JP6306154B2 - アフコシル化ＣＤ２０抗体とＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの併用療法 - Google Patents

アフコシル化ＣＤ２０抗体とＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの併用療法 Download PDF

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Description

本出願は、２０１３年５月２日に出願された米国仮出願第６１／８１８８２１号の利益を主張し、その内容全体は参照により本明細書に援用される。
本発明は、がんの治療のための、アフコシル化ＣＤ２０抗体とＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの併用療法を目的とするものである。
アフコシル化抗体
モノクローナル抗体の細胞媒介性エフェクター機能は、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されているように、それらのオリゴ糖成分を操作することにより高めることができる。がん免疫療法において最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に保存されたＮ結合型グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合二分岐オリゴ糖はＣＨ２ドメイン間に包埋されて、ポリペプチド骨格との広範な接触部を形成しており、それらの存在は、抗体が、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を媒介するのに必須である（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., 及び Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32)。Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び国際公開第９９／１５４３４２号は、二分されたオリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（「ＧｎＴＩＩＩ」）の、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞内での過剰発現が、抗体のインビトロＡＤＣＣ活性を有意に増大させることを示した。また、Ｎ２９７炭化水素の組成の変更又はその除去は、ＦｃγＲ及びＣ１ｑへのＦｃ結合への結合に影響を及ぼす（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 (2001) 288-294; Mimura, Y., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 45539-45547; Radaev, S., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 16478-16483; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604; Shields, R.L., et al., J. Biol. Chem. 277 (2002) 26733-26740; Simmons, L.C., et al., J. Immunol. Methods 263 (2002) 133-147）。
抗ＣＤ２０抗体を含むアフコシル化及びフコシル化抗体の活性を考察する研究が報告されている（例えば、Iida, S., et al., Clin. Cancer Res. 12 (2006) 2879-2887; Natsume, A., et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 93-103; Satoh, M., et al., Expert Opin. Biol. Ther. 6 (2006) 1161-1173; Kanda, Y., et al., Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688; Davies, J., et al., Biotechnol. Bioeng. 74 2001-288-294）。
ＣＤ２０及び抗ＣＤ２０抗体
ＣＤ２０分子（ヒトＢリンパ球限定分化抗原又はＢｐ３５とも呼ばれる）は、プレＢ及び成熟Ｂリンパ球に位置する疎水性の膜貫通タンパク質であり、広く文献に記載されている（Valentine, M.A., et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; and Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 1989 - 2560 -2568）。ＣＤ２０は９０％を上回るＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に発現する（Anderson, K.C., et al., Blood 63(6) (1984) 1424-1433)）が、造血幹細胞、プロＢ細胞、正常な形質細胞、又はその他正常な組織には見られない（Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 135(2) (1985) 973- 979）。
ＣＤ２０結合の様式及び生物活性が大きく異なる、二つの異なる型の抗ＣＤ２０抗体が存在する（Cragg, M.S., et al., Blood, 103 (2004) 2738-2743; 及びCragg, M.S., et al., Blood, 101 (2003) 1045-1052）。例えば、リツキシマブ（フコースの量が８５％以上である非アフコシル化抗体）のようなｔｙｐｅＩ抗体は、強い補体媒介性細胞傷害性を有する。
例えば、トシツモマブ（Ｂ１）、１１Ｂ８、ＡＴ８０又はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体のようなｔｙｐｅＩＩ抗体は、ホスファチジルセリン暴露を伴うカスパーゼ非依存性アポトーシスを介して標的細胞の死を効果的に開始する。
ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート
ＣＤ７９は、ＣＤ７９ａ（Ｉｇα、ｍｂ−１）及びＣＤ７９ｂ（Ｉｇβ、Ｂ２９）を含む共有結合性のヘテロ二量体からなる、Ｂ細胞受容体のシグナル伝達成分である。ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂの各々は、細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメイン、免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）ドメインを含む。ＣＤ７９は、Ｂ細胞及び非ホジキンリンパ腫細胞（ＮＨＬ）に発現される（Cabezudo et al., Haematologica, 84:413-418 (1999); D’Arena et al., Am. J. Hematol., 64: 275-281 (2000); Olejniczak et al., Immunol. Invest., 35: 93-114 (2006)）。ＣＤ７９ａ及びＣＤ７９ｂ及びｓＩｇはみな、ＣＤ７９の表面発現に必要とされる（Matsuuchi et al., Curr. Opin. Immunol., 13(3): 270-7)）。ＮＨＬ上でのＣＤ７９ｂの平均表面発現は、正常なＢ細胞のそれと同様であるが、範囲が広い（Matsuuchi et al., Curr. Opin. Immunol., 13(3): 270-7 (2001)）。
ＣＤ７９ｂの発現を前提として、特に慢性処置のために患者に投与されたときに抗原性を最小限にしか又はまったく生じないＣＤ７９ｂ抗原に対する治療抗体を製造することは有益である。本発明は、このような要求及び他の要求を満たすものである。本発明は、現在の治療用組成物の限界を克服するだけでなく、以下の詳細な説明から明らかとなる他の利点を供する抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供する。
がんの治療において、胞傷害剤又は細胞増殖抑制剤、即ち腫瘍細胞を殺傷又は阻害する薬物を局所送達するための抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）、即ちイムノコンジュゲートの使用（Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549; Wu et al (2005) Nature Biotechnology 23(9):1137-1146; Payne, G. (2003) Cancer Cell 3:207-212; Syrigos and Epenetos (1999) Anticancer Research 19:605-614; Niculescu-Duvaz and Springer (1997) Adv. Drug Del. Rev. 26:151-172;米国特許第４９７５２７８号）は、腫瘍を標的とした薬物部分の送達と細胞内蓄積を可能にし、この場合、これら非コンジュゲート薬物薬剤の全身投与により、排除されるべき腫瘍細胞だけでなく正常細胞への毒性が許容不能なレベルに達することがある（Baldwin et al (1986) Lancet pp. (Mar. 15, 1986):603-05; Thorpe, (1985) 「Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review,」 in Monoclonal Antibodies ‘84: Biological And Clinical Applications, A. Pinchera et al (ed.s), pp. 475-506）。治療指数、即ちＡＤＣの最大効果及び最小毒を改善しようとする努力は、ポリクローナルの選択性（Rowland et al (1986) Cancer Immunol. Immunother., 21:183-87）及びモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）、並びに薬物結合及び薬物放出特性（Lambert, J. (2005) Curr. Opinion in Pharmacology 5:543-549）に集中してきた。抗体−薬物コンジュゲートに使用される薬物部分には、ジフテリア毒素のような細菌タンパク質毒素、リシンのような植物タンパク質毒素、アウリスタチン、ゲルダナマイシンのような小分子（Mandler et al (2000) J. of the Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581; Mandler et al (2000) Bioorganic and Med. Chem. Letters 10:1025-1028; Mandler et al (2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791), メイタンシノイト゛(EP1391213; Liu et al (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:8618-8623), カリケアマイシン (Lode et al (1998) Cancer Res. 58:2928; Hinman et al (1993) Cancer Res. 53:3336-3342）、ダウノマイシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、及びビンデシン（Rowland et al (1986) 上掲）が含まれる。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合、又はトポイソメラーゼ阻害を含む、細胞傷害性及び細胞分裂停止性のメカニズムに影響しうる。いくつかの細胞傷害性薬物は、大きな抗体又はタンパク質受容体リガンドにコンジュゲートしたときに、不活性又は低活性となる傾向がある。
アウリスタチンペプチド、アウリスタチンＥ（ＡＥ）及びモノメチルアウリスタチン（ＭＭＡＥ）、ドラスタチンの合成類似体（国際公開第０２／０８８１７２号）は、薬物部分として以下にコンジュゲートした：（ｉ）キメラモノクローナル抗体ｃＢＲ９６（癌腫上のルイスＹに特異的）；（ｉｉ）血液悪性腫瘍上のＣＤ３０に特異的なｃＡＣ１０（Klussman, et al (2004), Bioconjugate Chemistry 15(4):765-773; Doronina et al (2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784; Francisco et al (2003) Blood 102(4):1458-1465;米国特許出願公開第２００４／００１８１９４号；（ｉｉｉ）ＣＤ２０を発現するがん及び免疫疾患の治療のための、リツキサンなどの抗ＣＤ２０抗体（国際公開第０４／０３２８２８）；（ｉｖ）結腸直腸がんの治療のための抗ＥｐｈＢ２Ｒ抗体２Ｈ９（Mao et al (2004) Cancer Research 64(3):781-788）；（ｖ）Ｅセレクチン抗体（Bhaskar et al (2003) Cancer Res. 63:6387-6394）；（ｖｉ）トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、米国特許第２００５／０２３８６４９号）、及び（ｖｉ）抗ＣＤ３０抗体（国際公開第０３／０４３５８３号）。アウリスタチンＥの変異体は、米国特許第５７６７２３７号及び同第６１２４４３１号に開示されている。モノクローナル抗体にコンジュゲートしたモノメチルアウリスタチンＥは、Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, presented March 28, 2004に開示されている。アウリスタチンアナログＭＭＡＥ及びＭＭＡＦは、種々の抗体にコンジュゲートしていた（米国特許第２００５／０２３８６４９号）。
薬物部分を抗体に結合、即ち共有結合により連結させる一般的な手段は、通常、薬物部分が抗体の複数部位に結合している分子の不均一な混合物の原因となる。例えば、細胞傷害性薬物は、典型的には、抗体の時に多数のリジン残基を介して抗体にコンジュゲートして、不均一な抗体−薬物コンジュゲート混合物を生成している。反応条件に応じて、不均一な混合物は、典型的には、０〜約８、又はそれ以上の、結合した薬物部分を含む抗体分配を含む。加えて、薬物部分対抗体を特定の整数比で有するコンジュゲートの各サブグループは、薬物部分が抗体の様々な部位に結合している不均一な混合物である可能性がある。分析方法及び調製方法は、コンジュゲーション反応から生じた不均一な混合物内の抗体−薬物コンジュゲート種分子を分離して特徴付けるには不十分なことがある。抗体は大きく、複雑で、構造的に多様な生体分子であり、時に複数の反応性官能基を有している。リンカー試薬及び薬物−リンカー中間体とのそれらの反応性は、ｐＨ、濃度、塩濃度、及び共溶媒といった要因に左右される。更に、多工程のコンジュゲーション方法は、反応条件の制御並びに反応物質及び中間体の特徴付けの困難さにより再現不能でありうる。
システインチオールは、ｐＨ７近傍でプロトン化して求核性が低下する多くのアミンとは異なり、中性のｐＨで反応性である。遊離チオール（ＲＳＨ、スルフヒドリル）基は相対的に反応性であるため、システイン残基を有するタンパク質は、ジスルフィド結合オリゴマーとしてしばしば酸化形態で存在するか、又は内部で架橋したジスルフィド基を有する。細胞外タンパク質は通常、遊離チオールを有さない（Garman, 1997, Non-Radioactive Labelling: A Practical Approach, Academic Press, London, page 55）。抗体のシステインチオール基は通常、給電性のコンジュゲーション試薬に対して、抗体アミン又はヒドロキシル基より反応性、即ち求核性が高い。システイン残基は、遺伝子工学技術によりタンパク質中に導入されて、リガンドへの共有結合を形成するか、又は新規の分子内ジスルフィド結合を形成した（Better et al (1994) J. Biol. Chem. 13:9644-9650; Bernhard et al (1994) Bioconjugate Chem. 5:126-132; Greenwood et al (1994) Therapeutic Immunology 1:247-255; Tu et al (1999) Proc. Natl. Acad. Sci USA 96:4862-4867; Kanno et al (2000) J. of Biotechnology, 76:207-214; Chmura et al (2001) Proc. Nat. Acad. Sci. USA 98(15):8480-8484;米国特許第６２４８５６４号）。しかしながら、タンパク質の様々なアミノ酸残基のシステインアミノ酸への変異によるシステインチオール基内の操作は、特に不対（遊離Ｃｙｓ）残基、又は反応若しくは酸化のために比較的到達可能なものの場合、問題を生じる可能性がある。タンパク質の濃縮溶液中においては、大腸菌の周辺質、培養上清、又は部分的に若しくは完全に精製されたタンパク質であるかを問わず、タンパク質の表面上の不対Ｃｙｓ残基は、対合及び酸化して分子間ジスルフィド、したがってタンパク質の二量体又は多量体を形成することができる。ジスルフィド二量体の形成により、薬物、リガンド、又は他の標識へのコンジュゲートに反応性でない新規のＣｙｓが得られる。更に、タンパク質が、新規に操作されたＣｙｓと既存のＣｙｓ残基との間に酸化的に分子内ジスルフィド結合を形成する場合、両方のＣｙｓチオール基は、活性部位の関与及び相互作用のために利用不能である。更に、タンパク質は、三次構造のミスフォールディング又は欠失により不活性又は非特異性となりうる（Zhang et al (2002) Anal. Biochem. 311:1-9）。
システイン操作抗体は、ＦＡＢ抗体断片として設計されたものであり（ｔｈｉｏＦａｂ）、完全長の、ＩｇＧモノクローナル（ｔｈｉｏＭａｂ）抗体として発現される（Junutula, J.R. et al. (2008) J Immunol Methods 332:41-52; 米国特許出願公開第2007/0092940号（参照により内容を援用する））。ＴｈｉｏＦａｂ及びＴｈｉｏＭａｂ抗体は、抗体薬物コンジュゲート（Ｔｈｉｏ ＡＤＣ）を調製するために、チオール反応性リンカー試薬及び薬物−リンカー試薬に、新規に導入されたシステインチオールにおいてリンカーを介してコンジュゲートされている。
特許出願及び特許公開を含む、本明細書に引用される全ての参照文献は、その全体が参照により援用される。
本発明者らは、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体とＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの組み合わせが、有意に亢進された抗増殖効果を示すことを見出した。
本発明の一態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体である。
本発明の別の態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用である。
本発明の別の態様は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートと併せて、そのような治療を必要とする患者に投与することによる、がんに罹患した患者の治療方法である。
一実施態様では、フコースの量は、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の４０％〜６０％である。別の実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の０％である。
一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はＩｇＧ１抗体である。別の実施態様では、前記がんは、ＣＤ２０を発現するがん、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。一実施態様では、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。特定の一実施態様において、抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブ（WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453で推奨のＩＮＮ）。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブは、ＧＡ１０１の同義語である。これは、全ての旧版を差し替え（例えばVol. 25, No. 1, 2011, p.75-76）、元はアフツズマブとして知られている（WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176;Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124で推奨のＩＮＮ）。
一態様において、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの発明におけるＣＤ７９ｂ抗体はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体であり、この場合、ＣＤ７９ｂに対する一価の親和性（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての抗体の親和性）又はその二価形態における抗体の親和性（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧ断片としての抗体の親和性）はそれぞれ、図７（配列番号２６）及び図８（配列番号２９）に示される軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列を含むか、それら配列からなるか、又は本質的にそれら配列からなるマウス抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての又はＩｇＧ断片としてのマウス抗体の親和性）又はキメラ抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての又はＩｇＧ断片としてのキメラ抗体の親和性）の、一価の親和性又はその二価形態における親和性と実質的に同じであるか、又はそれより小さいか、又はそれより大きい。
一態様において、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの発明におけるＣＤ７９ｂ抗体はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体であり、この場合、ＣＤ７９ｂに対するその二価形態における抗体の親和性（例えば、ＩｇＧとしての抗体のＣＤ７９ｂに対する親和性）は０．４ｎＭ、０．２ｎＭ又は０．５ｎＭである。
一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートにおけるＣＤ７９ｂ抗体は、以下からなる群より選択される、少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む：
（ｉ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）であるＨＶＲ−Ｌ１
（ｉｉ） 配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２
（ｉｉｉ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３
（ｉｖ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１
（ｖ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｖｉ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）であるＨＶＲ−Ｈ３。
一態様では、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂに結合する抗体は、変異ＨＶＲ配列が配列番号３１、３２、３３、３４、３５又は３６に示される配列の少なくとも一つの残基の修飾を含む、少なくとも一つの変異ＨＶＲを含む。
一態様では、本発明は、図３Ｂ（配列番号５０〜５２）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、図３Ａ（配列番号４７〜４９）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、図４Ｂ（配列番号５８〜６０）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、図４Ａ（配列番号５５〜５７）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、図５Ｂ（配列番号６６〜６８）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、図５Ａ（配列番号６３〜６５）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、図６Ｂ（配列番号７４〜７６）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、図６Ａ（配列番号７１〜７３）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号５４、６２、７０又は７８から選択される重鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む。別の態様では、本発明は、配列番号５３、６１、６９又は７７から選択される軽鎖可変ドメインを含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む。
一態様では、本発明は、一又は複数の遊離システインアミノ酸及び配列番号８３〜１３０から選択される配列を含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む。本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂポリペプチドに結合することができる。本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、親抗ＣＤ７９ｂ抗体の一又は複数のアミノ酸残基をシステインにより置換することを含む方法によって調製することができる。
一態様では、本発明は、一又は複数の遊離システインアミノ酸を含む、本発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体を含み、この場合、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体はＣＤ７９ｂポリペプチドに結合し、親抗ＣＤ７９ｂ抗体の一又は複数のアミノ酸残基をシステインにより置換することを含む方法により調製され、ここで親抗体は、以下から選択される少なくとも一つのＨＶＲ配列を含む：
（ｉ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）又はＫＡＳＱＳＶＤＹＥＧＤＳＦＬＮ（配列番号３７）であるＨＶＲ−Ｌ１；
（ｉｉ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２；
（ｉｉｉ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３；
（ｉｖ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１；
（ｖ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｖｉ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）又はＴＲＲＶＰＩＲＬＤＹ（配列番号３８）である、ＨＶＲ−Ｈ３。
一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、ＶＬ−ＦＲ１、ＶＬ−ＦＲ２、ＶＬ−ＦＲ３、ＶＬ−ＦＲ４（それぞれ配列番号３９〜４２）を含む軽鎖ヒトκＩコンセンサス配列（「ｈｕＫＩ」と表示；配列番号２５）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２６）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」；配列番号２７）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５３）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６１）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号６９）及びＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７７）からなる群より選択される可変軽鎖配列を含む。
一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの発明におけるＣＤ７９ｂ抗体は、以下からなる群より選択される可変重鎖配列を含む：ＶＨ−ＦＲ１、ＶＨ−ＦＲ２、ＶＨ−ＦＲ３、及びＶＨ−ＦＲ４（配列番号４３〜４６）を含む重鎖ヒトサブグループＩＩＩコンセンサス配列（「ｈｕｍＩＩＩ」と表示；配列番号２８）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２９）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号３０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５４）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６２）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号７０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）並びにＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７８）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）。
一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体は、一又は複数の遊離システインアミノ酸を含むシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体を含み、ここでシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂポリペプチドに結合し、親抗ＣＤ７９ｂ抗体の一又は複数のアミノ酸残基をシステインにより置換することを含む方法により調製され、ここで親抗体は、以下から選択される少なくとも一つのＨＶＲ配列を含む：
（ａ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）又はＫＡＳＱＳＶＤＹＥＧＤＳＦＬＮ（配列番号３７）であるＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２；
（ｃ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３；
（ｄ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１；
（ｅ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｆ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）又はＴＲＲＶＰＩＲＬＤＹ（配列番号３８）であるＨＶＲ−Ｈ３。
一実施態様では、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ（式Ｉ）を有するＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートであって、
（ａ）Ａｂは本明細書に定義されるＣＤ７９ｂ抗体であり、
（ｂ）Ｌはリンカーであり、
（ｃ）Ｄは薬物部分である。
したがって、抗体は、直接的に又はリンカーを介して薬物にコンジュゲートできる。式Ｉにおいて、ｐは抗体一つ当たりの薬物部分の平均数であり、例えば抗体一つ当たりの薬物部分は約１〜約２０であり、特定の実施態様では、抗体一つ当たりの薬物部分は１〜８である。本発明は、式Ｉの抗体−薬物化合物の混合物を含む組成物を含み、ここで抗体一つ当たりの平均薬物充填は約２〜５、又は約３〜約４である。
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有するＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの一実施態様では、Ｌは６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及びＮ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）から選択される。
式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有するＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの一実施態様では、Ｄはアウリスタチン、ドロスタンチン（ｄｏｌｏｓｔａｎｔｉｎ）、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦからなる群より選択される。
一実施態様では、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。特定の一実施態様では、前記コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である。
一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、１０−８Ｍ〜１０−１３ＭのＫＤでＣＤ２０に結合する。
本発明の一実施態様は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体，（一実施態様ではアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）、及びＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物である。本発明による組成物の一実施態様では、前記抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブである。
本発明による組成物の一実施態様では、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、以下からなる群より選択される少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む：
（ｉ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）であるＨＶＲ−Ｌ１
（ｉｉ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２
（ｉｉｉ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３
（ｉｖ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１
（ｖ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｖｉ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）であるＨＶＲ−Ｈ３。
本発明による組成物の一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、ＶＬ−ＦＲ１、ＶＬ−ＦＲ２、ＶＬ−ＦＲ３、ＶＬ−ＦＲ４（それぞれ配列番号３９〜４２）を含む軽鎖ヒトκＩコンセンサス配列（「ｈｕＫＩ」と表示；配列番号２５）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２６）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号２７）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５３）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６１）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号６９）及びＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７７）からなる群より選択される可変軽鎖配列を含む。
本発明による組成物の一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、以下からなる群より選択される可変重鎖配列を含む：ＶＨ−ＦＲ１、ＶＨ−ＦＲ２、ＶＨ−ＦＲ３、及びＶＨ−ＦＲ４（配列番号４３〜４６）を含む重鎖ヒトサブグループＩＩＩコンセンサス配列（「ｈｕｍＩＩＩ」と表示；配列番号２８）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２９）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号３０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５４）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６２）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号７０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）並びにＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７８）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）。
本発明による組成物の一実施態様では、追加的に一又は複数の他の細胞傷害性剤、化学療法剤又は抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物若しくは電離放射線が投与される。
本発明による組成物の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有しており、ここで
（ａ）Ａｂは本明細書に定義されるＣＤ７９ｂ抗体であり、
（ｂ）Ｌはリンカーであり、
（ｃ）Ｄは薬物部分である。
本発明による組成物の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有しており、ここでＬは６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及びＮ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）から選択される。
本発明による組成物の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有しており、Ｄはアウリスタチン、ドロスタンチン（ｄｏｌｏｓｔａｎｔｉｎ）、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦからなる群より選択される。
本発明による組成物の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートはがんの治療のための抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。特定の一実施態様では、前記コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である。ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体。
本発明の一実施態様は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートと併せてそのような治療を必要とする患者に投与することによる、がんに罹患した患者の治療方法である。
本発明による一実施態様では、方法は、前記がんがＣＤ２０を発現するがんであることを特徴とする。
本発明による一実施態様では、方法は、前記ＣＤ２０を発現するがんがリンパ腫又はリンパ球性白血病であることを特徴とする。
本発明による一実施態様では、方法は、前記抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であることを特徴とする。
本発明による一実施態様では、方法は、前記抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブであることを特徴とする。
本発明による一実施態様では、方法は、追加的に一又は複数の他の細胞傷害性剤、化学療法剤又は抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物若しくは電離放射線が投与されることを特徴とする。
本発明による一実施態様では、方法は、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂは、以下からなる群より選択される少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含むことを特徴とする：
（ｉ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）であるＨＶＲ−Ｌ１
（ｉｉ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２
（ｉｉｉ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３
（ｉｖ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１
（ｖ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｖｉ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）であるＨＶＲ−Ｈ３。
本発明による方法の一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、ＶＬ−ＦＲ１、ＶＬ−ＦＲ２、ＶＬ−ＦＲ３、ＶＬ−ＦＲ４（それぞれ配列番号３９〜４２）を含む軽鎖ヒトκＩコンセンサス配列（「ｈｕＫＩ」と表示；配列番号２５）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２６）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号２７）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５３）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６１）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号６９）及びＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７７）からなる群より選択される可変軽鎖配列を含む。
本発明による方法の一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、以下からなる群より選択される可変重鎖配列を含む：ＶＨ−ＦＲ１、ＶＨ−ＦＲ２、ＶＨ−ＦＲ３、及びＶＨ−ＦＲ４（配列番号４３〜４６）を含む重鎖ヒトサブグループＩＩＩコンセンサス配列（「ｈｕｍＩＩＩ」と表示；配列番号２８）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２９）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号３０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５４）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６２）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号７０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）並びにＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７８）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）。
本発明による方法の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有しており、ここで
（ａ）Ａｂは本明細書に開示されるＣＤ７９ｂ抗体であり、
（ｂ）Ｌはリンカーであり、
（ｃ）Ｄは薬物部分である。
本発明による方法の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有しており、ここでＬは６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及びＮ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）から選択される。
本発明による方法の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有しており、ここでＤはアウリスタチン、ドロスタンチン（ｄｏｌｏｓｔａｎｔｉｎ）、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦからなる群より選択される。
本発明による方法の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。
本発明による方法の一実施態様では、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である。
本発明による一実施態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用である。
本発明による使用の一実施態様は、前記がんがＣＤ２０を発現するがんであることを特徴とする。
本発明による使用の一実施態様は、前記ＣＤ２０を発現するがんがリンパ腫又はリンパ球性白血病であることを特徴とする。
本発明による使用の一実施態様は、前記抗ＣＤ２０抗体がヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であることを特徴とする。
本発明による使用の一実施態様は、前記抗ＣＤ２０抗体がオビヌツズマブであることを特徴とする。
本発明による使用の一実施態様は、追加的に一又は複数の他の細胞傷害性剤、化学療法剤又は抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物若しくは電離放射線が投与されることを特徴とする。
本発明による使用の一実施態様は、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体が、以下からなる群より選択される少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含むことを特徴とする：
（ｉ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）であるＨＶＲ−Ｌ１
（ｉｉ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２
（ｉｉｉ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３
（ｉｖ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１
（ｖ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｖｉ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）であるＨＶＲ−Ｈ３。
本発明による使用の一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、ＶＬ−ＦＲ１、ＶＬ−ＦＲ２、ＶＬ−ＦＲ３、ＶＬ−ＦＲ４（それぞれ配列番号３９〜４２）を含む軽鎖ヒトκＩコンセンサス配列（「ｈｕＫＩ」と表示；配列番号２５）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２６）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号２７）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５３）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６１）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号６９）及びＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７７）からなる群より選択される可変軽鎖配列を含む。
本発明による使用の一態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中のＣＤ７９ｂ抗体は、以下からなる群より選択される可変重鎖配列を含む：ＶＨ−ＦＲ１、ＶＨ−ＦＲ２、ＶＨ−ＦＲ３、及びＶＨ−ＦＲ４（配列番号４３〜４６）を含む重鎖ヒトサブグループＩＩＩコンセンサス配列（「ｈｕｍＩＩＩ」と表示；配列番号２８）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２９）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号３０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５４）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６２）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号７０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）並びにＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７８）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）。
本発明による使用の一実施態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートが式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有していることを特徴とし、ここで
（ａ）Ａｂは本明細書に開示されるＣＤ７９ｂ抗体であり、
（ｂ）Ｌはリンカーであり、
（ｃ）Ｄは薬物部分である。
本発明による使用の一実施態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートが式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有していることを特徴とし、ここでＬは６−マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロパノイル（ＭＰ）、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｌａ−ｐｈｅ）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、及びＮ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）から選択される。
本発明による使用の一実施態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートが式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有していることを特徴とし、ここでＤはアウリスタチン、ドロスタンチン（ｄｏｌｏｓｔａｎｔｉｎ）、ＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦからなる群より選択される。
本発明による使用の一実施態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートが抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥであることを特徴とする。
本発明による使用の一実施態様は、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体がｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８であることを特徴とする。
本発明による使用の一実施態様は、追加的に一又は複数の他の細胞傷害性剤、化学療法剤又は抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物若しくは電離放射線が投与されることを特徴とする。
オビヌツズマブ（ＧＡ１０１）、リツキシマブ、抗ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣ、ＣＤ７９ｂとＧＡ１０１の組み合わせ又はＣＤ７９ｂとリツキシマブの組み合わせの、ＳＣＩＤベージュマウスの播種性Ｚ１３８外套細胞リンパ腫（ＭＣＬ）モデルに対する効果を示す。 ペア毎のＷｉｌｃｏｘｏｎ検定及びペア毎のログランク検定による図１のデータの統計学的分析を示す。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７）の軽鎖アミノ酸配列を示す。図３Ａ（軽鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１３１〜１３４、４７〜４９、及び１３５）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７の軽鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１７６）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号５３）。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７）の重鎖アミノ酸配列を示す。図３Ｂ（重鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１３６〜１３９、５０〜５２、及び１４０〜１４１）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７の重鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１７７）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号５４）。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８）の軽鎖アミノ酸配列を示す。図４Ａ（軽鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１４２〜１４５、５５〜５７、及び１４７）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８の軽鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１７８）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号６１）。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８）の重鎖アミノ酸配列を示す。図４Ｂ（重鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１４８〜１５１、５８〜６０、及び１５２〜１５３）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８の重鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１７９）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号６２）。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８）の軽鎖アミノ酸配列を示す。図５Ａ（軽鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１５４〜１５７、６３〜６５、及び１５８）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８の軽鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１８０）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号６９（軽鎖を示す図７））。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８）の重鎖アミノ酸配列を示す。図５Ｂ（重鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１５９〜１６２、６６〜６８、及び１６３〜１６４）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８の重鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１８１）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号７０（重鎖を示す図８））。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２）の軽鎖アミノ酸配列を示す。図６Ａ（軽鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１６５〜１６８、７１〜７３、及び１６９）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２の軽鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１８２）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号７７）。 本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２）の重鎖アミノ酸配列を示す。図６Ｂ（重鎖）は、本発明の抗体（ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２）の一実施態様のフレームワーク（ＦＲ）、超可変領域（ＨＶＲ）、第１の定常ドメイン（ＣＬ又はＣＨ１）及びＦｃ領域（Ｆｃ）のアミノ酸配列を示す（配列番号１７０〜１７３、７４〜７６、及び１７４〜１７５）。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２の重鎖の完全長アミノ酸配列（可変及び定常領域）（配列番号１４６）を示し、定常ドメインには下線を引いた。可変ドメインのアミノ酸配列が示されている（配列番号７８）。 以下の可変軽鎖の配列の配列比較を示す：ＶＬ−ＦＲ１、ＶＬ−ＦＲ２、ＶＬ−ＦＲ３、ＶＬ−ＦＲ４（それぞれ配列番号３９〜４２）を含む軽鎖ヒトκＩコンセンサス配列（「ｈｕＫＩ」と表示；配列番号２５）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２６）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号２７）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５３）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６１）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号６９）及びＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７７）。位置はＫａｂａｔにより番号付けし、ＭＡ７９ｂから可変軽κＩコンセンサスフレームワークに移植された超可変領域（ＨＶＲ）は四角で囲んだ。 以下の可変重鎖の配列の配列比較を示す：ＶＨ−ＦＲ１、ＶＨ−ＦＲ２、ＶＨ−ＦＲ３、及びＶＨ−ＦＲ４（配列番号４３〜４６）を含む重鎖ヒトサブグループＩＩＩコンセンサス配列（「ｈｕｍＩＩＩ」と表示；配列番号２８）、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（「ＭＡ７９ｂ」と表示；配列番号２９）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体（「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」と表示；配列番号３０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１７（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１７」と表示；配列番号５４）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体１８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ１８」と表示；配列番号６２）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）、ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体２８（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８」と表示；配列番号７０）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）並びにＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体変異体３２（「ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ３２」と表示；配列番号７８）（７１Ａ、７３Ｔ及び７８Ａを含む）。位置はＫａｂａｔにより番号付けし、ＭＡ７９ｂから可変重サブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークに移植された超可変領域（ＨＶＲ）は四角で囲んだ。
本発明は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有する、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を含む。
本発明は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有する、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用を含む。
一実施態様では、フコースの量は、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の４０％〜６０％である。
用語「抗体」は、限定しないが、全抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、及びモノクローナル抗体、キメラ抗体又は組換え抗体のような遺伝子操作された抗体、並びに本発明による特徴的な特性を保持している限りそのような抗体の断片を含む、様々な形態の抗体を包含する。本明細書で使用される場合、用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一のアミノ酸組成物の抗体分子の調製物を指す。したがって、用語「ヒトモノクローナル抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変及び定常領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施態様では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合するヒト軽鎖導入遺伝子及びヒト重鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマにより生成される。
用語「キメラ抗体」は、通常は組換えＤＮＡ技術によって調製される、一の供給源又は種由来の可変領域、即ち結合領域と、異なる供給源又は種由来の定常領域の少なくとも一部を含む、モノクローナル抗体を指す。マウス可変領域及びヒト定常領域を含むキメラ抗体が特に好ましい。そのようなマウス／ヒトキメラ抗体は、マウス免疫グロブリン可変領域をコードするＤＮＡセグメントと、ヒト免疫グロブリン定常領域をコードするＤＮＡセグメントとを含む、発現された免疫グロブリン遺伝子の産物である。本発明によって包含される「キメラ抗体」の他の形態は、クラス又はサブクラスが元の抗体のものから改変又は変更されたものである。そのような「キメラ」抗体は、「クラススイッチ抗体」とも称される。キメラ抗体を作製するための方法は、現在当技術分野で周知の一般的な組換えＤＮＡ及び遺伝子トランスフェクション技術を含む。例えば、Morrison, S.L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855;米国特許第５２０２２３８号及び米国特許第５２０４２４４号を参照のこと。
用語「ヒト化抗体」は、フレームワーク又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）が、親免疫グロブリンのものと比較して異なる特異性を有する免疫グロブリンのＣＤＲを含むように改変された抗体を指す。好ましい実施態様では、「ヒト化抗体」を調製するために、マウスＣＤＲがヒト抗体のフレームワーク領域中に移植される。例えば、Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; 及び Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270を参照のこと。特に好ましいＣＤＲは、キメラ抗体及び二機能性抗体について上述した抗原認識配列を示すＣＤＲに相当する。
本明細書で使用する用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むことが意図される。ヒト抗体は当技術分野で周知である（van Dijk, M.A., 及び van de Winkel, J.G., Curr. Opin. Chem. Biol. 5 (2001) 368-374）。このような技術に基づき、広範な標的に対するヒト抗体を生成することができる。ヒト抗体の例は、例えばKellermann, S.A., et al., Curr Opin Biotechnol. 13 (2002) 593-597に記載されている。
本明細書において使用される「組換えヒト抗体」という用語は、ＮＳＯ細胞若しくはＣＨＯ細胞等の宿主細胞から、又はヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体、或いは宿主細胞中にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを用いて発現された抗体など、組換え手段により調製、発現、作製又は単離されたすべてのヒト抗体を含むことが意図される。このような組換えヒト抗体は、再配列された形態の、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。本発明による組換えヒト抗体はインビボ体細胞超変異に供されている。したがって、組換え抗体のＶＨ領域及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨ配列及びＶＬ配列に由来し、且つそれらに関連しているが、インビボでヒト抗体生殖系列レパートリー内には天然に存在しないであろう配列である。
本明細書で使用される「結合する」又は「特異的に結合する」という表現は、抗体が、精製された野生型抗原を用いたインビトロアッセイ、好ましくはプラズモン共鳴アッセイ（ＢＩＡｃｏｒｅ、ＧＥ−Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）において腫瘍抗原のエピトープに結合することを指す。結合の親和性は、ｋａ（抗体／抗原複合体からの抗体の解離の速度定数）、ｋＤ（解離定数）、及びＫＤ（ｋＤ／ｋａ）という観点から規定される。結合又は特異的結合は、１０−８Ｍ以下、好ましくは１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ（一実施態様では１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の結合親和性（ＫＤ）を意味する。したがって、本発明によるアフコシル化抗体は、結合親和性（ＫＤ）１０−８ｍｏｌ／ｌ以下、好ましくは１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ（一実施態様では１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）で腫瘍抗原に特異的に結合している。
本明細書で使用される場合、用語「核酸分子」は、ＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子を含むことを意図している。核酸分子は、一本鎖又は二本鎖でありうるが、好ましくは二本鎖ＤＮＡである。
「定常ドメイン」は、抗体の抗原への結合に直接的に関与していないが、エフェクター機能（ＡＤＣＣ、補体結合及びＣＤＣ）に関与している。
本明細書で使用される場合、「可変領域」（軽鎖の可変領域（ＶＬ）、重鎖の可変領域（ＶＨ））は、抗体の抗原への結合に直接関与する軽鎖及び重鎖の対の各々を意味する。可変ヒト軽鎖及び重鎖のドメインは同じ一般構造を有し、各ドメインは、三つの「超可変領域」（又は相補性決定領域、ＣＤＲ）によって接続された、配列が広く保存されている四つのフレームワーク（ＦＲ）領域を含む。フレームワーク領域は、ｂ−シートコンフォメーションをとり、ＣＤＲは、ｂ−シート構造を接続するループを形成しうる。各鎖におけるＣＤＲは、フレームワーク領域によりその三次元構造が保持され、もう一方の鎖に由来するＣＤＲと共に抗原結合部位を形成する。
本明細書において使用される場合、「超可変領域」又は「抗体の抗原結合部分」という用語は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、「相補性決定領域」即ち「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」即ち「ＦＲ」領域は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン領域である。したがって、抗体の軽鎖及び重鎖は、Ｎ末端からＣ末端へ、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４ドメインを含む。特に、重鎖のＣＤＲ３は、抗原結合に多くを寄与する領域である。ＣＤＲ及びＦＲ領域は、Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)の標準定義によって決定される、及び／又は「超可変ループ」由来のそれら残留物である。
用語「アフコシル化抗体」は、低レベルのフコース残基を有するＡｓｎ２９７においてＦｃ領域のグリコシル化パターンが改変されている、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプの（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプの）抗体を指す。ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３のグリコシル化は、２個までのＧａｌ残基で終結するコアフコシル化二分岐複合型オリゴ糖グリコシル化として、Ａｓｎ２９７で生じる。これらの構造は、末端Ｇａｌ残基の量に応じて、Ｇ０、Ｇ１（α−１，６若しくはα−１，３）、又はＧ２グリカン残基と命名される（Raju, T.S., Bioprocess Int. 1 (2003) 44-53）。抗体Ｆｃ部分のＣＨＯ型グリコシル化は、例えばRoutier, F.H., Glycoconjugate J. 14 (1997) 201-207によって記載されている。非糖修飾のＣＨＯ宿主細胞において組換え的に発現した抗体は、通常、少なくとも８５％の量でＡｓｎ２９７でフコシル化されている。本明細書で使用される場合、アフコシル化抗体という用語は、そのグリコシル化パターンにフコースを有さない抗体を含むものと理解されたい。抗体中の典型的なグリコシル化残基の位置がＥＵ番号付けシステムによる２９７位のアスパラギン（「Ａｓｎ２９７」）であることが一般に既知である。
「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」は、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及するときに一般に使用される（例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)に報告されているＥＵインデックス、本文献は引用により本明細書に援用される）。
本発明によるアフコシル化抗体は、フコースの量がＡｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下である（Ａｓｎ２９７においてＦｃ領域のオリゴ糖の少なくとも４０％以上がアフコシル化されていることを意味する）、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプの（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプの）抗体を意味する。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてＦｃ領域のオリゴ糖の４０％〜６０％である。別の実施態様では、フコースの量は５０％以下であり、また別の実施態様では、フコースの量はＡｓｎ２９７においてＦｃ領域のオリゴ糖の３０％以下である。本発明によれば、「フコースの量」は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により測定されて平均値として算出される、２９７に結合したすべてのオリゴ糖（糖類）（例えば、複合体構造物、ハイブリッド構造物及び高マンノース構造物）の合計に関連した、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）鎖内部の前記オリゴ糖（フコース）の量を意味する（フコースの量を決定するための詳細な手順については国際公開第２００８／０７７５４６号を参照）。一実施態様においては更に、Ｆｃ領域のオリゴ糖は二分されている。本発明によるアフコシル化抗体は、Ｆｃ領域内のオリゴ糖を部分的にフコシル化するために十分な量でＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドをコードする少なくとも一つの核酸を発現するように改変された糖修飾宿主細胞に発現されうる。一実施態様では、ＧｎＴＩＩＩ活性を有するポリペプチドは融合ポリペプチドである。代替的に、宿主細胞のα１，６−フコシルトランスフェラーゼ活性は、米国特許第６９４６２９２号によれば、糖修飾宿主細胞を生成するために、低減又は排除することができる。抗体のフコシル化の量は、例えば発酵条件（例えば発酵時間）によって又は異なるフコシル化の量を有する少なくとも二つの抗体の組み合わせによって、予め定めることができる。このようなアフコシル化抗体及びそれぞれの糖鎖工学法は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Umana, P., et al., Nature Biotechnol 17 (1999) 176-180、国際公開第９９／１５４３４２号、国際公開第２００５／０１８５７２号、国際公開第２００６／１１６２６０号、国際公開第２００６／１１４７００号、国際公開第２００５／０１１７３５号、国際公開第２００５／０２７９６６号、国際公開第９７／０２８２６７号、米国特許出願公開第２００６／０１３４７０９号、米国特許出願公開第２００５／００５４０４８号、米国特許出願公開第２００５／０１５２８９４号、国際公開第２００３／０３５８３５号、国際公開第２０００／０６１７３９号に開示されている。これらの糖改変抗体は増加したＡＤＣＣを有する。本発明によるアフコシル化抗体を生産する他の糖鎖工学法は、Niwa, R.. et al., J. Immunol. Methods 306 (2005) 151-160; Shinkawa, T., et al., J. Biol. Chem, 278 (2003) 3466-3473；国際公開第０３／０５５９９３又は米国特許出願公開第２００５／０２４９７２２号に記載されている。
本発明の一態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有する、ＣＤ２０に特異的に結合するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプの（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプの）アフコシル化抗ＣＤ２０抗体である。本発明の別の態様は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを併用するがんの治療のための医薬の製造のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースを有する、ＣＤ２０に特異的に結合するＩｇＧ１又はＩｇＧ３アイソタイプの（好ましくはＩｇＧ１アイソタイプの）アフコシル化抗ＣＤ２０抗体の使用である。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％〜２０％である。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％〜４０％である。一実施態様では、フコースの量は、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の０％である。
ＣＤ２０（Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５としても知られ；配列は、ＳｗｉｓｓＰｒｏｔデータベースエントリー番号Ｐ１１８３６を特徴とする）は、プレＢ及び成熟Ｂリンパ球に位置して約３５ｋＤの分子量を有する疎水性膜貫通タンパク質である（Valentine, M.A. et al., J. Biol. Chem. 264 (1989) 11282-11287; Tedder, T.F., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85 (1988) 208-212; Stamenkovic, I., et al., J. Exp. Med. 167 (1988) 1975-1980; Einfeld, D.A., et al., EMBO J. 7 (1988) 711-717; Tedder, T.F., et al., J. Immunol. 142 (1989) 2560-2568）。対応するヒト遺伝子は、膜貫通４ドメイン、サブファミリーＡ、メンバー１であり、ＭＳ４Ａ１としても知られる。この遺伝子は、膜貫通４Ａ遺伝子ファミリーのメンバーをコードする。この新生タンパク質ファミリーのメンバーは、共通の構造的特徴及び類似のイントロン／エクソンのスプライス境界により特徴づけられ、造血細胞及び非リンパ系組織の中に固有の発現パターンを示す。この遺伝子は、Ｂ細胞の形質細胞への発達及び分化に参画するＢリンパ球表面分子をコードする。このファミリーメンバーは、ファミリーメンバーのクラスターの中でも１１ｑ１２に局在する。この遺伝子の選択的スプライシングは、同じタンパク質をコードする二つの転写変異体をもたらす。
用語「ＣＤ２０」及び「ＣＤ２０抗原」は、本明細書において区別せずに使用され、細胞により天然に発現されたか又はＣＤ２０遺伝子でトランスフェクトされた細胞上に発現したヒトＣＤ２０の任意の変異体、アイソフォーム及び種相同体を含む。本発明の抗体のＣＤ２０抗原への結合は、ＣＤ２０を不活性化することにより、ＣＤ２０を発現する細胞（例えば腫瘍細胞）の死滅を媒介する。ＣＤ２０を発現する細胞の死滅は、以下の機序の一又は複数により生じうる：細胞死／アポトーシス誘発、ＡＤＣＣ及びＣＤＣ。
当技術分野で認識されているＣＤ２０の同義語は、Ｂリンパ球抗原ＣＤ２０、Ｂリンパ球表面抗原Ｂ１、Ｌｅｕ−１６、Ｂｐ３５、ＢＭ５、及びＬＦ５を含む。
本発明による用語「抗ＣＤ２０抗体」は、ＣＤ２０抗原に特異的に結合する抗体である。抗ＣＤ２０抗原への抗ＣＤ２０抗体の結合特性及び生物活性に応じて、抗ＣＤ２０抗体の二つの型（Ｉ型及びＩＩ型抗ＣＤ２０抗体）がCragg, M.S., et al., Blood 103 (2004) 2738-2743; and Cragg, M.S., et al., Blood 101 (2003) 1045-1052により区別される。表１を参照のこと。
ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体の例には、例えばヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体ＩｇＧ１（国際公開第２００５／０４４８５９号に開示されるようなキメラヒト化ＩｇＧ１抗体）、１１Ｂ８ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号に開示）、及びＡＴ８０ ＩｇＧ１が含まれる。典型的には、ＩｇＧ１アイソタイプのＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、特徴的なＣＤＣ特性を示す。ＩｇＧ１アイソタイプのＩ型抗体と比較して、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体は、（ＩｇＧ１アイソタイプの場合）減少したＣＤＣを有する。
Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例は、例えばリツキシマブ、ＨＩ４７ ＩｇＧ３（ＥＣＡＣＣ、ハイブリドーマ）、２Ｃ６ ＩｇＧ１（国際公開第２００５／１０３０８１号に記載）、２Ｆ２ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０３５６０７号及び同第２００５／１０３０８１号に記載）及び２Ｈ７ ＩｇＧ１（国際公開第２００４／０５６３１２号に記載）を含む。
本発明によるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、一実施態様では、ＩＩ型抗ＣＤ２０抗体であり、別の実施態様ではアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
本発明によるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、フコースが低減していない抗ＣＤ２０抗体とは異なり、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の増大を有する。
「抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の増大を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体」は、本明細書におけるこの用語の定義によれば、当業者に既知のいずれかの適切な方法により決定した場合にＡＤＣＣの増大を有するアフコシル化抗ＣＤ２０抗体を意味する。一つの受容されるインビトロＡＤＣＣアッセイは以下の通りである：
１）アッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが既知である標的細胞を使用する；
２）アッセイは、エフェクター細胞として、無作為に選ばれた健常なドナーの血液から単離されたヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を使用する；
３）アッセイは、以下のプロトコールに従って実行される：
ｉ）ＰＢＭＣを、標準の密度遠心分離手順を用いて単離し、ＲＰＭＩ細胞培地において、５×１０６細胞／ｍｌで懸濁する；
ｉｉ）標的細胞を、標準の組織培養法によって増殖させ、指数増殖期に９０％を上回る生存率で回収し、ＲＰＭＩ細胞培地中で洗浄し、１００マイクロキュリーの５１Ｃｒで標識し、細胞培地で二回洗浄し、細胞培地中に１０５細胞／ｍｌの密度で再懸濁する；
ｉｉｉ）１００マイクロリットルの上記最終的な標的細胞懸濁液を、９６ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移す；
ｉｖ）抗体を、細胞培地において４０００ｎｇ／ｍｌから０．０４ｎｇ／ｍｌへ連続的に希釈し、得られた抗体溶液５０マイクロリットルを９６ウェルマイクロタイタープレートの標的細胞に加え、上記全濃度範囲をカバーする種々の抗体濃度を三重に試験する；
ｖ）最大放出（ＭＲ）コントロールのために、標識した標的細胞を含むプレート内の更に３つのウェルに、抗体溶液（上記ｉｖ）の代わりに非イオン性洗剤（Ｎｏｎｉｄｅｔ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）の２％（ＶＮ）水溶液５０マイクロリットルを入れる；
ｖｉ）自然放出（ＳＲ）コントロールのために、標識した標的細胞を含むプレート内の更に３つのウェルに、抗体溶液（上記ｉｖ）の代わりにＲＰＭＩ細胞培地５０マイクロリットルを入れる；
ｖｉｉ）次いで９６ウェルマイクロタイタープレートを５０×ｇで１分間遠心分離し、１時間４℃でインキュベートする；
ｖｉｉｉ）ＰＢＭＣ懸濁液５０マイクロリットル（上記ｉ）を各ウェルに加えて、エフェクター対標的の比を２５：１とし、プレートを、５％のＣＯ２雰囲気下で３７℃で４時間インキュベーター内に置く；
ｉｘ）各ウェルの無細胞上清を回収し、γ計数器を用いて実験的に放出された放射能（ＥＲ）を定量化する；
ｘ）特異的溶解のパーセンテージを、各抗体濃度について、式（ＥＲ−ＭＲ）／（ＭＲ−ＳＲ）×１００（ＥＲは、その抗体濃度について定量化された平均放射能（上記ｉｘ参照）であり、ＭＲはＭＲコントロール（上記Ｖ参照）について定量化された平均放射能（上記ｉｘ参照）であり、ＳＲはＳＲコントロール（上記ｖｉ参照）について定量化された平均放射能（上記ｉｘ参照）である）に従って算出する；
４）「ＡＤＣＣの増大」は、上記試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの上昇、及び／又は上記試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの二分の一を達成するために必要な抗体濃度の低減と定義される。ＡＤＣＣの増大は、同じ標準的な生成、精製、製剤化、及び貯蔵方法（当業者に既知の）を用いて、但しＧｎＴＩＩＩを過剰発現するように改変された宿主細胞により生成されたものでない、同じ型の宿主細胞により生成され、同じ抗体により媒介される、上記アッセイを用いて測定されたＡＤＣＣと相対的なものである。
前記「ＡＤＣＣの増大」は、前記抗体の糖鎖工学により得られ、これは、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載のように、モノクローナル抗体の前記天然の細胞媒介性エフェクター機能を、それらのオリゴ糖成分を操作することにより増強させることを意味する。
用語「補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）」は、補体の存在下での、本発明の抗体によるヒト腫瘍標的細胞の溶解を意味する。ＣＤＣは、好ましくは、補体の存在下で、本発明による抗ＣＤ２０抗体を用いてＣＤ２０発現細胞の調製物を処理することにより測定される。ＣＤＣは、抗体が、４時間後に濃度１００ｎＭにおいて腫瘍細胞の２０％以上の溶解（細胞死）を引き起こした場合に見出される。アッセイは、好ましくは５１Ｃｒ又はＥｕ標識した腫瘍細胞及び放出された５１Ｃｒ又はＥｕの測定により実行される。コントロールには、補体を含むが抗体を含まない腫瘍標的細胞のインキュベーションが含まれる。
「リツキシマブ」抗体（参照抗体；Ｉ型抗ＣＤ２０抗体の例）は、ヒトＣＤ２０抗原に対する遺伝子操作キメラヒトγ１マウス定常ドメイン含有モノクローナル抗体である。このキメラ抗体は、ヒトγ１定常ドメインを含み、１９９８年４月１７日に発行され、ＩＤＥＣ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに付与された米国特許第５７３６１３７号（Ａｎｄｅｒｓｅｎ等）に「Ｃ２Ｂ８」という名称で同定されている。リツキシマブは、再発性又は難治性の低悪性度又は濾胞性のＣＤ２０陽性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫の患者の治療に対して承認されている。インビトロ作用機序研究は、リツキシマブがヒト補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を呈することを示している（Reff, M.E., et. al, Blood 83(2) (1994) 435-445）。加えて、リツキシマブは、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を測定するアッセイにおいて有意な活性を呈する。リツキシマブはアフコシル化されない。
「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」なる用語は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に開示されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体を指し、これらは、マウスモノクローナル抗ＣＤ２０抗体Ｂ−Ｌｙ１（マウス重鎖の可変領域（ＶＨ）：配列番号１；マウス軽鎖の可変領域（ＶＬ）：配列番号２（Poppema, S. and Visser, L., Biotest Bulletin 3 (1987) 131-139を参照）を、ＩｇＧ１由来のヒト定常ドメインを用いてキメラ化し、続いてヒト化することにより取得された（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号を参照）。これらの「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号に詳細に開示されている。
一実施態様において、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号３から配列番号１９の群から選択される重鎖の可変領域（ＶＨ）を有する（国際公開第２００５／０４４８５９及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２からＢ−ＨＨ９及びＢ−ＨＬ８からＢ−ＨＬ１７）。特定の実施態様において、このような可変ドメインは、配列番号３、４、７、９、１１、１３及び１５からなる群より選択される（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ２、ＢＨＨ−３、Ｂ−ＨＨ６、Ｂ−ＨＨ８、Ｂ−ＨＬ８、Ｂ−ＨＬ１１及びＢ−ＨＬ１３）。特定の実施態様において、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号２０の軽鎖（ＶＬ）の可変領域（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１）を有する。特定の実施態様において、「ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体」は、配列番号７の重鎖の可変領域（ＶＨ）（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＨＨ６）と、配列番号２０の軽鎖の可変領域（ＶＬ）（国際公開第２００５／０４４８５９号及び国際公開第２００７／０３１８７５号のＢ−ＫＶ１）を有する。更に、一実施態様において、ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、ＩｇＧ１抗体である。本発明によれば、かかるアフコシル化ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、国際公開第２００５／０４４８５９号、国際公開第２００４／０６５５４０号、国際公開第２００７／０３１８７５号、Umana, P. et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び国際公開第９９／１５４３４２号に記載された手順に従ってＦｃ領域において糖改変（ＧＥ）される。一実施態様では、アフコシル化糖改変ヒト化Ｂ−Ｌｙ１はＢ−ＨＨ６−Ｂ−ＫＶ１ ＧＥである。一実施態様では、抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブ（WHO Drug Information, Vol. 26, No. 4, 2012, p. 453で推奨されるＩＮＮ）。本明細書で使用される場合、オビヌツズマブは、ＧＡ１０１の同義語である。これは、全ての旧版を差し替え（例えばVol. 25, No. 1, 2011, p.75-76）、元はアフツズマブとして知られていたものである（WHO Drug Information, Vol. 23, No. 2, 2009, p. 176;Vol. 22, No. 2, 2008, p. 124で推奨されるＩＮＮ）。
このような糖改変ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は、Ｆｃ領域において改変されたグリコシル化パターンを有しており、好ましくは、フコース残基のレベルが低下している。一実施態様では、フコースの量はＡｓｎ２９７のオリゴ糖の総量の６０％以下である（一実施態様では、フコースの量は４０％〜６０％であり、別の実施態様では、フコースの量は５０％以下であり、更に別の実施態様では、フコース量は３０％以下である）。別の実施態様では、Ｆｃ領域のオリゴ糖は好ましくは二分されている。これらの糖改変ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体は増加したＡＤＣＣを有する
特に断らない限り、本明細書で使用される用語「ＣＤ７９ｂ」は、霊長類（例えばヒト、カニクイザル（ｃｙｎｏ））及びげっ歯類（例えば、マウス、ラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物由来の任意の天然型ＣＤ７９ｂを指す。ヒトＣＤ７９ｂは、本明細書では「ＰＲＯ３６２４９」（配列番号２２）とも呼ばれ、本明細書で「ＤＮＡ２２５７８６」とも呼ばれるヌクレオチド配列（配列番号２１）によってコードされる。カニクイザルＣＤ７９ｂは、本明細書では「ｃｙｎｏ ＣＤ７９ｂ」又は「ＰＲＯ２８３６２７」（配列番号８０）とも呼ばれ、本明細書で「ＤＮＡ５４８４５５」とも呼ばれるヌクレオチド配列（配列番号７９）によってコードされる。用語「ＣＤ７９ｂ」は、「完全長」の、未処理のＣＤ７９ｂ並びに細胞内でのプロセシングから生じた任意の形態のＣＤ７９ｂ包含する。この用語は、天然に存在するＣＤ７９ｂの変異体、例えばスプライスバリアント、対立遺伝子変異体及びアイソフォームも包含する。本明細書に記載されるＣＤ７９ｂポリペプチドは、様々な供給源、例えばヒト組織型から又は別の供給源から単離することができるか、又は組換え若しくは合成法により調製される。「天然配列ＣＤ７９ｂポリペプチド」は、天然由来の対応するＣＤ７９ｂポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。このような天然配列ＣＤ７９ｂポリペプチドは、自然から単離することができるか、又は組換え手段若しくは合成手段により生成することができる。用語「天然配列ＣＤ７９ｂポリペプチド」は、具体的には、特異的なＣＤ７９ｂポリペプチドの天然に存在する切断型又は分泌形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、ポリペプチドの天然に存在する変異形態（例えば、選択的にスプライシングされた形態）及び天然に存在する対立遺伝子変異体を包含する。
「ＭＡ７９ｂ」又は「マウスＣＤ７９ｂ抗体」又は「マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体」は、本明細書では具体的には、配列番号２６（図７）の軽鎖可変ドメイン及び配列番号２９（図８）の重鎖可変ドメインを含む、マウス抗ＣＤ７９ｂモノクローナル抗体を指すために使用される。マウス抗ＣＤ７９ｂモノクローナル抗体は、Ｂｉｏｍｅｄａ（抗ヒトＣＤ７９ｂ抗体；Foster City, CA）、ＢＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（抗ヒトＣＤ７９ｂ抗体；San Diego, CA）又はＡｎｃｅｌｌ（抗ヒトＣＤ７９ｂ抗体；Bayport, MN）といった商業的供給源から購入することができるか、又は１９９３年７月２０日にＡＴＣＣに寄託された、ハイブリドーマクローン３Ａ２−２Ｅ７アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ）寄託指定番号ＨＢ１１４１３から生成することができる。
「ｃｈＭＡ７９ｂ」又は「キメラＭＡ７９ｂ抗体」は、本明細書において、具体的には、配列番号２３の軽鎖を含むキメラ抗ヒトＣＤ７９ｂ抗体（米国特許出願第１１／４６２，３３６号（２００６年８月３日出願）に以前記載された）を指すために使用される。配列番号２３の軽鎖は更に、配列番号２６（図７）の可変ドメイン及びヒトＩｇＧ１の軽鎖定常ドメインを含む。キメラ抗ＣＤ７９ｂ抗体は更に、配列番号２４の重鎖を含む。配列番号２４の重鎖は更に、配列番号２９（図８）の可変ドメイン及びヒトＩｇＧ１の重鎖定常ドメインを含む。
「抗ｃｙｎｏＣＤ７９ｂ」又は「抗ｃｙｎｏ ＣＤ７９ｂ」は、本明細書において、ｃｙｎｏ ＣＤ７９ｂに結合する抗体（２００６年８月３日出願の米国特許出願第１１／４６２３３６号に以前に記載された配列番号８０）を指すために使用される。「抗ｃｙｎｏＣＤ７９ｂ（ｃｈ１０Ｄ１０）」又は「ｃｈ１０Ｄ１０」は、本明細書において、ｃｙｎｏＣＤ７９ｂ（配列番号８０）に結合するキメラ抗ｃｙｎｏＣＤ７９ｂ（２００６年８月３日出願の米国特許出願第１１／４６２３３６号に以前に記載された）を指すために使用される。抗ｃｙｎｏＣＤ７９ｂ（ｃｈ１０Ｄ１０）又はｃｈ１０Ｄ１０は、配列番号８１の軽鎖を含むキメラ抗ｃｙｎｏＣＤ７９ｂ抗体である。抗ｃｙｎｏＣＤ７９ｂ（ｃｈ１０Ｄ１０）又はｃｈ１０Ｄ１０は更に、配列番号８２の重鎖を含む。
「ＭＡ７９ｂ移植片」又は「ＭＡ７９ｂ移植「ヒト化」抗体」又は「ｈｕＭＡ７９ｂ移植片」は、本明細書において、具体的には、マウス抗ＣＤ７９ｂ抗体（ＭＡ７９ｂ）由来の超可変領域を、Ｒ７１Ａ、Ｎ７３Ｔ及びＬ７８によりヒトサブグループＩＩＩコンセンサスＶＨ（ｈｕＩＩＩ）及びアクセプターヒトコンセンサスＶＬ κＩ（ｈｕＫＩ）中に移植することにより生成される移植片を指すために使用される（Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)）（配列番号２７（図７）及び配列番号３０（図８）参照）。
用語「抗ＣＤ７９ｂ抗体」、又は「ＣＤ７９ｂに結合する抗体」は、ＣＤ７９ｂを標的とするうえで診断薬剤及び／又は治療的薬剤として有用であるように十分な親和性でＣＤ７９ｂに結合することができる抗体を指す。好ましくは、抗ＣＤ７９ｂ抗体の、無関係な、非ＣＤ７９ｂタンパク質への結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した場合、抗体のＣＤ７９ｂへの結合の約１０％未満である。特定の実施態様において、ＣＤ７９ｂ標的に結合する抗体の解離定数（Ｋｄ値）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、又は≦０．１ｎＭである。特定の実施態様において、抗ＣＤ７９ｂ抗体は、異なる種由来のＣＤ７９ｂの中で保存されているＣＤ７９ｂのエピトープに結合する。用語「抗ＣＤ７９ｂ抗体」は特に、引用により本明細書に包含される国際公開第２００９／０９９７２８号に開示されるいずれかの抗ＣＤ７９ｂ抗体を指す。
「単離された」抗体は、その自然環境の成分から同定及び分離され、及び／又は回収されたものである。その自然環境の汚染成分は、その抗体の治療的使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質を含みうる。好ましい実施態様において、抗体は、（１）ローリー法で決定される抗体の９５重量％を超えるまで、及び最も好ましくは９９重量％を超えるまで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用することにより、少なくとも１５残基のＮ末端あるいは内部アミノ酸配列を得るのに充分な程度まで、又は（３）クーマシーブルー又は好ましくは銀染色を使用した還元又は非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均一になるまで精製される。単離された抗体は、抗体の自然環境の少なくとも一つの成分が存在しないため、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕの抗体を含む。しかしながら、通常は、単離された抗体は少なくとも一つの精製工程により調製される。
基本的な４鎖抗体単位は、二つの同一の軽（Ｌ）鎖と二つの同一の重（Ｈ）鎖からなるヘテロ四量体の糖タンパク質である（ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加のポリペプチドを伴う基本的なヘテロ四量体単位５個からなり、したがって１０個の抗原結合部位を有し、一方分泌型ＩｇＡ抗体は、重合して、Ｊ鎖を伴う基本的な４鎖単位２〜５個を含む多価の集合体を形成することができる。ＩｇＧの場合、４鎖単位は通常約１５００００ダルトンである。各Ｌ鎖は、一の共有ジスルフィド結合によりＨ鎖にリンクし、二つのＨ鎖は、Ｈ鎖のアイソタイプにより一又は複数のジスルフィド結合により互いにリンクしている。また、各Ｈ及びＬ鎖は、一定の間隔で位置する鎖内ジスルフィド架橋を有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端に可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それにα鎖及びγ鎖の各々につき三つの定常ドメイン（ＣＨ）と、アイソタイプμ及びεの各々につき四つのＣＨドメインが続く。各Ｌ鎖はＮ末端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、それにその他端の定常ドメイン（ＣＬ）が続く。ＶＬはＶＨと整列しており、ＣＬは重鎖の第１の定常ドメインと（ＣＨ１）整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖及び重鎖可変ドメイン間の境界面を形成すると考えられる。一つのＶＨと一つのＶＬを合わせたペリングは、単一の抗原結合部位を形成する。抗体の異なる種類の構造及び特性については、例えばBasic and Clinical Immunology, 8th edition, Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton and Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6を参照されたい。
任意の脊椎動物種由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ及びラムダと呼ばれる二つの明確に区別される型の一つに割り当てることができる。その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは異なる種類又はアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンの５つの種類、即ち：それぞれα、δ、ε、γ、及びμと命名される重鎖を有するＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがある。γ及びαの種類は、ＣＨ配列及び機能の比較的小さな差異に基づいて、更にサブクラスに分割され、例えばヒトは以下のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２。
抗体の「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の重鎖又は軽鎖のＮ末端ドメインを指す。重鎖の可変ドメインを「ＶＨ」と称する。軽鎖の可変ドメインを「ＶＬ」と称する。これらドメインは、抗体の通常最も可変度の高い部分であり、抗原結合部位を含んでいる。
用語「可変」は、可変ドメインの特定のセグメントは抗体間で配列が広範囲に異なるという事実を指す。Ｖドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に関する特定の抗体の特異性を定義する。しかしながら、可変性は、可変ドメインの１１０個のアミノ酸範囲にわたって一様に分布してはいない。そうではなく、Ｖ領域は、それぞれ９〜１２アミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる極度に可変性のより短い領域で分割された、１５〜３０個のアミノ酸のフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的不変のストレッチからなる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ四つのＦＲを含み、大部分がβシート構成をとり、三つの超可変領域により繋がっており、この三つの超可変領域はβシート構造と繋がり、場合によってはβシート構造の一部を形成する、ループを形成する。各鎖の超可変領域は、ＦＲにより互いに極めて近接した状態で保持され、他の鎖由来の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)を参照）。定常ドメインは、抗原との抗体の結合には直接関わっていないが、抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）における抗体の関与など、多様なエフェクター機能を呈する。
「インタクトな」抗体は、抗原結合部位と、ＣＬ、及び少なくとも重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体でありうる。好ましくは、インタクトな抗体は、一又は複数のエフェクター機能を有する。
本明細書における目的のための「ネイキッド抗体」は、細胞傷害性部分又は放射標識にコンジュゲートされない抗体である。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部分、好ましくはインタクトな抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体断片の例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Zapata et al., Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]参照）；一本鎖抗体分子；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が含まれる。一実施態様では、抗体断片は、インタクトな抗体の抗原結合部位を含み、したがって抗原結合能を保持している。
抗体のパパイン消化により、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる二つの同一の抗原結合断片と、残りの「Ｆｃ」断片が生じ、消化は容易に結晶化する能力を反映している。Ｆａｂ断片は、Ｌ鎖全体並びにＨ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）、及び一つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、即ち単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理により単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片が生じ、これは凡そ、二価の抗原結合活性を有するジスルフィド結合した二つのＦａｂ断片に対応し、依然として抗原に架橋することができる。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の一又は複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数個の残基を更に有している点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書において、Ｆａｂ’の一般名称であり、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つ。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生成された。抗体断片の他の化学結合も知られている。抗体断片の他の化学結合も知られている。
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、Ｆｃ領域内の配列によって決定される。この領域は、特定の細胞型に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される部分でもある。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、一つの重鎖及び一つの軽鎖可変領域ドメインが、堅固な非共有結合をなした二量体からなる。単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）種では、柔軟なペプチドリンカーによって一つの重鎖及び一つの軽鎖可変ドメインが共有結合性に連結することができ、よって軽鎖及び重鎖は、二本鎖Ｆｖ種におけるものと類似の「二量体」構造に結合することができる。これら二つのドメインの折り畳みから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に対する抗原結合特異性を付与する六つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖それぞれ由来の３つのループ）が生じる。しかしながら、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な三つのＣＤＲのみを含むＦｖの半分）でさえ、結合部位全体よりも親和性が低くなるが、抗原を認識てし結合する能力を有している。
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される「単鎖Ｆｖ」は、単一ポリペプチド鎖中に接続するＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはｓＦｖが抗原結合に所望の構造を形成することを可能にする。ｓＦｖの総説については、Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994); Borrebaeck 1995, infraを参照のこと。
用語「ダイアボディ」は、二つの抗原結合部位を持つ抗体断片を指し、その断片は、同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。この小さな抗体断片は、ｓＦｖ断片（前段落参照）を、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５〜１０の残基）を用いて、Ｖドメインの鎖内ペアリングではなく鎖間ペアリングを達成させることにより二価の断片、即ち二つの抗原結合部位を有する断片をつくることにより調製される。ダイアボディは二価でも二特異性でもよい。二重特異性ダイアボディは、二つの抗体のＶＨドメインとＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する二つの「クロスオーバー」Ｆｖ断片のヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、ＥＰ４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448 (1993)に更に詳細に記載されている。トリアボディ及びテトラボディもHudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)に記載されている。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を意味し、即ち、少量で存在しうる可能な天然発生変異体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。更に、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体によって汚染されずに合成されうるという点で有利である。修飾語の「モノクローナル」は、いずれかの特定の方法による抗体の生成を必要とするものではない。例えば、本発明に有用なモノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature 256:495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製されてもよく、又は、細菌、真核生性動物又は植物細胞における組換えＤＮＡ法を用いて作製されてもよい（例えば、米国特許第４８１６５６７号参照）。「モノクローナル抗体」はまた、例えば、Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)及びMarks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)に記載されている技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
本明細書においてモノクローナル抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分は特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一若しくは相同であるが、鎖（複数可）の残りの部分は別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一若しくは相同である、「キメラ」抗体、並びに、所望の生物学的活性を呈するものである限りそのような抗体の断片を含む（例えば、米国特許第４８１６５６７号；及びMorrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855 (1984)）。本明細書における目的のキメラ抗体は、非ヒト霊長動物（例：旧世界サル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列及びヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体を含む。
非ヒト（例えばげっ歯類）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト抗体に由来する最小配列を含むキメラ抗体である。大抵の場合、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域由来の残基が、非ヒト種、例えば、所望の抗体特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長動物の超可変領域（ドナー抗体）由来の残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの例においては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。更に、ヒト化抗体はレシピエント抗体又はドナー抗体において見い出されない残基を含みうる。これらの修飾は、抗体性能を更に洗練させるためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも一つ、典型的には二つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべて又は実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべて又は実質的にすべてがヒト免疫グロブリン配列のものである。また、ヒト化抗体は、場合によっては、免疫グロブリン、通常はヒト免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含む。更なる詳細については、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988);及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照のこと。以下の概説文献及び本明細書の引用文献も参照されたい：Vaswani and Hamilton, Ann. Allergy, Asthma and Immunol., 1:105-115 (1998); Harris, Biochem. Soc. Transactions, 23:1035-1038 (1995); Hurle and Gross, Curr. Op. Biotech., 5:428-433 (1994)。
抗体に言及して本明細書で使用される「Ｔｈｉｏ」は、システイン操作抗体を指し、抗体に言及して本明細書で使用される「ｈｕ」はヒト化抗体を指す。
「ヒト抗体」は、ヒトによって生成される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を有するもの、及び／又は本明細書に記載の、ヒト抗体を製造するための任意の技術を使用して製造されたものである。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で既知の様々な技術を用いて生成することができる。Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)。ヒトモノクローナル抗体の調製にやはり利用可能であるのは、Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)に記載の方法である。van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)も参照されたい。ヒト抗体は、抗原を、抗原曝露に応答してこのような抗体を生成するように修飾されているが、その内因性座位が無能にされているトランスジェニック動物、例えば免疫化是のマウスに投与することにより調製することができる（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術に関する米国特許第６０７５１８１号及び６１５０５８４号参照）。例えば、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により精製されたヒト抗体に関するLi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)も参照されたい。
本明細書で使用される用語「超可変領域」、「ＨＶＲ」又は「ＨＶ」は、配列が超可変である、及び／又は構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般的に、抗体は、ＶＨに三つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに三つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の計六つの超可変領域を含む。複数の超可変領域の描写が使用されており、本明細書に含まれる。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は配列可変性に基づいており、最も一般的に使用されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）。Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに構造的ループの位置に言及している（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。Ｋａｂａｔ番号付け法を用いて番号付けした場合のＣｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ−Ｈ１ループの末端は、ループの長さに応じてＨ３２とＨ３４の間で変化する（これは、Ｋａｂａｔ番号付け式ではＨ３５ＡとＨ３５Ｂに挿入を置くために；３５Ａも３５Ｂも存在しない場合、ループは３２で終端し；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終端し；３５Ａ及び３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終端することによる）。ＡｂＭの超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループの間の妥協を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。「接触」超可変領域は、利用できる複合体結晶構造の解析に基づく。これらの超可変領域の各々由来の残基は以下に記される。
超可変領域は、以下のような「拡張された超可変領域」を含んでいてよい：ＶＬの２４〜３６又は２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６又は５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７（Ｌ３）、並びにＶＨの２６〜３５Ｂ（Ｈ１）、５０〜６５、４７〜６５又は４９〜６５（Ｈ２）及び９３〜１０２、９４〜１０２又は９５〜１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基には、これら各々の定義のために、上掲のＫａｂａｔ等，に従って番号を付した。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。
用語「Ｋａｂａｔの可変ドメイン残基番号付け」又は「Ｋａｂａｔのアミノ酸位置の番号付け」及びそれらの変形は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)の抗体の編集の軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインに対して用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを用いると、実際の線状のアミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲ又はＨＶＲの短縮物又はそれらへの挿入物に相当する、より少ないアミノ酸又は付加的なアミノ酸を含みうる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入物（Ｋａｂａｔによれば残基５２ａ）及び重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入残基（例えば、Ｋａｂａｔによれば残基８２ａ、８２ｂ及び８２ｃなど）を含みうる。残基のＫａｂａｔ番号付けは、「標準的な」Ｋａｂａｔ番号付けをされた配列と、抗体の配列相同性がある領域において配列比較することにり、所与の抗体について決定されうる。
Ｋａｂａｔナンバリングシステムは一般に、可変ドメイン内の残基（およそ軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）に言及するときに用いられる（例えば、Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)）。免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する場合には、一般に「ＥＵ番号付けシステム」又は「ＥＵインデックス」を用いる（例えば、上掲のＫａｂａｔ等に記載のＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔのＥＵインデックス」はヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。本明細書では、特に明記しない限り、抗体の可変ドメイン内の残基番号の参照は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基の番号付けを意味する。本明細書では、特に明記しない限り、抗体の定常ドメイン内の残基番号の参照は、ＥＵ番号付けシステムによる残基の番号付けを意味する（例えば、米国特許仮出願第６０／６４０３２３号、ＥＵナンバリングの図参照）。
「親和性成熟」抗体は、その一又は複数のＨＶＲに一又は複数の改変を含むことにより、そのような改変を有さない親抗体と比較して抗原に対する抗体の親和性が向上している抗体である。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル単位の、場合によってはピコモル単位の親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野において既知の手順により生成される。Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)には、ＶＨ及びＶＬドメインのシャフリングによる親和性成熟が記載されている。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は：Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813 (1994); Schier et al. Gene 169:147-155 (1995); Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995); Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995); and Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)に記載されている。
「阻止」抗体又は「アンタゴニスト」抗体は、結合する抗原の生物活性を阻害又は低減する抗体である。好ましい阻止抗体又はアンタゴニスト抗体は、実質的に又は完全に抗原の生物活性を阻害する。
本明細書で使用される「アゴニスト抗体」は、対象のポリペプチドの機能的活性の少なくとも一つを模倣する抗体である。
「種依存性抗体」、例えば哺乳動物の抗ヒトＩｇＥ抗体は、第一の哺乳動物種由来の抗原に対し、第二の哺乳動物種由来の抗原の相同体に対して有している結合親和性よりも強力な結合親和性を有する抗体である。通常、種依存性抗体は、ヒト抗原と「特異的に結合」する（即ち、１×１０−７Ｍ、好ましくは約１×１０−８以下、及び最も好ましくは約１×１０−９Ｍ以下の結合親和性（Ｋｄ）値を有する）が、ヒト抗原に対するその結合親和性よりも弱い、少なくとも約５０分の一、又は少なくとも約５００分の一、又は少なくとも約１０００分の一の、第二の非ヒト哺乳動物種由来の抗原の相同体に対する結合親和性を有する。種依存性抗体は、上で定義した様々な型の抗体のいずれとすることもできるが、好ましくはヒト化又はヒト抗体である。
一般的に、「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有の相互作用の総和の強度を指す。本明細書で使用する場合、特に断らない限り、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映している本質的な結合親和性を指す。そのパートナーＹに対する分子Ｘの親和性は、一般的に解離定数（Ｋｄ）で表すことができる。親和性は、本明細書に記載したものを含む、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は通常、抗原にゆっくり結合して素早く解離する傾向があるのに対し、高親和性抗体は通常、抗原により速く結合し、より長く結合を維持する傾向がある。結合親和性の種々の測定方法は当技術分野において周知であり、それらの何れも本発明の目的ために用いることができる。特定の説明的実施態様を後述する。
本明細書において結合親和性に言及して使用される「又はそれより良好」という表現は、分子とその結合パートナーの間のより強い結合を指す。本明細書で使用される「又はそれより良好」という表現は、数字的なＫｄ値がより小さいことによって表されるより強い結合を指す。例えば、抗原に対して「０．６ｎＭ又はそれより良好」の親和性を有する抗体、抗体の抗原に対する親和性は＜０．６ｎＭ、即ち０．５９ｎＭ、０．５８ｎＭ、０．５７ｎＭなど、又は０．６ｎＭ未満のいずれかの値である。
一実施態様では、本発明による「Ｋｄ」又は「Ｋｄ値」は、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を、標識されていない抗原の滴定系列の存在下において、最小濃度の（１２５Ｉ）−標識抗原でＦａｂを均衡化し、次いで抗Ｆａｂ抗体でコートされたプレートに結合した抗原を捕獲することにより測定する以下のアッセイにより記載されるように、対象の抗体のＦａｂバージョンとその抗原を用いて実行される放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される（Chen, et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881）。アッセイ条件を確立するために、マイクロタイタープレート（Ｄｙｎｅｘ）を、５μｇ／ｍｌの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）を含む５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）にて一晩コートし、その後２％（ｗ／ｖ））のウシ血清アルブミンを含むＰＢＳにて室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロックする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）内で、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］−抗原を、段階希釈した目的のＦａｂと混合する（例えば、Presta et. al., (1997) , Cancer Res. 57: 4593-4599の抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致）。次いで目的のＦａｂを一晩インキュベートする；しかしながら、インキュベーションは平衡状態に達したことを確認するまでの期間（例えば６５時間）延長してもよい。その後、混合物を捕獲プレートに移し、室温で（例えば１時間）インキュベートする。次いで、溶液を取り除き、プレートを０．１％のＴｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳにて八回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴｏｐｃｏｕｎｔガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計測する。最大結合の２０％以下濃度のＦａｂを選択してそれぞれ競合結合測定に用いる。
別の実施態様によれば、１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃でＢＩＡｃｏｒｅＴＭ−２０００又はＢＩＡｃｏｒｅＴＭ−２０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．／ニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用する表面プラズモン共鳴アッセイを使用することによりＫｄ値を測定する。簡潔には、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシニミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈し、結合したタンパク質の反応単位（ＲＵ）がおよそ１０になるように５μｌ／分の流速で注入する。抗原の注入後、反応しない群をブロックするために１Ｍのエタノールアミンを注入する。反応速度論的な測定のために、Ｆａｂの２倍の段階希釈（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ））を、２５℃で、およそ２５ｕｌ／分の流速で０．０５％Ｔｗｅｅｎ ２０（ＰＢＳＴ）を含むＰＢＳに注入する。会合及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることによる単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ３．２）を用いて、会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を算出する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として算出する。例えば、Chen, Y., et al., (1999) J. Mol Biol 293:865-881を参照されたい。上記の表面プラスモン共鳴アッセイによる会合速度が１０６ Ｍ−１ Ｓ−１を上回る場合、会合速度は、分光計、例えば流動停止を備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製）又は撹拌キュベットを備えた８０００シリーズＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）で測定される漸増濃度の抗原の存在下において、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；放出＝３４０ｎｍ、帯域通過＝１６ｎｍ）の増加又は減少を測定する蛍光消光技術を用いて決定することができる。
本発明による「ｏｎ−ｒａｔｅ」又は「会合の速度」又は「会合速度」又は「ｋｏｎ」は、上述のように、ＢＩＡｃｏｒｅＴＭ−２０００又はＢＩＡｃｏｒｅＴＭ−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ、Ｉｎｃ．／ニュージャージー州ピスカタウェイ）を用いた上述と同じ表面プラズモン共鳴法により決定することができる。
本明細書で使用される表現「実質的に類似」又は「実質的に同じ」は、当業者が、二つの値の間の差異が、前記値（例えば、Ｋｄ値）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、わずかに又は全く生物学的及び／又は統計学的有意性がないと考えるために、二つの数値（通常、一つは本発明の抗体に関連するもの、他方は参照／比較抗体に関連するもの）の間の十分に高い類似性を意味する。前記二つの値の間の差異は、基準／比較抗体の値の関数として、好ましくは約５０％未満、好ましくは約４０％未満、好ましくは約３０％未満、好ましくは約２０％未満、好ましくは約１０％未満である。
本明細書で使用される表現「実質的に低減」又は「実質的に異なる」は、当業者が、二つの値の間の差異が、前記値（例えば、Ｋｄ値、ＨＡＭＡ応答）によって測定される生物学的特性という脈絡の中で、統計学的に有意であると考えるために、二つの数値（通常、一つは本発明の抗体に関連するもの、他方は参照／比較抗体に関連するもの）の間の十分に高い相違性を意味する。前記二つの値の間の差異は、基準／比較抗体の値に応じて、好ましくは約１０％より大きい、好ましくは約２０％より大きい、好ましくは約３０％より大きい、好ましくは約４０％より大きい、好ましくは約５０％より大きい。
「抗原」は、抗体が選択的に結合することができる所定の抗原である。標的抗原は、ポリペプチド、炭化水素、核酸、脂質、ハプテン又は他の天然に存在する化合物若しくは合成の化合物とすることができる。好ましくは、標的抗原はポリペプチドである。
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬフレームワーク又はＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含有するフレームワークである。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同一のアミノ酸配列を含んでもよく、又は既存のアミノ酸配列の変化を含んでもよい。既存のアミノ酸変化が存在する場合、好ましくは５以下の、好ましくは４以下の、又は３以下の、既存のアミノ酸変化が存在する。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましくは、それら変化は位置７１Ｈ、７３Ｈ及び７８Ｈのうちの三つのみ、二つのみ、又は一つのみであり；例えば、それら位置のアミノ酸残基は７１Ａ、７３Ｔ及び／又は７８Ａである。一実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンのフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と、配列が同一である。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に存在するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般的には、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからのものである。一般的には、配列のサブグループはKabat et al.のサブグループである。一実施態様において、ＶＬについて、サブグループはKabat et al.のサブグループカッパＩである。一実施態様において、ＶＨについて、サブグループはKabat et al.のサブグループＩＩＩである。
「ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワーク」は、Kabat et al.の可変重サブグループＩＩＩのアミノ酸配列に由来するコンセンサス配列を含む。一実施態様では、ＶＨサブグループＩＩＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、以下の配列の各々少なくとも一部又は全部を含む：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号４３）−Ｈ１−ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶ（配列番号４４）−Ｈ２−ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣ（配列番号４５）−Ｈ３−ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号４６）。
「ＶＬサブグループＩコンセンサスフレームワーク」は、Kabat et al.の可変軽カッパサブグループＩのアミノ酸配列に由来するコンセンサス配列を含む。一実施態様では、ＶＬサブグループＩコンセンサスフレームワークのアミノ酸配列は、以下の配列の各々の少なくとも一部又は全部を含む：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号３９）−Ｌ１−ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号４０）−Ｌ２−ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号４１）−Ｌ３−ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ（配列番号４２）。
「非修飾ヒトフレームワーク」は、例えば、アクセプターヒトフレームワークにヒトから非ヒトへのアミノ酸置換を欠く、アクセプターヒトフレームワークと同じアミノ酸配列を有するヒトフレームワークである。
本明細書の目的のための「改変された超可変領域」は、その中に一又は複数の（例えば一から約１６の）アミノ酸置換を含む超可変領域である。
本明細書の目的のための「非修飾超可変領域」は、それが由来する非ヒト抗体と同じアミノ酸配列を有する、即ち、その中に一又は複数のアミノ酸置換を欠く超可変領域である。
対象の抗原、例えば、腫瘍関連ポリペプチド抗原標的と「結合する」抗体は、十分な親和性で抗原と結合することから、その抗原を発現する細胞又は組織の標的化における治療剤として有用であり、他のタンパク質とはそれほど交差反応しない抗体である。このような実施態様において、抗体と「非標的」タンパク質との結合度は、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析又は放射性免疫沈降法（ＲＩＡ）により決定した場合、抗体とその特定の標的タンパク質との結合の約１０％未満であろう。抗体と標的分子との結合に関しては、特定のポリペプチド、又は特定のポリペプチド標的上のエピトープについて、その「特異的結合」、又はそれと「特異的に結合する」、又はそれに対して「特異的である」という用語は、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、分子の結合をコントロール分子の結合との比較で決定することにより測定でき、コントロール分子は、一般に、結合活性を有さない類似構造の分子である。例えば、特異的結合は、標的と類似しているコントロール分子、例えば過剰な非標識標的との競合により決定することができる。この場合、特異的結合は、プローブとの標識標的の結合が、過剰な非標識標的により競合的に阻害される場合に示される。本明細書において使用される「特異的結合」又は特定のポリプチド若しくは特定のポリペプチド標的上のエピトープ「に特異的に結合する」又は「に特異的である」は、例えば、標的に対して少なくとも約１０−４Ｍ、代替的には少なくとも約１０−５Ｍ、代替的には少なくとも約１０−６Ｍ、代替的には少なくとも約１０−７Ｍ、代替的には少なくとも約１０−８Ｍ、代替的には少なくとも約１０−９Ｍ、代替的には少なくとも約１０−１０Ｍ、代替的には少なくとも約１０−１１Ｍ、代替的には少なくとも約１０−１２Ｍ、又はそれ以上のＫｄを有する分子により呈される。一実施態様では、用語「特異的結合」は、分子が特定のポリペプチド若しくは特定のポリペプチド上のエピトープに、実質的に他のいずれのポリペプチド若しくはポリペプチドエピトープにも結合することなく結合することを指す。
「ＣＤ７９ｂポリペプチドを発現する腫瘍細胞の増殖を阻害する」抗体又は「増殖阻害」抗体は、適切なＣＤ７９ｂポリペプチドを発現若しくは過剰発現するがん細胞の測定可能な増殖の阻害をもたらす抗体である。ＣＤ７９ｂポリペプチドは、がん細胞の表面に発現される膜貫通ポリペプチドであるか、又はがん細胞によって生成及び分泌されるポリペプチドである。好ましい増殖阻害性抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂを発現する腫瘍細胞の増殖を、適切なコントロールと比較した場合に、２０％を上回って、好ましくは約２０％〜約５０％、及び更に好ましくは５０％を上回って（例えば、約５０％〜約１００％）阻害する。この場合のコントロールは、典型的には試験される抗体で処理されていない腫瘍細胞である。一実施態様では、増殖の阻害は、細胞培養物中抗体濃度約０．１〜３０μｇ／ｍｌ又は約０．５ｎＭ〜２００ｎＭで測定することができ、増殖の阻害は、抗体に対する腫瘍細胞の暴露から１〜１０日後に決定される。インビボでの腫瘍細胞の増殖の阻害は、この後の実験的実施例のせセクションに記載されるように、様々な方法で決定することができる。体重１ｋｇ当たり約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇでの抗ＣＤ７９ｂ抗体の投与が、抗体の初回投与から５日〜３ヶ月以内に、好ましくは約５〜３０日以内に腫瘍の大きさ又は腫瘍細胞の増殖を低減させる場合、抗体はインビボで増殖阻害性である。
「アポトーシスを誘導する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化、及び／又は膜小胞の形成（アポトーシス小体と呼ばれる）により決定されるプログラム細胞死を誘導する抗体である。細胞は通常、ＣＤ７９ｂポリペプチドを過剰発現する細胞である。好ましくは、細胞は、腫瘍細胞、例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、好塩基球、好酸球、好中球、単球、血小板、又は赤血球といった造血細胞である。アポトーシスに関連づけられる細胞事象を評価するために様々な方法が利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の転位置を、アネキシン結合により測定することができ；ＤＮＡ断片化をＤＮＡラダーにより評価することができ；ＤＮＡ断片化を伴う核／染色質濃縮を、低二倍体細胞のいずれかの増大により評価することができる。好ましくは、アポトーシスを誘導する抗体は、アネキシン結合アッセイにおいて、非処理細胞と比較して約２〜５０倍、好ましくは約５〜５０倍、最も好ましくは約１０〜５０倍のアネキシン結合を誘導する抗体である。
「細胞死を誘導する」抗体は、生細胞を育成不能にする抗体である。細胞は、ＣＤ７９ｂポリペプチドを発現する細胞であり、ＣＤ７９ｂポリペプチドを特異的に発現若しくは過剰発現する細胞型である。細胞は、特定の細胞型のがん性細胞又は正常細胞でよい。ＣＤ７９ｂポリペプチドは、がん細胞の表面に発現される膜貫通ポリペプチドであるか、又はがん細胞によって生成及び分泌されるポリペプチドである。細胞は、癌細胞、例えばＢ細胞又はＴ細胞でよい。インビトロでの細胞死は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）によって誘導される細胞死を区別するために、補体及び免疫エフェクター細胞の非存在下で決定される。このように、細胞死のアッセイは、熱不活性化血清を用いて（即ち、補体の非存在下で）且つ免疫エフェクター細胞の非存在下で実行される。抗体が細胞死を誘導することができるかどうかを決定するために、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルー（Moore et al. Cytotechnology 17:1-11 (1995)参照）又は７ＡＡＤの取り込みにより評価される膜統合性の欠失を、非処理細胞と比較して評価することができる。好ましい細胞死誘導抗体は、ＢＴ４７４細胞のＰＩ取り込みアッセイにＰＩの取り込みを誘導する抗体である。
抗体「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に起因しうる生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプにより変化する。抗体エフェクター機能の例には：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化が含まれる。
本明細書において用語「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域及び変異Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化しうるが、通常ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基から又はＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸長すると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の生成若しくは精製の間に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換えにより改変することによって、除去することができる。したがって、インタクトな抗体の組成には、すべてのＫ４４７残基が除去された抗体集団、Ｋ４４７残基がまったく除去されていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有さない抗体とを混合して有する抗体集団が含まれうる。
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を有している。例示的な「エフェクター機能」には、Ｃ１ｑ結合；ＣＤＣ；Ｆｃ受容体結合；ＡＤＣＣ；食作用；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体；ＢＣＲ）の下方制御などが含まれる。このようなエフェクター機能は、一般に、Ｆｃ領域に結合ドメインが混合していることを必要とし（例えば抗体可変ドメイン）、例えば、本明細書の定義に開示される様々なアッセイを用いて評価することができる。
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然にみられるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域と、天然に存在するその変異体とを含む。
「変異Ｆｃ領域」は、少なくとも一つのアミノ酸修飾、好ましくは一又は複数のアミノ酸置換のおかげで天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも一つのアミノ酸置換を、例えば、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域に、約一から約十のアミノ酸置換、及び好ましくは約一から約五のアミノ酸置換を有する。本明細書の変異Ｆｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９０％の相同性、最も好ましくは少なくとも約９５％の相同性を有する。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合した分泌されたＩｇが、これら細胞傷害性のエフェクター細胞を、抗原を保持する標的細胞に特異的に結合させ、続いて細胞毒性により標的細胞を殺すことができる、細胞傷害性の一形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「有効化」するもので、そのような死滅に絶対的に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現は、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-92 (1991)の４６４ページの表３に要約されている。対象の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５５００３６２号又は同第５８２１３３７号に記載されているようなインビトロＡＤＣＣアッセイを実施してもよい。このようなアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。これに代えて又は加えて、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、Clynes et al. (USA) 95:652-656 (1998)に開示されるように、例えば動物モデルにおいて、インビボで評価することができる。
「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を説明する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）と結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、これらの受容体の対立遺伝子変異体及び代替的にスプライスされた形態も含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化型受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害型受容体」）を含み、これらは、その細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。活性化型受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメイン中に免疫受容活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害型受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメイン中に免疫受容阻害チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）を含む。（概説M. in Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)を参照）。ＦｃＲｓは、Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); and de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995)に概説されている。将来的に同定されることになるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書においては用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語には、胎児への母親のＩｇＧの移行を担う新生児の受容体ＦｃＲｎも含まれる（Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) and Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)）。
例えば、ヒトＦｃＲｎを発現するトランスフェクトされたヒト細胞株若しくはトランスジェニックマウスにおいて、又は変異Ｆｃ領域を有するポリペプチドが投与された霊長類において、ヒトＦｃＲｎへのインビボでの結合及びヒトＦｃＲｎ高親和性結合ポリペプチドの血清半減期をアッセイすることができる。国際公開第２０００／４２０７２号（Ｐｒｅｓｔａ）には、ＦｃＲｓへの結合が増大又は低減した抗体変異体が記載されている。例えば、Shields et al. J. Biol. Chem. 9(2):6591-6604 (2001)も参照されたい。
「ヒトエフェクター細胞」とは、一又は複数のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を実行する白血球である。好ましくはその細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を実行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例は、末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞障害性Ｔ細胞及び好中球を含むが、ＰＢＭＣとＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、天然の供給源、例えば血液から単離することができる。
「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、補体の存在下での標的細胞の溶解を指す。標準的補体経路の活性化は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の、それらの同種抗原に結合した（適切なサブクラスの）抗体への結合により開始される。補体活性化を評価するため、例えばGazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)に記載のようにＣＤＣアッセイを実行することができる。改変されたＦｃ領域アミノ酸配列及び増大又は低減されたＣ１ｑ結合能を有するポリペプチド変異体（変異Ｆｃ領域を有するポリペプチド）は、例えば、米国特許第６１９４５５１Ｂ１及び国際公開第１９９９／５１６４２号に記載されている。例えば、Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)も参照されたい。
用語「Ｆｃ領域保持抗体」は、Ｆｃ領域を含む抗体を指す。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の精製の間に、又は抗体をコードする核酸のエンジニアリングによって、除去することができる。したがって、本発明によるＦｃ領域を有する抗体を含む組成物は、Ｋ４４７を含む抗体、すべてのＫ４４７が除去された抗体、又はＫ４４７残基を有する抗体と有さない抗体との混合物を含むことができる。
ＣＤ７９ｂポリペプチド「細胞外ドメイン」又は「ＥＣＤ」は、本質的に膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを含まないＣＤ７９ｂポリペプチドの一形態を指す。通常、ＣＤ７９ｂポリペプチドＥＣＤは、このような膜貫通ドメイン及び／又は細胞質ドメインを１％未満で有し、好ましくは、このようなドメインを０．５％未満で有する。本発明のＣＤ７９ｂポリペプチドについて同定された膜貫通ドメインはいずれも、この種の疎水性ドメインを同定するために当技術分野で常套的に用いられる基準に従って同定されると理解されたい。膜貫通ドメインの正確な境界は変動しうるが、多くの場合、その変動幅はここで最初に同定されたドメインのいずれの末端においても約５アミノ酸以下である。したがって、任意選択的に、ＣＤ７９ｂポリペプチドの細胞外ドメインは、約５以下のアミノ酸を、実施例又は明細書において同定されるように膜貫通ドメイン／細胞外ドメイン境界のいずれかの側に含むことができ、シグナルペプチドを伴う又は伴わないこのようなポリペプチド、及びそれをコードする核酸は、本発明によって考慮される。
本明細書に開示されるＣＤ７９ｂポリペプチドの「シグナルペプチド」の凡その位置が、本明細書に示される。しかしながら、シグナルペプチドのＣ末端境界は変動しうるが、多くの場合その変動幅は、ここで最初に同定されるシグナルペプチドＣ末端境界のいずれの側でも約５アミノ酸以下であり、シグナルペプチドのＣ末端境界は、この種のアミノ酸配列要素を同定するために当技術分野で常套的に用いられる基準に従って同定されることに注意されたい（例えば、Nielsen et al., Prot. Eng. 10:1-6 (1997) and von Heinje et al., Nucl. Acids. Res. 14:4683-4690 (1986)）。更に、場合によっては、分泌されたポリペプチド由来のシグナル配列の切断は全体にわたって均一ではなく、複数の分泌種が生じることも認識されたい。ここで同定されるシグナルペプチドのＣ末端境界のいずれかの側で約５アミノ酸以下の範囲内でシグナルペプチドが切断される、これら成熟ポリペプチド、及びそれをコードするポリヌクレオチドは、本発明により考慮される。
略称
リンカー成分：
ＭＣ＝６−マレイミドカプロイル
Ｖａｌ−Ｃｉｔ又は「ｖｃ」＝バリン−シトルリン（プロテアーゼ切断可能リンカー内の例示的ジペプチド）
シトルリン＝２−アミノ−５−ウレイド ペンタン酸
ＰＡＢ＝ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「自壊的（ｓｅｌｆ ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」リンカー成分の一例）
Ｍｅ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ＝Ｎ−メチル−バリン−シトルリン（リンカーペプチド結合が、カテプシンＢによるその切断を防止するように修飾されている）
ＭＣ（ＰＥＧ）６−ＯＨ＝マレイミドカプロイル− ポリエチレングリコール（抗体システインに結合できる）
細胞傷害性薬：
ＭＭＡＥ＝モノ−メチル アウリスタチンＥ（ＭＷ ７１８）
ＭＭＡＦ＝薬物のＣ末端にフェニルアラニン（ＭＷ ７３１．５）を有するアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）の変異体
ＭＭＡＦ−ＤＭＡＥＡ＝Ｃ末端フェニルアラニン（ＭＷ ８０１．５）へのアミド結合にＤＭＡＥＡ（ジメチルアミノエチルアミン）を有するＭＭＡＦ
ＭＭＡＦ−ＴＥＧ＝フェニルアラニンにエステル化されたテトラエチレングリコールを有するＭＭＡＦ
ＭＭＡＦ−ＮｔＢｕ＝ＭＭＡＦのＣ末端にアミドとして結合したＮ−ｔ−ブチル
ＤＭ１＝Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ（２’）−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン
ＤＭ３＝Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン
ＤＭ４＝Ｎ（２’）−デアセチル−Ｎ２−（４−メルカプト−４−メチル−１−オキソペンチル）−メイタンシン
更なる略称は以下の通りである：ＡＥはアウリスタチンＥであり、ＢｏｃはＮ（ｔ−ブトキシカルボニル）であり、ｃｉｔはシトルリンであり、ｄａｐはドラプロインであり、ＤＣＣは１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＤＣＭはジクロロメタンであり、ＤＥＡはジエチルアミンであり、ＤＥＡＤはアゾジカルボン酸ジエチルであり、ＤＥＰＣはジエチルホスホリルシアニデート（ｄｉｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｙａｎｉｄａｔｅ）であり、ＤＩＡＤはジイソプロピルアゾジカルボン酸（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｌａｚｏｄｉｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ）であり、ＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり、ｄｉｌはドライソロイシン（ｄｏｌａｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ）であり、ＤＭＡはジメチルアセトアミドであり、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンであり、ＤＭＥはエチレングリコールジメチルエーテル（若しくは１，２−ジメトキシエタン）であり、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドであり、ｄｏｅは、ドラフェニン（ｄｏｌａｐｈｅｎｉｎｅ）であり、ｄｏｖはＮ，Ｎ−ジメチルバリンであり、ＤＴＮＢは５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）であり、ＤＴＰＡはジエチレントリアミン五酢酸であり、ＤＴＴはジチオスレイトールであり、ＥＤＣＩは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリドであり、ＥＥＤＱは２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンであり、ＥＳ−ＭＳはエレクトロスプレー質量分析法であり、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルであり、ＦｍｏｃはＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であり、ｇｌｙはグリシンであり、ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、ＨＰＬＣは高速液体クロマトグラフィーであり、ｉｌｅはイソロイシンであり、ｌｙｓはリジンであり、ＭｅＣＮ（ＣＨ３ＣＮ）はアセトニトリルであり、ＭｅＯＨはメタノールであり、Ｍｔｒは、４−アニシルジフェニルメチル（若しくは４−メトキシトリチル）であり、ｎｏｒは（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリンであり、ＰＢＳはリン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールであり、Ｐｈはフェニルであり、Ｐｎｐはｐ−ニトロフェニルであり、ＭＣは６−マレイミドカプロリルであり、ｐｈｅはＬ−フェニルアラニンであり、ＰｙＢｒｏｐはブロモトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＳＥＣはサイズ除外クロマトグラフィーであり、Ｓｕはスクシンイミドであり、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸であり、ＴＬＣは薄層クロマトグラフィーであり、ＵＶは紫外線であり、ｖａｌはバリンである。
一態様では、本発明は、一又は複数の遊離システインアミノ酸を含む、本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中の、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体を含み、この場合、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体はＣＤ７９ｂポリペプチドに結合し、親抗ＣＤ７９ｂ抗体の一又は複数のアミノ酸残基をシステインにより置換することを含む方法により調製され、この親抗体は、以下から選択される少なくとも一つのＨＶＲ配列を含む：
（ａ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）又はＫＡＳＱＳＶＤＹＥＧＤＳＦＬＮ（配列番号３７）であるＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２；
（ｃ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３；
（ｄ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１；
（ｅ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｆ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）又はＴＲＲＶＰＩＲＬＤＹ（配列番号３８）である、ＨＶＲ−Ｈ３。
特定の一態様では、本発明は、本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中の、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体に関し、この抗体は、本明細書に開示される完全長アミノ酸配列を有するシステイン操作抗体、又は本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くシステイン操作抗体のアミノ酸配列と、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性、代替的に少なくとも約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
更に別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中の、単離されたシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせに関し、この単離されたシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、（ａ）本明細書に開示される完全長アミノ酸配列を有するシステイン操作抗体、（ｂ）本明細書に開示されるシグナルペプチドを欠くシステイン操作抗体アミノ酸配列、（ｃ）シグナルペプチドを含む又は含まない、本明細書に開示される膜貫通システイン操作抗体タンパク質の細胞外ドメイン、（ｄ）本明細書に開示される核酸配列のいずれかによりコードされるアミノ酸配列又は（ｅ）本明細書に開示される完全長システイン操作抗体アミノ酸配列の、他のいずれかの特に定義される断片をコードするＤＮＡ分子の補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を含む。
特定の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、Ｎ末端シグナル配列を含まない及び／又は開始メチオニンを含まない本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中のシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、記載されるそのようなアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列によりコードされる。同組み合わせを製造する方法も本明細書において開示され、このような方法は、適切なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を、システイン操作抗体の発現に適した条件下で培養すること、及び細胞培養物からシステイン操作抗体を回収することを含む。
本発明の別の態様は、本明細書に開示される抗ＣＤ２０抗体と、本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中の、単離されたシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この単離されたシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は膜貫通ドメインが削除されているか、又は膜貫通ドメインが不活性化されている。同組み合わせを製造する方法も本明細書において記載され、このような方法は、適切なコード化核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を、システイン操作抗体の発現に適した条件下で培養すること、及び細胞培養物からシステイン操作抗体を回収することを含む。
他の態様では、本発明は、本明細書に開示される抗ＣＤ２０抗体と、本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中の、単離された抗ＣＤ７９ｂキメラシステイン操作抗体との組み合わせを提供し、この単離された抗ＣＤ７９ｂキメラシステイン操作抗体は、異種（非ＣＤ７９ｂ）ポリペプチドに融合した、本明細書に記載のシステイン操作抗体のいずれかを含む。このようなキメラ分子の例には、例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域又はエピトープタグ配列といった異種ポリペプチドに融合した本明細書に記載のシステイン操作抗体のいずれかが含まれる。
本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中のシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、モノクローナル抗体、抗体断片、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体又は抗ＣＤ７９ｂポリペプチド抗体のそれに対応する抗原エピトープへの結合を競合的に阻害する抗体でよい。本発明の抗体は、任意選択的に、増殖阻害剤又は毒素のような細胞傷害性薬剤にコンジュゲートすることができ、これには例えば、アウリスタチン、メイタンシノイド、ドロスタチン（ｄｏｌｏｓｔａｔｉｎ）誘導体又はカリケアマイシン、抗生物質、放射性同位体、核酸分解酵素などが含まれる。本発明の抗体は、任意選択的に、ＣＨＯ細胞又は細菌細胞中において生成され、好ましくは、それが結合する細胞の成長若しくは増殖を阻害するか、又はそのような細胞の死を誘導する。診断的目的のために、本発明の抗体は、検出可能に標識する、固体支持体に結合させるなどすることができる。
本発明の他の態様では、本発明は、本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中の、本明細書に記載の抗ＣＤ７９ｂ抗体及び抗ＣＤ７９ｂシステイン操作抗体のいずれかをコードするＤＮＡを含むベクターを提供する。このようなベクターのいずれかを含む宿主細胞も提供される。例として、宿主細胞は、ＣＨＯ細胞、大腸菌細胞、又は酵母細胞である。本明細書に記載のポリペプチドのいずれかを生成するための方法が更に提供され、この方法は、宿主細胞を、所望のポリペプチドの発現に適した条件下で培養すること、及び所望のポリペプチドを細胞培養物から回収することを含む。
本組み合わせ発明の、本発明による前記抗体−薬物コンジュゲート中のシステイン操作抗体は、がんの治療において有用でありえ、細胞表面及び膜貫通型受容体に特異的な抗体、及び腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含む。このような抗体は、ネイキッド抗体（薬物又は標識部位にコンジュゲートしない）として又は抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）として使用することができる。本発明のシステイン操作抗体は、部位特異性であり、チオール反応性試薬に効果的に結合することができる。チオール反応性試薬は、多機能リンカー試薬、キャプチャー標識試薬、蛍光体試薬、又は薬物−リンカー中間体でよい。システイン操作抗体は、検出可能な標識で標識される、固体相の支持体に固定化される、及び／又は薬物部分にコンジュゲートする。チオール反応性は、反応性のシステインアミノ酸によるアミノ酸の置換が、アミノ酸範囲：Ｌ１０〜Ｌ２０、Ｌ１０５〜Ｌ１１５、Ｌ１０９〜Ｌ１１９、Ｌ１１６〜Ｌ１２６、Ｌ１２２〜Ｌ１３２、Ｌ１６３〜Ｌ１７３、Ｌ２００〜Ｌ２１０から選択される軽鎖内の範囲内；並びにアミノ酸範囲：Ｈ１〜Ｈ１０、Ｈ１８〜Ｈ２８、Ｈ７９〜Ｈ８９、Ｈ１０７〜Ｈ１１７、Ｈ１０９〜Ｈ１１９、Ｈ１１１〜Ｈ１２１から選択される重鎖内の範囲内、並びに、Ｈ２７０〜Ｈ２８０、Ｈ３６６〜Ｈ３７６、Ｈ３９１〜４０１から選択される範囲内のＦｃ領域内で行われる、任意の抗体に一般化される。この場合のアミノ酸位置の番号付けは、Ｋａｂａｔ番号付けシステムの位置１において開始され（Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD）、その後は国際公開第２００６０３４４８８号；米国特許出願公開第２００７／００９２９４０号に記載のように順番に連続する。チオール反応性はまた、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３といった抗体の特定のドメインに一般化される。チオール反応性の値が０．６以上となるシステイン置換は、ＩｇＧサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２を含む、インタクトな抗体：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ，及びＩｇＭそれぞれの、重鎖定常ドメインα、δ、ε、γ、及びμで行われる。このような抗体及びその使用は、国際公開第２００６／０３４４８８号；米国特許出願公開２００７／００９２９４０号に開示されている。
本組み合わせ発明のシステイン操作抗体は、好ましくは、それらの野生型、親抗体のカウンターパートの抗原結合能を保持している。したがって、システイン操作抗体は、好ましくは特異的に、抗原に結合することができる。このような抗原には、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、細胞表面受容体タンパク質及び他の細胞表面分子、膜貫通タンパク質タンパク質、シグナル伝達タンパク質、細胞生存調節因子、細胞増殖調節因子、組織の発達又は分化に関連付けられる（例えば、機能的に寄与することが既知の又は寄与すると思われる）分子、リンホカイン、サイトカイン、細胞周期制御に関与する分子、脈管形成に関与する分子及び血管新生に関連する（例えば、機能的に寄与することが既知の又は寄与すると思われる）分子が含まれる。腫瘍関連抗原は、クラスター分化因子（即ち、限定されないがＣＤ７９ｂを含むＣＤタンパク質）でありうる。本発明のシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、その親抗ＣＤ７９ｂ抗体カウンターパートの抗原結合能を保持している。したがって、本発明のシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ヒト抗ＣＤ７９ｂアイソフォームβ及び／又はαを含むＣＤ７９ｂ抗原に、このような抗原が、限定しないがＢ細胞を含む細胞の表面に発現されるときを含め、好ましくは特異的に、結合することができる。
一態様では、本組み合わせ発明の抗体は、反応性部分、活性化部分、又は反応性システインチオール基を介して抗体に共有結合することができる任意の標識部位にコンジュゲートしうる（Singh et al (2002) Anal. Biochem. 304:147-15; Harlow E. and Lane, D. (1999) Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Lundblad R.L. (1991) Chemical Reagents for Protein Modification, 2nd ed. CRC Press, Boca Raton, FL）。結合した標識は：（ｉ）検出可能なシグナルを提供する；（ｉｉ）第２の標識と相互作用して、第１又は第２の標識により提供される検出可能なシグナルを修飾し、例えばＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）を生じさせる；（ｉｉｉ）抗原又はリガンドとの結合の親和性を上昇させる又は相互作用を安定化する；（ｉｖ）電荷、疎水性、形状、又は他の物理的パラメーターにより、移動度、例えば電気泳動移動度又は細胞透過性に影響を与える、又は（ｖ）捕獲部分を提供し、リガンド親和性、抗体／抗原結合、又はイオン錯体生成を調節するように機能することができる。
特定の実施態様では、上記抗体のいずれかをコードするポリヌクレオチドが提供される。一実施態様では、ポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。一実施態様において、ベクターを含む宿主細胞が提供される。一実施態様において、宿主細胞は、真核生物である。一実施態様では、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。一実施態様では、抗ＣＤ７９ｂ抗体の作製方法が提供され、この方法は、抗体をコードするポリヌクレオチドの発現に適した条件下において宿主細胞を培養すること、及び抗体を単離することを含む。
抗体−薬物コンジュゲート
別の態様では、本発明は、本明細書において定義される抗ＣＤ２０抗体とイムノコンジュゲートとの組み合わせ、即ち抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供し、これは、細胞傷害性剤、例えば化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位元素（即ち、ラジオコンジュゲート）にコンジュゲートした抗体を含む。別の態様では、本発明は更に、イムノコンジュゲートを使用する方法を提供する。一態様では、イムノコンジュゲートは、細胞傷害性薬剤又は検出可能な薬剤に共有結合した上記抗ＣＤ７９ｂ抗体のいずれかを含む。
一態様では、本組み合わせ発明のＣＤ７９ｂ抗体は、別のＣＤ７９ｂ抗体に結合したＣＤ７９ｂ上の同じエピトープに結合する。別の実施態様では、本発明のＣＤ７９ｂ抗体は、１９９３年７月２０日にＨＢ１１４１３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから生成されたモノクローナル抗体、配列番号２６（図７）及び配列番号２９（図８）の可変ドメインを含むモノクローナル抗体、又は１９９３年７月２０日にＡＴＣＣに寄託されたＨＢ１１４１３ハイブリドーマから生成されたいずれかの抗体の可変ドメインとＩｇＧ１由来の定常ドメインとを含むか、又は配列番号２６（図７）及び配列番号２９（図８）の配列を含むモノクローナル抗体の可変ドメインを含むキメラ抗体の、Ｆａｂ断片により結合されたＣＤ７９Ｂ上の同じエピトープに結合する。別の実施態様では、本発明のＣＤ７９ｂ抗体は、別のＣＤ７９ｂ抗体（即ち、ＣＢ３．１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／カタログ＃５５５６７８／カリフォルニア州サンノゼ）、ＡＴ１０５−１（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ／カタログ＃ＭＣＡ２２０８；ノースカロライナ州ローリー）、ＡＴ１０７−２（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ／カタログ＃ＭＣＡ２２０９）、抗ヒトＣＤ７９ｂ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／カタログ＃５５７５９２／カリフォルニア州サンノゼ）により結合されたＣＤ７９Ｂ上の同じエピトープに結合する。
別の態様では、本組み合わせ発明のＣＤ７９ｂ抗体は、別のＣＤ７９ｂ抗体により結合されたエピトープとは異なるＣＤ７９Ｂ上のエピトープに結合する。別の実施態様では、本発明のＣＤ７９ｂ抗体は、１９９３年７月２０日にＡＴＣＣに寄託されたＨＢ１１４１３ハイブリドーマから生成されたモノクローナル抗体、配列番号２６（図７）及び配列番号２９（図８）の可変ドメインを含むモノクローナル抗体、又は１９９３年７月２０日にＡＴＣＣに寄託されたＨＢ１１４１３ハイブリドーマから生成されたいずれかの抗体の可変ドメインとＩｇＧ１由来の定常ドメインとを含むか、又は配列番号２６（図７）及び配列番号２９（図８）の配列を含むモノクローナル抗体の可変ドメインを含むキメラ抗体の、Ｆａｂ断片により結合されたエピトープとは異なるＣＤ７９Ｂ上のエピトープに結合する。別の実施態様では、本発明のＣＤ７９ｂ抗体は、別のＣＤ７９ｂ抗体（即ち、ＣＢ３．１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／カタログ＃５５５６７８；カリフォルニア州サンノゼ）、ＡＴ１０５−１（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ／カタログ＃ＭＣＡ２２０８／ノースカロライナ州ローリー）、ＡＴ１０７−２（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ／カタログ＃ＭＣＡ２２０９）、抗ヒトＣＤ７９ｂ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／カタログ＃５５７５９２／カリフォルニア州サンノゼ））により結合されたＣＤ７９Ｂ上のエピトープとは異なるＣＤ７９ｂ上のエピトープに結合する。
別の態様では、本組み合わせ発明のＣＤ７９ｂ抗体は、１９９３年７月２０日にＨＢ１１４１３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから生成されたモノクローナル抗体、配列番号２６（図７）及び配列番号２９（図８）の可変ドメインを含むモノクローナル抗体、又は１９９３年７月２０日にＨＢ１１４１３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから生成された抗体の可変ドメインとＩｇＧ１由来の定常ドメインとを含むか、又は配列番号２６（図７）及び配列番号２９（図８）の配列を含むモノクローナル抗体の可変ドメインを含むキメラ抗体の、Ｆａｂ断片とは異なる（即ち、そのようなＦａｂ断片ではない）。別の実施態様では、本発明のＣＤ７９ｂ抗体は、別のＣＤ７９ｂ抗体（即ち、ＣＢ３．１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／カタログ＃５５５６７８／カリフォルニア州サンノゼ）、ＡＴ１０５−１（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ／カタログ＃ＭＣＡ２２０８／ノースカロライナ州ローリー）、ＡＴ１０７−２（ＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ／カタログ＃ＭＣＡ２２０９）、抗ヒトＣＤ７９ｂ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ／カタログ＃５５７５９２／カリフォルニア州サンノゼ））のＦａｂ断片とは異なる（即ち、そのようなＦａｂ断片ではない）。
一態様では、本発明の抗体は、第１の動物種のＣＤ７９ｂに特異的に結合し、第２の動物種のＣＤ７９ｂに特異的に結合しない。一実施態様では、第１の動物種はヒト及び／又は霊長類（例えば、カニクイザル）であり、第２の動物種はマウス（ｍｕｒｉｎｅ）（例えば、マウス（ｍｏｕｓｅ））及び／又はイヌである。一実施態様では、第１の動物種はヒトである。一実施態様では、第１の動物種は霊長類、例えばカニクイザルである。一実施態様では、第２の動物種はマウス（ｍｕｒｉｎｅ）、（例えば、マウス（ｍｏｕｓｅ）である。一実施態様では、第２の動物種はイヌである。
一態様では、細胞の表面上に発現されるＣＤ７９ｂに結合する抗体が提供される。一実施態様では、抗体は、ドメイン１若しくはドメイン２、又はドメイン１及び２を含むヒト又はマウスＣＤ７９ｂの一領域内のエピトープに結合する。一実施態様では、細胞は哺乳動物細胞である。一実施態様では、細胞はヒト細胞である。一実施態様では、細胞はがん細胞である。一実施態様では、細胞はＢ細胞である。一実施態様では、がん細胞はＢ細胞である。
特定の実施態様では、上記抗体はいずれもモノクローナル抗体である。一実施態様において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、又はＦ（ａｂ’）２断片から選択される抗体断片である。一実施態様では、抗体はヒト化されている。一実施態様では、抗体はヒト抗体である。
本発明の抗ＣＤ２０抗体との組み合わせにおける抗体−薬物コンジュゲートの一部としての例示的抗ＣＤ７９ｂ抗体の詳細な説明は以下の通りである。
抗ＣＤ７９ｂ抗体の具体的実施態様
一態様では、本発明は、上記又は後述のポリペプチドに対し、好ましくは特異的に結合する抗体を提供する。任意選択的に、抗体は、モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片を含む抗体断片、ダイアボディ、シングルドメイン抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体、又は抗ＣＤ７９ｂポリペプチド抗体の対応する抗原エピトープへの結合を競合的に阻害する抗体である。本発明の抗体は、任意選択的に、増殖阻害剤又は毒素のような細胞傷害性薬剤とすることができ、これには例えば、アウリスタチン、メイタンシノイド、ドロスタチン（ｄｏｌｏｓｔａｔｉｎ）誘導体又はカリケアマイシン、抗生物質、放射性同位体、核酸分解酵素などが含まれる。本発明の抗体は、任意選択的に、ＣＨＯ細胞又は細菌細胞中において生成され、好ましくは、それが結合する細胞の死を誘導する。検出目的のために、本発明の抗体は、検出可能に標識する、固体支持体に結合させるなどすることができる。
一態様において、本発明は、本明細書において定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する抗体の一価の親和性（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての抗体）又はその二価形態における親和性（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧ断片としての抗体）はそれぞれ、図７（配列番号２６）及び図８（配列番号２９）に示される軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列を含むか、それら配列からなるか、又は本質的にそれら配列からなる、マウス抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての又はＩｇＧ断片としてのマウス抗体）又はキメラ抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての又はＩｇＧ断片としてのキメラ抗体）の、一価の親和性又はその二価形態における親和性と、実質的に同じであるか、又はそれより小さいか、又はそれより大きい。
別の態様では、本発明は、本明細書において定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する抗体の一価の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての抗体の親和性）は、図７（配列番号２６）及び図８（配列番号２９）に示される軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列を含むか、それら配列からなるか、又は本質的にそれら配列からなる、マウス抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としてのマウス抗体の親和性）又はキメラ抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としてのキメラ抗体の親和性）の一価の親和性より、例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０倍低い。
別の態様では、本発明は、本明細書において定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する抗体の一価の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としての抗体の親和性）は、図７（配列番号２６）及び図８（配列番号２９）に示される軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列を含むか、それら配列からなるか、又は本質的にそれら配列からなる、マウス抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としてのマウス抗体）又はキメラ抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としてのキメラ抗体）の二価の親和性より、例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０倍高い。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は、図７（配列番号２６）及び図８（配列番号２９）に示される軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列を含むか、それら配列からなるか、又は本質的にそれら配列からなる、その二価形態におけるマウス抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体又はキメラ抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＦａｂ断片としてのキメラ抗体）の親和性と実質的に同じである。
別の態様では、本発明は、本明細書において定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は、図７（配列番号２６）及び図８（配列番号２９）に示される軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列を含むか、それら配列からなるか、又は本質的にそれら配列からなる、二価の形態におけるマウス抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体）又はキメラ抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧ断片としてのキメラ抗体）の親和性より低く、例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５又は６０倍低い。
別の態様では、本発明は、本明細書において定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は、図７（配列番号２６）及び図８（配列番号２９）に示される軽鎖及び重鎖可変ドメイン配列を含むか、それら配列からなるか、又は本質的にそれら配列からなる、二価の形態におけるマウス抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体）又はキメラ抗体（例えばＣＤ７９ｂに対するＩｇＧ断片としてのキメラ抗体）の親和性より、例えば少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０倍高い。
別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４ｎＭである。更なる態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４ｎＭ＋／−０．０４である。
別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３２ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３６ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４４ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４８ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．５ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３ｎＭ〜０．５ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３２ｎＭ〜０．４８ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３６ｎＭ〜０．４４ｎＭである。
別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．２ｎＭである。更なる態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．２ｎＭ＋／−０．０２である。
別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１２ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１４ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１６ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１８ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．２ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．２２ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．２４ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．２６ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．２８ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３０ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１ｎＭ〜０．３ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１２ｎＭ〜０．２８ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１４ｎＭ〜０．２６ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１６ｎＭ〜０．２４ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．１８ｎＭ〜０．２２ｎＭである。
別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．５ｎＭである。更なる態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．５ｎＭ＋／−０．１である。
別の態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．５ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．６ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．７ｎＭ又はそれより良好である。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．３ｎＭ〜０．７ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４ｎＭ〜０．６ｎＭである。別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．５ｎＭ〜０．５５ｎＭである。
一態様では、ＣＤ７９ｂに対するマウス抗体の一価の親和性は、配列番号２６（図７）及び配列番号２９（図８）の可変ドメイン配列を含むＦａｂ断片の結合親和性と実質的に同じである。別の態様では、ＣＤ７９ｂに対するマウス抗体の一価の親和性は、１９９３年７月２０日にＨＢ１１４１３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから生成される抗体の可変ドメイン配列を含むＦａｂ断片又は１９９３年７月２０日にＨＢ１１４１３としてＡＴＣＣに寄託されたハイブリドーマから生成される抗体の可変ドメインを含むキメラ抗体由来の結合親和性と実質的に同じである。
当技術分野で十分に確立されているように、リガンドのその受容体に対する結合親和性は、様々なアッセイのいずれかを用いて決定し、様々な定量的値の観点から表現することができる。したがって、一実施態様では、結合親和性はＫｄ値として表現され、固有の結合親和性を反映する（例えば、最小化されたアビディティ効果）。一般的に及び好ましくは、結合親和性は、細胞の無い設定で又は細胞に関連付けられた設定で、インビトロで測定される。本明細書において詳述されるように、結合親和性の倍数の差異は、ヒト化抗体（例えば、Ｆａｂ形態の）の一価の結合親和性の値と、参照／比較用抗体（例えば、Ｆａｂ形態の）（例えば、ドナー超可変領域の配列を有するマウス抗体）の一価の結合親和性の値との比の観点から定量化することができ、この場合、結合親和性の値は、同様のアッセイ条件下において決定される。したがって、一実施態様では、結合親和性の倍数の差異は、Ｆａｂ形態のヒト化抗体のＫｄ値と前記参照／比較用Ｆａｂ抗体との比として決定される。例えば、一実施態様では、本発明の抗体（Ａ）が参照抗体（Ｍ）の親和性の「３分の１」である場合、ＡのＫｄ値が３ｘであれば、ＭのＫｄ値は１ｘであり、ＡのＫｄ対ＭのＫｄの比は３：１である。逆に、一実施態様では、本発明の抗体（Ｃ）が参照抗体（Ｒ）の親和性の「３倍」である場合、ＣのＫｄ値が１ｘであれば、ＲのＫｄ値は３ｘであり、ＣのＫｄ値対ＲのＫｄ値は１：３である。本明細書に記載のものを含め、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）及びＥＬＩＳＡを含む、当技術分野で既知の任意の数のアッセイを、結合親和性測定値の取得に使用することができる。
別の態様では、本発明はヒト化抗ＣＤ７９ｂ抗体を提供し、この場合、ＣＤ７９ｂに対する二価の形態における抗体の親和性（例えば、ＣＤ７９ｂに対するＩｇＧとしての抗体の親和性）は０．４ｎＭ、０．２ｎＭ又は０．５ｎＭである。
一態様では、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体との組み合わせのための、ＣＤ７９ｂに結合する抗体が提供され、この抗体は：
（ｉ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）であるＨＶＲ−Ｌ１
（ｉｉ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２
（ｉｉｉ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３
（ｉｖ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１
（ｖ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｖｉ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）であるＨＶＲ−Ｈ３
からなる群より選択される少なくとも一つ、二つ、三つ、四つ、五つ、又は六つのＨＶＲを含む。
一態様では、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、ＣＤ７９ｂに結合する抗体との組み合わせが提供され、この抗体は、変異ＨＶＲ配列が、配列番号３１、３２、３３、３４、３５又は３６の配列の少なくとも一つの残基の修飾を含む、少なくとも一つの変異ＨＶＲを含む。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図３Ｂ（配列番号５０〜５２）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図３Ａ（配列番号４７〜４９）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図４Ｂ（配列番号５８〜６０）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図４Ａ（配列番号５５〜５７）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図５Ｂ（配列番号６６〜６８）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図５Ａ（配列番号６３〜６５）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図６Ｂ（配列番号７４〜７６）に示されるＨＶＲ１−ＨＣ、ＨＶＲ２−ＨＣ及び／又はＨＶＲ３−ＨＣ配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、図６Ａ（配列番号７１〜７３）に示されるＨＶＲ１−ＬＣ、ＨＶＲ２−ＬＣ及び／又はＨＶＲ３−ＬＣ配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗体との組み合わせを提供する。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、配列番号５４、６２、７０又は７８から選択される重鎖可変ドメインを含む抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを含む。別の態様では、本発明は、配列番号５３、６１、６９又は７７から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、一又は複数の遊離システインアミノ酸及び配列番号８３〜１３０から選択される配列を含む、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを含む。システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂポリペプチドに結合することができる。システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、親抗ＣＤ７９ｂ抗体の一又は複数のアミノ酸残基をシステインにより置換することを含む方法によって調製することができる。
一態様では、本発明は、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体と、一又は複数の遊離システインアミノ酸を含むシステイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体との組み合わせを含み、この場合、システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、ＣＤ７９ｂポリペプチドに結合し、親抗ＣＤ７９ｂ抗体の一又は複数のアミノ酸残基をシステインにより置換することを含む方法により調製され、この親抗体は、以下から選択される少なくとも一つのＨＶＲ配列を含む：
（ａ）配列Ａ１〜Ａ１５を含み、Ａ１〜Ａ１５がＫＡＳＱＳＶＤＹＤＧＤＳＦＬＮ（配列番号３１）又はＫＡＳＱＳＶＤＹＥＧＤＳＦＬＮ（配列番号３７）であるＨＶＲ−Ｌ１；
（ｂ）配列Ｂ１〜Ｂ７を含み、Ｂ１〜Ｂ７がＡＡＳＮＬＥＳ（配列番号３２）であるＨＶＲ−Ｌ２；
（ｃ）配列Ｃ１〜Ｃ９を含み、Ｃ１〜Ｃ９がＱＱＳＮＥＤＰＬＴ（配列番号３３）であるＨＶＲ−Ｌ３；
（ｄ）配列Ｄ１〜Ｄ１０を含み、Ｄ１〜Ｄ１０がＧＹＴＦＳＳＹＷＩＥ（配列番号３４）であるＨＶＲ−Ｈ１；
（ｅ）配列Ｅ１〜Ｅ１８を含み、Ｅ１〜Ｅ１８がＧＥＩＬＰＧＧＧＤＴＮＹＮＥＩＦＫＧ（配列番号３５）であるＨＶＲ−Ｈ２、及び
（ｆ）配列Ｆ１〜Ｆ１０を含み、Ｆ１〜Ｆ１０がＴＲＲＶＰＶＹＦＤＹ（配列番号３６）又はＴＲＲＶＰＩＲＬＤＹ（配列番号３８）であるＨＶＲ−Ｈ３。
システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体は、モノクローナル抗体、抗体断片、キメラ抗体、ヒト化抗体、一本鎖抗体又は抗ＣＤ７９ｂポリペプチド抗体のそれに対応する抗原エピトープへの結合を競合的に阻害する抗体でよい。本発明の抗体は、任意選択的に、増殖阻害剤又は毒素のような細胞傷害性薬剤にコンジュゲートすることができ、これには例えば、アウリスタチン、又はメイタンシノイドが含まれる。本発明の抗体は、任意選択的に、ＣＨＯ細胞又は細菌細胞中において生成され、好ましくは、それが結合する細胞の成長若しくは増殖を阻害するか、又はそのような細胞の死を誘導する。診断的目的のために、本発明の抗体は、検出可能に標識する、固体支持体に結合させるなどすることができる。
本組み合わせの発明による用語「ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート（「ＡＤＣ」）は、以下の式Ｉのものであり、この場合、抗体は任意選択的なリンカー（Ｌ）を介して一又は複数の薬物部分（Ｄ）にコンジュゲートする（即ち、共有結合する）。ＡＤＣはチオＭＡｂ薬物コンジュゲート（「ＴＤＣ」）を含みうる。
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ Ｉ
したがって、抗体は、直接的に又はリンカーを介して薬物にコンジュゲートできる。式Ｉにおいて、ｐは抗体一つ当たりの薬物部分の平均数であり、例えば抗体一つ当たりの薬物部分は約１〜約２０であり、特定の実施態様では、抗体一つ当たりの薬物部分は１〜８である。本発明は、式Ｉの抗体−薬物化合物の混合物を含む組成物を含み、ここで抗体一つ当たりの平均薬物充填数は約２〜５、又は約３〜約４である。
本発明による組み合わせの一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。
ａ．例示的リンカー
リンカーは、一又は複数のリンカー成分を含むことができる。例示的リンカー成分には、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」又は「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、及びリンカー試薬とのコンジュゲーションにより生じるもの、即ち：Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（本明細書で「ＭＣＣ」とも呼ばれる「ＳＭＣＣ」）、及びＮ−スクシンイミジル（４−ヨード−アセチル）アミノベンゾエート（「ＳＩＡＢ」）が含まれる。様々なリンカー成分が当技術分野で既知であり、そのうちのいくつかについて後述する。
リンカーは、細胞中での薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」でありうる。例えば、酸に不安定なリンカー（例えば、ヒドラゾン）、プロテアーゼ過敏性（例えば、ペプチダーゼ過敏性）リンカー、光解離性リンカー、ジメチルリンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Research 52:127-131 (1992)；米国特許第５２０８０２０号）が使用される。
特定の実施態様では、リンカーは、以下の式ＩＩで示される：

式中、Ａはストレッチャー単位であり、ａは０〜１の整数であり；Ｗはアミノ酸単位であり、ｗは０〜１２の整数であり；Ｙはスペーサー単位であり、ｙは０、１、又は２であり；Ａｂ、Ｄ、及びｐは式Ｉについて上述したように定義される。このようなリンカーの例示的実施態様は、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号に記載されており、これは参照により本明細書に包含される。
いくつかの実施態様では、リンカー成分は、抗体を、別のリンカー成分又は薬物部分に結合させる「ストレッチャー単位」を含んでもよい。例示的ストレッチャー単位を以下に示す（ここで波線は抗体への共有結合部位を示す）：
いくつかの実施態様では、リンカー成分はアミノ酸単位を含む。このような一実施態様では、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによりリソソーム酵素のような細胞内プロテアーゼへの暴露時にイムノコンジュゲートからの薬物の放出を容易にする。例えば、Doronina et al. (2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784を参照されたい。例示的アミノ酸単位には、限定されないが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドが含まれる。例示的ジペプチドには：バリン−シトルリン（ｖｃ又はｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆ又はａｌａ−ｐｈｅ）；フェニルアラニン−リジン（ｆｋ又はｐｈｅ−ｌｙｓ）；又はＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が含まれる。例示的トリペプチドには、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が含まれる。アミノ酸単位は、天然に存在するアミノ酸残基、並びにシトルリンのような非天然存在アミノ酸アナログ及びマイナーなアミノ酸を含みうる。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ及びＤ、又はプラスミンプロテアーゼによる酵素的切断に対するその感受性の点で設計及び最適化することができる。
いくつかの実施態様では、リンカー成分は、抗体を、直接的に又はストレッチャー単位及び／又はアミノ酸単位を介して薬物部分に結合させる「スペーサー」単位を含むことができる。スぺーサー単位は、「自壊性」でも「非自壊性」でもよい。「非自壊性」のスペーサー単位は、スペーサー単位の一部又は全部が、ＡＤＣの酵素的（例えば、タンパク分解性の）開裂時に薬物部分に結合したままであるスペーサー単位である。非自壊性スペーサーの例には、限定されないが、グリシンスペーサー単位及びグリシン−グリシンスペーサー単位が含まれる。配列特異的な酵素的切断の影響を受けやすいペプチドスペーサーの他の組み合わせも考慮される。例えば、腫瘍細胞に結合したプロテアーゼによるグリシン−グリシンスペーサー単位を含むＡＤＣの酵素的切断は、残りのＡＤＣからのグリシン−グリシン−薬物部分の放出を招く。このような実施態様では、次いで腫瘍細胞中においてグリシン−グリシン−薬物部分に別個の加水分解工程を行い、それにより薬物部分からグリシン−グリシンスペーサー単位を切断する。
「自壊性」スペーサー単位は、別個の加水分解工程なしで薬物部分の放出を可能にする。特定の実施態様では、リンカーのスペーサー単位はｐ−アミノベンジル単位を含む。このような一実施態様では、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位に結合し、カルバメート、メチルカルバメート、又は炭酸塩がベンジルアルコールと細胞傷害性薬剤の間に形成される。例えば、Hamann et al. (2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103を参照されたい。一実施態様では、スペーサー単位はｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。特定の実施態様では、ｐ−アミノベンジル単位のフェニレン部分はＱｍで置換され、ここでＱは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン，−ニトロ又は−シアノであり；ｍは０〜４の整数である。自壊性スペーサー単位の例には更に、限定されないが、ｐ−アミノベンジルアルコールと電子的に類似の芳香族化合物（例えば、米国特許出願公開第２００５／０２５６０３０号）、例えば２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（Hay et al. (1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）及びオルト−又はパラ−アミノベンジルアセタールが含まれる。アミド結合の加水分解時に環化する、置換及び非置換の４−アミノ酪酸アミド（Rodrigues et al., Chemistry Biology, 1995, 2, 223）；適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Storm, et al., J. Amer. Chem. Soc., 1972, 94, 5815）；及び２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberry, et al., J. Org. Chem., 1990, 55, 5867）といったスペーサーを使用することができる。グリシンのａ位置で置換されたアミン含有薬の排除（Kingsbury, et al., J. Med. Chem., 1984, 27, 1447）も、ＡＤＣに有用な自壊性スペーサーの例である。
一実施態様では、スペーサー単位は、以下に示す分枝状のビス（ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）単位であり、これを使用して複数の薬物の取り込み及び放出が可能である。

ここで、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ又は−シアノであり；ｍは０〜４の整数であり；ｎは０又は１であり；ｐは１〜約２０の範囲である。
別の実施態様では、リンカーＬは、一を超える薬物部分の、分枝による共有結合のための樹状型リンカー、抗体に対する多機能リンカー部分とすることができる（Sun et al (2002) Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215; Sun et al (2003) Bioorganic and Medicinal Chemistry 11:1761-1768）。樹状リンカーは、ＡＣＤの力価に関連する、抗体に対する薬物のモル比、即ち負荷を上昇させることができる。このように、システイン操作抗体が反応性システインチオール基を一つのみ保持する場合、多数の薬物部分が樹状リンカーを介して結合することができる。
例示的リンカー成分及びその組み合わせを、式ＩＩのＡＤＣの観点から以下に示す：
Ｖａｌ−Ｃｉｔ又はＶＣ

ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ


ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ
ストレッチャー、スペーサー、及びアミノ酸単位を含むリンカー成分は、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号に記載のような当技術分野において既知の方法によって合成することができる。
ｂ．例示的薬物部分
（１）メイタンシン及びメイタンシノイド
いくつかの実施態様では、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とイムノコンジュゲートの組み合わせは、一又は複数のメイタンシノイド分子にコンジュゲートした抗体を含む。メイタンシノイドは、チューブリン重合を阻害することにより作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは、東アフリカの灌木メイテナスセラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。続いて、特定の微生物も、メイタンシノイド、例えばメイタンシノール及びＣ−３メイタンシノールエステル等のマイタンシノイドを生成することが発見された（米国特許第４１５１０４２号）。合成メイタンシノイド及びその誘導体及びアナログは、例えば、米国特許第４１３７２３０号；同第４２４８８７０号；同第４２５６７４６号；同第４２６０６０８号；同第４２６５８１４号；同第４２９４７５７号；同第４３０７０１６号；同第４３０８２６８号；同第４３０８２６９号；同第４３０９４２８号；同第４３１３９４６号；同第４３１５９２９号；同第４３１７８２１号；同第４３２２３４８号；同第４３３１５９８号；同第４３６１６５０号；同第４３６４８６６号；同第４４２４２１９号；同第４４５０２５４号；同第４３６２６６３号；及び同第４３７１５３３号に開示されている。
メイタンシノイドの薬物部分は、以下の理由で抗体−薬物コンジュゲーションの魅力的な薬剤成分である：（ｉ）発酵生成物の発酵又は化学的修飾又は誘導体化により調製するために比較的到達可能であり、（ｉｉ）ジスルフィド及び非ジスルフィドリンカーを介した抗体へのコンジュゲートに適した官能基による誘導化を行い易く、（ｉｉｉ）血漿中において安定であり、且つ（ｉｖ）様々な腫瘍細胞株に対して有効である。
メイタンシノイド薬物部分としての使用に適したメイタンシン化合物は、当技術分野で周知であり、既知の方法に従って自然の供給源から単離することができるか、又は遺伝子工学及び発酵技術を用いて生成することができる（米国特許第６７９０９５２号；同出願公開第２００５／０１７０４７５号；Yu et al (2002) PNAS 99:7968-7973）。メイタンシノール及びメイタンシノールアナログも、既知の方法に従って合成的に調製することができる。
例示的メイタンシノイド薬物部分には、修飾された芳香族環、例えば：Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（アンサマイトシン（ａｎｓａｍｙｔｏｃｉｎ）Ｐ２の水素化アルミニウムリチウム還元により調製）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（又はＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号及び同第４３０７０１６号）（ストレプトマイセス又はアクチノミセスを用いた脱メチル化、又はＬＡＨを用いた脱塩素化により調製）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４２９４７５７号）（塩化アシルを用いたアシル化により調製）、及び他の位置に修飾を有するものが含まれる。
例示的メイタンシノイド薬物部分は、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（メイタンシノールのＨ２Ｓ又はＰ２Ｓ５との反応により調製）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチル又はアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（ノカルジアから調製）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（ストレプトマイセスによるメイタンシノールの変換により調製）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号及び同第４３１５９２９号）（トレウィアヌドロフローラ（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号及び同第４３２２３４８号）（ストレプトマイセスによるメイタンシノールの脱メチル化により調製）；及び、４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元により調製）といった修飾を有するものも含む。
メイタンシン化合物上の多数の位置が、結合の種類に応じて、結合位置として有用であることが既知である。例えば、エステル結合を形成するために、ヒドロキシル基を有するＣ−３位置、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位置、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位置、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位置はすべて適している（米国特許第５２０８０２０号；米国再発行特許第３９１５１号；米国特許第６９１３７４８号；米国特許第７３６８５６５号；米国特許出願公開第２００６／０１６７２４５号；同第２００７／００３７９７２号）。
メイタンシノイド薬物部分は、構造：

を有するものを含み、構造中、波線は、メイタンシノイド薬物部分の硫黄原子の、ＡＤＣのリンカーへの共有結合を示す。Ｒは、独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルでよい。硫黄原子へアミド基を結合するアルキレン鎖は、メタニル、エタニル、又はプロピルでよく、即ちｍは１、２、又は３である（米国特許第６３３４１０号；同第５２０８０２０号；同第７２７６４９７号；Chari et al (1992) Cancer Res. 52:127-131; Liu et al (1996) Proc. Natl. Acad. Sci USA 93:8618-8623）。
メイタンシノイド薬物部分のすべての立体異性体、即ち、Ｄの不斉炭素におけるＲとＳ構造のあらゆる組み合わせが、本発明の化合物のために考慮される。一実施態様では、メイタンシノイド薬物部分は以下の立体化学を有する：

メイタンシノイド薬物部分の例示的実施態様には：構造：






を有するＤＭ１；ＤＭ３；及びＤＭ４が含まれ、ここで波線は、薬物の硫黄原子の、抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。（国際公開第２００５／０３７９９２；米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２号）。
他の例示的メイタンシノイド抗体−薬物コンジュゲートは、以下の構造及び略称を有する（ここでＡｂは抗体であり、ｐは１〜約８である）：

Ａｂ −ＳＰＰ−ＤＭ１



Ａｂ−ＳＰＤＢ−ＤＭ４



Ａｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを介して抗体のチオール基に結合している例示的な抗体−薬物コンジュゲートは、構造及び略称：

を有し、ここでＡｂは抗体であり；ｎは０、１、又は２であり；ｐは１、２、３、又は４である。
メイタンシノイドを含有するイムノコンジュゲート、同イムノコンジュゲートの作製方法、及びその治療的使用が、例えば、Erickson, et al (2006) Cancer Res. 66(8):4426-4433；米国特許第５２０８０２０号、同第５４１６０６４号、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２号、及びヨーロッパ特許ＥＰ０４２５２３５Ｂ１に開示されており、これらの開示内容は参照により本明細書に明示的に包含される。
本組み合わせ発明の抗体−メイタンシノイドコンジュゲートは、抗体をメイタンシノイド分子に、抗体又はメイタンシノイド分子いずれの生物活性も大きく低減させることなく、化学的に結合することにより調製される。例えば、米国特許第５２０８０２０号参照（開示内容は参照により本明細書に明示的に包含される）。メイタンシノイドは、既知の技術により合成することができるか、又は自然の供給源から単離することができる。適切なメイタンシノイドは、例えば、米国特許第５２０８０２０号及び上述の他の特許文献及び非特許文献に開示されており、それらはメイタンシノール及びメイタンシノールの芳香環又は分子の他の位置で修飾されたメイタンシノールアナログなど、例えば様々なメイタンシノールエステルである。
抗体−メイタンシノイドコンジュゲートを作製するための、当技術分野において既知の多くの連結基があり、これには、例えば、米国特許第５２０８０２０号又はＥＰ特許０４２５２３５Ｂ１；Chari et al. Cancer Research 52:127-131 (1992)；及び米国特許出願公開第２００５／０１６９９３号に開示されているものが含まれ、これら文献の開示内容は参照により本明細書に明示的に包含される。リンカー成分ＳＭＣＣを含む抗体−メイタンシノイドコンジュゲートは、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２号、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ」に記載のようにして調製することができる。そのようなリンカーは、上記特許において開示されている、ジスルフィド基、チオエーテル基、酸解離性基、光解離性基、ペプチダーゼ解離性基、又はエステラーゼ解離性基を含む。更なるリンカーが本明細書に記載及び例示される。
抗体とメイタンシノイドのコンジュゲートは、種々の二官能性タンパク質カップリング剤、例えばＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオナート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステル類の二官能性誘導体（例えばジメチルアジピミダートＨＣＬ）、活性エステル類（例えば、スベリン酸ジスクシンイミジル）、アルデヒド類（例えば、グルタルアルデヒド）、ビスアジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トルエン−２，６−ジイソシアネート）、及び二活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）を使用して作製することができる。特定の実施態様では、ジスルフィド結合を提供するためのカップリング剤は、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルチオ）プロピオン酸（ＳＰＤＰ）（Carlsson et al., Biochem. J. 173:723-737 (1978)）又はＮ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）である。
リンカーは、連結の種類に応じて、多様な位置でメイタンシノイド分子に結合させることができる。例えば、エステル結合は、従来のカップリング技術を使用したヒドロキシル基との反応により形成される。この反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位で発生しうる。一実施態様において、結合は、メイタンシノール又はメイタンシノールアナログのＣ−３位で形成される。
（２）アウリスタチン及びドラスタチン
いくつかの実施態様では、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とイムノコンジュゲートの組み合わせは、ドラスタチン又はドラスタチンのペプチド性アナログ若しくは誘導体、例えばアウリスタチン（米国特許第５６３５４８３号；同第５７８０５８８号）にコンジュゲートした抗体を含む。ドラスタチン及びアウリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解、並びに核及び細胞分裂に干渉し（Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584）抗がん活性（米国特許第５６６３１４９号）及び抗真菌活性（Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965）を有することが示されている。ドラスタチン又はアウリスタチン薬物部分は、ペプチド性薬物部分のＮ（アミノ）末端又はＣ（カルボキシル）末端を介して抗体に結合しうる（国際公開第０２／０８８１７２）。
例示的アウリスタチンの実施態様には、Ｎ末端結合モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦが含まれる（米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号、Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, presented March 28, 2004に開示、これら文献の開示内容全体は参照により本明細書に明示的に包含される）。
ペプチド性薬物部分は、以下の式ＤＥ及びＤＦから選択される：
式中、ＤＥ及びＤＦの波線は、抗体又は抗体リンカー成分への共有結合部位を示し、各位置において独立して：
Ｒ２はＨ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環及び Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環及び Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５はＨ及びメチルから選択されるか；
又はＲ４及びＲ５は一緒に炭素環式環を形成し、式（ＣＲａＲｂ）ｎ（Ｒａ及びＲｂは独立してＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル及びＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５及び６から選択される）を有し；
Ｒ６はＨ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ７はＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環及び Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
各Ｒ８は独立してＨ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環及びＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され；
Ｒ９はＨ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ１０はアリール又はＣ３−Ｃ８複素環から選択され；
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、又はＮＲ１２（Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキル）であり；
Ｒ１１はＨ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、又は−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され；
ｍは１〜１０００にわたる整数であり；
Ｒ１３はＣ２−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１４は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８−アルキルであり；
Ｒ１５の各発生は独立してＨ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、又は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１６の各発生は独立してＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、又は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり；
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、及び−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され；
ｎは０〜６にわたる整数である。
一実施態様では、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７は独立してイソプロピル又はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は-Ｈ又はメチルである。例示的一実施態様では、Ｒ３及びＲ４の各々はイソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
また別の実施態様では、Ｒ２及びＲ６の各々はメチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
また別の実施態様では、Ｒ８の各発生は−ＯＣＨ３である。
例示的一実施態様では、Ｒ３及びＲ４の各々はイソプロピルであり、Ｒ２及びＲ６の各々はメチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各発生は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は−Ｈである。
一実施態様では、Ｚは−Ｏ−又は−ＮＨ−である。
一実施態様では、Ｒ１０はアリールである。
例示的一実施態様では、Ｒ１０は−フェニルである。
例示的一実施態様では、Ｚが−Ｏ−であるとき、Ｒ１１は−Ｈ、メチル又はｔ−ブチルである。
一実施態様では、Ｚが−ＮＨであるとき、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここでＲ１５は−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は−Ｃ１−Ｃ８アルキル又は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
別の一実施態様では、Ｚが−ＮＨであるとき、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、ここでＲ１５は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
式ＤＥの例示的アウリスタチンの実施態様はＭＭＡＥであり、式中の波線は、抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：
ＭＭＡＥ
式ＤＦの例示的アウリスタチンの実施態様はＭＭＡＦであり、式中の波線は、抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す（米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号及びDoronina et al. (2006) Bioconjugate Chem. 17:114-124参照）：
ＭＭＡＦ
他の例示的実施態様は、ペンタペプチドアウリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８８４８号）及びペンタペプチドアウリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８６０３号）を含む。
他の薬物部分は、以下のＭＭＡＦ誘導体を含み、式中の波線は、抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：



，

，

，

，

、及び


一態様では、上述のような、限定しないが三エチレングリコールエステル類（ＴＥＧ）を含む親水基は、薬物部分にＲ１１で結合することができる。いずれの理論にも縛られないが、親水基は薬物部分の内部移行及び非凝集作用を補助する。
アウリスタチン／ドラスタチン又はその誘導体を含む、式ＩのＡＤＣと本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体との組み合わせの例示的実施態様は、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号及びDoronina et al. (2006) Bioconjugate Chem. 17:114-124に記載されており、これら文献は参照により本明細書に明示的に包含される。ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦと、様々なリンカー成分とを含む式ＩのＡＤＣの例示的実施態様は、以下の構造及び略称を有する（ここで「Ａｂ」は抗体であり；ｐは１〜約８であり、「Ｖａｌ−Ｃｉｔ」又は「ｖｃ」はバリン−シトルリンジペプチドであり；「Ｓ」は硫黄原子である）。本明細書の硫黄に結合したＡＤＣの構造の記載のうち特定のものにおいては、抗体は「Ａｂ−Ｓ」と表記されているが、これは単に硫黄結合の特性を示すためであって、特定のリンカー−薬物部分を保持することを示しているのはな原子が複数のリンカー−薬物部分を保持することを示しているのではない。以下の構造の左の括弧は、硫黄原子の左側のＡｂとＳの間に配置してもよく、これは本明細書を通して記載される本発明のＡＤＣの等価な記載である。
ＭＭＡＦ及び様々なリンカー成分を含む式ＩのＡＤＣと本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体との組み合わせの例示的実施態様は更に、Ａｂ−ＭＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びｂＡｂ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦを含む。興味深いことに、タンパク質分解性に切断可能でないリンカーにより抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートは、タンパク質分解性に切断可能なリンカーにより抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートに匹敵する活性を保持することが示されている。Doronina et al. (2006) Bioconjugate Chem. 17:114-124参照。このような場合、薬物の放出は、細胞中の抗体分解によって行われると考えらえる。Ｉｄ．
通常、ペプチドベースの薬物部分は、二つ以上のアミノ酸及び／又はペプチド断片の間にペプチド結合を形成することにより調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド化学の分野で周知の液体相合成法に従って調製することができる（E. Schroder and K. Lubke, “The Peptides”, volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press参照）。アウリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号；米国特許第５６３５４８３号；同第５７８０５８８号；Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G.R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 5:859-863; 及びDoronina (2003) Nat. Biotechnol. 21(7):778-784の方法に従って調製される。
特に、式ＤＦのアウリスタチン／ドラスタチン薬物部分、例えばＭＭＡＦ及びその誘導体は、米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号及びDoronina et al. (2006) Bioconjugate Chem. 17:114-124に記載の方法を用いて調製される。式ＤＥのアウリスタチン／ドラスタチン薬物部分、例えばＭＭＡＥ及びその誘導体は、Doronina et al. (2003) Nat. Biotech. 21:778-784に記載の方法を用いて調製される。薬物−リンカー成分であるＭＣ−ＭＭＡＦ、ＭＣ−ＭＭＡＥ、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、及びＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、簡便には、例えばDoronina et al. (2003) Nat. Biotech. 21:778-784、及び米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９号に記載の常套的な方法により合成され、次いで対象の抗体にコンジュゲートされる。
（３）カリケアマイシン
他の実施態様では、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とイムノコンジュゲートの組み合わせは、一又は複数のカリケアマイシン分子にコンジュゲートした抗体を含む。カリケアマイシンファミリーの抗生物質は、ピコモル濃度未満で二本鎖ＤＮＡ切断を生じさせる能力がある。カリケアマイシンファミリーのコンジュゲートの調製については、米国特許第５７１２３７４号、同第５７１４５８６号、同第５７３９１１６号、同第５７６７２８５号、同第５７７０７０１号、同第５７７０７１０号、同第５７７３００１号、同第５８７７２９６号（すべてＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）を参照のこと。使用されうるカリケアマイシンの構造的アナログには、限定されないが、γ１ Ｉ、α２ Ｉ、α３ Ｉ、Ｎ−アセチル−γ１ Ｉ、ＰＳＡＧ及びθＩ １が含まれる（Hinman et al., Cancer Research 53:3336-3342 (1993), Lode et al., Cancer Research 58:2925-2928 (1998)、及び上述のＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙｔｅｎｔｓ ｔｏ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄの米国特許）。抗体をコンジュゲートすることができる別の抗腫瘍薬は、抗葉酸薬であるＱＦＡである。カリケアマイシンとＱＦＡはどちらも、細胞内作用部位を有しており、原形質膜を容易に越えない。したがって、細胞が抗体媒介性の内部移行を通じてこれらの薬剤を取り込むと、その細胞傷害効果は大きく強化される。
ｃ．他の細胞傷害性薬剤
抗体にコンジュゲートすることができる他の抗腫瘍剤には、ＢＣＮＵ、ストレプトゾイシン、ビンクリスチン及び５−フルオロウラシル、総称的にＬＬ−Ｅ３３２８８複合体として知られる薬剤ファミリー（米国特許第５０５３３９４号、同第５７７０７１０号に記載）、並びにエスペラマイシン（米国特許第５８７７２９６号）が含まれる。
使用可能な酵素的に活性な毒素及びその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、（緑膿菌からの）外毒素Ａ鎖、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシン（ｍｏｄｅｃｃｉｎ）Ａ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテスフォーディ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカチャランチア（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリアオフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）を含む。例えば、１９９３年１０月２８日公開の国際公開第９３／２１２３２号を参照。
本発明は更に、核分解活性を有する化合物と抗体との間に形成されたイムノコンジュゲートと本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体の組み合わせを含む（例えば、リボヌクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ、例えばデオキシリボヌクレアーゼ；ＤＮａｓｅ）。
特定の実施態様では、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とイムノコンジュゲートの組み合わせは、高度に放射性の原子を含みうる。様々な放射性同位体が放射性コンジュゲート抗体の生成のために入手可能である。例として、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。検出のためにイムノコンジュゲートを使用するとき、それはシンチグラフィー試験のための放射性原子、例えばＴｃ９９ｍ又はＩ１２３、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化ＭＲＩとしても知られている）のためのスピン標識、例えばヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン又は鉄を含んでよい。
放射能又は他の標識は、既知の方法でイムノコンジュゲートに取り込むことができる。例えば、ペプチドは、例えば、生合成されるか、例えば水素の代わりにフッ素１９を伴う適切なアミノ酸前駆体を用いた化学アミノ酸合成により合成される。ｔｃ９９ｍ又はＩ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１といった標識は、ペプチド中のシステイン残基を介して結合させることができる。Ｙｔｔｒｉｕｍ−９０は、リジン残基を介して結合させることができる。ＩＯＤＯＧＥＮ法（Fraker et al (1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80 49-57を、ヨウ素−１２３を取り込むために使用することができる。「Monoclonal Antibodies in Immunoscintigraphy」(Chatal, CRC Press 1989)には、他の方法が詳細に記載されている。
特定の実施態様では、本明細書に定義される抗ＣＤ２０抗体とイムノコンジュゲートの組み合わせは、プロドラッグを活性薬物、例えば抗がん薬に変換するプロドラッグ活性酵素にコンジュゲートした抗体を含みうる（例えば、ペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号参照）。このようなイムノコンジュゲートは、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体にコンジュゲートしうる酵素としては、限定されるものではないが、以下を含む：ホスフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用なアルカリホスファターゼ；スルフェート含有プロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用なアリールスルファターゼ；非毒性の５−フルオロシトシンを抗がん薬の５−フルオロウラシルに変換させるのに有用なシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用なプロテアーゼ、例えば、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、サブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（例えばカテプシンＢ及びＬ）；Ｄ−アミノ酸置換基を含有するプロドラッグを変換させるのに有用なＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化されたプロドラッグを遊離薬物に変換させるのに有用な炭水化物開裂酵素、例えばβ−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ；β−ラクタムで誘導体化されている薬物を遊離薬物に変換させるのに有用なβ−ラクタマーゼ；並びに、アミン窒素の位置においてそれぞれフェノキシアセチル基又はフェニルアセチル基で誘導体化されている薬剤を遊離薬物に変換させるのに有用なペニシリンアミダーゼ、例えばペニシリンＶアミダーゼ又はペニシリンＧアミダーゼ。酵素は、当技術分野で周知の組換えＤＮＡ技術により抗体に共有結合しうる。例えば、Neuberger et al., Nature 312:604-608 (1984)を参照のこと。
ｄ．薬物負荷
薬物負荷は、式Ｉの一分子中の抗体一つ当たりの薬物部分の平均数であるｐにより表される。薬物負荷は、抗体一つ当たり１〜２０個の薬物部分（Ｄ）にわたってよい。式ＩのＡＤＣは、１〜２０個の範囲の薬物部分にコンジュゲートした抗体の集団を含む。コンジュゲート反応に基づくＡＤＣの調製における抗体一つ当たりの薬物部分の平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣのような一般的な手段により特徴づけられる。ｐの観点からＡＤＣの量的分布も決定される。場合によっては、均一なＡＤＣの分離、精製、及び特徴づけ（ｐは他の薬物負荷を伴うＡＤＣに基づく何らかの値である）は、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動などの手段により達成される。このように、式Ｉの抗体−薬物コンジュゲートの薬学的製剤は、このようなコンジュゲートと１、２、３、４、又はそれより多い薬物部分に結合した抗体との不均一な混合物でありうる。
いくつかの抗体−薬物コンジュゲートの場合、ｐは抗体の結合部位の数によって限定される。例えば、上記例示的実施態様のように結合がシステインチオールである場合、抗体は一又は複数のシステインチオール基のみを有するか、又はそれを介してリンカーが結合する一又は複数の十分に反応性のチオール基を有することができる。特定の実施態様では、より高い薬物負荷、例えばｐ＞５は、特定の抗体−薬物コンジュゲートの凝集、不溶化、毒性、又は細胞透過性の欠失を引き起こすことがある。特定の実施態様では、本発明のＡＤＣの薬物負荷は、１〜約８；約２〜約６；又は約３〜約５にわたる。実際、特定のＡＤＣについて、抗体一つ当たりの薬物部分の最適な比が８未満であり、約２〜約５でありうることが示されている。米国特許出願公開第２００５−０２３８６４９号参照。
特定の実施態様では、理論的最大値を下回る薬物部分がコンジュゲート反応の間に抗体にコンジュゲートする。抗体は、例えば、後述するように、薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残留物を含むことができる。通常、抗体は、薬物部分に結合しうる、遊離する反応性システインチオール基を多くは含まず；実際、抗体中の大部分のシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在する。特定の実施態様では、抗体は、部分又は全還元条件下において、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）といった還元剤により還元されて、反応性システインチオール基を生成する。特定の実施態様では、抗体は、リジン又はシステインといった反応性求核基を明らかにするために、変性条件にさらされる。
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体の比）は、様々な方法によって制御され、それらは例えば以下である：（ｉ）抗体に反応性の過剰モルの薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬を制限すること、（ｉｉ）コンジュゲート反応時間又は温度を制限すること、並びに（ｉｉｉ）システインチオール修飾の還元条件を一部に制限すること。
複数の求核基が薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬とそれに続く薬物部分試薬と反応する場合、結果として得られる生成物が、ＡＤＣ化合物と、抗体に結合した一又は複数の薬物部分の分配の混合物であることを理解されたい。抗体一つ当たりの薬物の平均数は、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイにより混合物から計算することができ、これは抗体に特異的であり、且つ薬物に特異的である。個々のＡＤＣ分子は、質量分析により混合物中において同定され、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離される（例えば、McDonagh et al (2006) Prot. Engr. Design and Selection 19(7):299-307; Hamblett et al (2004) Clin. Cancer Res. 10:7063-7070; Hamblett, K.J., et al. “Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate,” Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., et al. “Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates,” Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004)。特定の実施態様では、単一の負荷値を有する均一なＡＤＣは、電気泳動又はクロマトグラフィーによりコンジュゲート混合物から単離される。
抗体薬物コンジュゲートの調製：
本明細書に記載される、本組み合わせ発明の抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、当業者に既知の方法により調製される。例示的方法は、例えば国際公開第２００９／０９９７２８号に記載されている。前記方法は、例えば国際公開第２００９／０９９７２８号の段落５３８−５４５（イムノコンジュゲートの調製）、段落５４６−５８５（例示的なイムノンジュゲート−チオ抗体薬物コンジュゲート）、段落５８６−５９１（リンカー）、段落５９２−６０５（ストレッチャー単位）、段落６０６−６１０（アミノ酸単位）、段落６１１−６１７（スペーサー単位）、段落６１８−６２４（樹状リンカー）、段落６２５−６３２（リンカー試薬）；段落６３３−６３６（システイン操作抗ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの調製）に記載されており、これらすべては参照により包含される。
本組み合わせ発明によるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートのＩＣ５０決定のためのインビトロ活性アッセイ
「ＩＣ５０」は、測定された比活性の５０％を阻害するために必要な特定の化合物の濃度を指す。ＣＤ７９ｂの相互作用を阻害する薬剤のＩＣ５０は、特に以下のようにして測定することができる。
用語「細胞傷害活性」は、抗体−薬物コンジュゲート又は抗体−薬物コンジュゲートの細胞内代謝物質の細胞死滅効果、細胞分裂停止効果、又は増殖阻害効果を指す。細胞傷害活性は、ＩＣ５０値として表すことができ、これは細胞の半分が生存する単位体積当たりの濃度（モル又は質量）である。
複数のリンパ腫細胞株上のヒトＣＤ７９ｂの表面発現
様々な量でその表面上にＣＤ７９ｂを発現している１９のリンパ腫細胞株を培養し、ログ段階増殖において収穫した。細胞を、それぞれ１００μｇ／ｍｌの正常なマウスＩｇＧ及び正常なヒトＩｇＧを含むＦＡＣＳ洗浄バッファー（ＰＢＳ；０．５％ウシ血清アルブミン；０．１％アジ化ナトリウム）中に懸濁し、氷上に維持した。１００μｌ当たり約１×１０６個の細胞を、抗ｈｕＣＤ７９ｂ ＡＰＣ（ｍＩｇＧ１、クローンＲＦＢ４、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＃９３６１−１１）又はマウスＩｇＧ１ ＡＰＣアイソタイプ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５５７５１）で３０分間氷上で染色した。死細胞は７−ＡＡＤ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５９９２５）で染色した。データは、ＢＤ ＦａｃｓＣａｌｉｂｕｒＴＭフローサイトメーター上で取得し、ＦｌｏｗＪｏＴＭソフトウェアで分析した。ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＭＣｖｃＰＡＢ−ＤＭ１又はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＭＣｖｃＰＡＢ−ＭＭＡＦ又はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＭＣｖｃＰＡＢ−ＭＭＡＥ又は各遊離薬物（ＤＭ１、ＭＭＡＦ、又はＭＭＡＥ）のＩＣ５０の決定は、上述のようにリンパ腫細胞を培養すること、ログ段階の培養細胞を収穫すること、及び５０００個の細胞を、９６ウェルプレートの一ウェル当たり９０μｌの培地に播種することによって行われた。ＡＤＣ及び遊離薬物を、検出範囲内で順番に希釈した（ＡＤＣについて３００μｇ／ｍｌから、又は遊離薬物について９０ｎＭから開始して、本質的にゼロのアッセイ標的まで希釈）。１０μｌの希釈ＡＤＣ又は遊離薬物のアリコートを、細胞を含有する複製ウェルに加え、３日間３７℃でインキュベートした。各ウェルに対し、１００μｌのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ＧｌｏＴＭを加え、３０分間インキュベートした。化学発光を検出し、データを、ＰｒｉｓｍＴＭソフトウェアを用いて分析した。
オリゴ糖成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する耐性、免疫系との相互作用、薬物動態、及び特定の生物活性を含む、治療用糖タンパク質の効能に関連した特性に有意に影響することができる。そのような特性は、オリゴ糖の有無だけでなく、その特定の構造にも依存しうる。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間で、何らかの一般化が可能である。例えば、特定のオリゴ糖構造が特定の糖結合タンパク質との相互作用を通じて血流からの糖タンパク質の迅速な排除を媒介する一方、他のオリゴ糖構造は抗体に結合し、望まれない免疫反応を惹起する（Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
哺乳動物細胞は、ヒトへの応用に最も適合性の形態にタンパク質をグリコシル化するその能力のために、治療用糖タンパク質生産のための優良な宿主である（Cumming, D.A., et al., Glycobiology 1 (1991) 115-130; Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。細菌は非常に希にしかタンパク質をグリコシル化せず、酵母、糸状菌、昆虫及び植物細胞などの他の種類の一般的な宿主と同様に、血流からの迅速な排除、望ましくない免疫相互作用、及び何らかの特定の場合では、生物活性の低下に関与するグリコシル化パターンを生じる。哺乳動物細胞の中で、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞は、最近２０年間に最も一般的に使用されている。適切なグリコシル化パターンを生じることに加えて、これらの細胞は、遺伝的に安定で、高度に生産性のクローン細胞株の一貫した産生を可能とする。これらは、簡単なバイオリアクター中で、無血清培地を使用して高密度で培養することが可能で、安全かつ再現性のよいバイオプロセスの開発を可能にする。他の一般的に使用される動物細胞は、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、ＮＳＯ−及びＳＰ２／０−マウス骨髄腫細胞を含む。より最近では、トランスジェニック動物由来の生産も試験されている（Jenkins, N., et al., Nature Biotechnol. 14 (1996) 975-981）。
全ての抗体は、重鎖定常領域の保存位置に炭水化物構造を含み、各アイソタイプはＮ結合型糖鎖構造の別個のアレイを有し、これらはタンパク質集合、分泌又は機能的活性に様々に影響する（Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。結合したＮ結合炭水化物の構造は、プロセシングの度合いに応じて大きく変化し、多重に分岐した高マンノース、並びに二分岐複合体オリゴ糖を含みうる（Wright, A., and Morrison, S.L., Trends Biotech. 15 (1997) 26-32）。典型的には、特定のグリコシル化部位で結合したコアオリゴ糖構造の不均一なプロセシングが存在し、モノクローナル抗体であっても複数の糖形態として存在する。同様に、抗体のグリコシル化における大きな差異が細胞株の間で生じることが示されており、場合によっては異なる培養条件下で増殖した所定の細胞株に対して僅かな差異が見られる（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822）。
単純な生産プロセスを維持し、有意な望ましくない副作用を潜在的に回避しながら、効力を大きく増加させる一つの方法は、Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180及び米国特許第６６０２６８４号に記載されるように、そのオリゴ糖成分を操作することにより、モノクローナル抗体の天然の細胞媒介性エフェクター機能を亢進させることである。がん免疫療法において最も一般的に使用される抗体であるＩｇＧ１型抗体は、各ＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に保存されたＮ結合型グリコシル化部位を有する糖タンパク質である。Ａｓｎ２９７に結合した２つの複合二分岐オリゴ糖はＣＨ２ドメイン間に包埋されて、ポリペプチド骨格を有する広範な接触部を形成し、それらの存在は、抗体が、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能を媒介するのに必須である（Lifely, M.R., et al., Glycobiology 5 (1995) 813-822; Jefferis, R., et al., Immunol. Rev. 163 (1998) 59-76; Wright, A., 及び Morrison, S.L., Trends Biotechnol. 15 (1997) 26-32）。
二分岐オリゴ糖の形成を触媒するグリコシルトランスフェラーゼであるβ（ｌ，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩ１１（「ＧｎＴＩＩ１７ｙ」）のチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における過剰発現が、操作されたＣＨＯ細胞により生産される抗神経芽細胞腫キメラモノクローナル抗体（ｃｈＣＥ７）のインビトロＡＤＣＣ活性を有意に増加させることが既に示されている（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180；及び国際公開第９９／１５４３４２号を参照のこと。これらの全内容は参照により本明細書中に援用される）。抗体ｃｈＣＥ７は、高い腫瘍親和性及び特異性を有するが、ＧｎＴＩＩＩ酵素を欠く標準的な工業用細胞株において生産された場合、殆ど効力を有さず臨床的に有用ではない非コンジュゲートモノクローナル抗体の大きなクラスに属する（Umana, P., et al., Nature Biotechnol. 17 (1999) 176-180）。その研究は、二分岐非フコシル化オリゴ多糖を含む、定常領域（Ｆｃ）に結合した二分岐オリゴ糖の割合の増加も引き起こす、ＧｎＴＩＩＩを発現するように、抗体産生細胞を操作することにより、天然に存在する抗体に見出されるレベルを超えて、ＡＤＣＣ活性の大幅な増加が達成され得ることを最初に示したものである。
本明細書で使用される用語「がん」は、リンパ腫、リンパ性白血病、肺がん、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）がん、細気管支肺胞上皮細胞肺がん、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頸部がん、皮膚黒色腫又は眼球内黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門領域のがん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸がん、乳がん、子宮がん、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、ホジキン病、食道がん、小腸がん、内分泌系のがん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織の肉腫、尿道がん、陰茎がん、前立腺がん、膀胱がん、腎臓又は尿管のがん、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、肝細胞がん、胆道がん、中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星状細胞腫、シュワン腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫を含み、上記がんのいずれかの難治型、又は上記がんの一又は複数の組み合わせも含まれる。一実施態様では、用語がんはＣＤ２０を発現するがんを指す。
用語「ＣＤ２０の発現」抗原は、細胞中、好ましくは、腫瘍又はがん（好ましくは非固形腫瘍）にそれぞれ由来する、好ましくはＴ又はＢ細胞（より好ましくはＢ細胞）の細胞表面上における、ＣＤ２０抗原の発現の有意なレベルを示すことが意図される。「ＣＤ２０を発現するがん」に罹患している患者は、当技術分野で既知の標準的アッセイにより決定することができる。例えば、ＣＤ２０抗原発現は、免疫組織化学（ＩＨＣ）検出、ＦＡＣＳを使用して、又は対応するｍＲＮＡのＰＣＲに基づく検出を介して測定することができる。
本明細書において使用される用語「ＣＤ２０を発現するがん」は、がん細胞がＣＤ２０抗原の発現を示すすべてのがんを指す。本明細書において使用されるＣＤ２０を発現するがんは好ましくは、リンパ腫（好ましくはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））及びリンパ性白血病を指す。このようなリンパ腫及びリンパ性白血病は、例えばａ）濾胞性リンパ腫、ｂ）小型非開裂性細胞リンパ腫／バーキットリンパ腫（地方病性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫及び非バーキットリンパ腫を含む）ｃ）辺縁帯リンパ腫（節外性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（粘膜関連リンパ組織リンパ腫、ＭＡＬＴ）、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫及び脾性辺縁帯リンパ腫）、ｄ）マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ｅ）大細胞リンパ腫（Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、びまん性混合型細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、血管中心性肺Ｂ細胞リンパ腫を含む）ｆ）毛様細胞白血病、ｇ）リンパ球性リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、ｈ）急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、ｉ）形質細胞腫、形質細胞骨髄腫、多発性骨髄腫、骨髄腫、ｊ）ホジキン病を含む。
一実施態様では、ＣＤ２０を発現するがんはＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。別の実施態様では、ＣＤ２０を発現するがんは、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、Ｂ細胞びまん性大細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）、バーキットリンパ腫、毛様細胞白血病、濾胞性リンパ腫、多発性骨髄腫、辺縁帯リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患（ＰＴＬＤ）、ＨＩＶ関連リンパ腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、又は中枢神経系原発リンパ腫である。
用語「治療方法」又はこれと同義の用語は、例えばがんに適用される場合、患者におけるがん細胞の数を減少又は消滅させるように、又はがんの症状を緩和するように設計された手順又は行動方針を指す。がん又は他の増殖性疾患の「治療方法」は、がん細胞若しくは他の疾患が実際に消滅し、細胞の数若しくは疾患が実際に低減し、又はがん若しくは他の疾患の症状が実際に緩和することを必ずしも意味しない。しばしば、成功の確率が低くても患者の既往歴や推定生存期間を前提として総合的に有益な行動方針を誘導するとみなされるがんの治療方法が実施される。
用語「共投与」又は「共投与すること」は、前記アフコシル化抗ＣＤ２０、及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの、二つの別個の製剤（又は単一の製剤）としての投与を指す。共投与は、同時であっても、又は任意の順序で連続的であってもよく、両方（又はすべて）の活性剤がそれらの生物活性を同時に発揮する期間があることが好ましい。前記抗ＣＤ２０アフコシル化抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、同時に又は連続して共投与される（例えば連続的注入により静脈内（ｉ．ｖ．）に（抗ＣＤ２０抗体について一回、及び最終的に前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートについて一回；又は例えば抗ＣＤ２０抗体は連続的注入により静脈内（ｉ．ｖ．）投与され、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは経口投与される）。両方の治療剤が連続的に共投与されるとき、用量は、二回の別々の投与に分けて同日に投与されるか、又は薬剤の一方が１日目に投与され、二番目が２〜７日目に、好ましくは２〜４日目に共投与される。このように、一実施態様では、用語「連続的に」は、第１の成分（抗ＣＤ２０抗体又はＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート）の用量の後の７日以内を、好ましくは第１の成分の用量の後の４日以内を意味し；用語「同時に」は同じ時点でを意味する。前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの維持量に関する用語「共投与」は、治療周期、例えば毎週１回、が両方の薬物にとって適切である場合は、維持量が同時に共投与されうることを意味する。或いは、例えばＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、例えば毎第１日目〜第３日目に投与され、前記アフコシル化抗体は毎週投与される。或いは、維持量は、一日以内又は七日以内に、連続的に共投与される。
対象化合物の量又は併用量が、研究者、獣医、医師若しくは他の臨床家が求める組織、系、動物若しくはヒトの生物学的又は医学的奏功を引き出す量である、「治療的有効量」（又は単に「有効量」）で抗体が患者に投与されることは自明である。
前記抗ＣＤ２０アフコシル化抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの共投与の量及び共投与のタイミングは、治療される患者の種類（人種、性別、年齢、体重など）及び状態、並びに治療される疾患又は状態の重症度に依存する。前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、単回で、又は一連の治療にわたって、例えば同日又は後日、患者に対して適切に共投与される。
投与が静脈内投与である場合、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体又は前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの最初の点滴時間は、次の点滴時間より長く、例えば最初の点滴が約９０分間であり、次の点滴が約３０分間である（最初の点滴が良好な耐容性を示せば）。
疾患の種類及び重度に応じて、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体；及び１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）の前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートが、両方の薬物の患者への共投与のための初回の候補投与量である。一実施態様において前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体の好ましい投与量（好ましくはアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇの一又は複数の用量（又はこれらのいずれかの組み合わせ）を患者に共投与してよい。一実施態様において前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの好ましい投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇである。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ又は３０ｍｇ／ｋｇの一又は複数の用量（又はこれらのいずれかの組み合わせ）を患者に共投与してよい。
これらのがんを治療するために、一実施態様では、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、上述のように、静脈内注入を介して投与される。点滴により投与される用量は、一用量当たり約１μｇ／ｍ２〜約１００００μｇ／ｍ２の範囲であり、通常は週に一用量で合計で一、二、三、又は四用量である。代替的に、投与量の範囲は、約１μｇ／ｍ２〜約１０００μｇ／ｍ２、約１μｇ／ｍ２〜約８００μｇ／ｍ２、約１μｇ／ｍ２〜約６００μｇ／ｍ２、約１μｇ／ｍ２〜約４００μｇ／ｍ２、約１０μｇ／ｍ２〜約５００μｇ／ｍ２、約１０μｇ／ｍ２〜約３００μｇ／ｍ２、約１０μｇ／ｍ２〜約２００μｇ／ｍ２、及び約１μｇ／ｍ２〜約２００μｇ／ｍ２である。用量は毎日一回、週一回、週複数回但し毎日一回より少ない量で、月に複数回但し毎日一回より少ない量で、月に複数回但し週一回より少ない量で、月に一回、又は断続的に、疾患の症状を軽減又は緩和するために、投与されうる。投与は、治療されているリンパ腫、白血病の腫瘍又は症状の寛解まで、開示される間隔のいずれかで継続されうる。投与は、症状の寛解又は軽減が達成された後、このような寛解又は軽減が投与の継続によって延長するならば、継続されうる。
患者の種類（種、性別、年齢、体重など）及び状態と、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体の種類とに応じて、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体の投与量及び投与計画は前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートとは異なってよい。例えば、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体は、一〜三週間に一回投与されてよく、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは毎日又は２〜１０日毎に投与されてよい。また、初期の高負荷用量の後、一以上の低用量を投与してよい。
一実施態様では、本発明によりＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートと併用される前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくは、アフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）の好ましい投与量は、３〜６週の投薬サイクルの１、８、１５日目に８００〜１６００ｍｇ（一実施態様では８００〜１２００ｍｇ）、及び次いで九回までの３〜４週の投薬サイクルの１日目に４００〜１２００（一実施態様では８００〜１２００）ｍｇである。最も好ましくは、用量は３週間の投薬計画においてフラット用量１０００ｍｇであり、第２週にフラット用量１０００ｍｇのサイクルが追加可能である。
また別の実施態様では、本発明によりアフコシル化抗ＣＤ２０抗体と併用されるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの用量は、３週間の投薬計画において約１．５ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１．７ｍｇ／ｋｇ〜約２．５ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約１．８ｍｇ／ｋｇ〜約２．４ｍｇ／ｋｇである。前記最も好ましい投与量は、現在ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート単剤療法の第２相試験において試験されている。
また別の実施態様では、本発明によりＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートと併用されるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の用量は、１日目に約１０００ｍｇのフラット用量（サイクル１の１日目（Ｃ１Ｄ１））、８日目に約１０００ｍｇの更なるフラット用量（Ｃ１Ｄ８）及び１５日目に約１０００ｍｇの更なるフラット用量（Ｃ１Ｄ１５）と、続いて更に六回にわたる、三週毎の前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体約１０００ｍｇのフラット用量（サイクル２）：２２日目（Ｃ２Ｄ１）、４３日目（Ｃ２Ｄ２）、６４日目（Ｃ２Ｄ３）、８５日目（Ｃ２Ｄ４）、１０６日目（Ｃ２Ｄ５）、及び１２７日目（Ｃ２Ｄ６）である。前記実施態様では、本発明によりアフコシル化抗ＣＤ２０抗体と併用されるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの用量は、三週毎に約２．４ｍｇ／ｋｇ又は代替的に三週毎に１．８ｍｇ／ｋｇである。前記実施態様では、本発明によりアフコシル化抗ＣＤ２０抗体と併用されるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの投薬は、１日目（Ｃ１Ｄ１）、２２日目（Ｃ２Ｄ１）、４３日目（Ｃ２Ｄ２）、６４日目（Ｃ２Ｄ３）、８５日目（Ｃ２Ｄ４）、１０６日目（Ｃ２Ｄ５）及び１２７日目（Ｃ２Ｄ６）である。
好ましくは、上述の前記投薬計画では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はオビヌツズマブ又はＧＡ１０１である。また、好ましくは、上述の前記投薬計画では、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。
本発明は、自己免疫疾患を緩和する方法も提供し、この方法は、自己免疫疾患に罹患している患者に対し、本明細書に開示される前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記実施態様のうちのいずれか一つのヒト化ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８抗体−薬物コンジュゲートの治療的有効量を投与することを含む。好ましい実施態様では、抗体は、静脈内投与又は皮下投与される。抗体−薬物コンジュゲートは、一用量当たり約１μｇ／ｍ２〜約１００ｍｇ／ｍ２の投与量で静脈内投与され、特定の実施態様では、投与量は１μｇ／ｍ２〜約５００μｇ／ｍ２である。用量は毎日一回、週一回、週複数回但し毎日一回より少ない量で、月に複数回但し毎日一回より少ない量で、月に複数回但し週一回より少ない量で、月に一回、又は断続的に、疾患の症状を軽減又は緩和するために、投与されうる。投与は、治療されている自己免疫疾患の症状の軽減又は緩和まで、開示される間隔のいずれかで継続されうる。投与は、症状の軽減又は緩和が達成された後、このような緩和又は軽減が投与の継続によって延長するならば、継続されうる。
本発明は、Ｂ細胞疾患の治療方法も提供し、この方法は、Ｂ細胞増殖性疾患（限定しないがリンパ腫及び白血病を含む）又は自己免疫疾患といったＢ細胞疾患に罹患している患者に対し、本明細書に開示される前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記実施態様のうちのいずれか一つのヒト化ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８抗体の治療的有効量を投与することを含み、この場合抗体は細胞傷害性分子又は検出可能な分子にコンジュゲートしていない。抗体は、典型的には、約１μｇ／ｍ２〜約１０００ｍｇ／ｍ２の投与量範囲で投与される。
推奨される用量は、さらに化学療法剤が共投与されるかどうかによって、且つ化学療法剤の種類に基づいて変化する。
一実施態様では、医薬は、がん、好ましくはＣＤ２０を発現するがんに罹患しているこのような患者における転移又は更なる播種を防止又は低減するために有用である。医薬は、生存期間、無増悪生存期間、応答率又は奏功期間により測定して、このような患者の生存期間を延長するため、このような患者の無増悪生存期間を延長するため、奏功期間を延長するため、治療対象患者の統計的に有意且つ臨床的に意味のある改善をもたらすために有用である。好ましい一実施態様では、医薬は、一群の患者において応答率を上昇させるために有用である。
この発明の文脈において、更に他の細胞傷害性剤、化学療法剤又は抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物（例えばサイトカイン）は、がんのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート併用治療に使用されうる。このような分子は、好適には、意図した目的に有効な量で組み合わされて存在する。一実施態様では、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート併用治療は、このような更なる細胞傷害性剤、化学療法剤又は抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物なしで使用される。
そのような薬剤は、例えば以下を含む：シクロホスファミド（ＣＴＸ；例えば、シトキサン（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；例えば、ロイケラン（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えば、プラチノール（登録商標））、ブスルファン（例えば、ミレラン（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣなどのアルキル化剤又はアルキル化作用を有する薬剤；メトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えば、べプシド（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えば、ゼロータ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などの代謝拮抗剤；アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えば、アドリアマイシン（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシン等の抗生物質；ビンカアルカロイド（例えば、ビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチンなど）などのアルカロイド；及び、パクリタキセル（例えば、タキソール（登録商標））及びパクリタキセル誘導体などの他の抗腫瘍剤、細胞増殖抑制剤、デキサメサゾン（ＤＥＸ；例えば、デカドロン（登録商標））などのグルココルチコイド、プレドニゾンなどのコルチコステロイド、ヒドロキシウレアなどのヌクレオシド酵素阻害剤、アスパラギナーゼ、ロイコボリン及び他の葉酸誘導体などのアミノ酸除去酵素、並びに、類似の様々な抗腫瘍剤。以下の薬剤も、追加の薬剤として使用されてよい：アミホスチン（例えば、エチオール（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（例えば、ドキシル（登録商標））、ゲムシタビン（例えば、ジェムザール（登録商標））、ダウノルビシンリポ（例えば、ダウノキソーム（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えば、タキソテール（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトセシン、ＣＰＴ１１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ ７−エチル−カンプトセシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペグアスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロラムブシル。一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート併用治療は、このような追加的薬剤なしで使用される。
化学療法レジメンにおける上記細胞傷害性剤及び抗がん剤、並びにプロテインキナーゼ阻害剤のような抗増殖性標的特異的抗がん剤の使用は、一般に、がん治療の分野において特徴が明らかにされており、本明細書におけるその使用も、耐性及び有効性のモニタリング並びに投与経路及び投与量の制御について、いくらか調節した上で、同様に考慮される。例えば、細胞傷害性剤の実際の用量は、組織培養法を用いることにより決定される患者の培養細胞応答に応じて変化しうる。一般に、投与量は、追加の他の薬剤の非存在下で使用される量と比較して減らされる。
有効な細胞傷害性剤の典型的な投与量は、製造者によって推奨される範囲であってよく、インビトロ反応又は動物モデルにおける反応により指示される場合、最大約１桁までの範囲で濃度又は量を減らすことができる。したがって、実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び初代培養悪性細胞若しくは組織培養試料のインビトロ応答性に基づくか、又は適切な動物モデルにおいて観察される応答に基づく治療法の有効性によって決まる。
本発明の文脈では、ＣＤ２０を発現するがんのアフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの併用治療に加えて、電離放射線の有効量が実施されてよく、及び／又は放射性医薬品が使用されてもよい。放射線源は、治療されるべき患者の外部又は内部のいずれかにあってよい。放射線源が患者に対して外部である場合、治療は外部照射療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者に対して内部である場合、治療は近接照射療法（ＢＴ）と称される。本発明の文脈で使用される放射性原子は、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、及びインジウム−１１１を含むがこれらに限定されない群から選択される。また、抗体をこのような放射性同位体で標識することができる。一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及び前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート併用治療は、このような電離放射線なしで使用される。
放射線療法は、切除不可能若しくは手術不可能な腫瘍及び／又は腫瘍転移物を制御するための標準的な治療である。放射線療法が化学療法と併用される場合に、改善した結果が見られている。放射線療法は、標的領域に送達された高用量の放射線が腫瘍組織及び正常組織の両方において生殖細胞の死をもたらすという原理に基づいている。放射線投与レジメンは、一般的に、放射線吸収用量（Ｇｙ）、時間及び細分化の観点から定義され、がん専門医によって注意深く定められる必要がある。患者が受ける放射線量は、様々な考慮に依拠することになるが、二つの最も重要なことは、身体の他の重要な構造又は臓器に対する腫瘍の位置、及び腫瘍が広がっている範囲である。放射線療法を受ける患者の典型的な治療過程は、１０〜８０Ｇｙの総用量を、一回約１．８〜２．０Ｇｙの分量で毎日、週５日患者に投与する、１から６週間にわたる治療スケジュールである。本発明の好ましい実施態様において、ヒト患者の腫瘍が本発明の併用療法と放射線とを用いて治療される場合に相乗効果がある。換言すれば、本発明の併用療法を構成する薬剤よる腫瘍増殖の阻害は、放射線と組合わされた時に、場合により追加の化学療法剤又は抗癌剤と組合わされた時に、亢進される。アジュバント放射線療法のパラメーターは、例えば、国際特許公開第９９／６００２３号に包含されている。
本発明によるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体、及び／又はＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、既知の方法に従って、ボーラスとして静脈内投与により、又は一定時間かけて連続的注入により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑膜内に、若しくは腱鞘内経路で、患者に投与される。一実施態様では、抗体の投与は静脈内投与又は皮下投与である。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、薬物投与に適合するすべての物質を含むことを意図し、そのような物質には、溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌性及び抗真菌性薬剤、等張及び吸収遅延剤、並びに薬物投与に適合する他の物質及び化合物が含まれる。但し、活性化合物と適合性である限り従来の媒体又は薬剤のいずれについても、本発明の組成物におけるその使用が考慮される。補足的活性化合物も、組成物中に取り込むことができる。
薬学的組成物：
薬学的組成物は、本発明による抗ＣＤ２０抗体及び／又はＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを、薬学的に許容される、無機又は有機担体を用いて処理することにより得られる。ラクトース、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩などを、例えば、錠剤、コーティングされた錠剤、ドラフェ及び硬質ゼラチンカプセルのためのこのような担体として使用することができる。軟質ゼラチンカプセルに適した担体は、例えば、植物油、ワックス、油脂、半固体及び液状ポリオールなどである。しかしながら、活性物質の性質によっては、通常軟質ゼラチンカプセルの場合担体は不要である。溶液及びシロップ剤生成ための適切な担体は、例えば、水、ポリオール、グリセロール、植物油などである。坐剤に適した担体は、例えば、天然油又は硬化油、ワックス、油脂、半液状又は液状ポリオールなどである。
さらに、薬学的組成物は、保存料、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、香味料、浸透圧を変えるための塩、バッファー、マスキング剤、又は抗酸化物質を含有することができる。薬学的組成物は、他の治療的に価値のある物質を含有することもできる。
本発明の一実施態様では、組成物は、フコースの量が６０％以下である前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくは、前記アフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）及びがん、特にＣＤ２０を発現するがん（好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病、例えばＢ細胞非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））の治療に使用される前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの両方を含む。
前記薬学的組成物は、一又は複数の薬学的に許容される担体を更に含んでもよい。
本発明は更に、例えばがんに使用される薬学的組成物を提供し、この薬学的組成物は、（ｉ）フコースの量が６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくはアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）の有効な第１の量、及び（ｉｉ）ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの有効な第２の量を含む。このような組成物は、任意選択的に、薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤を含む。
本発明によって単独で使用されるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体の薬学的組成物は、貯蔵のために、所望の純度を有する抗体を、任意選択的な薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤と混合することにより、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態に調製される（Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980)）。許容される担体、賦形剤又は安定剤は、使用される投与量及び濃度でレシピエントに毒性でなく、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸といった緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（例えば、オクタデシルジメチオルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロライド；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチル又はプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース又はデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；及び／又はＴＷＥＥＮＴＭ、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳＴＭ若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）といった非イオン性界面活性剤を含む。
抗体ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの薬学的組成物は、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体について上述したものに類似のものとすることができる。
小分子ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの薬学的組成物は、経口投与、鼻腔内投与、局所（頬側及び舌下を含む）投与、直腸内投与、膣内投与及び／又は非経口投与に適したものを含む。簡便には、組成物は、単位投与量の形態で提示することができ、薬学の分野において周知の何れかの方法により調製することができる。単一投与形態を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、治療されている宿主、並びに特定の投与様式によって様々であろう。単一投与形態を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は通常、治療効果を生じさせる式Ｉの化合物の量であろう。一般的に、１００パーセントのうち、この量は、約１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの活性成分の範囲となるであろう。このような組成物を調製する方法は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートをを担体、及び任意選択的に一又は複数の副成分と会合させる工程を含む。一般に、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの薬学的組成物は、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを液体担体、又は微粉固体担体、又は両方と均一かつ密接に会合させ、次いで、必要に応じて、製品を成形することにより調製される。経口投与に適した組成物は、それぞれ所定の量の本発明の化合物を活性成分として含む、カプセル、オブラート薬包、小袋、ピル、錠剤、甘味錠剤（香料ベース、通常はショ糖及びアカシア又はトラガカントを用いる）、粉末、顆粒の形態で、又は水性若しくは非水性の液体中の溶液若しくは懸濁液として、又は水中油型若しくは油中水型エマルジョンとして、又はエリキシル剤若しくはシロップ剤として、又はトローチ（不活性基剤、例えばゼラチン及びグリセリン、又はショ糖及びアカシアを用いる）及び／又はマウスウォッシュなどである。本発明の化合物は、ボーラス、舐剤、又はペーストとして投与されてもよい。
本発明の更なる一実施態様では、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体及びＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、二つの別個の薬学的組成物に製剤化される。
また、活性成分は、例えば、コアセルベーション技術又は界面重合により調製したマイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）において又はマクロエマルジョンにおいて、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンのマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリラート）マイクロカプセル中に封入されてもよい。このような技術は、Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
持続放出性調製物が調製されてもよい。徐放性製剤の好適な例は、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスを含み、そのマトリックスが成形品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３７７３９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とガンマ−エチル−Ｌ−グルタメートとの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴＴＭ（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリドからなる注射可能なミクロスフェア）のような分解性乳酸−グリコール酸共重合体、並びにポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
インビボでの投与に使用される製剤は無菌でなければならない。これは、滅菌濾過膜を通した濾過により容易に達成される。
一実施態様は、がんの治療のための、Ａｓｎ２９７においてオリゴ糖（糖類）の総量の６０％以下の量のフコースでアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体、及び本明細書に開示されるＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを含む組成物である。
本発明は更に、がんの治療のための方法を提供し、この方法は、そのような治療を必要とする患者に対し、（ｉ）フコースの量が６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体（好ましくはアフコシル化されたヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体）の有効な第１の量、及び（ｉｉ）ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートの有効な第２の量を投与することを含む。
一実施態様では、フコースの量は４０％〜６０％である。
好ましくは、前記がんはＣＤ２０を発現するがんである。
好ましくは、前記ＣＤ２０を発現するがんは、リンパ腫又はリンパ性白血病である。
好ましくは、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はＩＩ型抗ＣＤ２０抗体である。
好ましくは、前記抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。好ましくは、前記ヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体はオビヌツズマブである。
好ましくは、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。好ましくは、このＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である。
最も好ましくは、前記抗ＣＤ２０抗体は、抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲーと併用されるオビヌツズマブである。
好ましくは、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥであり、前記がんはＣＤ２０を発現するがん、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。
本明細書において使用される用語「患者」は、あらゆる目的のために、アフコシル化抗ＣＤ２０抗体による治療を必要とするヒト（例えばＣＤ２０を発現するがんに罹患した患者）、更に好ましくは、がん、又は前がん状態若しくは病変を治療するためにこのような治療を必要とするヒトを指す。しかしながら、用語「患者」は、非ヒト動物、中でも好ましくはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ及び非ヒト霊長類を指すこともできる。
本発明は更に、がんの治療において使用されるフコースの量が６０％以下であるアフコシル化抗ＣＤ２０抗体、及びＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートを含む。
好ましくは、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体である。
好ましくは、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは、本発明による方法の一実施態様では、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。好ましくは、このＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である。
好ましくは、前記アフコシル化抗ＣＤ２０抗体はヒト化Ｂ−Ｌｙ１抗体であり、前記ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲートは抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥである。最も好ましくは、このＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である。
好ましくは、前記がんは、ＣＤ２０を発現するがん、好ましくはリンパ腫又はリンパ性白血病である。
以下の実施例及び図面は、本発明の理解を助けるために提供されるが、本発明の真の範囲は特許請求の範囲に記載されている。本発明の精神から逸脱することなく、記載された手順で改変がなされうる。
実施例１−ＣＤ７９ｂ抗体薬物コンジュゲート
ＢＪＡＢ−ルシフェラーゼ（バーキットリンパ腫）異種移植片
インビボ腫瘍細胞死滅アッセイ
Ａ．異種移植片−ＤＭ１コンジュゲート
ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｈ３（ｈｕＭＡ７９ｂ Ｌ２／Ｈ３）に変化を有するＭＡ７９ｂを移植された「ヒト化」抗体変異体のＩｇＧ変異体の有効性を試験するために、ｈｕＭＡ７９ｂ Ｌ２／Ｈ３変異体をＤＭ１にコンジュゲートし、コンジュゲートされた変異体のマウスの腫瘍に対する影響を分析した。
具体的には、複数の異種移植片モデルにおいて腫瘍を退縮させる抗体能力が試験され、このような移植モデルには、ＲＡＭＯＳ細胞、ＢＪＡＢ細胞（転座ｔ（２；８）（ｐ１１２；ｑ２４）（ＩＧＫ−ＭＹＣ）、変異ｐ５３遺伝子を含み、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）陰性であるバーキットリンパ腫細胞株）（Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001)）、グランタ５１９細胞（サイクリンＤ１（ＢＣＬ１）の過剰発現をもたらす転座ｔ（１１；１４）（ｑ１３；ｑ３２）（ＢＣＬ１−ＩＧＨ）を含み、Ｐ１６ＩＮＫ４Ｂ及びＰ１６ＩＮＫ４Ａの欠失を含み、且つＥＢＶ陽性であるマントル細胞リンパ腫細胞株）（Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001)）、Ｕ６９８Ｍ細胞（リンパ芽球性リンパ腫Ｂ細胞株）（Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001）及びＤｏＨＨ２細胞（Ｉｇ重鎖により引き起こされるＢｃｌ−２の過剰発現をもたらす濾胞性リンパ腫ｔ（１４；１８）（ｑ３２；ｑ２１）の転座特性を含み、Ｐ１６ＩＮＫ４Ａの欠失を含み、転座ｔ（８；１４）（ｑ２４；ｑ３２）（ＩＧＨ−ＭＹＣ）を含み、且つＥＢＶ陰性である濾胞性リンパ腫細胞株）（Drexler, H.G., The Leukemia-Lymphoma Cell Line Facts Book, San Diego: Academic Press, 2001)）が含まれる。
ＭＡ７９ｂを移植された「ヒト化」抗体変異体の有効性の分析のために、メス ＣＢ１７ ＩＣＲ ＳＣＩＤマウス（週齢６〜８、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ／カリフォルニア州ホリスター）に、２×１０７個のＢＪＡＢ−ルシフェラーゼ細胞又はグランタ５１９細胞を、ＣＢ１７ ＩＣＲ ＳＣＩＤマウスの脇腹に注入することにより皮下接種し、異種移植腫瘍を平均２００ｍｍ２に成長させた。後述で特に示されない限り、０日目は、腫瘍が平均２００ｍｍ２であり、最初／又は一回のみの治療用量が投与される日を指す。腫瘍体積は、ノギスを用いて測定された二つの寸法に基づいて計算され、式：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂは、それぞれ腫瘍の長辺及び短辺である）に従ってｍｍ３で表される。各実験群から収集されるデータは平均＋ＳＥとして表した。１０匹のマウスの群を、マウス１ｍ２当たり抗体結合薬物５０μｇ〜２１０μｇ（マウス１ｋｇ当たり１〜４ｍｇに相当）の単一静脈内（ｉ．ｖ．）用量と、ＭＡ７９ｂを移植した「ヒト化」抗体変異体又はコントロール抗体−薬物コンジュゲートとにより処置した。実験を通して、腫瘍は週に一又は二回測定した。実験を通して、マウスの体重は週に一又は二回測定した。マウスは、腫瘍体積が３０００ｍｍ３に到達する前に、又は腫瘍が潰瘍形成の徴候を示したとき、安楽死させた。すべての動物プロトコールは、Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC)によって承認された。
使用した抗体と毒素との間のリンカーは、ＤＭ１の場合チオエーテルクロスリンカーＳＭＣＣであった。さらなるリンカーには、ＤＭ１についてはジスルフィドリンカーＳＰＰ又はチオエーテルクロスリンカーＳＭＣＣが、又はモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）又はモノメチルアウリスタンチンＦ（ＭＭＡＦ）については、ＭＣ又はＭＣ−バリン−シトルリン（ｖｃ）−ＰＡＢ又はマレイミド成分及びパラ−アミノベンジルカルバモイル（ＰＡＢ）自壊性成分を有する（バリン−シトルリン（ｖｃ））ジペプチドリンカー試薬）が含まれうる。使用した毒素はＤＭ１であった。更なる毒素にはＭＭＡＥ又はＭＭＡＦが含まれうる。
この実験のためのＣＤ７９ｂ抗体には、２００６年８月３日出願の米国特許出願第１１／４６２３３６号に記載のキメラＭＡ７９ｂ（ｃｈＭＡ７９ｂ）抗体、並びに本明細書に記載のＭＡ７９ｂを移植した「ヒト化」抗体変異体が含まれた。更なる抗体には、ＡＴＣＣにＨＢ１１４１３として１９９３年７月２０日に寄託されたハイブリドーマから生成されたＭＡ７９ｂモノクローナル抗体、及び抗ＣＤ７９ｂ抗体を含む、市販の抗体が含まれた。
Ｂ．異種移植片−更なるコンジュゲート
陰性コントロールには、抗ＨＥＲ２（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ））ベースのコンジュゲート（ＳＭＣＣ−ＤＭ１）が含まれていた。同様の研究において、実施例Ａ（上記）に開示されているものと同じ異種移植片試験プロトコールを用いて、薬物コンジュゲート及び投与用量を変化させ、追加の薬物コンジュゲートの有効性を、ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウス内のＢＪＡＢ−ルシフェラーゼ異種移植片（バーキットリンパ腫）において試験した。薬物コンジュゲート及び用量（すべてのＡＤＣ及びコントロールについて０日目に投与）を以下の表３に示す。
コントロール抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８（ＳＭＣＣ−ＤＭ１にコンジュゲート）であった。コントロールＨＣ（Ａ１１８Ｃ）チオＭＡｂは、チオｈｕ−抗ＨＥＲ２−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）抗体チオＭＡｂ（ＢＭＰＥＯ−ＤＭ１、ＭＣ−ＭＭＡＦ又はＭＣｖｃＰＡＢ−ＭＭＡＥにコンジュゲート）、チオｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）チオＭＡｂ又はチオｈｕ−抗ＣＤ２２（１０Ｆ４ｖ３）−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）チオＭＡｂ（ＭＣ−ＭＭＡＦにコンジュゲート）であった。結果を以下の表３に示す。
示されるチオｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）−ＢＭＰＥＯ−ＤＭ１、チオ−ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）−ＭＣ−ＭＭＡＦ及びチオｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）−ＭＣｖｃＰＡＢ−ＭＭＡＥ チオＭＡｂ薬物コンジュゲートの投与は、ネガティブコントロール抗体薬物コンジュゲート（チオ−ｈｕ−抗ＨＥＲ２−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）−ＢＭＰＥＯ−ＤＭ１、チオ−ｈｕ−抗ＨＥＲ２−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）−ＭＣ−ＭＭＡＦ及びチオ−ｈｕ−抗ＨＥＲ２−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）−ＭＣｖｃＰＡＢ−ＭＭＡＥ）と比較して、腫瘍増殖の阻害を示した。他のコントロールは、チオ−ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）、ｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８−ＳＭＣＣ−ＤＭ１及びチオ−ｈｕ−抗ＣＤ２２（１０Ｆ４ｖ３）−ＨＣ（Ａ１１８Ｃ）−ＭＣ−ＭＭＡＦであった。
更に、同じ試験において、最初の７日間のパーセント体重変化を、各投与量群において決定した。この結果、これらチオＭＡｂ薬物コンジュゲートの投与が、この期間中に有意な体重増又は体重減を引き起こさないことが示された。
更に表３では、試験したマウスの合計数のうち、ＰＲ＝部分的後退（投与後の任意の時点での腫瘍体積が、０日目に測定された腫瘍体積の５０％未満に減少）又はＣＲ＝完全寛解（投与後の任意の時点で腫瘍体積が０ｍｍ３に減少）を示した数が示されており、ＮＡ＝なしを示す。（ＤＡＲ＝薬物対抗体比）
実施例２−ＧＡ１０１とＣＤ７９ｂ抗体薬物コンジュゲートの組み合わせ
この実験パートは、ＣＤ７９ｂ抗体薬物コンジュゲート抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥと併用されるＧＡ１０１（本明細書に定義されるオビヌツズマブ）に関し、ここでこのＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体はｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である。このＣＤ７９ｂ抗体薬物コンジュゲートは、本明細書では「ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣ」と呼ばれる。本試験の主要な目的は、ＳＣＩＤベージュマウスに播種されたＺ１３８マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）異種移植モデルにおいて、ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣと併用されるＧＡ１０１の効果を、ＧＡ１０１を用いた単剤療法、リツキシマブを用いた単剤療法及びリツキシマブとＣＤ７９ｂ−ＡＤＣの併用と比較して調べることである。試験設計を表４に示す。
細胞培養及び細胞適用
Ｚ１３８ヒトマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）細胞は、最初にＭａｒｔｉｎ Ｄｙｅｒから得られ、増殖後Ｇｌｙｃａｒｔ社内部細胞バンクに寄託された。腫瘍細胞株を、常套的に、１０％ＦＣＳ（Ｇｉｂｃｏ）を含むＤＭＥＭ中において、５％ＣＯ２の水飽和雰囲気中３７℃で培養した。生存率９６．４％において、継代２６を移植に使用した。動物１当たり１０ｘ１０６個の細胞を、２００μｌのＡｉｍ Ｖ細胞培地（ＧＩＢＣＯ）において、尾静脈に静脈内注入した。ＣＤ２０及びＣＤ７９ｂの発現を、Ｚ１３８ ＭＣＬ細胞上においてＦＡＣＳにより確認した。この目的のために、０．２Ｍｉｏの細胞を、抗ヒトＣＤ２０ ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃５５５６２３）、抗ヒトＣＤ７９ｂ−ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃５５５６７９）又はアイソタイプコントロールのマウスＩｇＧ１（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃５５５７４９）又はマウスＩｇＧ２ｂ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ＃５５５７４３）を用いて３重に染色した。平均蛍光を、ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩ（Ｓｏｆｔｗａｒｅ ＦＡＣＳ Ｄｉｖａ）において、プレートプロトコールを用いて測定した。
動物
６２のＳＣＩＤベージュのメスのマウス；実験開始時に週齢７〜８（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｄｅｎｍａｒｋから購入）を、関連するガイドライン（ＧＶ−Ｓｏｌａｓ；Ｆｅｌａｓａ；ＴｉｅｒｓｃｈＧ）に従い、毎日、１２時間明所／１２時間暗所のサイクルで、特定の病原体のいない条件下で保持した。実験的な試験プロトコールは、地域の獣医（免許証番号Ｐ２００８０１６）により確認及び承認された。動物は到着後１週間、新しい環境への馴致及び観察のために保持された。継続的な健康モニタリングが定期的に実施された。
治療
治療は、細胞移植の２１日後に開始された。治療抗体及び対応するビヒクルを、試験の２１、２８及び３５日目に、３０ｍｇ／ｋｇの用量で、単剤として静脈内に与えた。ＣＤ７９ｂＡＤＣを、試験２１日目に４ｍｇ／ｋｇの用量で１回与えた。抗体希釈物を、使用前に在庫から新しく調製した。試験は３０９日目に終了した。
モニタ、終了基準及び解剖
動物は、臨床症状及び有害作用の検出について毎日検査した。動物の終了基準は目に見える病気、即ち：汚い毛皮、背中の湾曲、荒い呼吸、運動障害、ＨＬＰ（後肢麻痺）であった。マウスは、終了基準に従って屠殺した。腫瘍量をチェックするために、実験開始時に１のスカウトを採取した。マウスは、終了基準に従って屠殺した。
統計
生存データを、ペア毎のＷｉｌｃｏｘｏｎ及びペア毎のログランク検定により統計学的に分析した。
結果
ヒトマントル細胞リンパ腫細胞株Ｚ１３８を、マウスの尾静脈中に静脈内接種（細胞１０ｘ１０６個）した。マウスを、第１療法の前に無作為化し、治療を細胞移植後２１日目に開始した。抗体薬物コンジュゲートは、２１日目に４ｍｇ／ｋｇの用量で１回与えられ、ＧＡ１０１、リツキシマブ及び対応するビヒクルは、試験日２１、２８及び３５に３０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内に与えられた。コントロール群の動物にはＰＢＳを与えた。すべての動物を、臨床症状及び有害作用の検出について毎日検査し、設定された終了基準に従って屠殺した。試験終了は試験日３０９であった。生存データは生存曲線で表され（図１）、ペア毎のＷｉｌｃｏｘｏｎ及びペア毎のログランク検定によって統計学的に分析された（図２）。図２の＊でマークした値は、有意な差異を示す。異なる治療群の中央値及び全生存期間値を、表４及び表５に示す。実験が終了した３０９日目まで生存したすべての動物は、生検中見かけ上腫瘍を有していなかった。
全ての群は、ペア毎のログランク検定において、リツキシマブを除いてビヒクルと有意に異なっている。両組み合わせ、即ちＧＡ１０１＋抗ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣ、並びにリツキシマブ＋抗ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣは、対応する単剤療法と比較して、生存期間の有意な延長を示している。ＧＡ１０１＋ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣの組み合わせは、最大の生存期間中央値を示し、それに続いてリツキシマブ＋ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣ組み合わせの値が大きく、それぞれ腫瘍を有さない動物は２／１０又は３／１０であった。更に、リツキシマブ及びＧＡ１０１とＣＤ７９ｂ−ＡＤＣの組み合わせは、全生存期間の観点から、ＲＴＸ、ＧＡ１０１又は抗ＣＤ７９ｂ−ＡＤＣによる対応する単剤療法と比較して強い抗腫瘍活性を示す。

Claims (11)

  1. ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥと組み合わせてがんを治療するための医薬であって、オビヌツズマブを含み、該ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含むｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である、医薬。
  2. オビヌツズマブと組み合わせてがんを治療するための医薬であって、ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを含み、該ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含むｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である、医薬。
  3. 一又は複数の追加の他の細胞傷害性剤、化学療法剤若しくは抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物若しくは電離放射線と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１又は２に記載の医薬。
  4. 前記がんがＣＤ２０を発現するがんであることを特徴とする、請求項１から３の何れか一項に記載の医薬。
  5. 前記ＣＤ２０を発現するがんがリンパ腫又はリンパ性白血病であることを特徴とする、請求項４に記載の医薬。
  6. がんを治療するための組成物であって、オビヌツズマブとＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥとを含み、該ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含むｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である、組成物。
  7. 一又は複数の追加の他の細胞傷害性剤、化学療法剤若しくは抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物若しくは電離放射線と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
  8. ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート抗ＣＤ７９ｂ−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥを併用するがんの治療のための医薬の製造のための、オビヌツズマブの使用であって、該ＣＤ７９ｂ抗体−薬物コンジュゲート中の抗ＣＤ７９ｂ抗体が、配列番号６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン及び配列番号７０のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含むｈｕＭＡ７９ｂ．ｖ２８である、使用。
  9. 前記がんがＣＤ２０を発現するがんであることを特徴とする、請求項８に記載の使用。
  10. 前記ＣＤ２０を発現するがんがリンパ腫又はリンパ性白血病であることを特徴とする、請求項９に記載の使用。
  11. 前記医薬が、一又は複数の追加の他の細胞傷害性剤、化学療法剤若しくは抗がん剤、又はこのような薬剤の効果を増強する化合物若しくは電離放射線と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項８から１０のいずれか一項に記載の使用。
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