JP6157524B2 - Low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof - Google Patents

Low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof Download PDF

Info

Publication number
JP6157524B2
JP6157524B2 JP2015042794A JP2015042794A JP6157524B2 JP 6157524 B2 JP6157524 B2 JP 6157524B2 JP 2015042794 A JP2015042794 A JP 2015042794A JP 2015042794 A JP2015042794 A JP 2015042794A JP 6157524 B2 JP6157524 B2 JP 6157524B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
mass
acid
containing composition
fatty acid
low
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2015042794A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP2016160244A (en
Inventor
伊藤 仁
仁 伊藤
道陽 荒木
道陽 荒木
善彦 平田
善彦 平田
亜紀子 島田
亜紀子 島田
和拓 木下
和拓 木下
千恵 松原
千恵 松原
瑞之 竜
瑞之 竜
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Saraya Co Ltd
Original Assignee
Saraya Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Saraya Co Ltd filed Critical Saraya Co Ltd
Priority to JP2015042794A priority Critical patent/JP6157524B2/en
Publication of JP2016160244A publication Critical patent/JP2016160244A/en
Application granted granted Critical
Publication of JP6157524B2 publication Critical patent/JP6157524B2/en
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Eyeglasses (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Emulsifying, Dispersing, Foam-Producing Or Wetting Agents (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)

Description

本発明は、低毒性ソホロリピッド含有組成物及びその用途に関する。   The present invention relates to a low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof.

種々の化粧品、医薬品及び飲食品に界面活性剤が多用されているが、界面活性剤の多用によって引き起こされる手荒れや皮膚炎に悩む消費者も増えている。事実、厚生労働省の患者数調査(傷病分類別)によれば、昭和62年から平成11年までアトピー性皮膚炎の患者数は22万4000人から39万9000人に増え、平成23年の時点でも36万9000人もの患者がいるとされている。このことから、日常的に界面活性剤による障害(例えば、肌のかさつき、肌荒れ、ひび割れ、湿疹、髪のパサツキ等)を感じている消費者は潜在的に多いと考えられる。   Surfactants are frequently used in various cosmetics, pharmaceuticals, and foods and drinks, and consumers who suffer from rough hands and dermatitis caused by heavy use of surfactants are also increasing. In fact, according to the survey of the number of patients by the Ministry of Health, Labor and Welfare (by classification of injury and disease), the number of patients with atopic dermatitis increased from 224,000 to 399,000 from 1987 to 1999, as of 2011. But it is said that there are 369,000 patients. From this, it is considered that there are potentially many consumers who regularly feel a disorder due to a surfactant (for example, rough skin, rough skin, cracks, eczema, hair rustling, etc.).

また、皮膚以外にも咽頭、鼻腔、膣等の粘膜部位、及び創傷部位においては、異物が付着することにより不快感、炎症または化膿が生じることが知られている。このような症状を予防及び改善するためには、これらの部位を洗浄料等を用いて洗浄することによって異物を除去することが有効であるとされている。この場合、界面活性剤等を含む洗浄料を使用することによって、優れた洗浄効果を得ることができる。一方、界面活性剤は、通常皮膚や毛髪に適用されるものであり、眼、咽頭、鼻腔、膣、口腔等の粘膜部位、及び創傷部位に対しては強い刺激があるため、低濃度でなければ、適用部位が赤く腫れたり(紅斑)、また創傷の治癒を阻害したりすることがある。従って、界面活性剤またはこれを含む洗浄料等を粘膜部位や創傷部位に使用することは敬遠されている。   In addition to the skin, it is known that discomfort, inflammation, or suppuration occurs due to foreign matter adhering to mucous membrane sites such as the pharynx, nasal cavity, and vagina, and wound sites. In order to prevent and ameliorate such symptoms, it is considered effective to remove foreign substances by washing these parts with a cleaning material or the like. In this case, an excellent cleaning effect can be obtained by using a cleaning material containing a surfactant or the like. On the other hand, surfactants are usually applied to the skin and hair, and have strong irritation to the mucous membrane sites such as the eyes, pharynx, nasal cavity, vagina and oral cavity, and wound sites, so the concentration should be low. For example, the application site may be red and swollen (erythema), and may inhibit wound healing. Therefore, the use of a surfactant or a cleaning material containing the same on a mucosal site or a wound site is avoided.

ところで、生物由来の界面活性剤であるバイオサーファクタントは、生分解性及び安全性が高いことから、次世代型界面活性剤として産業利用が期待されている物質である。なかでも糖脂質型バイオサーファクタントの一つであるソホロリピッドは、酵母の発酵から得られる発酵産物であり、従来から安全性が高いことが知られている(特許文献1)。しかしながら、その低刺激の程度はアミノ酸系界面活性剤と同等であり、また非特許文献1によると、キャンディダ・ボンビコーラ(Candida bombicola)ATCC 22214の培養物を酢酸エチルで抽出した抽出物を、ヘキサンで洗浄して脂肪酸を除去した天然のソホロリピッド混合物を始め、ラクトン型ソホロリピッド、並びにメチルエステル、エチルエステル(モノアセチル型、及びジアセチル型を含む)、及びヘキシルエステル等のエステル型ソホロリピッドは、安全性が高いソホロリピッドのなかでも毒性が比較的高いことが知られている。このため、さらなる低刺激化(低毒性化)が求められる。   Biosurfactants, which are biologically derived surfactants, are substances that are expected to be industrially used as next-generation surfactants because of their high biodegradability and safety. Among them, sophorolipid, which is one of glycolipid type biosurfactants, is a fermentation product obtained from yeast fermentation, and has been known to have high safety (Patent Document 1). However, the degree of mildness is the same as that of amino acid surfactants, and according to Non-Patent Document 1, an extract obtained by extracting a culture of Candida bombicola ATCC 22214 with ethyl acetate In addition to natural sophorolipid mixtures that have been washed with fatty acids to remove lactone sophorolipids, and ester sophorolipids such as methyl esters, ethyl esters (including monoacetyl and diacetyl types), and hexyl esters, It is known that toxicity is relatively high among high sophorolipids. For this reason, further reduction in stimulation (reduction in toxicity) is required.

特開2009−275145号公報JP 2009-275145 A

Shah V, Doncel GF, Seyoum T, Eaton KM, Zalenskaya I, Hagver R, Azim A, Gross R(2005)、Sophorolipids, Microbial Glycolipids with Anti-HumanImmunodeficiency Virus and Sperm-Immobilizing Activities. Antimicrob. Agents Chemother. 49(10), 4093-4100Shah V, Doncel GF, Seyoum T, Eaton KM, Zalenskaya I, Hagver R, Azim A, Gross R (2005), Sophorolipids, Microbial Glycolipids with Anti-HumanImmunodeficiency Virus and Sperm-Immobilizing Activities. Antimicrob. Agents Chemother. 49 (10 ), 4093-4100 Karen M.J. Saerens, Lien Saey, Wim Soetaert(2011)One-Step Production of Unacetylated Sophorolipids by an Acetyltransferase Negative Candida bombicola. Biotechnol. Bioeng. 108(12). 2923-2931Karen M.J.Saerens, Lien Saey, Wim Soetaert (2011) One-Step Production of Unacetylated Sophorolipids by an Acetyltransferase Negative Candida bombicola. Biotechnol. Bioeng. 108 (12). 2923-2931

本発明は低毒性ソホロリピッド含有組成物を提供することを目的とする。また本発明は、低毒性ソホロリピッド含有組成物の用途を提供することを目的とする。なお、本発明において、「低毒性ソホロリピッド含有組成物」とは、低毒性ソホロリピッドを含有する低毒性の組成物を意味する。   It is an object of the present invention to provide a low toxicity sophorolipid-containing composition. Moreover, an object of this invention is to provide the use of a low toxicity sophorolipid containing composition. In the present invention, the “low toxicity sophorolipid-containing composition” means a low toxicity composition containing a low toxicity sophorolipid.

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねていたところ、酵母発酵により生成されるソホロリピッド含有組成物に含まれるラクトン型ソホロリピッドに加えて、脂肪酸、及びヒドロキシ脂肪酸、並びに、従来安全性が高いとされている酸型ソホロリピッドに含まれるアセチル基が、それぞれソホロリピッド含有組成物の細胞毒性に少なからず悪影響していることを見出し、これらを除去することで、より低毒性のソホロリピッド含有組成物、特に眼、口腔内、及びそれ以外の粘膜部位(咽喉、鼻腔、耳腔、生殖器、肛門など)、並びに創傷部位に対する刺激性が極めて低いソホロリピッド含有組成物(低刺激性ソホロリピッド含有組成物)が得られることを確認した。   The inventors of the present invention have made extensive studies to solve the above problems. In addition to the lactone type sophorolipid contained in the sophorolipid-containing composition produced by yeast fermentation, fatty acids, hydroxy fatty acids, and conventional safety It has been found that the acetyl groups contained in acid-type sophorolipids, which are considered to have high properties, have a significant adverse effect on the cytotoxicity of the sophorolipid-containing compositions, respectively, and by removing these, the lower-toxic sophorolipid-containing composition Sophorolipid-containing composition (hypoallergenic sophorolipid-containing composition) that is extremely irritating to products, particularly the eyes, oral cavity, and other mucosal sites (throat, nasal cavity, ear cavity, genital organs, anus, etc.) and wound sites It was confirmed that

また、本発明者らは、当該低毒性のソホロリピッド含有組成物は、これを皮膚や毛髪に適用した場合につっぱり感やきしみ感といった問題がないばかりか、それ自体に保湿作用、皮膚や毛髪に対する保護作用(皮膚保護作用、毛髪保護作用)、及び毛髪を修復する作用があり、その結果、皮膚に潤いを与えたり、皮膚や毛髪のダメージを予防することができることを見出した。   In addition, the present inventors have found that the low-toxic sophorolipid-containing composition does not have a problem such as a feeling of tension or squeak when applied to the skin or hair, but also has a moisturizing effect on itself, against the skin and hair. It has been found that it has a protective action (skin protective action, hair protective action) and an action of repairing hair, and as a result, it can moisturize the skin and prevent damage to the skin and hair.

本発明はかかる知見に基づいて完成したものであり、下記の実施形態を包含するものである。なお、以下、本明細書において「ソホロリピッド」を「SL」と略称する場合がある。具体的には、本発明の「低毒性ソホロリピッド含有組成物」を「低毒性SL含有組成物」とも称する。   The present invention has been completed based on such findings, and includes the following embodiments. In the following description, “Sophorolipid” may be abbreviated as “SL”. Specifically, the “low-toxic sophorolipid-containing composition” of the present invention is also referred to as “low-toxic SL-containing composition”.

(I)低毒性SL含有組成物
(I-1)下記(a)〜(c)の特徴を有する低毒性SL含有組成物;
(a)SL産生酵母培養物に由来する酸型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を少なくとも含有し、酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量を100質量%とした場合に、それぞれの割合が乾燥重量に換算して下記である
(1)酸型SL:94〜99.99質量%、
(2)ラクトン型SL:0〜2質量%、
(3)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量:0.01〜4質量%;
(b)低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL100質量部に対するラクトン型SLの割合、または脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が、それぞれ0〜2.12質量部または0.01〜4.25質量部;
(c)低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL及びラクトン型SLがいずれもアセチル基を有しない。
(I) Low-toxic SL-containing composition (I-1) A low-toxic SL-containing composition having the following characteristics (a) to (c):
(A) It contains at least acid type SL, fatty acid, and hydroxy fatty acid derived from SL-producing yeast culture, and the total amount of acid type SL, lactone type SL, fatty acid, and hydroxy fatty acid is 100% by mass. (1) Acid type SL: 94 to 99.99% by mass,
(2) Lactone type SL: 0 to 2% by mass,
(3) Total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid: 0.01 to 4% by mass;
(B) The ratio of lactone-type SL with respect to 100 mass parts of acid-type SL contained in a low toxicity SL containing composition, or the ratio of a fatty acid and a hydroxy fatty acid (total amount) is 0-2.12 mass parts or 0.01-4, respectively. .25 parts by weight;
(C) Neither the acid type SL nor the lactone type SL contained in the low-toxic SL-containing composition has an acetyl group.

(I-2)酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%あたりに含まれるラクトン型SLの割合、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が、それぞれ下記(i)並びに(ii)のいずれか少なくとも一方を充足する、(I-1)記載の低毒性SL含有組成物:
(i)ラクトン型SL:好ましくは0より多く2質量%以下、より好ましくは0.1〜2質量%、さらに好ましくは0.1〜1.5質量%、特に好ましくは0.8〜1.5質量%、
(ii)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量):好ましくは0.01〜2.4質量%、より好ましくは0.01〜1.2質量%、さらに好ましくは0.01〜0.24質量%。
(I-2) Acid type SL, lactone type SL, the ratio of lactone type SL contained per 100% by mass of the total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid, and the ratio of fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) are the following (i) and The low-toxic SL-containing composition according to (I-1), which satisfies at least one of (ii):
(I) Lactone type SL: preferably more than 0 and 2% by mass or less, more preferably 0.1 to 2% by mass, still more preferably 0.1 to 1.5% by mass, particularly preferably 0.8 to 1.%. 5% by mass,
(Ii) Fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount): preferably 0.01 to 2.4% by mass, more preferably 0.01 to 1.2% by mass, and still more preferably 0.01 to 0.24% by mass.

(I-3)酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%あたりに含まれる酸型SL、ラクトン型SL、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が下記である、(I-1)に記載する低毒性SL含有組成物:
(i)酸型SL:好ましくは96.1質量%以上、より好ましくは97.9質量%以上、さらに好ましくは99.31質量%以上、
(ii)ラクトン型SL:好ましくは0より多く2質量%以下、より好ましくは0.1〜2質量%、さらに好ましくは0.1〜1.5質量%以下、特に好ましくは0.8〜1.5質量%、
(iii)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量):好ましくは0.01〜2.4質量%、より好ましくは0.01〜1.2質量%、さらに好ましくは0.01〜0.24質量%。
(I-3) Acid type SL, lactone type SL, the ratio of acid type SL, lactone type SL, and fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) contained per 100% by mass of the total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid are as follows: The composition containing low toxicity SL described in I-1):
(I) Acid type SL: Preferably it is 96.1 mass% or more, More preferably, it is 97.9 mass% or more, More preferably, it is 99.31 mass% or more,
(Ii) Lactone type SL: preferably more than 0 and 2% by mass or less, more preferably 0.1 to 2% by mass, still more preferably 0.1 to 1.5% by mass, and particularly preferably 0.8 to 1%. .5% by mass,
(Iii) Fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount): preferably 0.01 to 2.4% by mass, more preferably 0.01 to 1.2% by mass, and still more preferably 0.01 to 0.24% by mass.

(I-4)酸型SL及びラクトン型SLの総量100質量%あたり、酸型SLの割合が98〜100質量%、好ましくは98.5〜100質量%、より好ましくは99〜100質量%、さらに好ましくは99.5〜100質量%であり、ラクトン型SLの割合が0〜2質量%、好ましくは0〜1.5質量%、より好ましくは0〜1質量%、(I-1)〜(I-3)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。   (I-4) The ratio of the acid type SL is 98 to 100% by mass, preferably 98.5 to 100% by mass, more preferably 99 to 100% by mass, per 100% by mass of the total amount of the acid type SL and the lactone type SL. More preferably, it is 99.5-100 mass%, The ratio of lactone type SL is 0-2 mass%, Preferably it is 0-1.5 mass%, More preferably, it is 0-1 mass%, (I-1)- The low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-3).

(I-5)エタノール可溶分が10質量%になるように低毒性SL含有組成物を溶解した水溶液の波長440nmにおける吸光度(色相:OD440)が0.001〜1、好ましくは0.005〜0.8、より好ましくは0.01〜0.6、特に好ましくは0.01〜0.5、さらに特に好ましくは0.4以下である、(I-1)〜(I-4)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。 (I-5) The absorbance (hue: OD 440 ) at a wavelength of 440 nm of an aqueous solution in which a low-toxic SL-containing composition is dissolved so that the ethanol-soluble content is 10% by mass is 0.001-1, preferably 0.005. -0.8, more preferably 0.01-0.6, particularly preferably 0.01-0.5, even more preferably 0.4 or less, of (I-1) to (I-4) The low-toxic SL-containing composition described in any one of the above.

(I-6)エタノール可溶分1g相当物のエステル価が0.01〜2mgKOH/g、好ましくは0.01〜1.5mgKOH/g、より好ましくは0.1〜1.5mgKOH/g、特に好ましくは0.8〜1.5mgKOH/gである、(I-1)〜(I-5)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。   (I-6) Ester value of 1 g equivalent of ethanol soluble component is 0.01 to 2 mgKOH / g, preferably 0.01 to 1.5 mgKOH / g, more preferably 0.1 to 1.5 mgKOH / g, especially The low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-5), preferably 0.8 to 1.5 mgKOH / g.

(I-7)エタノール可溶分1g相当物の水酸基価がは545〜630mgKOH/g、好ましくは560〜630mgKOH/g、より好ましくは575〜630mgKOH/g、特に好ましくは575〜585mgKOH/gである、(I-1)〜(I-6)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。   (I-7) The hydroxyl value of the equivalent of 1 g of ethanol soluble component is 545 to 630 mg KOH / g, preferably 560 to 630 mg KOH / g, more preferably 575 to 630 mg KOH / g, and particularly preferably 575 to 585 mg KOH / g. A low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-6).

(I-8)HeLa細胞に対する細胞致死濃度(IC50)が2000ppm以上、好ましくは3000〜60000ppmであることを特徴とする、(I-1)〜(I-7)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。 (I-8) The low lethal concentration (IC 50 ) against HeLa cells is 2000 ppm or more, preferably 3000 to 60000 ppm. Toxic SL-containing composition.

(I-9)HeLa細胞に対する細胞致死濃度(IC50)と臨界ミセル濃度(CMC)との比(IC50/CMC)が6.7〜200、好ましくは10〜200、より好ましくは17〜200、特に好ましくは33〜200であることを特徴とする、(I-1)〜(I-8)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。 (I-9) Ratio (IC 50 / CMC) of cell lethal concentration (IC 50 ) to critical micelle concentration (CMC) for HeLa cells is 6.7 to 200, preferably 10 to 200, more preferably 17 to 200 The low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-8), particularly preferably 33 to 200.

(I-10)下記(a)〜(c)のいずれか少なくとも1つの物性を有することを特徴とする(I-1)〜(I-9)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物:
(a)蒸発残分:1〜100%、
(b)乾燥減量:0〜99%、
(c)エタノール可溶分:1〜100%。
(I-10) The low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-9), wherein the composition has at least one physical property of any of the following (a) to (c): :
(A) Evaporation residue: 1 to 100%
(B) Loss on drying: 0 to 99%,
(C) Ethanol soluble content: 1 to 100%.

(I-11)赤外吸収スペクトルにおいて、少なくとも波数1024cm−1付近、1706〜1730cm−1付近、2854cm−1付近、2924cm−1付近、および3000〜3500cm−1付近に赤外線吸収バンドを有する、(I-1)〜(I-10)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。 In (I-11) Infrared absorption spectrum having at least wavenumber 1024cm around -1, 1706~1730Cm around -1, 2854Cm around -1, 2924 cm around -1, and 3000~3500cm infrared absorption band around -1, ( The low-toxic SL-containing composition described in any one of (I-1) to (I-10).

(I-12)固体形状を有することを特徴とする、(I-1)〜(I-11)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物。   (I-12) The low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-11), which has a solid form.

(I-13)固体形状が粉末または顆粒である、(I-12)に記載する低毒性SL含有組成物。   (I-13) The low-toxic SL-containing composition according to (I-12), wherein the solid form is a powder or a granule.

(II)低毒性SL含有組成物の用途
(II-1)(I-1)〜(I-13)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物を有効成分とするアニオン性界面活性剤。
(II) Use of low-toxic SL-containing composition (II-1) An anionic surfactant comprising the low-toxic SL-containing composition described in any one of (I-1) to (I-13) as an active ingredient.

(II-2)(I-1)〜(I-13)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物を有効成分とする、皮膚保湿剤、肌荒れ改善剤、皮膚保護剤、または毛髪保護剤。   (II-2) Skin moisturizing agent, rough skin improving agent, skin protecting agent, or hair protecting agent comprising the low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-13) as an active ingredient .

(II-3)(I-1)〜(I-13)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物を含有することを特徴とする香粧品、医薬部外品、医薬品、医療機器若しくは日常雑貨品;または香粧品用、医薬部外品用、医薬品用、医療機器用若しくは日常雑貨品用の添加剤。   (II-3) Cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, medical devices or daily life characterized by containing the low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-13) Miscellaneous goods; or additives for cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, medical devices or daily miscellaneous goods.

(II-4)皮膚、毛髪、粘膜、または創傷部(傷口または炎症部など)に適用されるものである、(II-3)に記載する香粧品、医薬部外品、医薬品、医療機器若しくは日常雑貨品;または香粧品用、医薬部外品用、医薬品用、医療機器用若しくは日常雑貨品用の添加剤。   (II-4) Cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, medical devices or the like described in (II-3) that are applied to skin, hair, mucous membranes, or wounds (such as wounds or inflamed areas) Daily miscellaneous goods; or additives for cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, medical equipment or daily miscellaneous goods.

(II-5)上記香粧品、医薬部外品、医薬品、医療機器若しくは日常雑貨品が、身体洗浄料、毛髪洗浄剤、洗眼料、点眼剤、化粧料、口腔洗浄料、粘膜または創傷部洗浄料、及び創傷被覆材よりなる群から選択される少なくとも1つである、(II-3)または(II-4)に記載する香粧品、医薬部外品、医薬品、医療機器、若しくは日常雑貨品またはこれらの添加物。   (II-5) The above cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, medical equipment or daily miscellaneous goods are body wash, hair cleanser, eye wash, eye drop, cosmetic, oral cleanser, mucous membrane or wound cleanser. Cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, medical devices, or daily miscellaneous goods described in (II-3) or (II-4), which are at least one selected from the group consisting of cosmetics and wound dressings Or these additives.

(II-6)(I-1)〜(I-13)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物を下記の割合で含有するものである、(II-5)記載の香粧品、医薬部外品、医薬品、医療機器若しくは日常雑貨品またはこれらの添加物:
身体洗浄料:0.01〜100質量%、
毛髪洗浄剤:0.01〜30質量%、
洗眼料:0.001〜10質量%、
点眼剤:0.001〜10質量%、
化粧料:0.01〜20質量%、
口腔洗浄料:0.001〜10質量%、
粘膜または創傷部洗浄料:0.001〜30質量%、
創傷被覆材:0.001〜30質量%。
(II-6) A cosmetic or pharmaceutical product according to (II-5), which comprises the low-toxic SL-containing composition according to any one of (I-1) to (I-13) in the following ratio: Quasi-drugs, pharmaceuticals, medical equipment or daily miscellaneous goods or their additives:
Body wash: 0.01-100% by mass,
Hair cleaning agent: 0.01 to 30% by mass,
Eye wash: 0.001-10% by mass,
Eye drops: 0.001 to 10% by mass,
Cosmetics: 0.01-20% by mass,
Oral cleansing agent: 0.001 to 10% by mass,
Mucosal or wound cleaning material: 0.001 to 30% by mass,
Wound dressing: 0.001 to 30% by mass.

また本発明には上記の低毒性SL含有組成物の製造方法、及びSL含有組成物の低毒性化方法が含まれる。   The present invention also includes a method for producing the above-mentioned low-toxic SL-containing composition and a method for reducing the toxicity of the SL-containing composition.

(III)低毒性SL含有組成物の製造方法
(III-1)SL産生酵母を培養することによって得られるSL含有培養物またはその処理物を、(1)脂肪酸及び/又はヒドロキシ脂肪酸を除去する工程、及び
必要に応じて、さらに
(2)SLに結合したアセチル基を脱離する工程、又は/及び
(3)ラクトン型SLを除去する工程に供することを特徴とする、(I-1)〜(I-13)のいずれかに記載する低毒性SL含有組成物の製造方法。
(III) Method for producing low-toxic SL-containing composition (III-1) SL-containing culture obtained by culturing SL-producing yeast or treated product thereof (1) Step of removing fatty acid and / or hydroxy fatty acid And, if necessary, (2) a step of removing an acetyl group bonded to SL, and / or (3) a step of removing lactone-type SL, (I-1) to The manufacturing method of the low toxicity SL containing composition in any one of (I-13).

(III-2)(1)脂肪酸及び/又はヒドロキシ脂肪酸を除去する工程が、溶剤抽出法、吸着法、及びクロマトグラフィーから選択される少なくとも一つの処理である、(III-1)に記載する製造方法。   (III-2) (1) The production according to (III-1), wherein the step of removing fatty acid and / or hydroxy fatty acid is at least one treatment selected from a solvent extraction method, an adsorption method, and chromatography Method.

(III-3)溶剤抽出法がジエチルエーテルを溶剤とする抽出法であり;吸着法が吸着剤として活性炭、シリカゲル、ゼオライト、イオン交換樹脂及び酸化アルミナを用いた方法であり;クロマトグラフィーが固定相としてODS樹脂、移動相としてエタノール水溶液を用いた逆相カラムクロマトグラフィーである(III-2)に記載する製造方法。   (III-3) Solvent extraction method is extraction method using diethyl ether as solvent; adsorption method is a method using activated carbon, silica gel, zeolite, ion exchange resin and alumina oxide as adsorbent; chromatography is stationary phase The production method described in (III-2), which is reverse phase column chromatography using an ODS resin as a mobile phase and an aqueous ethanol solution as a mobile phase.

(III-4)(2)SLに結合したアセチル基を脱離する工程が、加水分解処理、及び酵素処理から選択される少なくとも一つの処理である、(III-1)〜(III-3)のいずれかに記載する製造方法。   (III-4) (2) The step of removing the acetyl group bonded to SL is at least one treatment selected from hydrolysis treatment and enzyme treatment (III-1) to (III-3) The manufacturing method described in any one of.

(III-5)酵素処理がアセチルエステラーゼを用いた処理である、(III-4)に記載する製造方法。   (III-5) The production method according to (III-4), wherein the enzyme treatment is a treatment using acetylesterase.

(III-6)(3)ラクトン型SLを除去する工程が、加水分解処理、及びクロマトグラフィーから選択される少なくとも一つの処理である、(III-1)〜(III-5)のいずれかに記載する製造方法。   (III-6) (3) The step of removing lactone-type SL is at least one treatment selected from hydrolysis treatment and chromatography, and any of (III-1) to (III-5) Manufacturing method to be described.

(III-7)クロマトグラフィーが固定相としてODS樹脂、移動相としてエタノール水溶液を用いた逆相カラムクロマトグラフィーである(III-6)に記載する製造方法。   (III-7) The production method according to (III-6), wherein the chromatography is reverse phase column chromatography using an ODS resin as a stationary phase and an aqueous ethanol solution as a mobile phase.

(IV)SL含有組成物の低毒化方法
(IV-1)SL産生酵母を培養することによって得られるSL含有培養物またはその処理物を(1)脂肪酸及び/又はヒドロキシ脂肪酸を除去する工程、及び
必要に応じて
(2)SLに結合したアセチル基を脱離する工程、又は/及び
(3)ラクトン型SLを除去する工程を有する方法に供し、下記(a)〜(c)の特徴を有する低毒化SL含有組成物を調製することを特徴とする、SL含有組成物の低毒化方法:
(a)低毒化SL含有組成物に含まれる酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量を100質量%とした場合に、それぞれの割合が乾燥重量に換算して下記の範囲にある
(1)酸型SL:94〜99.99質量%、
(2)ラクトン型SL:0〜2質量%、
(3)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量:0.01〜4質量%;
(b)低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL100質量部に対するラクトン型SL、または脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合がそれぞれ0〜0.212または0.01〜4.25質量部;
(c)低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL及びラクトン型SLがいずれもアセチル基を有しない。
(IV) Method for reducing toxicity of SL-containing composition (IV-1) (1) Step of removing fatty acid and / or hydroxy fatty acid from SL-containing culture obtained by culturing SL-producing yeast or treated product thereof, And (2) removing the acetyl group bonded to SL, and / or (3) removing the lactone-type SL, if necessary, and having the following characteristics (a) to (c) A method for detoxifying a SL-containing composition comprising preparing a detoxified SL-containing composition having:
(A) When the total amount of acid-type SL, lactone-type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid contained in the attenuated SL-containing composition is 100% by mass, the respective ratios are converted into dry weights within the following ranges. (1) Acid type SL: 94 to 99.99% by mass,
(2) Lactone type SL: 0 to 2% by mass,
(3) Total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid: 0.01-4% by mass;
(B) The ratio of lactone type SL or fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) to 100 parts by mass of acid type SL contained in the low-toxic SL-containing composition is 0 to 0.212 or 0.01 to 4.25 parts by mass, respectively.
(C) Neither the acid type SL nor the lactone type SL contained in the low-toxic SL-containing composition has an acetyl group.

(IV-2)酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%あたりに含まれるラクトン型SLの割合、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が、それぞれ下記(i)並びに(ii)のいずれか少なくとも一方の範囲にある低毒化SL含有組成物を調製することを特徴とする、(IV-1)に記載する低毒化方法:
ラクトン型SL:好ましくは0より多く2質量%以下、より好ましくは0.1〜2質量%、さらに好ましくは0.1〜1.5質量%、特に好ましくは0.8〜1.5質量%、
脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量):好ましくは0.01〜2.4質量%、より好ましくは0.01〜1.2質量%、さらに好ましくは0.01〜0.24質量%。
(IV-2) Acid type SL, lactone type SL, the proportion of lactone type SL contained per 100% by mass of the total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid, and the proportion of fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) are the following (i) and (Ii) A method for reducing poisoning according to (IV-1), characterized in that a composition containing SL with reduced poisoning in at least one of the ranges is prepared:
Lactone type SL: preferably more than 0 and 2% by mass or less, more preferably 0.1 to 2% by mass, further preferably 0.1 to 1.5% by mass, particularly preferably 0.8 to 1.5% by mass ,
Fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount): preferably 0.01 to 2.4% by mass, more preferably 0.01 to 1.2% by mass, and still more preferably 0.01 to 0.24% by mass.

(IV-3)酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%あたりに含まれる酸型SL、ラクトン型SL、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が下記の範囲にある低毒化SL含有組成物を調製することを特徴とする、(IV-1)に記載する低毒化方法:
(a)酸型SL:好ましくは96.1質量%以上、より好ましくは97.9質量%以上、さらに好ましくは99.31質量%以上、
(b)ラクトン型SL:好ましくは0より多く2質量%以下、より好ましくは0.1〜2質量%、さらに好ましくは0.1〜1.5質量%、特に好ましくは0.8〜1.5質量%、
(c)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸:好ましくは0.01〜2.4質量%、より好ましくは0.01〜1.2質量%、さらに好ましくは0.01〜0.24質量%。
(IV-3) Acid type SL, lactone type SL, the ratio of acid type SL, lactone type SL, and fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) contained per 100% by mass of the total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid are in the following ranges. A method for detoxification as described in (IV-1), which comprises preparing a composition with reduced SL content:
(A) Acid type SL: Preferably it is 96.1 mass% or more, More preferably, it is 97.9 mass% or more, More preferably, it is 99.31 mass% or more,
(B) Lactone type SL: preferably more than 0 and 2% by mass or less, more preferably 0.1 to 2% by mass, still more preferably 0.1 to 1.5% by mass, and particularly preferably 0.8 to 1.%. 5% by mass,
(C) Fatty acid and hydroxy fatty acid: preferably 0.01 to 2.4% by mass, more preferably 0.01 to 1.2% by mass, and still more preferably 0.01 to 0.24% by mass.

(IV-4)酸型SL及びラクトン型SLの総量100質量%あたり、酸型SLの割合が98〜100質量%、好ましくは98.5〜100質量%、より好ましくは99〜100質量%、特に好ましくは99.5〜100質量%であり、ラクトン型SLの割合が0〜2質量%、好ましくは0〜1.5質量%、より好ましくは0〜1質量%である低毒化SL含有組成物を調製することを特徴とする、(IV-1)〜(IV-3)のいずれかに記載する低毒化方法。   (IV-4) The ratio of the acid type SL is 98 to 100% by mass, preferably 98.5 to 100% by mass, more preferably 99 to 100% by mass, per 100% by mass of the total amount of the acid type SL and the lactone type SL. Particularly preferably, it is 99.5 to 100% by mass, and the lactone-type SL content is 0 to 2% by mass, preferably 0 to 1.5% by mass, and more preferably 0 to 1% by mass. A method for reducing toxicity according to any one of (IV-1) to (IV-3), which comprises preparing a composition.

(IV-5)エタノール可溶分1g相当物のエステル価が0.01〜2mgKOH/g、好ましくは0.01〜1.5mgKOH/g、より好ましくは0.1〜1。5mgKOH/g、特に好ましくは0.8〜1.5mgKOH/gである低毒化SL含有組成物を調製することを特徴とする、(IV-1)〜(IV-4)のいずれかに記載する低毒化方法。   (IV-5) The ester value of the equivalent of 1 g of ethanol soluble component is 0.01 to 2 mgKOH / g, preferably 0.01 to 1.5 mgKOH / g, more preferably 0.1 to 1.5 mgKOH / g, particularly Preferably, the attenuated SL-containing composition according to any one of (IV-1) to (IV-4), wherein a reduced attenuated SL-containing composition of 0.8 to 1.5 mg KOH / g is prepared. .

(IV-6)エタノール可溶分1g相当物の水酸基価が545〜630mgKOH/g、好ましくは560〜630mgKOH/g、より好ましくは575〜630mgKOH/g、特に好ましくは575〜585mgKOH/gである低毒化SL含有組成物を調製することを特徴とする、(IV-1)〜(IV-5)のいずれかに記載する低毒化方法。   (IV-6) Low hydroxyl group value of ethanol equivalent 1g equivalent is 545-630 mgKOH / g, preferably 560-630 mgKOH / g, more preferably 575-630 mgKOH / g, particularly preferably 575-585 mgKOH / g A method for reducing poisoning according to any one of (IV-1) to (IV-5), wherein a composition containing a poisoned SL is prepared.

(IV-7)(1)脂肪酸及び/又はヒドロキシ脂肪酸を除去する工程が、溶剤抽出法、吸着法、及びクロマトグラフィーから選択される少なくとも一つの処理である、(IV-1)〜(IV-6)のいずれかに記載する低毒化方法。   (IV-7) (1) The step of removing fatty acid and / or hydroxy fatty acid is at least one treatment selected from a solvent extraction method, an adsorption method, and chromatography, (IV-1) to (IV- 6) The method for reducing toxicity described in any one of the above.

(IV-8)溶剤抽出法がジエチルエーテルを溶剤とする抽出法であり;吸着法が吸着剤として活性炭、シリカゲル、ゼオライト、イオン交換樹脂及び酸化アルミナを用いた方法であり;クロマトグラフィーが固定相としてODS樹脂、移動相としてエタノール水溶液を用いた逆相カラムクロマトグラフィーである(IV-7)に記載する低毒化方法。   (IV-8) Solvent extraction method is extraction method using diethyl ether as solvent; adsorption method is a method using activated carbon, silica gel, zeolite, ion exchange resin and alumina oxide as adsorbent; chromatography is stationary phase As described in (IV-7), which is reverse phase column chromatography using an ODS resin as a mobile phase and an aqueous ethanol solution as a mobile phase.

(IV-9)(2)SLに結合したアセチル基を脱離する工程が、加水分解処理、及び酵素処理から選択される少なくとも一つの処理である、(IV-7)〜(IV-8)のいずれかに記載する低毒化方法。   (IV-9) (2) The step of removing the acetyl group bonded to SL is at least one treatment selected from hydrolysis treatment and enzyme treatment, (IV-7) to (IV-8) The method for reducing poisoning according to any one of the above.

(IV-10)酵素処理がアセチルエステラーゼを用いた処理である、(IV-9)に記載する低毒化方法。   (IV-10) The method for reducing poisoning according to (IV-9), wherein the enzyme treatment is treatment using acetylesterase.

(IV-11)(3)ラクトン型SLを除去する工程が、加水分解処理、及びクロマトグラフィーから選択される少なくとも一つの処理である、(IV-7)〜(IV-10)のいずれかに記載する低毒化方法。   (IV-11) (3) The step of removing lactone-type SL is at least one treatment selected from hydrolysis treatment and chromatography, and any of (IV-7) to (IV-10) Detoxification method to be described.

(IV-12)クロマトグラフィーが固定相としてODS樹脂、移動相としてエタノール水溶液を用いた逆相カラムクロマトグラフィーである(IV-11)に記載する低毒化方法。   (IV-12) The method for reducing toxicity described in (IV-11), wherein the chromatography is reverse phase column chromatography using an ODS resin as a stationary phase and an aqueous ethanol solution as a mobile phase.

本発明によれば細胞毒性の低いSL含有組成物を提供することができる。当該低毒性SL含有組成物は、界面活性作用を有するとともに、細胞毒性、並びに粘膜や創傷部位に対する刺激性が極めて少ないため(低毒性、低刺激性)、皮膚、眼粘膜、口腔粘膜、及びそれ以外の粘膜部位(咽喉、鼻腔、耳腔、生殖器、肛門など)、並びに創傷部位(傷口及び炎症部等)に適用される化粧品、医薬品、医薬部外品、及び医療機器等に好適に配合することができる。具体的には、眼粘膜に適用される点眼薬、洗眼液およびコンタクトレンズ用装着液などのアイケア製品、口腔粘膜に適用される口腔用製剤、並びに鼻粘膜に適用される点鼻薬等の鼻腔用製剤などに好適に配合することができる。   According to the present invention, an SL-containing composition having low cytotoxicity can be provided. The low-toxic SL-containing composition has a surface-active effect, and has extremely low cytotoxicity and irritation to mucous membranes and wound sites (low toxicity and low irritation), so that the skin, ocular mucosa, oral mucosa, and the Suitable for cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs, medical devices, etc. applied to other mucosal sites (throat, nasal cavity, ear cavity, genital organs, anus, etc.) and wound sites (such as wounds and inflamed areas) be able to. Specifically, eye care products such as eye drops applied to the ocular mucosa, eye wash and contact lens mounting liquids, oral preparations applied to the oral mucosa, and nasal drops such as nasal drops applied to the nasal mucosa It can mix | blend suitably for a formulation etc.

このため、当該本発明の低毒性(低刺激性)SL含有組成物を含有する化粧品、医薬品および医薬部外品は、皮膚のみならず、眼粘膜、口腔粘膜、及びそれ以外の粘膜部位(咽喉、鼻腔、耳腔、生殖器、肛門など)、並びに創傷部位(傷口及び炎症部等)に好適に使用することができる。   For this reason, cosmetics, pharmaceuticals and quasi-drugs containing the low-toxicity (hypoallergenic) SL-containing composition of the present invention include not only the skin but also the ocular mucosa, oral mucosa, and other mucosal sites (throats). Nasal cavity, ear cavity, genital organs, anus, etc.) and wound sites (such as wounds and inflamed areas).

また本発明の低毒性(低刺激性)SL含有組成物は保湿作用、皮膚や毛髪に対する保護作用、並びに皮膚バリア機能改善作用を有しているため、上記粘膜部位や創傷部位だけでなく、皮膚や毛髪を保護したあり潤いを与えるために好適に使用することができる。   In addition, the low toxicity (low irritation) SL-containing composition of the present invention has a moisturizing action, a protective action for skin and hair, and an action for improving the skin barrier function. It can be preferably used to protect the hair and moisturize it.

参考製造例2及び実施例1〜10で得られたSL含有組成物(粗精製SL含有組成物−2,実施例品1〜10)、Tween 20、および市販アニオン界面活性剤A〜C(A:「アミノソフトLT-12」(30%):味の素(株)製、B:「サーファクチンNa」(100%):和光純薬工業(株)製、C:「リポランLJ-441」(37%):ライオン(株)製))、SLSについて、細胞毒性試験から算出した細胞致死濃度(IC50)と試験例2で算出したCMCをプロットしたグラフを示す。SL-containing compositions obtained in Reference Production Example 2 and Examples 1 to 10 (crudely purified SL-containing composition-2, Example products 1 to 10), Tween 20, and commercially available anionic surfactants A to C (A : “Aminosoft LT-12” (30%): Ajinomoto Co., Inc., B: “Surfactin Na” (100%): Wako Pure Chemical Industries, Ltd., C: “Lipolane LJ-441” (37 %): Manufactured by Lion Co., Ltd.)) and SLS, the cell lethality concentration (IC 50 ) calculated from the cytotoxicity test and the CMC calculated in Test Example 2 are plotted. ヒトの上腕部をSDSで処理して作成した肌荒れの回復効果を示した図である。It is the figure which showed the recovery effect of the rough skin created by processing the upper arm part of human by SDS. (A)健常毛に対する毛髪保護効果を示した図である。(B)損傷毛に対する毛髪修復効果を示した図である。(A) It is the figure which showed the hair protection effect with respect to healthy hair. (B) It is the figure which showed the hair repair effect with respect to damaged hair.

(I)一般的なソホロリピッド(公知SL)
ソホロリピッド(SL)は、一般的にソホロース又はヒドロキシル基が一部アセチル化したソホロースと、ヒドロキシ脂肪酸とからなる糖脂質である。なお、ソホロースとは、β1→2結合した2分子のブドウ糖からなる糖である。ヒドロキシ脂肪酸とは、ヒドロキシル基を有する脂肪酸である。また、SLは、ヒドロキシ脂肪酸のカルボキシル基が遊離した酸型(下記一般式(1))と、分子内のソホロースが結合したラクトン型(下記一般式(2))とに大別される。ある種の酵母(SL産生酵母)の発酵によって得られるSLは、通常、下記一般式(1)で示されるSLと一般式(2)で示されるSLの混合物であり、脂肪酸鎖長(R)が異なるもの、ソホロースの6’(R)及び6”位(R)がアセチル化あるいはプロトン化されたものなど、30種以上の構造同族体の集合体として得られる。
(I) General sophorolipid (known SL)
Sophorolipid (SL) is a glycolipid generally composed of sophorose or sophorose having a partially acetylated hydroxyl group and a hydroxy fatty acid. Sophorose is a sugar composed of two molecules of glucose linked by β1 → 2. Hydroxy fatty acid is a fatty acid having a hydroxyl group. SL is broadly classified into an acid type in which the carboxyl group of hydroxy fatty acid is liberated (the following general formula (1)) and a lactone type in which sophorose in the molecule is bound (the following general formula (2)). SL obtained by fermentation of a certain kind of yeast (SL-producing yeast) is usually a mixture of SL represented by the following general formula (1) and SL represented by the general formula (2), and the fatty acid chain length (R 3 ) Are different, and the 6 ′ (R 2 ) and 6 ″ positions (R 1 ) of sophorose are acetylated or protonated, and are obtained as an aggregate of 30 or more structural homologues.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

Figure 0006157524
Figure 0006157524

前記一般式(1)又は(2)において、Rは水素原子あるいはメチル基のいずれかである。R及びRはそれぞれ独立して、水素原子又はアセチル基である。Rは飽和脂肪族炭化水素鎖、又は二重結合を少なくとも一個有する不飽和脂肪族炭化水素鎖であり、一以上の置換基を有していても良い。該置換基は、例えば、ハロゲン原子、水酸基、低級(C1〜6)アルキル基、ハロ低級(C1〜6)アルキル基、ヒドロキシ低級(C1〜6)アルキル基、ハロ低級(C1〜6)アルコキシ基等が挙げられる。また、Rの炭化水素鎖の炭素数は、通常11〜20、好ましくは13〜17、より好ましくは14〜16である。ここでハロゲン原子またはアルキル基やアルコキシ基に結合するハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子が挙げられる。 In the general formula (1) or (2), R 0 is either a hydrogen atom or a methyl group. R 1 and R 2 are each independently a hydrogen atom or an acetyl group. R 3 is a saturated aliphatic hydrocarbon chain or an unsaturated aliphatic hydrocarbon chain having at least one double bond, and may have one or more substituents. Examples of the substituent include a halogen atom, a hydroxyl group, a lower (C 1-6 ) alkyl group, a halo lower (C 1-6 ) alkyl group, a hydroxy lower (C 1-6 ) alkyl group, and a halo lower (C 1 -C) . 6 ) An alkoxy group and the like can be mentioned. The number of carbon atoms of the hydrocarbon chain of R 3 is usually 11 to 20, preferably 13 to 17, more preferably 14 to 16. Here, examples of the halogen atom bonded to the halogen atom or the alkyl group or alkoxy group include a fluorine atom, a chlorine atom, a bromine atom, and an iodine atom.

SL産生酵母の発酵により得られる培養液には、SLが、通常、前記一般式(1)で示される酸型SLと前記一般式(2)で示されるラクトン型SLとの混合物として存在している。当該培養液中に含まれる酸型SLとラクトン型SLとの割合は、通常45:55〜10:90(乾燥重量比)を挙げることができる。   In a culture solution obtained by fermentation of SL-producing yeast, SL is usually present as a mixture of acid type SL represented by general formula (1) and lactone type SL represented by general formula (2). Yes. The ratio of the acid type SL and the lactone type SL contained in the culture solution can usually include 45:55 to 10:90 (dry weight ratio).

SL産生酵母としては、キャンディダ・ボンビコーラ(Candida bombicola)を好適に挙げることができる。なお、キャンディダ属は、現在スタメレラ(Starmerella)属という名称に変更されている。当該酵母は、SL(酸型、ラクトン型)を著量生産することが知られている公知のSL産生酵母である〔Canadian Journal of Chemistry, 39,846(1961)(注:当該文献に記載されているトルロプシス属は、キャンディダ属に該当するが、上記するように、現在スタメレラ(Starmerella)属に分類されている。)、Applied and Environmental Microbiology, 47,173(1984)など]。なお、キャンディダ(スタメレラ)・ボンビコーラは生物資源バンクであるATCC(American Type Culture Collection)に登録されており、そこから入手することができる(Candida bombicola ATCC22214など)。また、本発明の低毒性SL含有組成物の製造には、SL(酸型、ラクトン型)を産生することが知られているキャンディダ属(スタメレラ属)に属する他のSL産生酵母を使用することもできる。かかるSL産生酵母として、例えばキャンディダ・マグノリエ(Candida magnoliae)、キャンディダ・グロペンギッセリ(Candida gropengisseri)、及びキャンディダ・アピコーラ(Candida apicola)、キャンディダ・ペトロフィラム(Candida petrophilum)、キャンディダ・ボゴリエンシス(Candida bogoriensis)、キャンディダ・バチスタエ(Candida batistae)を挙げることができる。なお、これらの酵母の培養液中にSLが比較的多量に生産されることは既に報告されている(R. Hommel, Biodegradation, 1, 107(1991))。   A preferred example of the SL-producing yeast is Candida bombicola. The genus Candida has been changed to the name of the genus Starmerella. The yeast is a known SL-producing yeast known to produce a significant amount of SL (acid type, lactone type) [Canadian Journal of Chemistry, 39,846 (1961) (Note: described in the literature) The genus Torlopsis falls under the genus Candida, but as described above, it is currently classified into the genus Starmerella.), Applied and Environmental Microbiology, 47, 173 (1984), etc.]. Candida (Starmelera) and Bonbicola are registered in the biological resource bank ATCC (American Type Culture Collection), and can be obtained from them (Candida bombicola ATCC22214, etc.). For the production of the low-toxic SL-containing composition of the present invention, another SL-producing yeast belonging to the genus Candida (Starmelera), which is known to produce SL (acid type, lactone type), is used. You can also Examples of such SL-producing yeast include Candida magnoliae, Candida gropengisseri, Candida apicola, Candida petrophilum, and Candida bogoriensis. bogoriensis) and Candida batistae. It has already been reported that SL is produced in a relatively large amount in the culture medium of these yeasts (R. Hommel, Biodegradation, 1, 107 (1991)).

またキャンディダ・フロリコーラ(Candida floricola)ZM−1502株(FERM P−21133)及びキャンディダ・フロリコーラ(Candida floricola)NBRC10700T株は、ジアセチル基を有する酸型SLのみを選択的に生産するSL産生酵母であることが知られている(特開2008−247845号公報)。従って、酸型SLを選択的に製造する場合は、当該SL産生酵母を好適に使用することができる。但し、前述するように当該酸型SLはジアセチル基を有するため、後述する本発明の低毒性SL含有組成物を得るためには脱アセチル化処理が必要である。   Candida floricola (Candida floricola) strain ZM-1502 (FERM P-21133) and Candida floricola (Candida floricola) NBRC10700T strain are SL-producing yeasts that selectively produce only acid type SL having a diacetyl group. It is known (Japanese Patent Laid-Open No. 2008-247845). Therefore, when the acid form SL is selectively produced, the SL-producing yeast can be preferably used. However, since the acid type SL has a diacetyl group as described above, a deacetylation treatment is required to obtain the low-toxic SL-containing composition of the present invention described later.

これらのSL産生酵母の培養には、炭素源としてグルコース等の糖類(親水性基質)、並びに脂肪酸、脂肪酸トリグリセリド等の脂肪酸エステル類、または脂肪酸を構成成分として含む植物油等の油脂類(疎水性基質)を含有する培地が用いられる。培地のその他の成分は、特に制限はなく、酵母に対して一般に用いられる培地成分から適宜選定することができる。   For the cultivation of these SL-producing yeasts, sugars such as glucose (hydrophilic substrate) as a carbon source, fatty acids such as fatty acids and fatty acid triglycerides, or fats and oils such as vegetable oils containing fatty acids as constituents (hydrophobic substrates) ) Is used. Other components of the medium are not particularly limited and can be appropriately selected from medium components generally used for yeast.

(II)低毒性SL含有組成物
本発明が対象とする低毒性SL含有組成物は、前述する従来公知のSL組成物とは、少なくとも細胞毒性(細胞刺激性)及び皮膚保湿作用の点で相違し、下記の特徴を備えている。
(II) Low-toxic SL-containing composition The low-toxic SL-containing composition targeted by the present invention is different from the above-described conventionally known SL compositions in at least cytotoxicity (cell irritation) and skin moisturizing action. However, it has the following features.

(a)SL産生酵母培養物に由来する酸型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を少なくとも含有し、酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量を100質量%とした場合に、それぞれの割合が乾燥重量に換算して下記である;
(1)酸型SL:94〜99.99質量%、
(2)ラクトン型SL:0〜2質量%、
(3)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量:0.01〜4質量%、
(b)低毒性SL産生酵母培養物に含まれる酸型SL100質量部に対するラクトン型SLの割合、または脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合がそれぞれ0〜2.12または0.01〜4.25質量部である、
(c)低毒性SL産生酵母培養物に含まれる酸型SL及びラクトン型SLはいずれもアセチル基を有しない。
(A) It contains at least acid type SL, fatty acid, and hydroxy fatty acid derived from SL-producing yeast culture, and the total amount of acid type SL, lactone type SL, fatty acid, and hydroxy fatty acid is 100% by mass. Is converted to dry weight as follows:
(1) Acid type SL: 94-99.99 mass%,
(2) Lactone type SL: 0 to 2% by mass,
(3) Total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid: 0.01-4% by mass,
(B) The ratio of the lactone type SL to the 100 parts by mass of the acid type SL contained in the low-toxic SL-producing yeast culture, or the ratio of the fatty acid and the hydroxy fatty acid (total amount) is 0 to 2.12 or 0.01 to 4.25, respectively. Part by mass,
(C) Neither acid-type SL nor lactone-type SL contained in a low-toxic SL-producing yeast culture has an acetyl group.

以下、これらについて説明する。
(a)(1)酸型SLを乾燥物換算で94〜99.99質量%の割合で含有する
これは低毒性SL含有組成物中の酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%中に含まれる酸型SLの割合(乾燥物重量)である。これは、低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれる酸型SLの割合に相当する。従って、低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれる酸型SLの割合は94〜99.99質量%であるということができる。当該酸型SLの割合として、好ましくは96.1質量%以上、より好ましくは97.9質量%以上、特に好ましくは99.31質量%以上である。
Hereinafter, these will be described.
(A) (1) Containing acid type SL at a ratio of 94 to 99.99% by mass in terms of dry matter, this is the total amount of acid type SL, lactone type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid in the composition containing low toxicity SL It is a ratio (dry matter weight) of acid type SL contained in 100 mass%. This corresponds to the ratio of the acid form SL contained in 100% by mass of the ethanol-soluble component of the low-toxic SL-containing composition. Therefore, it can be said that the ratio of acid-type SL contained in 100 mass% of ethanol soluble parts of a low toxicity SL containing composition is 94-99.99 mass%. The ratio of the acid type SL is preferably 96.1% by mass or more, more preferably 97.9% by mass or more, and particularly preferably 99.31% by mass or more.

なお、本発明の低毒性SL含有組成物には、酸型SLを95〜99.86質量%の割合で含む低毒性SL含有組成物が含まれるが(実施例1〜10)、これらは本発明の一態様であり、これらに限定されるものではない。   The low-toxic SL-containing composition of the present invention includes a low-toxic SL-containing composition containing acid SL at a ratio of 95 to 99.86% by mass (Examples 1 to 10). It is one aspect of the invention and is not limited thereto.

当該酸型SLの割合は、低毒性SL含有組成物のエステル価及びエーテル抽出物含量から算出することができる。後述するように、本発明において「エステル価」及び「エーテル抽出物含量」は、それぞれ低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL、ラクトン型SL、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%中に含まれる「ラクトン型SL」の割合及び「脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸」の割合に相当する。従って、100からこれら「エステル価」及び「エーテル抽出物含量」の総和を引いた値が、低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SLの割合(質量%)に相当することになる。   The proportion of the acid type SL can be calculated from the ester value and the ether extract content of the low-toxic SL-containing composition. As will be described later, in the present invention, “ester value” and “ether extract content” are the acid type SL, lactone type SL, and the total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid contained in the low-toxic SL-containing composition, respectively, of 100% by mass. Corresponds to the ratio of “lactone type SL” and the ratio of “fatty acid and hydroxy fatty acid”. Therefore, a value obtained by subtracting the sum of these “ester value” and “ether extract content” from 100 corresponds to the ratio (mass%) of the acid type SL contained in the low-toxic SL-containing composition.

(a)(2)ラクトン型SLを乾燥物換算で0〜2質量%の割合で含有する
これは低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%中に含まれるラクトン型SLの割合(乾燥物重量)である。これは、低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれるラクトン型SLの割合に相当する。従って、低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれるラクトン型SLの割合は0〜2質量%であるということができる。当該ラクトン型SLの割合は、少ないほうが毒性の低いSL含有組成物を取得するうえで好ましいが、0より多く2質量%以下の範囲で或る程度含まれているほうが表面張力低下能が良好であり、界面活性剤としての性能(濡れ性、可溶化力、洗浄力、起泡性)に優れる(試験例5参照)。
(A) (2) Containing 0 to 2 mass% of lactone type SL in terms of dry matter, this is a total amount of acid type SL, lactone type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid contained in the low toxicity SL-containing composition 100 It is the ratio (dry matter weight) of the lactone type SL contained in mass%. This corresponds to the proportion of lactone-type SL contained in 100% by mass of the ethanol-soluble component of the low-toxic SL-containing composition. Therefore, it can be said that the ratio of lactone-type SL contained in 100 mass% of ethanol soluble parts of a low toxicity SL containing composition is 0-2 mass%. A smaller lactone-type SL ratio is preferable in obtaining an SL-containing composition having low toxicity, but a surface tension reducing ability is better if it is contained to some extent within a range of more than 0 and 2% by mass or less. Yes, it is excellent in performance as a surfactant (wetting property, solubilizing power, detergency, foaming property) (see Test Example 5).

このため、低毒性を主眼とした場合の、低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれるラクトン型SLの割合(上限、下限)は、以下の通りである:
上限:好ましくは1.5質量%以下、より好ましくは0.9質量%以下、さらに好ましくは0.45質量%以下、特に好ましくは0.1質量%以下、
下限:好ましくは0質量%。なお、SL産生酵母としてラクトン型SLを産生する酵母を使用する場合には0.01質量%を挙げることができる。
For this reason, the ratio (upper limit, lower limit) of the lactone type SL contained in 100% by mass of the ethanol-soluble component of the low-toxic SL-containing composition when focusing on low toxicity is as follows:
Upper limit: preferably 1.5% by mass or less, more preferably 0.9% by mass or less, further preferably 0.45% by mass or less, particularly preferably 0.1% by mass or less,
Lower limit: Preferably 0% by mass. In addition, when using yeast which produces lactone type | mold SL as SL production yeast, 0.01 mass% can be mentioned.

一方、界面活性剤としての性能(濡れ性、可溶化力、洗浄力、起泡性)(以下、これらを総称して「界面活性能」という)を良好に保有しながらも、低毒性に優れる低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれるラクトン型SLの割合(上限、下限)は、以下の通りである:
上限:好ましくは2質量%以下、より好ましくは1.5質量%以下、
下限:好ましくは0質量%より多く、より好ましくは0.1質量%以上、さらに好ましくは0.8質量%以上。
On the other hand, it possesses excellent performance as a surfactant (wetability, solubilizing power, detergency, foaming property) (hereinafter collectively referred to as “surfactant activity”) and is excellent in low toxicity. The ratio (upper limit, lower limit) of the lactone type SL contained in 100% by mass of the ethanol-soluble component of the low-toxic SL-containing composition is as follows:
Upper limit: preferably 2% by mass or less, more preferably 1.5% by mass or less,
Lower limit: preferably more than 0% by mass, more preferably 0.1% by mass or more, still more preferably 0.8% by mass or more.

なお、本発明の低毒性SL含有組成物には、ラクトン型SLを0.04〜2.0質量%の割合で含む低毒性SL含有組成物が含まれる(実施例1〜10)。但し、これらは本発明の一態様であり、これらに限定されるものではない。   In addition, the low toxicity SL containing composition of this invention contains the low toxicity SL containing composition which contains lactone type SL in the ratio of 0.04-2.0 mass% (Examples 1-10). However, these are one aspect | mode of this invention, and are not limited to these.

当該ラクトン型SLの割合は、低毒性SL含有組成物のエステル価(mg KOH/g)から求めることができる。   The ratio of the lactone type SL can be determined from the ester value (mg KOH / g) of the low-toxic SL-containing composition.

具体的には、本発明でいう「エステル価(mg KOH/g)」とは、エタノール可溶分1gに相当する試料(低毒性SL含有組成物)に含まれるエステルを完全けん化するのに要する水酸化カリウムのmg数であり、これにより当該試料(低毒性SL含有組成物)に含まれるラクトン環のエステル結合の割合を把握することができる。当該エステル価(mg KOH/g)は、SL含有組成物中に含まれるSLの総量(100質量%)に占めるラクトン型SLの割合と相関しており、当該エステル価からエタノール可溶分100質量%中に占めるラクトン型SLの割合を算出することができる。   Specifically, the “ester value (mg KOH / g)” as used in the present invention is required to completely saponify the ester contained in a sample (low-toxic SL-containing composition) corresponding to 1 g of ethanol-soluble matter. This is the number of mg of potassium hydroxide, whereby the ratio of the ester bond of the lactone ring contained in the sample (low-toxic SL-containing composition) can be grasped. The ester value (mg KOH / g) correlates with the proportion of lactone type SL in the total amount (100% by mass) of SL contained in the SL-containing composition. % Of the lactone type SL in% can be calculated.

ここでエタノール可溶分は、実質的にはSL含有組成物に含まれる酸型SL、ラクトン型SL並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量に相当するため、上記エステル価を求めることで、酸型SL、ラクトン型SL並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%中に含まれる酸型SLの算出することができる。   Here, the ethanol-soluble component substantially corresponds to the total amount of the acid type SL, lactone type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid contained in the SL-containing composition, so that the acid value SL, The lactone type SL and the acid type SL contained in 100% by mass of the total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid can be calculated.

当該「エステル価(mg KOH/g)」は、日本油化学協会(日本)が定めている基準油脂分析試験法(2.3.3-1996)に従って測定することができる。その詳細は、試験例1で説明する通りである。本発明の低毒性SL含有組成物のエステル価(mg KOH/g)は通常0〜2mgKOH/gである。低毒化という点からは、好ましくは0〜1.5mgKOH/g、より好ましくは0.01〜0.9mgKOH/g、特に好ましくは0〜0.45mgKOH/gである。一方、界面活性剤としての性能(濡れ性、可溶化力、洗浄力、起泡性)を良好に保有しながら低毒化を達成する目的からは、好ましくは0より多く(例えば、0.01mgKOH/g)2mgKOH/g以下、より好ましくは0.1〜2mgKOH/g、さらに好ましくは0.1〜1.5mgKOH/g、特に好ましくは0.8〜1.5mgKOH/gである。   The “ester value (mg KOH / g)” can be measured according to the standard method for analyzing fats and oils (2.3.3-1996) established by the Japan Oil Chemical Association (Japan). The details are as described in Test Example 1. The ester value (mg KOH / g) of the low toxicity SL-containing composition of the present invention is usually 0 to 2 mg KOH / g. From the viewpoint of reducing the poisoning, it is preferably 0 to 1.5 mgKOH / g, more preferably 0.01 to 0.9 mgKOH / g, and particularly preferably 0 to 0.45 mgKOH / g. On the other hand, for the purpose of achieving low toxicity while maintaining good performance (wetting property, solubilizing power, detergency, foaming property) as a surfactant, it is preferably more than 0 (for example, 0.01 mg KOH). / G) 2 mgKOH / g or less, more preferably 0.1 to 2 mgKOH / g, still more preferably 0.1 to 1.5 mgKOH / g, and particularly preferably 0.8 to 1.5 mgKOH / g.

なお、低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SLとラクトン型SLの総量を100質量%とした場合、これに含まれる酸型SLとラクトン型SLの割合(酸型SL:ラクトン型SL、重量比)としては、98:2〜100:0、好ましくは98.5:1.5〜100:0、より好ましくは99:1〜100:0である。なお、SL産生酵母としてラクトン型SLを産生する酵母を使用する場合、酸型SLが100質量%にならない場合もあり、この場合は酸型SLとラクトン型SLの割合(重量比)が99.99:0.01であってもよい。   In addition, when the total amount of acid type SL and lactone type SL contained in the low-toxic SL-containing composition is 100% by mass, the ratio of acid type SL and lactone type SL contained therein (acid type SL: lactone type SL, The weight ratio is 98: 2 to 100: 0, preferably 98.5: 1.5 to 100: 0, and more preferably 99: 1 to 100: 0. In addition, when using yeast which produces lactone type SL as SL production yeast, acid type SL may not become 100 mass%, and in this case, the ratio (weight ratio) of acid type SL and lactone type SL is 99. 99: 0.01 may be sufficient.

(a)(3)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を乾燥物換算で総量0.01〜4質量%の割合で含有する
これは低毒性SL含有組成物の酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%中に含まれる脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の割合(乾燥物重量)である。これは、低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれる脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の合計の割合に相当する。従って、低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分100質量%中に含まれる脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の合計の割合は0.01〜4質量%であるということができる。
(A) (3) Fatty acid and hydroxy fatty acid are contained in a ratio of the total amount of 0.01 to 4% by mass in terms of dry matter. This is a low-toxic SL-containing composition of acid type SL, lactone type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid. It is the ratio (dry matter weight) of fatty acids and hydroxy fatty acids contained in a total amount of 100% by mass. This corresponds to the total proportion of fatty acid and hydroxy fatty acid contained in 100% by mass of the ethanol-soluble component of the low-toxic SL-containing composition. Therefore, it can be said that the total ratio of the fatty acid and the hydroxy fatty acid contained in 100% by mass of the ethanol-soluble component of the low-toxic SL-containing composition is 0.01 to 4% by mass.

ここで対象とする脂肪酸は、SL産生酵母の培養に使用する培地に含まれる脂肪酸であって、実施例で説明するエーテル抽出物含量の測定方法により当該エーテル抽出物として算出される脂肪酸である。具体的には、炭素数6〜24の飽和または不飽和脂肪酸である。より具体的にはカプロン酸(C6)、エナント酸(C7)、カプリル酸(C8)、ペラルゴン酸(C9)、カプリン酸(C10)、ラウリン酸(C12)、ミリスチン酸(C14)、ペンタデシル酸(C15)、パルミチン酸(C16)、マルガリン酸(C17)、ステアリン酸(C18)、およびアラキジン酸(C20)、ドコサン酸(C22)、リグノセリン酸(C24)などの飽和脂肪酸;パルミトレイン酸(C16:1)、オレイン酸(C18:1)、リノール酸(C18:2)、およびリノレン酸(C18:3)、アラキドン酸(C20:4)、エイコサペンタエン酸(C20:5)、ドコサヘキエン酸(C22:6)などの不飽和脂肪酸が挙げられる。   The target fatty acid here is a fatty acid contained in a medium used for culturing SL-producing yeast, and is a fatty acid calculated as the ether extract by the method for measuring an ether extract content described in Examples. Specifically, it is a saturated or unsaturated fatty acid having 6 to 24 carbon atoms. More specifically, caproic acid (C6), enanthic acid (C7), caprylic acid (C8), pelargonic acid (C9), capric acid (C10), lauric acid (C12), myristic acid (C14), pentadecylic acid ( Saturated fatty acids such as C15), palmitic acid (C16), margaric acid (C17), stearic acid (C18), arachidic acid (C20), docosanoic acid (C22), lignoceric acid (C24); palmitoleic acid (C16: 1 ), Oleic acid (C18: 1), linoleic acid (C18: 2), and linolenic acid (C18: 3), arachidonic acid (C20: 4), eicosapentaenoic acid (C20: 5), docosahexynoic acid (C22: 6) ) And other unsaturated fatty acids.

またここで対象とするヒドロキシ脂肪酸としては、上記の脂肪酸において少なくとも1つの水素原子がヒドロキシ基で置換されてなる脂肪酸を挙げることができる。   Moreover, as a hydroxy fatty acid made into object here, the fatty acid by which at least 1 hydrogen atom is substituted by the hydroxy group in said fatty acid can be mentioned.

当該脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合は、上限として好ましくは2.4質量%以下、より好ましくは1.2質量%以下、特に好ましくは0.24質量%以下である。また下限としては好適には0.01質量%を挙げることができる。脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の量はできるだけ少ないほうが毒性の低いSL含有組成物を取得するうえで望ましいものの、本発明においては0.01〜4質量%の範囲で或る程度含まれているほうが、酸型SLの界面活性能が維持されるという利点がある。拘束されるものではないが、その理由として、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸が被験試料中で一種のキレート効果を発揮することが挙げられる。具体的には、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸のキレート作用により、被験試料中に含まれるK、Na、Ca及びMg等の金属イオンが補足される結果、当該金属イオンと酸型SLとの塩形成が抑制されて、酸型SLの界面活性剤としての効果が維持されるものと考えられる。なお、本発明の低毒性SL含有組成物には、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を総量で0.1〜4質量%の割合で含む低毒性SL含有組成物が含まれる(実施例1〜10)。但し、これらは本発明の一態様であり、これらに限定されるものではない。   The ratio of the fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) is preferably 2.4% by mass or less, more preferably 1.2% by mass or less, and particularly preferably 0.24% by mass or less as the upper limit. Moreover, as a minimum, 0.01 mass% can be mentioned suitably. Although the amount of fatty acid and hydroxy fatty acid is preferably as small as possible in order to obtain a SL-containing composition having low toxicity, in the present invention, it is more preferable that the amount of the fatty acid and hydroxy fatty acid is contained in a range from 0.01 to 4% by mass. There is an advantage that the surface activity of SL is maintained. Although not restrained, the reason is that fatty acids and hydroxy fatty acids exhibit a kind of chelating effect in the test sample. Specifically, the chelating action of fatty acid and hydroxy fatty acid supplements metal ions such as K, Na, Ca and Mg contained in the test sample, thereby suppressing salt formation between the metal ion and acid type SL. Thus, it is considered that the effect of the acid type SL as a surfactant is maintained. In addition, the low toxicity SL containing composition of this invention contains the low toxicity SL containing composition which contains a fatty acid and a hydroxy fatty acid in the ratio of 0.1-4 mass% in total (Examples 1-10). However, these are one aspect | mode of this invention, and are not limited to these.

なお、本発明の低毒性SL含有組成物に含まれる脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の中で主流をなすものは炭素数16及び18の飽和及び不飽和脂肪酸である。具体的には低毒性SL含有組成物に含まれる主な脂肪酸は、炭素数16の飽和脂肪酸及び炭素数18の二重結合が1または2の不飽和脂肪酸である。また、低毒性SL含有組成物に含まれる主なヒドロキシ脂肪酸は、炭素数16の飽和脂肪酸及び炭素数18の二重結合が1または2の不飽和脂肪酸である(試験例1、表2参照)。このため、上記脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合は、実質的にこれら炭素数16及び18の脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合であるということもできる。   Among the fatty acids and hydroxy fatty acids contained in the low-toxic SL-containing composition of the present invention, the mainstream are saturated and unsaturated fatty acids having 16 and 18 carbon atoms. Specifically, the main fatty acids contained in the low-toxic SL-containing composition are a saturated fatty acid having 16 carbon atoms and an unsaturated fatty acid having 1 or 2 double bonds having 18 carbon atoms. The main hydroxy fatty acid contained in the low-toxic SL-containing composition is a saturated fatty acid having 16 carbon atoms and an unsaturated fatty acid having 1 or 2 double bonds having 18 carbon atoms (see Test Example 1 and Table 2). . For this reason, it can also be said that the ratio of the fatty acid and the hydroxy fatty acid (total amount) is substantially the ratio of the fatty acid having 16 and 18 carbon atoms and the hydroxy fatty acid (total amount).

当該脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の割合は、低毒性SL含有組成物のエーテル抽出物含量(%)から求めることができる。   The ratio of the fatty acid and hydroxy fatty acid can be determined from the ether extract content (%) of the low toxicity SL-containing composition.

具体的には、本発明でいう「エーテル抽出物含量(%)」とは、エタノール可溶分1gに相当する試料(低毒性SL含有組成物)からエーテルを用いて抽出される物質の割合(質量%)であり、これにより当該試料(低毒性SL含有組成物)に含まれる脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の割合を把握することができる。つまり、当該「エーテル抽出物含量(%)」はエタノール可溶分100質量%に占める脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の割合と相関しているため、当該「エーテル抽出物含量(%)」からエタノール可溶分100質量%に占める当該脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の割合を算出することができる。前述するように、エタノール可溶分は、実質的にはSL含有組成物に含まれる酸型SL、ラクトン型SL並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量に相当するため、上記「エーテル抽出物含量(%)」を求めることで、酸型SL、ラクトン型SL並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%中に含まれる脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の量を算出することができる。   Specifically, the “ether extract content (%)” referred to in the present invention is the ratio of a substance extracted with ether from a sample (low-toxic SL-containing composition) corresponding to 1 g of ethanol-soluble matter ( Thus, the ratio of fatty acids and hydroxy fatty acids contained in the sample (low-toxic SL-containing composition) can be grasped. That is, since the “ether extract content (%)” correlates with the proportion of fatty acid and hydroxy fatty acid in 100% by mass of the ethanol-soluble component, the ethanol-soluble component is determined from the “ether extract content (%)”. The ratio of the fatty acid and hydroxy fatty acid in 100% by mass can be calculated. As described above, the ethanol-soluble component substantially corresponds to the total amount of acid type SL, lactone type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid contained in the SL-containing composition. The amount of fatty acid and hydroxy fatty acid contained in 100% by mass of the total amount of acid type SL, lactone type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid can be calculated.

当該「エーテル抽出物含量(%)」の測定方法の詳細は、試験例1で説明する通りである。本発明の低毒性SL含有組成物の「エーテル抽出物含量(%)」は、通常0.01〜4質量%、好ましくは0.01〜2.4質量%、より好ましくは0.01〜1.2質量%、特に好ましくは0.01〜0.24質量%である。とりわけ、0.1〜4質量%の範囲を例示することができる。   The details of the method for measuring the “ether extract content (%)” are as described in Test Example 1. The “ether extract content (%)” of the low toxicity SL-containing composition of the present invention is usually 0.01 to 4% by mass, preferably 0.01 to 2.4% by mass, more preferably 0.01 to 1%. .2% by mass, particularly preferably 0.01 to 0.24% by mass. In particular, a range of 0.1 to 4% by mass can be exemplified.

(b−1)低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL100質量部に対するラクトン型SLの割合が0〜2.12質量部
当該割合は、低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL及びラクトン型SLの含有量から容易に算出することができる。当該割合は、好ましくは0.01〜1.5質量部、より好ましくは0.01〜1.0質量部である。
(B-1) The ratio of the lactone type SL to 100 parts by mass of the acid type SL contained in the low toxicity SL-containing composition is 0 to 2.12 parts by mass ,
This ratio can be easily calculated from the contents of acid-type SL and lactone-type SL contained in the low-toxic SL-containing composition. The said ratio becomes like this. Preferably it is 0.01-1.5 mass parts, More preferably, it is 0.01-1.0 mass part.

(b−2)低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL100質量部に対する脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が0.01〜4.25質量部
当該割合は、低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の含有量から容易に算出することができる。当該割合は、好ましくは0.05〜2.5質量部、より好ましくは0.1〜1.0質量部である。
(B-2) The ratio of fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) to 100 parts by mass of acid type SL contained in the low-toxic SL-containing composition is 0.01 to 4.25 parts by mass ;
This ratio can be easily calculated from the contents of acid type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid contained in the low-toxic SL-containing composition. The said ratio becomes like this. Preferably it is 0.05-2.5 mass parts, More preferably, it is 0.1-1.0 mass part.

(c)低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL及びラクトン型SLはいずれもアセチル基を有しない
アセチル基を有するSLは、アセチル基を有しないSLに比べて細胞毒性が高い。このことからSLのアセチル基は、酸型SL及びラクトン型SLのいずれも細胞毒性に関係しているものと考えられる。これに対して本発明の低毒性SL含有組成物に含まれる酸型SL及びラクトン型SLはいずれもアセチル基を有しないことを特徴とする。
(C) The acid-type SL and lactone-type SL contained in the low-toxic SL-containing composition have higher cytotoxicity than SL having no acetyl group, as compared to SL having no acetyl group. From this, it is considered that the acetyl group of SL is related to cytotoxicity in both acid type SL and lactone type SL. On the other hand, both the acid type SL and the lactone type SL contained in the low toxicity SL-containing composition of the present invention are characterized by not having an acetyl group.

SL含有組成物に含まれるアセチル基の割合は、SL含有組成物のエタノール可溶分1g相当物の水酸基価から求めることができる。本発明の低毒性SL含有組成物はアセチル基を有しないものである。このため水酸基価はこれを反映するものであればよい。低毒性SL含有組成物の水酸基価(7個分)は、理論上630mgKOH/Lになるものの、実際は反応効率(約90%)を考慮して、通常545〜630mgKOH/Lを挙げることができる。つまり、SL含有組成物のエタノール可溶分1g相当物の水酸基価が545〜630mgKOH/gである場合に、当該SL含有組成物に含まれるSLはアセチル基を有しないと判断することができる。   The ratio of the acetyl group contained in the SL-containing composition can be determined from the hydroxyl value of the equivalent of 1 g ethanol-soluble component of the SL-containing composition. The low toxicity SL-containing composition of the present invention does not have an acetyl group. For this reason, the hydroxyl value should just reflect this. Although the hydroxyl value (for 7) of the low-toxic SL-containing composition is theoretically 630 mgKOH / L, in reality, 545 to 630 mgKOH / L can be usually mentioned in consideration of the reaction efficiency (about 90%). That is, when the hydroxyl value of the 1 g equivalent of the ethanol-soluble component of the SL-containing composition is 545 to 630 mgKOH / g, it can be determined that SL contained in the SL-containing composition does not have an acetyl group.

本発明でいう「水酸基価(mg KOH/g)」とは、エタノール可溶分1gに相当する試料(低毒性SL含有組成物)に含まれる化合物のOH基を完全にアセチル化するために要する水酸化カリウムのmg数であり、これにより当該試料(低毒性SL含有組成物)に含まれるSL中のフリーの水酸基の割合を測定することができる。水酸基価(mg KOH/g)が高ければSL中に含まれるフリーの水酸基の割合が多く(つまりアセチル化されている水酸基が少ない=アセチル基が少ない)、水酸基価(mg KOH/g)が低ければSL中に含まれるフリーの水酸基の割合が低い(つまりアセチル化されている水酸基が多い=アセチル基が多い)という関係にある。   The “hydroxyl value (mg KOH / g)” as used in the present invention is necessary for completely acetylating the OH group of a compound contained in a sample (low-toxic SL-containing composition) corresponding to 1 g of ethanol-soluble matter. This is the number of mg of potassium hydroxide, whereby the proportion of free hydroxyl groups in SL contained in the sample (low-toxic SL-containing composition) can be measured. If the hydroxyl value (mg KOH / g) is high, the percentage of free hydroxyl groups contained in the SL is large (that is, the number of acetylated hydroxyl groups is small = the acetyl group is small), and the hydroxyl value (mg KOH / g) is low. For example, the ratio of free hydroxyl groups contained in SL is low (that is, there are many acetylated hydroxyl groups = many acetyl groups).

当該「水酸基価(mg KOH/g)」は、日本油化学協会(日本)が定めている基準油脂分析試験法(2.3.6.2-1996)に従って測定することができる。その詳細は、試験例1で説明する通りである。本発明の低毒性SL含有組成物の「水酸基価(mg KOH/g)」は、エタノール可溶分1g相当の試料について、前述するように545〜630mgKOH/gであることが望ましい。好ましくは560〜630mgKOH/g、より好ましくは575〜630mgKOH/gである。なお、本発明の低毒性SL含有組成物には、水酸基価が575〜585mgKOH/gである低毒性SL含有組成物が含まれるが(実施例1〜10)、これらは本発明の一態様であり、これらに限定されるものではない
本発明が対象とする低毒性SL含有組成物には、前述する(a)(1)〜(3)、(b)及び(c)の特性に加えて、さらに下記の(d)〜(h)の少なくとも1つの特性を備えるものが含まれる。
The “hydroxyl value (mg KOH / g)” can be measured according to the standard method for analyzing fats and oils (2.3.6.2-1996) established by the Japan Oil Chemical Association (Japan). The details are as described in Test Example 1. As described above, the “hydroxyl value (mg KOH / g)” of the low-toxic SL-containing composition of the present invention is preferably 545 to 630 mg KOH / g for a sample equivalent to 1 g of ethanol-soluble matter. Preferably it is 560-630 mgKOH / g, More preferably, it is 575-630 mgKOH / g. In addition, although the low toxicity SL containing composition of this invention contains the low toxicity SL containing composition whose hydroxyl value is 575-585 mgKOH / g (Examples 1-10), these are 1 aspect of this invention. Yes, the present invention is not limited to the low-toxic SL-containing composition targeted by the present invention, in addition to the characteristics of (a) (1) to (3), (b) and (c) described above. Further, those having at least one of the following characteristics (d) to (h) are included.

(d)エタノール可溶分が10質量%になるように低毒性SL含有組成物を溶解した水溶液の吸光度(OD 440 )が0.001〜1である
本発明が対象とする低毒性SL含有組成物は白色以外の色に着色しているものが含まれる。
(D) Low toxic SL-containing composition targeted by the present invention in which the absorbance (OD 440 ) of an aqueous solution in which a low-toxic SL-containing composition is dissolved so that the ethanol-soluble content is 10% by mass is 0.001-1 The thing contains what is colored in colors other than white.

酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸はいずれも無色または白色を呈することから、低毒性SL含有組成物が着色している場合、当該着色は、酸型SL、ラクトン型SL、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸以外に着色成分を含むことを意味する。なお、着色成分はSL産生酵母の培養物に由来するものであり、この限りにおいて特に制限されるものではない。可能性の一例を挙げるとメラノイジンを例示することができるが、これに拘束されることはない。   Since acid type SL, lactone type SL, fatty acid, and hydroxy fatty acid are all colorless or white, when the low-toxic SL-containing composition is colored, the coloration includes acid type SL, lactone type SL, fatty acid and It means that coloring components are included in addition to hydroxy fatty acids. In addition, a coloring component originates in the culture of SL production yeast, and it will not restrict | limit in particular in this limit. As an example of the possibility, melanoidin can be exemplified, but is not restricted thereto.

なお、本発明の低毒性SL含有組成物の着色程度は、具体的には、低毒性SL含有組成物をアルカリ溶液(2% Na2CO3in 0.1N NaOH)に溶解し、エタノール可溶分の総濃度が10質量%になるように調製した水溶液の波長440nmにおける吸光度(色相:OD440)を測定することで評価することができる。本発明の低毒性SL含有組成物を上記のように調製した場合、その水溶液の色相(OD440)は0.001〜1の範囲にある。好ましくは0.005〜0.8、より好ましくは0.01〜0.6、特に好ましくは0.01〜0.5である。なお、本発明の低毒性SL含有組成物には、色相(OD440)が0.1〜0.4である低毒性SL含有組成物が含まれる(実施例1〜7)。但し、これらは本発明の一態様であり、これらに限定されるものではない。 The coloring degree of the low-toxic SL-containing composition of the present invention is specifically determined by dissolving the low-toxic SL-containing composition in an alkaline solution (2% Na 2 CO 3 in 0.1N NaOH) to obtain an ethanol-soluble component. This can be evaluated by measuring the absorbance (hue: OD 440 ) at a wavelength of 440 nm of an aqueous solution prepared so that the total concentration of the solution becomes 10% by mass. If low toxicity SL-containing composition of the present invention was prepared as described above, the hue of the aqueous solution (OD 440) is in the range of 0.001 to 1. Preferably it is 0.005-0.8, More preferably, it is 0.01-0.6, Most preferably, it is 0.01-0.5. Incidentally, the low toxicity SL-containing composition of the present invention, the hue (OD 440) is included low toxicity SL-containing composition is 0.1 to 0.4 (Example 1-7). However, these are one aspect | mode of this invention, and are not limited to these.

(e)蒸発残分:1〜100%
ここで「蒸発残分(%)」とは、試験例1で説明するように、試料を蒸発させた時の残分を質量百分率(質量%)で示したものであり、これにより試料中、本発明では低毒性SL含有組成物中に混在する物、特に高沸点の混在物の含量を把握することができる。当該「蒸発残分(%)」は、JIS K0067−1992の第2法に従って測定することができる。その詳細は、試験例1で説明する通りである。本発明の低毒性SL含有組成物の蒸発残分(%)は1〜100%であり、好ましくは5〜100%、より好ましくは10〜100%の範囲にあればよいが、さらに好ましくは60〜100%、さらにより好ましくは70〜100%、特に好ましくは80〜100%、より特に好ましくは90〜100%である。
(E) Evaporation residue: 1 to 100%
Here, the “evaporation residue (%)” is, as described in Test Example 1, the residue when the sample is evaporated is shown in mass percentage (mass%). In the present invention, it is possible to ascertain the content of substances mixed in the low-toxic SL-containing composition, in particular, high-boiling substances. The “evaporation residue (%)” can be measured according to the second method of JIS K0067-1992. The details are as described in Test Example 1. The evaporation residue (%) of the low toxicity SL-containing composition of the present invention is 1 to 100%, preferably 5 to 100%, more preferably 10 to 100%, still more preferably 60. -100%, even more preferably 70-100%, particularly preferably 80-100%, more particularly preferably 90-100%.

(f)乾燥減量:0〜99%
「乾燥減量(%)」とは、試験例1で説明するように試料を乾燥した時の減量を質量百分率(質量%)で示したものであり、これにより試料中、本発明では低毒性SL含有組成物中の水分その他の揮発性物質(低沸点化合物)の含量を把握することができる。当該「乾燥減量(%)」は、JIS K0067−1992の第1法に従って測定することができる。その詳細は、試験例1で説明する通りである。本発明の低毒性SL含有組成物の乾燥減量(%)は0〜99%であり、好ましくは0〜95%、より好ましくは0〜90%の範囲にあればよいが、さらに好ましくは0〜30%、さらにより好ましくは0〜20%、特に好ましくは0〜20%、より特に好ましくは0〜10%である。
(F) Loss on drying: 0 to 99%
The “loss on drying (%)” is the weight loss when the sample is dried as described in Test Example 1 in mass percentage (% by mass). The content of moisture and other volatile substances (low boiling point compounds) in the contained composition can be ascertained. The “loss on drying (%)” can be measured according to the first method of JIS K0067-1992. The details are as described in Test Example 1. Loss on drying (%) of the low-toxic SL-containing composition of the present invention is 0 to 99%, preferably 0 to 95%, more preferably 0 to 90%, and still more preferably 0 to 90%. 30%, even more preferably 0 to 20%, particularly preferably 0 to 20%, and even more preferably 0 to 10%.

(g)エタノール可溶分:1〜100%
「エタノール可溶分(%)」とは、試験例1で説明するように、試料中に含まれるエタノールに溶解する物質の含量(質量%)であり、これにより試料中に混在するエタノール溶解性の極性物質、例えば界面活性剤等の含量を把握することができる。当該「エタノール可溶分(%)」は、JIS K3362−2008に従って測定することができる。その詳細は、試験例1で説明する通りである。本発明の低毒性SL含有組成物のエタノール可溶分(%)は1〜100%であり、好ましくは5〜100%、より好ましくは10〜100%の範囲にあればよいが、さらに好ましくは85〜100%、さらにより好ましくは90〜100%、特に好ましくは95〜100%、より特に好ましくは98〜100%である。エタノール可溶分(%)は、対象の試料、本発明においては低毒性SL含有組成物を100質量%とした場合の酸型SLおよびラクトン型SL、脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸の含有割合(質量%)を示す。
(G) Ethanol soluble content: 1 to 100%
As described in Test Example 1, the “ethanol-soluble content (%)” is the content (mass%) of a substance dissolved in ethanol contained in a sample, and thereby the ethanol solubility mixed in the sample. The content of polar substances such as surfactants can be ascertained. The “ethanol soluble content (%)” can be measured according to JIS K3362-2008. The details are as described in Test Example 1. The ethanol-soluble component (%) of the low-toxic SL-containing composition of the present invention is 1 to 100%, preferably 5 to 100%, more preferably 10 to 100%, more preferably It is 85 to 100%, more preferably 90 to 100%, particularly preferably 95 to 100%, more particularly preferably 98 to 100%. The ethanol-soluble content (%) is the content ratio (mass%) of the target sample, acid-type SL and lactone-type SL, fatty acid, hydroxy fatty acid when the low-toxic SL-containing composition is 100 mass% in the present invention. Indicates.

(h)赤外吸収スペクトル
本発明の低毒性SL含有組成物は、より好ましくは赤外吸収スペクトルが、少なくとも波数1024cm−1付近、1706〜1730cm−1付近、2854cm−1付近、2924cm−1付近、および3000〜3500cm−1付近に赤外線吸収バンド(吸収ピーク)を有する。
(H) Infrared absorption spectrum The low-toxic SL-containing composition of the present invention more preferably has an infrared absorption spectrum of at least about 1024 cm −1 , about 1706 to 1730 cm −1 , about 2854 cm −1 , and about 2924 cm −1. And an infrared absorption band (absorption peak) in the vicinity of 3000 to 3500 cm −1 .

本発明の低毒性SL含有組成物はその形状を特に制限せず、液状であっても、乳液状であっても、また固体形状であってもよい。好ましくは固体形状であり、かかる固体形状には、錠剤形態、丸剤形態、粉末形態、顆粒形態、カプセル形態を挙げることができる。好ましくは粉末形態または顆粒形態であり、より好ましくは粉末形態である。   The shape of the low-toxic SL-containing composition of the present invention is not particularly limited, and may be liquid, emulsion, or solid. The solid form is preferred, and examples of the solid form include tablet form, pill form, powder form, granule form, and capsule form. Preferably it is a powder form or a granular form, More preferably, it is a powder form.

本発明の低毒性SL含有組成物は、界面活性作用を有しながらも、その製造過程で生じるSL産生酵母発酵副産物のうち、細胞毒性を示す成分が選択的に除去され、それらの混入が少ないことを特徴とする。細胞毒性を示す成分としては、例えばラクトン型SL;炭素数16及び18の脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸;及びアセチル基を有するSL等を挙げることができるが、これらに制限されることはない。   The low-toxic SL-containing composition of the present invention has a surfactant action, but among the SL-producing yeast fermentation by-products produced in the production process, the components showing cytotoxicity are selectively removed, and their contamination is low. It is characterized by that. Examples of the cytotoxic component include, but are not limited to, lactone type SL; fatty acids and hydroxy fatty acids having 16 and 18 carbon atoms; and SL having an acetyl group.

本発明の低毒性SL含有組成物の毒性は、例えばHela細胞(ヒト子宮頸部上皮癌由来細胞)を用いた細胞毒性試験から算出される細胞致死濃度(IC50)で評価することができる。ただし、界面活性作用との両面から低毒性SL含有組成物の作用効果を評価するうえでは、低毒性SL含有組成物の「細胞致死濃度(IC50)」を低毒性SL含有組成物の「臨界ミセル濃度(CMC)」で除算した値(IC50/CMC)を求めることが好ましい。 The toxicity of the low-toxic SL-containing composition of the present invention can be evaluated by, for example, a cell lethal concentration (IC 50 ) calculated from a cytotoxicity test using Hela cells (human cervical epithelial cancer-derived cells). However, in evaluating the action and effect of the low-toxic SL-containing composition in terms of both surface-active action, the “cell lethal concentration (IC 50 )” of the low-toxic SL-containing composition is set to the “criticality of the low-toxic SL-containing composition. It is preferable to obtain a value (IC 50 / CMC) divided by “micelle concentration (CMC)”.

Hela細胞を用いた細胞毒性試験及びそれから細胞致死濃度(IC50)を算出する方法、及び臨界ミセル濃度(CMC)の測定方法は、それぞれ試験例3及び2において詳述する通りである。 The cytotoxicity test using Hela cells, the method for calculating the cell lethal concentration (IC 50 ) therefrom, and the method for measuring the critical micelle concentration (CMC) are as described in detail in Test Examples 3 and 2, respectively.

本発明の低毒性SL含有組成物のHela細胞に対する細胞致死濃度(IC50)としては、2000〜60000ppmを挙げることができる。好ましくは3000〜60000ppm、より好ましくは5000〜60000ppm、特に好ましくは10000〜60000ppmである。 Examples of the cell lethal concentration (IC 50 ) with respect to Hela cells of the low toxicity SL-containing composition of the present invention include 2000 to 60000 ppm. Preferably it is 3000-60000 ppm, More preferably, it is 5000-60000 ppm, Most preferably, it is 10000-60000 ppm.

本発明の低毒性SL含有組成物の臨界ミセル濃度(CMC)としては、50〜500ppmを挙げることができる。好ましくは50〜400ppm、より好ましくは、50〜300ppm、特に好ましくは100〜300ppmである。   Examples of the critical micelle concentration (CMC) of the low toxicity SL-containing composition of the present invention include 50 to 500 ppm. Preferably it is 50-400 ppm, More preferably, it is 50-300 ppm, Most preferably, it is 100-300 ppm.

これらの細胞致死濃度(IC50)及び臨界ミセル濃度(CMC)から算出される本発明の低毒性SL含有組成物の「IC50/CMC」は6.7〜200の範囲であり、好ましくは10〜200、より好ましくは17〜200、特に好ましくは33〜200である。なお、本発明の低毒性SL含有組成物には、「IC50/CMC」が106.7〜200である低毒性SL含有組成物が含まれる(実施例1〜10)。但し、これらは本発明の一態様であり、これらに限定されるものではない。 The “IC 50 / CMC” of the low toxicity SL-containing composition of the present invention calculated from these cell lethal concentration (IC 50 ) and critical micelle concentration (CMC) is in the range of 6.7 to 200, preferably 10 It is -200, More preferably, it is 17-200, Most preferably, it is 33-200. Incidentally, the low toxicity SL-containing composition of the present invention, "IC 50 / CMC" are included low toxicity SL-containing composition is from 106.7 to 200 (Examples 1-10). However, these are one aspect | mode of this invention, and are not limited to these.

また試験例3で説明するように、本発明の低毒性SL含有組成物はその細胞致死濃度(IC50)から眼や粘膜に対する刺激性も極めて低く、低毒性であると同時に眼や粘膜に対して低刺激性(無刺激性)でもある。なお、ここでいう粘膜には、眼粘膜以外の粘膜、具体的には、口腔粘膜、咽喉粘膜、鼻腔粘膜、耳腔粘膜、生殖器粘膜、及び肛門部等の粘膜が含まれる。 In addition, as described in Test Example 3, the low toxicity SL-containing composition of the present invention has extremely low irritation to the eyes and mucous membranes from its cell lethal concentration (IC 50 ), and is low in toxicity and at the same time to the eyes and mucosa And hypoallergenic (non-irritating). The mucosa herein includes mucous membranes other than ocular mucosa, specifically, mucous membranes such as oral mucosa, throat mucosa, nasal mucosa, ear cavity mucosa, genital mucosa, and anus.

(III)低毒性SL含有組成物の用途
上記に説明するように本発明の低毒性SL含有組成物は、界面活性作用、具体的には良好な洗浄作用及び泡立ち性を有する一方で、細胞毒性及び眼や粘膜に対する刺激性が極めて少なく、実用濃度では実質的に無毒性及び無刺激性といえる。このことから、低毒性且つ低刺激性のアニオン性界面活性剤として使用することができる。また、安全性や低刺激性(無刺激性)が求められる医薬品、医薬部外品、医療機器、粧品、及び日常雑貨品等に好適に用いることができる。また医薬品用、医薬部外品用、医療機器用、香粧品用または日常雑貨品用の添加剤として用いることもできる。
(III) Use of low-toxic SL-containing composition As described above, the low-toxic SL-containing composition of the present invention has a surface-active action, specifically a good cleaning action and foaming property, while being cytotoxic. In addition, there is very little irritation to eyes and mucous membranes, and it can be said to be substantially non-toxic and non-irritating at practical concentrations. Therefore, it can be used as an anionic surfactant having low toxicity and low irritation. Further, it can be suitably used for pharmaceuticals, quasi-drugs, medical devices, cosmetics and daily miscellaneous goods that require safety and hypoallergenicity (non-irritant). It can also be used as an additive for pharmaceuticals, quasi-drugs, medical devices, cosmetics or daily miscellaneous goods.

なお、ここで香粧品とは、香水、オーデコロン及びパヒューム等の「芳香製品」、「化粧品」並びに「医薬部外品」を包含する概念で用いられる。なお、化粧品とは、人の身体を清潔にし、美化し、魅力を増し、容貌を変え、又は皮膚もしくは毛髪を健やかに保つために、身体に塗擦、散布その他これらに類似する方法(例えば、貼付など)で使用されることが目的とされるものである。香粧品としては、メーキャップ化粧品(ファンデーション、口紅など)、基礎化粧品(化粧水、乳液など)、頭髪用化粧品(ヘアトニック、ヘアリキッド、ヘアクリームなど)、身体用化粧品(ボディローション、ハンドクリーム、日焼け止め製剤など)、トイレタリー製品(歯磨き、洗口剤、シャンプー、リンス、石けん、身体洗浄料、洗顔料、入浴剤、洗眼料など)医薬部外品(薬用化粧品、制汗剤、ヘアカラー、殺虫剤など)、芳香製品(香水、オードトワレ、オーデコロン、ボディパウダー、匂い袋など)を例示することができる。医薬品としては、外用薬(皮膚外用薬、点眼薬、口腔薬、点鼻薬、点耳薬、坐薬など)、内服薬、注射薬を例示できる。医療機器としては創傷被覆材などを例示できる。 また、日常雑貨品としては、食器野菜用洗剤、洗濯用洗剤、柔軟剤、漂白剤、住居用洗剤、風呂用洗剤、トイレ用洗剤、芳香剤などがあげられる。   Here, the term “cosmetics” is used in a concept including “fragrance products” such as perfume, eau de cologne and perfume, “cosmetics” and “quasi-drugs”. Cosmetics are used to clean, beautify, enhance attractiveness, change appearance, or keep skin or hair healthy, such as by rubbing, spraying or other similar methods on the body (for example, applying Etc.). Cosmetics include makeup cosmetics (foundation, lipstick, etc.), basic cosmetics (skin lotion, emulsion, etc.), hair cosmetics (hair tonic, hair liquid, hair cream, etc.), body cosmetics (body lotion, hand cream, tanning). Stopper preparations, etc.), toiletry products (toothpaste, mouthwash, shampoo, rinse, soap, body wash, facial cleanser, bath preparation, eye wash, etc.) Quasi-drugs (medicinal cosmetics, antiperspirants, hair color, insecticide) Agents), aromatic products (perfume, eau de toilette, eau de cologne, body powder, odor bags, etc.). Examples of the drug include external preparations (skin external preparations, eye drops, oral preparations, nasal drops, ear drops, suppositories, etc.), internal medicines and injections. Examples of medical devices include wound dressings. Examples of daily miscellaneous goods include dish vegetable detergents, laundry detergents, softeners, bleaches, residential detergents, bath detergents, toilet detergents, and fragrances.

本発明の低毒性SL含有組成物は、なかでも低刺激性(無刺激性)が求められる外用組成物に好適に用いることができる。かかる外用組成物としては、具体的には過敏性肌用の香粧品(化粧品、芳香製品)、創傷や炎症のある皮膚に適用される外用医薬品、外用医薬部外品、化粧品(例えば、創傷部洗浄料などが含まれる)、または医療機器(例えば、創傷部被覆材などが含まれる)、眼、鼻腔または口腔内等の粘膜に適用される医薬品、医薬部外品、化粧品(例えば、点眼薬、眼軟膏、洗眼液、コンタクトレンズ装着液などのアイケア製品、洗鼻液、点鼻薬、口内炎治療薬)などを例示することができる。なお、上記創傷部被覆材の形態は特に問わず、ゲル状、パウダー状、シート状、その他の形状を広く挙げることができる。   The low-toxic SL-containing composition of the present invention can be suitably used for an external composition that requires low irritation (nonirritation). Specifically, the composition for external use includes cosmetics for sensitive skin (cosmetics, fragrance products), external medicines applied to wounds and inflamed skin, quasi-drugs for external use, cosmetics (for example, wound parts) Pharmaceuticals, quasi-drugs, and cosmetics (eg, eye drops) that are applied to mucous membranes such as eye care, nasal cavity and oral cavity, etc. Eye care products such as eye ointments, eyewashes, contact lens mounting liquids, nasal rinses, nasal drops, and stomatitis therapeutic agents). In addition, the form of the said wound part coating | covering material is not ask | required in particular, A gel form, powder form, a sheet form, and other shapes can be mentioned widely.

本発明の低毒性SL含有組成物をアニオン性界面活性剤として使用する場合、低毒性SL含有組成物をそのままアニオン性界面活性剤として用いてもよいし、また界面活性効果を奏し、かつ低毒性/低刺激性という本発明の特徴が損なわれないことを限度として、他成分を配合してもよい。かかる他成分としては、溶剤としての蒸留水、イオン交換水、及びエタノール等;添加剤としての塩化ナトリウム、及び塩化カリウム等;可溶化剤としてのグリセリン、プロピレングリコール、及びヘキシレングリコール等;増粘剤としてのキサンタンガム、アルギン酸、及びデキストラン等;pH調整剤としてのクエン酸、乳酸、リンゴ酸、塩酸、硫酸、ホウ酸、水酸化ナトリウム、及び水酸化カリウム等;キレート剤としてリン酸化合物、ニトリロ三酢酸(NTA)、及びエチレンジアミン四酢酸(EDTA)等;そのほか、色素、及び酵素などを例示することができるが、これらに制限されるものではない。他成分を配合する場合、当該アニオン性界面活性剤に含まれる本発明の低毒性SL含有組成物の量としては、界面活性効果を奏する限り、制限はされないものの、脱アセチル酸型SLの量に換算して0.005〜99.9質量%、好ましくは0.01〜50質量%、より好ましくは0.02〜10質量%、特に好ましくは0.1〜5質量%を例示することができる。   When the low-toxic SL-containing composition of the present invention is used as an anionic surfactant, the low-toxic SL-containing composition may be used as an anionic surfactant as it is, or has a surfactant effect and has low toxicity. / Other ingredients may be blended as long as the feature of the present invention, i.e. hypoallergenicity, is not impaired. Such other components include distilled water as a solvent, ion-exchanged water, and ethanol; sodium chloride and potassium chloride as additives; glycerin, propylene glycol, and hexylene glycol as solubilizers; Xanthan gum, alginic acid, dextran, etc. as agents; citric acid, lactic acid, malic acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, boric acid, sodium hydroxide, potassium hydroxide, etc. as pH adjusters; phosphoric acid compounds, nitrilotrimethyl as chelating agents Acetic acid (NTA), ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and the like; other examples include, but are not limited to, dyes and enzymes. When blending other components, the amount of the low-toxic SL-containing composition of the present invention contained in the anionic surfactant is not limited as long as it exhibits a surfactant effect, but the amount of deacetylated SL is not limited. In terms of conversion, 0.005 to 99.9% by mass, preferably 0.01 to 50% by mass, more preferably 0.02 to 10% by mass, and particularly preferably 0.1 to 5% by mass. .

本発明の低毒性SL含有組成物を医薬品、医薬部外品、医療機器、香粧品または日常雑貨品の添加剤(医薬品添加剤、医薬部外品添加剤、医療機器添加剤、香粧品添加剤または日常雑貨品添加剤)として使用する場合、低毒性SL含有組成物はそれをそのままこれらの添加剤として用いてもよいし、また所望の界面活性効果を奏し、かつ低毒性/低刺激性という本発明の特徴が損なわれないことを限度として、他成分を配合してもよい。かかる他成分は、医薬品、医薬部外品、医療機器、香粧品または日常雑貨品などの対象製品に応じて適宜設定することができる。他成分を配合する場合、当該添加剤に含まれる本発明の低毒性SL含有組成物の量としては、所望の界面活性効果を奏する限り、制限はされないものの、脱アセチル化酸型SLの量に換算して0.005〜99.9質量%、好ましくは0.01〜50質量%、より好ましくは0.02〜10質量%、特に好ましくは0.1〜5質量%を例示することができる。   The low-toxic SL-containing composition of the present invention is added to pharmaceuticals, quasi-drugs, medical devices, cosmetics or daily miscellaneous goods additives (pharmaceutical additives, quasi-drug additives, medical device additives, cosmetic additives) In addition, when used as a daily miscellaneous goods additive), the low-toxic SL-containing composition may be used as such as it is, or has a desired surface active effect and has low toxicity / low irritation. You may mix | blend another component as long as the characteristic of this invention is not impaired. Such other components can be appropriately set according to the target product such as pharmaceuticals, quasi-drugs, medical devices, cosmetics or daily miscellaneous goods. When blending other components, the amount of the low-toxic SL-containing composition of the present invention contained in the additive is not limited as long as the desired surface-active effect is exhibited, but the amount of deacetylated acid SL is not limited. In terms of conversion, 0.005 to 99.9% by mass, preferably 0.01 to 50% by mass, more preferably 0.02 to 10% by mass, and particularly preferably 0.1 to 5% by mass. .

本発明の低毒性SL含有組成物を医薬品、医薬部外品、医療機器、香粧品または日常雑貨品に添加して用いる場合、つまり本発明の低毒性SL含有組成物を用いて医薬品、医薬部外品、医療機器、香粧品または日常雑貨品を調製する場合、これら各種製品に配合する低毒性SL含有組成物の量は、各製品の目的や性状に応じて、所望の界面活性効果を発揮する範囲で適宜設定される。制限はされないものの、本発明の低毒性SL含有組成物は、医薬品、医薬部外品、医療機器、香粧品または日常雑貨品に対して添加することで、これらの医薬品などのCMCが300ppm以上になるような割合を挙げることができる。例えば、これらの医薬品等に配合される本発明の低毒性SL含有組成物の量は、脱アセチル酸型SLの量に換算して通常、0.001〜99.9質量%、好ましくは0.001〜50質量%の範囲から製品に応じて適宜選択することができる(例えば、0.02〜10質量%や0.1〜5質量%など)。具体的には、各製品に応じて下記の割合を挙げることができる。
身体洗浄料:0.01〜100質量%、好ましくは1〜90質量%、より好ましくは5〜800質量%
毛髪洗浄剤:0.01〜30質量%、好ましくは1〜25質量%、より好ましくは5〜20質量%
洗眼料:0.001〜10質量%、好ましくは0.01〜8質量%、より好ましくは0.05〜5質量%
点眼剤:0.001〜10質量%、好ましくは0.01〜8質量%、より好ましくは0.05〜5質量%
化粧料:0.01〜20質量%、好ましくは0.05〜15質量%、より好ましくは0.1〜10質量%
口腔洗浄料:0.001〜10質量%、好ましくは0.05〜8質量%、より好ましくは0.1〜5質量%
粘膜または創傷部洗浄料:0.001〜30質量%、好ましくは0.01〜25質量%、より好ましくは0.1〜20質量%
創傷被覆材:0.001〜30質量%、好ましくは0.005〜25質量%、より好ましくは0.01〜20質量%。
When the low-toxic SL-containing composition of the present invention is used by adding to a pharmaceutical, quasi-drug, medical device, cosmetic or daily miscellaneous product, that is, using the low-toxic SL-containing composition of the present invention, When preparing external products, medical devices, cosmetics, or daily miscellaneous goods, the amount of the low-toxic SL-containing composition contained in these various products exhibits a desired surface-active effect depending on the purpose and properties of each product. It is set as appropriate within the range. Although not limited, the low-toxic SL-containing composition of the present invention can be added to pharmaceuticals, quasi-drugs, medical devices, cosmetics or daily miscellaneous goods to increase the CMC of these pharmaceuticals to 300 ppm or more. Can be mentioned. For example, the amount of the low-toxic SL-containing composition of the present invention blended in these pharmaceuticals and the like is usually 0.001 to 99.9% by mass, preferably 0.00, in terms of the amount of deacetylated SL. It can select suitably from the range of 001-50 mass% according to a product (for example, 0.02-10 mass%, 0.1-5 mass%, etc.). Specifically, the following ratios can be given according to each product.
Body cleansing agent: 0.01 to 100% by mass, preferably 1 to 90% by mass, more preferably 5 to 800% by mass
Hair cleaning agent: 0.01 to 30% by mass, preferably 1 to 25% by mass, more preferably 5 to 20% by mass
Eye wash: 0.001 to 10% by mass, preferably 0.01 to 8% by mass, more preferably 0.05 to 5% by mass
Eye drops: 0.001 to 10% by mass, preferably 0.01 to 8% by mass, more preferably 0.05 to 5% by mass
Cosmetic: 0.01 to 20% by mass, preferably 0.05 to 15% by mass, more preferably 0.1 to 10% by mass
Oral cleansing agent: 0.001 to 10% by mass, preferably 0.05 to 8% by mass, more preferably 0.1 to 5% by mass
Mucosal or wound cleaning agent: 0.001 to 30% by mass, preferably 0.01 to 25% by mass, more preferably 0.1 to 20% by mass
Wound dressing: 0.001 to 30% by mass, preferably 0.005 to 25% by mass, more preferably 0.01 to 20% by mass.

本発明の低毒性SL含有組成物を医薬品、医薬部外品、香粧品または日常雑貨品に添加して用いる場合、これらの医薬品などには、本発明の効果を損なわない範囲で、使用目的に応じて、さらに美白剤、抗老化剤、保湿剤、紫外線吸収剤、抗菌剤、及びそれら以外の成分を配合することができる。   When the low-toxic SL-containing composition of the present invention is used by adding it to a pharmaceutical product, quasi-drug, cosmetic product or daily miscellaneous product, these pharmaceutical products are used for the purpose of use as long as the effects of the present invention are not impaired. Accordingly, whitening agents, anti-aging agents, moisturizers, ultraviolet absorbers, antibacterial agents, and other components can be further blended.

例えば、美白剤としては、L−アスコルビン酸またはその誘導体、トラネキサム酸またはその誘導体、ハイドロキノン及びその誘導体、ルシノール、エデト酸またはその誘導体、アルブチン、胎盤抽出物、t-AMCHA、アセロラエキス、エイジツエキス、エラグ酸またはその誘導体、火辣エキス、カミツレエキス、カミツレ花エキス、キウイエキス、グルタチオン、トコトリエノール、フェルラ酸、ラズベリーケトン、ルシノール、ウワウルシエキス、ジパルミチン酸ピリドキシン、イオウ、コウジ酸またはその誘導体、グルコサミンまたはその誘導体、ヒドロキシケイヒ酸またはその誘導体、グルタチオン、アルニカエキス、オウゴンエキス、ソウハクヒエキス、サイコエキス、ボウフウエキス、マンネンタケ菌糸体培養物またはその抽出物、シナノキエキス、モモ葉エキス、エイジツエキス、クジンエキス、ジユエキス、トウキエキス、ヨクイニンエキス、カキ葉エキス、ダイオウエキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、マロニエエキス、オトギリソウエキス、油溶性カンゾウエキス等が例示される。   For example, whitening agents include L-ascorbic acid or a derivative thereof, tranexamic acid or a derivative thereof, hydroquinone and a derivative thereof, lucinol, edetic acid or a derivative thereof, arbutin, placental extract, t-AMCHA, acerola extract, agetsu extract, Ellagic acid or its derivatives, flame extract, chamomile extract, chamomile flower extract, kiwi extract, glutathione, tocotrienols, ferulic acid, raspberry ketone, lucinol, walnut extract, pyridoxine dipalmitate, sulfur, kojic acid or its derivatives, glucosamine or its derivatives Derivatives, hydroxycinnamic acid or its derivatives, glutathione, arnica extract, urgonum extract, Sakuhakuhi extract, Psycho extract, bowfish extract, garlic mycelium culture or extract thereof, shiitake Examples include nanoki extract, peach leaf extract, ages extract, cucumber extract, jellyfish extract, touki extract, yokuinin extract, oyster leaf extract, daiou extract, button pipi extract, hamamelis extract, maroni extract, hypericum extract, oil-soluble licorice extract and the like.

例えば、抗炎症剤としては、グリチルリチン酸またはその塩、グリチルレチン酸またはその塩、イソプロピルアミノカプロン酸またはその塩、アラントイン、塩化リゾチーム、グアイアズレン、サリチル酸メチル、γ−オリザノールを挙げることができる。   For example, examples of the anti-inflammatory agent include glycyrrhizic acid or a salt thereof, glycyrrhetinic acid or a salt thereof, isopropylaminocaproic acid or a salt thereof, allantoin, lysozyme chloride, guaiazulene, methyl salicylate, and γ-oryzanol.

また、抗酸化剤としては、αカロチン、βカロチン、γカロチン、リコピン、クリプトキサンチン、ルテイン、ゼアキサンチン、イソゼアキサンチン、ロドキサンチン、カプサンチン、クロセチン等のカロチノイド;1,4−ジアザシクロオクタン、2,5−ジメチルフラン、2−メチルフラン、2,5−ジフェニルフラン、1,3−ジフェニルイソベンゾフラン、αトコフェロール、βトコフェロール、γトコフェロール、dトコフェロール、ヒスチジン、トリプトファン、メチオニン、アラニン又はそのアルキルエステル、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、アスコルビン酸、タンニン酸、エピカテキン、エピカロカテキン、エピカテキンガレート、エピカロカテキンガレート等のタンニン類、ルチン等のフラボノイド、その他没食子酸プロピル、ラカンカエキス、アスタキサンチン、カロチン、トコフェロール、アスコルビン酸誘導体、エデト酸四ナトリウム、エリソルビン酸、酢酸トコフェロール、酢酸レチノール、ジビチルヒドロキシトルエン、ステアリン酸アスコルビル、パルミチン酸アスコルビル、メチルシラノールジオレイルトコフェロール・無水ケイ酸混合物、ニコチン酸ベンジル、感光素401号、アスパラギン酸、アデノシン三リン酸2Na 、アミノ酪酸、ウイキョウエキス、オランダカラシエキス、カフェイン、クロレラエキス、サフランエキス、ショウキョウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、葉酸、レチノール、パルミチン酸レチノール、イノシトール、ウコンエキス、オリザノール、カロチン、カロットエキス、コムギ胚牙エキス、センキュウエキス、チンピエキス、トウキエキス、トウキ根エキス、ドクダミエキス、トコフェロール、ニコチン酸トコフェロール、ボタンエキス、エルゴカルシフェロール、ジカプリル酸ピリドキシン、バチルアルコール、ステアリン酸グリチルレチニル、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、塩酸ジフェンヒドラミン、塩化リゾチーム、アミノカプロン酸、レイシエキス、ヨクイニン、メリロートエキス、ボタンエキス、トウキエキス、トウキ根エキス、センキュウエキス、ゲンノショコエキス、アラントイン、アルニカエキス、アルニカ花エキス、オウゴンエキス、オウレンエキス、オドリコソウエキス、ガマ穂エキス、カミツレエキス、カラミン、カワラヨモギエキス、甘草エキス、グアイアズレン、クチナシエキス、クマザサエキス、グリチルリチン酸2K、グリチルレチン酸ステアリル、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、コンフリーエキス、コンフリー葉エキス、酢酸トコフェロール、サリチル酸メチル、酸化亜鉛、シコンエキス,ムラサキ根エキス、シソエキス、シソ葉エキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、スイカズラエキス、セージエキス、セイヨウキズタエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、トウキンセンカエキス、ピリドキシンHCl、ビワ葉エキス、フユボダイジュエキス、モモ葉・果実エキス、ヤグルマギクエキス、ユキノシタエキス、ヨモギエキス、レタスエキス、ローマカミツレエキス、ワレモコウエキス及びカカロール、ポリアミン等が例示される。   Antioxidants include α-carotene, β-carotene, γ-carotene, lycopene, cryptoxanthine, lutein, zeaxanthin, isozeaxanthin, rhodoxanthine, capsanthin, crocetin and other carotenoids; 1,4-diazacyclooctane, 2, 5-dimethylfuran, 2-methylfuran, 2,5-diphenylfuran, 1,3-diphenylisobenzofuran, α-tocopherol, β-tocopherol, γ-tocopherol, d-tocopherol, histidine, tryptophan, methionine, alanine or its alkyl ester, dibutyl Flavono such as tannins such as hydroxytoluene, butylhydroxyanisole, ascorbic acid, tannic acid, epicatechin, epicacatechin, epicatechin gallate, epicacatechin gallate, etc. , Propyl gallate, lacanca extract, astaxanthin, carotene, tocopherol, ascorbic acid derivative, tetrasodium edetate, erythorbic acid, tocopherol acetate, retinol acetate, dibitylhydroxytoluene, ascorbyl stearate, ascorbyl palmitate, methylsilanoldiol Reyltocopherol / silicic acid mixture, benzyl nicotinate, photosensitizer 401, aspartic acid, adenosine triphosphate 2Na, aminobutyric acid, fennel extract, Dutch mustard extract, caffeine, chlorella extract, saffron extract, ginger extract, soybean extract , Tisoiso extract, folic acid, retinol, retinol palmitate, inositol, turmeric extract, oryzanol, carotene, carrot extract, wheat embryo Kiss, Senkyu Extract, Chimp Extract, Toki Extract, Toki Root Extract, Dokudami Extract, Tocopherol, Tocopherol Nicotinate, Button Extract, Ergocalciferol, Pyridoxine Dicaprylate, Batyl Alcohol, Glycyrrhetinic Acid Stearate, Glycyrrhizic Acid, Glycyrrhetinic Acid, Diphenhydramine Hydrochloride, Lysozyme chloride, aminocaproic acid, litchi extract, yokoinin, merirot extract, button extract, toki extract, toki root extract, senkyu extract, geno-chocolate extract, allantoin, arnica extract, arnica flower extract, oxon extract, lauren extract, licorice extract, Cattail extract, chamomile extract, calamine, kawara mugwort extract, licorice extract, guaiazulene, gardenia extract, ku Zasa extract, glycyrrhizic acid 2K, stearyl glycyrrhetinate, gentian extract, black tea extract, Comfrey extract, Comfrey leaf extract, tocopherol acetate, methyl salicylate, zinc oxide, citrus extract, purple root extract, perilla extract, perilla leaf extract, periwinkle extract, peonies Extract, Honeysuckle extract, Sage extract, Horseshoe extract, Horseshoe extract, Achillea millefolium extract, Prunus extract, Sorocera extract, Periwinkle extract, Pyridoxine HCl, Biwa leaf extract, Fuyubodaiju extract, Peach leaf / fruit extract, Cornflower extract, Examples are cypress extract, mugwort extract, lettuce extract, roman chamomile extract, bitumen extract, kakarol, polyamine and the like.

保湿剤として、ピリドンカルボン酸ナトリウム、グリコール、グリセリン、グルコース、マルトース、マルチトール、ショ糖、フラクトース、キシリトール、ソルビトール、マルトトリオース、スレイトール、エリスリトール、デンプン分解糖還元アルコール、ソルビトール、多価アルコール類(エチレングリコール、1,4−ブチレングリコール、ジグリセリン、トリグリセリン、テトラグリセリン、1,3−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、1,3−プロパンジオール、ペンチレングリコール、ヘキサンジオール、オクタンジオール)、セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ヒドロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチン硫酸ヘパリン、グリセロリン脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質、リノール酸またはそのエステル類、エイコサペンタエン酸またはそのエステル類、ペクチン、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物またはその抽出物、小麦胚芽油、アボガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ−オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マンネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマ、ピロリドンカルボン酸、トマトエキス、ツバキ油、大豆リン脂質、ヒアルロン酸、トレオニン、グリコール酸アンモニウム、アルギン酸メチルシラノール、ヨクイニン、トウキエキス、トウキ根エキス、ダイズエキス、アスパラガスエキス、DNA−Na、PCA−Na、RNA-Na、アシタバエキス、アスパラギン酸、アマチヤエキス、羅漢果エキス、ラクトフェリン、アラニン、アルギニン、アルギン酸Na、アルテアエキス、アロエベラエキス、オイスタエキス、オオムギバクガエキス、カキ葉、加水分解ケラチン、加水分解コラーゲン、加水分解コンキオリン、加水分解卵殻膜、加水分解卵白、加水分解シルク、加水分解ダイズタンパク、褐藻エキス、カリンエキス、キイチゴエキス、キシリトール、キトサン、キュウリエキス、キュウリ果実エキス、グアバ葉エキス、グアバ果実エキス、クインスシードエキス、グリシン、グリセリン、グルコース、グレープフルーツエキス、グレープフルーツ果実エキス、クレマティスエキス、ゴボウエキス、コメ発酵液、コンドロイチン硫酸Na、魚コラ一ゲノ、サンザシエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、グリセリン、シスチン、システイン、スギナエキス、ゼニアオイエキス、セリン、ソルビトール、ダイズタンパク、トマトエキス、乳酸Na、乳酸桿菌、ダイズ発酵エキス、尿素、ノバラエキス、アーモンドエキス、アーモンド果実エキス、コーン油、ハチミツ、ヒアルロン酸Na、フクノエキス、ベタイン、ヘチマエキス、マルチトール、マルトース、マンニトール、ユリエキス、リシン、リンゴエキス、レンゲソウエキス、ローヤルゼリー、ラノリン脂肪酸ポリエチレングリコール1000、ラノリン脂肪酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソブチル、ヘキシルデカノール、乳酸ミリスチル、ラノリン脂肪酸、トリカプリルグリセリル、オレイルアルコール、オレイン酸オクチルドデシル、オレイン酸デシル、還元ラノリン、オクチルドデカノール、アーモンド油、アボカド油、オリーブ油、オレイン酸、オレンジラフイー油、カカオ脂、カロットエキス、ゴマ油、サザンカ油、サフラワー油、ジヒドロコレステロール、スクワラン、ステアリン酸コレステリル、セラミド2、月見草油、ヒマシ油、ヒマワリ油、セフニド3、ヒマワリ種子油ハイブリッドヒマワリ油、フィトスフィンゴシン、ブドウ種子油、ホホバ油、ホホバ種子油、ミネラルオイル、ミンク油、マカデミアナッツ油、メドウフォーム油、ユーリ油、ユーカリ葉油、ラノリン、リノール酸、ローズヒップ油、ワセリン及びポリグルタミン酸等が例示される。   As moisturizers, sodium pyridonecarboxylate, glycol, glycerin, glucose, maltose, maltitol, sucrose, fructose, xylitol, sorbitol, maltotriose, threitol, erythritol, amylolytic sugar-reducing alcohol, sorbitol, polyhydric alcohols ( Ethylene glycol, 1,4-butylene glycol, diglycerin, triglycerin, tetraglycerin, 1,3-butylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol, polyethylene glycol, 1,3-propanediol, pentylene glycol, hexanediol, Octanediol), serine, glycine, threonine, alanine, collagen, hydrolyzed collagen, hydronectin, fibronectin, keratin, ella Chin, royal jelly, chondroitin sulfate heparin, glycerophospholipid, glyceroglycolipid, sphingophospholipid, sphingoglycolipid, linoleic acid or its esters, eicosapentaenoic acid or its esters, pectin, bifidobacteria fermentation product, lactic acid fermentation product, yeast Extract, Ganoderma mycelium culture or extract thereof, wheat germ oil, avocado oil, rice germ oil, jojoba oil, soybean phospholipid, γ-oryzanol, belude oyster extract, juniper extract, dianthus extract, typhoid extract, diatomaceous earth extract Extract, burdock extract, mannen wax extract, arnica extract, wheat bran, pyrrolidone carboxylic acid, tomato extract, camellia oil, soybean phospholipid, hyaluronic acid, threonine, ammonium glycolate, methyl silano alginate , Yokuinin, Toki Extract, Toki Root Extract, Soybean Extract, Asparagus Extract, DNA-Na, PCA-Na, RNA-Na, Ashitaba Extract, Aspartic Acid, Amatya Extract, Rahan Fruit Extract, Lactoferrin, Alanine, Arginine, Na Alginic Acid, Altea extract, aloe vera extract, oyster extract, barley buckthorn extract, oyster leaf, hydrolyzed keratin, hydrolyzed collagen, hydrolyzed conchiolin, hydrolyzed egg shell membrane, hydrolyzed egg white, hydrolyzed silk, hydrolyzed soy protein, brown alga extract, Karin extract, raspberry extract, xylitol, chitosan, cucumber extract, cucumber fruit extract, guava leaf extract, guava fruit extract, quince seed extract, glycine, glycerin, glucose, grapefruit extract, grapefruit fruit ex , Clematis extract, burdock extract, rice fermented liquor, chondroitin sulfate Na, fish collagena, hawthorn extract, shiitake extract, diou extract, glycerin, cystine, cysteine, horsetail extract, mallow extract, serine, sorbitol, soy protein, tomato extract, Sodium lactate, lactobacilli, fermented soybean extract, urea, wild rose extract, almond extract, almond fruit extract, corn oil, honey, sodium hyaluronate, fuchno extract, betaine, loofah extract, maltitol, maltose, mannitol, lily extract, lysine, apple extract , Lotus root extract, royal jelly, lanolin fatty acid polyethylene glycol 1000, lanolin fatty acid isopropyl, isopropyl myristate, isobutyl myristate, hexyldecanol, milk Myristyl, lanolin fatty acid, tricaprylglyceryl, oleyl alcohol, octyldodecyl oleate, decyl oleate, reduced lanolin, octyldodecanol, almond oil, avocado oil, olive oil, oleic acid, orange rough oil, cocoa butter, carrot extract, Sesame oil, sasanqua oil, safflower oil, dihydrocholesterol, squalane, cholesteryl stearate, ceramide 2, evening primrose oil, sunflower oil, sunflower oil, cefnide 3, sunflower seed oil hybrid sunflower oil, phytosphingosine, grape seed oil, jojoba oil, Examples are jojoba seed oil, mineral oil, mink oil, macadamia nut oil, meadow foam oil, yuri oil, eucalyptus leaf oil, lanolin, linoleic acid, rosehip oil, petrolatum and polyglutamic acid. .

紫外線吸収剤 として、安息香酸アミル、パラアミノ安息香酸オクチル、サリチル酸エチレングリコール、サリチル酸フェニル、サリチル酸オクチル、サリチル酸ベンジル、サリチル酸ブチルフェニル、サリチル酸ホモメンチル、ケイ皮酸ベンジル、パラメトキシケイ皮酸2−エトキシエチル、パラメトキシケイ皮酸オクチル、ジパラメトキシケイ皮酸モノ2−エチルヘキサン酸グリセリル、パラメトキシケイ皮酸イソプロピル、ジイソプロピル・ジイソプロピルケイ皮酸エステル混合物、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、ヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸またはその塩、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノンジスルフォン酸ナトリウム、ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、4−tert−ブチル−4’−メトキシ−ジベンゾイルメタン、2、4、6−トリアニリノ−p−(カルボ−2’−エチルヘキシル−1’−オキシ)−1、3、5−トリアジン、2-(2-ヒドロキシ-5-メチルフェニル)ベンゾトリアゾール、パラジメチルアミノ安息香酸2-エチルヘキシル、パラアミノ安息香酸エチル、トプチルメトキシジペンゾイルメタン、オキシベンゾン-1、グアイアズレンスルホン酸エチル、シノキサート、及びアントラニル酸系紫外線吸収剤 (例えば、ホモメンチル−N− アセチルアントラニレート)、ジメトキシベンジリデンジオキソイミダゾリジンプロピオン酸エチルヘキシルなどが例示される。また、紫外線散乱剤とし、酸化チタン、酸化亜鉛などが例示される。   Ultraviolet absorbers include amyl benzoate, octyl paraaminobenzoate, ethylene glycol salicylate, phenyl salicylate, octyl salicylate, benzyl salicylate, butylphenyl salicylate, homomenthyl salicylate, benzyl cinnamate, 2-ethoxyethyl paramethoxycinnamate, para Octyl methoxycinnamate, glyceryl mono-2-ethylhexanoate diparamethoxycinnamate, isopropyl paramethoxycinnamate, diisopropyl diisopropylcinnamate ester mixture, urocanic acid, ethyl urocanate, hydroxymethoxybenzophenone, hydroxymethoxybenzophenone Sulfonic acid or its salt, dihydroxymethoxybenzophenone, dihydroxymethoxybenzophenone sodium disulfonate, dihydro Xylbenzophenone, tetrahydroxybenzophenone, 4-tert-butyl-4′-methoxy-dibenzoylmethane, 2,4,6-trianilino-p- (carbo-2′-ethylhexyl-1′-oxy) -1,3, 5-triazine, 2- (2-hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole, 2-ethylhexyl paradimethylaminobenzoate, ethyl paraaminobenzoate, toptylmethoxydipenzoylmethane, oxybenzone-1, ethyl guaiazulenesulfonate, synoxate And anthranilic acid ultraviolet absorbers (for example, homomenthyl-N-acetylanthranilate), ethyl hexyl dimethoxybenzylidenedioxoimidazolidinepropionate, and the like. Examples of the ultraviolet scattering agent include titanium oxide and zinc oxide.

抗菌剤として、オウバク抽出液、ハロカルバン、クロロフェネシン、塩化リゾチーム、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン、イソプロピルメチルフェノール、チモール、ヘキサクロロフェン、ベルベリン、チオキソロン、サリチル酸またはそれらの誘導体、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、パラクロルメタクレゾール、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、イソプロピルメチルフェノール、石炭酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、ヘキサクロロフェン、塩化クロルヘキシジン、トリクロロカルバニリド、感光素、ビス(2−ピリジルチオ−1−オキシド)亜鉛、チアントール、ヒノキチオール、トリクロサン、トリクロロヒドロキシジフェニルエーテル、クロルヘキシジングルコン酸塩、フェノキシエタノール、レゾルシン、アズレン、サリチル酸、ジンクピリチオン、モノニトログアヤコールナトリウム、ウイキョウエキス、サンショウエキス、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンゼトニウム及びウンデシレン酸誘導体などが例示される。   As antibacterial agents, alum extract, halocarban, chlorophenesin, lysozyme chloride, alkyldiaminoethylglycine hydrochloride, isopropylmethylphenol, thymol, hexachlorophene, berberine, thioxolone, salicylic acid or derivatives thereof, benzoic acid, sodium benzoate, Paraoxybenzoic acid ester, parachlorometacresol, benzalkonium chloride, phenoxyethanol, isopropylmethylphenol, carboxylic acid, sorbic acid, potassium sorbate, hexachlorophene, chlorhexidine chloride, trichlorocarbanilide, photosensitizer, bis (2-pyridylthio- 1-oxide) zinc, thianthol, hinokitiol, triclosan, trichlorohydroxydiphenyl ether, chlorhexidine gluconate, phenol Butoxyethanol, resorcinol, azulene, salicylic acid, zinc pyrithione, sodium mononitroguayacol, fennel extract, pepper extract, cetylpyridinium chloride, etc. benzethonium chloride and undecylenic acid derivatives.

本発明の低毒性SL含有組成物は、後述する試験例で示すように、そのもの自体に皮膚保湿作用、皮膚や毛髪のダメージ(肌荒れ、毛髪のキューティクルの損傷)を改善する作用、皮膚や毛髪を保護する作用がある。このため、本発明の低毒性SL含有組成物は、それ自体を保湿剤(皮膚、毛髪)、肌荒れ改善剤、皮膚保護剤、及び毛髪保護剤などとして用いることができる。この場合、これらの各製品100質量%中に含まれる本発明の低毒性SL含有組成物の割合は、製品の目的(美白、肌荒れ改善、皮膚・毛髪保護など)に応じて、その効果が発揮できる量であればよく、通常、低毒性SL含有組成物に含まれる脱アセチル酸型SLの量に換算して0.01〜10質量%の範囲から適宜選択設定することができる。   The low-toxic SL-containing composition of the present invention, as shown in test examples to be described later, itself has a skin moisturizing action, an action for improving skin and hair damage (rough skin, hair cuticle damage), skin and hair. There is a protective effect. Therefore, the low toxicity SL-containing composition of the present invention can be used as a moisturizer (skin, hair), a rough skin improving agent, a skin protecting agent, a hair protecting agent and the like. In this case, the ratio of the low-toxic SL-containing composition of the present invention contained in 100% by mass of each product exhibits its effect according to the purpose of the product (whitening, improvement of rough skin, skin / hair protection, etc.). The amount may be any amount, and can be appropriately selected from a range of 0.01 to 10% by mass in terms of the amount of deacetylated SL contained in the low-toxic SL-containing composition.

(IV)低毒性SL含有組成物の製造方法
(IV-1)原料(SL含有培養物またはその処理物)
低毒性SL含有組成物の製造の原料として用いるSL含有培養物またはその処理物としては、SL産生酵母の培養物またはその処理物であってSLを含有する粗精製物を広く挙げることができる。SL産生酵母としては公知のものを用いることができ、例えば、前述するキャンディダ(スタメレラ)・ボンビコーラ(Candida bombicola)を好適に挙げることができる。なお、キャンディダ(スタメレラ)・ボンビコーラは生物資源バンクであるATCCに登録されており、そこから入手することができる(Candida bombicola ATCC22214など)。また、本発明の低毒性SL含有組成物の製造には、SL(酸型、ラクトン型)を産生することが知られているキャンディダ属に属する他のSL産生酵母を使用することもできる。かかるSL産生酵母として、例えばキャンディダ・マグノリエ(Candida magnoliae)、キャンディダ・グロペンギッセリ(Candida gropengisseri)、及びキャンディダ・アピコーラ(Candida apicola)、キャンディダ・ペトロフィラム(Candida petrophilum)、キャンディダ・ボゴリエンシス(Candida bogoriensis)、キャンディダ・バチスタエ(Candida batistae)を挙げることができる。これらの酵母は、保存機関から分譲された菌株又はその継代培養によって得られた菌株であってもよい。ここで、ロドトルラ(キャンディダ)・ボゴリエンシス NRCC9862(Rhodotorula(Candida)bogoriensis NRCC9862)が生産するSLは、13−[(2’−O−β−D−glucopyranosyl−β−D−glucopyranosyl)oxy] docosanoic acid6’, 6”−diacetateであり、アルキル基の中央のヒドロキシル基とソホロースがグリコシド結合している。このSLは前記一般式(1)及び(2)とは異なるが、ソホロースとヒドロキシ脂肪酸から構成される点では同じであり、本発明が対象とするSLに含まれる。
(IV) Method for producing low-toxic SL-containing composition
(IV-1) Raw material (SL-containing culture or processed product thereof)
Examples of the SL-containing culture used as a raw material for the production of the low-toxic SL-containing composition or a processed product thereof include a wide variety of SL-producing yeast cultures or processed products thereof containing SL. Known SL-producing yeasts can be used, and for example, the above-mentioned Candida bombicola can be preferably mentioned. Candida (Starmelera) and Bonbicola are registered with the biological resource bank ATCC and can be obtained from them (Candida bombicola ATCC22214, etc.). In addition, for the production of the low-toxic SL-containing composition of the present invention, other SL-producing yeast belonging to the genus Candida, which is known to produce SL (acid type, lactone type), can also be used. Examples of such SL-producing yeast include Candida magnoliae, Candida gropengisseri, Candida apicola, Candida petrophilum, and Candida bogoriensis. bogoriensis) and Candida batistae. These yeasts may be strains distributed from preservation institutions or strains obtained by subculture thereof. Here, SL produced by Rhodotorula (Candida) Bogoriensis NRCC9862 (Rhodotorula (Candida) bogoriensis NRCC9862) is 13-[(2′-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosyl) oxycosic] 6 ', 6 "-diacetate, where the hydroxyl group at the center of the alkyl group and the sophorose are glycoside-bonded. This SL is different from the general formulas (1) and (2), but is composed of sophorose and hydroxy fatty acid. This is the same, and it is included in the SL targeted by the present invention.

またキャンディダ・フロリコーラ(Candida floricola)ZM−1502株(FERM P-21133)及びキャンディダ・フロリコーラ(Candida floricola)NBRC10700T株は、ジアセチル基を有する酸型SLのみを選択的に生産するSL産生酵母である。本発明の低毒性SL含有組成物の製造に際しては脱アセチル処理が必須になるものの、ラクトン型SLを含まない低毒性SL含有組成物を得るうえでは好適に使用することができる。なお、以下、当該SL産生酵母を、上記の酸型SL及びラクトン型SLの両者を産生するSL産生酵母(ラクトン型/酸型SL産生酵母)と区別するため、「酸型SL産生酵母」とも称する。   Candida floricola ZM-1502 strain (FERM P-21133) and Candida floricola NBRC10700T strain are SL-producing yeasts that selectively produce only acid type SL having a diacetyl group. is there. In the production of the low-toxic SL-containing composition of the present invention, deacetylation is essential, but it can be suitably used for obtaining a low-toxic SL-containing composition that does not contain lactone-type SL. Hereinafter, in order to distinguish the SL-producing yeast from the SL-producing yeast that produces both the acid-type SL and the lactone-type SL (lactone-type / acid-type SL-producing yeast), it is also referred to as “acid-type SL-producing yeast”. Called.

さらに非特許文献2に記載されているアセチルトランスフェラーゼ欠失キャディダ・ボンビコーラ(Candida bombicola)を使用することもでき、かかるアセチルトランスフェラーゼ欠失SL産生酵母によれば、非アセチル化SLを1段で製造することができる。   Furthermore, acetyltransferase-deficient Candida bombicola described in Non-Patent Document 2 can also be used, and according to such acetyltransferase-deficient SL-producing yeast, non-acetylated SL is produced in one stage. be able to.

SL産生酵母の培養方法としては、例えば、高濃度の糖と疎水性の油性基質を同時に与えて培養する方法等が好ましく挙げられる。又は、これに限らず、本発明の効果を妨げない限り広く公知の方法を適用できる。当該公知の方法は、特開2002−045195号公報(特許文献2)等に記載されたものであってもよい。具体的には、糖としてグルコース、疎水性の油性基質として脂肪酸と植物油からなる炭素源を用いて、SL産生酵母を培養する手法を用いることができる。   As a method for culturing SL-producing yeast, for example, a method of culturing by simultaneously giving a high concentration of sugar and a hydrophobic oily substrate can be mentioned. Alternatively, not limited to this, a widely known method can be applied as long as the effect of the present invention is not hindered. The known method may be one described in JP-A-2002-045195 (Patent Document 2). Specifically, a method of culturing SL-producing yeast using glucose as a sugar and a carbon source composed of a fatty acid and vegetable oil as a hydrophobic oily substrate can be used.

培地組成は、特に限定されないが、SLの脂肪酸部分は、培地成分として添加する疎水性基質の脂肪酸鎖長やその割合に依存することが知られており、ある程度の制御が可能である。たとえば、疎水性基質としては、オレイン酸あるいはオレイン酸を高い割合で含有する脂質が好適である。たとえば、パーム油、米ぬか油、ナタネ油、オリーブ油、サフラワー油などの植物油、及び豚脂や牛脂などの動物油が挙げられる。安定的に高い収量・収率でSLを発酵生産させる場合、炭素源として親水性の糖と疎水性の油脂を混合したものが好ましい。親水性基質としては、グルコースが多用される。   The medium composition is not particularly limited, but the fatty acid portion of SL is known to depend on the fatty acid chain length of the hydrophobic substrate added as a medium component and its ratio, and can be controlled to some extent. For example, as the hydrophobic substrate, oleic acid or a lipid containing a high proportion of oleic acid is suitable. Examples thereof include vegetable oils such as palm oil, rice bran oil, rapeseed oil, olive oil and safflower oil, and animal oils such as pork fat and beef tallow. In the case where SL is stably fermented and produced at a high yield and yield, a mixture of hydrophilic sugar and hydrophobic fat as a carbon source is preferable. Glucose is frequently used as the hydrophilic substrate.

得られた培養液から、例えば遠心分離やデカンテーション等の定法の固液分離法で液成分を分離除去した後、固形分を水洗いすることにより、SL含有画分(SL含有培養物)を得ることができる。なお、ラクトン型/酸型SL産生酵母の培養によって得られるSL含有画分(SL含有培養物)は、ラクトン型SLと酸型SLとの混合物(ラクトン型/酸型SL含有組成物)であり、通常、酸型SLの含有率はSL総量中45質量%未満(固形換算)である。一方、酸型SL産生酵母の培養によって得られるSL含有画分(SL含有培養物)に含まれるSLは、そのすべてがジアセチル基を有する酸型SLである。   From the obtained culture solution, for example, liquid components are separated and removed by a conventional solid-liquid separation method such as centrifugation or decantation, and then the solid content is washed with water to obtain an SL-containing fraction (SL-containing culture). be able to. The SL-containing fraction (SL-containing culture) obtained by culturing lactone-type / acid-type SL-producing yeast is a mixture of lactone-type SL and acid-type SL (lactone-type / acid-type SL-containing composition). Usually, the content rate of acid type SL is less than 45 mass% (solid conversion) in SL total amount. On the other hand, SL contained in the SL-containing fraction (SL-containing culture) obtained by culturing acid-type SL-producing yeast is all acid-type SL having a diacetyl group.

SL産生酵母の培養液から、ラクトン型/酸型SL含有組成物(または酸型SL含有組成物)を回収する方法は、本発明の効果を妨げない限り、公知の方法であってよく、例えば、特開2003−9896号公報(特許文献3)等に記載された方法を挙げることができる。かかる方法は、SL産生酵母の培養液またはそれから調製したSL含有画分のpHを調整することで、水に対するSLの溶解性を制御する方法である。具体的には、例えばSL産生酵母の培養液のpHをNaOH水溶液等で6〜7程度に調整してSLを可溶化し、これを遠心分離して回収した上清に、次いで硫酸水溶液等を添加してpH2〜3程度に調整することでSLを不溶化する。これを静置後、デカンテーションすることで約50%含水物としてラクトン型/酸型SL含有組成物(または酸型SL含有組成物)を調製することができる。   The method for recovering the lactone type / acid type SL-containing composition (or acid type SL-containing composition) from the culture solution of SL-producing yeast may be a known method as long as the effects of the present invention are not hindered. And a method described in JP-A-2003-9896 (Patent Document 3). Such a method is a method of controlling the solubility of SL in water by adjusting the pH of the SL-producing yeast culture solution or the SL-containing fraction prepared therefrom. Specifically, for example, the pH of the SL-producing yeast culture solution is adjusted to about 6 to 7 with an aqueous NaOH solution or the like to solubilize SL, and this is centrifuged and recovered, followed by an aqueous sulfuric acid solution or the like. SL is insolubilized by adding and adjusting to pH 2-3. The lactone type / acid type SL-containing composition (or acid type SL-containing composition) can be prepared as a hydrated product of about 50% by decanting after standing.

(IV-2)脂肪酸及び/又はヒドロキシ脂肪酸を除去する工程(脂肪酸除去工程)
本発明の低毒性SL含有組成物の製造方法には、SL含有培養物またはその処理物から(1)脂肪酸及び/又はヒドロキシ脂肪酸を除去する工程(脂肪酸除去工程)が含まれる。
(IV-2) Step of removing fatty acid and / or hydroxy fatty acid (fatty acid removal step)
The method for producing a low-toxic SL-containing composition of the present invention includes (1) a step of removing fatty acids and / or hydroxy fatty acids from the SL-containing culture or a processed product thereof (fatty acid removal step).

脂肪酸除去方法としては、(a)溶剤抽出法、(b)吸着法、及び(c)クロマトグラフィーを例示することができる。なお、これらの脂肪酸除去方法は、一種単独で行ってもよいし、2種以上を任意に組み合わせて使用することもできる。2以上の処理を併用する場合、処理の順序は順不同であり特に制限はされないが、好ましくは(a)→(c)または(b)→(c)などのように溶媒抽出または吸着を先に行うことが好ましい。   Examples of the fatty acid removal method include (a) solvent extraction method, (b) adsorption method, and (c) chromatography. In addition, these fatty acid removal methods may be performed individually by 1 type, and can also be used in combination of 2 or more types arbitrarily. When two or more treatments are used in combination, the treatment order is not particularly limited and is not particularly limited. Preferably, however, solvent extraction or adsorption is performed first as in (a) → (c) or (b) → (c). Preferably it is done.

(a)溶剤抽出法
溶剤抽出法は、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸がSLよりも疎水性が高いことを利用した分離方法である。一般的にSLを含有する溶液(通常、水)と相溶性のない溶剤を使用して、疎水性化合物である脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸をSL含有液から抽出除去する方法である。溶剤として使用されるものは、SL含有液と相溶性のない溶剤であればよく、特に制限されないものの、例えば酢酸エチル、ジエチルエーテル(エーテル)、及びヘキサンなどが挙げられる。特に酸型SLの回収率と脂肪酸およびヒドロキシ脂肪酸の除去率の高さからジエチルエーテル(エーテル)が好ましい。
(A) Solvent extraction method The solvent extraction method is a separation method utilizing the fact that fatty acids and hydroxy fatty acids are more hydrophobic than SL. In general, this is a method in which a fatty acid and a hydroxy fatty acid, which are hydrophobic compounds, are extracted and removed from a SL-containing liquid using a solvent that is not compatible with a solution containing SL (usually water). What is used as a solvent should just be a solvent incompatible with SL containing liquid, and although it does not restrict | limit in particular, For example, ethyl acetate, diethyl ether (ether), hexane, etc. are mentioned. In particular, diethyl ether (ether) is preferred because of the high recovery rate of acid SL and the high removal rate of fatty acids and hydroxy fatty acids.

また、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の除去率を上げるために処理対象のSL含有液のpHを予め酸性領域に調整しておくことが好ましい。酸性領域にすることで、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸のカルボキシル基がプロトン化され、より溶剤に回収され易くなる。特に制限はされないものの、酸性領域として、pH6程度以下を挙げることができる。より具体的にはpH1〜6未満程度、好ましくはpH1〜5程度、より好ましくはpH1〜4.5程度である。特に好ましくpH2〜4程度である。SL含有液(SL含有培養物またはその処理物)の酸性領域への調整は、通常pH調整剤が用いられる。pH調整剤としては、例えば、硫酸、塩酸、硝酸、燐酸、ホウ酸及びフッ化水素酸等の無機酸;ギ酸、酢酸、リンゴ酸、クエン酸、シュウ酸、グルタミン酸及びアスパラギン酸等の有機酸等が使用される。   In order to increase the removal rate of fatty acids and hydroxy fatty acids, it is preferable to adjust the pH of the SL-containing liquid to be treated to an acidic region in advance. By making it into an acidic region, the carboxyl group of fatty acid and hydroxy fatty acid is protonated and more easily recovered in a solvent. Although not particularly limited, the acidic region can include about pH 6 or less. More specifically, the pH is about 1 to less than 6, preferably about pH 1 to 5, more preferably about pH 1 to 4.5. The pH is particularly preferably about 2 to 4. For adjusting the SL-containing liquid (SL-containing culture or its treated product) to the acidic region, a pH adjuster is usually used. Examples of the pH adjuster include inorganic acids such as sulfuric acid, hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, boric acid and hydrofluoric acid; organic acids such as formic acid, acetic acid, malic acid, citric acid, oxalic acid, glutamic acid and aspartic acid. Is used.

前記溶剤抽出法の具体的な操作を、例えば溶剤としてジエチルエーテル(エーテル)、pH調整剤として硫酸を用いる場合を例にして説明すると、まずSL含有組成物(SL含有培養物またはその処理物)をエタノール可溶分が20質量%となるように分液漏斗に加えてpHを3に調整し、全量を蒸留水で100mlにする。次いで、これにエーテルを1/2〜2倍容量加えて激しく混合して静置し、下層を別の分液漏斗に移す。さらに別の分液漏斗に移した水相成分にエーテルを1/2〜2倍容量加えて同様に激しく混合して静置する。こうした抽出操作を、少なくとも計2回、好ましくは3回以上行う。抽出作業後は、加温または減圧を行ってエーテルを除去することが好ましい。   The specific operation of the solvent extraction method will be described by taking, for example, the case of using diethyl ether (ether) as a solvent and sulfuric acid as a pH adjuster, as an example. First, an SL-containing composition (SL-containing culture or treated product thereof) Is added to a separatory funnel so that the ethanol-soluble content is 20% by mass, the pH is adjusted to 3, and the total volume is made up to 100 ml with distilled water. Next, add 1/2 to 2 times volume of ether to this, mix vigorously and let stand, and transfer the lower layer to another separatory funnel. Further, add 1/2 to 2 times volume of ether to the aqueous phase component transferred to another separatory funnel, and mix vigorously in the same manner and let stand. Such extraction operation is performed at least twice, preferably three times or more. After the extraction operation, it is preferable to remove ether by heating or decompressing.

(b)吸着法
吸着法は、使用する吸着剤に対するSL並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の親和性の差を利用した分離方法である。吸着剤としては、一般的に疎水性化合物を選択的に吸着することができるものを使用することができ、例えば活性炭、シリカゲル、ゼオライト、及びイオン交換樹脂などが挙げられる。また、特開2008−64489号公報に記載されている酸化アルミナも用いることができる。疎水性の高い化合物を吸着するうえで特に好ましいのは活性炭である。なお、イオン交換樹脂としては、強酸性カチオン交換樹脂、弱酸性カチオン交換樹脂、強塩基性アニオン交換樹脂、及び弱塩基性アニオン交換樹脂を挙げることができる。好ましくは強塩基性アニオン交換樹脂、及び弱塩基性アニオン交換樹脂である。
(B) Adsorption method The adsorption method is a separation method that utilizes the difference in the affinity of SL and fatty acids and hydroxy fatty acids for the adsorbent used. As the adsorbent, those that can selectively adsorb hydrophobic compounds can be used, and examples thereof include activated carbon, silica gel, zeolite, and ion exchange resin. Moreover, the alumina oxide described in Unexamined-Japanese-Patent No. 2008-64489 can also be used. Particularly preferred for adsorbing a highly hydrophobic compound is activated carbon. Examples of the ion exchange resin include strong acid cation exchange resins, weak acid cation exchange resins, strong basic anion exchange resins, and weak basic anion exchange resins. A strong basic anion exchange resin and a weak basic anion exchange resin are preferred.

また、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の吸着除去率を上げるために処理対象のSL含有液のpHを予め酸性領域に調整しておくことが好ましい。酸性領域にすることで、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸のカルボキシル基がプロトン化され、より吸着剤に吸着され易くなる。特に制限はされないものの、酸性領域として、pH6程度以下を挙げることができる。より具体的にはpH1〜6未満程度、好ましくはpH1〜5程度、より好ましくはpH1〜4.5程度である。特に好ましくpH2〜4程度である。SL含有液(SL含有培養物またはその処理物)の酸性領域への調整は、通常pH調整剤が用いられる。pH調整剤は、上記(a)にて説明したものが同様に使用できる。   Moreover, in order to increase the adsorption removal rate of fatty acids and hydroxy fatty acids, it is preferable to adjust the pH of the SL-containing liquid to be treated to an acidic region in advance. By setting it as an acidic region, the carboxyl group of fatty acid and hydroxy fatty acid is protonated and more easily adsorbed by the adsorbent. Although not particularly limited, the acidic region can include about pH 6 or less. More specifically, the pH is about 1 to less than 6, preferably about pH 1 to 5, more preferably about pH 1 to 4.5. The pH is particularly preferably about 2 to 4. For adjusting the SL-containing liquid (SL-containing culture or its treated product) to the acidic region, a pH adjuster is usually used. As the pH adjuster, those described in the above (a) can be used similarly.

前記吸着法の具体的な操作を、例えば吸着剤として活性炭、pH調整剤として硫酸を用いる場合を例にして説明すると、まずエタノール可溶分30質量%相当のSL含有組成物(SL含有培養物またはその処理物)に硫酸を添加してpH3に調整し、これに活性炭を全量の5〜15質量%となるように加えて混合する。活性炭による脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の吸着効率の向上、及び活性炭のろ過除去の観点から、上記混合液は加温することもできる。加温温度は特に制限されないが、40〜100℃未満、好ましくは50〜100℃未満、より好ましくは55〜100℃未満、特に好ましくは60〜100℃未満を例示することができる。   The specific operation of the adsorption method will be described by taking, for example, the case where activated carbon is used as the adsorbent and sulfuric acid is used as the pH adjuster. Alternatively, sulfuric acid is added to the treated product) to adjust to pH 3, and activated carbon is added thereto and mixed so as to be 5 to 15% by mass of the total amount. From the viewpoint of improving the adsorption efficiency of fatty acids and hydroxy fatty acids by activated carbon, and filtering and removing activated carbon, the above mixed solution can be heated. The heating temperature is not particularly limited, and examples thereof include 40 to less than 100 ° C, preferably less than 50 to 100 ° C, more preferably less than 55 to 100 ° C, and particularly preferably less than 60 to 100 ° C.

(c)クロマトグラフィー
クロマトグラフィーは、両親媒性であるSLの構造を利用した分離方法である。一般的に、固定相として用いられる充填剤(吸着剤)には、当該分野で公知の任意のシリカゲル、オクタデシルシリカゲル(ODS)樹脂、イオン交換樹脂、または合成吸着剤などが用いられる。本発明で採用するクロマトグラフィーは、分配クロマトグラフィー、特に逆相クロマトグラフィーであることが好ましい。当該逆相クロマトグラフィーによると、環境及び人体に対して安全性の高い溶離液(移動相)を使用することができる。
(C) Chromatography Chromatography is a separation method that utilizes the amphiphilic SL structure. In general, any silica gel, octadecyl silica gel (ODS) resin, ion exchange resin, or synthetic adsorbent known in the art is used as a filler (adsorbent) used as a stationary phase. The chromatography employed in the present invention is preferably partition chromatography, particularly reverse phase chromatography. According to the reverse phase chromatography, it is possible to use an eluent (mobile phase) that is highly safe for the environment and the human body.

クロマトグラフィーとして逆相クロマトグラフィーを用いる場合、充填剤としては、ODS樹脂等を用いることが好ましい。シリカゲル担体に疎水性オクタデシル基等が化学修飾されたODS樹脂を用いることで、SLのアルキル側鎖との疎水性相互作用を利用して、SL含有組成物(SL含有培養物またはその処理物)から効率的に脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を除去することができる。逆相クロマトグラフィーの溶離液(移動相)としては、分離効率等の点から、固定相として用いる充填剤より極性の強い溶媒を用いることが好ましい。このような溶離液としては、例えば、メタノール及びエタノール等の低級アルコールと水との混合液が挙げられるが、安全性及び環境の面から、好ましくはエタノールと水との混合液である。当該溶離液には、好ましくは揮発性の酸成分を0.01〜0.2容量%、好ましくは0.05〜0.1容量%程度の割合で配合しておくことが好ましく、かかる酸成分としてはギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸(TFA)を例示することができる。   When reverse phase chromatography is used as chromatography, ODS resin or the like is preferably used as the filler. Using an ODS resin in which a hydrophobic octadecyl group or the like is chemically modified on a silica gel carrier, utilizing a hydrophobic interaction with an alkyl side chain of SL, an SL-containing composition (SL-containing culture or treated product thereof) Can efficiently remove fatty acids and hydroxy fatty acids. As the eluent (mobile phase) for reverse phase chromatography, it is preferable to use a solvent having a polarity stronger than that of the filler used as the stationary phase from the viewpoint of separation efficiency and the like. As such an eluent, for example, a mixed solution of lower alcohol such as methanol and ethanol and water can be mentioned. From the viewpoint of safety and environment, a mixed solution of ethanol and water is preferable. The eluent preferably contains a volatile acid component in a proportion of about 0.01 to 0.2% by volume, preferably about 0.05 to 0.1% by volume. Examples thereof include formic acid, acetic acid, and trifluoroacetic acid (TFA).

また、固定相への酸型SLの吸着量を増加させて、酸型SLの回収率を上げるために、クロマトグラフィーに供するSL含有液のpHを予め酸性領域に調整しておくことが好ましい。酸性領域としては、酸型SLのpKa値がpH6.1〜6.4であることから、好ましくはpH6程度未満である。より具体的にはpH1〜6未満程度、好ましくはpH1〜5程度、より好ましくはpH1〜4.5程度である。特に好ましくpH2〜4程度である。SL含有液(SL含有培養物またはその処理物)の酸性領域への調整は、通常pH調整剤が用いられる。pH調整剤は、上記(a)にて説明したものが同様に使用できる。   Moreover, in order to increase the adsorption amount of the acid type SL to the stationary phase and increase the recovery rate of the acid type SL, it is preferable to previously adjust the pH of the SL-containing liquid to be subjected to chromatography to an acidic region. As an acidic region, since the pKa value of acid type SL is pH 6.1-6.4, it is preferably less than about pH 6. More specifically, the pH is about 1 to less than 6, preferably about pH 1 to 5, more preferably about pH 1 to 4.5. The pH is particularly preferably about 2 to 4. For adjusting the SL-containing liquid (SL-containing culture or its treated product) to the acidic region, a pH adjuster is usually used. As the pH adjuster, those described in the above (a) can be used similarly.

前記クロマトグラフィーの具体的な操作を、例えば固定相としてODS樹脂、移動相をとしてエタノール水溶液を用いる場合を例にして説明すると、固定相にSL含有組成物(SL含有培養物またはその処理物)を供した後、約70〜80%(容量%を意味する。以下同じ)未満のエタノール濃度の溶離液(エタノール水溶液)を流すことで脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸などを含む不純物を吸着保持させた状態で酸型SL含有画分を回収することができる。具体的には、例えば、以下の方法を例示することができる。
(1)カラム塔最上部(以下、分離塔塔頂)から約70〜80%未満濃度の溶離液(例えば、エタノール濃度が約70〜80%未満の溶離液(エタノール水溶液))を供給し、カラムを平衡化する。
(2)分離塔塔頂からSL含有組成物(SL含有培養物の処理物)を添加する。
(3)分離塔塔頂から約70〜80%未満濃度の前記溶離液を供給し、酸型SL含有画分を選択的に溶出させて回収する。
The specific operation of the chromatography will be described by taking, for example, the case where an ODS resin is used as a stationary phase and an aqueous ethanol solution is used as a mobile phase. An SL-containing composition (SL-containing culture or treated product) is used as the stationary phase. In the state where impurities including fatty acids and hydroxy fatty acids are adsorbed and retained by flowing an eluent (ethanol aqueous solution) having an ethanol concentration of less than about 70 to 80% (meaning volume%; the same applies hereinafter). A fraction containing acid type SL can be collected. Specifically, for example, the following method can be exemplified.
(1) An eluent having a concentration of less than about 70 to 80% (for example, an eluent having an ethanol concentration of less than about 70 to 80% (ethanol aqueous solution)) is supplied from the top of the column tower (hereinafter, the top of the separation tower). Equilibrate the column.
(2) Add SL-containing composition (processed product of SL-containing culture) from the top of the separation tower.
(3) The eluent having a concentration of less than about 70 to 80% is supplied from the top of the separation column, and the acid-type SL-containing fraction is selectively eluted and recovered.

なお、(1)及び(3)の各工程において、溶離液中のエタノール濃度は、上記の濃度範囲内で経時的に上昇させてもよいし(グラジェント溶出法)、また上記の濃度範囲内の同濃度に保持させてもよい(ステップワイズ溶出法)。好ましくは後者のステップワイズ溶出法であり、例えばエタノール濃度70%のエタノール水溶液で平衡化した固定相(カラム充填剤)に[(1)工程]、SL含有組成物を添加し[(2)工程]、次いでエタノール濃度70%のエタノール水溶液を流して、目的の酸型SL含有画分を溶出させ回収する[(3)工程]方法を例示することができる。また、[(3)工程]の前に、SL含有培養物中の臭気成分、色素成分、塩類を酸型SL含有画分から除去することを目的に70%未満のエタノール水溶液を用いることができる[(3´)工程]。その場合は[(1)工程]で平衡化させるエタノール濃度[(3´)工程]で使用するエタノール濃度と一致させる。   In each step of (1) and (3), the ethanol concentration in the eluent may be increased over time within the above concentration range (gradient elution method), or within the above concentration range. (Stepwise elution method). Preferably, the latter stepwise elution method is used. For example, an SL-containing composition is added to a stationary phase (column filler) equilibrated with an aqueous ethanol solution having an ethanol concentration of 70% [step (2)]. Then, an ethanol aqueous solution having an ethanol concentration of 70% is flowed to elute and collect the target acid-type SL-containing fraction [step (3)]. Moreover, before [(3) process], the ethanol aqueous solution of less than 70% can be used for the purpose of removing the odor component, pigment | dye component, and salts in SL containing culture from an acid type SL containing fraction [ (3 ′) Step]. In this case, the ethanol concentration to be equilibrated in [(1) step] is made to coincide with the ethanol concentration used in [(3 ′) step].

本発明の低毒性SL含有組成物は、SL含有培養物またはその処理物を、前述する(1)脂肪酸及び/又はヒドロキシ脂肪酸を除去する工程(脂肪酸除去工程)に加えて、(2)SLのアセチル基を脱離する工程(脱アセチル化工程)、及び(3)ラクトン型SLを除去する工程(ラクトン型SL除去処理工程)の少なくとも1方の工程に供することで調製することもできる。以下にこれらの処理工程について説明する。   The low-toxic SL-containing composition of the present invention comprises an SL-containing culture or a processed product thereof in addition to the above-described (1) step of removing fatty acids and / or hydroxy fatty acids (fatty acid removal step), It can also be prepared by subjecting it to at least one of a step of removing an acetyl group (deacetylation step) and a step of removing (3) lactone-type SL (lactone-type SL removal treatment step). These processing steps will be described below.

(IV-3)SLのアセチル基を脱離する工程(脱アセチル化工程)
脱アセチル化方法としては、(d)加水分解処理、及び(e)酵素処理を例示することができる。なお、これらの脱アセチル化方法は、一種単独で行ってもよいし、2種以上を任意に組み合わせて使用することもできる。2以上の処理を併用する場合、処理の順序は順不同であり特に制限はされない。なお、脱アセチル化工程は、SL含有培養物またはその処理物が、アセチル化SLを産生するSL産生酵母によって調製されたものである場合に好適に用いられる処理工程であり、SL含有培養物またはその処理物が、非アセチル化SLを選択的に産生するSL産生酵母(アセチルトランスフェラーゼ欠失SL産生酵母)によって調製されたものである場合に適用されない。
(IV-3) Step of removing acetyl group of SL (deacetylation step)
Examples of the deacetylation method include (d) hydrolysis treatment and (e) enzyme treatment. In addition, these deacetylation methods may be performed individually by 1 type, and can also be used in combination of 2 or more types arbitrarily. When two or more processes are used in combination, the order of the processes is not limited and is not particularly limited. The deacetylation step is a treatment step that is preferably used when the SL-containing culture or its treated product is prepared by an SL-producing yeast that produces acetylated SL. The treatment product is not applied when it is prepared by an SL-producing yeast that selectively produces non-acetylated SL (acetyltransferase-deficient SL-producing yeast).

(d)加水分解処理
加水分解処理には、本発明の効果を妨げない限り、広く公知の方法を用いることができる。例えば、水酸化物の金属塩(ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウムなど)、炭酸塩、リン酸塩、またはアルカノールアミン等の塩基を用いたアルカリ加水分解を好適に挙げることができる。さらに、加水分解処理には、各種の触媒、例えば、アルコール等を用いることも可能である。前記アルカリ加水分解を行う場合の温度、圧力及び時間は、SL含有培養物またはその処理物に含まれるSLのアセチル基を脱離するという目的及び効果が達成できるものである限り特に制限されないが、目的産物である酸型SLの分解や化学修飾等の副反応を抑制しながら、効率的に脱アセチル化を進行させることのできる温度、圧力及び時間を採用することが好ましい。この点から、反応温度は通常約30℃〜120℃の範囲であり、好ましくは約50℃〜90℃である。圧力は通常約1気圧〜10気圧の範囲であり、好ましくは約1気圧〜2気圧である。反応時間は通常約10分〜5時間の範囲であり、好ましくは約1時間〜3時間である。また、アルカリ加水分解を行う時間は、処理するSL含有組成物中のSLに結合しているアセチル基の数によって適宜設定できる。
(D) Hydrolysis treatment As long as the effects of the present invention are not hindered, widely known methods can be used for the hydrolysis treatment. For example, alkaline hydrolysis using a base such as a metal salt of hydroxide (such as sodium, potassium, calcium and magnesium), carbonate, phosphate, or alkanolamine can be preferably mentioned. Further, various catalysts such as alcohol can be used for the hydrolysis treatment. The temperature, pressure and time for performing the alkaline hydrolysis are not particularly limited as long as the purpose and effect of eliminating the acetyl group of SL contained in the SL-containing culture or its treated product can be achieved. It is preferable to employ a temperature, pressure, and time at which deacetylation can proceed efficiently while suppressing side reactions such as decomposition and chemical modification of the target product acid type SL. In this respect, the reaction temperature is usually in the range of about 30 ° C to 120 ° C, preferably about 50 ° C to 90 ° C. The pressure is usually in the range of about 1 atmosphere to 10 atmospheres, preferably about 1 atmosphere to 2 atmospheres. The reaction time is usually in the range of about 10 minutes to 5 hours, preferably about 1 hour to 3 hours. Moreover, the time which performs an alkali hydrolysis can be suitably set with the number of acetyl groups couple | bonded with SL in the SL containing composition to process.

(e)酵素処理
酵素を用いてSLに結合しているアセチル基を解離する方法は、アセチルエステルからアルコールと酢酸を生成する酵素を利用した方法である。酵素として利用されるのは、一般的にアセチルエステラーゼであり、例えばAspergillus niger、Rhodococcus sp.、Meyerozyma guilliermondiiから単離されたアセチルエステラーゼが挙げられる。
(E) Enzyme treatment A method of dissociating an acetyl group bonded to SL using an enzyme is a method using an enzyme that generates alcohol and acetic acid from an acetyl ester. As the enzyme, generally used is acetylesterase, and examples thereof include acetylesterase isolated from Aspergillus niger, Rhodococcus sp., Meyerozyma guilliermondii.

アセチルエステラーゼの反応に適している条件はpH5〜8であり、好ましくは6〜7.5である。pH調整剤として、この範囲の中に納まるのであれば、通常使用されるpH調整剤を使用することができる。例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、硫酸、塩酸などが使用できる。反応温度としては、20〜40℃が好ましく、20〜35℃が特に好ましい。反応時間は通常6時間以上行われ、12時間以上が好ましく、特に好ましいのは1日以上である。   Suitable conditions for the reaction of acetylesterase are pH 5-8, preferably 6-7.5. As long as it falls within this range as a pH adjusting agent, a commonly used pH adjusting agent can be used. For example, sodium hydroxide, potassium hydroxide, sulfuric acid, hydrochloric acid and the like can be used. As reaction temperature, 20-40 degreeC is preferable and 20-35 degreeC is especially preferable. The reaction time is usually 6 hours or longer, preferably 12 hours or longer, particularly preferably 1 day or longer.

前記酵素を用いた脱アセチル化処理は、本発明の目的効果を妨げない限り特に限定されないが、例えばSL含有組成物を10質量%となるように0.1Mリン酸水溶液(pH7.0)に投入し、アセチルエステラーゼを50Uとなるように加え、室温(25℃)で1日攪拌を行う方法を例示することができる。   The deacetylation treatment using the enzyme is not particularly limited as long as the objective effect of the present invention is not hindered. For example, a 0.1M phosphoric acid aqueous solution (pH 7.0) is used so that the SL-containing composition becomes 10% by mass. An example is a method of adding acetylesterase to 50 U and stirring at room temperature (25 ° C.) for 1 day.

(IV-4)ラクトン型SLを除去する工程(ラクトン型SL除去工程)
ラクトン型SL除去方法としては、(f)加水分解処理、及び(g)クロマトグラフィーを例示することができる。これらのラクトン型SL除去方法は、(f)及び(g)のいずれかひとつを単独で行ってもよいし、2つを任意に組み合わせて使用することもできる。2つの処理を併用する場合、処理の順序は順不同であり特に制限はされないが、好ましくは(f)→(g)である。なお、ラクトン型SL除去処理工程は、SL含有培養物またはその処理物が、酸型SLとラクトン型SLの両方を産生するSL産生酵母(ラクトン型/酸型SL産生酵母)によって調製されたものである場合に好適に用いられる処理工程であり、SL含有培養物またはその処理物が、酸型SLを選択的に産生するSL産生酵母(酸型SL産生酵母)によって調製されたものである場合に適用されない。
(IV-4) Step of removing lactone-type SL (Lactone-type SL removal step)
Examples of the lactone-type SL removal method include (f) hydrolysis treatment and (g) chromatography. In these lactone-type SL removal methods, either one of (f) and (g) may be performed alone, or two may be used in any combination. When two processes are used in combination, the order of the processes is not particularly limited and is not particularly limited, but is preferably (f) → (g). In addition, the lactone type SL removal treatment step is prepared by SL-producing yeast (lactone type / acid type SL producing yeast) in which the SL-containing culture or the treated product produces both acid type SL and lactone type SL. The SL-containing culture or the processed product thereof is prepared by SL-producing yeast that selectively produces acid-type SL (acid-type SL-producing yeast). Not applicable.

(f)加水分解処理
ここで用いられる加水分解処理は、SL含有培養物またはその処理物に含まれるラクトン型SLのラクトン環を開環して酸型SLに変換する処理である。
(F) Hydrolysis treatment The hydrolysis treatment used here is a treatment for opening the lactone ring of the lactone type SL contained in the SL-containing culture or the treated product to convert it into the acid type SL.

当該加水分解処理には、本発明の効果を妨げない限り、広く公知の方法を用いることができる。例えば、水酸化物の金属塩(ナトリウム、カリウム、カルシウム及びマグネシウムなど)、炭酸塩、リン酸塩、またはアルカノールアミン等の塩基を用いたアルカリ加水分解を好適に挙げることができる。さらに、加水分解処理には、各種の触媒、例えば、アルコール等を用いることも可能である。前記アルカリ加水分解を行う場合の温度、圧力及び時間は、SL含有培養物またはその処理物に含まれるラクトン型SLのラクトン環を開環するという目的及び効果が達成できるものである限り特に制限されないが、目的産物である酸型SLの分解や化学修飾等の副反応を抑制しながら、効率的にラクトン環の開環を進行させることのできる温度、圧力及び時間を採用することが好ましい。この点から、反応温度は通常約30℃〜120℃の範囲であり、好ましくは約50℃〜90℃である。圧力は通常約1気圧〜10気圧の範囲であり、好ましくは約1気圧〜2気圧である。反応時間は通常約10分〜5時間の範囲であり、好ましくは約1時間〜3時間である。また、アルカリ加水分解を行う時間は、処理するSL含有組成物中に含まれるラクトン型SLの割合によって適宜設定できる。   A widely known method can be used for the hydrolysis treatment as long as the effects of the present invention are not hindered. For example, alkaline hydrolysis using a base such as a metal salt of hydroxide (such as sodium, potassium, calcium and magnesium), carbonate, phosphate, or alkanolamine can be preferably mentioned. Further, various catalysts such as alcohol can be used for the hydrolysis treatment. The temperature, pressure, and time for performing the alkaline hydrolysis are not particularly limited as long as the purpose and effect of opening the lactone ring of the lactone type SL contained in the SL-containing culture or its treated product can be achieved. However, it is preferable to employ a temperature, pressure, and time at which the lactone ring can be efficiently opened while suppressing side reactions such as decomposition and chemical modification of the acid type SL that is the target product. In this respect, the reaction temperature is usually in the range of about 30 ° C to 120 ° C, preferably about 50 ° C to 90 ° C. The pressure is usually in the range of about 1 atmosphere to 10 atmospheres, preferably about 1 atmosphere to 2 atmospheres. The reaction time is usually in the range of about 10 minutes to 5 hours, preferably about 1 hour to 3 hours. Moreover, the time which performs alkali hydrolysis can be suitably set with the ratio of lactone type SL contained in SL containing composition to process.

(g)クロマトグラフィー
ここで用いられるクロマトグラフィーは、SL含有培養物またはその処理物に含まれるラクトン型SLを選択的に除去する処理である。
(G) Chromatography The chromatography used here is a treatment for selectively removing lactone-type SL contained in the SL-containing culture or its treated product.

一般的に、固定相として用いられる充填剤(吸着剤)には、当該分野で公知の任意のシリカゲル、オクタデシルシリカゲル(ODS)樹脂、イオン交換樹脂、合成吸着剤などが用いられる。本発明で採用するクロマトグラフィーは、分配クロマトグラフィー、特に逆相クロマトグラフィーであることが好ましい。   In general, any silica gel, octadecyl silica gel (ODS) resin, ion exchange resin, synthetic adsorbent and the like known in the art are used as a filler (adsorbent) used as a stationary phase. The chromatography employed in the present invention is preferably partition chromatography, particularly reverse phase chromatography.

クロマトグラフィーとして逆相クロマトグラフィーを用いる場合、充填剤としては、ODS樹脂等を用いることが好ましい。逆相クロマトグラフィーの溶離液(移動相)としては、分離効率等の点から、固定相として用いる充填剤より極性の強い溶媒を用いることが好ましい。このような溶離液としては、例えば、メタノール及びエタノール等の低級アルコールと水との混合液が挙げられるが、安全性及び環境の面から、好ましくはエタノールと水との混合液である。当該溶離液には、好ましくは揮発性の酸成分を0.01〜0.2容量%、好ましくは0.05〜0.1容量%程度の割合で配合しておくことが好ましく、かかる酸成分としてはギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸(TFA)を例示することができる。   When reverse phase chromatography is used as chromatography, ODS resin or the like is preferably used as the filler. As the eluent (mobile phase) for reverse phase chromatography, it is preferable to use a solvent having a polarity stronger than that of the filler used as the stationary phase in view of separation efficiency and the like. As such an eluent, for example, a mixed solution of lower alcohol such as methanol and ethanol and water can be mentioned. From the viewpoint of safety and environment, a mixed solution of ethanol and water is preferable. The eluent preferably contains a volatile acid component in a proportion of about 0.01 to 0.2% by volume, preferably about 0.05 to 0.1% by volume. Examples thereof include formic acid, acetic acid, and trifluoroacetic acid (TFA).

また、固定相への酸型SLの吸着量を増加させて、酸型SLの回収率を上げるために、クロマトグラフィーに供するSL含有液のpHを予め酸性領域に調整しておくことが好ましい。酸性領域としては、酸型SLのpKa値がpH6.1〜6.4であることから、好ましくはpH6程度未満である。より具体的にはpH1〜6未満程度、好ましくはpH1〜5程度、より好ましくはpH1〜4.5程度である。特に好ましくpH2〜4程度である。SL含有液(SL含有培養物またはその処理物)の酸性領域への調整は、通常pH調整剤が用いられる。pH調整剤は、上記(a)にて説明したものが同様に使用できる。   Moreover, in order to increase the adsorption amount of the acid type SL to the stationary phase and increase the recovery rate of the acid type SL, it is preferable to previously adjust the pH of the SL-containing liquid to be subjected to chromatography to an acidic region. As an acidic region, since the pKa value of acid type SL is pH 6.1-6.4, it is preferably less than about pH 6. More specifically, the pH is about 1 to less than 6, preferably about pH 1 to 5, more preferably about pH 1 to 4.5. The pH is particularly preferably about 2 to 4. For adjusting the SL-containing liquid (SL-containing culture or its treated product) to the acidic region, a pH adjuster is usually used. As the pH adjuster, those described in the above (a) can be used similarly.

前記クロマトグラフィーの具体的な操作を、例えば固定相としてODS樹脂、移動相をとしてエタノール水溶液を用いる場合を例にして説明すると、固定相にSL含有組成物(SL含有培養物またはその処理物)を供した後、約70〜80%(容量%を意味する。以下同じ)未満のエタノール濃度の溶離液(エタノール水溶液)を流すことでラクトン型SLを含む不純物を吸着保持させた状態で酸型SL含有画分を回収することができる。具体的には、例えば、以下の方法を例示することができる。
(1)カラム塔最上部(以下、分離塔塔頂)から約70〜80%未満濃度の溶離液(例えば、エタノール濃度が約70〜80%未満の溶離液(エタノール水溶液))を供給し、カラムを平衡化する。
(2)分離塔塔頂からSL含有組成物(SL含有培養物の処理物)を添加する。
(3)分離塔塔頂から約70〜80%未満濃度の前記溶離液を供給し、酸型SL含有画分を選択的に溶出させて回収する。
The specific operation of the chromatography will be described by taking, for example, the case where an ODS resin is used as a stationary phase and an aqueous ethanol solution is used as a mobile phase. An SL-containing composition (SL-containing culture or treated product) is used as the stationary phase. In the state in which impurities including lactone type SL are adsorbed and retained by flowing an eluent (ethanol aqueous solution) having an ethanol concentration of less than about 70 to 80% (meaning volume%; the same shall apply hereinafter). The SL-containing fraction can be collected. Specifically, for example, the following method can be exemplified.
(1) An eluent having a concentration of less than about 70 to 80% (for example, an eluent having an ethanol concentration of less than about 70 to 80% (ethanol aqueous solution)) is supplied from the top of the column tower (hereinafter, the top of the separation tower). Equilibrate the column.
(2) Add SL-containing composition (processed product of SL-containing culture) from the top of the separation tower.
(3) The eluent having a concentration of less than about 70 to 80% is supplied from the top of the separation column, and the acid-type SL-containing fraction is selectively eluted and recovered.

なお、(1)及び(3)の各工程において、溶離液中のエタノール濃度は、上記の濃度範囲内で経時的に上昇させてもよいし(グラジェント溶出法)、また上記の濃度範囲内の同濃度に保持させてもよい(ステップワイズ溶出法)。好ましくは後者のステップワイズ溶出法であり、例えばエタノール濃度70%のエタノール水溶液で平衡化した固定相(カラム充填剤)に[(1)工程]、SL含有組成物を添加し[(2)工程]、次いでエタノール濃度70%のエタノール水溶液を流して、目的の酸型SL含有画分を溶出させ回収する[(3)工程]方法を例示することができる。また、[(3)工程]の前に、SL含有培養物中の臭気成分、色素成分、塩類を酸型SL含有画分から除去することを目的に70%未満のエタノール水溶液を用いることができる[(3´)工程]。その場合は[(1)工程]で平衡化させるエタノール濃度[(3´)工程]で使用するエタノール濃度と一致させる。   In each step of (1) and (3), the ethanol concentration in the eluent may be increased over time within the above concentration range (gradient elution method), or within the above concentration range. (Stepwise elution method). Preferably, the latter stepwise elution method is used. For example, an SL-containing composition is added to a stationary phase (column filler) equilibrated with an aqueous ethanol solution having an ethanol concentration of 70% [step (2)]. Then, an ethanol aqueous solution having an ethanol concentration of 70% is flowed to elute and collect the target acid-type SL-containing fraction [step (3)]. Moreover, before [(3) process], the ethanol aqueous solution of less than 70% can be used for the purpose of removing the odor component, pigment | dye component, and salts in SL containing culture from an acid type SL containing fraction [ (3 ′) Step]. In this case, the ethanol concentration to be equilibrated in [(1) step] is made to coincide with the ethanol concentration used in [(3 ′) step].

本発明の低毒性SL含有組成物の製造方法は、使用するSL産生酵母が産生するSLの種類によって選択することができる。具体的には、SL含有培養物またはその処理物が、脱アセチル化された酸型SL(非アセチル化酸型SL)だけを有するものである場合は、上記で説明する(IV-2)脂肪酸除去工程を単独で行えばよい。一方、SL含有培養物またはその処理物がアセチル基を有するSLを含む場合および/または酸型SLに加えてラクトン型SLを含む場合は、(IV-2)脂肪酸除去工程に(IV-3)脱アセチル化工程および/または(IV-4)ラクトン型SL除去工程を組み合わせてなるものであってもよい。この場合、これらの工程の順序は、本発明の目的が達成できる限りにおいて特に制限されない。   The manufacturing method of the low toxicity SL containing composition of this invention can be selected with the kind of SL which SL production yeast to use produces. Specifically, when the SL-containing culture or its treated product has only deacetylated acid type SL (non-acetylated acid type SL), (IV-2) fatty acid described above The removal step may be performed alone. On the other hand, when the SL-containing culture or its treated product contains SL having an acetyl group and / or contains lactone type SL in addition to acid type SL, (IV-2) in the fatty acid removal step (IV-3) A combination of a deacetylation step and / or (IV-4) a lactone-type SL removal step may be used. In this case, the order of these steps is not particularly limited as long as the object of the present invention can be achieved.

2以上の工程の組み合わせ態様としては、例えば、SL含有培養物またはその処理物が酸型SL産生酵母から調製されたものである場合(例えば、特許文献1参照)、(IV-2)脂肪酸除去工程(例えば、(a)〜(c))の後に(IV-3)脱アセチル化工程(例えば、(d)〜(e))を実施してもよいし、逆に(IV-3)脱アセチル化工程(例えば、(d)〜(e))の後に(IV-2)脂肪酸除去工程(例えば、(a)〜(c))を実施してもよい。制限はされないが、(IV-3)脱アセチル化工程後に(IV-2)脂肪酸除去工程を行うことが好ましく、具体的には(d)加水分解処理及び(e)酵素処理のいずれか少なくともひとつの処理後に、(a)溶剤抽出法、(b)吸着法及び(c)クロマトグラフィーからなる処理のうちいずれか少なくともひとつの処理を実施する方法を挙げることができる。好ましくは(d)加水分解処理と(a)溶剤抽出法及び/または(c)クロマトグラフィーとの組み合わせである。   As a combination aspect of two or more steps, for example, when an SL-containing culture or a processed product thereof is prepared from acid-type SL-producing yeast (for example, see Patent Document 1), (IV-2) fatty acid removal The step (eg, (a) to (c)) may be followed by (IV-3) deacetylation step (eg, (d) to (e)) or vice versa. After the acetylation step (for example, (d) to (e)), (IV-2) fatty acid removal step (for example, (a) to (c)) may be performed. Although not limited, it is preferable to perform (IV-2) fatty acid removal step after (IV-3) deacetylation step, specifically, at least one of (d) hydrolysis treatment and (e) enzyme treatment After the treatment, there can be mentioned a method of performing at least one of the treatment consisting of (a) solvent extraction method, (b) adsorption method and (c) chromatography. A combination of (d) hydrolysis treatment and (a) solvent extraction method and / or (c) chromatography is preferred.

また、例えば、SL含有培養物またはその処理物がラクトン型/酸型SL産生酵母から調製されたものである場合(例えば、参考製造例1参照)、(IV-4)ラクトン型SL除去工程(例えば、(f)〜(g))後に、(IV-2)脂肪酸除去工程(例えば、(a)〜(c))及び(IV-3)脱アセチル化工程(例えば、(d)〜(e))の少なくともひとつの工程を順不同に組み合わせて実施してもよい。なお、(IV-4)ラクトン型SL除去工程である(f)及び(g)は、それぞれ(IV-3)脱アセチル化工程の(d)及び(IV-2)脂肪酸除去工程の(c)と重複するので、(IV-4)ラクトン型SL除去処理をすることで同時に(IV-3)脱アセチル化または(IV-2)脂肪酸除去をすることができる。好ましい組み合わせとしては、(d)(または(f))加水分解処理後に、(a)溶剤抽出法または(c)(または(g))クロマトグラフィーのいずれか少なくともひとつの処理を実施する方法を挙げることができる。   Further, for example, when the SL-containing culture or the treated product thereof is prepared from a lactone type / acid type SL producing yeast (for example, see Reference Production Example 1), (IV-4) a lactone type SL removal step ( For example, after (f) to (g)), (IV-2) fatty acid removal step (for example, (a) to (c)) and (IV-3) deacetylation step (for example, (d) to (e) )) May be carried out in any combination. (IV-4) The lactone-type SL removal step (f) and (g) are (IV-3) the deacetylation step (d) and (IV-2) the fatty acid removal step (c), respectively. Therefore, (IV-3) deacetylation or (IV-2) fatty acid removal can be performed simultaneously by performing (IV-4) lactone-type SL removal treatment. A preferable combination is a method in which (d) (or (f)) hydrolysis treatment is followed by at least one of (a) solvent extraction method or (c) (or (g)) chromatography. be able to.

さらにまた、例えば、SL含有培養物またはその処理物がアセチルトランスフェラーゼ欠失SL産生酵母から調製されたものである場合(例えば、非特許文献2参照)、(IV-4)ラクトン型SL除去工程(例えば、(f)〜(g))と(IV-2)脂肪酸除去工程(例えば、(a)〜(c))とを順不同に組み合わせて実施してもよい。好ましい組み合わせとしては、 (f)加水分解処理後に、(a)溶剤抽出法または(c)クロマトグラフィーのいずれか少なくともひとつの処理を実施する方法を挙げることができる。   Furthermore, for example, when the SL-containing culture or a processed product thereof is prepared from an acetyltransferase-deficient SL-producing yeast (see, for example, Non-Patent Document 2), (IV-4) a lactone-type SL removal step ( For example, (f) to (g)) and (IV-2) fatty acid removal steps (for example, (a) to (c)) may be combined in any order. Preferable combinations include (f) a method of performing at least one of (a) solvent extraction method and (c) chromatography after the hydrolysis treatment.

(V)SL含有組成物の低毒化方法
前述する製造方法によれば、SL産生酵母から調製とされるSL含有組成物を低毒化及び低刺激性化し、本発明の低毒性SL含有組成物を取得することができる。従って、上記の製造方法は、SL産生酵母の培養により製造されるSL含有組成物の低毒化方法または低刺激性化方法と言い換えることができる。
(V) Method for reducing the toxicity of an SL-containing composition According to the production method described above, the SL-containing composition prepared from SL-producing yeast is reduced in toxicity and hypoallergenic, and the low-toxic SL-containing composition of the present invention is used. You can get things. Therefore, the above production method can be paraphrased as a method for reducing the toxicity or the method for reducing the irritancy of the SL-containing composition produced by culturing SL-producing yeast.

当該低毒化方法(または低刺激性化方法)は、上記(IV)に記載する方法に従って実施することができ、当該欄には前述する(IV)欄の記載のすべてが援用される。また当該低毒化方法(または低刺激性化方法)により、(III)欄で説明した本発明の低毒性SL含有組成物を調製し取得することができる。従ってSL産生酵母から調製とされるSL含有組成物を低毒化及び低刺激性化することによって得られる低毒性SL含有組成物については(III)欄の記載のすべてが援用される。   The method for reducing toxicity (or the method for reducing irritation) can be carried out according to the method described in (IV) above, and all the descriptions in the column (IV) described above are incorporated in this column. Moreover, the low toxicity SL containing composition of this invention demonstrated in the (III) column can be prepared and acquired by the said reduction method (or reduction method). Therefore, all the descriptions in the column (III) are incorporated for the low-toxic SL-containing composition obtained by reducing and reducing the SL-containing composition prepared from the SL-producing yeast.

以下に本発明を実施例及び試験例に基づいてより具体的に説明する。但し、本発明はこれらの実施例及び試験例になんら限定されるものではなく、本発明の技術的思想内で当分野において通常の知識を有する者により、多くの変形が可能である。   Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples and test examples. However, the present invention is not limited to these examples and test examples, and many modifications are possible by those having ordinary knowledge in the art within the technical idea of the present invention.

参考製造例1:SLの産生(粗精製SL含有組成物−1の調製)
培養培地として、1L当たり、含水グルコース10g(日本食品化工社製、製品名:日食含水結晶ブドウ糖)、ペプトン10g(オリエンタル酵母社製、製品名:ペプトンCB90M)、酵母エキス5g(アサヒフードアンドヘルスケア社製、製品名:ミーストパウダーN)を含有する液体培地を使用し、30℃で2日間、Candidabombicola ATCC22214を振盪培養し、これを前培養液とした。
Reference Production Example 1: Production of SL (Preparation of crudely purified SL-containing composition-1)
As a culture medium, 10 g of hydrous glucose per liter (manufactured by Nippon Shokuhin Kako Co., Ltd., product name: eclipse hydrous crystal glucose), 10 g of peptone (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd., product name: Peptone CB90M), 5 g of yeast extract (Asahi Food and Health) Candida mbicocola ATCC 22214 was shake-cultured at 30 ° C. for 2 days using a liquid medium containing a product of Care Co., product name: Mist Powder N), and this was used as a preculture solution.

この前培養液を、5L容量の発酵槽に仕込んだ本培養培地(3L)に、仕込み量の4%の割合で植菌し、30℃で6日間、通気0.6vvmの条件下で培養し発酵させた。なお、本培養培地として、1L当たり、含水グルコース100g、パームオレイン50g(日油製、製品名:パーマリィ2000)、オレイン酸(ACID CHEM製、製品名:パルマック760)50g、塩化ナトリウム1g、リン酸一カリウム10g、硫酸マグネシウム7水和物10g、酵母エキス2.5g(アサヒフードアンドヘルスケア社製、製品名:ミーストパウダーN)、及び尿素1gを含む培地(滅菌前のpH4.5〜4.8)を用いた。   This preculture was inoculated into a main culture medium (3 L) charged in a 5 L fermentor at a rate of 4% of the charged amount, and cultured at 30 ° C. for 6 days under conditions of aeration 0.6 vvm. Fermented. As the main culture medium, 100 g of hydrous glucose per liter, 50 g of palm olein (manufactured by NOF Corporation, product name: Permaly 2000), 50 g of oleic acid (manufactured by ACID CHEM, product name: Palmac 760), 1 g of sodium chloride, phosphoric acid Medium containing 10 g of monopotassium, 10 g of magnesium sulfate heptahydrate, 2.5 g of yeast extract (manufactured by Asahi Food and Healthcare, product name: Mist Powder N), and 1 g of urea (pH 4.5 to 4 before sterilization) .8) was used.

培養開始から6日目に発酵を停止し、発酵槽から取り出した培養液を加熱してから室温に戻し、2〜3日間静置することで、下から順に、液状の褐色沈殿物層、主に菌体と思われる乳白色の固形物層、上澄みの3層に分離した。上澄を除去した後、工業用水または地下水を、除去した上澄の量と同量添加した。これを攪拌しながら、48質量%の水酸化ナトリウム溶液を徐々に加えてpH6.5〜6.9とし、培養液中に含まれるSLを可溶化した。これを卓上遠心分離機(ウェストファリア:ウェストファリアセパレーターAG製)で遠心処理することにより、乳白色の固形物を沈殿させ、上澄を回収した。回収した上澄を攪拌しながら、これに62.5質量%濃度の硫酸水溶液を徐々に加えてpH2.5〜3.0とし、SLを再不溶化した。これを2日間静置後、デカンテーションにより上澄を可能な限り除去し、残留物を「粗精製SL含有組成物−1」(約50%含水物、参考製造例品1)として取得した。   The fermentation was stopped on the 6th day from the start of the culture, the culture solution taken out from the fermenter was heated, returned to room temperature, and allowed to stand for 2 to 3 days, so that a liquid brown precipitate layer, It was separated into three layers, a milky white solid layer and a supernatant. After removing the supernatant, industrial water or groundwater was added in the same amount as the removed supernatant. While stirring this, a 48 mass% sodium hydroxide solution was gradually added to adjust the pH to 6.5 to 6.9 to solubilize SL contained in the culture solution. This was centrifuged with a tabletop centrifuge (Westphalia: manufactured by Westphalia Separator AG) to precipitate a milky white solid, and the supernatant was collected. While the collected supernatant was stirred, a 62.5% by mass sulfuric acid aqueous solution was gradually added to adjust the pH to 2.5 to 3.0, thereby resolubilizing SL. After leaving this to stand for 2 days, the supernatant was removed as much as possible by decantation, and the residue was obtained as “crudely refined SL-containing composition-1” (about 50% hydrated product, reference production example product 1).

参考製造例2:粗精製SL含有組成物−2の調製
前記参考製造例1で分取した粗精製SL含有組成物−1に水酸化ナトリウム水溶液を加えてpH14に調整し、80℃で2時間処理して加水分解(アルカリ加水分解)を行った。次いで、室温に戻してから硫酸(9.8M水溶液)を用いてpH7.5に調整し、発生した不溶物をろ過除去して、ろ液を「粗精製SL含有組成物−2」(参考製造例品2)として得た。
Reference Production Example 2: Preparation of Crude Purified SL-Containing Composition-2 To the crude purified SL-containing composition- 1 fractionated in Reference Production Example 1, an aqueous sodium hydroxide solution was added to adjust the pH to 14, and then at 80 ° C. for 2 hours It processed and hydrolyzed (alkali hydrolysis). Next, after returning to room temperature, the pH is adjusted to 7.5 using sulfuric acid (9.8 M aqueous solution), the generated insoluble matter is removed by filtration, and the filtrate is “crudely purified SL-containing composition-2” (reference production). Obtained as Example 2).

実施例1:低毒性SL含有組成物の製造
前記参考製造例2で得た粗精製SL含有組成物−2を、硫酸(9.8M水溶液)を用いてpH3.0に調整した。
Example 1: Production of low-toxic SL-containing composition The crude purified SL-containing composition-2 obtained in Reference Production Example 2 was adjusted to pH 3.0 using sulfuric acid (9.8 M aqueous solution).

これを下記条件の逆相カラムクロマトグラフィーに供した。
固定相:C18カラム(コスモシル40C18―PREP、ナカライテスク、15kg)移動相:50%及び70% エタノール水溶液。
This was subjected to reverse phase column chromatography under the following conditions.
Stationary phase: C18 column (Cosmosil 40C18-PREP, Nacalai Tesque, 15 kg) Mobile phase: 50% and 70% aqueous ethanol.

具体的には、pH3.0に調整した粗精製SL含有組成物−2 1.2kg(固定相充填量15kgに対し、エタノール可溶分として約3%の粗精製SL含有組成物−2)をC18カラムに添加し、まずこれに50%エタノール水溶液35Lを供することにより、水溶性不純物(臭気及び塩類、一部の色素物質)を溶出除去した。引き続きカラムに70%エタノール水溶液30Lを供して、70%エタノール溶液が溶出し始めてから最初の15LをSL含有画分としてC18カラムから回収した。   Specifically, 1.2 kg of crude purified SL-containing composition-2 adjusted to pH 3.0 (approximately 3% of crude purified SL-containing composition-2 as an ethanol-soluble component with respect to 15 kg of stationary phase filling amount) First, 35 L of 50% ethanol aqueous solution was added to the C18 column, and water-soluble impurities (odor and salts, some pigment substances) were eluted and removed. Subsequently, 30 L of 70% ethanol aqueous solution was supplied to the column, and after the 70% ethanol solution started to elute, the first 15 L was recovered from the C18 column as a fraction containing SL.

得られたSL含有液をエバポレーター(東洋ケミカルフードプラント)に供して溶媒(エタノール)を留去し濃縮した。該濃縮物を、スプレードライヤー(乾燥粉体化装置)(SUS304製R-3型、水分蒸発能力MAX5kg/h、坂本技研社製)に供して乾燥粉末化した。スプレードライの条件は、アトマイザー12000rpm、槽内温度105℃とした。その結果、微細な粉末が得られた(実施例品1)。   The obtained SL-containing liquid was subjected to an evaporator (Toyo Chemical Food Plant), and the solvent (ethanol) was distilled off and concentrated. The concentrate was subjected to a spray dryer (dry powder pulverizer) (SUS304 R-3 type, water evaporation capacity MAX 5 kg / h, manufactured by Sakamoto Giken Co., Ltd.) to form a dry powder. The spray drying conditions were an atomizer of 12,000 rpm and a bath temperature of 105 ° C. As a result, a fine powder was obtained (Example product 1).

実施例2:低毒性SL含有組成物の製造
前記参考製造例2で得た粗精製SL含有組成物−2を、硫酸(9.8M水溶液)を用いてpH3.0に調整した。
Example 2: Production of low-toxic SL-containing composition Crude purified SL-containing composition-2 obtained in Reference Production Example 2 was adjusted to pH 3.0 using sulfuric acid (9.8 M aqueous solution).

pH3.0に調整した粗精製SL含有組成物−2 1.2kgを分液漏斗に投入し、400mlのジエチルエーテルを加えて混合し、2層に分離させてから下層を新たな分液漏斗に回収した。再度400mlのジエチルエーテルを加え、ジエチルエーテルによる抽出作業を3回行った。下層から抜き取った回収液を50℃条件下においてエーテルの臭気が感じなくなるまで放置したあと、実施例1と同様に逆相カラムクロマトグラフィーに供した。具体的にはジエチルエーテルを揮発させた上記回収液をC18カラムに添加し、まずこれに50%エタノール水溶液35Lを供し、水溶性不純物(臭気及び塩類、一部の色素物質)を溶出除去した。引き続き70%エタノール水溶液30Lを供して、70%エタノール溶液が溶出し始めてから最初の15LをSL含有画分としてC18カラムから回収した。   1.2 kg of the crude purified SL-containing composition-2 adjusted to pH 3.0 is put into a separatory funnel, 400 ml of diethyl ether is added and mixed, separated into two layers, and the lower layer is put into a new separatory funnel. It was collected. 400 ml of diethyl ether was added again, and extraction with diethyl ether was performed three times. The recovered liquid extracted from the lower layer was allowed to stand until the odor of ether was not felt under 50 ° C. conditions, and then subjected to reverse phase column chromatography in the same manner as in Example 1. Specifically, the recovered liquid in which diethyl ether was volatilized was added to a C18 column, and first, 35 L of a 50% ethanol aqueous solution was applied thereto to elute and remove water-soluble impurities (odor and salts, some pigment substances). Subsequently, 30 L of 70% ethanol aqueous solution was supplied, and after the 70% ethanol solution started to elute, the first 15 L was recovered as a SL-containing fraction from the C18 column.

得られたSL含有液をエバポレーター(東洋ケミカルフードプラント)に供して溶媒(エタノール)を留去し濃縮した。該濃縮物を、スプレードライヤー(乾燥粉体化装置)(SUS304製R-3型、水分蒸発能力MAX5kg/h、坂本技研社製)に供して乾燥粉末化した。スプレードライの条件は、アトマイザー12000rpm、槽内温度105℃とした。その結果、微細な粉末が得られた(実施例品2)。   The obtained SL-containing liquid was subjected to an evaporator (Toyo Chemical Food Plant), and the solvent (ethanol) was distilled off and concentrated. The concentrate was subjected to a spray dryer (dry powder pulverizer) (SUS304 R-3 type, water evaporation capacity MAX 5 kg / h, manufactured by Sakamoto Giken Co., Ltd.) to form a dry powder. The spray drying conditions were an atomizer of 12,000 rpm and a bath temperature of 105 ° C. As a result, a fine powder was obtained (Example product 2).

実施例3〜7:低毒性SL含有組成物の製造
前記参考製造例2で得た粗精製SL含有組成物−2を、硫酸(9.8M水溶液)を用いてpH3.0に調整した。これを、ジエチルエーテル(エーテル)を用いて下記の方法で抽出した(溶剤抽出法)。
Examples 3 to 7: Production of low-toxic SL-containing composition The crude purified SL-containing composition-2 obtained in Reference Production Example 2 was adjusted to pH 3.0 using sulfuric acid (9.8 M aqueous solution). This was extracted by the following method using diethyl ether (ether) (solvent extraction method).

具体的には、pH3.0に調整した粗精製SL含有組成物−2を50mlのスクリューキャップ付きガラス遠沈管にエタノール可溶分が3gになるように加えて、これに蒸留水を添加し、全量が15mlになるように調整した。これに下記容量のエーテルを加えて激しく混合したあと、200×gで2分間遠心を行って2層に分離させ、上層のエーテル層を除去した、(抽出作業)。この抽出作業を下記の回数行った。   Specifically, the roughly purified SL-containing composition-2 adjusted to pH 3.0 was added to a 50 ml glass centrifuge tube with a screw cap so that the ethanol-soluble content was 3 g, and distilled water was added thereto, The total volume was adjusted to 15 ml. The following amount of ether was added to this and mixed vigorously, followed by centrifugation at 200 × g for 2 minutes to separate into two layers, and the upper ether layer was removed (extraction operation). This extraction operation was performed as follows.

実施例3:3mlエーテルを用いた抽出作業を1回実施(→実施例品3)
実施例4:7mlエーテルを用いた抽出作業を1回実施(→実施例品4)
実施例5:15mlエーテルを用いた抽出作業を1回実施(→実施例品5)
実施例6:15mlエーテルを用いた抽出作業を2回実施(→実施例品6)
実施例7:15mlエーテルを用いた抽出作業を3回実施(→実施例品7)。
Example 3: An extraction operation using 3 ml ether was performed once (→ Example product 3).
Example 4: An extraction operation using 7 ml ether was performed once (→ Example product 4).
Example 5: The extraction operation using 15 ml ether was performed once (→ Example product 5).
Example 6: Extraction operation using 15 ml ether was performed twice (→ Example product 6).
Example 7: Extraction with 15 ml ether was carried out 3 times (→ Example product 7).

その後、50℃条件下で放置してエーテルを除去し、SL含有組成物を得た(実施例品3〜7)。   Then, it was left to stand under 50 ° C. to remove ether, and SL-containing compositions were obtained (Example products 3 to 7).

実施例8〜10:低毒性SL含有組成物の製造
前記参考製造例1で分取した粗精製SL含有組成物−1に水酸化ナトリウム水溶液を加えてpH14に調整し、80℃で15分間(実施例8)、80℃で30分間(実施例9)、及び80℃で45分間(実施例10)加熱することで、加水分解(アルカリ加水分解)を行った。次いで、これらを室温に戻してから硫酸(9.8M水溶液)を用いてpH7.5に調整し、発生した不溶物をろ過除去した。さらに、硫酸(9.8M水溶液)を用いてpH3.0に調整し、50mlのスクリューキャップ付きガラス遠沈管にエタノール可溶分が3gになるように加えて、これに蒸留水を添加し、全量が15mlになるように調整した。これにヘキサンを加えて激しく混合したあと、200×gで2分間遠心を行って2層に分離させ、上層のヘキサン層を除去した、(抽出作業)。この抽出作業を5回行った。その後、80℃条件下で放置してヘキサンを除去し、SL含有組成物を得た(実施例品8〜10)。
Examples 8 to 10: Production of low-toxic SL-containing composition Sodium hydroxide aqueous solution was added to the crude purified SL-containing composition-1 fractionated in Reference Production Example 1 to adjust to pH 14, and the mixture was adjusted to 80 ° C for 15 minutes ( Example 8) Hydrolysis (alkali hydrolysis) was performed by heating at 80 ° C. for 30 minutes (Example 9) and at 80 ° C. for 45 minutes (Example 10). Subsequently, these were returned to room temperature, adjusted to pH 7.5 using sulfuric acid (9.8 M aqueous solution), and the generated insoluble matter was removed by filtration. Further, adjust the pH to 3.0 using sulfuric acid (9.8M aqueous solution), add ethanol-soluble component to 3ml in a 50ml glass centrifuge tube with screw cap, and add distilled water to this. Was adjusted to 15 ml. Hexane was added thereto and mixed vigorously, and then centrifuged at 200 × g for 2 minutes to separate into two layers, and the upper hexane layer was removed (extraction operation). This extraction operation was performed five times. Then, it was left to stand at 80 ° C. to remove hexane, and SL-containing compositions were obtained (Example products 8 to 10).

試験例1 各試料の物性測定方法
上記の参考製造例1及び2、並びに実施例1〜10で調製したSL含有組成物(粗精製SL含有組成物−1、粗精製SL含有組成物−2、実施例品1〜10)について、下記の方法に従って、エステル価(mg KOH/g)、水酸基価(mg KOH/g)、エーテル抽出物含量(%)、色相(OD440)、蒸発残分(%)、乾燥減量(%)、エタノール可溶分(%)、及び赤外吸収スペクトル(cm-1)を測定した。また、HPLC分析を行った。
Test Example 1 Method for Measuring Physical Properties of Each Sample SL-containing composition prepared in Reference Production Examples 1 and 2 and Examples 1 to 10 (crudely purified SL-containing composition-1, roughly purified SL-containing composition-2, For Example products 1 to 10), the ester value (mg KOH / g), hydroxyl value (mg KOH / g), ether extract content (%), hue (OD 440 ), evaporation residue ( %), Loss on drying (%), ethanol-soluble content (%), and infrared absorption spectrum (cm −1 ). In addition, HPLC analysis was performed.

(1)試験の概要   (1) Outline of the test

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(2)試験方法
(A)エステル価
けん化価(エタノール可溶分1g相当の試料中の遊離酸の中和及びエステルのけん化に要する水酸化カリウムのmg数:JIS K 3331、日本油化学協会規定の基準油脂分析試験法[2.3.2.1-1996])と酸価(エタノール可溶分1g相当の試料中に含有する遊離酸を中和するのに要する水酸化カリウムのmg数:JIS K 3331、日本油化学協会法の基準油脂分析試験法[2.3.1-1996])との差として求めることができる他、直接測定する方法として、下記の方法を用いることができる。
(2) Test method
(A) Saponification value of ester value (mg of potassium hydroxide required for neutralization of free acid and saponification of ester in a sample equivalent to 1 g of ethanol-soluble component: JIS K 3331, standard oil analysis test specified by Japan Oil Chemical Association Method [2.3.2.1-1996]) and acid number (mg of potassium hydroxide required to neutralize free acid contained in a sample equivalent to 1 g of ethanol-soluble matter: JIS K 3331, Japan Oil Chemistry Association method In addition, the following method can be used as a direct measurement method.

[直接法] 試料約3gをけん化用フラスコに正しくはかり取り、95vol%エタノール50mLを加えてフェノールフタレイン指示薬を用いてよく振り混ぜながら、0.1mol/L 水酸化カリウム標準液で滴定中和する(酸価が求められる)。次にこれに0.5mol/L水酸化カリウム−エタノール標準液25mLを正しく加え、フラスコに冷却器をつけ、時々振り混ぜながら、還流するエタノールが冷却器の上端に達しないように加熱温度を調節して穏やかに加熱する。フラスコの内容物を30分間沸騰させた後、直ちに冷却し、内容物が寒天状に固まらないうちに、冷却器をはずして、フェノールフタレイン指示薬を数滴加え、0.5mol/L塩酸標準液で滴定し、指示薬の微紅色が消え、それが30秒間続いたときに終点と定め、要した0.5mol/L塩酸標準液の使用量を「本試験の0.5mol/L塩酸標準液の使用量(mL)」とする。なお、並行して、95vol%エタノール50mLを取り、0.5mol/L水酸化カリウム−エタノール標準液25mLを正しく加えたものについて空試験を行い、空試験において要した0.5mol/L塩酸標準液の使用量を「空試験の0.5mol/L塩酸標準液の使用量(mL)」とし、下式1から試料1gのエステル価を算出する。エタノール可溶分1g相当の試料のエステル価は、当該試料のエタノール可溶分(%)から、下式2に従って求めることができる。   [Direct method] Weigh approximately 3 g of sample correctly in a saponification flask, add 50 mL of 95vol% ethanol, shake well with a phenolphthalein indicator, and neutralize with a 0.1 mol / L potassium hydroxide standard solution. Acid value is required). Next, add 25 mL of 0.5 mol / L potassium hydroxide-ethanol standard solution correctly, attach a condenser to the flask, and adjust the heating temperature so that the refluxing ethanol does not reach the top of the condenser while stirring occasionally. Heat gently. Allow the flask contents to boil for 30 minutes and then immediately cool.Remove the cooler and add a few drops of phenolphthalein indicator while the contents do not solidify in agar. Add 0.5 mol / L hydrochloric acid standard solution. Titration was performed, and when the indicator disappeared slightly for 30 seconds, the end point was determined, and the amount of 0.5 mol / L hydrochloric acid standard solution used was determined as “the amount of 0.5 mol / L hydrochloric acid standard solution used in this test ( mL) ”. In parallel, take 50 mL of 95vol% ethanol, add 25 mol of 0.5 mol / L potassium hydroxide-ethanol standard solution correctly, perform a blank test, and use 0.5 mol / L hydrochloric acid standard solution required for the blank test. The amount is defined as “Amount used of 0.5 mol / L hydrochloric acid standard solution for blank test (mL)”, and the ester value of 1 g of the sample is calculated from the following formula 1. The ester value of a sample corresponding to 1 g of ethanol-soluble component can be determined from the ethanol-soluble component (%) of the sample according to the following formula 2.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(B)水酸基価
水酸基価(エタノール可溶分1g相当の試料に含まれる遊離のヒドロキシル基をアセチル化するために必要な酢酸を中和するのに要する水酸化カリウムのmg数:日本油化学協会規定の基準油脂分析試験法[2.3.6.2-1996])から求めることができる。
(B) Hydroxyl value Hydroxyl value (mg of potassium hydroxide required to neutralize acetic acid necessary for acetylating free hydroxyl group contained in a sample equivalent to 1 g of ethanol-soluble component: Japan Oil Chemical Association) It can be obtained from the standard oil and fat analysis test method [2.3.6.2-1996]).

[試薬]
アセチル化試薬:12.5 gの無水酢酸を100 mlの全量フラスコに入れ、ピリジンを標線まで加え、注意しながら十分に混ぜる。このようにして調製した液は、湿気、二酸化炭素、および酸の蒸気にふれないようにし、褐色ビンに保存する。
[reagent]
Acetylation reagent: Add 12.5 g of acetic anhydride to a 100 ml volumetric flask, add pyridine to the marked line, and mix well with caution. The solution thus prepared is kept away from moisture, carbon dioxide and acid vapors and stored in brown bottles.

[試験方法]
試料1gを正確に首長丸底フラスコに投入し、適当量のアセトンを加えて105℃で加温し、水分を除去する。その後、アセチル化試薬を5 ml正しく加え、95〜100 ℃に加熱する。1時間加熱した後、フラスコを加熱浴から取って空冷させ、1 mlの蒸留水を加えて混合したあと、フラスコを再度加熱浴に入れ、10分間加熱する。再び引き上げて空冷させ、漏斗の壁に凝縮した液を5 mlの中性エタノールで洗い流しながら加える。このフラスコの内容物にフェノールフタレイン溶液を加え、0.5 N KOH/EtOHで滴定し、下式に基づいて試料1gの水酸基価を算出する。また、下記式3中、酸価は、試料1g中に含有する遊離酸を中和するのに要する水酸化カリウムのmg数であり、日本油化学協会法の基準油脂分析試験法(JIS K 3331)[2.3.1-1996]に従って求めることができる。エタノール可溶分1g相当の試料の水酸基価は、当該試料のエタノール可溶分(%)から、下式4に従って求めることができる。
[Test method]
Put 1 g of the sample into the round neck flask accurately, add an appropriate amount of acetone and warm at 105 ° C. to remove the water. Then add 5 ml of acetylating reagent correctly and heat to 95-100 ° C. After heating for 1 hour, the flask is removed from the heating bath, allowed to cool, and 1 ml of distilled water is added and mixed, and then the flask is placed in the heating bath again and heated for 10 minutes. Pull it up again to cool it down, add the condensed liquid on the wall of the funnel while washing with 5 ml of neutral ethanol. A phenolphthalein solution is added to the contents of the flask, titrated with 0.5 N KOH / EtOH, and the hydroxyl value of 1 g of the sample is calculated based on the following formula. Further, in the following formula 3, the acid value is the number of mg of potassium hydroxide required to neutralize the free acid contained in 1 g of the sample, and is a standard oil analysis test method (JIS K 3331 ) [2.3.1-1996]. The hydroxyl value of a sample corresponding to 1 g of ethanol-soluble matter can be determined from the ethanol-soluble content (%) of the sample according to the following formula 4.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(C)エーテル抽出物含量(%)
エーテル抽出物含量は、エタノール可溶分1g相当の試料からエーテルを用いて抽出される物質の量を質量百分率で示したものである。
(C) Ether extract content (%)
The ether extract content indicates the amount of a substance extracted with ether from a sample corresponding to 1 g of ethanol-soluble matter in terms of mass percentage.

[測定方法]
試料1gを50ml容量のナス型フラスコに投入し、10%水酸化ナトリウム水溶液を10ml加えて冷却管を接続し、80℃で2時間加温を行った。10%塩酸水溶液を10ml加えて中和させ、99.5%エタノールを加えながらエバポレーターで水分を留去した。その後、99.5%エタノールを10ml加えて超音波処理を行いながら分散させ、分散液をガラス漏斗を用いてろ過し、ろ液を50ml容ナス型フラスコに移した。99.5%エタノールでさらに洗いこみを行ったあと、エタノールをエバポレーターで留去させ、 残留物を15mlスクリューキャップ付きガラス遠沈管に移し、硫酸(関東化学製)を用いてpHを3に調整し、全量を蒸留水で5mlに合わせた。5mlのエーテルを加えて激しく混合し、卓上遠心機H-108M2(コクサン製)を用いて1000 rpmで2分間遠心し、2層に分離させた。上層を重量既知の100mlビーカーに移し、新たに5mlのエーテルを加え、合計で3回エーテル抽出作業を行った。エーテル抽出液の入った100mlビーカーを50℃のインキュベーターに投入してエーテルを除去し、さらに105℃のインキュベーターで30分間置き、エーテルを完全に除去した。
[Measuring method]
1 g of a sample was put into a 50 ml capacity eggplant type flask, 10 ml of 10% aqueous sodium hydroxide solution was added, a condenser tube was connected, and the mixture was heated at 80 ° C. for 2 hours. 10 ml of 10% hydrochloric acid aqueous solution was added for neutralization, and water was distilled off with an evaporator while adding 99.5% ethanol. Thereafter, 10 ml of 99.5% ethanol was added and dispersed while performing ultrasonic treatment, the dispersion was filtered using a glass funnel, and the filtrate was transferred to a 50 ml eggplant type flask. After further washing with 99.5% ethanol, the ethanol was distilled off with an evaporator, the residue was transferred to a glass centrifuge tube with a 15 ml screw cap, and the pH was adjusted to 3 using sulfuric acid (manufactured by Kanto Chemical). The total amount was adjusted to 5 ml with distilled water. 5 ml of ether was added and mixed vigorously, followed by centrifugation at 1000 rpm for 2 minutes using a tabletop centrifuge H-108M2 (manufactured by Kokusan) to separate into two layers. The upper layer was transferred to a 100 ml beaker with a known weight, 5 ml of ether was newly added, and ether extraction was performed three times in total. A 100 ml beaker containing the ether extract was put into a 50 ° C. incubator to remove the ether, and further placed in a 105 ° C. incubator for 30 minutes to completely remove the ether.

室温に戻してから重量測定を行い、試料1g中のエーテル抽出物含量は下式5をもとに算出した。エタノール可溶分1g相当の試料のエーテル抽出物含量は、当該試料のエタノール可溶分(%)から、下式6に従って求めることができる。   After returning to room temperature, the weight was measured, and the ether extract content in 1 g of the sample was calculated based on the following formula 5. The ether extract content of a sample corresponding to 1 g of ethanol-soluble component can be determined from the ethanol-soluble component (%) of the sample according to the following formula 6.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(D)HPLC分析によるエーテル抽出物の組成分析
(C)エーテル抽出物含量で得られたエーテル抽出物を99.5%エタノールに1%溶液となるように溶解し、下表の条件でHPLC分析を行った。このHPLC分析条件により、酸型SLは8〜20分、ヒドロキシ脂肪酸は20〜45分、脂肪酸は45〜55分のリテンションタイムにそれぞれ検出される。20〜55分のリテンションタイムに検出される各ピークを、既知のヒドロキシ脂肪酸および脂肪酸(標準品)のリテンションタイムと対比することでヒドロキシ脂肪酸及び脂肪酸を同定し、且つ個々のピークの面積を20〜55分のリテンションタイムに検出されるピークの面積の総和で除することで、エタノール可溶分1gに対する脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の割合を算出した。つまり、下式10によりそれぞれ個別の含量を算出した。
(D) Composition analysis of ether extract by HPLC analysis (C) Ether extract obtained with ether extract content was dissolved in 99.5% ethanol to form a 1% solution, and HPLC analysis was performed under the conditions shown in the table below. Went. Under this HPLC analysis condition, acid type SL is detected at a retention time of 8 to 20 minutes, hydroxy fatty acid is detected at a retention time of 20 to 45 minutes, and fatty acid is detected at a retention time of 45 to 55 minutes. Each peak detected at a retention time of 20 to 55 minutes is compared with the retention time of a known hydroxy fatty acid and fatty acid (standard) to identify the hydroxy fatty acid and the fatty acid, and the area of each peak is 20 to By dividing by the sum of the peak areas detected at the retention time of 55 minutes, the ratio of fatty acids and hydroxy fatty acids to 1 g of ethanol-soluble fraction was calculated. That is, the individual contents were calculated by the following formula 10.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

得られた脂肪酸の表記の方法は、炭素数をCの後に記載し、その後セミコロンを挟んで二重結合の数を表す。つまり、炭素数18で二重結合を1つ持つオレイン酸の場合はC18:1となる。また、ヒドロキシ脂肪酸を表す場合は、末尾に(OH)を追加する。つまり、炭素数18のヒドロキシオレイン酸の場合はC18:1(OH)となる。   In the notation method of the obtained fatty acid, the number of carbon atoms is described after C, and then the number of double bonds is represented with a semicolon in between. That is, in the case of oleic acid having 18 carbon atoms and one double bond, C18: 1. When a hydroxy fatty acid is represented, (OH) is added at the end. That is, in the case of hydroxyoleic acid having 18 carbon atoms, C18: 1 (OH) is obtained.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(E)色相(OD 440
色相(OD440nm)は、エタノール可溶分が10質量%になるように、被験試料をアルカリ水溶液(2% Na2CO3in 0.1N NaOH)に溶解して調製した水溶液の、波長440nmにおける吸光度を測定することで求めることができる。
(E) Hue (OD 440 )
The hue (OD 440 nm ) is the absorbance at 440 nm of an aqueous solution prepared by dissolving a test sample in an alkaline aqueous solution (2% Na 2 CO 3 in 0.1N NaOH) so that the ethanol-soluble component is 10% by mass. It can be obtained by measuring.

(F)蒸発残分(%)
蒸発残分(%)は、試料の重量を精密に秤量した後、JIS K0067-1992規定の第2法(熱板上で加熱蒸発する方法)に従って蒸発乾固し、その残分を量り、下式7から求めることができる。
(F) Evaporation residue (%)
The evaporation residue (%) is precisely weighed and then evaporated to dryness according to the second method (method of heating and evaporating on a hot plate) specified in JIS K0067-1992. It can be obtained from Equation 7.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(G)乾燥減量(%)
乾燥減量(%)は、試料の重量を精密に秤量した後、JIS K0067-1992規定の第1法(大気圧下で加熱乾燥する方法)に従って加熱乾燥し(105±2℃、2時間)、乾燥後の減量を量り、下式7から求めることができる。
(G) Loss on drying (%)
Loss on drying (%) is obtained by accurately weighing the weight of the sample, followed by heat drying according to the first method (method of heat drying under atmospheric pressure) specified in JIS K0067-1992 (105 ± 2 ° C, 2 hours) The weight loss after drying can be measured and calculated from the following formula 7.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(H)エタノール可溶分(%)
エタノール可溶分は、試料をエタノールで溶解し、エタノールに溶ける物質の量を示したものである。
(H) Ethanol soluble content (%)
The ethanol-soluble component indicates the amount of a substance dissolved in ethanol after dissolving the sample with ethanol.

[測定方法]
三角フラスコ及びガラスろ過器の重量を正確に測定する。これらの重量は105℃で2時間以上乾燥後、デシケーター内で放冷してから測定する。三角フラスコに試料約5gを1mg単位まで正確に量り取り、エタノールを試料の100mL添加して、ガラス管を付けて水浴上で30分間加熱し、時々振り混ぜながら溶解する。なお、粉状または粒状試料には95vol%エタノールを使用し、液状又はペースト状試料には99.5vol%のエタノールを使用する。温溶液のままガラスろ過器を用いてろ過し、三角フラスコの残量に再びエタノール50mLを加えて溶解する。温溶液をガラスろ過器を用いてろ過し、熱エタノールで三角フラスコ及びガラスろ過器をよく洗浄する。室温まで放冷し、全量フラスコ250mLにろ液および洗液を移し、エタノールを標線まで加え、この中から、全量ピペットを用いて、100mLずつ質量既知の2個のビーカー200mLに分取する。そのうちの1個を、水浴上で加熱してエタノールを除いた後、105±2℃に調節した乾燥器で1時間乾燥し、デシケーターで放冷後、重量を正確に測定する(乾燥残量)。
[Measuring method]
Weigh accurately the Erlenmeyer flask and glass filter. These weights are measured after drying at 105 ° C. for 2 hours or longer and then allowing to cool in a desiccator. About 5 g of the sample is accurately weighed to the 1 mg unit in an Erlenmeyer flask, add 100 mL of the sample, attach a glass tube, heat on a water bath for 30 minutes, and dissolve while occasionally shaking. In addition, 95 vol% ethanol is used for powdery or granular samples, and 99.5 vol% ethanol is used for liquid or pasty samples. It filters using a glass filter with a warm solution, and 50 mL of ethanol is added again to the remaining amount of the Erlenmeyer flask and dissolved. The warm solution is filtered using a glass filter, and the Erlenmeyer flask and glass filter are thoroughly washed with hot ethanol. The mixture is allowed to cool to room temperature, the filtrate and washings are transferred to a 250-mL volumetric flask, ethanol is added up to the marked line, and 100 mL of each volume is dispensed into two 200-mL beakers of known mass using a pipette. One of them is heated on a water bath to remove ethanol, dried in a dryer adjusted to 105 ± 2 ° C for 1 hour, allowed to cool in a desiccator, and accurately weighed (residual amount) .

下式8からエタノール可溶分(%)を算出する。   The ethanol soluble content (%) is calculated from the following formula 8.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(I)強熱残分
強熱残分試験は、被験試料を下記の方法[第1法]で強熱した後に残留する物質の量を測定する方法である。通常、有機物中に不純物として含まれる無機物の含量を知る目的で行われるが、場合によっては、有機物中に構成成分として含まれる無機物又は揮発性無機物中に含まれる不純物の量を測定するために行なわれる。例えば、本発明において「強熱残分0.1%以下(第1法、1g)」と規定したものは、被験試料約1gを精密に量り、下記第1法の操作法によって強熱したとき、その残分が被験試料の採取量の0.10%以下であることを示す。
(I) Ignition residue test The ignition residue test is a method for measuring the amount of a substance remaining after ignition of a test sample by the following method [first method]. Usually, it is performed for the purpose of knowing the content of inorganic substances contained as impurities in organic substances, but in some cases, it is carried out to measure the amount of impurities contained in inorganic substances or volatile inorganic substances contained as constituents in organic substances. It is. For example, in the present invention, what is defined as “ignition residue 0.1% or less (first method, 1 g)” is obtained when about 1 g of a test sample is accurately weighed and ignited by the following first method. This indicates that the remainder is 0.10% or less of the collected amount of the test sample.

[試料の採取法]白金製、石英製または磁製のるつぼを恒量になるまで強熱し、デシケーター(シリカゲル)中で放冷した後、その質量を精密に量る(採取量)。これに規定量の±10%の範囲の試料を精密に測定し、次の操作を行う。
[第1法]るつぼの上で試料を硫酸少量で潤し、徐々に加熱してなるべく低温でほとんど灰化又は揮散させた後、硫酸で潤し、完全に灰化し、恒量になるまで強熱(450〜550℃)する。これをデシケーター(シリカゲル)中で放冷した後、質量を精密に量る。得られた測定値(残分)とあらかじめ測定しておいた採取量から、下式9により強熱残分(%)を算出する。
[Sample Collection Method] A platinum, quartz or magnetic crucible is heated to a constant weight, allowed to cool in a desiccator (silica gel), and then its mass is accurately measured (collected amount). A sample in the range of ± 10% of the specified amount is precisely measured, and the following operation is performed.
[First Method] Moisten the sample with a small amount of sulfuric acid on a crucible, gradually incinerate or volatilize it as low as possible by gradually heating, then moisten with sulfuric acid, completely incinerate, and ignite until constant weight (450 ~ 550 ° C). This is allowed to cool in a desiccator (silica gel) and then weighed accurately. From the obtained measured value (residue) and the collected amount measured in advance, the ignition residue (%) is calculated by the following formula 9.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(J)赤外吸収スペクトル
赤外吸収スペクトルの測定には、液体試料は105±2℃で3時間加熱乾燥固化したものを使用し、固体試料はそのまま使用した。赤外吸収スペクトルは、フーリエ変換赤外分光分析装置SpectrumTM100(パーキンエルマージャパン製)を使用し、ATR法で分析した。
(J) Infrared absorption spectrum For the measurement of infrared absorption spectrum, a liquid sample was used which was solidified by heating and drying at 105 ± 2 ° C. for 3 hours, and the solid sample was used as it was. The infrared absorption spectrum was analyzed by an ATR method using a Fourier transform infrared spectroscopic analyzer Spectrum 100 (manufactured by PerkinElmer Japan).

(3)試験結果
参考製造例及び実施例で調製したSL含有組成物(粗精製SL含有組成物−1、粗精製SL含有組成物−2、実施例品1〜10)について得られた試験結果を表3に示す。
(3) Test results Test results obtained for the SL-containing compositions (crudely purified SL-containing composition-1, roughly purified SL-containing composition-2, and example products 1 to 10) prepared in the reference production examples and examples. Is shown in Table 3.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

試験例2 界面活性剤としての性能評価
上記の参考製造例2、及び実施例1〜10で得られたSL含有組成物(粗精製SL含有組成物−2、実施例品1〜10)について、臨界ミセル濃度(CMC)及び表面張力低下能を測定した。また比較対照として、市販のアニオン界面活性剤(A:「アミノソフトLT-12」(30%):味の素(株)製、B:「サーファクチンNa」(100%):和光純薬工業(株)製、C:「リポランLJ-441」(37%):ライオン(株)製)、Tween 20(Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate (20 E.O.))及びSLS(Sodium Lauryl Sulfate)についても同様に臨界ミセル濃度(CMC)及び表面張力低下能を測定した。なお、市販のアニオン界面活性剤Aの成分はN−アシル−L−グルタミン酸トリエタノールアミン、Bの成分はサーファクチンNa、Cの成分はα−オレフィンスルホン酸Naである。
Test Example 2 Performance Evaluation as Surfactant About the SL-containing compositions (crudely purified SL-containing composition-2, example products 1 to 10) obtained in Reference Production Example 2 and Examples 1 to 10 above, The critical micelle concentration (CMC) and surface tension reducing ability were measured. As a comparative control, a commercially available anionic surfactant (A: “Aminosoft LT-12” (30%): manufactured by Ajinomoto Co., Inc., B: “Surfactin Na” (100%): Wako Pure Chemical Industries, Ltd. ), C: “Lipolane LJ-441” (37%): Lion Co., Ltd.), Tween 20 (Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate (20 EO)) and SLS (Sodium Lauryl Sulfate) in the same manner. ) And surface tension reducing ability. The component of the commercially available anionic surfactant A is N-acyl-L-glutamic acid triethanolamine, the component B is surfactin Na, and the component C is α-olefin sulfonic acid Na.

(1)実験方法
臨界ミセル濃度(CMC)及び表面張力低下能の測定はWilhelmy法に準拠して測定した。自動表面張力計 CBVP−Z型一式(協和界面科学株式会社製)を使用し、20℃、pH7の条件で測定を行った。なお、pH調整には、水酸化ナトリウム水溶液または塩酸水溶液を使用した。
(1) Experimental method The critical micelle concentration (CMC) and surface tension reducing ability were measured according to the Wilhelmy method. An automatic surface tension meter CBVP-Z type set (manufactured by Kyowa Interface Science Co., Ltd.) was used, and measurement was performed under the conditions of 20 ° C. and pH 7. In addition, sodium hydroxide aqueous solution or hydrochloric acid aqueous solution was used for pH adjustment.

(2)実験結果
各被験試料の臨界ミセル濃度(CMC)及び表面張力低下能の測定結果を、表4に示す。
(2) Experimental results Table 4 shows the measurement results of the critical micelle concentration (CMC) and the surface tension reducing ability of each test sample.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

試験例3 Hela細胞を用いた細胞毒性試験
上記の参考製造例2、及び実施例1〜10で得られたSL含有組成物(粗精製SL含有組成物−2、実施例品1〜10)について、Hela細胞を用いて細胞毒性試験を行った。また比較対照として、前述する市販アニオン界面活性剤A〜C、並びにTween 20及びSLSについても同様に細胞毒性試験を行った。
Test Example 3 Cytotoxicity Test Using Hela Cells About the SL-containing composition (crudely purified SL-containing composition-2, Example products 1-10) obtained in Reference Production Example 2 and Examples 1-10 above Cytotoxicity tests were performed using Hela cells. As a comparative control, cytotoxicity tests were similarly conducted on the above-described commercially available anionic surfactants A to C, Tween 20 and SLS.

(1)実験方法
HeLa細胞(クラボウ)を96ウェルプレートに2×10cells/wellの濃度で播種し、10%NCS(Newborn Calf Serum:invitrogen製)、非必須アミノ酸、58μg/mlL-グルタミン酸、60μg/mlカナマイシンを含んだDulbecco’s Modified EAGLE MEDIUM培地(日水製薬製)で37℃、5%CO2下で72時間培養した。被験試料を含んだ培地に交換し、48時間後、1mg/ml MTT(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide)入り培地に交換した。2時間処理し、イソプロパノールで色素であるホルマザンを抽出し、波長570nmの吸光度を測定した。細胞生存率%は下式から求めた。
(1) Experimental method
HeLa cells (Kurabo) are seeded in a 96-well plate at a concentration of 2 × 10 4 cells / well, and 10% NCS (Newborn Calf Serum: manufactured by invitrogen), non-essential amino acids, 58 μg / ml L-glutamic acid, 60 μg / ml kanamycin The cells were cultured for 72 hours at 37 ° C. under 5% CO 2 in the contained Dulbecco's Modified EAGLE MEDIUM medium (manufactured by Nissui Pharmaceutical). The medium was replaced with the medium containing the test sample. After 48 hours, the medium was replaced with a medium containing 1 mg / ml MTT (3- (4,5-Dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide). After treatment for 2 hours, formazan, which is a pigment, was extracted with isopropanol, and absorbance at a wavelength of 570 nm was measured. The cell viability% was obtained from the following formula.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

(2)実験結果
上記のMTTアッセイから細胞生存率を算出し、得られた細胞生存率から細胞致死濃度(IC50)を求めた。
(2) Experimental results The cell viability was calculated from the above MTT assay, and the cell lethal concentration (IC 50 ) was determined from the obtained cell viability.

細胞生存率から算出した細胞致死濃度(IC50)と試験例1で算出したCMCをプロットしたグラフを図1に示す。表5に各被験試料について試験例1で算出したCMC(ppm)、細胞致死濃度(IC50)及びこれら2つの数値の除算値(IC50/CMC)を纏めた結果を示す。 A graph plotting the cell lethal concentration (IC 50 ) calculated from the cell viability and the CMC calculated in Test Example 1 is shown in FIG. Table 5 shows the results of summarizing the CMC (ppm), cell lethal concentration (IC 50 ), and division value (IC 50 / CMC) of these two values calculated in Test Example 1 for each test sample.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果、実施例品1〜10のIC50は、2000ppm〜60000ppmであり、市販の界面活性剤並びにTween 20及びSLSのIC50(10〜700ppm)と比較しても格段に大きく、毒性が顕著に低いことが判明した。またこれらの実施例品のIC50は、その製造途中で得られる粗精製SL含有組成物−2のIC50(1500ppm)の1.3倍以上であり、粗精製SL含有組成物−2に対して行う処理(溶剤抽出処理、疎水性カラムクロマトグラフィー)により、顕著に毒性成分が除去されることが確認された。 As a result, the IC 50 of Example Product 10 is 2000Ppm~60000ppm, remarkably as compared with the commercially available surfactant and Tween 20 and SLS of IC 50 (10~700ppm) increased significantly toxic Turned out to be low. The IC 50 of these examples products are in the crude obtained in the course of manufacturing SL-containing composition-2 IC 50 (1500 ppm) of 1.3 times or more, performed on crude SL-containing compositions -2 It was confirmed that toxic components were remarkably removed by the treatment (solvent extraction treatment, hydrophobic column chromatography).

なお、本試験で行った細胞毒性試験は、眼や粘膜への刺激性を評価する眼刺激性試験として汎用されているDraize試験に代わる方法(眼刺激性試験代替法)として提案されている(岡本賢二「日本における眼刺激性試験代替法の動向」、FRAGRANCE JOURNAL 2005-2, P.67-71;「代替法を用いて化粧品原料の眼刺激性を評価するにあたっての指針(厚生科学研究班の作成した案)」Altern. Animal Test. Experiment, 5(Supplement), 1988)。後者論文に記載された厚生省の案によると、被験物質とともに、無刺激性の標準物質としてTween 20、及び陽性対照物質としてSLSについても同様に細胞毒性試験を行い、IC50がTween 20よりも大きい値の被験物質は「実質上無刺激性」であり、またIC50がTween 20より小さく、SLSよりも大きい値の被験物質は「軽度刺激性」であると評価できることが記載されている(後者論文の注8参照)。 The cytotoxicity test conducted in this study has been proposed as an alternative to the Draize test (an alternative to the eye irritation test) that is widely used as an eye irritation test for evaluating irritation to the eyes and mucous membranes ( Kenji Okamoto “Trends in alternative methods for eye irritation testing in Japan”, FRAGRANCE JOURNAL 2005-2, P.67-71; “Guidelines for evaluating eye irritation of cosmetic ingredients using alternative methods (Research Group for Health and Welfare) (Altern. Animal Test. Experiment, 5 (Supplement), 1988). According to the proposal of the Ministry of Health and Welfare described in the latter paper, cytotoxicity tests were similarly conducted on Tween 20 as a non-irritating standard substance and SLS as a positive control substance together with the test substance, and the IC 50 was larger than Tween 20 It is described that a test substance with a value is “substantially non-irritating”, and a test substance with an IC 50 smaller than Tween 20 and larger than SLS can be evaluated as “mildly irritating” (the latter See Note 8 of the paper).

上記表に示すように、実施例1〜10に示す本発明の低毒性SL含有組成物のIC50値はいずれもTween 20のIC50よりも格段に大きいことから「無刺激性」の物質であると判断される。また本発明の低毒性SL含有組成物のIC50値は、市販の界面活性剤のIC50値よりも遙かに大きいことから、従来公知の界面活性剤のなかでも特に低毒性で且つ低刺激性である。 As shown in the above table, since the IC 50 values of the low-toxic SL-containing compositions of the present invention shown in Examples 1 to 10 are much higher than the IC 50 of Tween 20, they are “non-irritating” substances. It is judged that there is. In addition, since the IC 50 value of the low-toxic SL-containing composition of the present invention is much larger than the IC 50 value of commercially available surfactants, it is particularly low toxic and less irritating among the conventionally known surfactants. It is sex.

また本発明の低毒性SL含有組成物のIC50値は、CMCに対する比(IC50/CMC)が6.7〜200倍であり、CMCとかけ離れていることから、安全性(低毒性、低刺激性)を担保しながら界面活性剤としての機能を十分に発揮できることが確認された。 Further, the IC 50 value of the low-toxic SL-containing composition of the present invention is 6.7 to 200 times the ratio to CMC (IC 50 / CMC), which is far from CMC. It was confirmed that the function as a surfactant can be sufficiently exhibited while ensuring (stimulation).

試験例4 高級脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の細胞毒性
SL含有組成物に多く含まれている高級脂肪酸としてオレイン酸を使用し、またヒドロキシ脂肪酸として12−ヒドロキシステアリン酸を使用して、高級脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の細胞毒性を測定した。
Test Example 4 Cytotoxicity of Higher Fatty Acids and Hydroxy Fatty Acids Oleic acid is used as a higher fatty acid and 12-hydroxystearic acid is used as a hydroxy fatty acid. Cytotoxicity was measured.

具体的には、オレイン酸及び12−ヒドロキシステアリン酸をそれぞれ100,000ppmとなるように、99.5%エタノールに溶解し、GHPメンブランフィルター(0.45μm)(日本ポール製)に通した。これらを1,000ppm〜50,000ppm濃度になるように99.5%エタノールで希釈した。これらの各希釈液10μlに990μlの10%NCS培地を加えて、細胞毒性用試験液として調製した(濃度範囲が10ppm〜1,000ppmの試験液を調製)。これを試験液として、試験例3に記載する方法に従って、Hela細胞の生存率(%)を測定し、オレイン酸及び12−ヒドロキシステアリン酸それぞれについて細胞致死濃度(IC50)を算出した。 Specifically, oleic acid and 12-hydroxystearic acid were each dissolved in 99.5% ethanol so as to be 100,000 ppm, and passed through a GHP membrane filter (0.45 μm) (manufactured by Nippon Pole). These were diluted with 99.5% ethanol to a concentration of 1,000 ppm to 50,000 ppm. 990 μl of 10% NCS medium was added to 10 μl of each of these dilutions to prepare a test solution for cytotoxicity (preparing a test solution having a concentration range of 10 ppm to 1,000 ppm). Using this as a test solution, the survival rate (%) of Hela cells was measured according to the method described in Test Example 3, and the cell lethal concentration (IC 50 ) was calculated for each of oleic acid and 12-hydroxystearic acid.

その結果、オレイン酸及び12−ヒドロキシステアリン酸それぞれの細胞致死濃度(IC50)は、300ppm及び160ppmであった。これらのIC50値は、本発明の低毒性SL含有組成物(実施例品1〜10)のIC50値(2000〜60000ppm、表4参照)の1/6〜1/375倍と小さく、これらが本発明の低毒性SL含有組成物に混入するとSL含有組成物の細胞毒性が高まることが懸念された。逆にいえば、こうした炭素数16〜18などの高級脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を含まないか、含んでいてもその量が微量になるようにSL含有組成物を調製することで、低毒性のSL含有組成物を取得できることがわかる。 As a result, the cell lethal concentrations (IC 50 ) of oleic acid and 12-hydroxystearic acid were 300 ppm and 160 ppm, respectively. These IC 50 values are as small as 1/6 to 1/375 times the IC 50 values (2000 to 60000 ppm, see Table 4) of the low-toxic SL-containing compositions of the present invention (Example products 1 to 10). However, there is a concern that the cytotoxicity of the SL-containing composition increases when it is mixed into the low-toxic SL-containing composition of the present invention. In other words, by preparing an SL-containing composition so that it does not contain higher fatty acids such as 16 to 18 carbon atoms and hydroxy fatty acids, or contains such fatty acids, the SL-containing composition contains low toxicity. It can be seen that the composition can be obtained.

試験例5 ラクトン型SLによる界面活性能に対する影響
下記の構成を有する高純度SL含有組成物に、ラクトン型SLを添加して、酸型SL、ラクトン型SL、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%とした場合のラクトン型SLの割合が0〜2質量%(エタノール可溶分1g相当物のエステル価:0〜2mgKOH/g)の範囲になるように調製した(実施例品11〜15)。
Test Example 5 Influence on Surface Activity by Lactone-type SL A lactone-type SL is added to a high-purity SL-containing composition having the following constitution, and the total amount of acid-type SL, lactone-type SL, fatty acid and hydroxy fatty acid is 100 mass. %, The ratio of the lactone-type SL was adjusted to be in the range of 0 to 2% by mass (the ester value of 1 g of the ethanol soluble content: 0 to 2 mg KOH / g) (Example products 11 to 15). .

[高純度SL含有組成物]
(1)酸型SL、ラクトン型SL、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量100質量%あたり、酸型SL99.95質量%、ラクトン型0質量%、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)0.05質量%
(2)エタノール可溶分が10質量%になるように溶解した水溶液の波長440nmにおける吸光度(OD440):0.08
(3)エタノール可溶分1g相当物の水酸基価:596mgKOH
(4)Hela細胞に対する細胞致死濃度(IC50):63000ppm。
[High purity SL-containing composition]
(1) Acid type SL 99.95% by mass, lactone type 0% by mass, fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) 0.05% by mass per 100% by mass of acid type SL, lactone type SL, and fatty acid and hydroxy fatty acid
(2) Absorbance (OD 440 ) at a wavelength of 440 nm of an aqueous solution dissolved so that the ethanol-soluble content is 10% by mass: 0.08
(3) Hydroxyl value of 1 g equivalent of ethanol soluble content: 596 mg KOH
(4) Cell lethal concentration (IC 50 ) for Hela cells: 63000 ppm.

これらのSL含有組成物について、臨界ミセル濃度(CMC)及び表面張力低下能を測定し、界面活性剤としての性能(濡れ性、可溶化力、洗浄力、起泡性)を評価した。なお、臨界ミセル濃度(CMC)及び表面張力低下能は、試験例2と同様に、Wilhelmy法に準拠して測定した。具体的には、自動表面張力計 CBVP−Z型一式(協和界面科学株式会社製)を使用し、20℃、pH7の条件で測定を行った。   For these SL-containing compositions, the critical micelle concentration (CMC) and surface tension reducing ability were measured, and the performance as a surfactant (wetting, solubilizing power, detergency, foaming property) was evaluated. The critical micelle concentration (CMC) and the surface tension reducing ability were measured according to the Wilhelmy method in the same manner as in Test Example 2. Specifically, an automatic surface tension meter CBVP-Z type set (manufactured by Kyowa Interface Science Co., Ltd.) was used, and measurement was performed under the conditions of 20 ° C. and pH 7.

結果を表6に示す。   The results are shown in Table 6.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

一般的に、アニオン界面活性剤(酸型SLはその一例)に非イオン型界面活性剤(ラクトン型SLはその一例)を添加した場合、表面張力は上がる場合もまた下がる場合もあり、通常は推測することができない。本発明のSL含有組成物は、表6に示すように、アニオン界面活性剤(酸型SL)に非イオン型界面活性剤(ラクトン型SL)を添加すると、所定量までは、表面張力が低下することが確認された。具体的には、ラクトン型SLの割合が0%から1.5%まで増加するにつれて表面張力(最低表面張力値)が低下した。しかし、1.5%で頭打ちになり、ラクトン型SLをそれ以上添加しても表面張力に変化はなかった。   In general, when a nonionic surfactant (an example of a lactone type SL) is added to an anionic surfactant (an example of an acid type SL), the surface tension may increase or decrease. I can't guess. As shown in Table 6, the SL-containing composition of the present invention decreases in surface tension up to a predetermined amount when a nonionic surfactant (lactone type SL) is added to an anionic surfactant (acid type SL). Confirmed to do. Specifically, the surface tension (minimum surface tension value) decreased as the proportion of lactone type SL increased from 0% to 1.5%. However, it reached a peak at 1.5%, and the surface tension did not change even when more lactone type SL was added.

表面張力の低下は、界面活性剤に求められる利点の一つであり、本組成物では2%までの濃度でラクトン型SLを含むことにより、界面活性剤としての性能が向上することが予測され、洗浄力、濡れ性、可溶化力、起泡性の向上という効果が期待される。   The decrease in surface tension is one of the advantages required for a surfactant, and it is predicted that the present composition will improve the performance as a surfactant by containing lactone-type SL at a concentration of up to 2%. The effect of improving the cleaning power, wettability, solubilizing power, and foamability is expected.

試験例6 身体洗浄料の調製とその評価(泡立ち性、すすぎ牲、皮膚刺激性)
上記の実施例1で得られた低毒性SL含有組成物を用いて、表7に記載する処方に従って、身体洗浄料(本発明身体洗浄料1〜4(液状)及び5〜6(固形))を製造し、各身体洗浄料の特性(泡立ち性、すすぎ性、及び皮膚刺激性)を評価した。また、比較試験として、上記の参考製造例2で得られた粗精製SL含有物―2を用いて、表8に記載する比較身体洗浄料1〜5(液状)及び6〜7(固形)についても同様に上記各特性を評価した。
Test Example 6 Preparation of body wash and its evaluation (foaming property, rinsing property, skin irritation)
Using the low-toxic SL-containing composition obtained in Example 1 above, according to the formulation described in Table 7, body wash (the present body wash 1-4 (liquid) and 5-6 (solid)) And the characteristics (foaming property, rinsing property, and skin irritation) of each body cleansing agent were evaluated. In addition, as comparative tests, using the roughly purified SL-containing product-2 obtained in Reference Production Example 2 above, comparative body cleansing materials 1 to 5 (liquid) and 6 to 7 (solid) described in Table 8 Similarly, each of the above characteristics was evaluated.

(1)実験方法
(1−1)泡立ち及びすすぎ性
自称敏感肌の被験者5名に、表7及び8に記載する各身体洗浄料(本発明身体洗浄料1〜6、比較身体洗浄料1〜7)を濡れた手のひらに出して、30秒間、両手のひらを擦り合わせてもらい、泡立ちを評価してもらった。なお、液状洗浄料は1ml量を用い、固形洗浄料も液状洗浄料の1mlに相当する量を手のひらで擦り合わせて使用した。その後、40℃の流水で30秒間両手のひらを擦り合わせながら濯いでもらい、洗浄料のすすぎ性を評価してもらった。泡立ちは4段階(かなり泡立つ:◎、泡立つ:○、やや泡立つ:△、泡立たない:×)で、またすすぎ性は2段階(ぬめり及びきしみ感をいずれも感じない:○、ぬめりまたはきしみ感を感じる:×)で評価した。
(1) Experimental method (1-1) Foaming and rinsing properties Each of the body cleansing materials described in Tables 7 and 8 (invention body cleaning materials 1 to 6, comparative body cleaning materials 1 to 1) was given to five subjects with self-named sensitive skin. 7) was put out on the wet palm, and both palms were rubbed together for 30 seconds to evaluate foaming. The liquid detergent was used in an amount of 1 ml, and the solid detergent was used by rubbing an amount corresponding to 1 ml of the liquid detergent with the palm. After that, they were rinsed by rubbing their palms with running water at 40 ° C. for 30 seconds, and the rinse property of the cleaning material was evaluated. There are 4 stages of foaming (very foaming: ◎, foaming: ◯, slightly foaming: △, no foaming: x), and rinsing properties are 2 stages (not both slimy and squeaky: ◯, slimy or squeaky Feel: evaluated with x).

(1−2)皮膚刺激性
皮膚感作テスト(パッチテスト)用テープ(フィンチャンバー[商標登録]:スマートプラクティスジャパン製)の濾紙部に、精製水で1%に希釈した各被験身体洗浄料を20 μl添加し、被験者(自称敏感肌の20〜50代、男女10名)の左手の前腕屈側部と手首のほぼ中間あたりに貼り付けた。20分間作用させた後、テープを除去し、洗い流さずそのまま放置した。判定は、テープ除去40分後とした。紅斑が認められた被験者については、紅斑が消失するまで観察を続けた。また判定時、ヒリヒリ感やチクチク感などの刺激の有無についても調べた。
(1-2) Skin irritation Each test body wash diluted to 1% with purified water is applied to the filter paper part of a tape for skin sensitization test (patch test) (Fin Chamber [registered trademark] manufactured by Smart Practice Japan). 20 μl was added and affixed around the middle of the forearm bent side of the left hand and wrist of subjects (self-proposed sensitive skin 20-50s, 10 men and women). After acting for 20 minutes, the tape was removed and left unwashed. The determination was made 40 minutes after the tape was removed. For subjects with erythema, observation was continued until the erythema disappeared. In addition, at the time of determination, the presence or absence of stimuli such as tingling and tingling was also examined.

テープ除去40分後に適用部位を肉眼により観察した。判定は下表の日本接触皮膚炎学会の基準に従った。   The application site was observed with the naked eye 40 minutes after removing the tape. The determination was in accordance with the standards of the Japanese Contact Dermatitis Society in the table below.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

判定は、「−:0点、±:1点、+:2点、++:3点、+++:4点」とし、各被験者のスコアを平均化した。皮膚刺激性の評価は、「平均スコア0〜0.30点:◎、0.31〜0.80点::○、0.81〜1.20:△、1.21以上:×」の4段階で評価とした。   The judgment was “−: 0 points, ±: 1 point, +: 2 points, ++: 3 points, +++: 4 points”, and the scores of each subject were averaged. The evaluation of skin irritation was evaluated in four stages: “average score 0 to 0.30 points: ◎, 0.31 to 0.80 points: ○, 0.81 to 1.20: Δ, 1.21 or more: ×”.

(2)実験結果
結果を表8及び9に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Tables 8 and 9.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

Figure 0006157524
Figure 0006157524

本発明身体洗浄料6の結果からわかるように、本発明が対象とする低毒性SL含有組成物はそれ自体泡立ち性が極めて良好であり、しかもすすぎ性も極めて良好であった。さらに、当該低毒性SL含有組成物は皮膚に対する刺激性も極めて低く、それは皮膚刺激性の高い界面活性剤(ラウレス硫酸Na)を併用した場合でも変わらなかった(本発明身体洗浄料3)。   As can be seen from the results of the body cleansing material 6 of the present invention, the low-toxic SL-containing composition targeted by the present invention itself has very good foaming properties and very good rinsing properties. Furthermore, the low-toxic SL-containing composition has extremely low irritation to the skin, and it did not change even when a surfactant with high skin irritation (Na Laureth sulfate) was used in combination (invention body wash 3).

また、本発明の身体洗浄料は、低毒性SL含有組成物を0.01質量%と極めて低濃度で含む場合(本発明身体洗浄料1)であっても泡立ち性がよく、すすぎ性も良好であった。さらに低毒性SL含有組成物を10質量%もの高濃度で含む場合や、泡立ち性及びすすぎ性の悪い界面活性剤(ラウレス硫酸Na)を併用した場合でも、泡立ち性は極めて良好であり、さらにすすぎ性も良好であった。   Further, the body cleansing agent of the present invention has good foaming properties and good rinsing properties even when it contains a low-toxic SL-containing composition at an extremely low concentration of 0.01% by mass (the present invention body cleaning material 1). Met. Furthermore, even when a low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 10% by mass, or when a surfactant having a low foaming property and rinsing property (Na Laureth sulfate) is used in combination, the foaming property is extremely good, and further rinsing is performed. The property was also good.

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、泡立ち性、及びすすぎ性が良好で、しかも皮膚刺激性が少ない身体洗浄料を調製し、提供することができることがわかる。   Based on these facts, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, a body cleansing agent having good foaming and rinsing properties and less skin irritation is prepared and provided. You can see that you can.

試験例7 毛髪洗浄料の調製とその評価(泡立ち性、すすぎ牲、皮膚刺激性)
実施例1で得られた低毒性SL含有組成物を用いて、下記表に記載する処方に従って、液状の毛髪洗浄料(pH4〜7)を製造し(本発明毛髪洗浄料1〜4)、各毛髪洗浄料の特性(泡立ち性、すすぎ性、及び皮膚刺激性)を評価した。また、比較試験として、下記表に記載する比較毛髪洗浄料(pH4〜10)についても同様に上記各特性を評価した。
Test Example 7 Preparation and evaluation of hair cleanser (foaming property, rinsing property, skin irritation)
Using the low toxicity SL-containing composition obtained in Example 1, according to the formulation described in the following table, liquid hair washes (pH 4 to 7) were produced (invention hair washes 1 to 4), and each The properties (foaming properties, rinsing properties, and skin irritation) of the hair cleanser were evaluated. Moreover, said each characteristic was similarly evaluated about the comparative hair washing material (pH 4-10) described in the following table as a comparative test.

(1)実験方法
(1−1)泡立ち及びすすぎ性
自称敏感肌の被験者女性5名(髪の長さ:肩にかかる程度)に、下記表に記載する各毛髪洗浄料(本発明毛髪洗浄料1〜4、比較毛髪洗浄料)6mlを用いて、40℃のお湯で洗髪してもらい、泡立ち性及びすすぎ時の髪のきしみ具合からすすぎ性を評価してもらった。泡立ちは4段階(かなり泡立つ:◎、泡立つ:○、やや泡立つ:△、泡立たない:×)で、またすすぎ性は3段階(きしみを感じない:○、きしみをやや感じる:△、きしみを感じる:×)で評価した。
(1) Experimental method (1-1) Foaming and rinsing properties Each of the hair washing materials described in the following table (the hair washing material of the present invention) was given to 5 female subjects (hair length: degree to be applied to the shoulder) of self-proposed sensitive skin. (1 to 4, comparative hair washing agent) 6 ml was used, and the hair was washed with hot water of 40 ° C., and the rinsing property was evaluated from the foaming property and the squeaking condition of the hair at the time of rinsing. There are 4 stages of foaming (very foaming: ◎, foaming: ○, slightly foaming: △, no foaming: ×), and rinsing properties are 3 stages (not feeling squeaking: ○, feeling squeaking slightly: △, feeling squeaking :).

(1−2)皮膚刺激性
試験例6と同じ方法で評価した。
(1-2) Skin irritation Evaluation was performed in the same manner as in Test Example 6.

(2)実験結果
結果を下記表に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in the table below.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の毛髪洗浄料は、低毒性SL含有組成物を30質量%もの高濃度で含有していても皮膚刺激性が極めて低く(本発明毛髪洗浄料3)、それは皮膚刺激性の高い界面活性剤(ラウレス硫酸Na、コカミドプロピルベタイン)を併用した場合でも変わらなかった(本発明毛髪洗浄料4)。また、本発明の毛髪洗浄料は、低毒性SL含有組成物を0.01質量%と低濃度で含む場合(本発明毛髪洗浄料1)であっても、泡立ち性がよく、すすぎ性も良好であった。さらに低毒性SL含有組成物を30質量%もの高濃度で含む場合や(本発明毛髪洗浄料3)、泡立ち性及びすすぎ性の悪い界面活性剤(ラウレス硫酸Naやコカミドプロピルベタイン)を併用した場合でも(本発明毛髪洗浄料4)、泡立ち性は極めて良好であり、さらにすすぎ性も良好であった。さらに一般的に石ケンが配合された毛髪洗浄料は、泡立ちやすすぎ性が悪いことが知られているが、低毒性SL含有物を配合することで泡立ちやすすぎ性が良好な洗浄料となった(本発明毛髪洗浄料5)。   As can be seen from the results, the hair cleanser of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition is extremely irritating to the skin even when the low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 30% by mass. It was low (Invention Hair Wash 3), and it did not change even when a surfactant (Na laureth sulfate, cocamidopropyl betaine) with high skin irritation was used in combination (Invention Hair Wash 4). Moreover, even if the hair cleansing material of the present invention contains a low-toxic SL-containing composition at a low concentration of 0.01% by mass (the present hair cleaning material 1), the foaming property is good and the rinsing property is also good. Met. Furthermore, when a low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 30% by mass (inventive hair cleansing material 3), a surfactant having poor foaming properties and rinsing properties (sodium laureth sulfate or cocamidopropyl betaine) was used in combination. Even in the case (Invention Hair Wash 4), the foaming property was very good and the rinsing property was also good. Furthermore, it is generally known that a hair cleanser formulated with soap is not easy to foam, but it contains a low-toxic SL content, resulting in a cleanser with good foam ease. (Invention hair cleanser 5).

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、泡立ち性、及びすすぎ性が良好で、しかも皮膚刺激性が少ない毛髪洗浄料を調製し、提供することができることがわかる。   Based on these facts, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, a hair cleanser having good foaming and rinsing properties and less skin irritation is prepared and provided. You can see that you can.

試験例8 洗眼料の調製とその評価(眼粘膜刺激性)
上記の実施例2で得られたSL含有組成物を用いて、表11に記載する処方に従って、液状の洗眼料(pH6)を製造し(本発明洗眼料1〜3)、各洗眼料の眼粘膜への刺激性を評価した。また、比較試験として、表11に記載する比較洗眼料1及び2(pH6)についても同様に眼粘膜への刺激性を評価した。
Test Example 8 Preparation of eye wash and its evaluation (eye mucous membrane irritation)
Using the SL-containing composition obtained in Example 2 above, a liquid eye wash (pH 6) was produced according to the formulation described in Table 11 (the present eye wash 1 to 3), and the eye of each eye wash The irritation to the mucous membrane was evaluated. Further, as a comparative test, the irritation to the ocular mucosa was similarly evaluated for Comparative Eyewashes 1 and 2 (pH 6) shown in Table 11.

(1)実験方法:
(眼・粘膜刺激性評価)
眼や粘膜などの刺激性を評価する眼・粘膜刺激性試験の代替法として、細胞毒性試験が提案されている。そこで、ウサギの角膜上皮由来細胞(SIRC)細胞を用いて細胞毒性試験を行った。まず、96wellプレートに各洗眼料をMEM培地で段階的に希釈したものを100μL添加し、そこにSIRC細胞を1×104cells/wellの濃度で播種し、37℃、5%CO2下で72時間培養した。培養後、0.5mg/mL MTT入り培地に交換し、さらに2時間培養した。得られた培養物からイソプロパノールを用いてホルマザン(色素)を抽出し、570nmの吸光度を測定した。細胞生存率(%)を下式で求めた。
(1) Experimental method:
(Evaluation of eye / mucosal irritation)
Cytotoxicity tests have been proposed as an alternative to eye / mucosal irritation tests that evaluate irritation of eyes and mucous membranes. Therefore, a cytotoxicity test was performed using rabbit corneal epithelium-derived cells (SIRC) cells. First, 100 μL of each eyewash diluted in MEM medium stepwise was added to a 96-well plate, and SIRC cells were seeded there at a concentration of 1 × 10 4 cells / well, at 37 ° C. and 5% CO 2 . Cultured for 72 hours. After the culture, the medium was replaced with a medium containing 0.5 mg / mL MTT, and further cultured for 2 hours. Formazan (dye) was extracted from the obtained culture using isopropanol, and the absorbance at 570 nm was measured. Cell viability (%) was determined by the following formula.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

比較対照物質のトリエタノールアミン(TEA)を用いて同様に試験し(比較試験)、上記で得られた細胞生存率(%)が比較試験で得られた細胞生存率よりも高い場合を◎(細胞毒性がTEAより低い)、同程度の場合を○(細胞毒性がTEAと同等)、低い場合を×(細胞毒性がTEAより高い)と判定した。   The same test was conducted using the comparative control substance triethanolamine (TEA) (comparative test), and the cell viability (%) obtained above was higher than the cell viability obtained in the comparative test. Cytotoxicity is lower than TEA), the case of the same degree was judged as ◯ (cytotoxicity is equivalent to TEA), and the case of low was judged as x (cytotoxicity higher than TEA).

(2)実験結果
結果を表11に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 11 together.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の洗眼料は、低毒性SL含有組成物を10質量%もの高濃度で含有していても眼粘膜刺激性が極めて低かった(本発明洗眼料3)。また、本発明の洗眼料は、低毒性SL含有組成物を0.001質量%と極めて低濃度で含む場合であっても(本発明洗眼料1)、良好な洗浄力を発揮することが確認された。   As can be seen from the results, the eye wash of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition is extremely irritating to the eye mucosa even when the low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 10% by mass. It was low (invention eyewash 3). In addition, it was confirmed that the eye wash of the present invention exhibits a good detergency even when it contains a low-toxic SL-containing composition at an extremely low concentration of 0.001% by mass (the present invention eye wash 1). .

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、洗浄力が良好で、しかも眼粘膜刺激性が低い洗眼料を調製し、提供することができることがわかる。   From these facts, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, it is possible to prepare and provide an eye wash with good detergency and low irritation to the eye mucosa. I understand.

試験例9 点眼薬の調製とその評価(眼刺激性)
実施例5で得られたSL含有組成物を用いて、表12に記載する処方に従って、液状の点眼薬(pH6)を製造し(本発明点眼薬1〜3)、各点眼薬の眼刺激性を評価した。また、比較試験として、表12に記載する比較点眼薬1及び2(pH6)についても同様に眼粘膜刺激性を評価した。
Test Example 9 Preparation of eye drops and their evaluation (eye irritation)
Using the SL-containing composition obtained in Example 5, a liquid eye drop (pH 6) was produced according to the formulation described in Table 12 (the present eye drops 1 to 3), and the eye irritation of each eye drop Evaluated. In addition, as a comparative test, the ophthalmic mucous membrane irritation was similarly evaluated for comparative eye drops 1 and 2 (pH 6) shown in Table 12.

(1)実験方法
(1−1)眼粘膜刺激性
被験試料として、本発明点眼薬1〜3及び比較点眼薬1〜2を用いて、試験例8と同様に、ウサギの角膜上皮由来細胞(SIRC)細胞を用いた細胞毒性試験を行い、眼粘膜刺激性を評価した。
(1) Experimental method (1-1) Ocular mucosal irritation Rabbit corneal epithelium-derived cells (Test Example 8) using eye drops 1 to 3 and comparative eye drops 1 and 2 of the present invention as test samples ( Cytotoxicity tests using SIRC cells were performed to evaluate eye mucosal irritation.

(2)実験結果
結果を表12に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 12 together.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の点眼薬は、試験例8で評価した洗眼料と同様に、低毒性SL含有組成物を10質量%もの高濃度で含有していても眼粘膜刺激性が極めて低かった(本発明点眼薬3)。このことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、眼粘膜刺激性が低い点眼薬を調製し、提供することができることがわかる。   As can be seen from the results, the eye drop of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition was similar to the eye wash evaluated in Test Example 8, and the low-toxic SL-containing composition was as high as 10% by mass. Even though it was contained, the ocular mucosal irritation was extremely low (the eye drop 3 of the present invention). From this, it can be seen that by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, it is possible to prepare and provide an eye drop having low eye mucosal irritation.

試験例10 口腔洗浄液の調製とその評価(粘膜刺激性)
上記の実施例9で得られたSL含有組成物を用いて、表13に記載する処方に従って、液状の口腔洗浄液(pH6.5)を製造し(本発明洗口液1〜3)、各洗口液の口腔粘膜刺激性を評価した。また、比較試験として、表13に記載する比較洗口液1〜3(pH6.5)についても同様に口腔粘膜刺激性を評価した。
Test Example 10 Preparation of mouthwash and its evaluation (mucosal irritation)
Using the SL-containing composition obtained in Example 9 above, a liquid mouth washes (pH 6.5) was produced according to the formulation described in Table 13 (invention mouthwash 1 to 3), and each wash The oral mucosal irritation of the oral fluid was evaluated. In addition, as a comparative test, oral mucosal irritation was similarly evaluated for comparative mouthwashes 1 to 3 (pH 6.5) shown in Table 13.

(1)実験方法
(口腔粘膜刺激性)
被験試料として、本発明洗口液1〜3及び比較洗口液1〜3を用いて、試験例8と同様に、ウサギの角膜上皮由来細胞(SIRC)細胞を用いた細胞毒性試験を行い、口腔粘膜刺激性を評価した。
(1) Experimental method (oral mucosal irritation)
As test samples, using the mouthwashes 1 to 3 and comparative mouthwashes 1 to 3 of the present invention, a cytotoxicity test using rabbit corneal epithelium-derived cells (SIRC) cells was performed in the same manner as in Test Example 8, Oral mucosal irritation was evaluated.

(2)実験結果
結果を表13に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 13 together.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の口腔洗浄液は、低毒性SL含有組成物を10質量%もの高濃度で含有していても口腔粘膜刺激性が極めて低かった(本発明洗口液3)。また、本発明の口腔洗浄液は、低毒性SL含有組成物を0.001質量%と極めて低濃度で含む場合であっても(本発明洗口液1)、良好な洗浄力を発揮することが確認された。   As can be seen from the results, the oral cleansing liquid of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition is extremely irritating to the oral mucosa even when the low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 10% by mass. It was low (invention mouthwash 3). In addition, it was confirmed that the oral cleansing liquid of the present invention exhibits good detergency even when it contains a low-toxic SL-containing composition at an extremely low concentration of 0.001% by mass (inventive mouthwash 1). It was.

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、洗浄力が良好で、しかも口腔粘膜刺激性が低い洗口料を調製し、提供することができることがわかる。   Therefore, it is possible to prepare and provide a mouthwash with good detergency and low oral mucosal irritation by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant. I understand that I can do it.

試験例11 粘膜洗浄料の調製とその評価(粘膜刺激性)
上記の実施例1で得られたSL含有組成物を用いて、表14に記載する処方に従って、液状の粘膜洗浄料(pH6)を製造し(本発明粘膜洗浄液1〜4)、各洗浄液のすすぎ性及び粘膜刺激性を評価した。また、比較試験として、表14に記載する比較粘膜洗浄液1〜2(pH6)についても同様にすすぎ性と粘膜刺激性を評価した。
Test Example 11 Preparation and evaluation of mucosal cleaning material (mucosal irritation)
Using the SL-containing composition obtained in Example 1 above, a liquid mucosal cleaning material (pH 6) was produced according to the formulation described in Table 14 (invention mucosal cleaning liquids 1 to 4), and each cleaning liquid was rinsed. And mucosal irritation were evaluated. In addition, as a comparative test, the rinsing properties and mucous membrane irritation properties were similarly evaluated for the comparative mucosal cleaning solutions 1 to 2 (pH 6) shown in Table 14.

(1)実験方法
粘膜刺激性
被験試料として、本発明粘膜洗浄液1〜4及び比較粘膜洗浄液1〜2を用いて、試験例8と同様に、ウサギの角膜上皮由来細胞(SIRC)細胞を用いた細胞毒性試験を行い、粘膜刺激性を評価した。
(1) Experimental method mucosal irritation Rabbit corneal epithelium-derived cells (SIRC) cells were used as test samples in the same manner as in Test Example 8 using the mucosal lavage fluids 1 to 4 and the comparative mucosal lavage fluids 1 and 2 of the present invention. Cytotoxicity tests were performed to evaluate mucosal irritation.

(2)実験結果
結果を表14に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 14.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の粘膜洗浄液は、低毒性SL含有組成物を30質量%もの高濃度で含有していても粘膜刺激性が極めて低かった(本発明粘膜洗浄液3)。また、本発明の粘膜洗浄液、低毒性SL含有組成物を0.001質量%と極めて低濃度で含む場合であっても(本発明粘膜洗浄液1)、良好な洗浄力を発揮することが確認された。   As can be seen from the results, the mucosal lavage fluid of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition has extremely low mucosal irritation even when the low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 30% by mass. (Invention mucosa washing solution 3). Further, even when the mucosal cleaning liquid of the present invention and the low-toxic SL-containing composition were contained at an extremely low concentration of 0.001% by mass (the mucosal cleaning liquid 1 of the present invention), it was confirmed that good detergency was exhibited.

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、洗浄力が良好で、しかも粘膜刺激性が低い粘膜洗浄液を調製し、提供することができることがわかる。   From these facts, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, it is possible to prepare and provide a mucosal cleaning solution with good detergency and low mucosal irritation. Recognize.

試験例12 創傷用洗浄剤の調製とその評価(洗浄力及び創傷部刺激性)
上記の実施例4で得られたSL含有組成物を用いて、表15に記載する処方に従って、液状の創傷用洗浄剤(pH5.5)を製造し(本発明創傷用洗浄剤1〜4)、各洗浄剤の洗浄力及び創傷部刺激性を評価した。また、比較試験として、表15に記載する比較創傷用洗浄剤1〜2(pH5.5)についても同様に洗浄力と創傷部刺激性を評価した。
Test Example 12 Preparation of wound cleaning agent and its evaluation (detergency and wound part irritation)
Using the SL-containing composition obtained in Example 4 above, a liquid wound cleanser (pH 5.5) was produced according to the formulation described in Table 15 (the present wound cleanser 1-4). The cleaning power and wound part irritation of each cleaning agent were evaluated. Moreover, as a comparative test, the cleaning power and wound part irritation were similarly evaluated for the cleaning agents for comparative wounds 1-2 (pH 5.5) shown in Table 15.

(1)実験方法
(1−1)洗浄力
洗浄力は以下の方法で評価した。あらかじめ重量を測定したステンレス片に「モデル汚れ」(下記参照)を均一に塗り広げテストピースを作成した。モデル汚れを乾燥させ重量を測定した。汚れの表面に各創傷用洗浄剤(本発明創傷用洗浄剤1〜4、比較創傷用洗浄剤1〜2)を塗布し、5分間静置後10秒間流水ですすいだ。乾燥後テストピースの重量を測定し、洗浄前後のモデル汚れの重量比より洗浄率を算出した。
(1) Experimental method (1-1) Detergency The detergency was evaluated by the following method. A test piece was prepared by uniformly spreading “model dirt” (see below) on a stainless steel piece whose weight had been measured in advance. The model soil was dried and weighed. Each wound cleaner (the present invention wound cleaners 1 to 4 and comparative wound cleaners 1 and 2) was applied to the surface of the soil, allowed to stand for 5 minutes, and then rinsed with running water for 10 seconds. After drying, the weight of the test piece was measured, and the washing rate was calculated from the weight ratio of the model dirt before and after washing.

得られた洗浄率から下記基準により洗浄力を評価した。
[洗浄力]
◎:洗浄率75-100%、○:洗浄率50-74%、△:洗浄率25-49%、×:洗浄率0-24%。
Detergency was evaluated according to the following criteria from the obtained cleaning rate.
[Detergency]
◎: Cleaning rate 75-100%, ○: Cleaning rate 50-74%, Δ: Cleaning rate 25-49%, ×: Cleaning rate 0-24%.

[モデル汚れ]
モデル皮脂汚れとモデル血液汚れを5:1で混合したものを「モデル汚れ」として用いた。
(モデル皮脂汚れの組成)
マカデミアナッツ油 40%、ミリスチン酸イソプロピル 20%、パルミチン酸 15%、スクアレン 10%、オレイン酸10%、コレステロール 5%;
(モデル血液汚れの組成)
緬羊無菌脱繊維血液。
[Model dirt]
A mixture of model sebum stain and model blood stain at 5: 1 was used as “model stain”.
(Composition of model sebum stain)
Macadamia nut oil 40%, Isopropyl myristate 20%, Palmitic acid 15%, Squalene 10%, Oleic acid 10%, Cholesterol 5%;
(Model blood stain composition)
Sheep sterile defibrinated blood.

(1−2)創傷部刺激性
繊維芽細胞を用いて細胞毒性評価を行った。まず、繊維芽細胞を96wellプレートに1×104cells/wellの濃度で播種し、DMEM培地で37℃、5%CO2下で72時間培養した。各創傷用洗浄剤(本発明創傷用洗浄剤1〜4、比較創傷用洗浄剤1〜2)を任意濃度で添加したDMEM培地に交換し、37℃、5%CO2下で48時間培養した。培養後、0.5mg/mL MTT入り培地に交換し、さらに2時間培養した。得られた培養物からイソプロパノールを用いてホルマザン(色素)を抽出し、570nmの吸光度を測定した。細胞生存率を下式で求めた。
(1-2) Wound site irritation Cytotoxicity evaluation was performed using fibroblasts. First, fibroblasts were seeded in a 96-well plate at a concentration of 1 × 10 4 cells / well and cultured in DMEM medium at 37 ° C. and 5% CO 2 for 72 hours. Each of the wound cleansing agents (the present invention wound cleansing agents 1-4, comparative wound cleansing agents 1-2) was replaced with a DMEM medium added at an arbitrary concentration, and cultured at 37 ° C. under 5% CO 2 for 48 hours. . After the culture, the medium was replaced with a medium containing 0.5 mg / mL MTT, and further cultured for 2 hours. Formazan (dye) was extracted from the obtained culture using isopropanol, and the absorbance at 570 nm was measured. The cell viability was calculated by the following formula.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

比較対照物質のトリエタノールアミン(TEA)を用いて同様に試験し(比較試験)、上記で得られた細胞生存率(%)が比較試験で得られた細胞生存率よりも高い場合◎(細胞毒性がTEAより低い)、同程度の場合を○(細胞毒性がTEAと同等)、低い場合を×(細胞毒性がTEAより高い)と判定した。   The same test was performed using the comparative control substance triethanolamine (TEA) (comparative test), and the cell viability (%) obtained above was higher than the cell viability obtained in the comparative test. Toxicity is lower than TEA), the case of the same degree is judged as ○ (cytotoxicity is equivalent to TEA), and the case of low is judged as × (cytotoxicity is higher than TEA).

(2)実験結果
結果を表15に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 15.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の創傷用洗浄剤は、低毒性SL含有組成物を30質量%もの高濃度で含有していても創傷部刺激性が極めて低かった(本発明創傷用洗浄剤3)。また、本発明の創傷用洗浄剤は、低毒性SL含有組成物を0.001質量%と極めて低濃度で含む場合であっても(本発明創傷用洗浄剤1)、良好な洗浄力を発揮することが確認された。   As can be seen from these results, the wound cleansing agent of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition is irritating to the wound even if it contains the low-toxic SL-containing composition at a high concentration of 30% by mass. Was very low (Inventive wound cleaning agent 3). Moreover, even if the wound cleaning agent of the present invention contains a low-toxic SL-containing composition at an extremely low concentration of 0.001% by mass (present invention wound cleaning agent 1), it exhibits good cleaning power. Was confirmed.

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、洗浄力が良好で、しかも創傷部刺激性が低い創傷用洗浄剤を調製し、提供することができることがわかる。   Based on these facts, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, preparing and providing a wound cleanser with good detergency and low wound area irritation You can see that

試験例13 創傷被覆材の調製とその評価(刺激性、分散性)
上記の実施例6で得られたSL含有組成物を用いて、表16に記載する処方に従って、ゲル状の創傷被覆材(pH7)を製造し(本発明創傷被覆材1〜8)、各被覆材の創傷部刺激性及び分散性を評価した。また、比較試験として、表17に記載する比較創傷被覆材(pH7)についても同様に創傷部刺激性及び分散性を評価した。
Test Example 13 Preparation of wound dressing and its evaluation (irritability, dispersibility)
Using the SL-containing composition obtained in Example 6 above, a gel wound dressing (pH 7) was produced according to the formulation described in Table 16 (the present wound dressing 1 to 8), and each coating The wound irritation and dispersibility of the material was evaluated. Moreover, as a comparative test, the wound part irritation and dispersibility were similarly evaluated for the comparative wound dressing (pH 7) described in Table 17.

(1)実験方法
(1−1)創傷部刺激性
被験試料として、本発明創傷被覆材1〜8及び比較創傷被覆材1〜4を用いて、試験例12と同様に、線維芽細胞を用いた細胞毒性試験を行い、創傷部刺激性を評価した。
(1) Experimental method (1-1) Wound part irritation As a test sample, the present invention wound dressing materials 1 to 8 and comparative wound dressing materials 1 to 4 were used, and fibroblasts were used as in Test Example 12. Cytotoxicity tests were performed to assess wound irritation.

(1−2)分散性
本発明創傷被覆材1〜8及び比較創傷被覆材1〜4を調製する際、各配合成分が均一に溶解するかを評価した。評価は、2段階(均一に溶解:○、凝集あるいは不溶:×)で行った。
(1-2) Dispersibility When preparing the present wound dressings 1-8 and comparative wound dressings 1-4, it was evaluated whether each compounding component was uniformly dissolved. Evaluation was performed in two stages (uniformly dissolved: ◯, aggregated or insoluble: x).

(2)実験結果
結果を表16及び17に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Tables 16 and 17.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を配合して調製した本発明の創傷被覆材は、低毒性SL含有組成物を配合しない創傷被覆材と比較して、格段に刺激性が低かった(本発明創傷被覆材1〜8)。また各成分の分散性も良好であった。   As can be seen from the results, the wound dressing of the present invention prepared by blending the low-toxic SL-containing composition was much less irritating than the wound dressing not blended with the low-toxic SL-containing composition. (Invention wound dressing 1-8). The dispersibility of each component was also good.

このことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を使用することで、各配合成分の分散性を高めるとともに、界面活性剤や抗菌剤などの添加剤に起因して生じる刺激を緩和抑制することができ、その結果、刺激性の低い創傷被覆材を調製し、提供することができることがわかる。   From this, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention, the dispersibility of each compounding component is enhanced, and the irritation caused by additives such as surfactants and antibacterial agents is alleviated and suppressed. It can be seen that, as a result, a less irritating wound dressing can be prepared and provided.

試験例14 低毒性SL含有組成物の保湿作用及び皮膚バリア機能改善作用の評価
上記の実施例1で得られた低毒性SL含有組成物を用いて、表18に記載する処方に従って、被験試料を製造し(本発明ローション1〜3)、各ローションの保湿作用及び皮膚バリア機能改善作用を評価した。また、比較試験として、表18に記載する比較ローション1〜3についても同様に保湿作用及び皮膚バリア機能改善作用を評価した。
Test Example 14 Evaluation of Moisturizing Action and Skin Barrier Function Improving Action of Low Toxicity SL-Containing Composition Using the low toxicity SL-containing composition obtained in Example 1 above, a test sample was prepared according to the formulation described in Table 18. Manufactured (invention lotions 1 to 3) and evaluated the moisturizing action and skin barrier function improving action of each lotion. Further, as comparative tests, Comparative Lotions 1 to 3 shown in Table 18 were similarly evaluated for the moisturizing action and the skin barrier function improving action.

(1)実験方法
(1−1)保湿作用
ヒト上腕内部に印をつけ、角層水分量を角層水分測定機(Corneometer CM825(Courage+Khazaka))を用いて測定した(初期値)。各ローション(本発明ローション1〜3、比較ローション1〜3)を20μL/cm2の割合で初期値を測定した部位に塗布した。相対湿度50%、温度20℃の部屋で4時間、上腕内部を素肌の状態で晒した後、当該塗布部の角層水分量を測定した。各ローション塗布前後の変化率を求め、下記基準に基づいて、各ローションの保湿作用を評価した。
(1) Experimental method (1-1) Moisturizing effect The inside of the human upper arm was marked, and the stratum corneum moisture content was measured using a stratum corneum moisture meter (Corneometer CM825 (Courage + Khazaka)) (initial value). Each lotion (invention lotions 1 to 3 and comparative lotions 1 to 3) was applied to the site where the initial value was measured at a rate of 20 μL / cm 2 . After exposing the inside of the upper arm for 4 hours in a room with a relative humidity of 50% and a temperature of 20 ° C., the moisture content of the stratum corneum was measured. The rate of change before and after application of each lotion was determined, and the moisturizing effect of each lotion was evaluated based on the following criteria.

[保湿作用]
◎:角層水分量変化率120%以上
○:角層水分量変化率100〜120%未満
△:角層水分量変化率90〜100%未満
×:角層水分量変化率90%未満。
[Moisturizing effect]
◎: Change rate of stratum corneum water content 120% or more ○: Change rate of stratum corneum water content 100% to less than 120% Δ: Change rate of stratum corneum water content 90% to less than 100% ×: Change rate of stratum corneum water content 90% or less.

(1−2)皮膚改善作用
ヒト上腕内部に5%SDS溶液を1時間接触させて、人工的に肌荒れを引き起こさせた。肌荒れを生じた皮膚の肌のキメをマイクロスコープ(マイクロスコープVHX-1000・VH-220R(キーエンス))で観察した。また、経皮水分蒸散量をTewameter TM300(Courage+Khazaka)を用いて測定した。この部位に各ローション(本発明ローション1〜3、比較ローション1〜3)を20μL/cm2の割合で1日2回塗布した。これを4日間実施した後、肌のキメを観察した。また、経皮水分蒸散量をTewameter TM300(Courage+Khazaka)を用いて測定した。各ローション使用前後の変化率を求め、下記基準に基づいて、各ローションの皮膚バリア機能改善作用を評価した。
(1-2) Skin Improvement Action A 5% SDS solution was brought into contact with the human upper arm for 1 hour to artificially cause rough skin. The texture of the rough skin was observed with a microscope (microscope VHX-1000 / VH-220R (Keyence)). In addition, transdermal moisture transpiration was measured using Tewameter TM300 (Courage + Khazaka). Each lotion (invention lotions 1 to 3 and comparative lotions 1 to 3) was applied to this site twice a day at a rate of 20 μL / cm 2 . After performing this for 4 days, the skin texture was observed. In addition, transdermal moisture transpiration was measured using Tewameter TM300 (Courage + Khazaka). The rate of change before and after using each lotion was determined, and the skin barrier function improving action of each lotion was evaluated based on the following criteria.

[皮膚バリア機能改善作用]
◎:水分蒸散量変化率が80%未満
○:水分蒸散量が80〜90%未満
△:水分蒸散量が90-100%未満
×:水分蒸散量が100%以上。
[Skin barrier function improving effect]
◎: Moisture transpiration rate change rate is less than 80% ○: Moisture transpiration rate is less than 80-90% △: Moisture transpiration amount is less than 90-100% ×: Moisture transpiration amount is 100% or more.

[肌のキメ]
◎:肌のキメが正常に戻った
○:肌のキメがやや改善した。
△:肌のキメがほとんど変化していない。
×:肌のキメが悪くなった。
[Skin texture]
A: Skin texture returned to normal. B: Skin texture slightly improved.
(Triangle | delta): The texture of skin has hardly changed.
X: The texture of the skin deteriorated.

(2)実験結果
結果を表18に合わせて示す。また、5%SDS溶液処理後及び本発明ローション1で4日間塗布した後の肌をそれぞれマイクロスコープで観察した肌の画像を図1に示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 18 together. Further, FIG. 1 shows skin images obtained by observing the skin after treatment with 5% SDS solution and after applying for 4 days with the lotion 1 of the present invention with a microscope.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果から、低毒性SL含有組成物には、低刺激性だけでなく、皮膚保湿作用及び皮膚バリア機能改善作用があることがわかる。特に、10質量%の割合で低毒性SL含有組成物を含むローションは、保湿作用もまた皮膚のバリア機能を改善する作用の両方に優れていることが判明した。このことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を使用することで、保湿作用及び皮膚のバリア機能改善作用を有する低刺激性外用剤(化粧料、皮膚医薬品、皮膚医薬部外品)を調製し、提供することができることがわかる。   From this result, it can be seen that the low-toxic SL-containing composition has not only low irritation but also skin moisturizing action and skin barrier function improving action. In particular, it has been found that a lotion containing a low-toxic SL-containing composition at a ratio of 10% by mass is excellent in both the moisturizing action and the action of improving the barrier function of the skin. Therefore, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention, a hypoallergenic external preparation (cosmetics, dermopharmaceutical, dermatological quasi-drug) having a moisturizing action and a skin barrier function improving action. It can be seen that can be prepared and provided.

試験例16 化粧水の保湿作用及び刺激性の評価
実施例1で得られた低毒性SL含有組成物を用いて、表19に記載する処方に従って、化粧水(pH5.0)を製造し(本発明化粧水1〜3)、各化粧水の保湿作用、及び刺激性を評価した。また、比較試験として、表19に記載する比較化粧水1〜3(pH5.0)についても同様に保湿作用及び刺激性を評価した。
Test Example 16 Evaluation of moisturizing action and irritation of lotion Using the composition containing low toxicity SL obtained in Example 1, lotion (pH 5.0) was produced according to the formulation described in Table 19 (this Invention lotion 1-3), the moisturizing action and irritation of each lotion were evaluated. Moreover, as a comparative test, the moisturizing action and irritation were similarly evaluated for comparative lotions 1 to 3 (pH 5.0) shown in Table 19.

(1)実験方法
(1−1)保湿作用及びスティンギングの評価
5名の専門パネラーに各化粧水(本発明化粧水1〜3、比較化粧水1〜3)をそれぞれ洗顔後の顔に塗布してもらい、しっとり感とスティンギング(刺激感)を評価してもらった。しっとり感の評価は「しっとりする:◎、ややしっとりする:○、あまりしっとりしない:△、しっとりしない:×」の4段階で、またスティンギング(刺激感)の評価は「全く刺激を感じない:○、わずかに刺激を感じる:△、非常に刺激を感じる:×」の3段階で行った。
(1) Experimental Method (1-1) Evaluation of Moisturizing Action and Stinging Applying each lotion (invention lotion 1 to 3 and comparative lotion 1 to 3) to the face after washing the face to 5 specialist panelists. I was asked to evaluate moistness and sting. The evaluation of moist feeling is “moist: ◎, slightly moist: ○, not very moist: △, not moist: x”, and the evaluation of sting (irritation) is “no irritation: “Slightly stimulated: Δ, very stimulating: x”.

(1−2)刺激性
(a)皮膚刺激性
本発明化粧水1〜3、及び比較化粧水1〜3を用いて、試験例6と同様に10名の被験者を対象としてパッチテストを行い、各化粧水の皮膚刺激性を評価した。
(1-2) Irritation
(A) Skin irritation Using the skin lotions of the present invention 1 to 3 and comparative skin lotions 1 to 3, a patch test was conducted on 10 subjects in the same manner as in Test Example 6, and the skin irritation of each skin lotion. Evaluated.

(2)実験結果
結果を表19に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 19 together.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の化粧水は、低毒性SL含有組成物を10質量%及び20質量%もの高濃度で含有していても皮膚刺激性が極めて低く、しかもグリセリン及びヒアルロン酸ナトリウムの保湿性を妨げることなく、むしろ増加させていることが確認された(本発明化粧水2及び3)。   As can be seen from the results, the skin lotion of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition is irritating to the skin even when the low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 10% by mass and 20% by mass. It was confirmed that the properties were extremely low and increased without impeding the moisture retention of glycerin and sodium hyaluronate (invention lotions 2 and 3).

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、良好な保湿性を有し、かつ皮膚刺激性が低い化粧料を調製し、提供することができることがわかる。   Therefore, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, it is possible to prepare and provide a cosmetic having good moisturizing properties and low skin irritation. I understand that I can do it.

試験例16 美白クリームの刺激性、保存安定性の評価
実施例1で得られた低毒性SL含有組成物を用いて、表20に記載する処方に従って、美白クリーム(pH5)を製造し(本発明クリーム1〜4)、各クリームの保存安定性、皮膚刺激性及び使用感を評価した。また、比較試験として、表20に記載する比較クリーム1〜2(pH5)についても同様に保存安定性、皮膚刺激性及び使用感を評価した。
Test Example 16 Evaluation of Irritation and Storage Stability of Whitening Cream Using the low toxicity SL-containing composition obtained in Example 1, a whitening cream (pH 5) was produced according to the formulation described in Table 20 (the present invention). Cream 1-4), the storage stability, skin irritation and feeling of use of each cream were evaluated. Moreover, as a comparative test, the storage stability, skin irritation, and feeling of use were similarly evaluated for comparative creams 1 to 2 (pH 5) shown in Table 20.

なお、各クリームは、下記のようにして製造した。
まずA相の各成分及びB相の各成分をそれぞれ混合して70℃まで加熱する。加熱溶解後、撹拌しながらA相にB相を徐々に添加し、ホモミキサーにて乳化する。次いで撹拌しながら室温まで冷却する。
Each cream was produced as follows.
First, each component of the A phase and each component of the B phase are mixed and heated to 70 ° C. After heating and dissolving, phase B is gradually added to phase A with stirring, and emulsified with a homomixer. It is then cooled to room temperature with stirring.

(1)実験方法
(1−1)保存安定性の評価
各美白クリーム(本発明クリーム1〜4、比較クリーム1〜2)を室温(25±5℃)、50℃、及び−5℃の条件下に1か月間保存し、1か月後に状態の変化を観察した。評価は3段階(変化なし:○、わずかに分離:△、明らかに分離:×)で行った。
(1) Experimental method (1-1) Evaluation of storage stability Conditions of each whitening cream (present creams 1 to 4 and comparative creams 1 to 2) at room temperature (25 ± 5 ° C), 50 ° C, and -5 ° C It was stored for one month below, and the change in state was observed after one month. Evaluation was performed in three stages (no change: ◯, slightly separated: Δ, clearly separated: x).

(1−2)皮膚刺激性
本発明クリーム1〜4、及び比較クリーム1〜2を用いて、試験例6と同様に10名の被験者を対象としてパッチテストを行い、各クリームの皮膚刺激性を評価した。
(1-2) Skin irritation Using the creams 1 to 4 of the present invention and the comparative creams 1 to 2, a patch test was conducted on 10 subjects as in Test Example 6, and the skin irritation of each cream was determined. evaluated.

(1−3)使用感
5名の専門パネラーに各美白クリーム(本発明クリーム1〜4、比較クリーム1〜2)を洗顔後の顔に塗布してもらい、使用感(のび性、しっとり感、肌なじみ)を評価してもらった。各評価項目毎に4段階(非常に良い:◎、良い:○、やや悪い:△、悪い:×)で評価を行った。
(1-3) Usability 5 professional panelists applied each whitening cream (Invention creams 1-4, Comparative creams 1-2) to the face after face washing, feeling of use (extensibility, moist feeling, Skin familiarity) was evaluated. Each evaluation item was evaluated in four stages (very good: ◎, good: ◯, somewhat bad: △, bad: ×).

(2)実験結果
結果を表20に合わせて示す。
(2) Experimental results The results are shown in Table 20 together.

Figure 0006157524
Figure 0006157524

この結果からわかるように、低毒性SL含有組成物を用いて調製した本発明の美白クリームは、低毒性SL含有組成物を10質量%及び20質量%もの高濃度で含有していても皮膚刺激性が極めて低く、しかもクリームの保存安定性を妨げることなく、むしろ向上させていることが確認された(本発明クリーム3及び4)。また本発明の美白クリームはいずれも使用感が良好であった。   As can be seen from the results, the whitening cream of the present invention prepared using the low-toxic SL-containing composition is irritating to the skin even when the low-toxic SL-containing composition is contained at a high concentration of 10% by mass and 20% by mass. It was confirmed that the properties were extremely low and improved without impairing the storage stability of the cream (inventive creams 3 and 4). Moreover, all of the whitening creams of the present invention had good usability.

これらのことから、本発明で提供する低毒性SL含有組成物を界面活性剤として使用することで、良好な保存安定性及び使用感を有し、かつ皮膚刺激性が低い化粧料を調製し、提供することができることがわかる。   From these, by using the low-toxic SL-containing composition provided in the present invention as a surfactant, a cosmetic having good storage stability and feeling of use and having low skin irritation is prepared. It can be seen that it can be provided.

試験例18 毛髪保護及び修復効果
(1)試験方法
(1−1)評価被験毛(長さ30cm、10gの毛束)の作製
(i)健常毛
健常な黒色人毛(30cm)を、10%アルキルエーテル硫酸エステルナトリウム(AES)の水溶液(pH7、室温)に1分間浸漬した後、流水で洗浄し、ドライヤーで乾燥したものを健常毛(10gの毛束)とした。
Test Example 18 Hair Protection and Restoration Effect (1) Test Method (1-1) Evaluation Preparation of Test Hair (30 cm Length, 10 g Hair Bundle) (i) Healthy Hair 10% healthy black human hair (30 cm) After immersing in an aqueous solution of alkyl ether sulfate sodium (AES) (pH 7, room temperature) for 1 minute, washed with running water and dried with a dryer, healthy hair (10 g of hair bundle) was obtained.

(ii)損傷毛
健常な黒色人毛(30cm)をブリーチ剤(6%過酸化水素水と2%アンモニアの1:2(w/w)混合液)(30℃)に30分間浸漬(浴比:毛髪/ブリーチ剤=1/10(w/w))した後、流水で洗浄した。次いで、0.1Mクエン酸と0.2Mリン酸水素二ナトリウムの緩衝液(pH4.0)に5分間浸漬し、流水で洗浄後、蒸留水(室温)に5分間浸漬した後、取り出してドライヤーで乾燥した。この処理を3回行った毛束10gを損傷毛とした。
(Ii) Damaged hair Dilute healthy black human hair (30cm) in bleach (6% hydrogen peroxide and 1% (2 / w) mixture of 2% ammonia) (30 ° C) for 30 minutes (bath ratio) : Hair / bleaching agent = 1/10 (w / w)), and then washed with running water. Next, it is immersed in a buffer solution (pH 4.0) of 0.1 M citric acid and 0.2 M disodium hydrogen phosphate for 5 minutes, washed with running water, immersed in distilled water (room temperature) for 5 minutes, then taken out and dried with a dryer. did. A hair bundle of 10 g obtained by performing this treatment three times was used as damaged hair.

(1−2)試験方法
本発明の低毒性SL含有組成物(実施例1)を1質量%濃度で含む水溶液に、0.08重量%濃度になるように蛍光物質Fluorescein sodium salt(SIGMA Batch116K0094 EC208-253-0)を添加して被験溶液を調製した。また比較及び対照試験のため、上記低毒性SL含有組成物(実施例1)に代えて、それぞれ「Aqulio TXF-875」(日本精化社製)を2質量%濃度で含む水溶液、及び水についても、上記と同様に蛍光物質を添加して、被験溶液を調製した。なお、「Aqulio TXF-875」は保湿性を有し、また有効効成分の浸透促進作用を有することが知られている。 これらに各評価被験毛(健常毛、損傷毛)をそれぞれ30分間浸漬し、その後、各評価被験毛の断面を蛍光顕微鏡で観察した。
(1-2) Test Method Fluorescein sodium salt (SIGMA Batch116K0094 EC208-253) in an aqueous solution containing the low-toxic SL-containing composition of the present invention (Example 1) at a concentration of 1% by mass to a concentration of 0.08% by weight. -0) was added to prepare a test solution. For comparison and control tests, instead of the low-toxic SL-containing composition (Example 1), an aqueous solution containing 2% by mass of “Aqulio TXF-875” (manufactured by Nippon Seika Co., Ltd.) and water In the same manner as above, a fluorescent substance was added to prepare a test solution. “Aqulio TXF-875” is known to have moisture retention and to promote penetration of active ingredients. Each evaluation test hair (normal hair, damaged hair) was immersed in these for 30 minutes, and then the cross section of each evaluation test hair was observed with a fluorescence microscope.

(2)試験結果
健常毛の結果を図3(A)に、損傷毛の結果を図3(B)に示す。これから明らかなように、低毒性SL含有組成物で処理した評価被験毛は、健常毛も損傷毛もいずれも毛髪表面が保護されるとともに、さらに毛髪内部まで被験溶液が浸透していることが確認された。このことから、本発明の低毒性SL含有組成物を用いることで、毛髪表面がコーティング保護されるだけでなく、毛髪内部まで浸透し、損傷毛の回復を図ることができると期待される。
(2) Test result The result of healthy hair is shown in FIG. 3 (A), and the result of damaged hair is shown in FIG. 3 (B). As is clear from this, the test hair treated with the low-toxic SL-containing composition is confirmed to have the test solution penetrating into the hair while protecting the hair surface of both healthy and damaged hair. It was done. From this, it is expected that the use of the low-toxic SL-containing composition of the present invention not only protects the hair surface by coating, but also penetrates into the hair and can recover damaged hair.

[処方例]
以下に本願発明の低毒性SL含有組成物を含む各種製品の処方を示す。
[Prescription example]
The formulation of various products containing the low toxicity SL containing composition of this invention is shown below.

処方例1 オイルクレンジング剤
ミリスチン酸ポリグリセリル-6 12.0(質量%)
オレイン酸ポリグリセリル-6 2.0
ラウリン酸ポリグリセリル-10 2.0
ペンタイソステアリン酸ポリグリセリル-10 4.0
ラウリン酸 2.0
パルミチン酸エチルヘキシル 10.0
トリエチルヘキサノイン 45.0
低毒性SL含有組成物(実施例1〜10) 5.0
ブチレングリコール 10.0
精製水 残 量
全 量 100.0質量%。
Formulation Example 1 Oil cleansing agent polyglyceryl-6 myristate 12.0 (mass%)
Polyglyceryl oleate-6 2.0
Polyglyceryl laurate-10 2.0
Polyglyceryl pentaisostearate-10 4.0
Lauric acid 2.0
Ethyl hexyl palmitate 10.0
Triethylhexanoin 45.0
Low-toxic SL-containing composition (Examples 1 to 10) 5.0
Butylene glycol 10.0
Purified water balance
Total amount 100.0% by mass.

処方例2 アウトバストリートメント
エタノール 5(質量%)
塩化ヒドロキシプロピルトリモニウムデンプン 0.3
低毒性SL含有組成物(実施例1〜10) 1
精製水 残量
全 量 100.0質量%。
Formulation example 2 Out bath treatment <br/> Ethanol 5 (mass%)
Hydroxypropyltrimonium chloride starch 0.3
Low-toxic SL-containing composition (Examples 1 to 10) 1
Purified water remaining
Total amount 100.0% by mass.

処方例3 点眼薬 (pH6.6)
1-メントール 0.02(質量%)
d-カンフル 0.001
d-ボルネオール 0.005
ユーカリ油 0.01
ミント油 0.002
塩酸ナファゾリン 0.0015
メチル硫酸ネオスチグミン 0.004
マレイン酸クロルフェニラミン 0.03
塩酸ビリドキシン 0.08
酢酸トコフェロール 0.04
L-アスパラギン酸マグネシウム・カリウム 1.4
アミノエチルスルホン酸 0.8
ホウ酸 0.5
ホウ砂 0.1
濃塩化ベンザルコニウム液50(日本薬局方) 0.015
クロロブタノール 0.2
低毒性SL含有組成物(実施例1〜10) 0.3
塩酸/水酸化ナトリウム 適量
精製水 残量
合 計 100.00質量%。
Formulation Example 3 Eye drops (pH 6.6)
1-Menthol 0.02 (mass%)
d-Camphor 0.001
d-borneol 0.005
Eucalyptus oil 0.01
Mint oil 0.002
Naphazoline hydrochloride 0.0015
Neostigmine methylsulfate 0.004
Chlorpheniramine maleate 0.03
Viridoxine hydrochloride 0.08
Tocopherol acetate 0.04
Magnesium and potassium L-aspartate 1.4
Aminoethylsulfonic acid 0.8
Boric acid 0.5
Borax 0.1
Concentrated benzalkonium chloride solution 50 (Japanese Pharmacopoeia) 0.015
Chlorobutanol 0.2
Low-toxic SL-containing composition (Examples 1 to 10) 0.3
Hydrochloric acid / sodium hydroxide
Purified water remaining
Total 100.00% by mass.

処方例4 洗眼薬 (pH5.8)
1-メントール 0.01(質量%)
イプシロンアミノカプロン酸 0.1
グリチルリチン酸二カリウム 0.1
硫酸亜鉛 0.05
マレイン酸クロルフェニラミン 0.003
L-アスパラギン酸カリウム 0.1
塩化カルシウム 0.05
ホウ酸 1.5
ホウ砂 0.015
濃塩化ベンザルコニウム液50(日本薬局方) 0.004
クロロブタノール 0.2
低毒性SL含有組成物(実施例1〜10) 0.2
エタノール 0.1
塩酸/水酸化ナトリウム 0.01
精製水 残量
合 計 100.00質量%。
Formulation Example 4 Eyewash (pH 5.8)
1-Menthol 0.01 (mass%)
Epsilon aminocaproic acid 0.1
Dipotassium glycyrrhizinate 0.1
Zinc sulfate 0.05
Chlorpheniramine maleate 0.003
Potassium L-aspartate 0.1
Calcium chloride 0.05
Boric acid 1.5
Borax 0.015
Concentrated benzalkonium chloride solution 50 (Japanese Pharmacopoeia) 0.004
Chlorobutanol 0.2
Low-toxic SL-containing composition (Examples 1 to 10) 0.2
Ethanol 0.1
Hydrochloric acid / sodium hydroxide 0.01
Purified water remaining
Total 100.00% by mass.

処方例5 コンタクトレンズ装着液(pH7.0)
1-メントール 0.015(質量%)
アミノエチルスルホン酸 0.5
塩化カリウム 0.08
塩化ナトリウム 0.15
ホウ酸 0.9
ホウ砂 0.2
ソルビン酸カリウム 0.1
エデト酸ナトリウム(日本薬局方) 0.05
低毒性SL含有組成物(実施例1〜10) 0.5
塩酸/水酸化ナトリウム 適量
精製水 残量
合計 100.0質量%。
Formulation Example 5 Contact Lens Wearing Solution (pH 7.0)
1-Menthol 0.015 (mass%)
Aminoethylsulfonic acid 0.5
Potassium chloride 0.08
Sodium chloride 0.15
Boric acid 0.9
Borax 0.2
Potassium sorbate 0.1
Sodium edetate (Japanese Pharmacopoeia) 0.05
Low-toxic SL-containing composition (Examples 1 to 10) 0.5
Hydrochloric acid / sodium hydroxide
Purified water remaining
Total 100.0% by mass.

処方例6 コンタクトレンズ装着液(pH7.5)
1-メントール 0.01(質量%)
塩化カリウム 0.05
塩化ナトリウム 1
リン酸水素ナトリウム 0.15
リン酸二水素ナトリウム 0.01
低毒性SL含有組成物(実施例1〜10) 0.02
20%ポリヘキサメチレンビグアニド液 0.0005
(商品名:コスモシルCQ)
塩酸/水酸化ナトリウム 適量
精製水 残量
合 計 100.0質量%。
Formulation Example 6 Contact Lens Wearing Solution (pH 7.5)
1-Menthol 0.01 (mass%)
Potassium chloride 0.05
Sodium chloride 1
Sodium hydrogen phosphate 0.15
Sodium dihydrogen phosphate 0.01
Low-toxic SL-containing composition (Examples 1 to 10) 0.02
20% polyhexamethylene biguanide solution 0.0005
(Product name: Cosmosil CQ)
Hydrochloric acid / sodium hydroxide
Purified water remaining
Total 100.0% by mass.

処方例7 創傷洗浄剤(pH6.5)
塩化ナトリウム 0.9(質量%)
低毒性SL含有組成物(実施例1〜10) 0.05
塩酸/水酸化ナトリウム 適量
精製水 残量
合 計 100.0質量%。
Formulation Example 7 Wound cleansing agent (pH 6.5)
Sodium chloride 0.9 (mass%)
Low-toxic SL-containing composition (Examples 1 to 10) 0.05
Hydrochloric acid / sodium hydroxide
Purified water remaining
Total 100.0% by mass.

Claims (4)

下記(a)〜(c)、並びに(イ)及び(ロ)の特徴を有する低毒性ソホロリピッド含有組成物を有効成分とする、皮膚保湿剤、肌荒れ改善剤、皮膚保護剤、または毛髪保護剤:
(a)SL産生酵母培養物に由来する酸型ソホロリピッド、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を少なくとも含有し、酸型ソホロリピッド、ラクトン型ソホロリピッド、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量を100質量%とした場合に、それぞれの割合が乾燥重量に換算して下記である;
(1)酸型ソホロリピッド:94〜99.99質量%、
(2)ラクトン型ソホロリピッド:0〜2質量%、
(3)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量:0.01〜0.24質量%
(b)低毒性ソホロリピッド含有組成物に含まれる酸型ソホロリピッド100質量部に対するラクトン型ソホロリピッドの割合、または脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が、それぞれ0〜2.12質量部または0.01〜1質量部
(c)低毒性ソホロリピッド含有組成物に含まれる酸型ソホロリピッド及びラクトン型ソホロリピッドがいずれもアセチル基を有しない、
(イ)HeLa細胞に対する細胞致死濃度(IC50)が10000〜60000ppmである、
(ロ)HeLa細胞に対する細胞致死濃度(IC50)と臨界ミセル濃度(CMC)との比(IC50/CMC)が33〜200である。
Skin moisturizer, rough skin improving agent, skin protective agent, or hair protective agent comprising as an active ingredient a low toxicity sophorolipid-containing composition having the following characteristics (a) to (c) and (b) and (b):
(A) It contains at least acid type sophorolipid, fatty acid and hydroxy fatty acid derived from SL-producing yeast culture, and when the total amount of acid type sophorolipid, lactone type sophorolipid, fatty acid and hydroxy fatty acid is 100% by mass, The proportion is converted to dry weight as follows:
(1) Acid-type sophorolipid: 94-99.99 mass%,
(2) Lactone type sophorolipid: 0 to 2% by mass,
(3) Total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid: 0.01 to 0.24% by mass ,
(B) The ratio of the lactone type sophorolipid to the 100 parts by mass of the acid type sophorolipid contained in the low toxicity sophorolipid-containing composition, or the ratio of the fatty acid and the hydroxy fatty acid (total amount) is 0 to 2.12 parts by mass or 0.01 to 1 part by mass (c) Neither the acid-type sophorolipid nor the lactone-type sophorolipid contained in the low-toxic sophorolipid-containing composition has an acetyl group,
(A) The cell lethal concentration (IC 50 ) for HeLa cells is 10,000 to 60000 ppm.
(B) the ratio of a cell lethal concentration on HeLa cells and (IC 50) and the critical micelle concentration (CMC) (IC 50 / CMC) is 33 to 200.
下記(a)〜(c)、並びに(イ)及び(ロ)の特徴を有する低毒性ソホロリピッド含有組成物を含有することを特徴とする過敏性肌用香粧品;創傷若しくは炎症部に適用される外用医薬部外品、外用医薬品、化粧品または外用医療機器;眼若しくは鼻孔内の粘膜に適用される医薬品、医薬部外品または化粧品:
(a)ソホロリピッド産生酵母培養物に由来する酸型ソホロリピッド、脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸を少なくとも含有し、酸型ソホロリピッド、ラクトン型ソホロリピッド、並びに脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量を100質量%とした場合に、それぞれの割合が乾燥重量に換算して下記である;
(1)酸型ソホロリピッド:94〜99.99質量%、
(2)ラクトン型ソホロリピッド:0〜2質量%、
(3)脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸の総量:0.01〜0.24質量%
(b)低毒性ソホロリピッド含有組成物に含まれる酸型ソホロリピッド100質量部に対するラクトン型ソホロリピッドの割合、または脂肪酸及びヒドロキシ脂肪酸(総量)の割合が、それぞれ0〜2.12質量部または0.01〜1質量部
(c)低毒性ソホロリピッド含有組成物に含まれる酸型ソホロリピッド及びラクトン型ソホロリピッドがいずれもアセチル基を有しない、
(イ)HeLa細胞に対する細胞致死濃度(IC50)が10000〜60000ppmである、
(ロ)HeLa細胞に対する細胞致死濃度(IC50)と臨界ミセル濃度(CMC)との比(IC50/CMC)が33〜200である。」
A hypersensitive skin cosmetic comprising the following (a) to (c) and a low-toxic sophorolipid-containing composition having the characteristics (a) and (b); applied to a wound or an inflamed area Externally used quasi-drugs, externally used pharmaceuticals, cosmetics or external medical devices; pharmaceuticals, quasi-drugs or cosmetics applied to the mucous membrane in the eye or nostril:
(A) When containing at least acid sophorolipid derived from a sophorolipid-producing yeast culture, fatty acid and hydroxy fatty acid, and the total amount of acid sophorolipid, lactone sophorolipid, fatty acid and hydroxy fatty acid is 100% by mass, The proportion is converted to dry weight as follows:
(1) Acid-type sophorolipid: 94-99.99 mass%,
(2) Lactone type sophorolipid: 0 to 2% by mass,
(3) Total amount of fatty acid and hydroxy fatty acid: 0.01 to 0.24% by mass ,
(B) The ratio of lactone type sophorolipid to fatty acid and hydroxy fatty acid (total amount) with respect to 100 parts by mass of acid type sophorolipid contained in the low-toxic sophorolipid-containing composition is 0 to 2.12 parts by mass or 0.01 to 1 part by mass (c) Neither the acid-type sophorolipid nor the lactone-type sophorolipid contained in the low-toxic sophorolipid-containing composition has an acetyl group,
(A) The cell lethal concentration (IC 50 ) for HeLa cells is 10,000 to 60000 ppm.
(B) the ratio of a cell lethal concentration on HeLa cells and (IC 50) and the critical micelle concentration (CMC) (IC 50 / CMC) is 33 to 200. "
上記過敏性肌用香粧品、医薬部外品、医薬品、化粧品または外用医療機器が、身体洗浄料、毛髪洗浄剤、洗眼料、点眼剤、化粧料、粘膜または創傷部洗浄料、及び創傷被覆材よりなる群から選択される少なくとも1つである、請求項2に記載する過敏性肌用香粧品、医薬部外品、医薬品、化粧品または外用医療機器。   The above sensitive skin cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, cosmetics, or external medical devices are body wash, hair cleansers, eye wash, eye drops, cosmetics, mucosa or wound cleansers, and wound dressings. The hypersensitive skin cosmetic, quasi-drug, pharmaceutical, cosmetic or external medical device according to claim 2, which is at least one selected from the group consisting of: 低毒性ソホロリピッド含有組成物を下記の割合で含有するものである、請求項3記載の過敏性肌用香粧品、医薬部外品、医薬品、化粧品または外用医療機器:
身体洗浄料:0.01〜100質量%、
毛髪洗浄剤:0.01〜30質量%、
洗眼料:0.001〜10質量%、
点眼剤:0.001〜10質量%、
化粧料:0.01〜20質量%、
粘膜または創傷部洗浄料:0.001〜30質量%、
創傷被覆材:0.001〜30質量%。
The sensitive skin cosmetic, quasi-drug, pharmaceutical, cosmetic or external medical device according to claim 3, wherein the composition contains a low-toxic sophorolipid-containing composition in the following ratio:
Body wash: 0.01-100% by mass,
Hair cleaning agent: 0.01 to 30% by mass,
Eye wash: 0.001-10% by mass,
Eye drops: 0.001 to 10% by mass,
Cosmetics: 0.01-20% by mass,
Mucosal or wound cleaning material: 0.001 to 30% by mass,
Wound dressing: 0.001 to 30% by mass.
JP2015042794A 2015-03-04 2015-03-04 Low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof Active JP6157524B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2015042794A JP6157524B2 (en) 2015-03-04 2015-03-04 Low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2015042794A JP6157524B2 (en) 2015-03-04 2015-03-04 Low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2016000292A Division JP2016160264A (en) 2016-01-04 2016-01-04 Low-toxicity sophorolipid-containing compositions and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2016160244A JP2016160244A (en) 2016-09-05
JP6157524B2 true JP6157524B2 (en) 2017-07-05

Family

ID=56844251

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2015042794A Active JP6157524B2 (en) 2015-03-04 2015-03-04 Low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP6157524B2 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3984628A4 (en) * 2019-06-11 2023-07-12 Saraya Co., Ltd. Acid type sophorolipid-containing composition which is suppressed in browning

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6764232B2 (en) * 2016-02-01 2020-09-30 アライドカーボンソリューションズ株式会社 Sophorolipid-containing composition having excellent foaming properties
KR102493297B1 (en) 2017-01-31 2023-01-30 사라야 컴퍼니 리미티드 Cell cryopreservation composition and cryopreservation method
US11312928B2 (en) 2017-03-07 2022-04-26 Saraya Co., Ltd. Detergent composition comprising an acidic sophorose lipid and fatty acid salt mixture
WO2018163512A1 (en) * 2017-03-07 2018-09-13 サラヤ株式会社 Detergent composition
EP4353239A1 (en) * 2021-06-08 2024-04-17 Saraya Co., Ltd. Biofilm remover and biofilm removal method
CN114112957B (en) * 2021-11-26 2022-06-21 浙江夸克生物科技有限公司 Adiponectin determination kit and application thereof

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2720941B1 (en) * 1994-06-13 1996-08-23 Inst Francais Du Petrole Use of sophorolipids and cosmetic and dermatological compositions.
FR2735979B1 (en) * 1995-06-28 1997-08-14 Inst Francais Du Petrole USE AS THERAPEUTICALLY ACTIVE SUBSTANCES OR COSMETIC PRODUCTS OF SOPHOROLIPIDS, PARTICULARLY FOR THE TREATMENT OF THE SKIN
JP2002045195A (en) * 2000-08-04 2002-02-12 Saraya Kk Method for carrying out fermentation production of sophorose lipid
JP4714377B2 (en) * 2001-06-29 2011-06-29 サラヤ株式会社 Purification method of sophorose lipid
JP4548827B2 (en) * 2004-09-06 2010-09-22 サラヤ株式会社 Biodegradable liquid detergent composition
JP5394073B2 (en) * 2006-03-09 2014-01-22 ポリテクニック、インスティチュート、オブ、ニューヨーク、ユニバーシティー Anti-herpesvirus properties of various forms of sophorolipids
JP2008247845A (en) * 2007-03-30 2008-10-16 National Institute Of Advanced Industrial & Technology Method for producing acid-type sophorose lipid
JP4304352B2 (en) * 2007-09-04 2009-07-29 独立行政法人産業技術総合研究所 Transdermal absorption control agent containing sophorolipid and method for producing the same
JP5649268B2 (en) * 2008-05-15 2015-01-07 サラヤ株式会社 Adsorption inhibiting composition containing sophorolipid
US8664373B2 (en) * 2008-10-28 2014-03-04 Kaneka Corporation Method for producing sophorose lipid
DE102010014680A1 (en) * 2009-11-18 2011-08-18 Evonik Degussa GmbH, 45128 Cells, nucleic acids, enzymes and their use, as well as methods for producing sophorolipids
US10065982B2 (en) * 2012-03-02 2018-09-04 Saraya Co., Ltd. High-purity acid-form sophorolipid (SL) containing composition and process for preparing same

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3984628A4 (en) * 2019-06-11 2023-07-12 Saraya Co., Ltd. Acid type sophorolipid-containing composition which is suppressed in browning

Also Published As

Publication number Publication date
JP2016160244A (en) 2016-09-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10688031B2 (en) Low-toxicity sophorolipid-containing composition and use therefor
JP6157524B2 (en) Low toxicity sophorolipid-containing composition and use thereof
TWI675671B (en) External dermal composition for anti-ageing and method for producing the same
JP6352560B2 (en) External composition containing ascorbic acid and / or salt thereof
US20060093689A1 (en) Skin cosmetics
WO2017135286A1 (en) Urolithins-containing aqueous solution, dried solid composition thereof and production method therefor, and urolithins stabilizing method
JP6043145B2 (en) Skin external composition for body odor control
JP4548831B2 (en) Hydrogenated retinoid or hydrogenated retinoid derivative and use thereof
WO2012014901A1 (en) Carbonylation inhibitor
JP2016160264A (en) Low-toxicity sophorolipid-containing compositions and uses thereof
JP5494142B2 (en) Topical skin preparation
JP2010018559A (en) Cosmetic composition containing biosurfactant
JP6521211B2 (en) Activator containing cellobiose lipid as an active ingredient
JP2004010505A (en) Cosmetic
TWI400094B (en) Skin external preparations
JP2013224318A (en) Active oxygen scavenger, skin care preparation, composition for oral cavity and food product
JP2002053477A (en) Skin care preparation
CN113966378B (en) Browning inhibited acid-containing sophorolipid composition
JP5313524B2 (en) Anti-inflammatory agent and anti-inflammatory skin external preparation
JP3611553B2 (en) Skin preparation
WO2015147236A1 (en) Composition and cosmetic
JP2002053478A (en) Skin care preparation
JP2017014154A (en) Hyaluronic acid production promoter containing urolithins
WO2006107184A1 (en) A pharmaceutical composition for the treatment of atopic dermatitis containing 4-hydroxy-5-methoxy-4-[2-methyl-3-(3-methyl-2-butenyl)-2-oxiranyl]-1-oxaspiro [2,5]octan-6-one
EP4382090A1 (en) Cosmetical and pharmaceutical compositions containing bacillus strains or fermentation broths thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20150929

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20170329

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20170606

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6157524

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250