養容器1のウェル底面101を、図5Bに示す仮想平面Bに投影して形成される領域Fの模式図である。It is a schematic diagram of the area | region F formed by projecting the well bottom face 101 of the cell culture container 1 which concerns on 4th Embodiment on the virtual plane B shown to FIG. 5B. 本発明の細胞培養容器1の第5実施形態のうちウェル100’’’の近傍の平面図の模式図を示す。The schematic diagram of the top view of the vicinity of well 100 "" among 5th Embodiment of the cell culture container 1 of this invention is shown. 図6Aに示すウェル100’’’の近傍におけるI−I’断面の模式図を示す。FIG. 6B is a schematic diagram of the I-I ′ cross section in the vicinity of the well 100 ″ ″ illustrated in FIG. 6A. 図6Aに示すウェル100’’’の近傍におけるII−II’断面の模式図を示す。FIG. 6B is a schematic diagram of a II-II ′ cross section in the vicinity of the well 100 ″ ″ shown in FIG. 6A. 第5実施形態に係る細胞培養容器1のウェル底面101を、図6Bに示す仮想平面Bに投影して形成される領域Fの模式図である。It is a schematic diagram of the area | region F formed by projecting the well bottom face 101 of the cell culture container 1 which concerns on 5th Embodiment on the virtual plane B shown to FIG. 6B. 最深部が偏心していない従来のウェルを用いて細胞Cを培養し、細胞Cをピペット200の先端で操作する際の、ピペット200の状態を示す模式図である。It is a schematic diagram showing the state of the pipette 200 when the cell C is cultured using a conventional well in which the deepest part is not eccentric, and the cell C is operated with the tip of the pipette 200.

<第1実施形態(図1A〜F、図2)>
本発明の細胞培養容器の第1実施形態を図1A〜F、図2を参照して説明する。
図1A〜Fに示す細胞培養容器1は、容器底部20と、容器底部20の周縁から上方に向け立設された容器側壁部30とを備え、細胞培養容器1の上面視において、容器底部20の中央部に、細胞及び培養液を収容するための内部空間を有する収容部40が形成されており、容器底部20の、収容部40と容器側壁部30との間の部分に、少なくとも1つのウェル100が形成されている。
<First Embodiment (FIGS. 1A to 1F, FIG. 2)>
1st Embodiment of the cell culture container of this invention is described with reference to FIG.
A cell culture container 1 shown in FIGS. 1A to 1F includes a container bottom part 20 and a container side wall part 30 erected upward from the periphery of the container bottom part 20, and the container bottom part 20 in the top view of the cell culture container 1. A container 40 having an internal space for storing cells and culture medium is formed at the center of the container, and at least one portion of the container bottom 20 between the container 40 and the container side wall 30 is formed. A well 100 is formed.

本発明の第一の特徴は、ウェル100の構造にあるが、先に培養容器1全体の構成を説明し、後にウェル100の構造の特徴を説明する。   The first feature of the present invention lies in the structure of the well 100. The structure of the entire culture vessel 1 will be described first, and the structure of the well 100 will be described later.

収容部40は、収容部底部41と、収容部底部41の周縁に立設された収容部周壁42とを少なくとも含み、上方に開口した有底の内部空間45(収容部内部空間と称することがある)を有する。収容部周壁42は、それが囲う内部空間45が細胞及び培養液を収容可能であればどのような構造を有していてもよいが、より好ましくは、図示するように、収容部底部41の周縁に立設された外縁に進むに従って高くなるように形成された収容部第一周壁43と、収容部第一周壁43の上端と接続し、更に外縁に進むに従って高くなるように形成された収容部第二周壁44とを含む。収容部周壁42の上端と容器底部20とは、収容部外壁46により接続されている。   The accommodating part 40 includes at least an accommodating part bottom part 41 and an accommodating part peripheral wall 42 erected on the periphery of the accommodating part bottom part 41, and has a bottomed internal space 45 (referred to as an accommodating part internal space) opened upward. Have). The housing peripheral wall 42 may have any structure as long as the inner space 45 that it encloses can accommodate cells and culture solution, but more preferably, as shown in the drawing, The housing part first peripheral wall 43 formed so as to rise as it goes to the outer edge standing on the periphery, and connected to the upper end of the housing part first peripheral wall 43, and further formed so as to become higher as it goes to the outer edge. And the accommodating portion second peripheral wall 44. The upper end of the accommodating portion peripheral wall 42 and the container bottom portion 20 are connected by an accommodating portion outer wall 46.

収容部40、容器底部20及び容器側壁部30を有する細胞培養容器を用いて細胞培養する場合、収容部40の内部空間45内に細胞と培養液とを含むドロップを収容し、更に、培養液の乾燥を防ぐために、ドロップを含んだ収容部40全体と収容部外の容器底部20とを覆うようにオイルを満たして培養を行う。収容部40内で複数の細胞(例えば受精卵)を一度にグループで培養する場合、発育の悪い細胞を同一のドロップ内に配置し続けることによって発育の良好な細胞の発育を阻害する可能性がある。このような場合に発育の悪い細胞を収容部40から取り出し、別の培養液ドロップ中に移して培養を継続することが求められる。このとき、仮にウェル100を有していない細胞培養容器を用いた場合、容器底部20の底面(容器側壁部30が設けられる側の面)21上に独立した培養液のドロップを形成し、該ドロップ中で発育の悪い細胞の培養が継続される。細胞培養容器1において表面を親水化する場合、底面21も親水化されるため培養液のドロップを形成することが難しい。この問題を解決すために、培養液のドロップを形成するためのウェル100を容器底部20の、収容部40と容器側壁部30との間の部分に少なくとも1つ設ける。すなわち内部空間45内に細胞及び培養液のドロップを収容し細胞培養を行うための収容部40と、下記の特徴を有するウェル100とを一体化して同一の細胞培養容器とすることにより、収容部40内での細胞培養と、ウェル100内での細胞培養とを並行して進めることが容易となる。   When cell culture is performed using a cell culture container having the container 40, the container bottom 20, and the container side wall 30, a drop containing cells and a culture solution is stored in the internal space 45 of the container 40, and further, a culture solution In order to prevent the drying, the culture is performed by filling the oil so as to cover the entire container 40 including the drop and the container bottom 20 outside the container. When culturing a plurality of cells (for example, fertilized eggs) in a group in the container 40 at a time, there is a possibility of inhibiting the growth of cells having good growth by continuing to place the cells having poor growth in the same drop. is there. In such a case, it is required to take out the cells having poor growth from the container 40, transfer them into another culture liquid drop, and continue the culture. At this time, if a cell culture container that does not have the well 100 is used, an independent culture liquid drop is formed on the bottom surface (surface on the side where the container side wall 30 is provided) 21 of the container bottom 20, Cultivation of cells with poor growth in the drop is continued. When the surface of the cell culture vessel 1 is made hydrophilic, it is difficult to form a drop of the culture solution because the bottom surface 21 is also made hydrophilic. In order to solve this problem, at least one well 100 for forming a drop of the culture solution is provided at a portion of the container bottom 20 between the container 40 and the container side wall 30. That is, the storage unit 40 is configured by integrating the storage unit 40 for storing cells and a drop of culture medium in the internal space 45 and performing cell culture, and the well 100 having the following characteristics to form the same cell culture container. It becomes easy to proceed the cell culture in 40 and the cell culture in the well 100 in parallel.

次に、ウェル100の特徴について説明する。なお、本発明の細胞培養容器は、少なくとも下記特徴を有するウェルを備えていればよく、収容部や他の構成と組み合わされた実施形態には限定されない。   Next, features of the well 100 will be described. In addition, the cell culture container of this invention should just be equipped with the well which has the following characteristic at least, and is not limited to embodiment combined with the accommodating part and another structure.

本発明において「ウェル」とは、細胞及び培養液を収容するための内部空間103が形成された、細胞及び培養液の収容用容器部を指す。内部空間103を形成する壁面が後述する特徴を有するものである限り、ウェル100はどのように形成されてもよい。図示するように、細胞培養容器1の容器底部20の上面21の一部をウェル底面101とし、該ウェル底面101の周縁を起点にウェル周壁106を設けて、ウェル周壁106の内部空間104を囲う面をウェル周壁面102としてウェル100を形成することができる。或いは、図示しないが、ウェル周壁106を別途設けず、容器底部20の表面の一部を窪ませ、内部空間104を画定するウェル底面101とウェル周壁面102とを有する凹穴を設けることによりウェル100を形成することもできる。更に、ウェル100は、細胞培養容器1の容器底部20と一体に形成されている必要はなく、独立の部材でウェル100を形成してからそれを容器底部20に固定してもよい。   In the present invention, the “well” refers to a cell and culture solution storage container portion in which an internal space 103 for storing cells and culture solution is formed. As long as the wall surface forming the internal space 103 has the characteristics described later, the well 100 may be formed in any manner. As shown in the figure, a part of the upper surface 21 of the container bottom 20 of the cell culture container 1 is used as a well bottom surface 101, and a well peripheral wall 106 is provided starting from the periphery of the well bottom surface 101, thereby enclosing the internal space 104 of the well peripheral wall 106. The well 100 can be formed using the surface as the well peripheral wall surface 102. Alternatively, although not shown, the well peripheral wall 106 is not separately provided, a part of the surface of the container bottom 20 is recessed, and a well having a well bottom surface 101 and a well peripheral wall surface 102 defining the internal space 104 is provided. 100 can also be formed. Furthermore, the well 100 does not have to be formed integrally with the container bottom 20 of the cell culture container 1, and the well 100 may be formed on an independent member and then fixed to the container bottom 20.

なお本明細書における収容部を「第二収容部」と称し、ウェルを「第一収容部」と称することもできる。この場合、本明細書における収容部底部、収容部周壁、収容部第一周壁、収容部第二周壁、収容部外壁、ウェル底面、ウェル周壁面、ウェル周壁を、それぞれ、第二収容部底部、第二収容部周壁、第二収容部第一周壁、第二収容部第二周壁、第二収容部外壁、第一収容部底面、第一収容部周壁面、第一収容部周壁と称することができる。   In addition, the accommodating part in this specification can also be called a "second accommodating part", and a well can also be called a "first accommodating part." In this case, the storage portion bottom, the storage portion peripheral wall, the storage portion first peripheral wall, the storage portion second peripheral wall, the storage portion outer wall, the well bottom surface, the well peripheral wall surface, and the well peripheral wall in this specification are respectively the second storage portion bottom portion. , Second housing portion peripheral wall, second housing portion first circumferential wall, second housing portion second circumferential wall, second housing portion outer wall, first housing portion bottom surface, first housing portion circumferential wall surface, first housing portion circumferential wall be able to.

ウェル100は、細胞及び培養液を収容するための内部空間103を有する。内部空間103を形成する壁面は、ウェル底面101と、ウェル底面101の周縁から起立し内部空間103を囲うウェル周壁面102とを含む。   The well 100 has an internal space 103 for accommodating cells and a culture solution. The wall surface forming the internal space 103 includes a well bottom surface 101 and a well peripheral wall surface 102 that stands up from the periphery of the well bottom surface 101 and surrounds the internal space 103.

ウェル底面101には窪み部104が形成されている。本発明において「窪み部」とは、窪んだ形状のウェル底面に囲まれた空間を指し、内部空間の一部を構成する。窪み部を形成するためには、ウェル底面の一部のみが部分的に窪んで窪み部を形成していてもよいし(例えば下記第5実施形態)、ウェル底面の全体が窪んで窪み部を形成していてもよい(例えば第1実施形態〜第4実施形態)。   A recess 104 is formed in the well bottom surface 101. In the present invention, the “recessed portion” refers to a space surrounded by a recessed well bottom surface and constitutes a part of the internal space. In order to form the depression, only a part of the well bottom may be partially depressed to form a depression (for example, the fifth embodiment described below), or the entire well bottom may be depressed to form a depression. You may form (for example, 1st Embodiment-4th Embodiment).

本発明では、ウェル底面のうち、ウェルの深さ方向に沿って窪み部の窪みが最も深い部分を「最深部」と呼ぶ。本発明において「ウェルの深さ方向」とは、本発明の細胞培養容器を水平面上に載置した状態でウェルの内部空間に培養液等の液体を収容したときに、該液体の深さ方向(すなわち鉛直方向)と一致する方向を指す。図1Bにおいてウェルの深さ方向に沿う軸を「A」として示す。本明細書では、ウェルの深さ方向(軸Aに沿う方向)を「深さ方向A」と称する。1つの細胞培養容器にウェルが複数存在する場合、各ウェルの深さ方向は、いずれも、細胞培養容器を水平面上に載置した状態での鉛直方向であるから、同一の方向である。「最深部」はウェル底面のうちの一部を指し、点状であってもよいし、線状であってもよいし、面状であってもよいし、線状と面状とが組み合わされた形状であってもよい。図1A〜E,図2に示すウェル100においては、最深部105は点状である。線状の最深部は、直線又は任意の曲線(折れ線を含む)の一区画の形状であることができる。面状の最深部は、任意の形状、例えば、円状(円形および楕円形を含む)、三角形、四角形、五角形、六角形、八角形等の多角形の形状であることができる。最深部は好ましくは点状の最深部、又は、円状の形状である面状の最深部である。   In the present invention, the portion of the well bottom surface where the dent of the dent portion is deepest along the depth direction of the well is referred to as the “deepest portion”. In the present invention, the “depth direction of the well” means the depth direction of the liquid when a liquid such as a culture solution is accommodated in the internal space of the well in a state where the cell culture container of the present invention is placed on a horizontal plane. (Ie, the vertical direction). In FIG. 1B, an axis along the depth direction of the well is indicated as “A”. In this specification, the depth direction of the well (direction along the axis A) is referred to as “depth direction A”. When there are a plurality of wells in one cell culture container, the depth direction of each well is the same direction because it is a vertical direction in a state where the cell culture container is placed on a horizontal plane. “Deepest part” refers to a part of the bottom surface of the well, which may be dot-like, linear, planar, or a combination of linear and planar. It may be a shaped shape. In the well 100 shown in FIGS. 1A to 1E and FIG. 2, the deepest portion 105 has a dot shape. The linear deepest portion can be a straight line or a section of an arbitrary curve (including a broken line). The deepest portion of the planar shape can have any shape, for example, a circular shape (including a circular shape and an elliptical shape), a polygonal shape such as a triangle, a quadrangle, a pentagon, a hexagon, and an octagon. The deepest portion is preferably a point-like deepest portion or a planar deepest portion having a circular shape.

ウェル100の内部空間103に細胞Cを含む培養液のドロップDを収容したとき、図2に示すように、最深部105に細胞Cを保持することが可能である。   When the culture medium drop D containing the cells C is accommodated in the internal space 103 of the well 100, the cells C can be held in the deepest portion 105 as shown in FIG.

本発明では、ウェル底面101を深さ方向Aに垂直な仮想平面Bに投影して形成される領域F(図1B及び図1F参照)において、最深部105を仮想平面Bに投影した部分115が、前記領域の重心Pから外れた位置となる(すなわち、ウェル底面101の最深部105がウェル底面101の重心から偏心された位置にある)ように、ウェル底面101が形成されていることを特徴とする。仮想平面Bは、図1B、3B、3C、4B、5B、6Bにおいて、断面を含む平面に対し垂直な平面として示す。 In the present invention, in a region F (see FIGS. 1B and 1F) formed by projecting the well bottom surface 101 onto a virtual plane B perpendicular to the depth direction A, a portion 115 obtained by projecting the deepest portion 105 onto the virtual plane B is The well bottom surface 101 is formed so as to be out of the center of gravity P 1 of the region (that is, the deepest portion 105 of the well bottom surface 101 is eccentric from the center of gravity of the well bottom surface 101). Features. The virtual plane B is shown as a plane perpendicular to the plane including the cross section in FIGS. 1B, 3B, 3C, 4B, 5B, and 6B.

ここでウェル底面を、ウェルの深さ方向に垂直な仮想平面に投影して形成される領域は、その形状が特に限定されず、任意の形状、例えば、円状(円形および楕円形を含む)、三角形、四角形、五角形、六角形、八角形等の多角形であることができる。該領域の重心は、該領域が円形である場合は、円形の中心と一致する。該領域が他の形状であっても重心は適宜求めることができる。そして、ウェル底面101を深さ方向Aに垂直な仮想平面Bに投影して形成される領域において、最深部105を仮想平面Bに投影した部分が、前記領域の「重心から外れた位置となる」とは、図1Fに示すように、前記領域Fにおいて、最深部105を仮想平面Bに投影した部分115の全体が領域Fの重心Pと重ならないことを指す。最深部105が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状である場合には、最深部105を仮想平面Bに投影した部分115が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状となるが、該部分115の全体がどこも領域Fの重心Pと重ならず、領域Fの重心Pから外れた位置にある。 Here, the region formed by projecting the bottom surface of the well onto a virtual plane perpendicular to the depth direction of the well is not particularly limited, and an arbitrary shape such as a circle (including a circle and an ellipse) is used. , Triangles, quadrangles, pentagons, hexagons, octagons, and other polygons. The center of gravity of the region coincides with the center of the circle when the region is circular. The center of gravity can be determined as appropriate even if the region has another shape. Then, in the region formed by projecting the well bottom surface 101 onto the virtual plane B perpendicular to the depth direction A, the portion where the deepest portion 105 is projected onto the virtual plane B is the “off-center position of the region”. “In the region F, as shown in FIG. 1F, the entire portion 115 obtained by projecting the deepest portion 105 onto the virtual plane B does not overlap the center of gravity P 1 of the region F. When the deepest part 105 is linear, planar, or a combination thereof, the portion 115 obtained by projecting the deepest part 105 onto the virtual plane B is linear, planar, or a combination thereof. The entire portion 115 does not overlap with the center of gravity P 1 of the region F anywhere, and is located away from the center of gravity P 1 of the region F.

ウェル底面101の最深部105がウェル底面101の重心から偏心された位置にあることによる効果を図2に基づき説明する。ウェル100の内部空間103に細胞Cを含む培養液のドロップDを収容したとき、細胞Cは重力により最深部105まで移動し保持される。細胞Cをピペット200の先端で操作するとき、ウェル周壁面102を有するウェル周壁106の、最深部105から離れた部分の上方からピペット200を挿入すれば、ピペット200がウェル周壁106の上端と干渉し難く、最深部105が偏心していないウェル70を用いた場合(図7に示す)と比較してピペット200の操作できる角度範囲が広い。   The effect obtained when the deepest portion 105 of the well bottom surface 101 is located eccentrically from the center of gravity of the well bottom surface 101 will be described with reference to FIG. When the culture medium drop D containing the cells C is accommodated in the internal space 103 of the well 100, the cells C move to the deepest portion 105 and are held by gravity. When the cell C is operated with the tip of the pipette 200, if the pipette 200 is inserted from above the portion of the well peripheral wall 106 having the well peripheral wall 102 away from the deepest portion 105, the pipette 200 interferes with the upper end of the well peripheral wall 106. It is difficult to do so, and the angle range in which the pipette 200 can be operated is wide as compared with the case where the well 70 whose deepest portion 105 is not eccentric is used (shown in FIG. 7).

より好ましい実施形態では、ウェル底面101を深さ方向Aに垂直な仮想平面Bに投影して形成される領域Fの重心をPとし、前記領域において前記最深部を仮想平面Bに投影した部分115の重心をP(前記部分115が点状である場合は、部分115と重心Pとは一致する)とし、PからPまでの直線距離をLとし、PからPを通り前記領域の周縁に至るまでの直線距離をLとしたとき、
0.20L≦L≦0.90L
を満足することが好ましい。
In a more preferred embodiment, the center of gravity of a region F formed by projecting the well bottom surface 101 onto a virtual plane B perpendicular to the depth direction A is P 1, and the deepest portion of the region is projected onto the virtual plane B The center of gravity of 115 is P 2 (if the portion 115 is point-like, the portion 115 and the center of gravity P 2 coincide), the linear distance from P 1 to P 2 is L 1, and P 1 to P 2 when the linear distance up to the periphery of the street the area was L 2 a,
0.20L 2 L 1 ≦ 0.90L 2
Is preferably satisfied.

また、LとLとの差(L−L)が、0.5mm以上であることが好ましく、1.0mm以上であることがより好ましい。LとLとの差がこの範囲であるとき、最深部105に保持された細胞は、ウェル周壁面102と十分に離れた位置にあるため、ウェル1の上方又は下方からの観察がウェル周壁面102によって妨げられ難く好ましい。 Further, the difference between L 1 and L 2 (L 2 -L 1) thereof is preferably 0.5mm or more, more preferably 1.0mm or more. When the difference between L 1 and L 2 is in this range, cells retained in the deepest portion 105, because it is in a position sufficiently distant from the well peripheral wall surface 102, observed from above or below the wells 1 well It is preferable that the peripheral wall 102 is not easily disturbed.

更に、最深部105が線状、面状又はこれらの組み合わせである場合には、最深部105を仮想平面Bに投影した部分115に含まれる全ての点について、該点を前記Pとして扱った場合に前記L及び前記Lが上記の特徴を有することが好ましい。 Further, the deepest portion 105 is linear, if a planar or a combination thereof, for all the points included in the partial 115 obtained by projecting the deepest 105 to the virtual plane B, dealing with the point as the P 2 In some cases, it is preferred that L 1 and L 2 have the above characteristics.

より好ましい実施形態では、ウェル周壁面102の開口側の辺上の点のなかから、ウェル底面101の最深部105の重心P(仮想平面Bに最深部105を投影した部分115の重心Pに対応する、ウェル底面1上の点を指す。最深部105が点状である場合は、Pと最深部105は一致する。)と結んで形成される直線の、ウェル100の深さ方向Aに垂直な仮想平面Bと成す角の角度(鋭角とする)が最も小さくなる点Pを選択したとき、ウェル周壁面102の開口側の辺上の前記選択された点Pとウェル底面101の最深部105の重心Pとを結ぶ直線Lと前記仮想平面Bとが成す角の角度θ(鋭角とする)は、45°以下が好ましく、30°以下が最も好ましい。θがこの範囲である場合、ピペット等の器具を用いて細胞を取り扱う際の器具の操作角度の範囲が十分に広いため好適である。 In a more preferred embodiment, the center of gravity P 3 of the deepest portion 105 of the well bottom surface 101 (the center of gravity P 2 of the portion 115 obtained by projecting the deepest portion 105 onto the virtual plane B) from the points on the opening side of the well peripheral wall surface 102. corresponding to refers to the point on the well bottom 1. If the deepest 105 is a point shape, the straight line P 3 and the deepest portion 105 is formed matching.) and connecting at the depth direction of the well 100 when the angle of the angle formed between a virtual plane perpendicular B to a (and acute) selects the smallest point P 4, wherein the selected point P 4 and the well bottom of the opening side of the side of the well peripheral wall surface 102 The angle θ 1 (assumed to be an acute angle) formed by the straight line L connecting the center of gravity P 3 of the deepest portion 105 of 101 and the virtual plane B is preferably 45 ° or less, and most preferably 30 ° or less. If theta 1 is in this range, the range of the operating angle of the instrument in handling the cells using an instrument such as a pipette is sufficiently wide for preferred.

図1A〜Fに示す実施形態では、ウェル底面101は、その周縁から最深部105に近づく従い、ウェルの深さ方向Aに沿って窪み部104の窪みが深くなるように形成された傾斜面107により形成される。この場合、ウェル100の内部空間103に細胞Cを含む培養液のドロップDを収容したとき、細胞Cは重力により最深部105まで移動し保持されるため好ましい。傾斜面107は、該傾斜面107の法線Nとウェルの深さ方向Aに垂直な仮想平面Bとが成す角の角度θ(鋭角とする)が通常は89〜45°、好ましくは88〜65°、より好ましくは79°〜87°、最も好ましくは81〜85°となるように形成される。角度θがこの範囲であるとき、ウェルの深さ方向Aに沿ってウェル底面101上の培養物を顕微鏡で透過観察する際の傾斜面107での反射、散乱が起こりにくくなり、鮮明な観察像を得ることができる。   In the embodiment shown in FIGS. 1A to F, the well bottom surface 101 is formed so that the dent of the dent 104 is deepened along the depth direction A of the well as it approaches the deepest part 105 from the periphery. It is formed by. In this case, when the culture medium drop D containing the cells C is accommodated in the internal space 103 of the well 100, the cells C are preferably moved and held by the gravity to the deepest portion 105. In the inclined surface 107, an angle θ (a sharp angle) formed by the normal line N of the inclined surface 107 and a virtual plane B perpendicular to the depth direction A of the well is usually 89 to 45 °, preferably 88 to It is formed to be 65 °, more preferably 79 ° to 87 °, and most preferably 81 to 85 °. When the angle θ is within this range, reflection and scattering on the inclined surface 107 are less likely to occur when the culture on the well bottom surface 101 is transmitted and observed with a microscope along the depth direction A of the well. Can be obtained.

図1A〜F,図2に示す実施形態では、ウェル底面101は、その周縁を含む平面が、ウェルの深さ方向Aに対して垂直な平面となるように形成されている。このため、ウェル底面101を構成する傾斜面107の傾斜角(及び角度θ)は、最深部105を中心とした周方向の位置により異なるが、より好ましくは、傾斜面107のどの部分においても角度θが前記範囲であることが好ましい。   In the embodiment shown in FIGS. 1A to 1F and FIG. 2, the well bottom surface 101 is formed such that the plane including the peripheral edge thereof is a plane perpendicular to the depth direction A of the well. For this reason, the inclination angle (and angle θ) of the inclined surface 107 constituting the well bottom surface 101 varies depending on the position in the circumferential direction around the deepest portion 105, but more preferably, the angle at any portion of the inclined surface 107 is It is preferable that θ is in the above range.

図示する実施形態ではいずれも、傾斜面107の勾配は、ウェル底面101の周縁の任意の点から最深部105に最短距離で進む場合に一定であり変化しないが、これには限定されず、勾配が変化する傾斜面であってもよい。ただし、より好ましくは、傾斜面107の勾配が、ウェル底面101の周縁の任意の点から最深部105に最短距離で進む経路の少なくとも一部の区間、好ましくは全部の区間において一定である。勾配が一定であることにより、細胞を最深部105に固定し易くなる。したがって、顕微鏡で観察した場合に鮮明な画像を得ることができる。   In any of the illustrated embodiments, the gradient of the inclined surface 107 is constant and does not change when traveling from the arbitrary point on the periphery of the well bottom surface 101 to the deepest portion 105 at the shortest distance, but is not limited to this. It may be an inclined surface on which changes. However, more preferably, the slope of the inclined surface 107 is constant in at least a part of the path that travels from the arbitrary point on the periphery of the well bottom surface 101 to the deepest portion 105 with the shortest distance, preferably in all the sections. Since the gradient is constant, the cells can be easily fixed to the deepest portion 105. Therefore, a clear image can be obtained when observed with a microscope.

傾斜面107の表面粗さは、大きい値であると、顕微鏡で透過観察を行った画像を輪郭抽出処理に付す際に、傾斜面上の凹凸に起因して明瞭な輪郭が得られない恐れがあるため、可能な限り小さい値であることが好ましい。具体的には、最大高さRy(粗さ曲線からその平均線の方向に基準長さだけを抜き取り、この抜き取り部分における山頂線と谷底線との間隔をいう)が1.0μm未満、特に0.5μm未満であることが好ましい。なお、傾斜面の表面粗さは、培養容器の鋳型を作製する際に磨き処理を施す等して、鋳型の加工精度を高めることにより小さくすることができる。表面粗さの計測は通常の断面形状計測装置を用いて行うことができる。計測条件としては、例えばキーエンス社製ダブルスキャン高精度レーザ測定器LT−9010M及び高精度形状測定システムKS−1100を用い、測定間隔5μmで計測することができる。   If the surface roughness of the inclined surface 107 is a large value, there is a risk that a clear contour cannot be obtained due to the unevenness on the inclined surface when an image subjected to transmission observation with a microscope is subjected to contour extraction processing. Therefore, it is preferable that the value be as small as possible. Specifically, the maximum height Ry (extracting only the reference length from the roughness curve in the direction of the average line, which means the interval between the peak line and the valley line in the extracted part) is less than 1.0 μm, particularly 0. It is preferably less than 5 μm. In addition, the surface roughness of the inclined surface can be reduced by increasing the processing accuracy of the mold, for example, by performing a polishing process when producing the mold for the culture vessel. The surface roughness can be measured using a normal cross-sectional shape measuring device. As measurement conditions, for example, measurement can be performed at a measurement interval of 5 μm using a double-scan high-precision laser measuring instrument LT-9010M manufactured by Keyence Corporation and a high-precision shape measurement system KS-1100.

ウェル底面101の幅寸法を、次のように定義する。ウェル底面101をウェルの深さ方向Aに垂直な仮想平面Bに投影して形成される領域において、該領域の周縁線上の、重心を介して対向する一対の点の間の直線距離の最大値(最大幅)と最小値(最小幅)との平均値を、ウェル底面101の幅寸法とする。そしてウェル底面101の幅寸法は好ましくは0.5〜10mm、より好ましくは1.5〜5mmであり、典型的には3.8mmである。   The width dimension of the well bottom surface 101 is defined as follows. In a region formed by projecting the well bottom surface 101 onto a virtual plane B perpendicular to the depth direction A of the well, the maximum linear distance between a pair of points facing each other via the center of gravity on the peripheral line of the region The average value of (maximum width) and minimum value (minimum width) is defined as the width dimension of the well bottom surface 101. The width of the well bottom surface 101 is preferably 0.5 to 10 mm, more preferably 1.5 to 5 mm, and typically 3.8 mm.

ウェル周壁面102のウェルの深さ方向Aに沿った幅寸法を、次のように定義する。すなわち、ウェル周壁面102のウェルの深さ方向Aに沿った幅のうち最大値と最小値との平均値を、ウェル周壁面102のウェルの深さ方向Aに沿った幅寸法とする。そして、ウェル周壁面102のウェルの深さ方向Aに沿った幅寸法は好ましくは0.1〜5mm、より好ましくは0.2〜3mmであり、典型的には1mmである。   The width dimension of the well peripheral wall surface 102 along the depth direction A of the well is defined as follows. That is, the average value of the maximum value and the minimum value among the widths along the well depth direction A of the well peripheral wall surface 102 is set as the width dimension along the well depth direction A of the well peripheral wall surface 102. The width of the well peripheral wall surface 102 along the depth direction A of the well is preferably 0.1 to 5 mm, more preferably 0.2 to 3 mm, and typically 1 mm.

ウェル100の内部空間103の容量は特に限定されないが、好ましくは5〜50μl、より好ましくは10〜30μlである。   The volume of the internal space 103 of the well 100 is not particularly limited, but is preferably 5 to 50 μl, more preferably 10 to 30 μl.

ウェル底面101、ウェル周壁面102及び内部空間103が上記の範囲であるとき1個の受精卵を培養液のドロップで培養するのに適した寸法であり好ましい。   When the well bottom surface 101, the well peripheral wall surface 102, and the internal space 103 are within the above ranges, the dimensions are suitable for culturing one fertilized egg with a drop of the culture solution.

図示するように、培養容器1の容器底部20の上面21をウェル底面101とし、該ウェル底面101の周縁を起点にウェル周壁106を設けて、ウェル周壁106の内部空間104を囲う面をウェル周壁面102としてウェル100を形成する場合、ウェル周壁106の径方向の幅は好ましくは0.1〜2mmであり、例えば0.5mmである。   As shown in the drawing, the upper surface 21 of the container bottom 20 of the culture vessel 1 is a well bottom surface 101, a well peripheral wall 106 is provided starting from the periphery of the well bottom surface 101, and the surface surrounding the internal space 104 of the well peripheral wall 106 is a well periphery. When the well 100 is formed as the wall surface 102, the radial width of the well peripheral wall 106 is preferably 0.1 to 2 mm, for example, 0.5 mm.

ウェル底面101とウェル周壁面102は、水接触角が60°以下の面であることが好ましい。本発明において水接触角とは温度25℃において測定された水接触角を指す。水接触角がこの範囲内であると、ウェル底面101とウェル周壁面102の水溶液に対する濡れ性が高いため、ウェル100の内部空間103に培養液を収容することが容易であるため好ましい。   The well bottom surface 101 and the well peripheral wall surface 102 are preferably surfaces having a water contact angle of 60 ° or less. In the present invention, the water contact angle refers to a water contact angle measured at a temperature of 25 ° C. It is preferable that the water contact angle is within this range because the wettability of the well bottom surface 101 and the well peripheral wall surface 102 with respect to the aqueous solution is high, and it is easy to accommodate the culture solution in the internal space 103 of the well 100.

図1A〜Fに示す細胞培養容器1では各ウェル100の配置に以下の特徴を有する。
細胞培養容器1の上面視において、収容部40の外縁47と接し、収容部40を挟む、互いに平行な一対の仮想直線をそれぞれ第一直線X及び第二直線Yとする。本発明において「上面視」とは、細胞培養容器1を、収容部40の深さ方向に沿って、収容部40の開口の側から見たときの見え方を指す。そして収容部40の深さ方向とは、本発明の細胞培養容器1を水平面上に載置した状態で収容部40の内部空間45に培養液等の液体を収容したときに、該液体の深さ方向(すなわち鉛直方向)と一致する方向を指す。細胞培養容器1を、収容部40の深さ方向に沿って、収容部40及び各ウェル100の開口の側から見たときの模式図が図1Aに示す平面図である。収容部40の深さ方向は、細胞培養容器1を水平面上に載置した状態での鉛直方向であるから、各ウェル100の深さ方向と同一の方向である。また、収容部40の外縁47とは、前記平面図において収容部40の外側の輪郭を成す部分であり、図1A〜Fに示す例では収容部外壁46の外側面に対応する。そして、容器側壁部30のうち、第一直線Xと第二直線Yとにより挟まれた一対の部分をそれぞれ第一部分31及び第二部分32とする。更に、容器底部20の、収容部40の外縁47と、容器側壁部30の第一部分31と、第一直線Xと、第二直線Yとにより囲まれた部分を第一底部25とする。更に、容器底部20の、収容部40の外縁47と、容器側壁部30の第二部分32と、第一直線Xと、第二直線Yとにより囲まれた部分を第二底部26とする。
The cell culture container 1 shown in FIGS. 1A to 1F has the following characteristics in the arrangement of each well 100.
When the cell culture container 1 is viewed from above, a pair of virtual lines that are in contact with the outer edge 47 of the container 40 and sandwich the container 40 are defined as a first straight line X and a second straight line Y, respectively. In the present invention, “top view” refers to how the cell culture container 1 is viewed from the opening side of the housing portion 40 along the depth direction of the housing portion 40. The depth direction of the container 40 is the depth of the liquid when a liquid such as a culture solution is stored in the internal space 45 of the container 40 with the cell culture container 1 of the present invention placed on a horizontal plane. A direction that coincides with the vertical direction (ie, the vertical direction). FIG. 1A is a plan view of the cell culture container 1 as seen from the opening side of the accommodating portion 40 and each well 100 along the depth direction of the accommodating portion 40. FIG. Since the depth direction of the container 40 is a vertical direction in a state where the cell culture container 1 is placed on a horizontal plane, it is the same direction as the depth direction of each well 100. Moreover, the outer edge 47 of the accommodating part 40 is a part which comprises the outline of the outer side of the accommodating part 40 in the said top view, and respond | corresponds to the outer surface of the accommodating part outer wall 46 in the example shown to FIG. A pair of portions sandwiched between the first straight line X and the second straight line Y in the container side wall portion 30 are referred to as a first portion 31 and a second portion 32, respectively. Further, a portion surrounded by the outer edge 47 of the container 40, the first portion 31 of the container side wall portion 30, the first straight line X, and the second straight line Y of the container bottom portion 20 is defined as a first bottom portion 25. Furthermore, a portion surrounded by the outer edge 47 of the container 40, the second portion 32 of the container side wall portion 30, the first straight line X, and the second straight line Y of the container bottom portion 20 is defined as a second bottom portion 26.

このとき、第一底部25に、少なくとも1つ(図1Aに示す例では2つ)のウェル100が形成されている。ここで第一底部25にウェル100が形成されているとは、前記平面図上において、各ウェル100のウェル底面101の少なくとも一部分が第一底部25に位置することを指し、より好ましくは、図1Aに示すようにウェル100のウェル底面101の全体が第一底部25に位置する。第一底部25に形成されるウェル100の数は特に限定されないが通常は1〜5である。   At this time, at least one (two in the example shown in FIG. 1A) well 100 is formed in the first bottom portion 25. Here, that the well 100 is formed on the first bottom 25 means that at least a part of the well bottom surface 101 of each well 100 is located on the first bottom 25 in the plan view, and more preferably, As shown in FIG. 1A, the entire well bottom surface 101 of the well 100 is located at the first bottom portion 25. The number of wells 100 formed in the first bottom portion 25 is not particularly limited, but is usually 1 to 5.

なおかつ、第二底部26にも、少なくとも1つ(図1Aに示す例では2つ)のウェル100が形成されている。ここで第二底部26にウェル100が形成されているというためには、前記平面図上において、各ウェル100のウェル底面101の少なくとも一部分が第二底部26に位置することを指し、より好ましくは、図1Aに示すようにウェル100のウェル底面101の全体が第二底部26に位置する。第二底部26に形成されるウェル100の数は特に限定されないが通常は1〜5である。   In addition, at least one (two in the example shown in FIG. 1A) well 100 is also formed in the second bottom portion 26. Here, in order to say that the well 100 is formed on the second bottom portion 26, it means that at least a part of the well bottom surface 101 of each well 100 is located on the second bottom portion 26 in the plan view, more preferably As shown in FIG. 1A, the entire well bottom surface 101 of the well 100 is located at the second bottom portion 26. The number of wells 100 formed in the second bottom portion 26 is not particularly limited, but is usually 1 to 5.

そして、細胞培養容器1を収容部40の深さ方向に沿って収容部40及び各ウェル100が開口する側から見たときの、各ウェル100のウェル底面101の形状の重心を、底面101の重心Pとする。第一底部25及び第二底部26に形成された各ウェル100は、細胞培養容器1を収容部40の深さ方向に沿って見たとき、各ウェル100の最深部105(最深部105が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状である場合は、最深部105の全部分を指す)が、ウェル底面101の重心Pよりも容器側壁部30に近い位置に形成されている。換言すれば、ウェルの深さ方向Aに垂直な仮想平面Bに投影して形成される領域Fにおいて、その最深部105を仮想平面Bに投影した部分115(最深部105が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状である場合は、最深部105を仮想平面Bに投影した部分115の全部分を指す)が、該領域Fの重心Pよりも、容器側壁部30に近い位置に形成されている。このようにウェル底面101が形成されていることにより、ピペットを右手で操作する者にとっては、第一底部25に形成されたウェル100が収容部40よりも左側に位置するように細胞培養容器1を設置した場合に第一底部25に形成されたウェル100を用いることが容易である。そして、ピペットを左手で操作する者にとっては、細胞培養容器1を移動させることなく収容部40よりも右側に位置する第二底部26に形成されたウェル100を用いることが可能である。 The center of gravity of the shape of the well bottom surface 101 of each well 100 when the cell culture container 1 is viewed from the side where the container 40 and each well 100 open along the depth direction of the storage portion 40 is the center of gravity P 5. Each well 100 formed in the first bottom portion 25 and the second bottom portion 26 has a deepest portion 105 (the deepest portion 105 is a line when the cell culture container 1 is viewed along the depth direction of the accommodating portion 40. In the case of a shape, a planar shape, or a combination thereof, the entire portion of the deepest portion 105 is formed at a position closer to the container side wall portion 30 than the center of gravity P 5 of the well bottom surface 101. In other words, in a region F formed by projecting onto a virtual plane B perpendicular to the depth direction A of the well, a portion 115 (the deepest portion 105 is linear or planar) with the deepest portion 105 projected onto the virtual plane B. Or, when the shape is a combination of them, the entire portion of the portion 115 obtained by projecting the deepest portion 105 onto the virtual plane B) is formed at a position closer to the container side wall portion 30 than the center of gravity P 1 of the region F. Has been. Since the well bottom surface 101 is formed in this manner, the cell culture container 1 is arranged so that the well 100 formed on the first bottom portion 25 is located on the left side of the housing portion 40 for those who operate the pipette with the right hand. It is easy to use the well 100 formed in the first bottom portion 25 when the is installed. For those who operate the pipette with the left hand, it is possible to use the well 100 formed in the second bottom portion 26 located on the right side of the accommodating portion 40 without moving the cell culture container 1.

本発明の細胞培養容器1の材質は、特に制限されない。具体的には、金属、ガラス、及びシリコン等の無機材料、プラスチック(例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ABS樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂)で代表される有機材料を挙げることができる。本発明の細胞培養容器1は、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、プラスチック材料からなる培養容器を製造する場合には、慣用の成形法、例えば射出成形により製造することができる。   The material of the cell culture container 1 of the present invention is not particularly limited. Specifically, inorganic materials such as metal, glass and silicon, plastics (for example, polystyrene resin, polyester resin, polyethylene resin, polypropylene resin, ABS resin, nylon, acrylic resin, fluorine resin, polycarbonate resin, polyurethane resin, methyl resin) Organic materials represented by pentene resin, phenol resin, melamine resin, epoxy resin, vinyl chloride resin). The cell culture container 1 of the present invention can be produced by a method known to those skilled in the art. For example, when a culture container made of a plastic material is manufactured, it can be manufactured by a conventional molding method such as injection molding.

光学顕微鏡での観察のためには、細胞培養容器1は光透過性の材料により形成されていることが好ましい。   For observation with an optical microscope, the cell culture vessel 1 is preferably formed of a light transmissive material.

本発明の細胞培養容器1は、受精卵の発育を促進するような表面処理又は表面コートがなされていてもよい。特に、受精卵の発育を促進するために、他の器官の細胞(例えば、子宮内膜細胞や卵管上皮細胞)と共培養をする場合、これらの細胞をあらかじめ培養容器に接着させる必要がある。このような場合に、細胞培養容器1の表面に細胞接着性の材料をコートすると有利である。   The cell culture container 1 of the present invention may be surface-treated or surface-coated so as to promote the development of a fertilized egg. In particular, in order to promote the development of a fertilized egg, when co-culturing with cells of other organs (for example, endometrial cells or fallopian tube epithelial cells), it is necessary to adhere these cells to a culture vessel in advance. . In such a case, it is advantageous to coat the surface of the cell culture vessel 1 with a cell adhesive material.

本発明の細胞培養容器1を用いて培養し観察する細胞としては、特に限定されないが、例えば、受精卵、卵細胞、ES細胞(胚性幹細胞)及びiPS細胞(人工多能性幹細胞)が挙げられる。卵細胞は、未受精の卵細胞をさし、未成熟卵母細胞及び成熟卵母細胞が含まれる。受精卵は、受精後、卵割により2細胞期、4細胞期、8細胞期と細胞数が増えていき、桑実胚を経て、胚盤胞へと発生する。受精卵には、2細胞胚、4細胞胚及び8細胞胚などの初期胚、桑実胚、胚盤胞(初期胚盤胞、拡張胚盤胞及び脱出胚盤胞を含む)が含まれる。胚盤胞は、胎盤を形成する潜在能力がある外部細胞と胚を形成する潜在能力がある内部細胞塊からなる胚を意味する。ES細胞は胚盤胞の内部細胞塊から得られる未分化な多能性又は全能性細胞をさす。iPS細胞は、体細胞(主に線維芽細胞)へ数種類の遺伝子(転写因子)を導入することにより、ES細胞に似た分化万能性を持たせた細胞をさす。すなわち、本発明において培養の対象となる細胞には、受精卵や胚盤胞のように複数の細胞の集合体も包含される。本発明の細胞培養容器1は、哺乳動物及び鳥類の細胞、特に哺乳動物の細胞の培養に好適である。哺乳動物は、温血脊椎動物をさし、例えば、ヒト及びサルなどの霊長類、マウス、ラット及びウサギなどの齧歯類、イヌ及びネコなどの愛玩動物、ならびにウシ、ウマ及びブタなどの家畜が挙げられる。本発明の細胞培養容器1は、ウシの受精卵の培養に特に好適である。   The cells cultured and observed using the cell culture vessel 1 of the present invention are not particularly limited, and examples include fertilized eggs, egg cells, ES cells (embryonic stem cells), and iPS cells (artificial pluripotent stem cells). . An egg cell refers to an unfertilized egg cell, and includes an immature oocyte and a mature oocyte. After fertilization, the fertilized egg increases in number of cells from the 2 cell stage, the 4 cell stage, and the 8 cell stage by cleavage, and develops into a blastocyst through a morula. Fertilized eggs include early embryos such as 2-cell embryos, 4-cell embryos and 8-cell embryos, morulas, blastocysts (including early blastocysts, expanded blastocysts and escaped blastocysts). A blastocyst means an embryo composed of external cells with the potential to form the placenta and internal cell masses with the potential to form embryos. ES cells refer to undifferentiated pluripotent or totipotent cells obtained from the inner cell mass of a blastocyst. An iPS cell refers to a cell having a pluripotency similar to that of an ES cell by introducing several types of genes (transcription factors) into somatic cells (mainly fibroblasts). That is, in the present invention, the cells to be cultured include a collection of a plurality of cells such as fertilized eggs and blastocysts. The cell culture vessel 1 of the present invention is suitable for culturing mammalian and avian cells, particularly mammalian cells. Mammals refer to warm-blooded vertebrates, for example, primates such as humans and monkeys, rodents such as mice, rats and rabbits, pets such as dogs and cats, and domestic animals such as cattle, horses and pigs. Is mentioned. The cell culture vessel 1 of the present invention is particularly suitable for culturing bovine fertilized eggs.

以下、図面に示す他の実施形態を説明するが、本発明の範囲はこれらの実施形態には限定されない。また、本明細書の図面では各構成の寸法及び形状に関わらず同じ機能を有する構成は同じ符号を付しており、上記第1実施形態との特段の相違点を除き説明を省略する。   Hereinafter, other embodiments shown in the drawings will be described, but the scope of the present invention is not limited to these embodiments. In the drawings of the present specification, configurations having the same functions are denoted by the same reference numerals regardless of the dimensions and shapes of the respective configurations, and the description thereof is omitted except for particular differences from the first embodiment.

<第2実施形態(図3A〜F)>
図3A〜Fに示す第2実施形態に係る細胞培養容器1では、第一底部25に形成された少なくとも1つのウェル100(個数は第1実施形態で説明した通り)はそれぞれ、細胞培養容器1の上面視において、各ウェル100の最深部105(最深部105が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状である場合は、最深部105の全部分を指す)が、ウェル底面101の重心Pよりも容器側壁部30に近い位置に形成されている。換言すれば、第一底部25に形成された各ウェルのウェル底面101を、ウェルの深さ方向Aに垂直な仮想平面Bに投影して形成される領域Fにおいて、該ウェルの最深部105を仮想平面Bに投影した部分115(最深部105が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状である場合は、最深部105を仮想平面Bに投影した部分115の全部分を指す)が、該領域Fの重心Pよりも、容器側壁部30に近い位置に形成されている。尚且つ、第二底部26に形成された少なくとも1つのウェル100(個数は第1実施形態で説明した通り)はそれぞれ、細胞培養容器1の上面視において、各ウェル100の最深部105(最深部105が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状である場合は、最深部105の全部分を指す)が、ウェル底面101の重心Pよりも収容部40に近い位置に形成されている。換言すれば、第二底部26に形成された各ウェルのウェル底面101を、ウェル100の深さ方向Aに垂直な仮想平面Bに投影して形成される領域Fにおいて、該ウェルの最深部105を仮想平面Bに投影した部分115(最深部105が線状、面状又はそれらを組み合わせた形状である場合は、最深部105を仮想平面Bに投影した部分115の全部分を指す)が、該領域Fの重心Pよりも、前記収容部40に近い位置に形成されている。
<Second Embodiment (FIGS. 3A to F)>
In the cell culture container 1 according to the second embodiment shown in FIGS. 3A to F, at least one well 100 (the number is the same as that described in the first embodiment) formed in the first bottom portion 25 is respectively the cell culture container 1. In the top view, the deepest portion 105 of each well 100 (in the case where the deepest portion 105 has a linear shape, a planar shape, or a combination thereof) indicates the center of gravity P of the well bottom surface 101. It is formed at a position closer to the container side wall 30 than 5 . In other words, in the region F formed by projecting the well bottom surface 101 of each well formed in the first bottom portion 25 onto the virtual plane B perpendicular to the depth direction A of the well, the deepest portion 105 of the well is defined. The portion 115 projected onto the virtual plane B (when the deepest portion 105 is linear, planar, or a combination thereof, indicates the entire portion of the portion 115 obtained by projecting the deepest portion 105 onto the virtual plane B), It is formed at a position closer to the container side wall 30 than the center of gravity P 1 of the region F. Further, at least one well 100 (the number is the same as described in the first embodiment) formed in the second bottom portion 26 is the deepest portion 105 (the deepest portion) of each well 100 when the cell culture container 1 is viewed from above. When the shape 105 is linear, planar, or a combination thereof, the entire portion of the deepest portion 105 is formed at a position closer to the accommodating portion 40 than the center of gravity P 5 of the well bottom surface 101. In other words, in the region F formed by projecting the well bottom surface 101 of each well formed in the second bottom portion 26 onto the virtual plane B perpendicular to the depth direction A of the well 100, the deepest portion 105 of the well is formed. Is projected onto the virtual plane B (if the deepest portion 105 is linear, planar, or a combination thereof, the entire portion of the portion 115 obtained by projecting the deepest portion 105 onto the virtual plane B) It is formed at a position closer to the accommodating portion 40 than the center of gravity P 1 of the region F.

この実施形態によれば、第二底部26の側からピペットを操作する者にとって、全てのウェルが利用しやすい位置に配置されていることになり好適である。   According to this embodiment, it is preferable that all wells are disposed at positions that are easy to use for those who operate the pipette from the second bottom portion 26 side.

<第3実施形態(図4A〜D)>
図4A〜Dには、第3実施形態に係る細胞培養容器1において、1つのウェル100’のみを拡大して説明する。細胞培養容器1のウェル以外の構成については他の実施形態と同一である。
<Third Embodiment (FIGS. 4A to 4D)>
4A to 4D, only one well 100 ′ is enlarged and described in the cell culture container 1 according to the third embodiment. The configuration other than the well of the cell culture container 1 is the same as that of the other embodiments.

ウェル100’では、ウェル底面101’が、その周縁から最深部105に近づく従い、ウェルの深さ方向Aに沿って窪み部104の窪みが深くなるように形成された傾斜面107’により形成される。この実施形態では、ウェル底面101’を構成する傾斜面107’の傾斜角(及び、傾斜面107’の法線Nと仮想平面Bとが成す角の角度θ(鋭角とする))は、最深部105を中心とした周方向のどの位置においても等しくなるように形成されている。この結果として、ウェル底面101’及び傾斜面107’は、その周縁を含む平面が、ウェルの深さ方向Aに垂直な平面ではなく、ウェルの深さ方向Aに垂直な平面に対して傾斜した平面となる。   In the well 100 ′, the well bottom surface 101 ′ is formed by an inclined surface 107 ′ formed so that the dent of the dent portion 104 becomes deep along the depth direction A of the well as it approaches the deepest portion 105 from the periphery. The In this embodiment, the inclination angle of the inclined surface 107 ′ constituting the well bottom surface 101 ′ (and the angle θ (the acute angle) formed by the normal line N of the inclined surface 107 ′ and the virtual plane B) is the deepest. It is formed so as to be equal at any position in the circumferential direction around the portion 105. As a result, the well bottom surface 101 ′ and the inclined surface 107 ′ are inclined with respect to a plane perpendicular to the well depth direction A instead of a plane perpendicular to the well depth direction A. It becomes a plane.

この第3実施形態によればウェル底面101’を構成する傾斜面107’の傾斜角を全周にわたって均一にできるため、次のような利点がある。傾斜面107’の傾斜角は、細胞の位置を固定するには大きいほうが有利であり、一方で、傾斜角が大きいと、ウェルの深さ方向Aに沿って顕微鏡で透過観察する際に傾斜面107’により反射や散乱が起きやすいため、観察のためには前記傾斜角は小さいほうが有利である。これらの相反する二つの要請を満たすために傾斜面107’の傾斜角には最適値が存在するが、第3実施形態によればウェル底面101’の全周に亘って傾斜面107’の傾斜角を前記最適値に揃えることが可能であるため有利である。また、第3実施形態によれば、ウェル100’内をウェルの深さ方向Aに沿って顕微鏡で透過観察する際のウェル底面101’による反射、散乱の程度が均一化でき、ムラのない観察像を得ることができ有利である。   According to the third embodiment, since the inclination angle of the inclined surface 107 ′ constituting the well bottom surface 101 ′ can be made uniform over the entire circumference, there are the following advantages. The inclination angle of the inclined surface 107 ′ is advantageously larger for fixing the position of the cell. On the other hand, if the inclination angle is large, the inclined surface is observed during transmission observation with a microscope along the depth direction A of the well. Since reflection and scattering are likely to occur due to 107 ', it is advantageous that the tilt angle is small for observation. In order to satisfy these two contradictory requirements, there is an optimum value for the inclination angle of the inclined surface 107 ′. According to the third embodiment, the inclination of the inclined surface 107 ′ is extended over the entire circumference of the well bottom surface 101 ′. Advantageously, the corners can be aligned to the optimum value. Further, according to the third embodiment, the degree of reflection and scattering by the well bottom surface 101 ′ when the inside of the well 100 ′ is observed through the microscope along the depth direction A of the well can be made uniform, and observation without unevenness can be achieved. Advantageously, an image can be obtained.

<第4実施形態(図5A〜D)>
図5A〜Dには、第4実施形態に係る細胞培養容器1において、1つのウェル100’’のみを拡大して説明する。細胞培養容器1のウェル以外の構成については他の実施形態と同一である。
<Fourth Embodiment (FIGS. 5A to 5D)>
5A to 5D, only one well 100 ″ is enlarged and described in the cell culture container 1 according to the fourth embodiment. The configuration other than the well of the cell culture container 1 is the same as that of the other embodiments.

ウェル100’’の最深部105’’は、ウェルの深さ方向Aに垂直な仮想平面Bと平行に広がる円形の面状の部分である。   The deepest portion 105 ″ of the well 100 ″ is a circular planar portion extending in parallel with a virtual plane B perpendicular to the depth direction A of the well.

また、ウェル底面101’’は、その周縁から最深部105’’に近づく従い、ウェルの深さ方向Aに沿って窪み部104’’の窪みが深くなるように形成された傾斜面107’’と、傾斜面107’’の最深部105’’の近傍の端からウェルの深さ方向Aに沿って、窪み部104’’の窪みが更に深くなるように延びる側壁面108と、側壁面108のうち前記窪みが最も深い部分に接続された面状の最深部105’’とを備える。   Further, the well bottom surface 101 '' is inclined 107 '' formed so that the dent of the dent 104 '' becomes deep along the depth direction A of the well as it approaches the deepest part 105 '' from the periphery. A side wall surface 108 extending from the end of the inclined surface 107 '' in the vicinity of the deepest portion 105 '' along the depth direction A of the well so that the depression of the depression 104 '' becomes deeper, and the side wall surface 108 And the deepest portion 105 ″ having a planar shape connected to the deepest portion.

この実施形態では、窪み部104’’は、最深部105’’を底とし周囲が側壁面108により囲われた第一窪み部109と、第一窪み部109に隣接し傾斜面107’’に周囲が囲われた第二窪み部110とから構成される。   In this embodiment, the recess 104 ″ includes a first recess 109 whose bottom is the deepest portion 105 ″ and a periphery surrounded by the side wall surface 108, and an inclined surface 107 ″ adjacent to the first recess 109. It is comprised from the 2nd hollow part 110 with which the circumference | surroundings were enclosed.

第一窪み部109は細胞を収容し定位置に保持可能な径を有している。内部空間103に収容された細胞は、重力を駆動力として第一窪み部109に移動し保持される。   The first depression 109 has a diameter that can accommodate cells and hold them in place. The cells accommodated in the internal space 103 are moved and held in the first depression 109 using gravity as a driving force.

図示しない他の実施形態としては、傾斜面107’’の最深部105’’の近傍の端と、面状の最深部105’’の周縁とが直接接続されている実施形態が挙げられる。   Another embodiment (not shown) includes an embodiment in which the end of the inclined surface 107 ″ in the vicinity of the deepest portion 105 ″ and the peripheral edge of the planar deepest portion 105 ″ are directly connected.

<第5実施形態(図6A〜D)>
図6A〜Dには、第5実施形態に係る細胞培養容器1における1つのウェル100’’’のみを拡大して説明する。細胞培養容器1のウェル以外の構成については他の実施形態と同一である。
<Fifth Embodiment (FIGS. 6A to 6D)>
6A to 6D, only one well 100 ′ ″ in the cell culture container 1 according to the fifth embodiment will be described in an enlarged manner. The configuration other than the well of the cell culture container 1 is the same as that of the other embodiments.

ウェル底面101’’’の一部のみが部分的に窪んで窪み部104’’’を形成している。   Only a part of the well bottom surface 101 "" is partially recessed to form a recess 104 "".

ウェル底面101’’’は、周縁から最深部105’’’に向かって延びる平坦面112と、平坦面112の最深部105’’’の近傍の端からウェルの深さ方向Aに沿って、窪み部104’’’の窪みが深くなるように延びる側壁面111と、側壁面111のうち前記窪みが最も深い部分に接続された面状の最深部105’’’とを備える。深部105’’’は、ウェルの深さ方向Aに垂直な仮想平面Bと平行に広がる円形の面状の部分である。   The well bottom surface 101 ′ ″ includes a flat surface 112 extending from the peripheral edge toward the deepest portion 105 ′ ″, and an end in the vicinity of the deepest portion 105 ′ ″ of the flat surface 112 along the depth direction A of the well. The side wall surface 111 extends so that the dent of the dent part 104 ′ ″ is deep, and the deepest part 105 ′ ″ having a planar shape connected to the deepest part of the side wall surface 111. The deep portion 105 ″ ″ is a circular planar portion that extends in parallel with a virtual plane B perpendicular to the depth direction A of the well.

この実施形態では、窪み部104’’’は、最深部105’’’を底とし周囲が側壁面111により囲われている。窪み部104’’’は細胞を収容し定位置に保持可能な径を有している。培養しようとする細胞を窪み部104’’’に配置することにより、細胞を定位置で培養することが可能である。   In this embodiment, the recess 104 ″ ″ is surrounded by the side wall surface 111 with the deepest portion 105 ″ ″ at the bottom. The indented portion 104 ″ ″ has a diameter that accommodates cells and can be held in place. By placing the cells to be cultured in the depression 104 ″ ″, the cells can be cultured at a fixed position.

1・・細胞培養容器
100・・ウェル
101・・ウェル底面
102・・ウェル周壁面
103・・ウェルの内部空間
105・・最深部
104・・窪み部
107・・傾斜面
115・・領域Fにおいて、最深部105を仮想平面Bに投影した部分
20・・容器底部
25・・第一底部
26・・第二底部
30・・容器側壁部
31・・容器側壁部の第一部分
32・・容器側壁部の第二部分
40・・収容部
45・・収容部の内部空間
47・・収容部40の外縁
A・・ウェルの深さ方向
B・・仮想平面
C・・細胞
D・・培養液のドロップ
F・・ウェル底面を仮想平面Bに投影して形成される領域
・・領域Fの重心
X・・第一直線
Y・・第二直線
1. In the cell culture vessel 100, the well 101, the well bottom surface 102, the well peripheral wall surface 103, the well inner space 105, the deepest portion 104, the depression 107, the inclined surface 115, the region F, A portion 20 obtained by projecting the deepest portion 105 onto a virtual plane B .... a container bottom 25 .... a first bottom 26 .... a second bottom 30 .... a container side wall 31 .... a first part 32 of a container side wall .... Second part 40 ··· storage portion 45 · · internal space 47 of storage portion · · outer edge A of storage portion 40 · · depth direction B of well · · virtual plane C · · cell D · · drop F of culture solution · A region P 1 formed by projecting the bottom of the well onto the imaginary plane B 1.

Claims (7)

細胞培養容器であって、
細胞及び培養液を収容するための内部空間を有する少なくとも1つのウェルを備え、
前記ウェルの前記内部空間を形成する壁面は、ウェル底面と、該ウェル底面の周縁から起立し前記内部空間を囲うウェル周壁面とを含み、
前記ウェル底面には窪み部が形成されており、
前記ウェル底面のうち、前記ウェルの深さ方向に沿って前記窪み部の窪みが最も深い部分を最深部としたとき、前記ウェル底面を、前記深さ方向に垂直な仮想平面に投影して形成される領域において、前記最深部を前記仮想平面に投影した部分が、該領域の重心から外れた位置となるように、前記ウェル底面が形成されており、
前記最深部は前記ウェル底面において1つのみ存在し、
前記細胞培養容器は、容器底部と、該容器底部の周縁から上方に向け立設された容器側壁部とを備え、
前記容器底部の中央部に、細胞及び培養液を収容するための内部空間を有する収容部が形成されており、
前記容器底部の、前記収容部と容器側壁部との間の部分に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、
前記収容部の内部空間の容量が、前記ウェルの内部空間の容量よりも大きい
ことを特徴とする、細胞培養容器。
A cell culture container,
Comprising at least one well having an internal space for containing cells and culture medium;
The wall surface forming the internal space of the well includes a well bottom surface and a well peripheral wall surface that stands up from a peripheral edge of the well bottom surface and surrounds the internal space,
A depression is formed on the bottom of the well,
Formed by projecting the well bottom surface onto a virtual plane perpendicular to the depth direction when the deepest portion of the well portion along the depth direction of the well is the deepest portion of the well portion. In the region to be formed, the well bottom surface is formed such that a portion where the deepest portion is projected onto the virtual plane is located away from the center of gravity of the region,
There is only one deepest portion at the bottom of the well ,
The cell culture container includes a container bottom and a container side wall erected upward from the periphery of the container bottom,
In the central part of the bottom of the container, an accommodating part having an internal space for accommodating cells and culture solution is formed,
At least one of the wells is formed in a portion of the container bottom between the container and the container side wall,
The cell culture container , wherein the capacity of the internal space of the accommodating portion is larger than the capacity of the internal space of the well .
細胞培養容器であって、A cell culture container,
細胞及び培養液を収容するための内部空間を有する少なくとも1つのウェルを備え、Comprising at least one well having an internal space for containing cells and culture medium;
前記ウェルの前記内部空間を形成する壁面は、ウェル底面と、該ウェル底面の周縁から起立し前記内部空間を囲うウェル周壁面とを含み、The wall surface forming the internal space of the well includes a well bottom surface and a well peripheral wall surface that stands up from a peripheral edge of the well bottom surface and surrounds the internal space,
前記ウェル底面には窪み部が形成されており、A depression is formed on the bottom of the well,
前記ウェル底面のうち、前記ウェルの深さ方向に沿って前記窪み部の窪みが最も深い部分を最深部としたとき、前記ウェル底面を、前記深さ方向に垂直な仮想平面に投影して形成される領域において、前記最深部を前記仮想平面に投影した部分が、該領域の重心から外れた位置となるように、前記ウェル底面が形成されており、Formed by projecting the well bottom surface onto a virtual plane perpendicular to the depth direction when the deepest portion of the well portion along the depth direction of the well is the deepest portion of the well portion. In the region to be formed, the well bottom surface is formed such that a portion where the deepest portion is projected onto the virtual plane is located away from the center of gravity of the region,
前記最深部は前記ウェル底面において1つのみ存在し、There is only one deepest portion at the bottom of the well,
前記細胞培養容器は、容器底部と、該容器底部の周縁から上方に向け立設された容器側壁部とを備え、The cell culture container includes a container bottom and a container side wall erected upward from the periphery of the container bottom,
前記容器底部の中央部に、細胞及び培養液を収容するための内部空間を有する収容部が形成されており、In the central part of the bottom of the container, an accommodating part having an internal space for accommodating cells and culture solution is formed,
前記容器底部の、前記収容部と容器側壁部との間の部分に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、At least one of the wells is formed in a portion of the container bottom between the container and the container side wall,
前記細胞培養容器の上面視において、In a top view of the cell culture container,
前記収容部の外縁と接し、前記収容部を挟む、互いに平行な一対の仮想直線をそれぞれ第一直線及び第二直線とし、前記容器側壁部の、前記第一直線と前記第二直線とにより挟まれた一対の部分をそれぞれ第一部分及び第二部分とし、A pair of parallel virtual lines that are in contact with the outer edge of the container and sandwich the container are defined as a first straight line and a second straight line, respectively, and are sandwiched between the first straight line and the second straight line of the container side wall. A pair of parts is a first part and a second part,
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第一部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第一底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、At least one of the wells is formed on the first bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the first portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Formed,
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第二部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第二底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、At least one of the wells on a second bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the second portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Is formed,
前記第一底部及び前記第二底部に形成された各ウェルは、前記最深部が、前記ウェル底面の重心よりも前記容器側壁部に近い位置となるように形成されているEach well formed in the first bottom portion and the second bottom portion is formed such that the deepest portion is closer to the container side wall portion than the center of gravity of the well bottom surface.
ことを特徴とする、細胞培養容器。A cell culture container characterized by the above.
前記ウェル底面は、前記周縁から前記最深部に近づく従い、前記ウェルの深さ方向に沿って前記窪み部の窪みが深くなるように形成された傾斜面を含む、請求項1又は2の細胞培養容器。 3. The cell culture according to claim 1, wherein the well bottom surface includes an inclined surface formed such that a dent of the dent portion becomes deeper along a depth direction of the well according to approaching the deepest portion from the peripheral edge. container. 前記細胞培養容器の上面視において、
前記収容部の外縁と接し、前記収容部を挟む、互いに平行な一対の仮想直線をそれぞれ第一直線及び第二直線とし、前記容器側壁部の、前記第一直線と前記第二直線とにより挟まれた一対の部分をそれぞれ第一部分及び第二部分とし、
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第一部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第一底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、
前記容器底部の、前記収容部の外縁と、前記容器側壁部の前記第二部分と、前記第一直線と、前記第二直線とにより囲まれた部分である第二底部に、少なくとも1つの前記ウェルが形成されており、
前記第一底部に形成された各ウェルは、前記最深部が、前記ウェル底面の重心よりも前記容器側壁部に近い位置となるように形成されており、
前記第二底部に形成された各ウェルは、前記最深部が、前記ウェル底面の重心よりも前記収容部に近い位置となるように形成されている、請求項の細胞培養容器。
In a top view of the cell culture container,
A pair of parallel virtual lines that are in contact with the outer edge of the container and sandwich the container are defined as a first straight line and a second straight line, respectively, and are sandwiched between the first straight line and the second straight line of the container side wall. A pair of parts is a first part and a second part,
At least one of the wells is formed on the first bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the first portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Formed,
At least one of the wells on a second bottom portion of the container bottom portion surrounded by the outer edge of the housing portion, the second portion of the container side wall portion, the first straight line, and the second straight line. Is formed,
Each well formed in the first bottom is formed so that the deepest part is closer to the container side wall than the center of gravity of the well bottom,
Wherein each well is formed in the second bottom, the deepest part, the center of gravity of the well bottom is formed so as to be located closer to the receiving portion, the cell culture vessel of claim 1.
前記収容部の内部空間の容量が、前記ウェルの内部空間の容量よりも大きい、請求項の細胞培養容器。 The cell culture container according to claim 2 , wherein the capacity of the internal space of the accommodating part is larger than the capacity of the internal space of the well. 前記ウェル底面及び前記ウェル周壁面の水接触角は60°以下である、請求項1〜のいずれか1項の細胞培養容器。 The well bottom and the water contact angle of the well wall surface is 60 ° or less, the cell culture vessel of any of claims 1-5. 前記ウェルの内部空間の容量が5〜50μlである、請求項1〜のいずれか1項の細胞培養容器。 Capacity of the internal space of the well is 5~50Myueru, any one of the cell culture vessel according to claim 1-6.
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