JP6329767B2 - Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物、その種子および植物部位ならびにそれらを獲得する方法 - Google Patents
Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物、その種子および植物部位ならびにそれらを獲得する方法 Download PDFInfo
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Description
本出願はＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）植物、詳細にはＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ植物、ならびにそれらの種子、果実および／または植物部位に関する。さらなる態様によると、本発明はＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物を獲得する方法に関する。加えて本発明は、このＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性を提供する量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）、およびこの量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）を同定するための分子マーカー、詳細にはランダム増幅マイクロサテライト多型（ＲＡＭＰ）マーカーに関する。
土壌に結合した微生物であるネコブカビ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ）は、アブラナ科植物（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ）における根こぶ病の原因である。アブラナ属（Ｂｒａｓｓｉｃａ）は、アブラナ科（Ｂｒａｓｓｉｃａｃｅａｅ（以前はＣｒｕｃｉｆｅｒａｅ）科）の中の植物属である。この属のメンバーはまとめてキャベツまたはカラシと呼ばれる。アブラナ属は多数の重要な農業作物および園芸作物を含み、これらとしてはセイヨウアブラナ、カリフラワー、赤キャベツ、チリメンキャベツ、白キャベツ、オックスハートキャベツ、縮れケールキャベツ、ブロッコリー、芽キャベツ、ハクサイ、コールラビおよびポルトガルキャベツ（トロンシューダ）が挙げられる。
植物のほとんど全ての部位、例えば根（カブ）、茎（コールラビ）、葉（白キャベツおよび赤キャベツ、チリメンキャベツ）、腋芽（芽キャベツ）、花（カリフラワー、ブロッコリー）、苗および種子（セイヨウアブラナ）などが食料として用いられる。白色もしくは紫色の花または独特な色もしくは形状の葉を有するいくつかの種は、観賞目的でさらに栽培される。
Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅによる侵入は、キャベツ植物の根毛を介して起こる。Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅの遊走子が根に入り込むと、この胞子は感染部位周辺の細胞を肥大（細胞増大）および過形成（細胞分裂）へと誘導する。これらのプロセスに対するホルモン刺激は植物の中でさらに深く拡散し、その結果、これらの構造変化は感染していない細胞の中でもまた起こり得る。
Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅは植物の中で菌糸を形成しないが、組織中で細胞内部に生じる変形体の形で現われる。この変形体は遊走子嚢を形成することによりさらなる損傷を根にもたらし、この遊走子嚢から新しい遊走子が放出される。疾病は高度に膨潤した根によって特徴付けられ、疾病プロセスがさらに進行すると、この根は腐敗のために崩壊する。形成された病原体の卵胞子はここで地中に放出される。損傷を受けた根系のために水およびミネラルの取込みが妨げられるため、宿主植物の地上部はさらに成長が遅れる。
世界のキャベツ栽培地域の１０％はＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅに感染していると推測される。これは相当な年間収量損失を結果として生じさせる。
食料生産のためのアブラナ属植物の重要性および病原菌Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅにより引き起こされる経済的損害に鑑み、本発明はその目的のためにＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物およびこれを獲得する方法を提供しなければならない。
食料生産のためのＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物へのニーズは、この疾病と戦う適切な、費用効果の高い効率的な手段の欠如、例えばこの病原菌に対する殺菌剤が利用できないことなどによって、さらに強調される。Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅは、世界的に最も重要なアブラナ科植物に対する病原菌の１つである。
本発明の上述の目的は、とりわけ、第一の態様により、添付された請求項１に記載のＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物を提供することによって達成される。
本発明の上述の目的は、とりわけ、第一の態様により、抵抗性を付与する２以上の遺伝的因子をゲノム中に含むＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ科植物によって具体的に提供され、抵抗性を付与する遺伝的因子の存在は、量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）および量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）の存在により決定することが可能であり、
量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）は、配列番号１（プライマー１．１）およびプライマー７の組合せによる２９２〜２９６ｂｐの断片；配列番号２（プライマー１．２）およびプライマー７の組合せによる６９〜７３ｂｐの断片；配列番号３（プライマー１．３）およびプライマー７の組合せによる１１３〜１１７ｂｐの断片；配列番号４（プライマー１．４）およびプライマー７の組合せによる２１４〜２１７ｂｐまたは２１５〜２１９ｂｐの断片；ならびに配列番号２４（プライマー１．５）およびプライマー７の組合せによる２０１〜２０５ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）は、配列番号９（プライマー３．１）およびプライマー７の組合せによる１５７〜１６９ｂｐの断片；配列番号１０（プライマー３．２）およびプライマー７の組合せによる１３３〜１３７ｂｐの断片；配列番号１１（プライマー３．３）およびプライマー７の組合せによる２１８〜２２２ｂｐの断片；ならびに配列番号１２（プライマー３．４）およびプライマー７の組合せによる７３〜７７ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）は、配列番号１６（プライマー５．１）およびプライマー７の組合せによる２７４〜２７８ｂｐの断片；配列番号１７（プライマー５．２）およびプライマー７の組合せによる５３３〜５３７ｂｐの断片；配列番号１８（プライマー５．３）およびプライマー７の組合せによる３３３〜３４１ｂｐの断片；ならびに配列番号１９（プライマー５．４）およびプライマー７の組合せによる２１７〜２２５ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる。
量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）は、配列番号１（プライマー１．１）およびプライマー７の組合せによる２９２〜２９６ｂｐの断片；配列番号２（プライマー１．２）およびプライマー７の組合せによる６９〜７３ｂｐの断片；配列番号３（プライマー１．３）およびプライマー７の組合せによる１１３〜１１７ｂｐの断片；配列番号４（プライマー１．４）およびプライマー７の組合せによる２１４〜２１７ｂｐまたは２１５〜２１９ｂｐの断片；ならびに配列番号２４（プライマー１．５）およびプライマー７の組合せによる２０１〜２０５ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）は、配列番号９（プライマー３．１）およびプライマー７の組合せによる１５７〜１６９ｂｐの断片；配列番号１０（プライマー３．２）およびプライマー７の組合せによる１３３〜１３７ｂｐの断片；配列番号１１（プライマー３．３）およびプライマー７の組合せによる２１８〜２２２ｂｐの断片；ならびに配列番号１２（プライマー３．４）およびプライマー７の組合せによる７３〜７７ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）は、配列番号１６（プライマー５．１）およびプライマー７の組合せによる２７４〜２７８ｂｐの断片；配列番号１７（プライマー５．２）およびプライマー７の組合せによる５３３〜５３７ｂｐの断片；配列番号１８（プライマー５．３）およびプライマー７の組合せによる３３３〜３４１ｂｐの断片；ならびに配列番号１９（プライマー５．４）およびプライマー７の組合せによる２１７〜２２５ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる。
本発明による植物についての上記定義によると、本発明はＱＴＬ１およびＱＴＬ３を含むアブラナ属植物、ＱＴＬ１およびＱＴＬ５を含む植物ならびにＱＴＬ１、ＱＴＬ３およびＱＴＬ５を含む植物に関するものであることに留意すべきである。
本発明のこの第一の態様によると、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のＢｒａｓｓｉｃａ植物が提供される。この植物は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅの４つの病原型全てに対する抵抗性を含む。言い換えれば、この植物はＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ病原型０、Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩに対する抵抗性を含む。
本文脈中で用いられるプライマー７は、市販のＲＡＰＤプライマー（Ｏｐｅｒｏｎ ＲＡＰＤ １０ｍｅｒキット Ａ−０１からＢＨ−２０まで）である。
本発明の好ましい実施形態によると、この植物はそのゲノム中に、上で定義される量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）および量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）を含む。
さらに好ましい実施形態によると、この植物は量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）についてホモ接合性である。
本発明の別の好ましい実施形態によると、この植物はそのゲノム中に抵抗性を付与する３以上の因子をも含み、抵抗性を付与する遺伝的因子の存在は、量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）、量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）および／または量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）の存在により決定することが可能であり、
量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）は、配列番号５（プライマー２．１）およびプライマー７の組合せによる７４０〜７５０ｂｐの断片；配列番号６（プライマー２．２）およびプライマー７の組合せによる１４１〜１４５ｂｐの断片；配列番号７（プライマー２．３）およびプライマー７の組合せによる１６７〜１７１ｂｐの断片；ならびに配列番号８（プライマー２．４）およびプライマー７の組合せによる２９３〜２９７ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）は、配列番号１３（プライマー４．１）およびプライマー７のプライマーの組合せによる３１４〜３１８ｂｐの断片；配列番号１４（プライマー４．２）およびプライマー７の組合せによる２４０〜２４４ｂｐの断片；ならびに配列番号１５（プライマー４．３）およびプライマー７の組合せによる１１２〜１１６ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）は、配列番号２０（プライマー６．１）およびプライマー７の組合せによる２０１〜２０５ｂｐの断片；配列番号２１（プライマー６．２）およびプライマー７の組合せによる２９１〜２９５ｂｐの断片；配列番号２２（プライマー６．３）およびプライマー７の組合せによる１８３〜１８７ｂｐの断片；ならびに配列番号２３（プライマー６．４）およびプライマー７の組合せによる３７５〜３７９ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる。
量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）は、配列番号５（プライマー２．１）およびプライマー７の組合せによる７４０〜７５０ｂｐの断片；配列番号６（プライマー２．２）およびプライマー７の組合せによる１４１〜１４５ｂｐの断片；配列番号７（プライマー２．３）およびプライマー７の組合せによる１６７〜１７１ｂｐの断片；ならびに配列番号８（プライマー２．４）およびプライマー７の組合せによる２９３〜２９７ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）は、配列番号１３（プライマー４．１）およびプライマー７のプライマーの組合せによる３１４〜３１８ｂｐの断片；配列番号１４（プライマー４．２）およびプライマー７の組合せによる２４０〜２４４ｂｐの断片；ならびに配列番号１５（プライマー４．３）およびプライマー７の組合せによる１１２〜１１６ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）は、配列番号２０（プライマー６．１）およびプライマー７の組合せによる２０１〜２０５ｂｐの断片；配列番号２１（プライマー６．２）およびプライマー７の組合せによる２９１〜２９５ｂｐの断片；配列番号２２（プライマー６．３）およびプライマー７の組合せによる１８３〜１８７ｂｐの断片；ならびに配列番号２３（プライマー６．４）およびプライマー７の組合せによる３７５〜３７９ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる。
本発明による植物についての上記定義によると、本発明はＱＴＬ１およびＱＴＬ３を含むアブラナ属植物、ＱＴＬ１およびＱＴＬ５を含む植物ならびにＱＴＬ１、ＱＴＬ３およびＱＴＬ５を含む植物に関し、前記植物はＱＴＬ２、ＱＴＬ４またはＱＴＬ６をさらに含み、したがってＱＴＬ１、ＱＴＬ３およびＱＴＬ２；ＱＴＬ１、ＱＴＬ３およびＱＴＬ４；ＱＴＬ１、ＱＴＬ３およびＱＴＬ６を含む植物、ＱＴＬ１、ＱＴＬ５およびＱＴＬ２；ＱＴＬ１、ＱＴＬ５およびＱＴＬ４；ＱＴＬ１、ＱＴＬ５およびＱＴＬ６を含む植物、ならびにＱＴＬ１、ＱＴＬ３、ＱＴＬ５およびＱＴＬ２；ＱＴＬ１、ＱＴＬ３、ＱＴＬ５およびＱＴＬ４；ＱＴＬ１、ＱＴＬ３、ＱＴＬ５およびＱＴＬ６を含む植物、ならびにＱＴＬ１から６またはＱＴＬ１から５またはＱＴＬ１から４を含む植物に関するものであることに留意すべきである。
別の好ましい実施形態によると、本発明による植物は、そのゲノム中に上で定義される量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）、量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）および／または量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）をさらに含む。
本発明の好ましい実施形態によると、この量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）は、上で定義されるマーカーごとに２以上のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる。
本発明の好ましい実施形態によると、この量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）は、上で定義されるＱＴＬごとに３以上のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる。
本発明の好ましい実施形態によると、この量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）は、上で定義されるＱＴＬごとに４以上のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる。
本発明の特に好ましい実施形態によると、このＱＴＬ１の存在は、上で定義される５つのＲＡＭＰマーカーによって指し示される。
本発明のいっそう特に好ましい実施形態によると、このＱＴＬの存在は定義される全てのマーカーによって指し示される。
本発明の好ましい実施形態によると、植物はＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ植物である。
本発明のさらに好ましい実施形態によると、植物はＢ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ（カリフラワー、ロマネスコブロッコリー）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ．ｃｙｍｏｓａ（ブロッコリー）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ．ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ（発芽ブロッコリー）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ．ｇｅｍｎｉｆｅｒａ（芽キャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ．ａｌｂａ（白キャベツ、オックスハートキャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ．ｒｕｂｒａ（赤キャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ．ｓａｂａｕｄａ（チリメンキャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ａｃｅｐｈａｌａ ｖａｒ．ｓａｂｅｌｌｉｃａ（縮れケールキャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ．ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ（コールラビ）およびＢ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ．ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ．ｃｏｓｔａｔａ（ポルトガルキャベツ）よりなる群から選ばれるアブラナ属植物である。
上に概説した本発明による植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６８５またはＮＣＩＭＢ４１６８６の植物に由来するＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性を好ましくは有しており、これらの寄託番号の植物はＮＣＩＭＢ Ｌｔｄ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ、Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ Ｅｓｔａｔｅ、Ｂｕｃｋｓｂｕｒｎ、Ａｂｅｒｄｅｅｎ ＡＢ２１ ９ＹＡ、Ｅｎｇｌａｎｄから入手可能である。
上に概説した本発明による植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６８５またはＮＣＩＭＢ４１６８６の植物中で見出されるＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性を好ましくは有しており、これらの寄託番号の植物はＮＣＩＭＢ Ｌｔｄ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ、Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ Ｅｓｔａｔｅ、Ｂｕｃｋｓｂｕｒｎ、Ａｂｅｒｄｅｅｎ ＡＢ２１ ９ＹＡ、Ｅｎｇｌａｎｄから入手可能である。
上に概説した本発明による植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６８５またはＮＣＩＭＢ４１６８６の植物に好ましくは由来し、これらの寄託番号の植物はＮＣＩＭＢ Ｌｔｄ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ、Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ Ｅｓｔａｔｅ、Ｂｕｃｋｓｂｕｒｎ、Ａｂｅｒｄｅｅｎ ＡＢ２１ ９ＹＡ、Ｅｎｇｌａｎｄから入手可能である。
本発明による有利な植物は、寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６８５またはＮＣＩＭＢ４１６８６の植物であり、これらはＮＣＩＭＢ Ｌｔｄ、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ、Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ Ｅｓｔａｔｅ、Ｂｕｃｋｓｂｕｒｎ、Ａｂｅｒｄｅｅｎ ＡＢ２１ ９ＹＡ、Ｅｎｇｌａｎｄから入手可能である。
本発明によるアブラナ属植物のこの有利な抵抗性に鑑み、本発明はまたさらなる態様によってこのアブラナ属植物の種子、果実および／または植物部位に関し、これらは上で定義される量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）および量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）を含む。
この態様の実施形態によると、このアブラナ属植物の種子、果実および／または植物部位はまた、上で定義される量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）、量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）および／または量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）を含む。
さらなる態様によると、本発明はまたＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａを提供する方法に関し、この方法は、アブラナ属植物における、上で定義される量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）および量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）の遺伝子移入またはゲノム結合を含む。
この態様の特別に推奨される実施形態によると、前記方法は、アブラナ属植物における、上で定義される量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）、量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）および／または量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）の遺伝子移入またはゲノム結合をさらに含む。
この態様の別の好ましい実施形態によると、本方法は、アブラナ属植物における、上で定義される１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーの存在を決定するための分子生物学的技術をさらに含む。
この態様の好ましい実施形態によると、アブラナ属植物は量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、３（ＱＴＬ３）および５（ＱＴＬ５）についてホモ接合性である。
なお別の態様によると、本発明は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物、好ましくはＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ植物、例えば本発明による植物などを提供するための、上で定義される量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）の使用に関する。
なお別の態様によると、本発明は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物、例えば本発明による植物などを提供するための、配列番号１〜２４（プライマー１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、２．１、２．２、２．３、２．４、３．１、３．２、３．３、３．４、４．１、４．２、４．３、５．１、５．２、５．３、５．４、６．１、６．２、６．３および６．４）よりなる群から選択される１つまたは複数のプライマーの使用に関する。
なお別の態様によると、本発明は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物を提供するための、本発明による植物の使用または本発明による種子、果実および／もしくは植物部位の使用に関する。
本発明は、好ましい実施形態の例に基づいて、本明細書において以下にさらに説明される。しかしながら、この例は専ら説明目的のために提供されるものであり、決して上記発明を限定するためのものではないと理解されるべきである。
Ｂｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａにおけるＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性を目的とした育種は複雑なプロセスである。Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅの複数の病原型については記載があり、抵抗性はＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａにおいて極めて稀に生じる。
本明細書に記載される、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅに対する幅広い抵抗性を有するＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ植物を獲得するために、優性抵抗性を持つ遺伝的供給源が使用される。加えて、抵抗性が多重遺伝子的に決定される遺伝的供給源が使用される。戻し交雑プログラムを介して、抵抗性は様々な遺伝的背景（感受性親系統）の中に導入される。
感受性植物を用いた各交雑に続いて、自家生殖を行った。この生殖の子孫は温室試験においてそれらの抵抗性レベルを試験されなければならない。それゆえ、新たな交雑の影響を調べるのに１年生植物の場合は世代あたり最低２年かかり、２年生植物の場合は最低３年かかる。
抵抗性試験は、成長発育中の幼若植物の根を、根こぶ病接種物に接触させることにより実施された。この接種物は、試験の開始１日前に、根こぶ病の感染が確定した単離物からの冷凍キャベツの根１５０グラムを細かく粉砕して、これを４０００グラムの培養土と混合することにより、調製された。続いて、混合物が完全に浸されるまで、混合物に水を加えた。接種物は、Ｐ．ｂｒａｓｓｉｃａｅ胞子が土壌／水混合物全体に活発に拡散することができるよう、２０℃で１日保存された。接種の日に、被検材料の５日齢苗を１ｃｃの土壌／水／Ｐ．ｂｒａｓｓｉｃａｅ混合物中に移植した。この目的のため、接種用量は、温室の足場に配置された１０ｃｍの培養土の層上への移植作業の直前に設定された。植物はその後６週間、それぞれ１６時間および８時間の昼／夜リズムならびに２０／１６℃の昼／夜温度を有する照明温室の中で栽培された。
評価の前に、植物は注意深く採集され、きれいに洗われた。これは白と黒に割り切った抵抗性反応を伴うものではないため、レベルは定量値として表された｛０（完全に抵抗性）から９（完全に感受性）｝。カテゴリー９の根は高度に感受性であり、重度の膨潤を呈した。カテゴリー０の根は全く膨潤しない。様々な遺伝的背景における抵抗性は、単純なメンデル的挙動ではなく、正規分布の範囲内で表現型の漸次的変化を示すことが見出された。この分布は感受性側に急激にシフトすることが可能であるが、このことは抵抗性供給源と様々な感受性親系統との間の交雑からの自殖集団が異なる割合の抵抗性植物を生み出すことを示唆している。
集団中の植物の分離比および抵抗性レベルの差異に基づいて、植物の抵抗性レベルは多数の遺伝的因子によって決定されることが見出された。量的形質をＤＮＡマーカーを用いてマッピングするために、ＱＴＬ分析が通常使用される。ＱＴＬは独立した染色体領域であり、基礎的遺伝子に連結されて、共に形質を説明または定義する。
ＤＮＡマーカーを用いて、多様な遺伝的背景を有するＢｒａｓｓｉｃａ ｏｌｅｒａｃｅａ交雑集団に対するゲノムスパニングＱＴＬ分析が実施された。これらの異なる集団の植物を用いて、個々の植物の抵抗性レベルを決定するために温室試験が行われた。マーカー分析のデータを温室試験スコアのデータと組み合わせることによって、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性の原因であるＱＴＬを同定することが可能であった。
抵抗性レベルに対して大なり小なりに寄与する、合計６つの独立した遺伝性ＱＴＬが同定された。温室試験において観察される植物間の抵抗性レベルの変動は、ＱＴＬの存在および／または欠如が原因である。これらの１つを主たるＱＴＬ（ＱＴＬ１）と指定することが可能であり、これは幅広く有効な抵抗性を少しでも獲得するために常に存在していなければならないものである。
ＱＴＬ１と同じように、ＱＴＬ３および５は抵抗性レベルに対して寄与し、この寄与は主たるＱＴＬのそれと同様の強さではないが、遺伝的背景からも独立している。その他の３つのＱＴＬ（ＱＴＬ２、４および６）は、おそらくは抵抗性レベルの変動を引き起こす修飾的な役割を持つ。
ＱＴＬ１から６に連結されたＤＮＡマーカーの使用は、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅに抵抗性である植物の選択を可能にした。多重領域に位置する形質の選択は、大きな選択集団を必要とする。抵抗性植物と感受性植物との間の交雑を起源とする個体から作成される自殖集団において、供給源からの３つの最も重要なＱＴＬホモ接合性を伴って植物が実際に存在する確率は１：６４である。
ＤＮＡマーカーを使用した選択は反復戻し交雑を実施するという選択肢を提供し、選択は根こぶ病抵抗性に関与するＱＴＬについて行われる（マーカー支援反復戻し交雑、ＭＡＲＢ）。この方法において交雑世代あたり１年または２年の時間を稼ぐことができ、このことは育種プログラムにおいて１０年から２０年の加速を意味する。
疾病テストから高い抵抗性レベルを有する植物を獲得することが可能であったが、しかしこれは１つまたは複数のＱＴＬをヘテロ接合型で有するものである。ＤＮＡマーカーの使用は、育種プログラムにおいて集団からの根こぶ病抵抗性植物について分析する可能性、および所望の植物の事前選択を行う可能性を提供した。
この事前選択のために出発材料として用いられたのは、所望の園芸的な品質形質を有する選択された植物であった。これらの植物は部分的にヘテロ接合性であったが、交雑品種の親として機能できるよう、これらは完全にホモ接合性とされなければならなかった。
受容植物においてＱＴＬの全ての遺伝子移入をホモ接合性とする方法は、二ゲノム性半数体の誘導を介するものであった。アブラナ属植物において二ゲノム性半数体を誘導する方法は、様々な刊行物中に記載されている（いくつかの例について参考文献１および参考文献２を参照のこと）。
再生成された植物それぞれの倍数性レベルが決定され（Ｐａｒｔｅｃ ＣＡ−ＩＩ、Ｐａｒｔｅｃ、Ｍｕｎｓｔｅｒ）、二ゲノム性半数体植物のみが保持された。
ＱＴＬは、供給源からの遺伝子移入を特徴付ける表２に記載される多数のＤＮＡマーカーによって、それぞれ特徴付けられる。
ＤＮＡマーカーはＲＡＭＰ技術を使用して生成される。ＲＡＭＰ技術は、ｉＳＳＲおよびＲＡＰＤプライマーが組み合わされたもので、抵抗性と特異的に共分離されるＤＮＡ断片をその中に有するバンドパターンを生み出し、これによりＱＴＬ遺伝子移入を含む個体とＱＴＬ遺伝子移入を含まない個体との間の区別が可能である。ＲＡＭＰ断片のマッピングおよび抵抗性スコアの表現型解析によって、ＱＴＬを形成する密接に関連したＲＡＭＰマーカーが同定され、これらのマーカーの概要は表２中に示される。関与する「連鎖群」上でのＱＴＬの位置およびＱＴＬ内のマーカーの相互距離はセンチモルガン（ｃＭ）で与えられる。
ＤＮＡマーカーが生成された一般的なＰＣＲ条件は下の概要の中に示される。
ＲＡＭＰ反応用のＰＣＲ混合物：
反応あたり
約０．２ｎｇ／μｌ 植物ゲノムＤＮＡ
７５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）
２０ｍＭ ＮＨ４ＳＯ４
０．０１％（ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ２０
２．８０ｍＭ ＭｇＣｌ２
０．２５ｍＭ ｄＮＴＰｓ
０．１２μＭ フォワードプライマー
０．２９μＭ リバースプライマー
０．０４ユニット／μｌ Ｒｅｄ Ｈｏｔ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼ（ＡＢｇｅｎｅ、Ｅｐｓｏｍ）
反応あたり
約０．２ｎｇ／μｌ 植物ゲノムＤＮＡ
７５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）
２０ｍＭ ＮＨ４ＳＯ４
０．０１％（ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ２０
２．８０ｍＭ ＭｇＣｌ２
０．２５ｍＭ ｄＮＴＰｓ
０．１２μＭ フォワードプライマー
０．２９μＭ リバースプライマー
０．０４ユニット／μｌ Ｒｅｄ Ｈｏｔ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼ（ＡＢｇｅｎｅ、Ｅｐｓｏｍ）
ＰＣＲプログラム ＲＡＰＤ３５：
サイクル数
ステップ１：２分 ９３℃ １
ステップ２：３０秒 ９３℃
ステップ３：３０秒 ４０℃
ステップ４：０．３℃／秒で７２℃まで加熱
ステップ５：１分３０秒 ７２℃
ステップ２〜５を繰り返す ４０
ステップ６：５分 ７２℃ １
サイクル数
ステップ１：２分 ９３℃ １
ステップ２：３０秒 ９３℃
ステップ３：３０秒 ４０℃
ステップ４：０．３℃／秒で７２℃まで加熱
ステップ５：１分３０秒 ７２℃
ステップ２〜５を繰り返す ４０
ステップ６：５分 ７２℃ １
ＰＡＧＥ／Ｌｉｃｏｒ
ＲＡＭＰパターンの分析のため、「Ｇｅｎｅ ＲｅａｄＩＲ ４２００ ＤＮＡアナライザー」（Ｌｉｃｏｒ Ｉｎｃ．）が使用された。最適濃度の６．５％アクリルアミドを基にして、断片は単一塩基にまで分離可能である。このシステム上で断片を可視化するために、標識化（ＩＲＤｙｅ標識）プライマーを用いることが必要である。この目的のため、フォワードプライマーの３分の１の量が同じ配列を有する標識化プライマーに置き換えられた。
ＲＡＭＰパターンの分析のため、「Ｇｅｎｅ ＲｅａｄＩＲ ４２００ ＤＮＡアナライザー」（Ｌｉｃｏｒ Ｉｎｃ．）が使用された。最適濃度の６．５％アクリルアミドを基にして、断片は単一塩基にまで分離可能である。このシステム上で断片を可視化するために、標識化（ＩＲＤｙｅ標識）プライマーを用いることが必要である。この目的のため、フォワードプライマーの３分の１の量が同じ配列を有する標識化プライマーに置き換えられた。
マーカー概要
表２において言及されるプライマーが、表１において言及されるＤＮＡマーカーを生成するために用いられる。
表２において言及されるプライマーが、表１において言及されるＤＮＡマーカーを生成するために用いられる。
様々なプライマーの組合せを使用したＰＣＲ反応は、特異的な大きさ（表１を参照）のＱＴＬ遺伝子移入断片を形成する。これらのＤＮＡマーカーは関与するＱＴＬに特徴的である。ＱＴＬを特徴付けるこれらのＤＮＡマーカーの組合せは、Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性供給源からのＱＴＬ遺伝子移入の存在の明白な証拠を提供する。
定義
センチモルガン（ｃＭ）：
マーカー間の遺伝的距離についての単位であり、１００個体あたりの交差数に基づく。
センチモルガン（ｃＭ）：
マーカー間の遺伝的距離についての単位であり、１００個体あたりの交差数に基づく。
ＤＮＡマーカー：
遺伝子と連鎖するまたはゲノム上の既知の位置の染色体断片中にあるＤＮＡ断片であり、この遺伝子またはこの断片の遺伝性をモニターするのに用いられる。
遺伝子と連鎖するまたはゲノム上の既知の位置の染色体断片中にあるＤＮＡ断片であり、この遺伝子またはこの断片の遺伝性をモニターするのに用いられる。
ゲル電気泳動：
分子（とりわけＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質）をそれらのサイズ、形状または電荷に基づいて分離する方法で、基質（アガロースまたはポリアクリルアミド）中、電場の影響下で行われる。
分子（とりわけＤＮＡ、ＲＮＡ、タンパク質）をそれらのサイズ、形状または電荷に基づいて分離する方法で、基質（アガロースまたはポリアクリルアミド）中、電場の影響下で行われる。
自家生殖（自家受粉）：
自身の花粉による個体の受精。
自身の花粉による個体の受精。
遺伝子移入：
交雑によって別の系統に導入することが可能な系統の染色体断片。
交雑によって別の系統に導入することが可能な系統の染色体断片。
ＩＲＤｙｅ標識：
Ｌｉｃｏｒイメージングシステムに用いられる赤外標識で、その検出は７００ｎｍまたは８００ｎｍで行う。
Ｌｉｃｏｒイメージングシステムに用いられる赤外標識で、その検出は７００ｎｍまたは８００ｎｍで行う。
連鎖群：
組合せで遺伝する遺伝子群。
組合せで遺伝する遺伝子群。
ＭＡＲＢ：
マーカー支援反復戻し交雑：ドナー系統と良質系統との反復戻し交雑がマーカー解析で支持される方法であり、それぞれの世代において、決定された抵抗性についての全てのＱＴＬをなお持っていて、かつほとんど良質系統に遺伝子型的に相当する植物を選択するためのものである。
マーカー支援反復戻し交雑：ドナー系統と良質系統との反復戻し交雑がマーカー解析で支持される方法であり、それぞれの世代において、決定された抵抗性についての全てのＱＴＬをなお持っていて、かつほとんど良質系統に遺伝子型的に相当する植物を選択するためのものである。
１遺伝子性：
１つの遺伝子によって決定される。
１つの遺伝子によって決定される。
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）：
特異的なＤＮＡ断片を増やすためのインビトロ増幅方法。この合成反応はＤＮＡ断片とハイブリダイズする最低１つのオリゴヌクレオチドプライマーを用い、その後ポリメラーゼが連続する温度サイクルの間に隣接領域を増幅する。
特異的なＤＮＡ断片を増やすためのインビトロ増幅方法。この合成反応はＤＮＡ断片とハイブリダイズする最低１つのオリゴヌクレオチドプライマーを用い、その後ポリメラーゼが連続する温度サイクルの間に隣接領域を増幅する。
量的形質遺伝子座（ＱＴＬ）：
１つまたは複数の遺伝子に連結されて、共に量的形質を説明する染色体領域。
１つまたは複数の遺伝子に連結されて、共に量的形質を説明する染色体領域。
ランダム増幅マイクロサテライト多型（ＲＡＭＰ）：
ＲＡＰＤプライマーおよびｉＳＳＲプライマーに基づくＤＮＡフィンガープリンティング技術であり、異なるＤＮＡ奇形体間の多型を検出する。
ＲＡＰＤプライマーおよびｉＳＳＲプライマーに基づくＤＮＡフィンガープリンティング技術であり、異なるＤＮＡ奇形体間の多型を検出する。
ランダム増幅多型ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）プライマー：
「ランダム」配列を有する１０ｍｅｒであって、ＧＣ含量は６０％から７０％の間にあり、プライマー末端は自己相補的ではない。
「ランダム」配列を有する１０ｍｅｒであって、ＧＣ含量は６０％から７０％の間にあり、プライマー末端は自己相補的ではない。
単純反復配列間（ｉＳＳＲ）プライマー：
ＳＳＲ（単純反復配列）の５’末端を設計されたプライマー。５’末端に４ｂｐのアンカーを有する、２または３ヌクレオチドの反復からなるＤＮＡ断片。
ＳＳＲ（単純反復配列）の５’末端を設計されたプライマー。５’末端に４ｂｐのアンカーを有する、２または３ヌクレオチドの反復からなるＤＮＡ断片。
戻し交雑：
個体と元の親の一方との交雑。
個体と元の親の一方との交雑。
Claims (15)
- 抵抗性を付与する２以上の遺伝的因子をゲノム中に含むＰｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物であって、前記Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性が寄託番号ＮＣＩＭＢ４１６８５またはＮＣＩＭＢ４１６８６の植物に由来し、抵抗性を付与する遺伝的因子の存在を、量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）および量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）の存在により決定することが可能であり、
以下のＲＡＰＤ−ＰＣＲ条件：
（１）ＰＣＲ混合物
０．２ｎｇ／μｌ 植物ゲノムＤＮＡ
７５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）
２０ｍＭ ＮＨ ４ ＳＯ ４
０．０１％（ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ２０
２．８０ｍＭ ＭｇＣｌ ２
０．２５ｍＭ ｄＮＴＰｓ
０．１２μＭ フォワードプライマー
０．２９μＭ リバースプライマー
０．０４ユニット／μｌ Ｒｅｄ Ｈｏｔ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼ（ＡＢｇｅｎｅ、Ｅｐｓｏｍ）
（２）ＰＣＲプログラム
ステップ１：２分 ９３℃ １サイクル
ステップ２〜５：３０秒 ９３℃、３０秒 ４０℃、０．３℃／秒で７２℃まで加熱、および１分３０秒 ７２℃ ４０サイクル
ステップ６：５分 ７２℃ １サイクル
において、
量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）が、配列番号１（プライマー１．１）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＰ−０３）の組合せによる２９４ｂｐの断片；配列番号２（プライマー１．２）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＩ−０５）の組合せによる７１ｂｐの断片；配列番号３（プライマー１．３）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＯ−０１）の組合せによる１１５ｂｐの断片；配列番号４（プライマー１．４）およびプライマー７（プライマーＯＰＢＥ−０６）の組合せによる２１５ｂｐまたは２１８ｂｐの断片；ならびに配列番号２４（プライマー１．５）およびプライマー７（プライマーＯＰＢＥ−１３）の組合せによる２０３ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）が、配列番号９（プライマー３．１）およびプライマー７（プライマーＯＰＧ−１３）の組合せによる１５９ｂｐの断片；配列番号１０（プライマー３．２）およびプライマー７（プライマーＯＰＧ−０２またはＯＰＡＱ−０５）の組合せによる１３５ｂｐの断片；配列番号１１（プライマー３．３）およびプライマー７（プライマーＯＰＢＢ−０４）の組合せによる２２０ｂｐの断片；ならびに配列番号１２（プライマー３．４）およびプライマー７（プライマーＯＰＬ−１７またはＯＰＤ−０９）の組合せによる７５ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）が、配列番号１６（プライマー５．１）およびプライマー７（プライマーＯＰＢＦ−１８，ＯＰＧ−１６，ＯＰＸ−０５またはＯＰＧ−１３）の組合せによる２７６ｂｐの断片；配列番号１７（プライマー５．２）およびプライマー７（プライマーＯＰＮ−１１，ＯＰＬ−０３またはＯＰＹ−０２）の組合せによる５３５ｂｐの断片；配列番号１８（プライマー５．３）およびプライマー７（プライマーＯＰＢＣ−０８，ＯＰＢＥ−０９またはＯＰＹ−１０）の組合せによる３３７ｂｐの断片；ならびに配列番号１９（プライマー５．４）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＢ−１５，ＯＰＢＣ−０５，ＯＰＢＨ−１２またはＯＰＪ−０９）の組合せによる２２１ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる、植物。 - 請求項１に定義される量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）および量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）をゲノム中に含む、請求項１に記載の植物。
- 抵抗性を付与する３以上の因子をゲノム中にさらに含み、前記抵抗性を付与する遺伝的因子のさらなる存在を、量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）、量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）および／または量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）の存在により決定することが可能であり、
以下のＲＡＰＤ−ＰＣＲ条件：
（１）ＰＣＲ混合物
０．２ｎｇ／μｌ 植物ゲノムＤＮＡ
７５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）
２０ｍＭ ＮＨ ４ ＳＯ ４
０．０１％（ｖ／ｖ） Ｔｗｅｅｎ２０
２．８０ｍＭ ＭｇＣｌ ２
０．２５ｍＭ ｄＮＴＰｓ
０．１２μＭ フォワードプライマー
０．２９μＭ リバースプライマー
０．０４ユニット／μｌ Ｒｅｄ Ｈｏｔ（登録商標）ＤＮＡポリメラーゼ（ＡＢｇｅｎｅ、Ｅｐｓｏｍ）
（２）ＰＣＲプログラム
ステップ１：２分 ９３℃ １サイクル
ステップ２〜５：３０秒 ９３℃、３０秒 ４０℃、０．３℃／秒で７２℃まで加熱、および１分３０秒 ７２℃ ４０サイクル
ステップ６：５分 ７２℃ １サイクル
において、
量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）が、配列番号５（プライマー２．１）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＤ−１８）の組合せによる７４５ｂｐの断片；配列番号６（プライマー２．２）およびプライマー７（プライマーＯＰＹ−１１，ＯＰＡＱ１７またはＯＰＡＹ−１９）の組合せによる１４３ｂｐの断片；配列番号７（プライマー２．３）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＴ−１８）の組合せによる１６９ｂｐの断片；ならびに配列番号８（プライマー２．４）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＫ−０６またはＯＰＲ−１３）の組合せによる２９５ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）が、配列番号１３（プライマー４．１）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＣ−０２）の組合せによる３１６ｂｐの断片；配列番号１４（プライマー４．２）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＵ−１３）の組合せによる２４２ｂｐの断片；ならびに配列番号１５（プライマー４．３）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＸ−０６）の組合せによる１１４ｂｐの断片よりなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられ、
量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）が、配列番号２０（プライマー６．１）およびプライマー７（プライマーＯＰＲ−１９）の組合せによる２０３ｂｐの断片；配列番号２１（プライマー６．２）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＡ−１２，ＯＰＡＰ−１９，ＯＰＡＸ−０９，ＯＰＢＤ−０２，ＯＰＩ−１７またはＯＰＫ−０２）の組合せによる２９３ｂｐの断片；配列番号２２（プライマー６．３）およびプライマー７の組合せによる１８５ｂｐの断片；ならびに配列番号２３（プライマー６．４）およびプライマー７（プライマーＯＰＡＤ−０８またはＯＰＡＷ−０５）の組合せによる３７７ｂｐの断片からなる群から選ばれる１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる、請求項１または請求項２に記載の植物。 - 量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）、量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）および／または量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）をゲノム中にさらに含む、請求項３に記載の植物。
- 前記量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）が２以上のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の植物。
- 前記量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）が３以上のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる、請求項１〜５のいずれか１項に記載の植物。
- 前記量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）が４以上のＲＡＭＰマーカーによって特徴付けられる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の植物。
- 前記植物が、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ（カリフラワー、ロマネスコブロッコリー）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ．ｃｙｍｏｓａ（ブロッコリー）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｖａｒ．ａｓｐａｒａｇｏｉｄｅｓ（発芽ブロッコリー）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ．ｇｅｍｎｉｆｅｒａ（芽キャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ．ａｌｂａ（白キャベツ、オックスハートキャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ．ｒｕｂｒａ（赤キャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ｃａｐｉｔａｔａ ｖａｒ．ｓａｂａｕｄａ（チリメンキャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ａｃｅｐｈａｌａ ｖａｒ．ｓａｂｅｌｌｉｃａ（縮れケールキャベツ）、Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｃｏｎｖａｒ．ａｃｅｐｈｅｌａ ｖａｒ．ｇｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ（コールラビ）およびＢ．ｏｌｅｒａｃｅａ ｖａｒ．ｔｒｏｎｃｈｕｄａ ｓｙｎ．ｃｏｓｔａｔａ（ポルトガルキャベツ）からなる群から選ばれるＢｒａｓｓｉｃａ植物である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の植物。
- アブラナ属植物において、請求項１に定義される量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）および量的形質遺伝子座３（ＱＴＬ３）および／または量的形質遺伝子座５（ＱＴＬ５）を交雑によって導入するステップを含む、請求項１〜８のいずれかに記載の植物を提供する方法。
- アブラナ属植物において、請求項３に定義される量的形質遺伝子座２（ＱＴＬ２）、量的形質遺伝子座４（ＱＴＬ４）および／または量的形質遺伝子座６（ＱＴＬ６）を交雑によって導入するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
- アブラナ属植物における、請求項１または請求項３に定義される１つまたは複数のＲＡＭＰマーカーの存在を決定するための分子生物学的技術をさらに含む、請求項９または請求項１０に記載の方法。
- 前記アブラナ属植物が、量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、３（ＱＴＬ３）および５（ＱＴＬ５）についてホモ接合性である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
- Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物を提供するための、請求項１または請求項３に定義される量的形質遺伝子座１（ＱＴＬ１）、２（ＱＴＬ２）、３（ＱＴＬ３）、４（ＱＴＬ４）、５（ＱＴＬ５）および／または６（ＱＴＬ６）の使用。
- Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物を提供するための、配列番号１〜２３からなる群から選択される１つまたは複数のプライマーの使用。
- Ｐｌａｓｍｏｄｉｏｐｈｏｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ抵抗性のアブラナ属植物を提供するための、請求項１〜８のいずれか１項に記載の植物の使用。
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