JP6335462B2 - 製紙廃棄物からのエタノールの製造方法 - Google Patents
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Description
未利用なバイオマス資源である農産廃棄物からのエタノール生産は、成分であるセルロースやヘミセルロースなどを分解・発酵させてエタノールを生産する微生物が利用される。
S.cerevisiaeは、セルロース分解酵素(セルラーゼ)を分泌せず、さらに、5炭糖を資化できるものの発酵性を有しない。また、キシロース発酵酵母であるCandida sheataeやPichia stipitisは、5炭糖は発酵するもののセルラーゼ等は分泌しない。さらに、セルラーゼを多量に分泌する糸状菌Trichoderma resseiやAcremonium cellulolyticusはエタノール発酵能を有していない。
一般の発酵微生物と市販の酵素剤を混合し、一つの発酵槽内で糖化と発酵を同時に行う同時糖化発酵システムは、市販の酵素剤を利用するため、酵素製造に関する経費が増大し、エタノール製造コストが向上することが問題である。
以下、本発明を詳細に説明する。
ムコール・シイルシネロイデェス(Mucor circinelloides)
ムコール・フラギリス(Mucor fragilis)
ムコール・ヘマリス(Mucor hiemalis)
ムコール・イナエクイスポラス(Mucor inaequisporus)
ムコール・オブロンジエリプティカス(Mucor oblongiellipticus)
ムコール・ラセモサス(Mucor racemosus)
ムコール・レクルバス(Mucor recurvus)
ムコール・サトゥルニナス(Mocor saturninus)
ムコール・サブティリススミウス(Mocor subtilissmus)
リゾムコール・プシルス(Rhizomucor pusillus)
カビ:”The Genera of Hyphomycetes from soil”, G.L.Barron, Baltimore, Maryland, Williams and Wilkins(1968).
”Compendium of soil Fungi”, K.H.
Domsh, W. Gams, T. Anderson, New York, Academic Press(1980).
ムコール・アンビグス(NBRC6742)
ムコール・シイルシネロイデェス(NBRC4572,4554,4569,4574,5382,5774,30470,4563,6746)
ムコール・フラギリス(NBRC9402)
ムコール・ヘマリス(NBRC9400,9407,6754)
ムコール・イナエクイスポラス(NBRC8635)
ムコール・オブロンジエリプティカス(NBRC9258)
ムコール・ラセモサス(NBRC6745)
ムコール・レクルバス(NBRC8093)
ムコール・サトゥルニナス(NBRC9562)
ムコール・サブティリススミウス(NBRC6755)
リゾムコール・プシルス(NBRC4578)
これらのカビは、野生株または変異株のいずれの株も用いることができる。また、これらのカビは、単独または混合して使用することができる。
発行の微生物カタログ第1版(2005年)に記載されており、それぞれのアクセション番号をもとにNBRCなどのセルバンクから入手することができる。
ここで用いられるセルラーゼ剤は特に限定されず、市販のセルラーゼ剤を用いればよい。セルラーゼ剤は複数組み合わせでカクテルとすることができ、例えば、アクセラーゼ・メイセラーゼ・ペクチナーゼのセルラーゼカクテルなどが挙げられる。
また、糖化発酵同時進行の場合、本発明のセルラーゼの分泌能を有するエタノール発酵微生物のみを発酵槽へ投入し、ペーパースラッジへの糖化と発酵を行うことから、酵素製造に係わるコストは必要としない。
すなわち、本発明により、ペーパースラッジのような産業廃棄物を含む未利用セルロース系バイオマスからバイオ燃料として利用されているエタノールを安価に製造することが可能となる。
硫酸アンモニウム(0.75%)、リン酸水素二カリウム(0.35%)、塩化カルシウム(0.1%)、硫酸マグネシウム・7水和物(0.075%)、酵母エキス(0.5%)、pH7.5の液体培地に、グルコース(2%)を含む寒天プレートで、ケカビ目の接合菌株を28℃で3〜5日培養した後、寒天プレートを粉砕し生理食塩液に懸濁させた。
生ペーパースラッジ(5%)を含有する上記の25mLに、上記懸濁液1mLを加え、28℃、120時間嫌気下で振とう培養した。
ペーパースラッジ発酵能を有するケカビによるエタノール生産を表1に示す。また、ペーパースラッジ発酵能を有するケカビによるペーパースラッジからのエタノール生産とセルラーゼ(エンド−β−グルカナーゼ)生産を表2に示す。
<同時糖化発酵によるペーパースラッジからのエタノール製造>
硫酸アンモニウム(0.75%)、リン酸水素二カリウム(0.35%)、硫酸マグネシウム・7水和物(0.075%)、酵母エキス(0.5%)、pH5.5の液体培地に、セルラーゼカクテル(1L中のタンパクとして、アクセラーゼ1.393g、メイセラーゼ0.943、ペクチナーゼ0.6464gを含有)3g(タンパク/L)およびペーパースラッジ100g/Lの培地で、ムコール・シイルシネロイデェス(NBRC4563)を28℃で振とう培養した。その結果を図1に示す。
<ペーパースラッジの前処理>
(1)生ペーパースラッジ中のセルロースに付着している無機・有機成分を水洗した。
具体的には、生ペーパースラッジ 1kgを20Lの洗浄容器に入れ、そこへ10Lの蒸留水を加え、常温で48時間ゆっくり撹拌した。このペーパースラッジ懸濁液を、ガーゼを3枚重ねたザルでこし取り、再度、5Lの蒸留水で24時間以上洗浄した。再度、水で洗浄したペーパースラッジを、ガーゼを重ねたザルでこし取り、得られた固形物を試料とした。
ペーパースラッジ中の各成分の水洗前後の変化を表3に示した。
具体的には、生ペーパースラッジ1kgを20Lの洗浄容器に入れ、そこへ5Lの1N塩酸を加え、常温で48時間ゆっくり撹拌した。このペーパースラッジ懸濁液を、ガーゼを3枚重ねたザルでこし取り、得られた固形物を再び10Lの容器に入れ、そこへ2Lの蒸留水を加え24時間ゆっくり撹拌しながら1Nの水酸化ナトリウム水溶液を加え中和した。中和したペーパースラッジ懸濁液を再びガーゼを重ねたザルでこし取り、再度、5Lの蒸留水で24時間以上洗浄した。再度、ガーゼを重ねたザルでこし取り、得られた固形物を試料とした。
ペーパースラッジ中の各成分の塩酸処理前後の変化を表4に示した。
培養24時間目までエタノール生産量は急激に増加し、培養72時間目に18g/Lのエタノールを得ることに成功した。このときの最大収率は、約70%、最大エタノール生産性は0.48g/L/hに達した。この結果から、生のペーパースラッジ中には製紙製造工程で使用される填料(炭酸カルシウム、カオリン)、界面活性剤、インクなど多くの不純物が含まれ、特に、カルシウム塩が生物変換反応の妨げになっていることが明かとなった。
<同時糖化発酵によるペーパースラッジテールからのエタノール製造>
硫酸アンモニウム(0.75%)、硫酸アンモニウム・7水和物 0.075%)、リン酸水素二カリウム(0.35%)、塩化カルシウム・2水和物(0.1%)、硫酸マグネシウム・7水和物(0.075%)、酵母エキス(0.5%)、pH5.5の液体培地に、ペーパースラッジテール80g/Lの培地で、ムコール・シイルシネロイデェス(NBRC4563)を28℃で振とう培養した。その結果を図2に示す。
Claims (4)
- 製紙廃棄物から発酵によりエタノールの製造する方法であって、
ムコール・アンビグス(NBRC6742)
ムコール・シイルシネロイデェス(NBRC4563,4572,4574)
リゾムコール・プシルス(NBRC4579,6746)
の野生株から選ばれる接合菌門・接合菌綱・ケカビ目に属するカビを用いることを特徴とするエタノールの製造方法において,前記発酵が,前記カビの他にはセルラーゼ供給源を組み合わせない糖化発酵同時進行させるエタノールの製造方法。 - 製紙廃棄物がペーパースラッジである請求項1に記載のエタノールの製造方法。
- 前処理工程を含む請求項1または2に記載のエタノールの製造方法。
- 前処理工程が、水洗処理および/または塩酸処理である請求項3に記載のエタノールの製造方法。
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