JP6202984B2 - 細胞分取方法 - Google Patents
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Description
本発明は、伸展性のシートに貼り付けられた基板に組織切片を貼り付け、前記シートの伸展によって前記基板を表面方向に引っ張ることによって前記基板と前記組織切片とを一緒に分割し、分割された基板のチップのうち一部を前記シートから剥離して採取する細胞分取方法において、伸展された前記シート上に隙間を空けて分布する前記チップのマップ画像を取得する画像取得工程と、該画像取得工程において取得された前記マップ画像内から前記チップの像を抽出する抽出工程と、該抽出工程において抽出された前記チップの像をつなぎ合わせることによって分割前の前記組織切片の像を復元する復元工程と、該復元工程において復元された前記組織切片の像を表示する復元像表示工程と、該復元像表示工程において表示された前記復元された組織切片の像に基づいて、採取すべき1つ以上の前記チップを選択する選択工程と、該選択工程において選択されたチップを前記シートから採取する採取工程とを含む細胞分取方法を提供する。
このようにすることで、基板の切れ目である辺同士を一致させることによって、チップの像を精度良く繋ぎ合わせ、分割前の組織切片の像をより正確に復元することができる。
このようにすることで、組織切片内の所望の部分の断片が付着しているチップを採取することができる。
このようにすることで、採取工程を操作者が手動で行う場合に、採取したいチップの位置に標識が付されたマップ画像を参照することによって、操作者は、シート上の多数のチップの内、採取すべきチップを容易に特定することができる。
このようにすることで、採取工程を自動制御によって行う場合に、復元工程における各チップの像の移動を利用してシート上の各チップの位置情報を取得し、取得された位置情報を用いて実在のチップの位置を制御することができる。
以下に、本発明の第1の実施形態に係る細胞分取方法について図1から図10を参照して説明する。
まず、本実施形態に係る細胞分取方法の概要について説明する。本実施形態に係る細胞分取方法は、生体組織から切り出した薄い組織切片1を多数の小さな断片1aに分割し、所望の細胞(例えば、癌化した細胞)を含む一部の断片1aを採取する方法である。
本実施形態に係る細胞分取方法は、図4に示されるように、組織切片1を基板3に貼り付ける貼付工程S1と、シート2を伸展させることによって組織切片1を基板3と一緒に分割する分割工程S2と、シート2上に分布するチップ3aの配列のマップ画像Aを取得する画像取得工程S3と、マップ画像A内から個々のチップ3aの像を抽出する抽出工程S4と、抽出されたチップ3aの像をつなぎ合わせて分割前の組織切片1の像(復元像)Bを復元する復元工程S5と、復元像Bを表示する復元像表示工程S6と、表示されている復元像Bに基づいて採取すべきチップ3aを選択する選択工程S7と、選択されたチップ3aを標識したマップ画像Aを表示するマップ画像表示工程S8と、選択されたチップ3aを採取する採取工程S9とを含んでいる。
分割工程S2においては、シート2を全方向に等方的に伸展させることによって、基板3および組織切片1を溝4に沿って分割する。シート2の伸展には、例えば、半導体プロセスにおいてダイシングシートの伸展に使用されるエキスパンダが好適に用いられる。基板3および組織切片1の分割後は、グリップリング等によってシート2を伸展状態に保持する。これにより、図2に示されるように、チップ3a間に隙間が空いた状態となる。
抽出工程S4において、画像処理部50は、観察部20から受信したマップ画像Aから画像処理によってチップ3aの像の輪郭を検出し、該輪郭によって囲まれたチップ領域3a’をマップ画像Aから切り出す。輪郭の検出は、例えば、画素の輝度値を、マップ画像Aの横軸方向および縦軸方向に1次微分し、得られた微分値が所定の閾値よりも大きい位置を検出することによって行われる。このときに、輝度値を2値化したマップ画像Aを用いてもよい。また、チップ3aの寸法および形状が既知である場合には、画像処理によって検出された輪郭を、既知のチップ3aの寸法および形状と一致するように補正してもよい。
まず、マップ画像A内の多数のチップ領域3a’のうち1つ、例えば、一番左上に位置するチップ領域3a’を基準用に決定し、基準用のチップ領域3a’の中心を原点に設定する。次に、設定された原点を有する直交座標系における、指定されたチップ領域3a’の中心位置を計算する。直交座標系において、マップ画像Aの横軸がX軸、縦軸がY軸である。チップ領域3a’の中心は、例えば、復元工程S5において取得した、チップ領域3a’の4つの角の位置座標を用い、チップ領域3a’の対角線の交点として求める。これにより、原点に対する、指定されたチップ領域3a’の中心の絶対位置が算出される。
まず、1つのチップ領域3a’を基準用に決定し、基準用のチップ領域3a’の中心を原点に設定する。次に、図9に示されるように、原点から隣接するチップ領域3a’の中心まで、チップ領域3a’の辺の中心を通る経路を決定し、該経路の始点と終点とを結ぶベクトルを計算する。ここで、チップ領域3a’の中心および辺の中心の位置の計算には、復元工程S5において得られた位置座標を利用することができる。同様にして、他の隣接する2つのチップ領域3a’について、中心同士を結ぶベクトルを計算する。これにより、原点に対する任意のチップ領域3a’の絶対位置を、ベクトルの和として得ることができる。
次に、本発明の第2の実施形態に係る細胞分取方法について図11を参照して説明する。
本実施形態においては、上述した第1の実施形態と異なる点において主に説明し、第1の実施形態と共通する構成については同一の符号を付して説明を省略する。
第1の実施形態においては、採取工程S9において、ライブ画像を観察しながらステージ10の位置を調整することとした。これに対し、本実施形態においては、ライブ画像を用いずにチップ3aの採取を行う点において、第1の実施形態と異なっている。したがって、本実施形態においては、採取工程について主に説明する。図11は、本実施形態の採取工程の詳細を示すフローチャートである。
(Xt,Yt)=(Xs,Ys)+(xt,yt)/Z
1a 断片
2 シート
3 基板
3a チップ
3a’ チップ領域(チップの像)
4 溝
10 ステージ
20 観察部
30 表示部
40 採取部
50 回収部
60 画像処理部
100 細胞分取システム
S1 貼付工程
S2 分割工程
S3 画像取得工程
S4 抽出工程
S5 復元工程
S6 復元像表示工程
S7 選択工程
S8 マップ画像表示工程
S9 採取工程
Claims (5)
- 伸展性のシートに貼り付けられた基板に組織切片を貼り付け、前記シートの伸展によって前記基板を表面方向に引っ張ることによって前記基板と前記組織切片とを一緒に分割し、分割された基板のチップのうち一部を前記シートから剥離して採取する細胞分取方法において、
伸展された前記シート上に隙間を空けて分布する前記チップのマップ画像を取得する画像取得工程と、
該画像取得工程において取得された前記マップ画像内から前記チップの像を抽出する抽出工程と、
該抽出工程において抽出された前記チップの像をつなぎ合わせることによって分割前の前記組織切片の像を復元する復元工程と、
該復元工程において復元された前記組織切片の像を表示する復元像表示工程と、
該復元像表示工程において表示された前記復元された組織切片の像に基づいて、採取すべき1つ以上の前記チップを選択する選択工程と、
該選択工程において選択されたチップを前記シートから採取する採取工程とを含む細胞分取方法。 - 前記復元工程において、互いに隣接する前記チップの像の、対向する辺同士が一致するように、前記チップの像をつなぎ合わせる請求項1に記載の細胞分取方法。
- 前記マップ画像を、前記選択工程において選択された前記チップの像に標識を付して表示するマップ画像表示工程を含む請求項1または請求項2に記載の細胞分取方法。
- 前記復元工程において、各前記チップの像の移動距離および移動方向に基づいて、前記マップ画像内における各前記チップの像の絶対位置を取得し、
前記採取工程において、前記復元工程において取得された前記絶対位置に基づいて、前記選択されたチップの位置を調整する請求項1から請求項3のいずれかに記載の細胞分取方法。 - 前記復元工程において、各前記チップの像の移動距離および移動方向に基づいて、前記マップ画像内における前記チップの像同士の相対位置を取得し、
前記採取工程において、前記復元工程において取得された前記相対位置に基づいて、前
記選択されたチップの位置を調整する請求項1から請求項3のいずれかに記載の細胞分取方法。
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