JP6151981B2 - 関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測方法 - Google Patents
関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6151981B2 JP6151981B2 JP2013127092A JP2013127092A JP6151981B2 JP 6151981 B2 JP6151981 B2 JP 6151981B2 JP 2013127092 A JP2013127092 A JP 2013127092A JP 2013127092 A JP2013127092 A JP 2013127092A JP 6151981 B2 JP6151981 B2 JP 6151981B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- inflammatory
- rheumatoid arthritis
- patients
- biologic
- biological
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 title claims description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 30
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 title claims description 27
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 75
- 108020004201 indoleamine 2,3-dioxygenase Proteins 0.000 claims description 72
- 102000006639 indoleamine 2,3-dioxygenase Human genes 0.000 claims description 72
- YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N (R)-Kynurenine Natural products OC(=O)C(N)CC(=O)C1=CC=CC=C1N YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- YGPSJZOEDVAXAB-QMMMGPOBSA-N L-kynurenine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(=O)C1=CC=CC=C1N YGPSJZOEDVAXAB-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 51
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 46
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 46
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 41
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 32
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 30
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 25
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 25
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 25
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 25
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 25
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 claims description 25
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 17
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 16
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 15
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 15
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 claims description 14
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 11
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 11
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims description 10
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 claims description 8
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 5
- 229940046728 tumor necrosis factor alpha inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 239000002451 tumor necrosis factor inhibitor Substances 0.000 claims description 4
- 229940124790 IL-6 inhibitor Drugs 0.000 claims description 3
- 101000935814 Salmonella typhimurium (strain LT2 / SGSC1412 / ATCC 700720) Periplasmic beta-glucosidase Proteins 0.000 claims description 2
- 229940123155 T cell inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 44
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 39
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 20
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 20
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 18
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 17
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 16
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 16
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 5
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 5
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 5
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 4
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 4
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 3
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 229960001743 golimumab Drugs 0.000 description 3
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 3
- 229960003989 tocilizumab Drugs 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000607662 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Abortusequi Species 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- IHWDSEPNZDYMNF-UHFFFAOYSA-N 1H-indol-2-amine Chemical compound C1=CC=C2NC(N)=CC2=C1 IHWDSEPNZDYMNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016680 Dioxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010028143 Dioxygenases Proteins 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039989 IL-17 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069193 IL-17 family Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100033096 Interleukin-17D Human genes 0.000 description 1
- 108010066979 Interleukin-27 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 125000002707 L-tryptophyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 229960003697 abatacept Drugs 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000003435 antirheumatic agent Substances 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011337 individualized treatment Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000008407 joint function Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000010223 real-time analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000013077 scoring method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001258 synovial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する方法に関する。
関節リウマチ（ＲＡ）は関節滑膜を炎症の主座とする慢性の炎症性疾患であり、関節炎が進行すると、関節機能の低下、日常生活動作（ＡＤＬ）の障害、クオリティ・オブ・ライフ（ＱＯＬ）の低下が起こる。関節リウマチの治療は、メトトレキサートをはじめとする抗リウマチ薬に加え、２００３年以降から承認され始めた、様々な種類の生物学的製剤の導入により、早期からの寛解導入、関節破壊の進行阻止が可能になってきた。しかしながら、生物学的製剤は、免疫抗体等を製剤化した薬であるために薬価が非常に高い一方で、投与された患者の１〜３割で薬効が見られないという問題がある。また、副作用として、感染症、結核、発癌リスクの上昇等が報告されている。さらに、関節破壊が進行した時点で生物学的製剤を投与しても、不可逆的な関節破壊によるＡＤＬ低下は改善されない。以上のように、ＱＯＬの維持と医療費の問題の面から、早期に適切な生物学的製剤を選択し、投与することが重要であるため、生物学的製剤選択においては個別化治療が強く求められている。
これに対し、関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測するための種々の方法が提案されている（例えば、特許文献１、２）。しかしながら、簡便に生物学的製剤の有効性を予測し得る方法のさらなる開発が求められている。
本発明は上記従来の課題を解決するためになされたものであり、その目的とするところは、簡便に生物学的製剤の有効性を予測し得る方法を提供することにある。
本発明によれば、関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する方法が提供される。該方法は、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性を指標にして炎症性刺激物質に対する反応性を評価すること、関節リウマチ患者から単離された末梢血を生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性を指標にして生物学的製剤に対する反応性を評価すること、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下であって、生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性を指標にして生物学的製剤による炎症抑制性を評価すること、および炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性および生物学的製剤による炎症抑制性の総合評価に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測を行うこと、を含む。
好ましい実施形態においては、上記関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測が、炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性、および生物学的製剤による炎症抑制性のそれぞれについて、応答感度が高いほど高スコアとなるようにスコア化し、それらの合計スコアが高いほど生物学的製剤が有効であると予測することによって行われる。
好ましい実施形態においては、上記炎症性刺激物質が、リポ多糖である。
好ましい実施形態においては、上記インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性が、培養液中のＬ−キヌレニン濃度に基づいて決定される。
好ましい実施形態においては、本発明の方法は、関節リウマチ患者から単離された末梢血由来の血球におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼおよびサイトカインの発現量を測定すること、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼおよびサイトカインの発現量比に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測すること、をさらに含む。
好ましい実施形態においては、上記サイトカインが、ＩＬ−１７である。
好ましい実施形態においては、炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−キヌレニン濃度に対する炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−キヌレニン濃度の比率が５００％未満である関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する。
好ましい実施形態においては、上記生物学的製剤が、ＴＮＦ阻害剤、ＩＬ−６阻害剤またはＴ細胞阻害剤である。
好ましい実施形態においては、上記スコア化が、後述する表１〜表３に基づいて行われ、その合計スコアが６以上の場合に生物学的製剤が有効であると予測する。
好ましい実施形態においては、上記関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測が、炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性、および生物学的製剤による炎症抑制性のそれぞれについて、応答感度が高いほど高スコアとなるようにスコア化し、それらの合計スコアが高いほど生物学的製剤が有効であると予測することによって行われる。
好ましい実施形態においては、上記炎症性刺激物質が、リポ多糖である。
好ましい実施形態においては、上記インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性が、培養液中のＬ−キヌレニン濃度に基づいて決定される。
好ましい実施形態においては、本発明の方法は、関節リウマチ患者から単離された末梢血由来の血球におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼおよびサイトカインの発現量を測定すること、およびインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼおよびサイトカインの発現量比に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測すること、をさらに含む。
好ましい実施形態においては、上記サイトカインが、ＩＬ−１７である。
好ましい実施形態においては、炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−キヌレニン濃度に対する炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−キヌレニン濃度の比率が５００％未満である関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する。
好ましい実施形態においては、上記生物学的製剤が、ＴＮＦ阻害剤、ＩＬ−６阻害剤またはＴ細胞阻害剤である。
好ましい実施形態においては、上記スコア化が、後述する表１〜表３に基づいて行われ、その合計スコアが６以上の場合に生物学的製剤が有効であると予測する。
本発明によれば、全血培養という簡便な手段を用いて生物学的製剤の有効性を投与前に予測することができる。
本発明の関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する方法は、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ１）活性を指標にして炎症性刺激物質に対する反応性を評価すること［工程Ａ］；関節リウマチ患者から単離された末梢血を生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして生物学的製剤に対する反応性を評価すること［工程Ｂ］；関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下であって、生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして生物学的製剤による炎症抑制性を評価すること［工程Ｃ］；および炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性および生物学的製剤による炎症抑制性の総合評価に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測を行うこと［工程Ｄ］を含む。本発明の方法によれば、全血培養という簡便な操作によって生物学的製剤の有効性を予測することができる。また、Ｌ−トリプトファン（Ｌ−ＴＲＰ）代謝の第一段階を触媒する律速酵素であり、Ｌ−ＴＲＰをＬ−キヌレニン（Ｌ−ＫＹＮ）へと代謝させるＩＤＯ１は、インターロイキン６（ＩＬ−６）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）等の種々のサイトカイン類によって活性化され、それらの発現動向を反映し得るので、ＩＤＯ１活性を指標とすることにより、ＴＮＦ阻害剤だけでなく、ＩＬ−６阻害剤、Ｔ細胞阻害剤等の種々の生物学的製剤についても薬効を予測することが可能である。
好ましい実施形態においては、本発明の予測方法は、さらに、関節リウマチ患者から単離された末梢血由来の血球におけるＩＤＯ１およびサイトカインの発現量を測定すること［工程Ｅ］；およびＩＤＯ１およびサイトカインの発現量比に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測すること［工程Ｆ］を含む。以下、各工程について詳細に説明する。
［工程Ａ］
工程Ａにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして炎症性刺激物質に対する反応性を評価する。具体的には、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性に対する炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性の比率に基づいて炎症性刺激物質に対する反応性を評価する。
工程Ａにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして炎症性刺激物質に対する反応性を評価する。具体的には、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性に対する炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性の比率に基づいて炎症性刺激物質に対する反応性を評価する。
ＩＤＯ１活性は、培養細胞中の酵素活性の測定によって決定することができるが、操作の簡便性の観点から、培養液中のＬ−ＴＲＰ濃度および／またはＬ−ＫＹＮ濃度に基づいてＩＤＯ１活性を決定してもよい。好ましくはＬ−ＫＹＮ濃度に基づいてＩＤＯ１活性が決定される。ＩＤＯ１活性の変動を好適に反映し得るからである。具体的には、培養中におけるＬ−ＴＲＰの消費量が少なければＩＤＯ１活性が低いと判断でき、また、Ｌ−ＫＹＮの産生量が多ければＩＤＯ１活性が高いと判断できる。したがって、炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度に対して炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度が高い場合、炎症性刺激物質に反応してＩＤＯ１活性が増大したことがわかり、その際のＬ−ＫＹＮ濃度の増大率が大きいほど炎症性刺激物質に対する反応性が高い（すなわち、応答感度が高い）と評価される（図１（ａ））。同様に、炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＴＲＰ濃度に対して炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＴＲＰ濃度が低い場合、炎症性刺激物質に反応してＩＤＯ１活性が増大したことがわかり、その際のＬ−ＴＲＰ濃度の減少率が大きいほど炎症性刺激物質に対する反応性が高いと評価される（図１（ｂ））。なお、Ｌ−ＴＲＰ濃度およびＬ−ＫＹＮ濃度は、例えば高速液体クロマトグラフィーを用いて測定することができる。
上記末梢血の全血培養は、末梢血を任意の適切な培地と混合して培養することによって行われる。培養条件は、当業者によって適切に設定され得る。培養条件は、例えば３７℃、５％ＣＯ２環境下とされ、２４時間〜４８時間培養された培養液におけるＩＤＯ１活性を指標とすることができる。
炎症性刺激物質の存在下で全血培養を行う場合、炎症性刺激物質は培養開始当初から添加されてもよく、培養開始から数時間後、例えば２〜５時間後に添加されてもよい。炎症性刺激物質を添加後、２４時間〜４８時間培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標とすることが好ましい。炎症性刺激物質に対する反応性をより正確に評価できるからである。
炎症性刺激物質としては、ＩＤＯ１を活性化し得る任意の適切な物質が用いられ得る。例えば、リポ多糖（ＬＰＳ）、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）等が挙げられる。なかでも、ＬＰＳが好ましく用いられ得る。ＬＰＳとしては、ヒト等の哺乳動物の細胞に作用してＩＤＯ１を活性化できるものであればよく、由来する細菌の種類に制限はない。
培養液における炎症性刺激物質の濃度（終濃度）は、種類等に応じて適切に設定され得る。例えば、ＬＰＳの培養液における濃度（終濃度）は、好ましくは０．５ｎｇ／ｍｌ〜２００ｎｇ／ｍｌ、より好ましくは１ｎｇ／ｍｌ〜５０ｎｇ／ｍｌである。
［工程Ｂ］
工程Ｂにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血を生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして生物学的製剤に対する反応性を評価する。具体的には、関節リウマチ患者から単離された末梢血を生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性に対する生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性の比率に基づいて生物学的製剤に対する反応性を評価する。
工程Ｂにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血を生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして生物学的製剤に対する反応性を評価する。具体的には、関節リウマチ患者から単離された末梢血を生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性に対する生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性の比率に基づいて生物学的製剤に対する反応性を評価する。
ＩＤＯ１活性は、工程Ａと同様に決定され得る。したがって、生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度に対する生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度として求められるＬ−ＫＹＮ濃度の増大率が小さいほど生物学的製剤に対する反応性が高い（すなわち、応答感度が高い）と評価される（図２（ａ））。同様に、生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＴＲＰ濃度に対する生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＴＲＰ濃度として求められるＬ−ＴＲＰ濃度の減少率が小さいほど生物学的製剤に対する反応性が高いと評価される（図２（ｂ））。
工程Ｂにおける末梢血の全血培養は、工程Ａと同様に行うことができる。
生物学的製剤の存在下で全血培養を行う場合、生物学的製剤は培養開始当初から添加されてもよく、培養開始から数時間後、例えば２〜５時間後に添加されてもよい。好ましくは生物学的製剤を添加後、２４時間〜４８時間培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標とする。生物学的製剤に対する反応性をより正確に評価できるからである。
生物学的製剤としては、特定のサイトカインを対象とするものに限定されず、例えば、ゴリムマブ、アダリムマブ、インフリキシマブ等のＴＮＦ阻害剤、トシリズマブ等のＩＬ−６阻害剤、アバタセプト等のＴ細胞阻害剤が用いられ得る。
培養液における生物学的製剤の濃度（終濃度）は、好ましくは１μｇ／ｍｌ〜１００μｇ／ｍｌ、より好ましくは５μｇ／ｍｌ〜５０μｇ／ｍｌである。
［工程Ｃ］
工程Ｃにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下であって、生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして生物学的製剤による炎症抑制性を評価する。具体的には、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下であって生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性に対する炎症性刺激物質および生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性の比率に基づいて生物学的製剤による炎症抑制性を評価する。
工程Ｃにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下であって、生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標にして生物学的製剤による炎症抑制性を評価する。具体的には、関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下であって生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性に対する炎症性刺激物質および生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＩＤＯ１活性の比率に基づいて生物学的製剤による炎症抑制性を評価する。
ＩＤＯ１活性は、工程Ａと同様に決定され得る。したがって、炎症性刺激物質の存在下であって生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度に対する炎症性刺激物質および生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度として求められるＬ−ＫＹＮ濃度の増大率が小さいほど炎症抑制性が高い（すなわち、応答感度が高い）と評価される（図３（ａ））。同様に、炎症性刺激物質の存在下であって生物学的製剤の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＴＲＰ濃度に対する炎症性刺激物質および生物学的製剤の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＴＲＰ濃度として求められるＬ−ＴＲＰ濃度の減少率が小さいほど炎症抑制性が高いと評価される（図３（ｂ））。
工程Ｃにおける末梢血の全血培養は、炎症性刺激物質の存在下で行われる。培養条件は工程Ａと同様であり、炎症性刺激物質は培養開始当初から添加されてもよく、培養開始から数時間後、例えば２〜５時間後に添加されてもよい。炎症性刺激物質の種類および濃度としては、工程Ａに関して記載したとおりである。
炎症性刺激物質および生物学的製剤の存在下で全血培養を行う場合、生物学的製剤は炎症性刺激物質の添加と同時に添加されてもよいが、好ましくは炎症性刺激物質の添加から数時間後、例えば２〜５時間後に添加される。また、生物学的製剤を添加後、２０時間〜４８時間培養した培養液におけるＩＤＯ１活性を指標とすることが好ましい。生物学的製剤による炎症抑制性をより正確に評価できるからである。生物学的製剤の種類および濃度としては、工程Ｂに関して記載したとおりである。
［工程Ｄ］
工程Ｄにおいては、工程Ａで評価した炎症性刺激物質に対する反応性、工程Ｂで評価した生物学的製剤に対する反応性および工程Ｃで評価した生物学的製剤による炎症抑制性の総合評価に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測を行う。
工程Ｄにおいては、工程Ａで評価した炎症性刺激物質に対する反応性、工程Ｂで評価した生物学的製剤に対する反応性および工程Ｃで評価した生物学的製剤による炎症抑制性の総合評価に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測を行う。
１つの実施形態においては、これらの反応性および炎症抑制性が高いほど末梢血の単離源である関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性が高いと予測することができる。具体的には、炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性、および生物学的製剤による炎症抑制性の各々に関して、その応答感度が高いほど高スコアとなるようにスコア化し、それらの合計スコアが高いほど生物学的製剤が有効であると予測することができる。スコア化の１つの方法としては、最高スコアを付与する応答感度の基準値と最低スコアを付与する応答感度の基準値（例えば、以下の表１〜表３の基準値）とを決定し、必要に応じて、それらの間を分割して、各応答感度レベルに連続的にスコアを付与する方法が挙げられる。このような方法で各評価に関して４区分以上にスコア化した場合（すなわち、最高スコアと最低スコアとの間を２以上に分割してスコア化した場合）、合計スコア（その最大値は１２以上となる）が該最大値の４０％以上、好ましくは５０％以上であれば生物学的製剤が有効であると予測することができる。当該方法による炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性、および生物学的製剤による炎症抑制性のスコア化の一例をそれぞれ、表１、表２および表３に示す。表１、表２および表３においてはそれぞれ、Ｌ−ＫＹＮ増大率が３００％以上９００％未満の範囲、９０％以上１０５％未満の範囲および７０％以上１００％未満の範囲を３つに均等分割し、その上下の範囲を加えて５区分のスコア化を行っている。表１〜３に例示するスコア化の場合、合計スコアが、例えば６以上（すなわち、合計スコアの最大値（１５）の４０％以上）、好ましくは７以上、より好ましくは８以上であれば、生物学的製剤が有効であると予測することができる。
なお、表１〜表３に示すスコア化は一例であり、炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性、および生物学的製剤による炎症抑制性のそれぞれに関して、用いる炎症性刺激物質および／または生物学的薬剤の種類、濃度等に応じて、より多くの区分に分けてスコア化してもよく、少ない区分に分けてスコア化してもよい。また、スコア化における区分の数は、３つの評価の各々で同じであってもよく、異なっていてもよい。
別の実施形態においては、炎症性刺激物質に対する反応性が低い一方で、生物学的製剤に対する反応性および生物学的製剤による炎症抑制性が高ければ末梢血の単離源である関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性が高いと予測することができる。具体的には、炎症性刺激物質に対する反応性が低い患者を選別する一方で、当該患者の生物学的製剤に対する反応性および生物学的製剤による炎症抑制性に関して、その応答感度が高いほど高スコアとなるようにスコア化し、これらの合計スコアが高いほど生物学的製剤が有効であると予測することができる。これらのスコア化の方法としては、上述の実施形態と同様の方法が用いられ得る。当該方法で各評価に関して４区分以上にスコア化した場合、合計スコア（その最大値は８以上となる）が該最大値の例えば３０％以上、好ましくは４０％以上、さらに好ましくは５０％以上であれば生物学的製剤が有効であると予測することができる。
上記炎症性刺激物質に対する反応性が低い関節リウマチ患者としては、炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度に対する炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度の増大率が例えば５００％未満、また例えば０〜３００％未満である関節リウマチ患者等が挙げられる。
［工程Ｅ］
工程Ｅにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血由来の血球におけるＩＤＯ１およびサイトカインの発現量を測定する。抹消血由来の血球としては、培養を経たものであってもよく、経ていないものであってもよい。好ましくは、炎症性刺激物質による処置および生物学的製剤による処置のいずれもがなされていない血球が用いられる。また、ＩＤＯ１およびサイトカインの発現量は、該血球におけるｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法等を用いて測定することによって決定できる。
工程Ｅにおいては、関節リウマチ患者から単離された末梢血由来の血球におけるＩＤＯ１およびサイトカインの発現量を測定する。抹消血由来の血球としては、培養を経たものであってもよく、経ていないものであってもよい。好ましくは、炎症性刺激物質による処置および生物学的製剤による処置のいずれもがなされていない血球が用いられる。また、ＩＤＯ１およびサイトカインの発現量は、該血球におけるｍＲＮＡの発現量をリアルタイムＰＣＲ法等を用いて測定することによって決定できる。
上記サイトカインとしては、関節リウマチに関連する炎症性サイトカインであれば限定されず、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、インターフェロン等が挙げられる。なかでも、ＩＬ−１７が好ましい。ＩＤＯ１との発現量比と生物学的製剤の有効性との関連性が高い傾向にあるためである。ＩＬ−１７の発現量は、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＬ−１７Ｆ等のファミリー分子のいずれか１つの発現量（例えば、ＩＬ−１７Ａの発現量）であってもよく、任意の２つ以上の合計発現量（例えば、ＩＬ−１７ファミリー全ての合計発現量）であってもよい。
［工程Ｆ］
工程Ｆにおいては、ＩＤＯ１およびサイトカインの発現量比に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する。例えば、ＩＬ−１７の発現量に対するＩＤＯ１の発現量比（ＩＤＯ１／ＩＬ−１７）が高い場合（例えば、１．５以上、また例えば２以上、また例えば２．５以上）、その関節リウマチ患者において生物学的製剤が有効であると予測することができる。このようなＩＤＯ１およびサイトカインの発現量比に基づいた有効性の予測と工程Ｄにおける各種反応性の総合評価に基づいた有効性の予測とを組み合わせることにより、より確実性の高い予測が可能となる。
工程Ｆにおいては、ＩＤＯ１およびサイトカインの発現量比に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する。例えば、ＩＬ−１７の発現量に対するＩＤＯ１の発現量比（ＩＤＯ１／ＩＬ−１７）が高い場合（例えば、１．５以上、また例えば２以上、また例えば２．５以上）、その関節リウマチ患者において生物学的製剤が有効であると予測することができる。このようなＩＤＯ１およびサイトカインの発現量比に基づいた有効性の予測と工程Ｄにおける各種反応性の総合評価に基づいた有効性の予測とを組み合わせることにより、より確実性の高い予測が可能となる。
本発明の予測方法は、好ましくは炎症性刺激物質に対する反応性が低い関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測するために用いられる。本発明者らの検討によれば、炎症性刺激物質に対する反応性が高い患者においては生物学的製剤の有効性が高い傾向にある一方で、炎症性刺激物質に対する反応性が低い関節リウマチ患者においては生物学的製剤の有効性に個人差が大きい傾向がある。よって、炎症性刺激物質に対する反応性が低い関節リウマチ患者を対象とする場合に、本発明の効果がより好適に得られ得る。
炎症性刺激物質に対する反応性が低い関節リウマチ患者としては、炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度に対する炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−ＫＹＮ濃度の比率が、例えば５００％未満、また例えば０〜３００％未満である関節リウマチ患者等が挙げられる。
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれら実施例によって限定されるものではない。なお、実施例等における測定値は全て平均±標準偏差で表記した。各群間での有意差検定にはＡＮＯＶＡを用い、ｐ＜０．０５を統計学的有意とした。
［全血サンプル］
生物学的製剤を未投与の関節リウマチ患者からヘパリン採血した全血をサンプルとし、使用時まで−８０℃で保存した。
生物学的製剤を未投与の関節リウマチ患者からヘパリン採血した全血をサンプルとし、使用時まで−８０℃で保存した。
［Ｌ−ＴＲＰおよびＬ−ＫＹＮの測定］
血清および全血培養上清は２倍量の３％ＰＣＡ（過塩素酸）を用いて除蛋白した。１４０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離後の上清をサンプルとして高速液体クロマトグラフィー（ＣＬＡＳＳ−ＬＣ１０、島津製作所株式会社)でＬ−ＴＲＰ、Ｌ−ＫＹＮを測定した。測定ＵＶ波長はＫＹＮ＝３５５ｎｍ、ＴＲＰ＝２８０ｎｍ、移動相は酢酸緩衝液、流量は１．０ｍｌ/ｍｉｎを測定条件とした。測定カラムはＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−１００Ｖ、粒子径３μｍ、内径４．６ｍｍ×７．５ｃｍ（ＴＯＨＯ製）を使用した。
血清および全血培養上清は２倍量の３％ＰＣＡ（過塩素酸）を用いて除蛋白した。１４０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離後の上清をサンプルとして高速液体クロマトグラフィー（ＣＬＡＳＳ−ＬＣ１０、島津製作所株式会社)でＬ−ＴＲＰ、Ｌ−ＫＹＮを測定した。測定ＵＶ波長はＫＹＮ＝３５５ｎｍ、ＴＲＰ＝２８０ｎｍ、移動相は酢酸緩衝液、流量は１．０ｍｌ/ｍｉｎを測定条件とした。測定カラムはＴＳＫ ｇｅｌ ＯＤＳ−１００Ｖ、粒子径３μｍ、内径４．６ｍｍ×７．５ｃｍ（ＴＯＨＯ製）を使用した。
［実施例１］
［炎症性刺激物質に対する反応性の評価］
全血サンプルをＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬株式会社）で２倍希釈し、３７℃、５％ＣＯ２培養条件の下、２４ｗｅｌｌプレートで５００μｌ／ｗｅｌｌとなるよう培養した（ｎ＝９）。炎症性刺激物質の存在下での培養は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ由来のＬＰＳを培養開始と同時に培養液に終濃度５０ｎｇ／ｍｌとなるように添加して行った。培養開始から２４時間後に上清を回収した。上清中のＬ−ＫＹＮ濃度を測定し、炎症性刺激物質の非存在下および存在下での培養後のＬ−ＫＹＮ濃度を比較した。結果を図４に示す。なお、培養後の血球はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて１６００ｒｐｍ、４℃、５分の遠心分離を２回繰り返すことで洗浄を行い、ペレットの状態で−８０℃で保存した。
［炎症性刺激物質に対する反応性の評価］
全血サンプルをＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬株式会社）で２倍希釈し、３７℃、５％ＣＯ２培養条件の下、２４ｗｅｌｌプレートで５００μｌ／ｗｅｌｌとなるよう培養した（ｎ＝９）。炎症性刺激物質の存在下での培養は、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ由来のＬＰＳを培養開始と同時に培養液に終濃度５０ｎｇ／ｍｌとなるように添加して行った。培養開始から２４時間後に上清を回収した。上清中のＬ−ＫＹＮ濃度を測定し、炎症性刺激物質の非存在下および存在下での培養後のＬ−ＫＹＮ濃度を比較した。結果を図４に示す。なお、培養後の血球はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて１６００ｒｐｍ、４℃、５分の遠心分離を２回繰り返すことで洗浄を行い、ペレットの状態で−８０℃で保存した。
［生物学的製剤に対する反応性の評価］
全血サンプルをＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬株式会社）で２倍希釈し、３７℃、５％ＣＯ２培養条件の下、２４ｗｅｌｌプレートで５００μｌ／ｗｅｌｌとなるよう培養した（ｎ＝９）。生物学的製剤の存在下での培養は、生物学的製剤としてゴリムマブ（ｎ＝４）、アダリムマブ（ｎ＝２）、インフリキシマブ（ｎ＝２）、またはトシリズマブ（ｎ＝１）を培養開始と同時に培養液に終濃度１０μg／ｍｌとなるように添加して行った。培養開始から２４時間後に上清を回収した。上清中のＬ−ＫＹＮ濃度を測定し、生物学的製剤の非存在下および存在下での培養後のＬ−ＫＹＮ濃度を比較した。結果を図５に示す。なお、培養後の血球はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて１６００ｒｐｍ、４℃、５分の遠心分離を２回繰り返すことで洗浄を行い、ペレットの状態で−８０℃で保存した。
全血サンプルをＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬株式会社）で２倍希釈し、３７℃、５％ＣＯ２培養条件の下、２４ｗｅｌｌプレートで５００μｌ／ｗｅｌｌとなるよう培養した（ｎ＝９）。生物学的製剤の存在下での培養は、生物学的製剤としてゴリムマブ（ｎ＝４）、アダリムマブ（ｎ＝２）、インフリキシマブ（ｎ＝２）、またはトシリズマブ（ｎ＝１）を培養開始と同時に培養液に終濃度１０μg／ｍｌとなるように添加して行った。培養開始から２４時間後に上清を回収した。上清中のＬ−ＫＹＮ濃度を測定し、生物学的製剤の非存在下および存在下での培養後のＬ−ＫＹＮ濃度を比較した。結果を図５に示す。なお、培養後の血球はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いて１６００ｒｐｍ、４℃、５分の遠心分離を２回繰り返すことで洗浄を行い、ペレットの状態で−８０℃で保存した。
［生物学的製剤による炎症抑制性の評価］
全血サンプルをＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬株式会社）で２倍希釈し、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ由来のＬＰＳを終濃度１ｎｇ／ｍｌとなるように添加して、３７℃、５％ＣＯ２培養条件の下、２４ｗｅｌｌプレートで５００μｌ／ｗｅｌｌとなるよう培養した（ｎ＝９）。生物学的製剤の存在下での培養は、生物学的製剤としてゴリムマブ（ｎ＝４）、アダリムマブ（ｎ＝２）、インフリキシマブ（ｎ＝２）、またはトシリズマブ（ｎ＝１）をＬＰＳ添加の３時間後に培養液に終濃度１０μg／ｍｌとなるように添加して行った。ただし、生物学的製剤に対する反応性の評価と生物学的製剤による炎症抑制性の評価において、同一患者由来の全血サンプルに対しては同一の生物学的製剤を使用した。培養開始から２４時間後に上清を回収した。上清中のＬ−ＫＹＮ濃度を測定し、生物学的製剤の非存在下および存在下での培養後のＬ−ＫＹＮ濃度を比較した。結果を図６に示す。
全血サンプルをＲＰＭＩ １６４０培地（日水製薬株式会社）で２倍希釈し、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ａｂｏｒｔｕｓ ｅｑｕｉ由来のＬＰＳを終濃度１ｎｇ／ｍｌとなるように添加して、３７℃、５％ＣＯ２培養条件の下、２４ｗｅｌｌプレートで５００μｌ／ｗｅｌｌとなるよう培養した（ｎ＝９）。生物学的製剤の存在下での培養は、生物学的製剤としてゴリムマブ（ｎ＝４）、アダリムマブ（ｎ＝２）、インフリキシマブ（ｎ＝２）、またはトシリズマブ（ｎ＝１）をＬＰＳ添加の３時間後に培養液に終濃度１０μg／ｍｌとなるように添加して行った。ただし、生物学的製剤に対する反応性の評価と生物学的製剤による炎症抑制性の評価において、同一患者由来の全血サンプルに対しては同一の生物学的製剤を使用した。培養開始から２４時間後に上清を回収した。上清中のＬ−ＫＹＮ濃度を測定し、生物学的製剤の非存在下および存在下での培養後のＬ−ＫＹＮ濃度を比較した。結果を図６に示す。
［総合評価］
上記３つの評価に関して、表１〜３に示すスコア化を行い、各患者における合計スコアを算出した。結果を表４に示す。
上記３つの評価に関して、表１〜３に示すスコア化を行い、各患者における合計スコアを算出した。結果を表４に示す。
各患者に関して、得られた合計スコアと各生物学的製剤による治療開始から３か月後におけるＡＣＲ／ＥＵＬＡＲ寛解基準であるＳｉｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ （ＳＤＡＩ）およびＣｌｉｎｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｄｅｘ （ＣＤＡＩ）との関連性を評価した。なお、ＳＤＡＩは、臨床試験における基準であり、３．３以下を寛解とみなす。また、ＣＤＡＩは、日常臨床における基準であり、２．８以下を寛解とみなす。結果を図７（ａ）および（ｂ）に示す。
［ＩＤＯ１およびＩＬ−１７の発現量比］
炎症性刺激物質および生物学的製剤の非存在下で培養した培養液中の血球を回収し、回収された血球から商品名「ＩＳＯＧＥＮ」（ニッポンジーン製）を使用してＲＮＡを抽出した。次いで、商品名「ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ ｑＰＣＲ ＲＴ−Ｋｉｔ」（ＴＯＹＯＢＯ製）を用いて逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡに関して、商品名「ＳｓｏＦａｓｔ ＥｖａＧｒｅｅｎ ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ＲＯＸ」（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用い、製品名「７５００／７５００Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ」(Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ製)にてＲｅａｌ−ｔｉｍｅ ＰＣＲ解析を行って、ＩＤＯ１およびＩＬ−１７ＡのｍＲＮＡの定量を行った（内部標準：ＧＡＰＤＨ、ｎ＝７）。また、対照として、上記と同様にして健常者の血球中のＩＤＯ１およびＩＬ−１７ＡのｍＲＮＡの定量を行った。使用したプライマーの配列を表５に示す。
炎症性刺激物質および生物学的製剤の非存在下で培養した培養液中の血球を回収し、回収された血球から商品名「ＩＳＯＧＥＮ」（ニッポンジーン製）を使用してＲＮＡを抽出した。次いで、商品名「ＲｅｖｅｒＴｒａ Ａｃｅ ｑＰＣＲ ＲＴ−Ｋｉｔ」（ＴＯＹＯＢＯ製）を用いて逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを得た。得られたｃＤＮＡに関して、商品名「ＳｓｏＦａｓｔ ＥｖａＧｒｅｅｎ ｓｕｐｅｒｍｉｘ ｗｉｔｈ ｌｏｗ ＲＯＸ」（Ｂｉｏ−Ｒａｄ製）を用い、製品名「７５００／７５００Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍ」(Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ製)にてＲｅａｌ−ｔｉｍｅ ＰＣＲ解析を行って、ＩＤＯ１およびＩＬ−１７ＡのｍＲＮＡの定量を行った（内部標準：ＧＡＰＤＨ、ｎ＝７）。また、対照として、上記と同様にして健常者の血球中のＩＤＯ１およびＩＬ−１７ＡのｍＲＮＡの定量を行った。使用したプライマーの配列を表５に示す。
一方、ＥＵＬＡＲ改善基準により患者群を表６に示すとおり、ＤＡＳ２８−ＥＳＲで治療反応性ごとにＧｏｏｄ ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（治療反応性が良好な患者）、Ｍｏｄｅｒａｔｅ ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（治療反応性が中程度の患者）、Ｎｏ ｒｅｓｐｏｎｄｅｒ（治療反応性が低い患者）に分類した。次いで、各分類におけるＩＤＯ１のｍＲＮＡ発現量およびＩＬ−１７ＡのｍＲＮＡ発現量を健常者における発現量（コントロール）を１００％として評価した。結果を図８（ａ）および（ｂ）に示す。また、各分類におけるＩＤＯ１とＩＬ−１７との発現量比（ＩＤＯ１／ＩＬ−１７）を図８（ｃ）に示す。
図７（ａ）および（ｂ）に示されるとおり、生物学的製剤の投与前の総合評価における合計スコアと投与後３か月におけるＳＤＡＩおよびＣＤＡＩとはそれぞれ高い相関性を有する。このことから、本発明の方法によって、生物学的製剤の投与前にその有効性を予測可能であることがわかる。さらに、図８（ｃ）に示されるとおり、生物学的製剤投与前のＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量が高く、ＩＬ−１７Ａ ｍＲＮＡ発現量が低い患者群、すなわち、ＩＤＯ１発現量/ＩＬ−１７発現量比が高い患者群がＧｏｏｄ ｒｅｓｐｏｎｄｅｒとなる傾向が認められる。このことから、生物学的製剤投与前のＩＤＯ１発現量/ＩＬ−１７発現量比が高い患者に対して生物学的製剤が有効であると予測可能であることがわかる。よって、上記総合評価に基づく予測とＩＤＯ１発現量/ＩＬ−１７発現量比に基づく予測とを組み合わせることにより、生物学的製剤の有効性をより確実に予測可能となる。
［参考例１］
健常者群（ｎ＝６５）と関節リウマチ患者群（ｎ＝３０）において、血中Ｌ−ＫＹＮ濃度および血中Ｌ−ＴＲＰ濃度を測定した。結果を図９（ａ）および（ｂ）に示す。
健常者群（ｎ＝６５）と関節リウマチ患者群（ｎ＝３０）において、血中Ｌ−ＫＹＮ濃度および血中Ｌ−ＴＲＰ濃度を測定した。結果を図９（ａ）および（ｂ）に示す。
図９（ａ）および（ｂ）に示されるとおり、関節リウマチ患者群における血中Ｌ−ＴＲＰ濃度は健常者群と比較して減少傾向を示し、血中Ｌ−ＫＹＮ濃度は健常者群と比較して有意な増加が認められた（ｐ＜０．００１）。また、別途、未処置全血培養時の血球内のＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量を測定したところ、関節リウマチ患者群における血球内のＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量が健常者群と比較して有意に増加した。これらの結果から、関節リウマチ患者においては、局所のＩＤＯ１活性のみならず、末梢循環血においてもＩＤＯ１が誘導されていることが確認された。
［参考例２］
実施例１における生物学的製剤に対する反応性の評価において培養後に凍結保存した血球中のＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量をリアルタイムＰＣＲで測定し、Ｌ−ＫＹＮ濃度の増大率が小さい群（生物学的製剤の存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度／非存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度＜０．９５）およびＬ−ＫＹＮ濃度の増大率が大きい群（生物学的製剤の存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度／非存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度≧１）におけるＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量を生物学的製剤の非存在下培養における発現量（コントロール）を１００％として評価した。結果を図１０に示す。
実施例１における生物学的製剤に対する反応性の評価において培養後に凍結保存した血球中のＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量をリアルタイムＰＣＲで測定し、Ｌ−ＫＹＮ濃度の増大率が小さい群（生物学的製剤の存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度／非存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度＜０．９５）およびＬ−ＫＹＮ濃度の増大率が大きい群（生物学的製剤の存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度／非存在下培養でのＬ−ＫＹＮ濃度≧１）におけるＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量を生物学的製剤の非存在下培養における発現量（コントロール）を１００％として評価した。結果を図１０に示す。
図１０に示されるとおり、Ｌ−ＫＹＮ濃度の増大率が小さい群において、血球内ＩＤＯ１ ｍＲＮＡ発現量が低下していた(ｐ＜０．０５)。このことから、生物学的製剤によるＬ−ＫＹＮ産生量の抑制率の差に、ＩＤＯ１が関与していることがわかる。
［参考例３］
炎症性刺激物質に対する反応性の評価におけるＬ−ＫＹＮ濃度の増大率と、ＤＡＳ２８−ＥＳＲでの分類による生物学的製剤による治療開始後３か月における疾患活動性との関連性を調べた。結果を図１１に示す。
炎症性刺激物質に対する反応性の評価におけるＬ−ＫＹＮ濃度の増大率と、ＤＡＳ２８−ＥＳＲでの分類による生物学的製剤による治療開始後３か月における疾患活動性との関連性を調べた。結果を図１１に示す。
図１１に示されるとおり、疾患活動性が高い群（ＤＡＳスコア≧５．１）ではＬＰＳ刺激によるＬ−ＫＹＮ増大率が小さく、ＬＰＳに対する反応性が低い傾向が見られた。一方、疾患活動性が低い群（ＤＡＳスコア＜３．２）では、ＬＰＳ刺激によるＬ−ＫＹＮ増大率が大きく、ＬＰＳに対する反応性が高い傾向が見られた。
本発明の予測方法は、医療分野において好適に利用され得る。
Claims (9)
- 関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性を指標にして炎症性刺激物質に対する反応性を評価すること、
関節リウマチ患者から単離された末梢血を生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性を指標にして生物学的製剤に対する反応性を評価すること、
関節リウマチ患者から単離された末梢血を炎症性刺激物質の存在下であって、生物学的製剤の存在下および非存在下でそれぞれ全血培養した培養液におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性を指標にして生物学的製剤による炎症抑制性を評価すること、および
炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性および生物学的製剤による炎症抑制性の総合評価に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測を行うこと、
を含む、関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する方法。 - 前記関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測が、炎症性刺激物質に対する反応性、生物学的製剤に対する反応性、および生物学的製剤による炎症抑制性のそれぞれについて、応答感度が高いほど高スコアとなるようにスコア化し、それらの合計スコアが高いほど生物学的製剤が有効であると予測することによって行われる、請求項１に記載の方法。
- 前記炎症性刺激物質が、リポ多糖である、請求項１または２に記載の方法。
- 前記インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ活性が、培養液中のＬ−キヌレニン濃度に基づいて決定される、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
- 関節リウマチ患者から単離された末梢血由来の血球におけるインドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼおよびサイトカインの発現量を測定すること、および
インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼおよびサイトカインの発現量比に基づいて関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測すること、
をさらに含む、請求項１から４のいずれかに記載の方法。 - 前記サイトカインが、ＩＬ−１７である、請求項５に記載の方法。
- 炎症性刺激物質の非存在下で全血培養した培養液におけるＬ−キヌレニン濃度に対する炎症性刺激物質の存在下で全血培養した培養液におけるＬ−キヌレニン濃度の比率が５００％未満である関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性を予測する、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
- 前記生物学的製剤が、ＴＮＦ阻害剤、ＩＬ−６阻害剤またはＴ細胞阻害剤である、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
- 前記スコア化が、以下の表１〜表３に基づいて行われ、その合計スコアが６以上の場合に生物学的製剤が有効であると予測する、請求項２から８のいずれかに記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013127092A JP6151981B2 (ja) | 2013-06-18 | 2013-06-18 | 関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2013127092A JP6151981B2 (ja) | 2013-06-18 | 2013-06-18 | 関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2015000048A JP2015000048A (ja) | 2015-01-05 |
| JP6151981B2 true JP6151981B2 (ja) | 2017-06-21 |
Family
ID=52294977
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013127092A Active JP6151981B2 (ja) | 2013-06-18 | 2013-06-18 | 関節リウマチ患者における生物学的製剤の有効性の予測方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6151981B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020175633A1 (ja) * | 2019-02-28 | 2020-09-03 | 吉崎 和幸 | 抗ＴＮＦ－α剤による関節リウマチの治療効果の予測判定方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004065120A (ja) * | 2002-08-07 | 2004-03-04 | Sumitomo Pharmaceut Co Ltd | 炎症性腸疾患の疾患マーカー及びその利用 |
| KR20110031962A (ko) * | 2008-07-18 | 2011-03-29 | 노보자임스 아데니움 바이오테크 에이/에스 | 포유류 베타 방어소를 이용한 염증 질환의 치료 |
| CA2777800C (en) * | 2009-10-15 | 2019-11-12 | Crescendo Bioscience | Biomarkers and methods for measuring and monitoring inflammatory disease activity |
-
2013
- 2013-06-18 JP JP2013127092A patent/JP6151981B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2015000048A (ja) | 2015-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Carr et al. | Eosinophilic and noneosinophilic asthma | |
| Wolk et al. | Lipocalin‐2 is expressed by activated granulocytes and keratinocytes in affected skin and reflects disease activity in acne inversa/hidradenitis suppurativa | |
| Takahashi et al. | Sputum proteomics and airway cell transcripts of current and ex-smokers with severe asthma in U-BIOPRED: an exploratory analysis | |
| Kortekaas Krohn et al. | Emerging roles of innate lymphoid cells in inflammatory diseases: clinical implications | |
| Franchi et al. | Inhibiting oxidative phosphorylation in vivo restrains Th17 effector responses and ameliorates murine colitis | |
| Thomson | Novel approaches to the management of noneosinophilic asthma | |
| Duarte et al. | Expression of immune‐inflammatory markers in sites of chronic periodontitis in patients with type 2 diabetes | |
| Bie et al. | Polarization of ILC2s in peripheral blood might contribute to immunosuppressive microenvironment in patients with gastric cancer | |
| Calvani et al. | Th1 cytokines in the pathogenesis of lupus nephritis: the role of IL-18 | |
| Corren | Role of interleukin-13 in asthma | |
| Xue et al. | Pharmacologic modulation of RORγt translates to efficacy in preclinical and translational models of psoriasis and inflammatory arthritis | |
| Freeman et al. | Cytotoxic potential of lung CD8+ T cells increases with chronic obstructive pulmonary disease severity and with in vitro stimulation by IL-18 or IL-15 | |
| Shanmugam et al. | Transcriptome patterns in hidradenitis suppurativa: support for the role of antimicrobial peptides and interferon pathways in disease pathogenesis | |
| Peelen et al. | Increased inflammasome related gene expression profile in PBMC may facilitate T helper 17 cell induction in multiple sclerosis | |
| Pang et al. | Th9/IL‐9 profile in human echinococcosis: their involvement in immune response during infection by Echinococcus granulosus | |
| Dong et al. | Aberrant expression of circulating Th17, Th1 and Tc1 cells in patients with active and inactive ulcerative colitis | |
| Shimauchi et al. | Serum interleukin‐22 and vascular endothelial growth factor serve as sensitive biomarkers but not as predictors of therapeutic response to biologics in patients with psoriasis | |
| Banerjee et al. | Interferon-gamma (IFN-γ) is elevated in wound exudate from hidradenitis suppurativa | |
| Negera et al. | The effects of prednisolone treatment on cytokine expression in patients with erythema nodosum leprosum reactions | |
| Hamzaoui et al. | Serum IL-33 levels and skin mRNA expression in Behçet’s disease | |
| Wilson et al. | IL-5 receptor α levels in patients with marked eosinophilia or mastocytosis | |
| Zhu et al. | miR‐223 inhibits the polarization and recruitment of macrophages via NLRP3/IL‐1β pathway to meliorate neuropathic pain | |
| Tahvili et al. | The effect of dimethyl fumarate on gene expression and the level of cytokines related to different T helper cell subsets in peripheral blood mononuclear cells of patients with psoriasis | |
| Nieto et al. | Effect of lipopolysaccharide infusion on gene expression of inflammatory cytokines in normal horses in vivo | |
| Wang et al. | Increased frequencies of T helper type 17 cells in tuberculous pleural effusion |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20160615 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20161028 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20161031 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161226 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170421 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170510 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170526 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6151981 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |