JP6155251B2 - 核酸の検出方法、そのキット及びその使用 - Google Patents
核酸の検出方法、そのキット及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6155251B2 JP6155251B2 JP2014501395A JP2014501395A JP6155251B2 JP 6155251 B2 JP6155251 B2 JP 6155251B2 JP 2014501395 A JP2014501395 A JP 2014501395A JP 2014501395 A JP2014501395 A JP 2014501395A JP 6155251 B2 JP6155251 B2 JP 6155251B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- deoxynucleotide
- probe
- triphosphate
- limiting primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
- C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
[1] PCRバッファ溶液中の非対称PCR反応条件下で、一対のプライマー、DNAポリメラーゼ、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸を分析物の核酸と接触させる工程、
接触後の産物をプローブ含有溶液と混合する工程、並びに
色変化の観察によって分析物の核酸が標的核酸を含むかどうかを判定する工程を含む、核酸の検出方法。
[2] 非対称PCR反応条件において、プレ変性温度が90〜98℃、変性温度が90〜98℃、アニーリング温度が40〜60℃、伸長温度が70〜75℃、サイクル数が10より多く、標的核酸を増幅し得る前記一対のプライマーが律速プライマー及び非律速プライマーを含み、律速プライマーと非律速プライマーのモル比が1:5〜240である前記方法。
[3] サイクル数が30〜40であり、律速プライマーと非律速プライマーとのモル比が1:10〜100である前記方法。
[4] PCRバッファ溶液の添加量が接触後の産物溶液の5〜50%であり、PCRバッファ溶液のpHが8.5〜9.5であり、分析物の核酸の添加量が0.001〜1000nMであり、添加されるDNAポリメラーゼが0.01〜0.2U/μLであり、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸の添加量がそれぞれ50〜500μMであり、プライマーの添加量が0.1〜5μMである前記方法。
[5] 分析物の核酸の添加量が接触後の産物溶液量に対して1〜300nMであり、添加されるDNAポリメラーゼが0.01〜0.1U/μLであり、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸の添加量がそれぞれ100〜300μMであり、プライマーの添加量が0.3〜3μMである前記方法。
[6] 無機塩MX(MはNa及び/又はK、XはCl、Br、及びIの1つ以上である)の存在下で、接触後の産物とプローブ含有溶液とを混合し、MXの添加により0.5〜1.5MのMX濃度となる前記方法。
[7] 接触後の産物とプローブ含有溶液との混合が10℃以上の温度で1〜60分である前記方法。
[8] プローブ含有溶液中のプローブ濃度が500〜1500nMである前記方法。
[9] プローブ含有溶液中の前記プローブが複数の複合物を含み、各複合物が1つのナノ粒子及び1つ以上のオリゴヌクレオチドにより形成され、各オリゴヌクレオチドが標的核酸の1つの鎖の一部に少なくとも部分的に相補的である前記方法。
[10] プローブ含有溶液中の前記プローブが2つの複合物を含み、各複合物が1つのナノ粒子及び1つのオリゴヌクレオチドにより形成され、2つのナノ粒子が同一であり、2つのオリゴヌクレオチドが異なり、2つの複合物のモル比が1:0.8〜1.2である前記方法。
[11] 前記オリゴヌクレオチドが10〜50ヌクレオチド長である前記方法。
[12] 前記複合物中のナノ粒子が5〜100nmの直径を有する前記方法。
[13] 前記複合物中のナノ粒子がAuNPである前記方法。
[14] 標的核酸が炭疽菌(Bacillus anthracis)、コレラ菌(Vibrio cholerae)、ペスト菌(Yersinia pestis)、野兎病菌(Bacillus tularense)、チフス菌(Salmonella typhi)、ブルセラ種(Brucella species)、天然痘ウイルス(variola virus)、黄熱ウイルス(yellow fever virus)、東部ウマ脳炎ウイルス(Eastern equine encephalitis virus)、西部ウマ脳炎ウイルス(Western equine encephalitis virus)、発疹熱群リケッチア(typhus group rickettsiae)、ボツリヌス毒素(botulinum toxin)、鳥類病クラミディア(ornithosis Chlamydia)、ボツリヌス毒素(botulinum toxin)、ブドウ球菌腸毒素(staphylococcal enterotoxin)、コクシジオイデス イミティス(Coccidioides immitis)、ヒストプラスマ カプスラーツム(Histoplasma capsulatum)の少なくとも1つのゲノムの少なくとも一部である前記方法。
[15] 標的核酸配列が炭疽菌(Bacillus anthracis)のゲノムDNAであり、律速プライマー配列が配列番号1であり、非律速プライマー配列が配列番号2であり、律速プライマーと非律速プライマーのモル比が1:10〜100であり、プローブが金ナノ粒子とオリゴヌクレオチドにより形成される2つの複合物からなり、第一複合物がAuNPと配列番号3で示されるオリゴヌクレオチドにより形成され、第二複合物がAuNPと配列番号4で示されるオリゴヌクレオチドにより形成され、第一複合物と第二複合物のモル比が1:0.8〜1.2である前記方法。
[16] 検出方法が、裸眼による比色分析により行われる前記方法。
[17] (1)標的核酸を増幅し得る一対のプライマーであって、律速プライマーと非律速プライマーを含み、律速プライマーと非律速プライマーのモル比が非対称PCR反応の要件を満たし、独立して又は混合して保存される一対のプライマー、
(2)前記一対のプライマーから独立して保存されるプローブ含有溶液又はその混合物を含む、前記記載の方法を適用する核酸検出のためのキット。
[18] 律速プライマーと非律速プライマーのモル比が1:5〜240である前記キット。
[19] PCRバッファ溶液、DNAポリメラーゼ、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸の1つ以上をさらに含み、DNAポリメラーゼが独立して保存され、残りが独立して又は1つ以上の成分を含む混合物で保存される前記キット。
[20] 検査及び検疫のための、前記方法又は前記キットの使用。
本調製は、およそ13nmの粒子直径を有するAuNPの合成に関するものである。
マウスβ−アクチンのcDNA配列により、適切なハイブリッド部位を選択し、律速プライマーP1、非律速プライマーP2、後の分子ハイブリダイゼーションのOligo1及びOligo2オリゴヌクレオチドを設計する。配列は以下の通りである:
P1:5’−GATGCCACAGGATTCCATA−3’(配列番号:6);
P2:5’−CTTCTCTTTGATGTCACGCA−3’(配列番号:7);
Oligo1:5’−TGCGTGACATCAAAGAGAAG−3’(配列番号:8);
Oligo2:5’−GATGCCACAGGATTCCATA−3’(配列番号:9);
結合のための、Oligo1及びOligo2の5’末端のC6は、メルカプト修飾される。本発明の実施例に使用されるオリゴヌクレオチドプローブが市販されていることは言及されるべき事である。
本調製例は、プローブを含む液体の調製に関するものである。
非対称PCRを行い、50μLの非対称PCR反応システムを確立し、添加される物質を表1に示す。
非対称PCRを行い、添加される物質を表2に示す。
非対称PCRを行い、添加される物質を表3に示す。
非対称PCRを行い、添加される物質を表4に示す。
従来のPCRを行い、添加される物質を表5に示す。
非対称PCRを行い、添加される物質を表6に示す。
添加されるP1の最終濃度が、それぞれ0.0025μM及び0.006μMであることを除き、実施例1に記載される方法に従って非対称PCR反応を行う。
添加される鋳型の最終濃度が、それぞれ2ng/μL、0.2ng/μL、0.02ng/μL、0.002ng/μL、0.0002ng/μLであることを除いて、実施例1に記載される方法に従って、非対称PCR反応を行う。
実施例1〜5の産物及び比較例1〜3の産物から各5μLを取り、アガロースゲル電気泳動を行い、結果を図2に示す。レーンMは、マーカーであり、下部から上部のバンドは、それぞれ50bp、100bp、150bp、200bp、300bp、400bp及び500bpを表示する。レーン1〜5は、実施例1〜5の産物であり、レーン6は、鋳型なしのネガティブ対照、即ち比較例1の産物であり、レーン7は従来PCRの対照、即ち比較例2の産物であり、レーン8は、律速プライマーとしてP1及び非律速プライマーとしてP2を用いる対照、即ち比較例3の非対称PCR産物である。
実施例3の産物及び比較例1〜3の産物から各5μLを取り、プローブを含む調製例3から10μLを取り、室温(25℃)で2分間4μLの4M NaClと混合し、観察し、写真を撮る。結果を図3に示す。チューブ1〜4はそれぞれ実施例3と比較例1〜3に対応する。産物の吸収ピーク波長及び吸光度を測定する。実施例3及び比較例1〜3の産物の吸収ピーク波長及び吸光度はそれぞれ(575nm,1.52)、(524nm,0.74)、(524nm,0.69)、(524nm,0.79)である。
実施例6〜10の産物及び比較例1の産物から各5μLを取り、プローブを含む調製例3から10μLを取り、室温(25℃)で10分間4μLの4M NaCl溶液と混合し、観察し、写真を撮る。結果を図4に示す。チューブ1〜6は、それぞれ実施例6〜10及び比較例1に対応する。産物の吸収ピーク波長及び吸光度を測定する。実施例6〜10の産物の吸収ピーク波長及び吸光度は(575nm,1.63)、(575nm,1.51)、(575nm,1.39)、(575nm,1.26)、(575nm,0.92)である。
実施例1〜2の産物並びに比較例1及び3の産物から各5μLを取り、プローブを含む調製例3から10μLを取り、室温(25℃)で2分間4μLの4M NaClと混合し、観察し、写真を撮る。結果を図5に示す。チューブ1〜3は、それぞれ実施例1並びに比較例1及び3に対応する。産物の吸収ピーク波長及び吸光度を測定する。実施例1〜2及び4〜5の産物の吸収ピーク波長及び吸光度は、(575nm,1.59)、(575nm,1.56)、(575nm,1.43)及び(575nm,1.40)である。
炭疽菌のゲノムDNA配列断片により、適切なハイブリダイゼーション部位を選択し、律速プライマーP3、非律速プライマーP4、後の分子ハイブリダイゼーションのためのOligo3及びOligo4オリゴヌクレオチドを設計する。配列は以下の通りである:
P3:5’−CGTAACAAGAGGAAAGAGCA−3’(配列番号:1);
P4:5’−CTGCTACTATTGTAGGAGGA−3’(配列番号:2);
Oligo3:5’−TCCTCCATCTAGGACAGCT−3’(配列番号:3);
Oligo4:5’−AATTCGATTGCGATAGGAGT−3’(配列番号:4)
プローブ3及びプローブ4を含む溶液を、調製例3に記載の方法に従って調製する。プローブ3及びプローブ4は、それぞれOligo3及びOligo4の複合物である。プローブを含む液体量に対して、上記プローブ3及びプローブ4の濃度は同様に1.9μMである。
非対称PCRを行い、50μLの非対称PCR反応システムを確立し、添加される物質を表7に示す。
非対称PCRを行い、50μLの非対称PCR反応システムを確立し、添加される物質を表8に示す。
実施例11〜15の産物及び比較例1の産物から各5μLを取り、プローブを含む調製例5から10μLを取り、室温(25℃)で2分間4μLの4M NaClと混合し、観察し、写真を撮る。結果を図6に示す。チューブ1及び2はそれぞれ、実施例11及び比較例1に対応する。産物の吸収ピーク波長及び吸光度を測定する。実施例11〜15の産物の吸収ピーク波長及び吸光度は、(537nm,2.97)、(537nm,3.27)、(537nm,2.91)、(537nm,2.79)及び(537nm,2.53)である。
炭疽菌のゲノムDNA配列断片により、適切なハイブリダイゼーション部位を選択し、非律速プライマーP5、律速プライマーP6、後の分子ハイブリダイゼーションのためのOligo5及びOligo6オリゴヌクレオチドを設計する。配列は以下の通りである:
P5:5’−TGGTGCTCTTTCCTCTTG−3’(配列番号:10);
P6:5’−GTCCGAATGCGATTGATT−3’(配列番号:11);
Oligo5:5’−GGAAGGCGCTTTATGACCAA−3’(配列番号:12);
Oligo6:5’−AATTAAAGAGCGCCTTTGGA−3’(配列番号:13).
プローブ5及びプローブ6を含む溶液を、調製例3に記載の方法に従って調製する。プローブ5及びプローブ6は、それぞれOligo5及びOligo6の複合物である。プローブを含有する液体量に対して、上記プローブ3及びプローブ4の濃度は、同様に1.2μMである。
非対称PCRを行い、50μLの非対称PCRシステムを確立し、添加される物質を表9に示す。
非対称PCRを行い、添加される物質を表10に示す。
実施例16〜20の産物から各5μLを取り、プローブを含む調製例7から10μLを取り、室温(25℃)で2分間4μLの4M NaClと混合する。産物の吸収ピーク波長及び吸光度を測定する。実施例16〜20の産物の吸収ピーク波長及び吸光度は、(537nm,2.92)、(537nm,3.11)、(537nm,2.83)、(537nm,2.66)及び(537nm,2.51)である。
コレラ菌CTX−A遺伝子配列により、適切なハイブリダイゼーション部位を選択し、非律速プライマーP7、律速プライマーP8、後の分子ハイブリダイゼーションのためのOligo7及びOligo8オリゴヌクレオチドを設計する。配列は以下の通りである:
P7:5’−TCAAACTAATTGAGGTGGAAACATATCC−3’(配列番号:14);
P8:5’−ATGCCAAGAGGACAGAGTGAGT−3’(配列番号:15);
Oligo7:5’−GGAACTCAGACGGGATTTGT−3’(配列番号:16);
Oligo8:5’−CCTTTATGATCATGCAAGA−3’(配列番号:17).
プローブ7及びプローブ8を含む溶液を、調製例3に記載の方法に従って調製する。プローブ7及びプローブ8は、それぞれOligo7及びOligo8の複合物である。プローブを含有する液体量に対して、上記プローブ7及びプローブ8の濃度は、同様に1μMである。
非対称PCRを行い、添加される物質を表11に示す。
非対称PCRを行い、添加される物質を表12に示す。
実施例21〜25の産物から各5μLを取り、プローブを含む調製例7から10μLを取り、室温(25℃)で2分間4μLの4M NaClと混合し、観察し、写真を撮る。結果を図7に示す。チューブ1及び2は、それぞれ実施例21及び比較例1に対応する。産物の吸収ピーク波長及び吸光度を測定する。実施例21〜25の産物の吸収ピーク波長及び吸光度は(537nm,2.77)、(537nm,2.91)、(537nm,2.76)、(537nm,2.33)及び(537nm,2.18)である。
Claims (6)
- PCRバッファ溶液中の非対称PCR反応条件下で、一対のプライマー、DNAポリメラーゼ、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸を分析物の核酸と接触させる工程、
接触後の産物をプローブ含有溶液と混合する工程、並びに
色変化の観察によって分析物の核酸が標的核酸を含むかどうかを判定する工程を含み、検出方法が裸眼による比色分析により行われ、
標的核酸が炭疽菌(Bacillus anthracis)のゲノムDNAの少なくとも一部であり、
標的核酸を増幅し得る前記一対のプライマーが律速プライマー及び非律速プライマーを含み、律速プライマー配列が配列番号1であり、非律速プライマー配列が配列番号2であり、律速プライマーと非律速プライマーのモル比が1:10〜100であり、
プローブ含有溶液中のプローブが金ナノ粒子とオリゴヌクレオチドにより形成される2つの複合物からなり、第一複合物がAuNPと配列番号3で示されるオリゴヌクレオチドにより形成されるものであり、第二複合物がAuNPと配列番号4により示されるオリゴヌクレオチドにより形成されるものであり、第一複合物と第二複合物のモル比が1:0.8〜1.2であり、複合物中の2つのナノ粒子が同一であり、ナノ粒子が5〜100nmの直径を有し、
PCRバッファ溶液の添加量が接触後の産物溶液の5〜50%であり、PCRバッファ溶液のpHが8.5〜9.5であり、分析物の核酸の添加量が0.001〜1000nMであり、添加されるDNAポリメラーゼが0.01〜0.2U/μLであり、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸の添加量がそれぞれ50〜500μMであり、プライマーの添加量が0.1〜5μMであり、
プローブ含有溶液中のプローブ濃度が500〜1500nMであり、
接触後の産物とプローブ含有溶液の混合が22〜25℃で3〜10分間であり、
無機塩MX(MはNa及び/又はK、XはCl、Br、及びIの1つ以上である)の存在下で、接触後の産物とプローブ含有溶液とを混合し、MX濃度が0.5〜1.5Mである核酸の検出方法。 - 非対称PCR反応条件において、プレ変性温度が90〜98℃、変性温度が90〜98℃、アニーリング温度が40〜60℃、伸長温度が70〜75℃、サイクル数が10より多い請求項1に記載の方法。
- サイクル数が30〜40である請求項2に記載の方法。
- 分析物の核酸の添加量が接触後の産物溶液量に対して1〜300nMであり、添加されるDNAポリメラーゼが0.01〜0.1U/μLであり、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸の添加量がそれぞれ100〜300μMであり、プライマーの添加量が0.3〜3μMである請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- (1)標的核酸を増幅し得る一対のプライマーであって、律速プライマーと非律速プライマーを含み、律速プライマーと非律速プライマーのモル比が非対称PCR反応の要件を満たし、独立して又は混合して保存される一対のプライマー、
(2)前記一対のプライマーから独立して保存されるプローブ含有溶液又はその混合物を含み、
標的核酸が炭疽菌(Bacillus anthracis)のゲノムDNAの少なくとも一部であり、
前記律速プライマー配列が配列番号1であり、前記非律速プライマー配列が配列番号2であり、律速プライマーと非律速プライマーのモル比が1:10〜100であり、
プローブ含有溶液中のプローブが金ナノ粒子とオリゴヌクレオチドにより形成される2つの複合物からなり、第一複合物がAuNPと配列番号3で示されるオリゴヌクレオチドにより形成されるものであり、第二複合物がAuNPと配列番号4により示されるオリゴヌクレオチドにより形成されるものであり、第一複合物と第二複合物のモル比が1:0.8〜1.2であり、複合物中の2つのナノ粒子が同一であり、ナノ粒子が5〜100nmの直径を有する、請求項1〜4のいずれかに記載の方法を適用する核酸検出のためのキット。 - PCRバッファ溶液、DNAポリメラーゼ、デオキシヌクレオチドアデニン三リン酸、デオキシヌクレオチドグアニン三リン酸、デオキシヌクレオチドシトシン三リン酸、及びデオキシヌクレオチドチミジン三リン酸の1つ以上をさらに含み、DNAポリメラーゼが独立して保存され、残りが独立して又は1つ以上の成分を含む混合物で保存される請求項5に記載のキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201110078665.0 | 2011-03-30 | ||
CN201110078665.0A CN102719520B (zh) | 2011-03-30 | 2011-03-30 | 一种核酸的检测方法和一种试剂盒及应用 |
PCT/CN2011/072682 WO2012129821A1 (zh) | 2011-03-30 | 2011-04-12 | 一种核酸的检测方法和一种试剂盒及应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2014515601A JP2014515601A (ja) | 2014-07-03 |
JP6155251B2 true JP6155251B2 (ja) | 2017-06-28 |
Family
ID=46929360
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2014501395A Active JP6155251B2 (ja) | 2011-03-30 | 2011-04-12 | 核酸の検出方法、そのキット及びその使用 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9404153B2 (ja) |
EP (1) | EP2692869A4 (ja) |
JP (1) | JP6155251B2 (ja) |
CN (1) | CN102719520B (ja) |
WO (1) | WO2012129821A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2533983A (en) * | 2015-06-04 | 2016-07-13 | Ford Global Tech Llc | Parking assist method and system |
WO2017010854A1 (ko) * | 2015-07-13 | 2017-01-19 | 국립암센터 | 나노입자를 이용한 핵산 검출용 키트 및 핵산 검출 방법 |
CN111315863A (zh) * | 2017-07-26 | 2020-06-19 | 穆罕默德·穆罕默德·阿德尔·艾尔·索格里 | 基于浓度的dna测序机 |
CN109470851A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-03-15 | 遵义医学院附属医院 | 一种快速、灵敏和现场检测PML/RARα融合基因的检测方法 |
CN110736833B (zh) * | 2019-11-13 | 2022-10-14 | 浙江工商大学 | 基于咖啡环效应的甲壳类精氨酸激酶检测试剂盒及其检测方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6767702B2 (en) * | 1996-07-29 | 2004-07-27 | Nanosphere, Inc. | Nanoparticles having oligonucleotides attached thereto and uses therefor |
WO2003048769A1 (en) | 2001-11-30 | 2003-06-12 | Nanosphere, Inc. | Real-time monitoring of pcr amplification using nanoparticle probes |
CN1280422C (zh) | 2004-08-26 | 2006-10-18 | 北京博奥生物芯片有限责任公司 | 一种不对称pcr扩增方法及其应用 |
CN101768633B (zh) | 2008-12-31 | 2012-02-08 | 蔡剑平 | O139群霍乱弧菌检测用组合物、试剂盒及其在食品中的检测方法 |
-
2011
- 2011-03-30 CN CN201110078665.0A patent/CN102719520B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-04-12 US US14/007,201 patent/US9404153B2/en active Active
- 2011-04-12 JP JP2014501395A patent/JP6155251B2/ja active Active
- 2011-04-12 EP EP11862434.5A patent/EP2692869A4/en not_active Withdrawn
- 2011-04-12 WO PCT/CN2011/072682 patent/WO2012129821A1/zh active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20140017671A1 (en) | 2014-01-16 |
US9404153B2 (en) | 2016-08-02 |
EP2692869A4 (en) | 2014-12-10 |
EP2692869A1 (en) | 2014-02-05 |
CN102719520A (zh) | 2012-10-10 |
JP2014515601A (ja) | 2014-07-03 |
WO2012129821A1 (zh) | 2012-10-04 |
CN102719520B (zh) | 2015-03-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Luo et al. | Fluorescent aptasensor for antibiotic detection using magnetic bead composites coated with gold nanoparticles and a nicking enzyme | |
Chen et al. | DNA-mediated inhibition of peroxidase-like activities on platinum nanoparticles for simple and rapid colorimetric detection of nucleic acids | |
US9605304B2 (en) | Ultra-stable oligonucleotide-gold and-silver nanoparticle conjugates and method of their preparation | |
Zhu et al. | Application of nanomaterials in the bioanalytical detection of disease-related genes | |
Larguinho et al. | Gold and silver nanoparticles for clinical diagnostics—from genomics to proteomics | |
Yao et al. | Specific and simultaneous detection of micro RNA 21 and let-7a by rolling circle amplification combined with lateral flow strip | |
Yang et al. | Copy number variation analysis based on gold magnetic nanoparticles and fluorescence multiplex ligation-dependent probe amplification | |
Hu et al. | Nucleic acid-functionalized nanomaterials for bioimaging applications | |
JP6155251B2 (ja) | 核酸の検出方法、そのキット及びその使用 | |
US11299771B2 (en) | Enhanced DNA sensing via catalytic aggregation of gold nanoparticles by DNA hybridization chain reaction | |
Liang et al. | Ultrasensitive colorimetric carcinoembryonic antigen biosensor based on hyperbranched rolling circle amplification | |
Du et al. | Multiplexed aptasensing of food contaminants by using terminal deoxynucleotidyl transferase-produced primer-triggered rolling circle amplification: application to the colorimetric determination of enrofloxacin, lead (II), Escherichia coli O157: H7 and tropomyosin | |
Chen et al. | Sensitive colorimetric detection of protein by gold nanoparticles and rolling circle amplification | |
Yin et al. | Ligation Chain Reaction based gold nanoparticle assembly for ultrasensitive DNA detection | |
JP2007516426A (ja) | オリゴヌクレオチドの検出のための比色法および蛍光法 | |
Zhu et al. | Nano-magnetic primer based electrochemiluminescence-polymerase chain reaction (NMPE-PCR) assay | |
Kuang et al. | Rapid DNA detection by interface PCR on nanoparticles | |
Guven et al. | A rapid method for detection of genetically modified organisms based on magnetic separation and surface-enhanced Raman scattering | |
Yang et al. | A novel fluorescent detection for PDGF-BB based on dsDNA-templated copper nanoparticles | |
Khalil et al. | DNA/Nano based advanced genetic detection tools for authentication of species: Strategies, prospects and limitations | |
Yao et al. | An aptamer-based chemiluminescence method for ultrasensitive detection of platelet-derived growth factor by cascade amplification combining rolling circle amplification with hydroxylamine-enlarged gold nanoparticles | |
Tian et al. | A novel quantification platform for point-of-care testing of circulating MicroRNAs based on allosteric spherical nanoprobe | |
Zhao et al. | Fluorometric determination of the p53 cancer gene using strand displacement amplification on gold nanoparticles | |
Chen et al. | Detection of single-nucleotide polymorphisms using gold nanoparticles and single-strand-specific nucleases | |
Kaewphinit et al. | Colorimetric DNA based biosensor combined with loop-mediated isothermal amplification for detection of mycobacterium tuberculosis by using gold nanoprobe aggregation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150210 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150508 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150630 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151030 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160209 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160301 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160301 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20160324 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20160520 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170321 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170605 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6155251 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |