JP6232547B2 - 聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療剤 - Google Patents
聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6232547B2 JP6232547B2 JP2014550136A JP2014550136A JP6232547B2 JP 6232547 B2 JP6232547 B2 JP 6232547B2 JP 2014550136 A JP2014550136 A JP 2014550136A JP 2014550136 A JP2014550136 A JP 2014550136A JP 6232547 B2 JP6232547 B2 JP 6232547B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ret
- mice
- test
- cerebellar ataxia
- cerebellar
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/4436—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
[1]ヘッジホッグシグナル伝達系賦活化剤を含む、聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療剤。
[2]ヘッジホッグシグナル伝達系賦活化剤がスムーズンド(Smoothened)アゴニストである、[1]に記載の予防・治療剤。
[3]スムーズンドアゴニストがSAG又はSAG1.1である、[2]に記載の予防・治療剤。
[4][1]〜[3]のいずれか一項に記載の予防・治療剤を含有する、聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療用組成物。
[5]医薬、医薬部外品又は食品である、[4]に記載の予防・治療用組成物。
[6][1]〜[3]のいずれか一項に記載の予防・治療剤又は[4]若しくは[5]に記載の予防・治療用組成物を、治療上有効量、対象に投与するステップを含む、聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療法。
[7]以下のステップ(1)〜(4)を含む、聴覚障害の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法:
(1)複数匹のホモRet-Y1062F-ノックインマウスを用意し、試験群と対照群に分けるステップ、
(2)試験群に被験物質を投与するステップ、
(3)ステップ(2)後の試験群について、80〜112dB、5〜60分間の騒音負荷前後に1 kHz〜40 kHzの聴力を測定し、騒音負荷による聴力低下レベルを決定するステップ、
(4)ステップ(3)で決定した聴力低下レベルと、被験物質を投与しないこと以外、試験群と同様の処置を施した対照群について決定した聴力低下レベルとを比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。
[8]以下のステップ(1)〜(4)を含む、小脳性運動失調症の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法:
(i)複数匹のホモRet-Y1062F-ノックインマウスを用意し、試験群と対照群に分けるステップ、
(ii)試験群に被験物質を投与するステップ、
(iii)ステップ(ii)後の試験群について、小脳性運動失調症の有無又は程度を検出するステップ、
(iv)ステップ(iii)での検出結果と、被験物質を投与しないこと以外、試験群と同様の処置を施した対照群についての検出結果を比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。
本発明は聴覚障害及び小脳性運動失調症に対して有効性を認めた化合物(ヘッジホッグシグナル伝達系賦活化剤)の用途に関し、第1の局面では当該化合物を含む、聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療剤が提供される。
本発明の第2の局面は本発明の予防・治療剤を含有する、聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療用組成物を提供する。本発明の組成物の形態は特に限定されないが、好ましくは医薬、医薬部外品又は食品である。尚、2種類以上の予防・治療剤を併用することにしてもよい。
本発明は、動物モデルを用いて聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療に有効な物質をスクリーニングする方法(in vivoスクリーニング法)も提供する。当該スクリーニング法では、RET機能障害マウス(ホモRet-Y1062F-ノックインマウス)を利用する。一態様では、以下のステップ(1)〜(4)を実施する。この態様のスクリーニング方法で選抜される物質には、特に聴覚障害の予防又は治療効果を期待できる。
(1)複数匹のホモRet-Y1062F-ノックインマウスを用意し、試験群と対照群に分けるステップ
(2)試験群に被験物質を投与するステップ
(3)ステップ(2)後の試験群について、80〜112dB、5〜60分間の騒音負荷前後に1 kHz〜40 kHzの聴力を測定し、騒音負荷による聴力低下レベルを決定するステップ
(4)ステップ(3)で決定した聴力低下レベルと、被験物質を投与しないこと以外、試験群と同様の処置を施した対照群について決定した聴力低下レベルとを比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ
(i)複数匹のホモRet-Y1062F-ノックインマウスを用意し、試験群と対照群に分けるステップ
(ii)試験群に被験物質を投与するステップ
(iii)ステップ(ii)後の試験群について、小脳性運動失調症の有無又は程度を検出するステップ
(iv)ステップ(iii)での検出結果と、被験物質を投与しないこと以外、試験群と同様の処置を施した対照群についての検出結果を比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ
(1)方法
Retタンパク質の1063番目チロシンがフェニルアラニンに置換されるように遺伝子操作し、両方のアレルのRet遺伝子に点変異が導入されたホモ型のノックインマウス(ホモRet-Y1062F-ノックインマウス)(非特許文献6)の小脳生理機能を解析した。具体的な方法は以下の通りである。小脳発達が完了する生後21日において、過去の論文の方法(非特許文献7)に従い、ローターロッド解析(回転速度;10もしくは25 rpm)を実施した。マウスをロッド上で歩行させ、ロッドから落下するまでの時間を最長2分間まで測定した。5分間隔で合計6回測定した。歩行パターン解析は、過去の論文の方法(非特許文献8)に従って実施した。マウスの前肢に赤色を、後ろ肢に青色の生体に害のない塗料をつけ、白紙を置いた14 x 44 cmの箱の中の一端にマウスを置き、歩行パターンを解析した。
ローターロッド試験及び歩行パターン試験の結果、生後3週間の時点でホモRet-Y1062F-ノックインマウスは小脳失調症の表現型を示すことが判明した(図1a-c)。ホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳プルキンエ細胞では、Retの1063番目のチロシンのリン酸化レベルが顕著に低下している事が分かった(図1d-h)。更に、生後15日以降、ホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳は形態学的には発達異常を示す事が分かった(図1i-o)。その形態異常の特徴としては、Ret自体は小脳プルキンエ細胞に発現しているにも関わらず、生後18日時点のホモRet-Y1062F-ノックインマウスのプルキンエ細胞の数は異常がないのに対して(図1q)、プルキンエ細胞とは異なる顆粒細胞が発達異常を示す点にある(図1o, p)。そこで、小脳の顆粒細胞発達を含む神経ネットワーク構築に必須のプルキンエ細胞から分泌される液性因子であるShhの発現レベルを免疫組織染色により検討した。その結果、野生型マウスにおいて、Retの1063番目のチロシンのリン酸化レベル上昇と共に、shh陽性プルキンエ細胞数は増加する事、ホモRet-Y1062F-ノックインマウスでshh陽性プルキンエ細胞数は有意に減少する事が分かった(図2a-c, e)。更に、ホモ型Ret-Y1062F-ノックインマウスの小脳shh減少は、恒常活性型RET遺伝子を導入したc-Ret-KIY1062F/Y1062F;RET-Tgマウス(非特許文献4)ではレスキュー出来た事から、小脳プルキンエ細胞から分泌されるshhレベルはRetのリン酸化により制御されている可能性が示唆された(図2d, e)。
(1)方法
shhシグナル伝達系の抑制因子として知られ、小脳顆粒細胞にも発現を認めるPatched1に注目し、「Patched1による抑制」の解除によってホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳失調症の表現型をレスキューできるとの仮説の下、以下の実験を行った。まず、ホモRet-Y1062F-ノックインマウスとPatched1ノックアウトマウス(Matthew Scott博士の許可を得て、金沢大学がん研究所 平尾敦教授より提供;Goodrich LV, et al., Science 277, 1109-1113 (1997))を交配させた。交配によって得られた仔マウス(c-Ret-KIY1062F/Y1062F;Patched1-KO)をローターロッド解析および小脳の病理解析に供した。小脳顆粒細胞のshhシグナル伝達系の下流分子マーカーとしてGli1を、顆粒細胞の成熟マーカーとしてGABA-alpha6を用いた。Gliの発現レベルは、shhシグナル伝達系の活性レベルに依存して正の相関を示す(Gold DA, et al., Neuron 40, 1119-1131 (2003))。
生後21日のc-Ret-KIY1062F/Y1062F;Patched1-KOマウスをローターロッド解析および病理解析に供したところ、ホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳失調症の表現型を、Patched1の発現レベルを低下させる事により、有意にレスキュー出来る事が分かった(図2f)。更に、Gli1の発現レベルおよび成熟顆粒細胞の陽性数もレスキューされる事が分かった(図2g-o)。これらの結果より、Patched1による抑制の解除によって、ホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳失調症をレスキューできることが判明した。
(1)方法
ホモRet-Y1062F-ノックインマウスに対して、shhシグナル伝達系賦活化剤であるSAG(N-Methyl-N′-(3-pyridinylbenzyl)-N′-(3-chlorobenzo[b]thiophene-2-carbonyl)-1,4-diaminocyclohexane;製品番号566660、EMD Chemicals, Inc.)を皮下注射で投与した。生後0.5日で投与を開始し、生後7.5日まで24時間毎に一回皮下注射で投与した。生後0.5日での投与量は3.3μg/g体重で生後1.5日以降は2.5μg/g体重の投与量で投与した。約3週後(生後21日目)に上記(2.(1))と同様の方法でホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳失調に対する効果を検討した。
SAGを投与したホモRet-Y1062F-ノックインマウスを生後21日でローターロッド解析および病理解析に供したところ、ホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳失調を有意にレスキュー出来る事が分かった(図2f)。更に、Gli1の発現レベルおよび成熟顆粒細胞の陽性数もレスキューされる事が分かった(図2g-o)。これらの結果より、SAGの皮下投与によって、ホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳失調をレスキューできることが判明した。
(1)方法
SAGを投与したホモRet-Y1062F-ノックインマウスの小脳を採取してホモジナイズした後、酢酸エチルでSAGを抽出し、酢酸エチル:エタノール:水(=60:20:18)混合展開溶媒を用いた薄層クロマトグラフィー(TLC)による解析に供した。
SAGを皮下投与したマウスの小脳から抽出したサンプルをTLCで展開したところ、SAGの標準品のRf値0.38と同じRf値付近にスポットを検出出来た。以上の結果より、皮下投与したSAGは小脳に組織分布する事が分かった(図3)。
(1)方法
3.(1)と同様の方法で処理したホモRet-Y1062F-ノックインマウスの聴力レベルを聴性脳幹反応(ABR)により測定し(Ohgami, N., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107,13051-13056 (2010))、先天性難聴に対する効果を調べた。統計処理にはMann-Whitney U-testを用いた。
SAGの投与によって聴力レベルの改善を認めた(図4)。即ち、先天性難聴に対してSAGが予防効果を示すことが明らかとなった。
shhシグナル伝達系賦活化剤であるSAGが小脳性運動失調症及び聴覚障害に対して有効であることが判明した。
Claims (3)
- 以下のステップ(i)〜(iv)を含む、小脳性運動失調症の予防又は治療に有効な物質のスクリーニング法:
(i)複数匹のホモRet-Y1062F-ノックインマウスを用意し、試験群と対照群に分けるステップ、
(ii)試験群に被験物質を投与するステップ、
(iii)ステップ(ii)後の試験群について、小脳性運動失調症の有無又は程度を検出するステップ、
(iv)ステップ(iii)での検出結果と、被験物質を投与しないこと以外、試験群と同様の処置を施した対照群についての検出結果を比較し、比較結果に基づき被験物質の有効性を判定するステップ。 - ローターロッド試験又は歩行パターン試験によって、ステップ(iii)における、小脳性運動失調症の有無又は程度が検出される、請求項1に記載のスクリーニング方法。
- 試験群において小脳性運動失調症の改善を認めることを有効性の指標として、ステップ(iv)における判定が行われる、請求項1又は2に記載のスクリーニング方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012259456 | 2012-11-28 | ||
JP2012259456 | 2012-11-28 | ||
PCT/JP2013/081094 WO2014084085A1 (ja) | 2012-11-28 | 2013-11-19 | 聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2014084085A1 JPWO2014084085A1 (ja) | 2017-01-05 |
JP6232547B2 true JP6232547B2 (ja) | 2017-11-22 |
Family
ID=50827728
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014550136A Active JP6232547B2 (ja) | 2012-11-28 | 2013-11-19 | 聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療剤 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6232547B2 (ja) |
WO (1) | WO2014084085A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3536778B1 (en) | 2014-11-14 | 2021-05-19 | Regenesis Science Co., Ltd. | Method for serum-free culture of chondrocytes and serum-free culture medium |
KR102610930B1 (ko) * | 2016-08-24 | 2023-12-08 | (주)아모레퍼시픽 | 3-클로로-N-[트랜스-4-(메틸아미노)사이클로헥실]-N-[[3-(4-피리디닐)페닐]메틸]벤조[b]티오펜-2-카복사마이드를 포함하는 피부 미백용 조성물 |
RU2730864C1 (ru) | 2017-11-10 | 2020-08-26 | Редженесис Сайенс Ко., Лтд. | Способ производства культивируемых клеток и лекарственного препарата для лечения спинномозговых травм |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2489733B1 (en) * | 2006-06-07 | 2019-02-13 | Genzyme Corporation | Gene therapy for amyotrophic lateral sclerosis and other spinal cord disorders |
-
2013
- 2013-11-19 WO PCT/JP2013/081094 patent/WO2014084085A1/ja active Application Filing
- 2013-11-19 JP JP2014550136A patent/JP6232547B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2014084085A1 (ja) | 2014-06-05 |
JPWO2014084085A1 (ja) | 2017-01-05 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Ramirez et al. | Breathing challenges in Rett syndrome: lessons learned from humans and animal models | |
Searcy et al. | Long-term pioglitazone treatment improves learning and attenuates pathological markers in a mouse model of Alzheimer's disease | |
Carvalho et al. | Type 2 diabetic and Alzheimer's disease mice present similar behavioral, cognitive, and vascular anomalies | |
Lopes et al. | IGF-1 intranasal administration rescues Huntington's disease phenotypes in YAC128 mice | |
Dong et al. | Effects of donepezil on amyloid-β and synapse density in the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease | |
Wu et al. | Activation of CB2 receptor system restores cognitive capacity and hippocampal Sox2 expression in a transgenic mouse model of Alzheimer's disease | |
JP2020143087A (ja) | 障害を治療するための5ht作動薬 | |
Shi et al. | Kruppel-like factor 2 protects against ischemic stroke by regulating endothelial blood brain barrier function | |
Rodgers et al. | Dose–response effects of orexin-A on food intake and the behavioural satiety sequence in rats | |
Podratz et al. | Drosophila melanogaster: a new model to study cisplatin-induced neurotoxicity | |
AU2014306597B2 (en) | Compositions and methods for treating chronic urticaria | |
Carloni et al. | Early life permethrin exposure induces long-term brain changes in Nurr1, NF-kB and Nrf-2 | |
Wu et al. | Hippocampal overexpression of TREM2 ameliorates high fat diet induced cognitive impairment and modulates phenotypic polarization of the microglia | |
Patterson et al. | MeCP2 deficiency results in robust Rett-like behavioural and motor deficits in male and female rats | |
KR20200098536A (ko) | Dux4 발현과 관련된 질병의 치료를 위한 화합물 | |
Huotarinen et al. | Combination of CDNF and deep brain stimulation decreases neurological deficits in late-stage model Parkinson’s disease | |
JP6232547B2 (ja) | 聴覚障害又は小脳性運動失調症の予防・治療剤 | |
AU2018331267A1 (en) | Improved treatment of atopic dermatitis with tradipitant | |
KR20160108258A (ko) | 대사 질환의 예방 또는 치료용 조성물 | |
JP2021505611A (ja) | 免疫疾患の予防または治療のためのripk1阻害剤とikk阻害剤の組み合わせ | |
Geisler et al. | Phenotypic characterization and brain structure analysis of calcium channel subunit α2δ-2 mutant (ducky) and α2δ double knockout mice | |
Allen et al. | TrkB-deficient mice show diminished phase shifts of the circadian activity rhythm in response to light | |
US20160228452A1 (en) | Treatment of metabolic diseases by inhibtion of htr2a or htr3 | |
JP2019517536A (ja) | 神経障害性疼痛の治療のための低用量flt3受容体阻害剤 | |
US20200000752A1 (en) | Method for Treating Epilepsy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20161003 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170706 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170807 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170901 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170912 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6232547 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |