JP6245264B2 - タンパク質及びその製造方法、並びにタンパク質活性評価方法 - Google Patents
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Description
本実施形態に係るタンパク質の製造方法は、少なくとも検査工程を備えるものである。当該検査工程は、タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm−1付近に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンド(吸収バンドII)又は1600〜1700cm−1付近に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンド(吸収バンドI)を、1又は複数の正規分布に近似するステップと、当該正規分布に基づいて赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、指標値を予め設定された閾値と比較し、閾値よりも赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む。
(i)nが偶数のとき、An/2及びAn/2+1の少なくとも一方又は両方の面積の総和をA1〜An/2−1及びAn/2+2〜Anからなる群より選択される少なくとも一つの面積の総和で割った値を指標値とする。
(ii)nが奇数のとき、A(n+1)/2の面積をA1〜A(n+1)/2−1及びA(n−1)/2+2〜Anからなる群より選択される少なくとも一つの面積の総和で割った値を指標値とする。
本実施形態に係るタンパク質活性評価方法は、タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、吸収バンドI又は吸収バンドIIを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、当該正規分布に基づいて赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、当該指標値を予め設定された閾値と比較し、閾値よりも赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を活性のあるタンパク質と評価するステップと、を含む評価工程を備える。
本明細書において、固定化リパーゼとは、樹脂担体にリパーゼを吸着等により担持させたものをいう。
本実施形態に係る再生固定化リパーゼの製造方法は、リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼから、リパーゼ活性の一部又は全部が再生された再生固定化リパーゼを製造するものである。当該製造方法は、リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼの赤外吸収スペクトルにおいて、吸収バンドI又は吸収バンドIIを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、上記正規分布に基づいて上記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、上記指標値を予め設定された閾値と比較し、上記閾値よりも上記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さい上記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜するステップと、を含む選抜工程を備えるものである。
本実施形態に係る固定化リパーゼのリパーゼ活性評価方法は、固定化リパーゼの赤外吸収スペクトルにおいて、吸収バンドI又は吸収バンドIIを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、上記正規分布に基づいて上記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、上記指標値を予め設定された閾値と比較し、上記閾値よりも上記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さい固定化リパーゼを、リパーゼ活性のある固定化リパーゼと評価する、又はリパーゼ活性の一部若しくは全部を再生できる可能性のある固定化リパーゼと評価するステップと、を含む評価工程を備える。
本実施形態に係る化合物の製造方法は、上記固定化リパーゼの製造方法により得られた固定化リパーゼ、又は上記再生固定化リパーゼの製造方法により得られた再生固定化リパーゼを用いることを特徴とする。当該化合物は、リパーゼによる触媒反応を経て製造される化合物である。
本明細書において、固定化ペルオキシダーゼとは、シリカ担体にペルオキシダーゼを吸着等により担持させたものをいう。
本実施形態に係る固定化ペルオキシダーゼのペルオキシダーゼ活性評価方法は、固定化ペルオキシダーゼの赤外吸収スペクトルにおいて、吸収バンドI又は吸収バンドIIを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、上記正規分布に基づいて上記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、上記指標値を予め設定された閾値と比較し、上記閾値よりも上記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さい固定化ペルオキシダーゼを、ペルオキシダーゼ活性のある固定化ペルオキシダーゼと評価するステップと、を含む評価工程を備える。
本明細書において、抗体とは、IgG、IgM、IgA、IgD、IgEのいずれであってもよい。また、抗原結合能を保持した抗体のフラグメント(例えば、scFV、F(ab)、F(ab’)2等)であってもよい。抗体はまた、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、マウス抗体、ウサギ抗体、ニワトリ抗体であってもよい。
本実施形態に係る抗体活性評価方法は、抗体の赤外吸収スペクトルにおいて、吸収バンドI又は吸収バンドIIを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、上記正規分布に基づいて上記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、上記指標値を予め設定された閾値と比較し、上記閾値よりも上記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さい抗体を活性のある抗体と評価するステップと、を含む評価工程を備える。ここでいう抗体活性とは、例えば、抗体力価である。
<ヘキシルアクリレートの定量方法>
ヘキシルアクリレートは、ガスクロマトグラフィー(内部標準法)により定量した。ガスクロマトグラフィーによる測定条件は以下のとおりである。
・ガスクロマトグラフ装置(GC2014,株式会社島津製作所製)
・分析カラム:DB−5(30m×0.53mm ID 1.0μm,株式会社島津製作所製)
・カラム温度:60℃→2分間保持→10℃/分→200℃→2分間保持
・注入口温度:200℃
・検出口温度(FID):250℃
・キャリアーガス:ヘリウム
・線速度:29.4cm/秒
・スプリット比:1:50
・注入量:1.0μL
・保持時間
ヘキシルアクリレート:9.31分
テトラエチレングリコールジメチルエーテル(内部標準物質):15.6分
上記の方法で定量した生成ヘキシルアクリレートの量を用いて、下記式に従い、各多孔性樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼのエステル交換反応の比活性を算出した。
水分計(MOC63u,乾燥重量法,株式会社島津製作所製)を用いて、測定条件:標準乾燥自動停止モード(120℃:水分変化率0.05%)にて、試料約1.0gを用いて、2反復測定後平均値を算出した。
各固定化リパーゼのFT−IRスペクトルは、フーリエ変換赤外分光光度計(FTS7000e顕微UMA600;Agilent Technologies社製)を用いて測定した。
<吸収バンドI>
FT−IRスペクトルの1600〜1700cm−1付近に現れるリパーゼ由来の吸収バンドIから以下の手順により指標値1〜6を算出した。
各固定化リパーゼについて、得られたFT−IRスペクトルを表計算ソフト(Microsoft Excel;Microsoft社製)を用いて単一の正規分布で近似した。FT−IRスペクトルを単一の正規分布で近似する際、まず、1800及び1575cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行った。次いで、1720cm−1付近に出現する多孔性樹脂担体に由来する吸収バンドを、ガウス関数を用いて分離した。その後、1660cm−1付近に出現するリパーゼに由来する吸収バンドを、非線形最小二乗法によって単一の正規分布で近似し、指標値として半値幅を算出した。なお、非線形最小二乗法では、ピーク位置、半値幅及び強度を変数とした。
各固定化リパーゼについて、得られたFT−IRスペクトルを表計算ソフト(Microsoft Excel;Microsoft社製)を用いて波形分離し、吸収バンド面積比を求めた。FT−IRスペクトルを波形分離する際、まず、1800及び1575cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行った。次いで、1720cm−1付近に出現する多孔性樹脂担体に由来する吸収バンドを、ガウス関数を用いて分離し、その後、1660cm−1付近に出現するリパーゼに由来する吸収バンドの波形分離を行った。フィッティングに用いるガウス関数の初期値として、波数のバンド位置を1656cm−1(A1及びA2)の1点とし、また半値幅を47cm−1(A1)、82cm−1(A2)とした。非線形最小二乗法によって各吸収バンドを分離し、得られた各吸収バンドの面積を用いて、下記式に従い指標値2として吸収バンド面積比を算出した。
吸収バンド面積比(指標値2)=A1/A2
式中、A1及びA2は、各吸収バンドの面積である。
各固定化リパーゼについて、得られたFT−IRスペクトルを表計算ソフト(Microsoft Excel;Microsoft社製)を用いて波形分離し、吸収バンド面積比を求めた。FT−IRスペクトルを波形分離する際、まず、1800及び1575cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行った。次いで、1720cm−1付近に出現する多孔性樹脂担体に由来する吸収バンドを、ガウス関数を用いて分離し、その後、1660cm−1付近に出現するリパーゼに由来する吸収バンドの波形分離を行った。フィッティングに用いるガウス関数の初期値として、波数のバンド位置を1680cm−1(A1)、1656cm−1(A2)、1631cm−1(A3)の3点とし、またそれぞれの半値幅を50cm−1とした。非線形最小二乗法によって各吸収バンドを分離し、得られた各吸収バンドの面積を用いて、下記式に従い指標値3として吸収バンド面積比を算出した。
吸収バンド面積比(指標値3)=A2/(A1+A3)
式中、A1、A2及びA3は、各吸収バンドの面積である。
各固定化リパーゼについて、得られたFT−IRスペクトルを表計算ソフト(Microsoft Excel;Microsoft社製)を用いて波形分離し、吸収バンド面積比を求めた。FT−IRスペクトルを波形分離する際、まず、1800及び1575cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行った。次いで、1720cm−1付近に出現する多孔性樹脂担体に由来する吸収バンドを、ガウス関数を用いて分離し、その後、1660cm−1付近に出現するリパーゼに由来する吸収バンドの波形分離を行った。フィッティングに用いるガウス関数の初期値として、波数のバンド位置を1685cm−1(A1)、1670cm−1(A2)、1656cm−1(A3)、1641cm−1(A4)及び1626cm−1(A5)の5点とし、またそれぞれの半値幅を30cm−1とした。非線形最小二乗法によって各吸収バンドを分離し、得られた各吸収バンドの面積を用いて、下記式に従い指標値4として吸収バンド面積比を算出した。
吸収バンド面積比(指標値4)=A3/(A1+A2+A4+A5)
式中、A1、A2、A3、A4及びA5は、各吸収バンドの面積である。
各固定化リパーゼについて、得られたFT−IRスペクトルを表計算ソフト(Microsoft Excel;Microsoft社製)を用いて波形分離し、吸収バンド面積比を求めた。FT−IRスペクトルを波形分離する際、まず、1800及び1575cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行った。次いで、1720cm−1付近に出現する多孔性樹脂担体に由来する吸収バンドを、ガウス関数を用いて分離し、その後、1660cm−1付近に出現するリパーゼに由来する吸収バンドの波形分離を行った。フィッティングに用いるガウス関数の初期値として、波数のバンド位置を1692cm−1(A1)、1682cm−1(A2)、1670cm−1(A3)、1658cm−1(A4)、1648cm−1(A5)、1638cm−1(A6)、1629cm−1(A7)及び1619cm−1(A8)の8点とし、またそれぞれの半値幅を19cm−1とした。非線形最小二乗法によって各吸収バンドを分離し、得られた各吸収バンドの面積を用いて、下記式に従い指標値5及び指標値6として吸収バンド面積比を算出した。
吸収バンド面積比(指標値5)=(A4+A5)/(A1+A2+A3+A6+A7+A8)
式中、A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7及びA8は、各吸収バンドの面積である。
吸収バンド面積比(指標値6)=(A4+A5)/(A2+A3+A8)
式中、A2、A3、A4、A5及びA8は、各吸収バンドの面積である。
FT−IRスペクトルの1500〜1600cm−1付近に現れるリパーゼ由来の吸収バンドIIから以下の手順により指標値7〜8を算出した。
各固定化リパーゼについて、得られたFT−IRスペクトルを表計算ソフト(Microsoft Excel;Microsoft社製)を用いて単一の正規分布で近似した。FT−IRスペクトルを単一の正規分布で近似する際、まず、1800及び1575cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行った。次いで、1400〜1500cm−1付近に出現する多孔性樹脂担体に由来する吸収バンドを、ガウス関数を用いて分離した。その後、1500〜1570cm−1付近に出現するリパーゼに由来する吸収バンドを、非線形最小二乗法によって単一の正規分布で近似し、指標値として半値幅を算出した。なお、非線形最小二乗法では、ピーク位置、半値幅及び強度を変数とした。
各固定化リパーゼについて、得られたFT−IRスペクトルを表計算ソフト(Microsoft Excel;Microsoft社製)を用いて波形分離し、吸収バンド面積比を求めた。FT−IRスペクトルを波形分離する際、まず、1800及び1575cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行った。次いで、1400〜1500cm−1付近に出現する多孔性樹脂担体に由来する吸収バンドを、ガウス関数を用いて分離し、その後、1500〜1570cm−1付近に出現するリパーゼに由来する吸収バンドの波形分離を行った。フィッティングに用いるガウス関数の初期値として、波数のバンド位置を1570cm−1(B1)、1545cm−1(B2)、1518cm−1(B3)の3点とし、またそれぞれの半値幅を31cm−1とした。非線形最小二乗法によって各吸収バンドを分離し、得られた各吸収バンドの面積を用いて、下記式に従い指標値8として吸収バンド面積比を算出した。
吸収バンド面積比(指標値8)=B2/(B1+B3)
式中、B1、B2及びB3は、各吸収バンドの面積である。
リパーゼPS「アマノ」SDH(アマノエンザイム社製)150gに100mMリン酸緩衝液(pH7.0)0.6Lと純水を加え溶解後、3Lに定容し、固定化液を調製した。そこに多孔性樹脂担体(LEWATIT VPOC 1600、LANXESS社製)600gを加え、6℃にて12時間攪拌した。その後、デカンテーションにて担体を回収し、純水で洗浄後、減圧乾燥し、固定化リパーゼ(リパーゼ固定化量3.4wt%)352gを得た。この固定化リパーゼを「固定化リパーゼPS」又は「3.4wt% Amano PS/Lewatit」と呼ぶ。
攪拌装置及び温度調節装置を備えた内容積20mLのガラス製試験管に、1−ヘキサノール0.2g(2.0mmol)、アクリル酸メチル1.6g(18.6mmol)、テトラエチレングリコールジメチルエーテル0.04g(0.2mmol)、及び触媒として、含水率が7.1%の固定化リパーゼPSを加えて、撹拌しながら40℃で反応させた。1時間後、反応液を取り出し、上述の方法によりエステル交換反応の比活性を算出した。エステル交換反応の比活性は259.3mmol・h−1・g−1だった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は54.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は、1.75であった。
触媒として、含水率が1.0%の固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は16.5mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は54.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.73であった。
触媒として、25℃のメタノールに2時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を71.0%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は89.8mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は61.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.46であった。
触媒として、25℃のトルエンに2時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を50.0%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は216.1mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は54.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.68であった。
触媒として、25℃のアセトンに2時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を52.4%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は169.7mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は61.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.44であった。
触媒として、25℃のアセトニトリルに2時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を58.6%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は127.4mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は63.5cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.33であった。
触媒として、25℃の1−ブタノールに2時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を65.5%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は79.7mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は65.8cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.38であった。
触媒として、25℃のエタノールに2時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を60.2%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は87.0mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は65.8cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.24であった。
触媒として、大気中230℃で1時間保持し、その後精製水で洗浄して含水率を40.0%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。生成物であるヘキシルアクリレートは観測されなかった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は70.5cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.95であった。
触媒として、固定床流通式エステル交換反応に3ヶ月使用し、トルエンで洗浄した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は13.6mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は61.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.28であった。
触媒として、実施例12と同じ固定床流通式エステル交換反応に3ヶ月使用し、トルエンで洗浄した後、含水率5%のアセトンに6℃で一晩浸し、含水率を46.1%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は88.2mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は61.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.33であった。
触媒として、25℃の酢酸水溶液(pH2)に2時間浸した後、精製水で洗浄して含水率を25.0%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は209.6mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は56.4cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.55であった。
触媒として、25℃の塩酸水溶液(pH4)に16時間浸した後、精製水で洗浄して含水率を12.0%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は220.5mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は61.1cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.51であった。
触媒として、70℃の塩酸水溶液(pH4)に16時間浸した後、精製水で洗浄して含水率を33.0%に調整した固定化リパーゼPSを使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は56.1mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は65.8cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.21であった。
触媒として、含水率が1.0%のNovozym(登録商標)435(novozymes社製)を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は346.4mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.6cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0.72であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は1.87であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.49であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.70であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.42であり、指標値7(吸収バンドII、半値幅)は37.6cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は1.75であった。なお、Novozym(登録商標)435は、多孔性樹脂担体にリパーゼCalBを固定化した固定化リパーゼである。
触媒として、25℃のメタノールに3時間浸した後、真空乾燥により含水率を1.0%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は98.6mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は70.5cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0.26であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.88であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.31であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.58であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.06であり、指標値7(吸収バンドII、半値幅)は44.7cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は1.13であった。
触媒として、25℃のトルエンに3時間浸した後、真空乾燥により含水率を1.0%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は392.6mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は56.4cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0.92であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は2.10であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.50であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.69であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.48であった。
触媒として、25℃のアセトンに3時間浸した後、真空乾燥により含水率を1.0%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は384.4mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は56.4cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は1.05であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は2.50であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.53であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.73であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.58であった。
触媒として、25℃のアセトニトリルに3時間浸した後、真空乾燥により含水率を1.0%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は375.9mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は56.4cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0.88であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は2.20であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.48であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.74であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.55であった。
触媒として、大気中230℃で1時間保持し、含水率を0.1%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。生成物であるヘキシルアクリレートは観測されなかった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は82.3cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.47であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.25であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.45であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.85であり、指標値7(吸収バンドII、半値幅)は47.0cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.58であった。
触媒として、25℃の酢酸水溶液(pH=2)に2時間浸した後、真空乾燥により含水率を9.0%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は224.2mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は58.8cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0.59であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は1.63であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.45であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.66であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.39であった。
触媒として、25℃の塩酸水溶液(pH=4)に16時間浸した後、真空乾燥により含水率を3.0%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は351.6mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は58.8cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0.55であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は1.97であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.50であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は070であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.42であった。
触媒として、70℃の塩酸水溶液(pH=4)に16時間浸した後、真空乾燥により含水率を5.0%に調整したNovozym(登録商標)435を使用したこと以外は、試験例3と同様に反応を行った。エステル交換反応の比活性は187.8mmol・h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は61.1cm−1であり、指標値2(吸収バンドI、吸収バンド面積比−2つの正規分布)は0.49であり、指標値3(吸収バンドI、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は1.38であり、指標値4(吸収バンドI、吸収バンド面積比−5つの正規分布)は0.37であり、指標値5(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.63であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.31であり、指標値7(吸収バンドII、半値幅)は40.0cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は1.67であった。
<o−フェニレンジアミンの酸化物の定量方法>
o−フェニレンジアミンの酸化物は、紫外可視分光光度計でUV−visスペクトルを測定することにより定量した。紫外可視分光光度計による測定条件は以下のとおりである。
・紫外可視分光光度計(UV2450、株式会社島津製作所製)
・ピーク波長:420nm
上記の方法で測定したo−フェニレンジアミンの酸化物に由来するUV−visスペクトルのピーク強度(420nmにおける吸収強度)を用いて、下記式に従い、固定化ペルオキシダーゼの酸化反応の比活性を算出した。なお、オキシダーゼ重量は、BCA法によりBSA基準にて求めたペルオキシダーゼの重量である。
固定化リパーゼの場合と同様の方法で含水率を測定した。
1800及び1545cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行ったこと以外は、試験例1と同様にして指標値を算出した。
33.2gのPluronic P−123に、20%%HCl水溶液及び精製水をそれぞれ400g及び200gずつ加え、次いで、メシチレンを23.5g加えた。その後、40℃に加熱したウォーターバスに浸し、Pluronic P−123を十分に溶解させた。その後、テトラエトキシシランを70.0g加え、5分間撹拌した後、30℃で20時間静置させた。得られた白色スラリーに、フッ化アンモニウム水溶液(0.38g/40g−H2O)を加え、100℃で24時間熟成させた。その後、500mLの精製水−エタノール混合液で洗浄、濾過した後、100℃のオーブンで一晩乾燥させた。得られた白色粉体を大気雰囲気下、500℃まで5時間かけて昇温し、そのままの温度で5時間保持した。得られた白色粉末(Siliceous Mesocellular Foams,MCFs)を、「シリカ担体」又は「MCFs」と呼ぶ。窒素吸脱着測定によって求めたシリカ担体の比表面積及び平均細孔径は、それぞれ597m2・g−1及び24.4nmだった。
攪拌装置及び温度調節装置を備えた内容積20mLのガラス製試験管に、0.1M o−フェニレンジアミンのトルエン溶液2.5mL、1.1M t−ブチルヒドロペルオキシドのデカン溶液0.6mL、及び触媒として、含水率が34.9%の固定化ペルオキシダーゼを加えて、攪拌しながら35℃で反応させた。1時間後、反応液を取り出し、上述の方法により酸化反応の比活性を算出した。酸化反応の比活性は、3899.9h−1・g−1だった。また、上述の方法により求めた指標値7(吸収バンドII、半値幅)は65.7cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.70であった。
触媒として、25℃のメタノールに3時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を22.7%に調整した固定化ペルオキシダーゼを使用したこと以外は、試験例28と同様に反応を行った。酸化反応の比活性は1016.0h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値7(吸収バンドII、半値幅)は75.1cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.40であった。
触媒として、110℃のトルエンに3時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を28.5%に調整した固定化ペルオキシダーゼを使用したこと以外は、試験例28と同様に反応を行った。酸化反応の比活性は2841.5h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値7(吸収バンドII、半値幅)は71.1cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.62であった。
触媒として、60℃のHCl水溶液(pH3.5)に3時間浸し、その後精製水で洗浄して含水率を25.3%に調整した固定化ペルオキシダーゼを使用したこと以外は、試験例28と同様に反応を行った。酸化反応の比活性は2374.8h−1・g−1であった。また、上述の方法により求めた指標値7(吸収バンドII、半値幅)は70.5cm−1であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.58であった。
<抗体の力価測定方法>
抗体(IgG)の力価は、直接吸着法ELISA(Enzyme−Linked Immunosorbent Assay)により測定した。
1720及び1490cm−1の赤外吸収強度が0になるようにベースライン補正を行ったこと以外は、試験例1と同様にして指標値を算出した。
抗ニワトリIgGウサギ抗体(Rockland inc製)溶液(10.0mg/mL)0.5mLにポリエチレングリコール(PEG:平均分子量20,000)45mgを加え、10mMリン酸緩衝液(pH7.0)5mLに溶解し、抗体溶液とした。抗体溶液0.5mLを試験管に分取し、直ちに−20℃で凍結乾燥させた。凍結乾燥後の抗体を力価測定、及び顕微ATR法によるFT−IRスペクトル測定に用いた。抗体の力価を測定した結果を表3及び図23に示す(図23中、試験例33は、「−20℃」のプロットに対応する)。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.0cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.09であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.97であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、4℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3及び図23に示す(図23中、試験例34は、「4℃」のプロットに対応する)。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.6cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.03であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.92であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、25℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3及び図23に示す(図23中、試験例35は、「25℃」のプロットに対応する)。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.7cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.00であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.94であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、50℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3及び図23に示す(図23中、試験例36は、「50℃」のプロットに対応する)。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は58.4cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.02であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.93であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、75℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3及び図23に示す(図23中、試験例37は、「75℃」のプロットに対応する)。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は66.0cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.96であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.80であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、90℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3及び図23に示す(図23中、試験例38は、「90℃」のプロットに対応する)。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は70.6cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.92であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.79であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、10%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3に示す。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は56.9cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は0.98であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.95であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、20%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3に示す。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は56.7cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.01であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.97であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、40%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3に示す。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.0cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.00であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.96であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、50%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例33と同様に測定を行った。抗体の力価を測定した結果を表3に示す。また、上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.8cm−1であり、指標値6(吸収バンドI、吸収バンド面積比−8つの正規分布)は1.00であり、指標値8(吸収バンドII、吸収バンド面積比−3つの正規分布)は0.93であった。
抗ニワトリ卵白リゾチーム抗体(Anti White Lysozyme、コスモバイオ株式会社製)溶液(10.0mg/mL)0.5mLにポリエチレングリコール(PEG:平均分子量20,000)45mgを加え、10mMリン酸緩衝液(pH7.0)5mLに溶解し、抗体溶液とした。抗体溶液0.5mLを試験管に分取し、直ちに−20℃で凍結乾燥させた。凍結乾燥後の抗体を顕微ATR法によるFT−IRスペクトル測定に用いた。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.1cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、4℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は57.4cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、25℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は58.6cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、50℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は62.5cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、75℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は72.5cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、90℃で24時間静置してから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は94.0cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、10%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は58.4cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、20%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は59.0cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、40%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は59.9cm−1であった。
抗体溶液0.5mLを試験管に分取した後、50%v/vとなるようアセトンを加え、25℃で24時間静置し、10分間窒素パージしてアセトンを揮散させてから−20℃で凍結乾燥させたこと以外は試験例43と同様に測定を行った。上述の方法により求めた指標値1(吸収バンドI、半値幅)は62.0cm−1であった。
Claims (29)
- タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドを単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅である、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドを複数の正規分布に波形分離し、前記赤外吸収バンドのピークトップ位置付近の1又は複数の正規分布の面積の総和を、前記赤外吸収バンドの端付近の1又は複数の正規分布の面積の総和で割った値である、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドを、いずれも前記赤外吸収バンドのピークトップ位置付近に頂点を有し、かつ、互いに異なる半値幅を有する2つの正規分布に波形分離し、前記2つの正規分布のうち半値幅が小さい方の正規分布の面積を、半値幅が大きい方の正規分布の面積で割った値である、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドをA1〜Anのn個(nは3以上の整数)の正規分布に波形分離し、
前記nが偶数のとき、An/2及びAn/2+1の少なくとも一方又は両方の面積の総和をA1〜An/2−1及びAn/2+2〜Anからなる群より選択される少なくとも一つの面積の総和で割った値であり、
前記nが奇数のとき、A(n+1)/2の面積をA1〜A(n+1)/2−1及びA(n−1)/2+2〜Anからなる群より選択される少なくとも一つの面積の総和で割った値である、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅であり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が70cm−1以下となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A1及びA2の2つの正規分布に波形分離し、A1の面積をA2の面積で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記2つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A1(ピーク位置1656cm−1、半値幅47cm−1)、A2(ピーク位置1656cm−1、半値幅82cm−1)の2つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.27以上となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A1、A2及びA3の3つの正規分布に波形分離し、A2の面積をA1及びA3の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記3つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A1(ピーク位置1680cm−1、半値幅50cm−1)、A2(ピーク位置1656cm−1、半値幅50cm−1)及びA3(ピーク位置1631cm−1、半値幅50cm−1)の3つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.9以上となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A1、A2、A3、A4及びA5の5つの正規分布に波形分離し、A3の面積をA1、A2、A4及びA5の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記5つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A1(ピーク位置1685cm−1、半値幅30cm−1)、A2(ピーク位置1670cm−1、半値幅30cm−1)、A3(ピーク位置1656cm−1、半値幅30cm−1)、A4(ピーク位置1641cm−1、半値幅30cm−1)及びA5(ピーク位置1626cm−1、半値幅30cm−1)の5つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.35以上となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7及びA8の8つの正規分布に波形分離し、A4及びA5の面積の総和をA1、A2、A3、A6、A7及びA8の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記8つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A1(ピーク位置1692cm−1、半値幅19cm−1)、A2(ピーク位置1682cm−1、半値幅19cm−1)、A3(ピーク位置1670cm−1、半値幅19cm−1)、A4(ピーク位置1658cm−1、半値幅19cm−1)、A5(ピーク位置1648cm−1、半値幅19cm−1)、A6(ピーク位置1638cm−1、半値幅19cm−1)、A7(ピーク位置1629cm−1、半値幅19cm−1)及びA8(ピーク位置1619cm−1、半値幅19cm−1)の8つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.6以上となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7及びA8の8つの正規分布に波形分離し、A4及びA5の面積の総和をA2、A3及びA8の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記8つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A1(ピーク位置1692cm−1、半値幅19cm−1)、A2(ピーク位置1682cm−1、半値幅19cm−1)、A3(ピーク位置1670cm−1、半値幅19cm−1)、A4(ピーク位置1658cm−1、半値幅19cm−1)、A5(ピーク位置1648cm−1、半値幅19cm−1)、A6(ピーク位置1638cm−1、半値幅19cm−1)、A7(ピーク位置1629cm−1、半値幅19cm−1)及びA8(ピーク位置1619cm−1、半値幅19cm−1)の8つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が1.2以上となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1500〜1600cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅であり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が44cm−1以下となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼであり、
前記指標値が、1500〜1600cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、B1、B2及びB3の3つの正規分布に波形分離し、B2の面積をB1及びB3の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記3つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、B1(ピーク位置1570cm−1、半値幅31cm−1)、B2(ピーク位置1545cm−1、半値幅31cm−1)及びB3(ピーク位置1518cm−1、半値幅31cm−1)の3つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が1.2以上となる固定化リパーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - 前記固定化リパーゼが、エステル交換活性又はエステル加水分解活性を有する、請求項5〜12のいずれか一項に記載の製造方法。
- 前記リパーゼが、バルクホルデリア・セパシア(Burkholderia cepacia)又はカンジダ・アンタークティカ(Candida antarctica)由来のリパーゼである、請求項5〜13のいずれか一項に記載の製造方法。
- タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、シリカ担体にペルオキシダーゼが固定化されてなる固定化ペルオキシダーゼである、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、シリカ担体にペルオキシダーゼが固定化されてなる固定化ペルオキシダーゼであり、
前記指標値が、1500〜1600cm−1に現れるペルオキシダーゼ由来の赤外吸収バンドを、単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅であり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が75cm−1以下となる固定化ペルオキシダーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、シリカ担体にペルオキシダーゼが固定化されてなる固定化ペルオキシダーゼであり、
前記指標値が、1500〜1600cm−1に現れるペルオキシダーゼ由来の赤外吸収バンドを、B1、B2及びB3の3つの正規分布に波形分離し、B2の面積をB1及びB3の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記ペルオキシダーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記3つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、B1(ピーク位置1570cm−1、半値幅31cm−1)、B2(ピーク位置1545cm−1、半値幅31cm−1)及びB3(ピーク位置1518cm−1、半値幅31cm−1)の3つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.45以上となる固定化ペルオキシダーゼを良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、抗体であり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れる抗体由来の赤外吸収バンドを、単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅であり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が65cm−1以下となる抗体を良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、抗体であり、
前記指標値が、1600〜1700cm−1に現れる抗体由来の赤外吸収バンドを、A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7及びA8の8つの正規分布に波形分離し、A4及びA5の面積の総和をA2、A3及びA8の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記抗体由来の赤外吸収バンドの面積と、前記8つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A1(ピーク位置1692cm−1、半値幅19cm−1)、A2(ピーク位置1682cm−1、半値幅19cm−1)、A3(ピーク位置1670cm−1、半値幅19cm−1)、A4(ピーク位置1658cm−1、半値幅19cm−1)、A5(ピーク位置1648cm−1、半値幅19cm−1)、A6(ピーク位置1638cm−1、半値幅19cm−1)、A7(ピーク位置1629cm−1、半値幅19cm−1)及びA8(ピーク位置1619cm−1、半値幅19cm−1)の8つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.98以上となる抗体を良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を良品として選抜するステップと、を含む検査工程を備え、
前記タンパク質が、抗体であり、
前記指標値が、1500〜1600cm−1に現れる抗体由来の赤外吸収バンドを、B1、B2及びB3の3つの正規分布に波形分離し、B2の面積をB1及びB3の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記抗体由来の赤外吸収バンドの面積と、前記3つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、B1(ピーク位置1570cm−1、半値幅31cm−1)、B2(ピーク位置1545cm−1、半値幅31cm−1)及びB3(ピーク位置1518cm−1、半値幅31cm−1)の3つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.85以上となる抗体を良品として選抜する、タンパク質の製造方法。 - 前記赤外吸収スペクトルが、減衰全反射法により測定されたものである、請求項1〜20のいずれか一項に記載の製造方法。
- リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼから、リパーゼ活性の一部又は全部が再生された再生固定化リパーゼを製造する製造方法であって、
固定化リパーゼは、樹脂担体にリパーゼが固定化されたものであり、
前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼの赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm−1又は1600〜1700cm−1に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さい前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜するステップと、を含む選抜工程を備え、
前記指標値が、1600〜1700cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅であり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が70cm −1 以下となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、
前記指標値が、1600〜1700cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A 1 及びA 2 の2つの正規分布に波形分離し、A 1 の面積をA 2 の面積で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記2つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A 1 (ピーク位置1656cm −1 、半値幅47cm −1 )、A 2 (ピーク位置1656cm −1 、半値幅82cm −1 )の2つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.27以上となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、
前記指標値が、1600〜1700cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A 1 、A 2 及びA 3 の3つの正規分布に波形分離し、A 2 の面積をA 1 及びA 3 の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記3つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A 1 (ピーク位置1680cm −1 、半値幅50cm −1 )、A 2 (ピーク位置1656cm −1 、半値幅50cm −1 )及びA 3 (ピーク位置1631cm −1 、半値幅50cm −1 )の3つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.9以上となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、
前記指標値が、1600〜1700cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A 1 、A 2 、A 3 、A 4 及びA 5 の5つの正規分布に波形分離し、A 3 の面積をA 1 、A 2 、A 4 及びA 5 の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記5つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A 1 (ピーク位置1685cm −1 、半値幅30cm −1 )、A 2 (ピーク位置1670cm −1 、半値幅30cm −1 )、A 3 (ピーク位置1656cm −1 、半値幅30cm −1 )、A 4 (ピーク位置1641cm −1 、半値幅30cm −1 )及びA 5 (ピーク位置1626cm −1 、半値幅30cm −1 )の5つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.35以上となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、
前記指標値が、1600〜1700cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A 1 、A 2 、A 3 、A 4 、A 5 、A 6 、A 7 及びA 8 の8つの正規分布に波形分離し、A 4 及びA 5 の面積の総和をA 1 、A 2 、A 3 、A 6 、A 7 及びA 8 の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記8つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A 1 (ピーク位置1692cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 2 (ピーク位置1682cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 3 (ピーク位置1670cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 4 (ピーク位置1658cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 5 (ピーク位置1648cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 6 (ピーク位置1638cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 7 (ピーク位置1629cm −1 、半値幅19cm −1 )及びA 8 (ピーク位置1619cm −1 、半値幅19cm −1 )の8つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が0.6以上となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、
前記指標値が、1600〜1700cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、A 1 、A 2 、A 3 、A 4 、A 5 、A 6 、A 7 及びA 8 の8つの正規分布に波形分離し、A 4 及びA 5 の面積の総和をA 2 、A 3 及びA 8 の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記8つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、A 1 (ピーク位置1692cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 2 (ピーク位置1682cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 3 (ピーク位置1670cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 4 (ピーク位置1658cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 5 (ピーク位置1648cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 6 (ピーク位置1638cm −1 、半値幅19cm −1 )、A 7 (ピーク位置1629cm −1 、半値幅19cm −1 )及びA 8 (ピーク位置1619cm −1 、半値幅19cm −1 )の8つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が1.2以上となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、
前記指標値が、1500〜1600cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅であり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が44cm −1 以下となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、又は
前記指標値が、1500〜1600cm −1 に現れるリパーゼ由来の赤外吸収バンドを、B 1 、B 2 及びB 3 の3つの正規分布に波形分離し、B 2 の面積をB 1 及びB 3 の面積の総和で割った値であり、
前記波形分離は、前記リパーゼ由来の赤外吸収バンドの面積と、前記3つの正規分布の面積の総和との差の絶対値が最小となるように、B 1 (ピーク位置1570cm −1 、半値幅31cm −1 )、B 2 (ピーク位置1545cm −1 、半値幅31cm −1 )及びB 3 (ピーク位置1518cm −1 、半値幅31cm −1 )の3つの正規分布に波形分離するものであり、
前記選抜するステップにおいて、前記指標値が1.2以上となる前記リパーゼ活性が減少した固定化リパーゼをリパーゼ活性が再生する可能性のあるものとして選抜する、再生固定化リパーゼの製造方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を活性のあるタンパク質と評価するステップと、を含む評価工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドを単一の正規分布で近似したときの当該正規分布の半値幅である、タンパク質活性評価方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を活性のあるタンパク質と評価するステップと、を含む評価工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドを複数の正規分布に波形分離し、前記赤外吸収バンドのピークトップ位置付近の1又は複数の正規分布の面積の総和を、前記赤外吸収バンドの端付近の1又は複数の正規分布の面積の総和で割った値である、タンパク質活性評価方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を活性のあるタンパク質と評価するステップと、を含む評価工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドを、いずれも前記赤外吸収バンドのピークトップ位置付近に頂点を有し、かつ、互いに異なる半値幅を有する2つの正規分布に波形分離し、前記2つの正規分布のうち半値幅が小さい方の正規分布の面積を、半値幅が大きい方の正規分布の面積で割った値である、タンパク質活性評価方法。 - タンパク質の赤外吸収スペクトルにおいて、1500〜1600cm −1 又は1600〜1700cm −1 に現れるタンパク質由来の赤外吸収バンドを、1又は複数の正規分布に近似するステップと、
前記正規分布に基づいて前記赤外吸収バンドの広がりの度合いを示す指標値を算出するステップと、
前記指標値を予め設定された閾値と比較し、前記閾値よりも前記赤外吸収バンドの広がりの度合いが小さいタンパク質を活性のあるタンパク質と評価するステップと、を含む評価工程を備え、
前記指標値が、前記赤外吸収バンドをA1〜Anのn個(nは3以上の整数)の正規分布に波形分離し、
前記nが偶数のとき、An/2及びAn/2+1の少なくとも一方又は両方の面積の総和をA1〜An/2−1及びAn/2+2〜Anからなる群より選択される少なくとも一つの面積の総和で割った値であり、
前記nが奇数のとき、A(n+1)/2の面積をA1〜A(n+1)/2−1及びA(n−1)/2+2〜Anからなる群より選択される少なくとも一つの面積の総和で割った値である、タンパク質活性評価方法。 - 前記タンパク質が、樹脂担体にリパーゼが固定化されてなる固定化リパーゼである、請求項23〜26のいずれか一項に記載のタンパク質活性評価方法。
- 前記タンパク質が、シリカ担体にペルオキシダーゼが固定化されてなる固定化ペルオキシダーゼである、請求項23〜26のいずれか一項に記載のタンパク質活性評価方法。
- 前記タンパク質が、抗体である、請求項23〜26のいずれか一項に記載のタンパク質活性評価方法。
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