JP6279649B2 - 免疫学的検定試験のためのシステム - Google Patents
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Description
請求項及び明細書において使用される用語は、以下に示されたように定義されたものを除き、当業者により理解されるような通常の意味に従い解釈されるべきである。
本発明は、免疫学的検定試験のためのカートリッジに関する。前記カートリッジは、(a)プローブ及びキャップを具備するプローブ・ウェルであって、キャップはプローブを当該プローブ・ウェル内に囲繞する閉じ位置に在り、プローブは分析対象物結合分子により被覆された下部先端を有する、プローブ・ウェルと、(b)サンプルを受容するサンプル用ウェルと、(c)一つ以上の試薬用ウェルと、(d)各々が第1水溶液を収容する複数の洗浄用ウェルと、(e)光透過性底部を有すると共に第2水溶液を収容する測定用ウェルとを具備し、サンプル用ウェル、試薬用ウェル、測定用ウェル、及び洗浄用ウェルの夫々の開口がシールされる。
本発明はまた、ロッド状部分を有する少なくとも一本のプローブを装填し且つ解放する装置に関するものでもある。該装置は、溝ユニット及び押圧ピンを具備する。押圧ピンの形状は、円筒状、球状、立方状、又はその目的に対して当業者が適切と考え得る任意の形状であり得る。溝ユニットは、プローブのロッド状部分を垂直方向に保持するように形成された、垂直方向に沿う溝を有する。押圧ピンは、水平方向に沿って移動するように形成される。押圧ピンは、第1位置及び第2位置に在留することができる。押圧ピンが第1位置に在留するとき、該押圧ピンの先端は、プローブのロッド状部分を溝に押し付けることができる。押圧ピンが第2位置に在留するとき、押圧ピンの先端と溝との間の距離は、プローブのロッド状部分の直径よりも大きい。
実施例1:本発明のカートリッジを用いた免疫学的検定の実施
1mm直径及び2cm長の石英プローブが、製造者の手順に従って、化学蒸着プロセス(イールド・エンジニアリング・システムズ社[Yield Engineering Systems]、1224P)を用いて、アミノプロピルシランにより被覆された。プローブ先端は次に、pH7.4のPBS中にて10μg/mlとされたネズミ・モノクローナル抗フルオレセイン(バイオスパシフィック社[Biospacific])の溶液に浸漬された。抗体がプローブに吸着するのを20分に亙り許容した後、プローブ先端はPBS中で洗浄された。
ストレプトアビジンのCy5標識化は、特許文献3中に開示された手順に従い調製される。
抗BNP(ハイテスト社)が、標準的方法によりビオチン化された。1mLのリン酸緩衝生理食塩水中の1mgの抗BNPに対し、DMF中で5mg/mlである10μLのビオチン−LC−LC−NHS(ピアス・ケミカル社[Pierce Chemical])が加えられた。前記混合物は室温にて1時間に亙り反応させられ、PD10カラム(ジーイー・ヘルスケア社[GE Healthcare])上での精製が後に続いた。
カートリッジの形態:
測定用ウェル:80μLのPBS+0.05%のTween 20
洗浄用ウェル:80μLのPBS+0.05%のTween 20
再構成用ウェル:80μLのPBS+0.05%のTween 20
サンプル用ウェル:25μLのBNPサンプル+再構成用ウェルからの50μLの緩衝液
ビオチン試薬用ウェル:5μLのB−抗BNP(25μg/ml)+再構成用ウェルからの50μLの緩衝液
ストレプトアビジン試薬用ウェル:5μLのCy5−ストレプトアビジン−架橋フィコール(150μg/ml)+再構成用ウェルからの50μLの緩衝液
1.抗BNP被覆されたプローブがサンプル用ウェル内に浸漬され、BNPサンプル混合物が室温にて5分間に亙り定温放置された。
2.プローブが、ウェル毎に10秒の滞留時間で、3個の洗浄用ウェルに対して順次的に移送された。
3.プローブは、ビオチン試薬用ウェル内に室温にて2分間に亙り浸漬され、各々を10秒間として、3個の洗浄用ウェルを通す循環が後に続いた。
4.プローブは、ストレプトアビジン試薬用ウェル内に室温にて1分間に亙り浸漬され、各々を10秒間として、3個の洗浄用ウェルを通す循環が後に続いた。
5.プローブは測定用ウェル内に位置決めされた。
6.プローブの末端における蛍光が測定された。
以下に、本発明の様々な様態を記す。
[様態1]
本発明により、免疫学的検定試験のためのカートリッジであって、
プローブ及びキャップを具備するプローブ・ウェルであって、前記プローブは単体的な基体を有し、前記単体的な基体の下部先端が分析対象物結合分子により被覆されている、プローブ・ウェルと、
サンプルを受容するサンプル用ウェルと、
一つ以上の試薬用ウェルと、
各々が第1水溶液を収容する複数の洗浄用ウェルと、
光透過性底部を有すると共に、第2水溶液を収容する測定用ウェルと、を具備し、
前記サンプル用ウェル、試薬用ウェル、測定用ウェル、及び洗浄用ウェルの夫々の開口がシールされており、
前記キャップはヒンジを介して前記プローブ・ウェルに機械的に連結されていて、前記キャップが閉じ位置にあるとき、前記キャップは前記プローブ・ウェル内に前記プローブを囲繞するために前記プローブ・ウェル上に折り重ねられるが、前記キャップは前記サンプル用ウェル、前記洗浄用ウェル、又は前記測定用ウェルを覆わない、免疫学的検定試験のためのカートリッジが提供される。
[様態2]
様態1に記載のカートリッジを用いて免疫学的検定試験を行う方法であって、
(a)前記プローブ・ウェルの前記キャップを開き位置へ係止解除する段階と、
(b)押圧ピンと、溝を有する溝ユニットとを垂直方向に下降させる段階と、
(c)前記プローブを前記押圧ピンと前記溝との間に装填する段階と、
(d)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(e)前記溝及び前記押圧ピンを前記サンプル用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(f)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの下部先端を、分析対象物を有するサンプル溶液を具備する前記サンプル用ウェル内へ、前記サンプル用ウェルの内側面に接触させずに浸漬し、且つ、免疫複合体を形成するために、前記分析対象物と、前記プローブの前記下部先端上に被覆された分析対象物結合分子との間における反応を第1の時間間隔に亙り許容する段階と、
(g)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(h)前記溝及び前記押圧ピンを前記試薬用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(i)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの前記下部先端を前記試薬用ウェル内へ、前記試薬用ウェルの内側面に接触させずに浸漬し、且つ、前記免疫複合体と前記試薬との間における反応を第2の時間間隔に亙り許容する段階と、
(j)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(k)前記溝及び前記押圧ピンを洗浄用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(l)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの前記下部先端を前記洗浄用ウェル内へ、前記洗浄用ウェルの内側面に接触させずに浸漬し、且つ、前記プローブ上に非特異的に結合した物質を洗い流す段階と、
(m)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(n)前記溝及び前記押圧ピンを前記測定用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(o)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの前記下部先端を前記測定用ウェル内へ浸漬し、且つ、前記プローブの前記下部先端を前記測定用ウェルの内側面から所定距離に維持する段階と、
(p)前記光透過性底部を通して前記プローブの前記下部先端上の光学的信号を検出することにより、前記形成された免疫複合体を検出する段階と、を含む方法が本発明により提供される。
[様態3]
本発明では、様態2に記載の方法が、
(q)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(r)前記溝及び前記押圧ピンを前記プローブ・ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(s)前記プローブを前記プローブ・ウェル内へ配設するために前記溝及び前記押圧ピンを下降させる段階と、
(t)前記溝及び前記押圧ピンから前記プローブを解放する段階と、
(u)前記プローブを前記プローブ・ウェルもしくは廃材容器内へ配設する段階と、を更に含んでよい。
[様態4]
本発明により、
下部先端を有するロッド状中心セグメントと、
前記ロッドを囲繞するフランジと、
前記フランジの下方のスリーブと、を具備するプローブであって、
前記下部先端は分析対象物結合分子により被覆され、及び前記ロッド状中心セグメントは、前記フランジの頂部側から突出する部分を有する、プローブが提供される。
[様態5]
本発明では、様態4に記載のプローブが、前記スリーブ及び前記フランジは、前記ロッド状中心セグメントに掛止するプラスチック製ホルダと、前記プラスチック製ホルダを締着する締着リングとを具備してよい。
[様態6]
本発明により、
ロッド状部分を有する少なくとも一本のプローブを装填し且つ解放する装置であって、
前記プローブの前記ロッド状部分を垂直方向に沿って保持するように形成された、垂直方向に沿う溝を有する溝ユニットと、
水平方向に沿って移動するように形成されると共に、第1位置及び第2位置に在留できる押圧ピンと、を具備し、
前記押圧ピンが前記第1位置に在留するとき、前記押圧ピンの先端は、前記プローブの前記ロッド状部分を前記溝に押し付けることができ、及び、
前記押圧ピンが前記第2位置に在留するとき、前記押圧ピンの前記先端と前記溝との間の距離は、前記プローブの前記ロッド状部分の直径よりも大きい、装置が提供される。
[様態7]
本発明では、様態6に記載の装置が、前記押圧ピンを滑動チャネルに沿って、水平方向、及び前記水平方向の逆の方向に移動させる手段を更に具備してよい。
[様態8]
本発明では、様態6に記載の装置が、前記溝ユニット及び前記押圧ピンを共に第2水平方向に移動させる手段を更に具備してよい。
[様態9]
本発明では、様態6に記載の装置が、前記溝ユニット及び前記押圧ピンを共に、垂直方向、及び前記垂直方向とは逆の方向に移動させる手段を更に具備してよい。
301 プローブ・ウェル
302 保護キャップ
303 ヒンジ
311 サンプル用ウェル
312 ビオチン試薬用ウェル
313 ストレプトアビジン試薬用ウェル
322 再構成用ウェル
325 洗浄用ウェル
329 測定用ウェル
Claims (2)
- 免疫学的検定試験のためのカートリッジを用いて免疫学的検定試験を行う方法であって、
前記免疫学的検定試験のためのカートリッジは、
プローブ及びキャップを具備するプローブ・ウェルであって、前記プローブは単体的な基体を有し、前記単体的な基体の下部先端が分析対象物結合分子により被覆されている、プローブ・ウェルと、
サンプルを受容するサンプル用ウェルと、
一つ以上の試薬用ウェルと、
各々が第1水溶液を収容する複数の洗浄用ウェルと、
光透過性底部を有すると共に、第2水溶液を収容する測定用ウェルと、を具備し、
前記サンプル用ウェル、試薬用ウェル、測定用ウェル、及び洗浄用ウェルの夫々の開口がシールされており、
前記キャップはヒンジを介して前記プローブ・ウェルに機械的に連結されていて、前記キャップが閉じ位置にあるとき、前記キャップは前記プローブ・ウェル内に前記プローブを囲繞するために前記プローブ・ウェル上に折り重ねられるが、前記キャップは前記サンプル用ウェル、前記洗浄用ウェル、又は前記測定用ウェルを覆わない、免疫学的検定試験のためのカートリッジであり、
(a)前記プローブ・ウェルの前記キャップを開き位置へ係止解除する段階と、
(b)押圧ピンと、溝を有する溝ユニットとを垂直方向に下降させる段階と、
(c)前記プローブを前記押圧ピンと前記溝との間に装填する段階と、
(d)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(e)前記溝及び前記押圧ピンを前記サンプル用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(f)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの下部先端を、分析対象物を有するサンプル溶液を具備する前記サンプル用ウェル内へ、前記サンプル用ウェルの内側面に接触させずに浸漬し、且つ、免疫複合体を形成するために、前記分析対象物と、前記プローブの前記下部先端上に被覆された分析対象物結合分子との間における反応を第1の時間間隔に亙り許容する段階と、
(g)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(h)前記溝及び前記押圧ピンを前記試薬用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(i)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの前記下部先端を前記試薬用ウェル内へ、前記試薬用ウェルの内側面に接触させずに浸漬し、且つ、前記免疫複合体と前記試薬との間における反応を第2の時間間隔に亙り許容する段階と、
(j)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(k)前記溝及び前記押圧ピンを洗浄用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(l)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの前記下部先端を前記洗浄用ウェル内へ、前記洗浄用ウェルの内側面に接触させずに浸漬し、且つ、前記プローブ上に非特異的に結合した物質を洗い流す段階と、
(m)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(n)前記溝及び前記押圧ピンを前記測定用ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(o)前記溝及び前記押圧ピンを下降させて、前記プローブの前記下部先端を前記測定用ウェル内へ浸漬し、且つ、前記プローブの前記下部先端を前記測定用ウェルの内側面から所定距離に維持する段階と、
(p)前記光透過性底部を通して前記プローブの前記下部先端上の光学的信号を検出することにより、前記形成された免疫複合体を検出する段階と、を含む方法。 - (q)前記溝及び前記押圧ピンを上昇させる段階と、
(r)前記溝及び前記押圧ピンを前記プローブ・ウェル上の箇所へ水平面内で移動させる段階と、
(s)前記プローブを前記プローブ・ウェル内へ配設するために前記溝及び前記押圧ピンを下降させる段階と、
(t)前記溝及び前記押圧ピンから前記プローブを解放する段階と、
(u)前記プローブを前記プローブ・ウェルもしくは廃材容器内へ配設する段階と、を更に含む請求項1に記載の方法。
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