JP6371288B2 - 生物防除組成物 - Google Patents
生物防除組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6371288B2 JP6371288B2 JP2015532530A JP2015532530A JP6371288B2 JP 6371288 B2 JP6371288 B2 JP 6371288B2 JP 2015532530 A JP2015532530 A JP 2015532530A JP 2015532530 A JP2015532530 A JP 2015532530A JP 6371288 B2 JP6371288 B2 JP 6371288B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nmi
- laterosporus
- lepidoptera
- moss
- laterosporus strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 63
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 title 1
- 241000193417 Brevibacillus laterosporus Species 0.000 claims description 88
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims description 65
- 241000255925 Diptera Species 0.000 claims description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 42
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 33
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 claims description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 21
- 241000255901 Tortricidae Species 0.000 claims description 19
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 claims description 15
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 claims description 12
- 241000023343 Culex pervigilans Species 0.000 claims description 11
- 241001635274 Cydia pomonella Species 0.000 claims description 11
- 241000500437 Plutella xylostella Species 0.000 claims description 11
- 241001408792 Opifex fuscus Species 0.000 claims description 10
- 241000500441 Plutellidae Species 0.000 claims description 10
- 241000512226 Bartramia pomiformis Species 0.000 claims description 7
- 241000256834 Vespula vulgaris Species 0.000 claims description 7
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 claims description 6
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000244199 Panagrellus redivivus Species 0.000 claims description 6
- 241000255990 Helicoverpa Species 0.000 claims description 5
- 241000918677 Epiphyas Species 0.000 claims 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 67
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 35
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 241000894007 species Species 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 241000254173 Coleoptera Species 0.000 description 18
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 13
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 11
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 11
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 11
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 10
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 10
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 10
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 9
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 8
- -1 auxiliaries Substances 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 8
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 8
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 8
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 7
- 240000003553 Leptospermum scoparium Species 0.000 description 7
- 235000016887 Leptospermum scoparium Nutrition 0.000 description 7
- 241000256259 Noctuidae Species 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 6
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 6
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 5
- 241001350387 Cnephasia Species 0.000 description 5
- 241000918644 Epiphyas postvittana Species 0.000 description 5
- 241000918655 Planotortrix notophaea Species 0.000 description 5
- 241000710551 Pseudocoremia Species 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 4
- 241000256113 Culicidae Species 0.000 description 4
- 241001634830 Geometridae Species 0.000 description 4
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 4
- 241000254062 Scarabaeidae Species 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 4
- 241000625764 Anticarsia gemmatalis Species 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 3
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 3
- 241000254171 Curculionidae Species 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 241000255967 Helicoverpa zea Species 0.000 description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 241000256856 Vespidae Species 0.000 description 3
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 3
- 235000021405 artificial diet Nutrition 0.000 description 3
- 239000012681 biocontrol agent Substances 0.000 description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 241000256118 Aedes aegypti Species 0.000 description 2
- 244000153158 Ammi visnaga Species 0.000 description 2
- 235000010585 Ammi visnaga Nutrition 0.000 description 2
- AILDTIZEPVHXBF-UHFFFAOYSA-N Argentine Natural products C1C(C2)C3=CC=CC(=O)N3CC1CN2C(=O)N1CC(C=2N(C(=O)C=CC=2)C2)CC2C1 AILDTIZEPVHXBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000193388 Bacillus thuringiensis Species 0.000 description 2
- 235000017647 Brassica oleracea var italica Nutrition 0.000 description 2
- 241000555281 Brevibacillus Species 0.000 description 2
- 241000588699 Erwinia sp. Species 0.000 description 2
- 241001147381 Helicoverpa armigera Species 0.000 description 2
- 241000258916 Leptinotarsa decemlineata Species 0.000 description 2
- 241000220225 Malus Species 0.000 description 2
- 241000257159 Musca domestica Species 0.000 description 2
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 2
- 235000008577 Pinus radiata Nutrition 0.000 description 2
- 241000218621 Pinus radiata Species 0.000 description 2
- 241000500439 Plutella Species 0.000 description 2
- 241000209504 Poaceae Species 0.000 description 2
- 244000308495 Potentilla anserina Species 0.000 description 2
- 235000016594 Potentilla anserina Nutrition 0.000 description 2
- 241001646398 Pseudomonas chlororaphis Species 0.000 description 2
- SEQDDYPDSLOBDC-UHFFFAOYSA-N Temazepam Chemical compound N=1C(O)C(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 SEQDDYPDSLOBDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 229940097012 bacillus thuringiensis Drugs 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 2
- 239000003906 humectant Substances 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 239000004563 wettable powder Substances 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000254175 Anthonomus grandis Species 0.000 description 1
- 241001541354 Antiporus Species 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 235000011331 Brassica Nutrition 0.000 description 1
- 241000219198 Brassica Species 0.000 description 1
- 235000004221 Brassica oleracea var gemmifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000012905 Brassica oleracea var viridis Nutrition 0.000 description 1
- 244000308368 Brassica oleracea var. gemmifera Species 0.000 description 1
- 244000304217 Brassica oleracea var. gongylodes Species 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 101100008044 Caenorhabditis elegans cut-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241000252229 Carassius auratus Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009182 Chikungunya Diseases 0.000 description 1
- 208000004293 Chikungunya Fever Diseases 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000500845 Costelytra zealandica Species 0.000 description 1
- 241000256057 Culex quinquefasciatus Species 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 241000320597 Diplachne fusca Species 0.000 description 1
- 241000258937 Hemiptera Species 0.000 description 1
- 241000748095 Hymenopappus filifolius Species 0.000 description 1
- 241001177117 Lasioderma serricorne Species 0.000 description 1
- 241001136025 Listronotus bonariensis Species 0.000 description 1
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 1
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 1
- 241000257226 Muscidae Species 0.000 description 1
- BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N Orthosilicate Chemical compound [O-][Si]([O-])([O-])[O-] BPQQTUXANYXVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000907661 Pieris rapae Species 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- 241000255893 Pyralidae Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000256106 Simulium vittatum Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 241000256248 Spodoptera Species 0.000 description 1
- 241000985245 Spodoptera litura Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000254109 Tenebrio molitor Species 0.000 description 1
- 241000254107 Tenebrionidae Species 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 244000077923 Vaccinium vitis idaea Species 0.000 description 1
- 235000017606 Vaccinium vitis idaea Nutrition 0.000 description 1
- 101000872823 Xenopus laevis Probable histone deacetylase 1-A Proteins 0.000 description 1
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 238000003053 completely randomized design Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000010410 dusting Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000000967 entomopathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 238000003958 fumigation Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000005645 nematicide Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000013500 performance material Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000013138 pruning Methods 0.000 description 1
- 239000008262 pumice Substances 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 238000007560 sedimentation technique Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 1
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
Description
本発明は、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）の新規株及びこれを含有する組成物に関する。また、当該株及び組成物を使用したコナガ及び蚊を含む害虫の生物学的防除の方法も提供される。
害虫は、現代の農業において、顕著な経済的支出を強いるものである。現行の農業システムは、広大な領域に渡り１つの又は幾つかの作物又は植物種を生育することを要する。そのような生態学的にアンバランスな系は、害虫による被害を受けやすい。
幾つかの害虫は、ヒトを含む動物の健康に対しても有害である。例えば、蚊は様々な疾病を運搬することが知られている。従って、それらは、疾病の蔓延における運搬体として作用する。
伝統的に、害虫の防除は、化学的な殺昆虫剤や殺虫剤を使用して行われてきた。しかしながら、消費者は、化学的残留物やそれらの動物及び植物の健康並びに環境に対する影響について注目するようになっている。更に、多くの害虫が、殺虫剤や殺昆虫剤に対する耐性を獲得しつつある。
生物学的防除は、化学物質に対する依存を減少させる、害虫防除の代替的手段を提供する。そのような「天然の」方法は、公衆に受け入れられやすく、化学的防除方法よりも有効で持続する場合がある。
細菌、酵母及び真菌を含む幅広い範囲の生物学的防除剤が、害虫防除への使用を検討されている。殺昆虫剤として使用される細菌として広く研究されている種は、バチルス（Bacillus）である。
バチルス属は、動物や植物の健康に対して有害なものや、昆虫の防除に有用なもの等、様々な性質を有する広範な細菌種を含んでいる。
特に、バチルス・ツリンギエンシス（Bacillus thuringiensis）（Bt）は、Thuricide（登録商標）やDipel(登録商標)等の製品として市販されている、周知の生物学的防除剤である。
近年、Btに対する耐性を持った害虫が出現している。例えばTabashnik et al (1990); Baxter et al (2011);及びTabashnik et al (1998)を参照されたい。
従って、昆虫を含む害虫の防除に使用される新規バチルス種の需要は尚も存在する。
出願人は、生物防除剤として有効な多くの新規ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）を同定した。
本発明の一つの目的は、生物防除剤として有用な新規B. ラテロスポルス（B. laterosporus）株を提供することである。他の目的は、本発明の新規B. ラテロスポルス（B. laterosporus）の１つ以上を含有する組成物を提供すること；及び／又は少なくとも公衆に対して有用な選択肢を提供することである。
本発明の一つの側面において、１つ以上の鱗翅目種及び１つ以上の双翅目種に対する殺虫活性を有する、単離されたブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）株が提供される。
一つの態様において、前記１つ以上の鱗翅目種が、コナガ(Plutella xylostella)である。
一つの態様において、前記１つ以上の鱗翅目種が、キャベツルーパーモス(Trichoplusia ni)である。
一つの態様において、前記鱗翅目種が、ハマキガ科（Tortricidae）及びコナガ科(Plutellidae)からなる群から選択される。
更なる態様において、前記双翅目種が蚊種である。
更なる態様において、前記蚊種が、クレックス・プレビギランス（Culex pervigilans）及びオピフェックス・フスクス（Opifex fuscus）からなる群から選択される。
更なる態様において、前記B. ラテロスポルス（B. laterosporus）株は、１つ以上のコナガ(Plutella xylostella)及びクレックス・プレビギランス（Culex pervigilans）及びオピフェックス・フスクス（Opifex fuscus）から選択される１つ以上の蚊種に対する殺虫活性を有する。
一つの態様において、前記B. ラテロスポルス（B. laterosporus）株は、生物学的に純粋な培養物の形態である。
前記単離されたB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株又は生物学的に純粋な培養物は、NMI No. V12/001946、NMI No. V12/001945及びNMI No. V12/001944から選択される株であってもよい。
一つの側面において、本発明は、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）株NMI No. V12/001946の生物学的に純粋な培養物を提供する。
更なる側面において、本発明は、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）株NMI No. V12/001945の生物学的に純粋な培養物を提供する。
更なる側面において、本発明は、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）株NMI No. V12/001944の生物学的に純粋な培養物を提供する。
他の側面において、本発明は、本発明の１つ以上のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株及び農業的に許容される担体を含有する組成物を提供する。
一つの側面において、本発明は、NMI No. V12/001946, NMI No. V12/001945及びNMI No. V12/001944から選択されるB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株、並びに農業的に許容される担体を含有する組成物を提供する。
一つの態様において、前記組成物は、本発明の２つのB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株を含有してもよい。他の側面において、前記組成物は、本発明の３つのB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株を含有してもよい。
一つの側面において、前記組成物は、NMI No. V12/001946, NMI No. V12/001945及びNMI No. V12/001944から選択される１つ以上のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株、並びに農業的に許容される担体から本質的に構成される。
一つの態様において、前記組成物は、本発明の２つのB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株、並びに農業的に許容される担体から本質的に構成される。他の態様において、前記組成物は、本発明の２つのB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株から本質的に構成される。
一つの態様における組成物は、殺虫組成物である。
他の側面において、本発明は、１つ以上の害虫を防除する方法を提供し、当該方法は、１つ以上の本発明の組成物を、１つ以上の害虫に接触させる工程を含む。
他の側面において、本発明は、１つ以上の害虫を防除する方法を提供し、当該方法は、１つ以上の本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株を、１つ以上の害虫に接触させる工程を含む。
好ましくは、前記１つ以上の害虫は、昆虫の害虫であり、より好ましくは、当該１つ以上の害虫は、鱗翅目及び双翅目から選択される。
本発明の方法における、本発明の株又は組成物の施用は、２種類以上の害虫を防除する場合もある。
従って、更なる態様において、前記１つ以上の害虫は、鱗翅目、双翅目又はそれらの両方から選択される、昆虫の害虫である。
一つの態様において、前記１つ以上の昆虫の害虫は、コナガ及び蚊から選択される昆虫の害虫である。
更なる態様において、前記１つ以上の昆虫の害虫は、コナガ、蚊、又はそれらの両方から選択される昆虫の害虫である。
一つの態様において、前記鱗翅目は、トルトリシダエ（Tortricidae）、プルテリダエ（Plutellidae）及びノクツイダエ（Noctuidae）から選択される。特定の態様において、前記鱗翅目は、トルトリシダエ（Tortricidae）及びプルテリダエ（Plutellidae）から選択される。
他の態様において、前記１つ以上の昆虫の害虫は、蛾である。一つの態様における蛾は、コナガ(Plutella xylostella)、キャベツルーパーモス(Trichoplusia ni)、コドリンガ(Cydia pomonella)、コモンフォレストルーパーモス(Pseudocoremia suavis)、コットンボールワームモス(Helicoverpa armmigera)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、ブラックレグドリーフローラーモス(Planotortrix notophaea)、及びブラックライアリーフローラーモス(Cnephasia jactatana)からなる群から選択される。
他の態様において、前記害虫は、線形動物である。特定の態様において、前記線形動物は、マイクロワームである。好ましくは、前記マイクロワームは、パナグレルス・レディビブス（Panagrellus redivivus）である。
他の態様において、前記昆虫の害虫はカリバチである。特定の態様において、前記カリバチは、ベスプラ・ブルガリス（Vespula vulgaris）である。
他の態様において、前記昆虫の害虫は、マヌカビートル（ピロンタ ｓｐ．（Pyronta sp.））である。
定義
本明細書中、「殺虫剤」という用語は、虫の死滅又は増殖の抑制に作用する薬剤を指す。
本明細書中、「殺虫剤」という用語は、虫の死滅又は増殖の抑制に作用する薬剤を指す。
本明細書中、「接触」という用語は、害虫の防除に硬化を発揮するように、害虫に対して本発明の組成物又は株を提供することを指す。最も通常の接触は、本発明の組成物又は株を含有する材料を害虫に摂食させることを含み得るが、これに限定されない。従って、「接触」は、摂食を含む。
本明細書中、「防除」、「防除すること」、「生物防除」又は「生物学的防除」は、害虫、特に昆虫の害虫の数を、本発明の株又は組成物を使用することによって減少させることを指す。一般的に想定されることは、数の減少、又は害虫の根絶、又はそれらの繁殖速度を低下させることである。
本明細書中、「含む」とは、「少なくとも一部を構成する」ことを意味する。本明細書中で、用語「含む」を含む各文言を解釈するとき、当該用語に隣接するもの以外の特徴も存在し得る。これに関連する「含有する」、「包含する」等の用語も同様に解釈されるべきである。
本明細書中、用語「本質的に構成される」とは、言及されるものの他に、当該ものの基本的な特徴を物質的に変化させない他のものの存在を許容することを指す。
用語「農業的に許容される担体」は、水及び油、又は助剤、分散剤、接着剤、湿潤剤（wettant）、界面活性剤、保湿剤、粘着付与剤等の、殺虫組成物を含む防除組成物の調製に使用されることが当初から知られている、当該技術分野で公知の全ての液体及び固体の担体を包含する。
本明細書中、用語「有効量」は、害虫、特に昆虫の害虫を防除又は根絶するのに有効な量を意味する。
本明細書中、「生物学的に純粋な培養物」又は「生物学的に純粋な単離物」は、９０％以上、好ましくは95%以上、好ましくは９９％以上、より好ましくは９９％以上のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株を含有する、本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株の培養物を指す。
本明細書中、「害虫」は、ヒトに対して都合の悪い生物を意味する。一つの態様において、当該用語は、ヒトを含む動物、又は植物に対して被害を及ぼす生物を意味する。被害とは、動物又は植物の健康、成長、収量、繁殖又は生存率に関するものであってもよく、外観上の被害であってもよい。好ましくは、被害とは、商業的重要性に関するものである。好ましい態様において、「害虫」とは、植物に対して被害を及ぼす生物を意味する。好ましくは、植物とは、栽培植物である。
一つの側面において、本発明は、昆虫、特に鱗翅目及び双翅目を含む害虫を含む害虫に対して活性を有するブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）株に関する。
ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）は、幾つかの昆虫種に対して病原性が知られている、嫌気性の胞子を形成する昆虫病原性細菌である。バチルス・ツリンギエンシス（thuringiensis）と同様に、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）は、胞子嚢が溶解した後に胞子の一端に形成される典型的なカヌー状パラスポラルボディ（ＣＳＰＢ）が形成されることを特徴とする。
ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）は、寄生性の線形動物(Bone and Singer, 1991; Huang et al., 2005; Singer, 1996)、軟体動物、鞘翅目(Boets et al., 2004; Schnepf et al., 2003; Singer, 1996; Singer et al., 1997)、双翅目(Favret and Yousten, 1985; Rivers et al., 1991)、及び鱗翅目のアンチカルシア・ゲムマタリス（Anticarsia gemmatalis）(De Oliveira et al., 2004)の卵や幼虫に対する病原性を有するものとして記録されている。様々なB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株において、様々な毒性因子が記録されている(Favret and Yousten, 1985; Rivers et al., 1991; Zahner et al., 1999)。
B. ラテロスポルス（B. laterosporus）の傷害活性とその胞子及び結晶との協調は、ネッタイシマカのアエデス・アエギプティ（Aedes aegypti）を含む双翅目の幼虫に対するバイオアッセイにおいて、Orlova et al. (1998)により最初に実証された。この蚊は、黄熱病や、デング熱及びチクングンヤ熱等の他の疾患の媒体と見なされている。ブヨ(Simulium vittatum);蚊(Culex quinquefasciatus and Aedes aegypti) (Favret and Yousten, 1985; Rivers et al., 1991);及びウマアブ(Musca domestica (Ruiu et al. 2006))の幼虫に対する活性も報告されている（EP2,079,314）。
鞘翅目に対するB. ラテロスポルス（B. laterosporus）の活性は、最初に、予備的なバイオアッセイにおいて報告された。当該鞘翅目は、タバコシバンムシのラシオデルマ・セリコルネ（Lasioderma serricorne）及びコロラドハムシのレプチノタルサ・デケムリネアタ(Leptinotarsa decemlineata)を含む(Rivers et al., 1991)。様々なB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株の、コーンルートワームのジアブラティカ（Diabratica）類に対する活性が報告されている(Aronson et al., 1991; Schnepf et al., 2002; Boets et al., 2011)。コーンルートワームは、トウモロコシ作物の主要な農業的害虫である。
De Oliveira et al. (2004)は、穀物の被害に関連する害虫であるメキシカンコットンボールウィービルのアントノムス・グランディス（Anthonomus grandis）に対する高い毒性を報告した。ベルベットビーンキャタピラーのアンチカルシア・ゲムマタリス（Anticarsia gemmatalis）に対する鱗翅目活性も、同一の研究において報告された。
しかしながら、現在までに、双翅目及び鱗翅目の両方に対する株の活性を議論する報告は存在しない。Rivers et al. (1991)は、芋虫、蚊及び鞘翅目(コロラドハムシ)に対して２８種類の株をスクリーニングしたが、芋虫に対する活性は見られず、他の２つの群に対する活性が見られた。Favret及びYousten (1985)も、蚊に対する活性を確認したが、鱗翅目に対する活性は見出さなかった。
驚くべきことに、出願人は、幾つかの鱗翅目及び双翅目の両方を含む様々な昆虫の害虫に対して活性を有するブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）の株を同定した。特に、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）の３つの株が、アブラナの種子及びニュージーランドの土壌から単離された。スクリーニングアッセイは、３つの株のいずれも、コナガの幼虫(Plutella xylostella)及び蚊の幼虫(クレックス・ペルビギランス（Culex pervigilans）及びオピフェックス・フスクス（Opifex fuscus）)の両方に対する活性を有することを示した。
これらの３つの新しいブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）株は、いずれも、特許手続のためのブダペスト条約に従い、2012年12月に、National Measurement Institute Laboratories (NMI), Suakin Street, Pymble, New South Walesに寄託された。当該単離物は、それぞれ受託番号NMI No. V12/001946、NMI No. V12/001945及びNMI No. V12/001944として記録された。
当該単離物を取得するのに採用された単離及び選択プロセスは、実施例に記載する。本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）の形態的及び生理的特徴は、実施例３に示す。
出願人は、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）株NMI No. V12/001946、NMI No. V12/001945及びNMI No. V12/001944を、単離された形態で初めて提供する者である。
一つの態様において、本発明は、B. ラテロスポルス（B. laterosporus） NMI No. V12/001946を提供する。
他の態様において、本発明は、B. ラテロスポルス（B. laterosporus） NMI No. V12/001945を提供する。
他の態様において、本発明は、B. ラテロスポルス（B. laterosporus） NMI No. V12/001944を提供する。
一つの態様において、本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株が単離される。好ましくは、当該株は、生物学的に純粋な培養物の形態で単離される。
本発明の株は、幾つかの鱗翅目及び双翅目の両方を含む広範な昆虫の害虫に対する殺虫剤活性を示した。３つの株のいずれも、殺虫活性が初めて示されたものである。より好ましくは、これらの株のいずれも、コナガ及び蚊の両方に対して活性を有する。
NMI No. V12/001946株の殺虫活性は：コドリンガ(Cydia pomonella)、コモンフォレストルーパーモス(Pseudocoremia suavis)、コットンボールワームモス(Helicoverpa armmigera)、ブラックライアリーフローラーモス(Cnephasia jactatana)、ブラックレグドリーフローラーモス(Planotortrix notophaea)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、マヌカビートル（ピロンタ ｓｐ．（Pyronta sp.））、及びカリバチ（ベスプラ・ブルガリス（Vespula vulgaris））を含む、他の広範な昆虫の害虫に対しても示されている。
キャベツルーパーモス(Trichoplusia ni)に対するNMI No's V12/001944及びV12/001945株の活性も実証された。
NMI No. V12/001944株は、コトリンガ(Cydia pomonella)に対しても活性を有する。
NMI No. V12/001944及びNMI No. V12/001946は、線形動物のマイクロワーム(Panagrellus redivivus)に対しても活性が示された。
本発明の株は、レピドプテラ・トルトリシダエLepidoptera Tortricidae）及びレピドプテラ・プルテリダエ（Lepidoptera Plutellidae）の科に対する特定の用途を有し得る。レピドプテラ・ノルツイダエ（Lepidoptera Noctuidae）に対しても、一定の活性が示されている。
上記昆虫の害虫は、植物及び動物の両方の健康における広範な問題を引き起こす重大な問題となるものである。特に蛾の類は、農業及び園芸作物における顕著な経済的損失の原因となる。例えば、現在、コナガ（ＤＢＭ）の防除のために世界で１０億ドルが消費されている。
蚊の防除には、年間４億ドル以上が費やされている。
一つの態様において、本発明の単離された株は、１つ以上の鱗翅目の種、及び１つ以上の双翅目の種に対する殺虫剤活性を有する。
一つの態様において、前記鱗翅目の種は、トルトリシダエ（Tortricidae）、プルテリダエ（Plutellidae）、ノクツイダエ（Noctuidae）及びゲオメトリダエ（Geometridae）から選択される科である。
好ましいトルトリシダエ種は、コドリンガ(Cydia pomonella)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、ブラックレグドリーフローラーモス(Planotortrix notophaea) 及びブラックライアリーフローラーモス(Cnephasia jactatana)を含む。
好ましいプルテリダエ種は、コナガ(Plutella xyostella)を含む。
好ましいノクツイダエ種は、キャベツルーパーモス(Trichoplusia ni)及びコットンボールワームモス(Helicoverpa armmigera)を含む。
好ましいゲオメトリダエ種は、コモンフォレストルーパー(Pseudocoremia suavis)である。
一つの態様において、双翅目の種は、蚊科のものである。
好ましい蚊の種は、オピフェックス・フスクス（Opifex fuscus）及びクレックス・プレビギランス（Culex pervigilans）を含む。
また、本発明は、１つ以上の本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株及び農業的に許容される担体を含有する組成物も提供する。
一つの態様において、本発明は、
(a) B. ラテロスポルス（B. laterosporus）NMI No. V12/001946
(b) B. ラテロスポルス（B. laterosporus）NMI No. V12/001945
(c) B. ラテロスポルス（B. laterosporus）NMI No. V12/001944
から選択される１つ以上のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株、及び農業的に許容される担体又は助剤を含有する組成物を提供する。
(a) B. ラテロスポルス（B. laterosporus）NMI No. V12/001946
(b) B. ラテロスポルス（B. laterosporus）NMI No. V12/001945
(c) B. ラテロスポルス（B. laterosporus）NMI No. V12/001944
から選択される１つ以上のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株、及び農業的に許容される担体又は助剤を含有する組成物を提供する。
当該組成物は、２つ以上の本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株の組み合わせを含有してもよい。当該組み合わせとは、（a）及び（ｂ）、（a）及び（ｃ）又は（ｂ）及び（ｃ）である。一つの態様において、当該組成物は、本発明の３つの株を全て含有してもよい。
本発明の株は、目的の害虫を防除するのに有効な量で、前記組成物中に存在する。当該有効濃度は、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）が使用される形態、前記組成物が施用される環境、蔓延する害虫の種類、密度及び程度；温度；季節；湿度；植物が生長する季節における段階；植物の生長度；施用の方法、速度及び頻度；施用されている公知の殺真菌剤や殺虫剤の数及び種類、及び植物の処理（例えば剪定、放牧及び灌漑）に依存して変化し得る。全ての要素が、前記組成物の製剤化において考慮され得る。
本発明の組成物は、１つ以上の本発明の毒素を生産するB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株と所望の農業的担体とを混合することにより生産されてもよい。
典型的には、前記生産物は、噴霧用に製剤化された、胞子及び結晶を分離していない、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）の発酵材料を含有してもよい。発酵材料は、２日以上、典型的には４日経過したものを使用し得る。前記組成物におけるB. ラテロスポルス（B. laterosporus）は、細胞懸濁物として、所望の農業的担体を用いて製剤化される。当該細胞は、直接、又は胞子若しくは結晶を介して、殺虫性の毒素を生産する。
B. ラテロスポルス（B. laterosporus）の典型的な濃度範囲は、無傷の細胞の形態で前記組成物中に存在する場合、1 x 103〜1 x 1014、好ましくは1 x 104〜1 x 1010、より好ましくは1 x 106〜1 x 108 cells/mgである。細胞濃度が1 x 1011〜1 x 1014のオーダーの組成物が調製され、必要に応じて施用前に希釈されるのが好ましい。
B. ラテロスポルス（B. laterosporus）は、当該技術分野で公知の標準的な乾燥及び発酵技術を使用して前記組成物における使用のために調製され得る。増殖は、増殖に適した温度及びｐＨの培養槽中、好気条件下で実施される。典型的な増殖温度は１５〜３７℃、通常は２７〜３２℃である。
増殖培地は、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）培養に適した任意の公知の培地であってもよい。例えば、Nutrient Yeast Extract Salt Medium (NYSM) (Favret, and Youstein 1985)が用いられる。
前記株は、公知の洗浄、濾過、又は遠心分離等の沈降技術を使用して回収されてもよく、又はサイクロン系を使用して回収されてもよい。回収された細胞は、直ちに使用されてもよく、又は低音条件下（例えば4℃）で保存されてもよく、又は凍結乾燥されてもよい。好ましくは細胞は回収直後に使用されるべきである。
また、前記細胞は、活性細胞抽出物、細胞懸濁物、細胞ホモジネート、細胞溶解物、細胞上澄、細胞濾過物、細胞ペレットを生産するために使用される前に処理されてもよく、又は全形の細胞の調製品として使用されてもよい。
本発明の組成物は、保湿剤、拡散剤、粘着付与剤、界面活性剤、安定化剤、浸透剤、乳化剤、分散剤、界面活性剤、緩衝剤、接着剤及び殺虫又は防除組成物の分野で典型的に採用される他の成分を含有してもよい。
本発明の組成物は液体であっても固体であってもよく、液体組成物は典型的には水、生理食塩水又は植物油や鉱物油等の油を含有する。本発明で使用出来る植物油の例は、大豆油及びココナッツ油である。
前記組成物は、噴霧、懸濁、濃縮、泡塊、灌注(drench)、スラリー、注射、ゲル、浸漬、ペースト等の形態であってもよい。液体組成物は、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）細胞と液体の農業的に許容される担体とを混合することにより調製されてもよい。液体組成物を生産するために、公知の製剤技術が使用され得る。
一つの態様において、前記組成物は固体の形態である。当該組成物は、本発明の液体組成物を乾燥させることにより生産されてもよい。あるいは、本発明で使用される固体組成物は、本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）細胞と、様々な無機又は生物材料とを混合することにより調製されてもよい。例えば、固体の無機的な農業的担体は、炭酸塩、硫酸塩、リン酸塩、ケイ酸塩、軽石、石灰、ベントナイト、又はそれらの組み合わせを含んでもよい。固体の生物材料は、粉末化したパーム外皮、トウモロコシの軸や鞘、及びナッツの殻を含んでもよい。
前記組成物は、粉塵、顆粒、種子コーティング、水和粉末等として製剤化されてもよい。当該組成物は、施用の際液体組成物を提供するように製剤化されてもよい。
本発明の組成物は、調整放出、又は持続放出製剤の形態であってもよい。
本発明の組成物は、殺虫剤、殺昆虫剤、殺真菌剤、殺線虫剤、殺ウイルス剤、増殖促進剤、栄養剤、発芽促進剤等の他の制御剤を、本発明のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株の機能に適合するものである限り、含有してもよい。
本発明の株が直接使用される場合、上記で議論した株、調製及び適用の組み合わせと同様のものが適用される。
他の側面において、本発明は、害虫を防除する方法を提供し、当該方法は、本発明の組成物を害虫に接触させることを含む。
他の態様において、本発明は、害虫を防除する方法を提供し、当該方法は、本発明の１つ以上のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株を害虫に接触させることを含む。
一つの態様において、本発明の方法により防除される害虫は、昆虫及び線形動物から選択される。
線形動物として好ましくはマイクロワームを含む。好ましいマイクロワームは、パナグレルス・レジビブス（Panagrellus redivivus）である。
一つの態様において、前記害虫は昆虫である。
一つの態様において、前記昆虫は、鱗翅目、双翅目、膜翅目及び鞘翅目からなる群から選択される。
一つの態様において、前記鱗翅目は、トルトリシダエ（Tortricidae）、プルテリダエ（Plutellidae）、ノクツイダエ（Noctuidae）及びゲオメトリダエ（Geometridae）から選択される科である。
好ましいトルトリシダエ種は、コドリンガ(Cydia pomonella)、ライトブラウンアップルモス(Epiphyas postvittana)、ブラックレグドリーフローラーモス(Planotortrix notophaea) 及びブラックライアリーフローラーモス(Cnephasia jactatana)を含む。
好ましいプルテリダエ種は、コナガ(Plutella xyostella)である。
好ましいノクツイダエ種は、キャベツルーパーモス(Trichoplusia ni)及びコットンボールワームモス(Helicoverpa armmigera)を含む。
好ましいゲオメトリダエ種は、コモンフォレストルーパー(Pseudocoremia suavis)である。
一つの態様において、双翅目の種は、蚊科のものである。
好ましい蚊の種は、オピフェックス・フスクス（Opifex fuscus）及びクレックス・プレビギランス（Culex pervigilans）を含む。
一つの態様において、膜翅目の種は、スズメバチ科のものである。
好ましいスズメバチ科の種は、カリバチ（Vespula vulgaris）である。
一つの態様において、鞘翅目の種は、コガネムシ科から選択される。
好ましいコガネムシ科の種は、マヌカビートル(Pyronta sp)である。好ましいピロンタ種は、ピロンタ・フェスティバ（Pyronta festiva）である。
一つの態様において、本発明の組成物又は株は、害虫に直接施用される。例えば、噴霧、浸漬、散布等により施用される。
他の態様において、本発明の組成物又は株は、害虫の存在する環境、典型的には保護される植物又は動物、設備、土壌又は大気に施用される。利用可能な施用技術として、噴霧、粉塵、浸漬、種子コーティング、葉上噴霧、ミスト、エアロゾル、及び燻蒸が挙げられる。
一つの態様において、本発明の組成物又は株は、植物又は動物の典型的には表面に、又は害虫が摂食する部分に施用される。
施用は、１回だけ、又は必要に応じて反復して実施され得る。植物の生活環における複数の異なる時点での施用も想定される。例えば、害虫による収穫後の被害を予防し、又は最小にするため、収穫時に施用される。
より一般的には、本発明の組成物又は株は、苗の時に、及び周期的に植物に施用され、施用率は、1010〜1014胞子／ヘクタール、好ましくは101２〜101３胞子／ヘクタールである。
典型的な施用率は、50g/ヘクタール〜10,000g/ヘクタールであってもよい。通常は100g/ヘクタール〜5,000g/ヘクタール、又は500〜1500g/ヘクタールである。
本発明の組成物を使用して、様々な植物が処理されてもよい。そのような植物として、穀物、野菜及び耕地作物、芝生（grasses、lawns）、牧草、果樹並びに観葉樹及び植物が挙げられる。
本発明の組成物及び株の使用によって特に利益を受ける耕地植物として、アブラナ科の植物（crucifers及びbrassicas）が挙げられる。例えば、キャベツ、ブロッコリー、カリフラワー、芽キャベツ及びチンゲン菜である。
施用のために製剤化されるとき、本発明の組成物は、典型的には、製剤中に、1〜99重量％、5〜95重量％、10〜90重量％、15〜85重量％、20〜80重量％、30〜70重量％、又は40〜60重量％の濃度で存在してもよい。
添付した図面を参照して、本発明が記述される。
下記非限定的な実施例は、本発明を例示するために提供され、その範囲を何ら限定しない。
実施例１−ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）の選択のプロセス
害虫及びアブラナ科植物の病害に対する新規生物防除剤の探索の一部として、ブロッコリー、キャベツ、コールラビ及びチンゲン菜の野菜、並びにケール、葉株（Ｌｅａｆ ｔｕｒｎｉｐ）、セイヨウアブラナ及びスウェードの試料植物の８種類のアブラナ科植物の３６個の種ロットから、微生物が単離された。
害虫及びアブラナ科植物の病害に対する新規生物防除剤の探索の一部として、ブロッコリー、キャベツ、コールラビ及びチンゲン菜の野菜、並びにケール、葉株（Ｌｅａｆ ｔｕｒｎｉｐ）、セイヨウアブラナ及びスウェードの試料植物の８種類のアブラナ科植物の３６個の種ロットから、微生物が単離された。
全部で８１１個の微生物が単離され、標準的な微生物培地で純粋培養された。微生物の構成は、細菌の単離物584個、真菌の単離物２２７個であった。
殆どの微生物は、不滅菌の種子から生じた（８４％）。バチリ（Bacilli）を形成する種は回収された細菌単離物の７４％を占めるが、ブレビバチルス（Brevibacillus）属に属する単離物は２つだけであった。
２１種類の微生物（細菌単離物が１７種類、真菌が４種類）の生物活性を、切断葉アッセイを使用して、コナガ幼虫、プルテラ・キシロステラ（Plutella xylostella）に対して評価した。Lincoln Universityのカルチャーコレクションから細菌種２種類及び真菌６種類も、Ｐ．キシロステラに対する活性が追加でスクリーニングされた。葉の表面を細菌及び真菌の溶液で汚染し、これを幼虫に摂食させ、死亡率をモニタリングした。このスクリーニングで、１つのB. ラテロスポルス（B. laterosporus）単離物が同定された。同一の種類の更なる単離物が、残りの単離物の中から見いだされ、同様にＰ．キシロステラに対してスクリーニングされ、活性が示された。
無関係のプログラムにおいて、滅菌されたジャガイモの匍匐枝表面から、更なるB. ラテロスポルス（B. laterosporus）の単離物が取得された。これも、葉アッセイにおいて、ＤＢＭの幼虫に対して活性を示した。これらの株は、更なる生物アッセイに供され、識別が確認された。
実施例２−ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）の単離
ニュージーランドの植物又は種子から、３種類のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株が単離された。Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ａｇａｒの単離プレート上に形成されたコロニーを滅菌ループを使用して選択し、新しいプレートに展開して、純粋な培養物を取得した。
ニュージーランドの植物又は種子から、３種類のB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株が単離された。Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ａｇａｒの単離プレート上に形成されたコロニーを滅菌ループを使用して選択し、新しいプレートに展開して、純粋な培養物を取得した。
NMI No. NMI No. V12/001946は、South Pacific Seeds (NZ) Ltdから取得されたハイブリッドキャベツ種子から単離された。
NMI No. NMI No. V12/001945は、PGG Wrightson Seeds Ltd, New Zealandから取得されたフォレージレイプ種子から単離された。
NMI No. NMI No. V12/001944は、Southbridge, New Zealand付近の商業的農場からのジャガイモ植物（ｃｖイラムハーディ（Ilam hardy）から単離された。
単離手順
アブラナの種子において、種子の実滅菌の表面から細菌がＮｕｔｒｉｅｎｔ Ａｇａｒの表面に単離された。各コロニーを純粋培養した。
アブラナの種子において、種子の実滅菌の表面から細菌がＮｕｔｒｉｅｎｔ Ａｇａｒの表面に単離された。各コロニーを純粋培養した。
ジャガイモ植物において、匍匐枝を熱処理（80℃20分）し、表面を滅菌し（２％次亜塩素酸ナトリウム中５分間）、そして組織を浸漬し、Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ａｇａｒ上に展開した。
実施例３−形態的及び生理的同定
全ての単離物を、ブレビバチルスの特徴を検査するために、光学顕微鏡を使用して同定した。
全ての単離物を、ブレビバチルスの特徴を検査するために、光学顕微鏡を使用して同定した。
API 50CH (bioMerieux)を用いた生化学的特定
市販の基質利用キットAPI 50CH (bioMerieux)を説明書に従って使用して、NMI No V12/001946及びNMI No. V12/001945を更に同定した。説明書の勧めに従い、それぞれAPI 50 CHB/E培地中の細菌を播種した。bioMerieuxによる同一性のチェックから、それらのデータベース上でB. ラテロスポルス（B. laterosporus）と９９．９％の同一性を示した。
市販の基質利用キットAPI 50CH (bioMerieux)を説明書に従って使用して、NMI No V12/001946及びNMI No. V12/001945を更に同定した。説明書の勧めに従い、それぞれAPI 50 CHB/E培地中の細菌を播種した。bioMerieuxによる同一性のチェックから、それらのデータベース上でB. ラテロスポルス（B. laterosporus）と９９．９％の同一性を示した。
形態学的特性
ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）は、好気性、グラム陽性、芽胞形成細菌であり、通性嫌気性菌でもある(Shida et al., 1996)。
ブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）は、好気性、グラム陽性、芽胞形成細菌であり、通性嫌気性菌でもある(Shida et al., 1996)。
３種類のブレビバチルス・ラテロスポルス（Brevibacillus laterosporus）NMI No. V12/001946、NMI No. V12/001945及びNMI No. V12/001944は、当該種の典型である、以下の形態学的特徴を有する：３株全て最初は栄養細胞として増殖し、パラスポラルボディ(CSPB)及び隣接胞子（adjacent spore）を含有する胞子嚢を形成する。
増殖の特性
好気性で、通性嫌気性であり；寒天上のコロニーは白黄色で、縁が不規則である。
好気性で、通性嫌気性であり；寒天上のコロニーは白黄色で、縁が不規則である。
１６ｓ ｒDNA同定
１６ｓ ｒDNAの領域を、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）の４つの各株のゲノム配列から取得した。ゲノムDNAを、New Zealand Genomics Ltd, Dunedin, New Zealandによりシークエンシングした。B. ラテロスポルス（B. laterosporus）からの他の１６ｓ ｒDNA配列、及び抽出された全長１６ｓ ｒDNA遺伝子を使用してコンティグが探索され、Geneious (http://www.geneious.com/)及び DNAman (Lynnon Biosoft, Canada)プログラムを使用して重ね合された。
１６ｓ ｒDNAの領域を、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）の４つの各株のゲノム配列から取得した。ゲノムDNAを、New Zealand Genomics Ltd, Dunedin, New Zealandによりシークエンシングした。B. ラテロスポルス（B. laterosporus）からの他の１６ｓ ｒDNA配列、及び抽出された全長１６ｓ ｒDNA遺伝子を使用してコンティグが探索され、Geneious (http://www.geneious.com/)及び DNAman (Lynnon Biosoft, Canada)プログラムを使用して重ね合された。
NMI V12/001946を特徴付けるために配列番号１を使用し;NMI V12/001945を特徴付けるために配列番号２を使用し；NMI V12/001944を特徴付けるために配列番号３を使用し；NCIMB41419を特徴付けるために配列番号４を使用した。EP 2,079,314で同定されたNCIMB41419は、NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen, AB21 9YA, Scotlandから取得されたB. ラテロスポルス（B. laterosporus）の株である。
配列番号１〜４の重ね合わせを図１０に示す。この図は、各株間の配列及び特徴の違いを示す。
実施例４−バイオアッセイ手順
コナガ(Plutella xylostella) (鱗翅目：コナガ科)、モンシロチョウ（Pieris rapae）(鱗翅目：シロチョウ科)及びキャベツルーパーモス(Trichoplusia ni)(鱗翅目：ヤガ科)
コナガの幼虫を、Lincolnのアブラナ科植物（キャベツ植物）上で飼育し、又はCry1A及びCry1Cに耐性の株、並びに感受性の株（G88）を取得し、Geneva, NY, USAのCornell University, New York State Agricultural Experiment Station, College of Agriculture and Life Sciencesで試験を行った。モンシロチョウの幼虫は、Lincoln University, New Zealandの農場から野外採集した。
コナガ(Plutella xylostella) (鱗翅目：コナガ科)、モンシロチョウ（Pieris rapae）(鱗翅目：シロチョウ科)及びキャベツルーパーモス(Trichoplusia ni)(鱗翅目：ヤガ科)
コナガの幼虫を、Lincolnのアブラナ科植物（キャベツ植物）上で飼育し、又はCry1A及びCry1Cに耐性の株、並びに感受性の株（G88）を取得し、Geneva, NY, USAのCornell University, New York State Agricultural Experiment Station, College of Agriculture and Life Sciencesで試験を行った。モンシロチョウの幼虫は、Lincoln University, New Zealandの農場から野外採集した。
１０匹の２〜３齢幼虫を使用し、細菌を含有する株(NMI No's: V12/00944, V12/001945 or V12/001946)のいずれかの溶液で処理したキャベツの葉の３ｃｍ円盤上に置き、又はそれらの溶液に浸漬した。イタリアのB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株NCIMB41419、及び他の細菌属エルウィナ（Erwina）(ICMP)の培養物も、DBMの幼虫に対する活性の比較対象として使用された。水和剤のSiliwet L-77 (Momentive Performance Materials, New York, USA)又はTriton X-100 (Rohm and Hass Co, Philidelphia, USA)は、＜０．０５％で使用された。各処理は、３〜５回反復された（処理当たり幼虫３〜５０匹）。処理された幼虫を、２３℃ 16L:8HD (Lincoln)、又は27℃ 16hL:8hD (USA)でキャベツの葉の上に置き、生死を毎日チェックした。
感受性及びCry1A耐性トリコプルシア・ニ（Trichoplusia ni）も取得され、Geneva, NY, USAのCornell University New York State Agricultural Experiment Station, College of Agriculture and Life Sciencesで試験された。第二の３齢幼虫もDBMと同様に接種及び維持したが、反復実験あたり５匹の幼虫しか使用しなかった（実験あたり合計で幼虫２５匹）。幼虫は処理後27℃ 16hL:8hDで維持された。
コドリンガ(Cydia pomonella)バイオアッセイ（鱗翅目：ハマキガ科）
バイオアッセイは、Plant and Food Research Center, (PFR), Auckland, New Zealandにより提供された卵に由来するコドリンガの幼虫を使用して準備された。PFRも、昆虫の飼育に使用される人工飼料を供給した。
バイオアッセイは、Plant and Food Research Center, (PFR), Auckland, New Zealandにより提供された卵に由来するコドリンガの幼虫を使用して準備された。PFRも、昆虫の飼育に使用される人工飼料を供給した。
予備的及び確認的試験を行い、NMI NO. V12/001946に対する昆虫の反応を評価した。各バイオアッセイは、a)無希釈（30℃のNYSM中で４日間シェーカーフラスコ中で増殖させた材料を希釈せずに使用し、水和剤として０．０２５％のコンタクトを含有する）のNMI No. V12/001946又はV12/001944で処理した飼料、及びｂ）対照としての未処理の飼料からなる２つの処理を有する。予備的なセットアップにおいて、各処理は、１０回反復され、１つのチューブは１つの複製物を表す。確認的試験において、各処理は３０個の複製物を有し、又は複製物として１つのチューブを有する。処理した飼料において、その表面に１０μｌのNMI No. V12/001946を散布し、１０分間送風により乾燥させた。２匹の２齢幼虫を各チューブに入れ、チューブをパラフィルムで封じた。
全てのチューブをラックに置き、25℃のインキュベーターに入れ、照明時間を１６：８（L:D）とした。幼虫の死亡率を毎日観察し、接種の１日後からデータを収集した。
イエバエ(Musca domestica)バイオアッセイ（双翅目：イエバエ科）
バイオアッセイの試行は、Auckland, New Zealandに本拠地を置く生きた昆虫を供給する会社であるBiosuppliers Insects (www.biosuppliers.com)から購入した幼虫（蛆虫）及び蛹を使用して実行された。セットアップにおいて、Ruiu et al. 2006による人工飼料が使用された。
バイオアッセイの試行は、Auckland, New Zealandに本拠地を置く生きた昆虫を供給する会社であるBiosuppliers Insects (www.biosuppliers.com)から購入した幼虫（蛆虫）及び蛹を使用して実行された。セットアップにおいて、Ruiu et al. 2006による人工飼料が使用された。
蛆虫及び蛹のNMI No. V12/001946に対する反応は、a)無希釈のNMI No. V12/001946で処理した飼料、及びｂ）対照としての未処理の飼料の、２つの処理において観察された。蛆虫を使用した予備的なセットアップにおいて、各処理は、１０ｍｌの飼料を有する３つのポッテルカップ（pottel cups）(Huhtamaki Co., Henderson, Auckland, New Zealand)を有する。処理した飼料において、２００μｌの無希釈のNMI No. V12/001946を飼料と粗く混合した後、６匹の蛆虫に与えた。蛹を使用するセットアップにおいて、各処理は、各カップに５匹の蛹を入れたポッテルを有する。
前記セットアップは21度のインキュベーター中に置かれ、照明時間を１６：８（L:D）とした。当該セットアップを毎日観察した。
コモンフォレストルーパーモス(Pseudocoremia suavis)バイオアッセイ（鱗翅目：シャクガ科）
コモンフォレストルーパーの卵は、PFRから供給された。卵を、Bioprotection Center, Lincoln, New Zealandの20℃及び照明時間１６：８（L:D）のControlled Temperature (CT)室の一つの中で孵化させた。新生の幼虫をLincoln University Nursery, Lincoln, New Zealandにおいて、切り離したラジアータパインの芽の中で生育させた。当該芽は、軽く洗浄し、水気を切り、湿ったペーパータオルを敷いたプラスチック容器に入れられた。当該容器は空気が通るように網蓋で覆われた。新鮮な松の葉は、バイオアッセイに用いる３齢幼虫になるまで毎日供給された。
コモンフォレストルーパーの卵は、PFRから供給された。卵を、Bioprotection Center, Lincoln, New Zealandの20℃及び照明時間１６：８（L:D）のControlled Temperature (CT)室の一つの中で孵化させた。新生の幼虫をLincoln University Nursery, Lincoln, New Zealandにおいて、切り離したラジアータパインの芽の中で生育させた。当該芽は、軽く洗浄し、水気を切り、湿ったペーパータオルを敷いたプラスチック容器に入れられた。当該容器は空気が通るように網蓋で覆われた。新鮮な松の葉は、バイオアッセイに用いる３齢幼虫になるまで毎日供給された。
葉を浸漬する方法を使用して行われたバイオアッセイは２つ存在する。各バイオアッセイは、a)０．０１％TritonX100（水和剤、Rohm and Haas Co. Philadelphia, USA）を有する細菌中に浸漬したラジアータパインの葉、及びｂ）対照の、０．０１％TritonX100を有する滅菌蒸留水中に浸漬した葉の、２つの処理を有する。各処理は２つの複製を表す２つの葉の試料を有する。第一のバイオアッセイにおいて、10-1の細菌希釈が使用され、第二の試行において、無希釈が利用された。葉は送風により乾燥され、その葉に５匹の幼虫が導入された。当該セットアップは、CT室で、20℃、１６：８（L:D）照明時間に置かれた。
グラスグラブ（Costelytra zealandica）バイオアッセイ（鞘翅目：コガネムシ科）
グラスグラブの幼虫を近所の野原から採集した。バイオアッセイの前に、当該幼虫に、１２ウェルの組織培養プレート中の人参キューブを与えた。必要に応じて新鮮な人参キューブを再び与えた。２日後、活発に餌を食べる全ての幼虫をバイオアッセイ用に選択した。
グラスグラブの幼虫を近所の野原から採集した。バイオアッセイの前に、当該幼虫に、１２ウェルの組織培養プレート中の人参キューブを与えた。必要に応じて新鮮な人参キューブを再び与えた。２日後、活発に餌を食べる全ての幼虫をバイオアッセイ用に選択した。
バイオアッセイは、NMI No. V12/001946で処理した人参キューブ、及び対照である未処理の人参キューブの、２種類の処理を有する。NMI No. V12/001946で処理した人参キューブにおいて、各キューブは、２日間栄養寒天中で増殖させたNMI No. V12/001946上で転がされた。処理あたり１２個のウェルが割り当てられ、ウェル当たり１匹の幼虫が割り当てられた。プレートは湿ったペーパータオルを敷いたトレイ中に置かれ、透明なプラスチックバッグに入れられ、湿度を増大させて人参キューブの乾燥を防いだ。トレイは、２１℃、１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置かれた。観察は毎日行われた。
マヌカビートル(Pyronota spp.)バイオアッセイ（鞘翅目：コガネムシ科）
マヌカビートルの幼虫に関して、人参キューブバイオアッセイ及び土壌バイオアッセイの２つのバイオアッセイが行われた。マヌカビートルの幼虫は、Landcare Farming Ltd, Westport, New Zealandから提供された。
マヌカビートルの幼虫に関して、人参キューブバイオアッセイ及び土壌バイオアッセイの２つのバイオアッセイが行われた。マヌカビートルの幼虫は、Landcare Farming Ltd, Westport, New Zealandから提供された。
人参キューブバイオアッセイにおいて、グラスグラブと同一の工程がなぞられた。土壌バイオアッセイにおいて、幼虫は、１２ウェル組織培養プレート中で２日間人参キューブを与えられた。バイオアッセイには良く食べる幼虫が選択した。滅菌した土壌１０ｇをユニバーサルボトル中に入れた。当該土壌中に２ｍｌの滅菌蒸留水を添加し、よく混合した。処理した土壌には５００ｍｌの無希釈NMI No. V12/001946が加えられ、土壌とよく混合された。対照には、２ｍｌの滅菌蒸留水のみ土壌と混合された。各ボトルに１匹の幼虫が導入され、１つの人参キューブが与えられた。ボトルの蓋は軽く締められ、２１℃で１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置かれた。幼虫の死亡率が毎日観察された。
ライトブラウンアップルモス（LBAM）(Epiphyas postvittana)バイオアッセイ（鱗翅目：ハマキガ科）
このバイオアッセイは、Wearing et al. (2003)の方法を改変したものである。彼らの方法は、完全に展開したリンゴの葉を使用し、幼虫は、４齢になるまで毎週新しい葉に移された。当該葉は、背軸面を下にして平らな所に置かれた。BHU, Lincoln Universityからの若いリンゴの葉、及びPlant & Food Researchから提供された卵から育てたLBAMの幼虫を、セットアップに使用した。
このバイオアッセイは、Wearing et al. (2003)の方法を改変したものである。彼らの方法は、完全に展開したリンゴの葉を使用し、幼虫は、４齢になるまで毎週新しい葉に移された。当該葉は、背軸面を下にして平らな所に置かれた。BHU, Lincoln Universityからの若いリンゴの葉、及びPlant & Food Researchから提供された卵から育てたLBAMの幼虫を、セットアップに使用した。
予備的なバイオアッセイにおいて、Wearing et al. (2003)のプロトコルからの改変は、１）全形の葉の代りに、葉は１インチ四方にカットされた点、２）２つの葉の方向が使用された点、及び３）幼虫が新しい葉に移されなかった点である。
予備的バイオアッセイは：対照としての無処理の葉及び無希釈１８２１で処理した葉の２つの処理を有する。若い完全に展開した葉から１平方インチの葉を切り出した。処理された葉の試料において、無希釈の40 μl V12/001946が表面に散布され、送風で乾燥された。対照及び処理された葉の試料は、水寒天の表面に、１）葉の葉軸面側（下側）を寒天とさせる、及び２）葉の向軸面（上側）を寒天と接触させる、２つの方法で置かれた。処理あたり、及び葉の方向あたり、２つの葉の試料が用意された。各葉の試料に、５枚の葉が置かれた。
第二のバイオアッセイは、全形の葉を使用して行われた。処理及び手順は、第一のバイオアッセイと同一であった。
トマトフルーツワームモス（アカコーンイヤーワーム及びコモンボールワームモス）(Helicoverpa armigera)バイオアッセイ（鱗翅目：ヤガ科）
トマトフルーツワームに対するV12/001946の反応は、PFRから提供された卵から育てた幼虫及び人工飼料を使用して、Singh (1983)の方法の改変に基づいて評価された。改変は、保存料、抗生物剤、及び抗真菌剤の化合物を試料に入れない点である。
トマトフルーツワームに対するV12/001946の反応は、PFRから提供された卵から育てた幼虫及び人工飼料を使用して、Singh (1983)の方法の改変に基づいて評価された。改変は、保存料、抗生物剤、及び抗真菌剤の化合物を試料に入れない点である。
このバイオアッセイは：無希釈V12/001946で処理した飼料、及び対照としての無処理試料の、２つの処理を有する。処理あたり５ｍｌの試料と６個のポーションカップ(Huhtamaki Co., Henderson, Auckland)が使用された。処理した飼料において、無希釈V12/001946 ２０μｌが試料の表面に散布され、通気乾燥された。処理された及び無処理の飼料において、カップあたり５匹の幼虫が導入された。このカップは、試料の乾燥を防ぐためにパラフィルムで覆われた。処理された及び無処理のカップは、２５℃の１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置かれた。
蚊バイオアッセイ(Culex pervigilans及びOpifex fuscus)（双翅目：カ科）
このバイオアッセイは、Oxford, Canterbury, New Zealandの閉鎖されたプールからLincoln Universityが採集した(Culex pervigilans)、又はNew Zealand BioSecure Entomology Laboratory Research, Lincoln, Christchurchにより供給された(Culex pervigilans and opifex fuscus)蚊の幼虫を使用して実施された。当該アッセイは、７つの処理、即ち無希釈NMI No. V12/001946（シェーカーフラスコから）、10-2、10-4、10-6、10-8、10-10の５つの細菌希釈物、及び対照としての無処理の幼虫を有する。各処理は、１２個の複製物を示す１２ウェルを有し、完全にランダム化されるように設計された。
このバイオアッセイは、Oxford, Canterbury, New Zealandの閉鎖されたプールからLincoln Universityが採集した(Culex pervigilans)、又はNew Zealand BioSecure Entomology Laboratory Research, Lincoln, Christchurchにより供給された(Culex pervigilans and opifex fuscus)蚊の幼虫を使用して実施された。当該アッセイは、７つの処理、即ち無希釈NMI No. V12/001946（シェーカーフラスコから）、10-2、10-4、10-6、10-8、10-10の５つの細菌希釈物、及び対照としての無処理の幼虫を有する。各処理は、１２個の複製物を示す１２ウェルを有し、完全にランダム化されるように設計された。
水１ｍｌ及び１匹の幼虫を１２ウェル組織培養プレートの各ウェルに注入した。処理された幼虫において、２０μlのNMI No. V12/001946が各ウェルに導入された。プレートを蓋で覆い、２５℃の１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置かれた。幼虫の死亡は、ゆっくり混ぜたときに幼虫が動かなくなったことにより示され、死亡率は毎日評価された。
当該アッセイは、NMI V12/001944、V12/001945及びV12/001946の３つの株、イタリアのB. ラテロスポルス（B. laterosporus）株NCIMB41419を使用して繰り返され、他の細菌種Erwina (ICMP)の培養物も、比較として使用された。
ハスモンヨトウ(Spodoptera litura)バイオアッセイ（鱗翅目：ヤガ科）
このバイオアッセイで使用される幼虫は、PFRにより供給された卵から育てたものである。新生の翌日、トマトフルーツワーム用に開発された人工飼料中で幼虫を一昼夜育成した。飼料の表面の排泄物の存在により示されるように、この飼料がハスモンヨトウにも好適であることが証明された。
このバイオアッセイで使用される幼虫は、PFRにより供給された卵から育てたものである。新生の翌日、トマトフルーツワーム用に開発された人工飼料中で幼虫を一昼夜育成した。飼料の表面の排泄物の存在により示されるように、この飼料がハスモンヨトウにも好適であることが証明された。
このバイオアッセイには、無希釈NMI No. V12/001946で処理した飼料と、対照としての無処理飼料の、２種類の処理がある。各処理は、６個の複製物を表す６個のポッテルカップを有する。飼料の表面に２０μｌの細菌を散布し、通気乾燥させる。各ポッテルカップに、５匹の幼虫を導入した。このカップを、幼虫の導入後に、パラフィルムで封じた。
このセットアップを２５℃及び１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター内に置いた。
ブラックレグドリーフローラーモス(Planotortrix notophaea)及びブラックライアリーフローラーモス(Cnephasia jactatana)バイオアッセイ（鱗翅目：ハマキガ科）
２つのバイオアッセイの為の試験用の昆虫及び人工飼料は、PFRにより提供された。卵から孵化した翌日、幼虫を人工飼料中で一昼夜飼育し、２１℃及び１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置いた。
２つのバイオアッセイの為の試験用の昆虫及び人工飼料は、PFRにより提供された。卵から孵化した翌日、幼虫を人工飼料中で一昼夜飼育し、２１℃及び１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置いた。
両バイオアッセイは、無希釈NMI No. V12/001946で処理した飼料と、対照としての無処理飼料の、２つの処理を有する。ブラックレグドリーフローラーを含むバイオアッセイにおいて、対照のチューブは１５本あり、各チューブは１つの複製物を表す。処理された試料は、１４個の複製物を有する。ブラックライアのバイオアッセイにおいて、処理された飼料及び無処理の飼料はそれぞれ１５個の複製物を有する。各チューブに２匹の２齢幼虫が導入され、パラフィルムで封じられた。
両バイオアッセイにおいて、処理された及び無処理のチューブは、２１℃及び１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置かれた。幼虫の死亡率は、双眼顕微鏡下で毎日観察された。ラクダのブラシで軽くこすったときに動かない幼虫は、死んでいると評価された。
ミールワーム(Tenebrio molitor)バイオアッセイ（鞘翅目：ゴミムシダマシ科）
このバイオアッセイの為の幼虫及び飼料は、Biosuppliers Live Insects, Auckland, New Zealandから購入した。無希釈で処理した飼料と、対照としての無処理飼料の、２つの処理が存在する。各処理は２つの複製物を有し、１つの複製物は１つの容器を有する。
このバイオアッセイの為の幼虫及び飼料は、Biosuppliers Live Insects, Auckland, New Zealandから購入した。無希釈で処理した飼料と、対照としての無処理飼料の、２つの処理が存在する。各処理は２つの複製物を有し、１つの複製物は１つの容器を有する。
各容器中に２５０ｍｇの飼料が置かれた。処理された飼料において、２００μｌの細菌溶液が飼料と粗く混合され、通気乾燥された。対照の飼料には、同量の滅菌蒸留水が混合された。各容器に５匹の幼虫が入れられ、中央に穴が空けられた蓋で封じされた。これらの容器を、２５℃及び１６：８（L:D）照明時間のインキュベーター中に置いた。
サワーペーストネマトード／マイクロワーム(Panagrellus redivivus)バイオアッセイ（線形動物：桿線虫類）
自由な生きた線形動物を、Biosuppliersから購入した。B. ラテロスポルス（B. laterosporus）細菌のマイクロワームに対する反応を試験するために、２つのバイオアッセイが実施された。２つのバイオアッセイにおいて、マイクロワームはペーストの状態で提供され、当該ペーストから掬い取り、滅菌蒸留水の入った深いペトリ皿中に置かれて、個々の線形動物に分離させた。チップカットを有する１ｍｌピペットチップを使用して、個別のマイクロワームを滅菌蒸留水中に取った。
自由な生きた線形動物を、Biosuppliersから購入した。B. ラテロスポルス（B. laterosporus）細菌のマイクロワームに対する反応を試験するために、２つのバイオアッセイが実施された。２つのバイオアッセイにおいて、マイクロワームはペーストの状態で提供され、当該ペーストから掬い取り、滅菌蒸留水の入った深いペトリ皿中に置かれて、個々の線形動物に分離させた。チップカットを有する１ｍｌピペットチップを使用して、個別のマイクロワームを滅菌蒸留水中に取った。
第一のバイオアッセイにおいて：１）無希釈V12/001946で処理したマイクロワーム、２）無希釈V12/001944で処理したマイクロワーム、及び３）対照としての無処理マイクロワームの、３つの処理がある。１２ウェル組織培養プレートの各ウェル中に１０匹のマイクロワームが置かれた。各ウェル中に、１ｍｌの滅菌蒸留水が入れられた。各処理は、完全に無作為化される設計で６個の複製ウェルを有する。処理されたマイクロワームにおいて、ウェルあたり１０μｌの細菌が入れられた。このバイオアッセイは、室温で行われた。
マイクロワームの死亡率は、播種後３日まで毎日評価された。幼虫の死亡率は、双眼顕微鏡下で観察された。
第二のバイオアッセイにおいて、遠心分離された材料の代りに細菌ブロスが使用された。１）無希釈V12/001944ブロス、2)10-2希釈物、3)10-3希釈物、4)10-4希釈物及び5)対照としての無処理物の、５つの処理が評価された。処理あたり６ウェルを用い、各ウェルには１０匹のマイクロワームが入れられ、完全に無作為化するように設計された。処理されたマイクロワームにおいて、ウェルあたり２０μｌの細菌ブロスが添加された。当該バイオアッセイも、室温で実施された。
死亡率は、播種後３日間毎日評価された。幼虫の死亡率は双眼顕微鏡下で観察された。
アルゼンチンステムウィービル(Listronotus bonariensis)（鞘翅目：ゾウムシ科）
アルゼンチンステムウィービルに対するV12/001946の反応を評価するために、２つのバイオアッセイが実施された。両バイオアッセイのための試験材料として、ホソムギとゾウムシは、Canterbury, New Zealandの野外採集された材料である。
アルゼンチンステムウィービルに対するV12/001946の反応を評価するために、２つのバイオアッセイが実施された。両バイオアッセイのための試験材料として、ホソムギとゾウムシは、Canterbury, New Zealandの野外採集された材料である。
最初のバイオアッセイは：無希釈V12/001946ブロスで処理されたホソムギ及び対照としての無処理の葉の、２つの処理を有する。ホソムギは２インチの長さに切られた。V12/001946処理草において、草試料は無希釈V12/001946ブロスに浸漬され、１０〜１５分間通気乾燥された。対照及び処理草試料は、ペトリ皿中に置かれた。処理草は５枚のペトリ皿を有し、対照は４枚有する。各草試料に１０匹のゾウムシが導入された。ペトリ皿はラッピングフィルムでシールされた。全てのペトリ皿は、２２℃及び１２：１２（L:D）照明時間のインキュベーター内に置かれた。幼虫の死亡率は、毎日観察された。
第二のバイオアッセイは、全形のホソムギ苗が使用された。三週齢のホソムギ苗が使用された。ホソムギ苗の根は小さいプラスチックバッグに入れられ、十分な水を入れて苗の乾燥を防いだ。プラスチックバッグは根の少し上で縛られプラスチックジッパーが閉じられて、バッグから水が出ることを防いだ。
このバイオアッセイは：V12/001946処理ホソムギと、対照としての無処理ホソムギの、２つの処理を有する。処理あたり３本のホソムギ苗を使用する。無処理ホソムギにおいて、エアーブラシを用いて各苗に５００μｌの滅菌蒸留水がスプレーされた。処理ホソムギにおいて、５００μｌのV12/001946ブロスがスプレーされた。苗はスプレー後通気乾燥され、メッシュ蓋付きの長方形のプラスチック容器内に置かれた。各苗に１０匹のゾウムシが導入された。全ての容器は、２２℃及び１２：１２（L:D）照明期間のインキュベーター中に置かれた。幼虫の死亡率の評価は毎日実施された。
ウォーターボートメン（半翅目：ミズムシ科）
このバイオアッセイは、Oxford, New Zealandで野外採集したウォーターボートメンを使用して行われた。V12/001946で処理されたウォーターボートメンと、対照としての無処理のものの、２つの処理がある。１つのウォーターボートメンが、５ｍｌの滅菌蒸留水が入ったユニバーサルボトル中に入れられた。処理あたり５本のボトルがある。処理されたウォーターボートメンにおいて、滅菌蒸留水に４０μｌの無希釈V12/001946が添加された。この実験は室温（２０〜２４℃）で行われた。死亡率は毎日評価された。
このバイオアッセイは、Oxford, New Zealandで野外採集したウォーターボートメンを使用して行われた。V12/001946で処理されたウォーターボートメンと、対照としての無処理のものの、２つの処理がある。１つのウォーターボートメンが、５ｍｌの滅菌蒸留水が入ったユニバーサルボトル中に入れられた。処理あたり５本のボトルがある。処理されたウォーターボートメンにおいて、滅菌蒸留水に４０μｌの無希釈V12/001946が添加された。この実験は室温（２０〜２４℃）で行われた。死亡率は毎日評価された。
ゲンゴロウ(Antiporus duplex)（鞘翅目：ゲンゴロウ科）
このバイオアッセイにおいて、Oxford, New Zealandで野外採集されたゲンゴロウが使用された。このバイオアッセイは、V12/001946処理ゲンゴロウ及び対照としての無処理ゲンゴロウの、２つの処理を有する。
このバイオアッセイにおいて、Oxford, New Zealandで野外採集されたゲンゴロウが使用された。このバイオアッセイは、V12/001946処理ゲンゴロウ及び対照としての無処理ゲンゴロウの、２つの処理を有する。
１２ウェル組織培養プレートをバイオアッセイで利用した。処理あたり６ウェルが用いられ、ウェルあたり１匹のゲンゴロウを入れた。２ｍｌの蒸留水を各ウェルに入れた。V12/001946処理ゲンゴロウにおいて、１０μｌの無希釈V12/001946を添加した。このバイオアッセイは室温（２０〜２４℃）で行われ、死亡率は毎日記録された。
コモンワスプ（Vespula vulgaris）成虫（膜翅目：スズメバチ科）
このバイオアッセイは、Lincoln University周辺の顕花植物から回収したカリバチの成虫を使用して行われた。V12/001946で処理したカリバチと、対照としての無処理のものの、２つの処理が評価された。小さい穴が空けられた蓋付きのプラスチック容器中に５匹のカリバチが入れられた。
このバイオアッセイは、Lincoln University周辺の顕花植物から回収したカリバチの成虫を使用して行われた。V12/001946で処理したカリバチと、対照としての無処理のものの、２つの処理が評価された。小さい穴が空けられた蓋付きのプラスチック容器中に５匹のカリバチが入れられた。
対照のカリバチは、小さいプラスチックの蓋の中に置かれた２ｍｌの１０％スクロース溶液を与えた。V12/001946処理カリバチにおいて、２ｍｌの１０％スクロースは１ｍｌのV12/001946無希釈（濃縮）物と混合された。スクロース溶液（V12/001946を含む又は含まない）は、各容器にカリバチを入れる前に置かれた。
このバイオアッセイは、室温（２０〜２４℃）で行われた。死亡率は毎日記録された。
New Zealandで単離された３つのB. ラテロスポルス（B. laterosporus） (NMI No's V12/001944、V12/001945及びV12/001946)は、DBMの幼虫に対する活性を示した（図３）。これらの細菌は、他の鱗翅目の幾つかの種に対しても毒性であった（表１）。リーフローラー（ブラックレグドリーフローラー、ブラックライアリーフローラー、ライトブラウンアップルモス、全てハマキガ科）、コドリンガ（ハマキガ科）及びDBM(コナガ科)及びヤガ科が感受性であった。
蚊（双翅目：カ科）も、前記細菌に対して大いに感受性であった（図４及び５）。マヌカビートル（コガネムシ）もある程度感受性であるが、幼虫が土壌中にある場合には感受性が見られなかった。他のコガネムシのグラスグラブは、感受性は見られなかった（表２）。膜翅目のカリバチ、ヴェスプラ・ブルガリス（Vespula vulgaris）の成虫は、感受性が認められた。
線形動物に対する活性は、線形動物の一種のマイクロワーム（Panagrellus redivivus）により実証された（図９）。
B. ラテロスポルス（B. laterosporus）株NCIMB 41419は、ダイヤモンドバックモス（図３）又は蚊（図５）に対して有効ではなかった。
表１：V12/001946株を用いた鱗翅目の昆虫に対するバイオアッセイの結果をまとめる。（無希釈は、３〜４日培養した約1010cells/mlの培養物を示す。）
表２：他の種
ニュージーランドの植物から単離されたB. ラテロスポルス（B. laterosporus）の３つの株は、いずれも、幾つかの鱗翅目及び双翅目に対して活性を有する。鱗翅目の中で、試験された全てのハマキガ科及びコナガ科の種は感受性であった。双翅目の中で、カ科が感受性であった。
本明細書において、特許明細書、他の外的文献、又は他の情報源が引用されている場合、これは、一般に、本発明の特徴を議論するためのコンテクストを提供するためのものである。別に言及が無い限り、そのような外的文献の参照は、そのような文献又は情報源が、いずれかの管轄において、先行技術であること、又は当該技術分野の技術常識の部分を形成することと見做されるべきではない。
参考文献の一覧
Aronson, A. I., & Dunn, P. E. (1991). United States Patent No. US5055293.
Baxter, S.W., Badenes-Perez, F.R., Morrison, A., Vogel, H., Crickmore, N., Kain, W., Wang, P., Heckel, D.G. and Jiggins, C.D. (2011) Parallel evolution of Bacillus thuringiensis toxin resistance in Lepidoptera. Genetics October, 189, 675-679.
Boets, A., Arnaut, G., van Rie, J., & Damme, N. (2011). Belgium Patent No. US 7919609B2.
Bone, L. W., & Singer, S. (1991). United States Patent No. 5045314
de Oliveira, E. J., Rabinovitch, L., Monnerat, R. G., Passos, L. K., & Zahner, V. (2004). Molecular characterization of Brevibacillus laterosporus and its potential use in biological control. Appl Environ Microbiol, 70(11), 6657-6664.
Favret, M.E. and Yousten, A.A. (1985) Insecticidal activity of Bacillus laterosporus. J. Invertebrate Pathology 48,195-203.
Huang, X., Tian, B., Niu, Q., Yang, J., Zhang, L., & Zhang, K. (2005). An extracellular protease from Brevibacillus laterosporus G4 without parasporal crystals can serve as a pathogenic factor in infection of nematodes. Res Microbiol, 156(5-6), 719-727.
Orlova, M. V., Smirnova, T. A., Ganushkina, L. A., Yacubovich, V. Y., & Azizbekyan, R. R. (1998). Insecticidal activity of Bacillus laterosporus. Appl Environ Microbiol, 64(7), 2723-2725.
Rivers, D. B., Vann, C. N., Zimmack, H. L., & Dean, D. H. (1991). Mosquitocidal activity of Bacillus laterosporus. Journal of Invertebrate Pathology, 58, 444-447.
Ruiu, L., Delrio, G., Ellar, D. J., Floris, I., Paglietti, B., Rubino, S., et al. (2006). Lethal and sublethal effects of Brevibacillus laterosporus on the housefly (Musca domestica). Entomologia Experimentalis et Applicata, 118(2), 137-144.
Schnepf, H. E., Narva, K. E., Stockhoff, B. A., Finstad Lee, S., Walz, M., & Sturgis, B. (2002). United States Patent No. US 2002/0120114A1.
Singer, S. (1996). The utility of strains of morphological group II Bacillus. Advances in applied microbiology, 42, 219-261.
Singer, S., Van Fleet, A. L., Viel, J. J., & Genevese, E. E. (1997). Biological control of the zebra mussel Dreissena polymorpha and the snail Biomphalaria glabrata, using Gramicidin S and D and molluscicidal strains of Bacillus. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 18(4), 226-231.
Singh, P. (1983) A general purpose laboratory diet mixture for rearing insects. Insect Sci. Application 4, 357-362.
Tabashnik, B.E., Cushing, N.L., Finson, N., Johnson, M.W. (1990) Field Development of Resistance to Bacillus thuringiensis in Diamondback Moth (Lepidoptera: Plutellidae). Journal of Economic Entomology, 83, 1671-1676.
Tabashnik, B.E., Liu, Y., Malvar, T., Heckel, D.G., Masson, L. and Ferre, J. (1998) Insect resistance to Bacillus thuringiensis: uniform or diverse? Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 29 October 353, 1751-1756.
Wearing, C.H. et al., (2003) Screening for resistance in apple cultivars to light brown apple moth, Epiphyas postvittana and green headed leaf roller Planotortrix octo and its relationship to field damage. Entomologia Experimentalis et Applicata 109, 39-53.
Zahner, V., Rabinovitch, L., Suffys, P., & Momen, H. (1999). Genotypic diversity among Brevibacillus laterosporus strains. Applied and environmental microbiology, 65(11), 5182.
Aronson, A. I., & Dunn, P. E. (1991). United States Patent No. US5055293.
Baxter, S.W., Badenes-Perez, F.R., Morrison, A., Vogel, H., Crickmore, N., Kain, W., Wang, P., Heckel, D.G. and Jiggins, C.D. (2011) Parallel evolution of Bacillus thuringiensis toxin resistance in Lepidoptera. Genetics October, 189, 675-679.
Boets, A., Arnaut, G., van Rie, J., & Damme, N. (2011). Belgium Patent No. US 7919609B2.
Bone, L. W., & Singer, S. (1991). United States Patent No. 5045314
de Oliveira, E. J., Rabinovitch, L., Monnerat, R. G., Passos, L. K., & Zahner, V. (2004). Molecular characterization of Brevibacillus laterosporus and its potential use in biological control. Appl Environ Microbiol, 70(11), 6657-6664.
Favret, M.E. and Yousten, A.A. (1985) Insecticidal activity of Bacillus laterosporus. J. Invertebrate Pathology 48,195-203.
Huang, X., Tian, B., Niu, Q., Yang, J., Zhang, L., & Zhang, K. (2005). An extracellular protease from Brevibacillus laterosporus G4 without parasporal crystals can serve as a pathogenic factor in infection of nematodes. Res Microbiol, 156(5-6), 719-727.
Orlova, M. V., Smirnova, T. A., Ganushkina, L. A., Yacubovich, V. Y., & Azizbekyan, R. R. (1998). Insecticidal activity of Bacillus laterosporus. Appl Environ Microbiol, 64(7), 2723-2725.
Rivers, D. B., Vann, C. N., Zimmack, H. L., & Dean, D. H. (1991). Mosquitocidal activity of Bacillus laterosporus. Journal of Invertebrate Pathology, 58, 444-447.
Ruiu, L., Delrio, G., Ellar, D. J., Floris, I., Paglietti, B., Rubino, S., et al. (2006). Lethal and sublethal effects of Brevibacillus laterosporus on the housefly (Musca domestica). Entomologia Experimentalis et Applicata, 118(2), 137-144.
Schnepf, H. E., Narva, K. E., Stockhoff, B. A., Finstad Lee, S., Walz, M., & Sturgis, B. (2002). United States Patent No. US 2002/0120114A1.
Singer, S. (1996). The utility of strains of morphological group II Bacillus. Advances in applied microbiology, 42, 219-261.
Singer, S., Van Fleet, A. L., Viel, J. J., & Genevese, E. E. (1997). Biological control of the zebra mussel Dreissena polymorpha and the snail Biomphalaria glabrata, using Gramicidin S and D and molluscicidal strains of Bacillus. Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, 18(4), 226-231.
Singh, P. (1983) A general purpose laboratory diet mixture for rearing insects. Insect Sci. Application 4, 357-362.
Tabashnik, B.E., Cushing, N.L., Finson, N., Johnson, M.W. (1990) Field Development of Resistance to Bacillus thuringiensis in Diamondback Moth (Lepidoptera: Plutellidae). Journal of Economic Entomology, 83, 1671-1676.
Tabashnik, B.E., Liu, Y., Malvar, T., Heckel, D.G., Masson, L. and Ferre, J. (1998) Insect resistance to Bacillus thuringiensis: uniform or diverse? Phil. Trans. R. Soc. Lond. B 29 October 353, 1751-1756.
Wearing, C.H. et al., (2003) Screening for resistance in apple cultivars to light brown apple moth, Epiphyas postvittana and green headed leaf roller Planotortrix octo and its relationship to field damage. Entomologia Experimentalis et Applicata 109, 39-53.
Zahner, V., Rabinovitch, L., Suffys, P., & Momen, H. (1999). Genotypic diversity among Brevibacillus laterosporus strains. Applied and environmental microbiology, 65(11), 5182.
Claims (23)
- コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）及び１つ以上の蚊種に対する殺虫活性を有する、単離されたブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株であって、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株ＮＭＩ Ｎｏ． Ｖ１２／００１９４６、ブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ） 株ＮＭＩ Ｎｏ． Ｖ１２／００１９４５、及びブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株ＮＭＩ Ｎｏ． Ｖ１２／００１９４４からなる群から選択される、単離されたブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株。
- 前記蚊種が、クレックス・プレビギランス（Ｃｕｌｅｘ ｐｅｒｖｉｇｉｌａｎｓ）及びオピフェックス・フスクス（Ｏｐｉｆｅｘ ｆｕｓｃｕｓ）からなる群から選択される、請求項１に記載の単離されたブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株。
- 生物学的に純粋な培養物の形態である、請求項１又は２のいずれか１項に記載の単離されたブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株。
- ブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株ＮＭＩ Ｎｏ． Ｖ１２／００１９４６の生物学的に純粋な培養物。
- ブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株ＮＭＩ Ｎｏ． Ｖ１２／００１９４５の生物学的に純粋な培養物。
- ブレビバチルス・ラテロスポルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株ＮＭＩ Ｎｏ． Ｖ１２／００１９４４の生物学的に純粋な培養物。
- 請求項１〜３のいずれか１項に記載の１つ以上のＢ． ラテロスポルス（Ｂ． ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株、又は請求項４〜６のいずれか１項に記載の１つ以上の培養物、及び農業的に許容される担体を含有する組成物。
- 請求項１〜３のいずれか１項に記載の２つ又は３つのＢ． ラテロスポルス（Ｂ． ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株、又は請求項４〜６のいずれか１項に記載の２つ又は３つの培養物を含有する、請求項７に記載の組成物。
- 殺虫組成物である、請求項７又は８のいずれか１項に記載の組成物。
- １つ以上の害虫を防除する方法であって、請求項７〜９のいずれか１項に記載の組成物、又は請求項１〜３のいずれか１項に記載の１つ以上のＢ． ラテロスポルス（Ｂ． ｌａｔｅｒｏｓｐｏｒｕｓ）株、又は請求項４〜６のいずれか１項に記載の１つ以上の培養物を、１つ以上の害虫に接触させる工程を含む、当該方法。
- 前記１つ以上の害虫が昆虫である、請求項１０に記載の方法。
- 前記１つ以上の昆虫である害虫が、鱗翅目種及び双翅目種から選択される、請求項１１に記載の方法。
- 前記１つ以上の昆虫が鱗翅目種である、請求項１１又は１２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記鱗翅目がトルトリシダエ（Ｔｏｒｔｒｉｃｉｄａｅ）又はプルテリダエ（Ｐｌｕｔｅｌｌｉｄａｅ）である、請求項１３に記載の方法。
- 前記鱗翅目種がコナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）及びキャベツルーパーモス（Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ）からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
- 前記鱗翅目種が、コドリンガ（Ｃｙｄｉａ ｐｏｍｏｎｅｌｌａ）、コモンフォレストルーパーモス（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｒｅｍｉａ ｓｕａｖｉｓ）、コットンボールワームモス（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ ａｒｍｍｉｇｅｒａ）、ライトブラウンアップルモス（Ｅｐｉｐｈｙａｓ ｐｏｓｔｖｉｔｔａｎａ）、ブラックレグドリーフローラーモス（Ｐｌａｎｏｔｏｒｔｒｉｘ ｎｏｔｏｐｈａｅａ）、及びブラックライアリーフローラーモス（Ｃｎｅｐｈａｓｉａ ｊａｃｔａｔａｎａ）からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
- 前記双翅目種が蚊種である請求項１２に記載の方法。
- 前記蚊種が、クレックス・プレビギランス（Ｃｕｌｅｘ ｐｅｒｖｉｇｉｌａｎｓ）及びオピフェックス・フスクス（Ｏｐｉｆｅｘ ｆｕｓｃｕｓ）からなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
- 前記害虫が線形動物である、請求項１０に記載の方法。
- 前記線形動物がマイクロワームである、請求項１９に記載の方法。
- 前記マイクロワームがパナグレルス・レディビブス（Ｐａｎａｇｒｅｌｌｕｓ ｒｅｄｉｖｉｖｕｓ）である、請求項２０に記載の方法。
- 前記害虫がカリバチである、請求項１０又は１１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記カリバチがベスプラ・ブルガリス（Ｖｅｓｐｕｌａ ｖｕｌｇａｒｉｓ）である、請求項２２に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261704801P | 2012-09-24 | 2012-09-24 | |
| US61/704,801 | 2012-09-24 | ||
| US13/837,735 | 2013-03-15 | ||
| US13/837,735 US10004236B2 (en) | 2012-09-24 | 2013-03-15 | Biocontrol compositions |
| PCT/IB2013/055157 WO2014045131A1 (en) | 2012-09-24 | 2013-06-24 | Biocontrol compositions |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2015535684A JP2015535684A (ja) | 2015-12-17 |
| JP6371288B2 true JP6371288B2 (ja) | 2018-08-15 |
Family
ID=50339061
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2015532530A Active JP6371288B2 (ja) | 2012-09-24 | 2013-06-24 | 生物防除組成物 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10004236B2 (ja) |
| EP (1) | EP2906044B1 (ja) |
| JP (1) | JP6371288B2 (ja) |
| KR (1) | KR102112380B1 (ja) |
| CN (1) | CN104994739A (ja) |
| AU (1) | AU2013319915B2 (ja) |
| BR (1) | BR112015006405B1 (ja) |
| CA (1) | CA2885303C (ja) |
| ES (1) | ES2698100T3 (ja) |
| IN (1) | IN2015DN03185A (ja) |
| NZ (1) | NZ706821A (ja) |
| PL (1) | PL2906044T3 (ja) |
| WO (1) | WO2014045131A1 (ja) |
| ZA (1) | ZA201502782B (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014102697A2 (en) * | 2012-12-24 | 2014-07-03 | Lincoln University | Polynucleotides, polypeptides and methods of use |
| US11130964B2 (en) | 2014-11-20 | 2021-09-28 | Monsanto Technology Llc | Insect inhibitory proteins |
| CA3216879A1 (en) * | 2014-11-20 | 2016-05-26 | Monsanto Technology Llc | Novel insect inhibitory proteins |
| AU2017309380A1 (en) | 2016-08-12 | 2019-01-03 | Lincoln University | Biocontrol compositions |
| US11168314B2 (en) | 2017-09-05 | 2021-11-09 | Department Of Biotechnology | Modified chitinase from Brevibacillus laterosporus LAK 1210 and uses thereof |
| CN107494453B (zh) * | 2017-09-21 | 2020-06-12 | 怀化学院 | 一种短小芽孢杆菌作为鳞翅目类昆虫的生长调节剂的用途 |
| CN107638380B (zh) * | 2017-11-02 | 2020-11-27 | 吕丽娅 | 一种长效驱蚊的儿童驱蚊花露水的制备方法 |
| CN107669616B (zh) * | 2017-11-02 | 2021-07-16 | 乐比(广州)健康产业有限公司 | 一种长效驱蚊花露水的制备方法 |
| WO2021040536A1 (en) * | 2019-08-23 | 2021-03-04 | Ecolibrium Biologicals Holdings Limited | Biocontrol compositions and uses thereof |
| AU2020337732A1 (en) * | 2019-08-23 | 2023-06-29 | Cellora Limited | Bioactive polypeptides and methods related thereto |
| CN111418610A (zh) * | 2020-05-09 | 2020-07-17 | 山东天润和生物工程有限公司 | 侧孢芽孢杆菌在灭除蝇蛆中的应用及其培养方法 |
| KR102562138B1 (ko) * | 2022-12-29 | 2023-08-02 | 넥서스환경디자인연구원(주) | 식물 생장 촉진 활성을 가지는 브레비바실러스 라테로스포러스 균주 및 이의 용도 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5055293A (en) | 1988-03-09 | 1991-10-08 | Purdue Research Foundation | Biological pesticide |
| US5045314A (en) | 1989-11-14 | 1991-09-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Control of parasitic nematode ova/larvae with a bacillus laterosporus |
| AR020141A1 (es) | 1998-08-10 | 2002-04-10 | Mycogen Corp | Toxinas y genes pesticidas de cepas de bacillus laterosporus |
| US7091399B2 (en) | 2000-05-18 | 2006-08-15 | Bayer Bioscience N.V. | Transgenic plants expressing insecticidal proteins and methods of producing the same |
| US6706860B2 (en) | 2000-05-18 | 2004-03-16 | Bayer Bioscience N.V. | Toxins |
| BRPI0110867B1 (pt) * | 2000-05-18 | 2018-04-03 | Bayer Cropscience N.V. | Proteínas inseticidas, proteína híbrida, dna codificando as mesmas, genes quiméricos, processos para controle de insetos e para tornar uma planta resistente a insetos, bem como composição compreendendo as referidas proteínas, e microrganismo |
| CN1194085C (zh) * | 2003-08-13 | 2005-03-23 | 云南大学 | 一种具有杀线虫功能的菌剂及制备方法和应用 |
| AR048685A1 (es) * | 2004-04-09 | 2006-05-17 | Monsanto Technology Llc | Metodos para el control de infestaciones de insectos en plantas. |
| ITMI20061765A1 (it) * | 2006-09-15 | 2008-03-16 | Uni Degli Studi Di Sassari | Ceppo di brevibacillus laterosporus e metodo per il controllo microbiologico di ditteri mediante formulazioni contenuti lo stesso |
| WO2013050867A2 (en) | 2011-10-08 | 2013-04-11 | Gangavaramu Lakshmi Prasanna | A chitinase from brevibacillus laterosporus, its production and use thereof |
-
2013
- 2013-03-15 US US13/837,735 patent/US10004236B2/en active Active
- 2013-06-24 IN IN3185DEN2015 patent/IN2015DN03185A/en unknown
- 2013-06-24 AU AU2013319915A patent/AU2013319915B2/en active Active
- 2013-06-24 BR BR112015006405-1A patent/BR112015006405B1/pt active IP Right Grant
- 2013-06-24 PL PL13838290T patent/PL2906044T3/pl unknown
- 2013-06-24 KR KR1020157010608A patent/KR102112380B1/ko active IP Right Grant
- 2013-06-24 WO PCT/IB2013/055157 patent/WO2014045131A1/en active Application Filing
- 2013-06-24 CA CA2885303A patent/CA2885303C/en active Active
- 2013-06-24 NZ NZ706821A patent/NZ706821A/en unknown
- 2013-06-24 ES ES13838290T patent/ES2698100T3/es active Active
- 2013-06-24 CN CN201380061154.5A patent/CN104994739A/zh active Pending
- 2013-06-24 JP JP2015532530A patent/JP6371288B2/ja active Active
- 2013-06-24 EP EP13838290.8A patent/EP2906044B1/en active Active
-
2015
- 2015-04-23 ZA ZA2015/02782A patent/ZA201502782B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2906044B1 (en) | 2018-08-22 |
| ES2698100T3 (es) | 2019-01-31 |
| AU2013319915A1 (en) | 2015-05-07 |
| US10004236B2 (en) | 2018-06-26 |
| NZ706821A (en) | 2018-09-28 |
| IN2015DN03185A (ja) | 2015-10-02 |
| EP2906044A4 (en) | 2016-06-01 |
| PL2906044T3 (pl) | 2019-04-30 |
| JP2015535684A (ja) | 2015-12-17 |
| KR20150059178A (ko) | 2015-05-29 |
| CN104994739A (zh) | 2015-10-21 |
| ZA201502782B (en) | 2022-10-26 |
| KR102112380B1 (ko) | 2020-05-19 |
| EP2906044A1 (en) | 2015-08-19 |
| US20140086876A1 (en) | 2014-03-27 |
| CA2885303C (en) | 2020-12-29 |
| AU2013319915B2 (en) | 2016-09-22 |
| CA2885303A1 (en) | 2014-03-27 |
| BR112015006405B1 (pt) | 2020-03-31 |
| WO2014045131A9 (en) | 2014-08-21 |
| WO2014045131A1 (en) | 2014-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6371288B2 (ja) | 生物防除組成物 | |
| AU2018204758B2 (en) | Fungal endophytes for improved crop yields and protection from pests | |
| US8709399B2 (en) | Bio-pesticide and method for pest control | |
| Prabhukarthikeyan et al. | Combination of endophytic Bacillus and Beauveria for the management of Fusarium wilt and fruit borer in tomato | |
| WO2005082149A1 (ja) | バチルス属細菌を用いた植物病害の防除方法および防除剤 | |
| Singh et al. | Biocontrol of collar rot disease of betelvine (Piper betle L.) caused by Sclerotium rolfsii by using rhizosphere-competent Pseudomonas fluorescens NBRI-N6 and P. fluorescens NBRI-N | |
| Glazer et al. | Biopesticides in Israel: exploration, development, and applications | |
| Stewart et al. | Utilizing soil microbes for biocontrol | |
| Miller | Management of Spoladea recurvalis (Lepidoptera: Crambidae) on amaranths using biopesticides | |
| Thakur et al. | Ajar Nath Yadav2, Harcharan Singh Dhaliwal2, Rajesh Thakur3 and Seema Thakur3 | |
| Sönmez | Myriodontium keratinophilum (Ascomycota: Myriodontium) as a Potential Entomopathogenic Fungus for a Wide Range of Pests | |
| Nethravathi et al. | Bioefficacy of Chikkamagalur native Bacillus thuringiensis isolates against lepidopteran insects | |
| Ahmed | Use of entomopathogenic fungi in biological control of cotton mealybug (Phenacoccus solenopsis) and mustard aphid (Lipaphis erysimi) | |
| Manju Kumari et al. | Evaluation of local Bacillus thuringiensis from the soils of Western Ghats, Karnataka and their biocontrol potential against white grub, Holotrichia serrata (F.)(Coleoptera) and house fly, Musca domestica L.(Diptera). | |
| Sloaa | Maittt of^ l) ilosl09^ p |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160602 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170329 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170411 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170710 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171002 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180227 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180523 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180612 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180712 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6371288 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |