JP6083085B2 - Angiotensin converting enzyme inhibitor and use thereof - Google Patents
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Description
本発明は、アンジオテンシン変換酵素阻害剤およびその用途に関する。 The present invention relates to an angiotensin converting enzyme inhibitor and use thereof.
現代社会において、高血圧は動脈硬化へつながる深刻な生活習慣病の一つである。高血圧は特有の自覚症状がほとんどないため軽視する人も多いが、その状態を放置しておくと、動脈硬化が進行して脳や心臓に深刻な合併症をもたらし、最悪の場合は生命の危険にさらされる。 In modern society, hypertension is one of the serious lifestyle-related diseases that leads to arteriosclerosis. Many people neglect hypertension because there are few specific subjective symptoms, but if left untreated, arteriosclerosis will progress, causing serious complications in the brain and heart. Exposed to.
高血圧に関与する因子の一つと考えられているアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）は、生理活性ペプチドであるアンジオテンシンＩを強い血管収縮作用を持つアンジオテンシンＩＩに変換する酵素である。ＡＣＥはまた、血圧を下げる活性を有する生理活性ペプチドであるブラジキニンを分解する作用も持つため、このＡＣＥを阻害することは効果的に血圧を降下させる作用につながる。また、一般に「ＡＣＥ阻害剤」は脳や心臓などの臓器を保護する作用を併せ持っていることから、臓器障害の改善や進行を予防する効果も期待できる。血圧降下剤として現在広く用いられているＡＣＥ阻害剤のほとんどは、カプトプリル、エナラプリル、アラセプリルなどの有機合成化合物であり、血管浮腫などの副作用を持つことが知られている。一方で、ペプチド性のＡＣＥ阻害剤（血圧降下剤）はほとんど知られていないのが現状である。 Angiotensin converting enzyme (ACE), which is considered to be one of the factors involved in hypertension, is an enzyme that converts angiotensin I, which is a physiologically active peptide, into angiotensin II having a strong vasoconstrictive action. ACE also has an action of degrading bradykinin, which is a physiologically active peptide having an activity of lowering blood pressure, so inhibiting ACE leads to an action of effectively lowering blood pressure. In general, since an “ACE inhibitor” also has an action of protecting organs such as the brain and heart, it can be expected to have an effect of improving and preventing progression of organ damage. Most of the ACE inhibitors that are currently widely used as antihypertensive agents are organic synthetic compounds such as captopril, enalapril, and alaspril, and are known to have side effects such as angioedema. On the other hand, there are few known peptide ACE inhibitors (antihypertensive agents).
ところで、人体をはじめとする動物組織を構成するタンパク質として、エラスチンが知られている。このエラスチンは、コラーゲンと同様に細胞外において機能する繊維状のタンパク質であり、ゴムのように伸縮する性質（弾性）を有していることから、組織への柔軟性の付与に関与している。このため、伸縮性が必要とされる組織・器官（ヒトでは例えば、皮膚の真皮、靱帯、腱、血管壁など）に広く分布している。 By the way, elastin is known as a protein constituting animal tissues including the human body. This elastin is a fibrous protein that functions extracellularly like collagen, and is involved in imparting flexibility to tissues because it has the property of stretching (elasticity) like rubber. . For this reason, it is widely distributed in tissues and organs (for example, the dermis of skin, ligaments, tendons, blood vessel walls, etc.) that require stretchability.
本願の発明者らは従来、動物性生体組織から水溶性エラスチンを単離する手法を開発することに成功し、当該手法に基づく水溶性エラスチンの製造方法を開示している（特許文献１を参照）。また、単離された水溶性エラスチンが動脈硬化の抑制、脂質代謝異常の改善、血栓形成の抑制といった作用を示すことも見出し、開示している（同じく特許文献１を参照）。ただし、単離された水溶性エラスチンがＡＣＥ阻害作用（血圧降下作用）を示すことは、特許文献１を含めて従来技術においては知られていない。 The inventors of the present application have succeeded in developing a method for isolating water-soluble elastin from animal living tissue and have disclosed a method for producing water-soluble elastin based on the method (see Patent Document 1). ). It has also been found and disclosed that the isolated water-soluble elastin exhibits actions such as suppression of arteriosclerosis, improvement of lipid metabolism abnormality, and suppression of thrombus formation (see also Patent Document 1). However, it is not known in the prior art including Patent Document 1 that the isolated water-soluble elastin exhibits an ACE inhibitory action (blood pressure lowering action).
本発明は、従来公知の有機合成化合物の形態のＡＣＥ阻害剤（血圧降下剤）（例えば、カプトプリルなど）に代替しうる、副作用が低減されたペプチド性の薬剤を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a peptidic drug with reduced side effects, which can be substituted for a conventionally known ACE inhibitor (antihypertensive agent) (for example, captopril) in the form of an organic synthetic compound.
本発明者らは、上述したような従来技術の現状に鑑み、鋭意検討を行なった。その過程で、驚くべきことに、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物がＡＣＥ阻害作用を示し、よって血圧降下作用を示すこと、を見出した。そしてこの知見に基づき、本発明を完成させるに至った。 In view of the current state of the prior art as described above, the present inventors have intensively studied. In the process, it was surprisingly found that water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate exhibits an ACE inhibitory action, and thus a blood pressure lowering action. And based on this knowledge, it came to complete this invention.
すなわち、本発明の一形態によれば、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を有効成分として含有する、アンジオテンシン変換酵素阻害剤が提供される。この際、当該阻害剤は、前記エラスターゼ加水分解物を有効成分として含有することが好ましい。 That is, according to one form of this invention, the angiotensin converting enzyme inhibitor which contains water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate as an active ingredient is provided. At this time, the inhibitor preferably contains the elastase hydrolyzate as an active ingredient.
また、本発明の他の形態によれば、上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する、血圧降下剤が提供される。 Moreover, according to the other form of this invention, the antihypertensive agent containing the said angiotensin converting enzyme inhibitor is provided.
さらに、本発明のさらに他の形態によれば、上記アンジオテンシン変換酵素阻害剤を含有する、飲食品が提供される。 Furthermore, according to the further another form of this invention, the food / beverage products containing the said angiotensin converting enzyme inhibitor are provided.
また、本発明のさらに他の形態によれば、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を有効量含有する飲食品であって、高血圧を予防または改善する機能を有し、その機能表示が付された、飲食品が提供される。当該飲食品は、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、疾病リスク低減表示が付された食品、または病者用食品であることが好ましい。 According to still another aspect of the present invention, there is provided a food or drink containing an effective amount of water-soluble elastin or an elastase hydrolyzate thereof, which has a function of preventing or improving hypertension, and a function indication thereof is attached. Food and drinks are provided. The food or drink is preferably a health food, a functional food, a food for specified health use, a dietary supplement, a food with a disease risk reduction label, or a food for a sick person.
本発明の別の形態では、水溶性エラスチンの製造方法もまた、提供される。すなわち、本発明の一形態によれば、分子量１〜３万の水溶性エラスチンを、ｗ／ｖ換算で０．００１〜０．５倍の濃度のエラスターゼの存在下、２０〜５０℃の温度で３〜７２時間インキュベートすることにより、前記水溶性エラスチンを加水分解して前記水溶性エラスチンの分解物を得る工程を含む、水溶性エラスチン分解物の製造方法が提供される。 In another aspect of the present invention, a method for producing water-soluble elastin is also provided. That is, according to one aspect of the present invention, water-soluble elastin having a molecular weight of 1 to 30,000 is converted to a temperature of 20 to 50 ° C. in the presence of 0.001 to 0.5 times the concentration of elastase in terms of w / v. There is provided a method for producing a water-soluble elastin degradation product, which comprises a step of hydrolyzing the water-soluble elastin to obtain a degradation product of the water-soluble elastin by incubating for 3 to 72 hours.
上記製造方法は、オクタデシル（ＯＤＳ）−シリカゲルカラムクロマトグラフィ法を用いて前記分解物を精製する工程をさらに含むことが好ましい。この際、好ましくは、Ａ液（０．１％トリフルオロ酢酸 ｉｎ ５％アセトニトリル）とＢ液（０．１％トリフルオロ酢酸 ｉｎ ９５％アセトニトリル）との混合比が８０／２０〜５０／５０（Ａ液／Ｂ液（ｖ／ｖ））である溶離液によって溶出される画分から前記分解物が精製される。 It is preferable that the manufacturing method further includes a step of purifying the decomposition product using octadecyl (ODS) -silica gel column chromatography. At this time, the mixing ratio of the liquid A (0.1% trifluoroacetic acid in 5% acetonitrile) and the liquid B (0.1% trifluoroacetic acid in 95% acetonitrile) is preferably 80/20 to 50/50 ( The decomposition product is purified from the fraction eluted by the eluent which is A liquid / B liquid (v / v)).
また、上記製造方法は、溶出された画分であって前記分解物を含むものを凍結乾燥することにより、前記分解物を粉末の形態で得る工程をさらに含むことが好ましい。 Moreover, it is preferable that the said manufacturing method further includes the process of obtaining the said degradation product in the form of a powder by freeze-drying the eluted fraction which contains the said degradation product.
本発明によれば、従来の有機合成化合物の形態のＡＣＥ阻害剤（血圧降下剤）と比較して副作用が低減されたペプチド性の薬剤が提供されうる。また、当該薬剤などに有効に利用されうるペプチドとして、簡便な手法によって水溶性エラスチンの分解物を得る技術もまた、提供されうる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the peptide-type chemical | medical agent by which the side effect was reduced compared with the ACE inhibitor (blood pressure lowering agent) of the form of the conventional organic synthetic compound can be provided. In addition, a technique for obtaining a water-soluble elastin degradation product by a simple technique as a peptide that can be effectively used for the drug or the like can also be provided.
以下、本発明を実施するための具体的な形態について詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は下記の具体的な形態のみに限定されるわけではない。 Hereinafter, specific embodiments for carrying out the present invention will be described in detail, but the technical scope of the present invention is not limited to the following specific embodiments.
本発明の一形態は、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物（以下、単に「分解物」とも称する）を有効成分として含有する、アンジオテンシン変換酵素阻害剤（以下、単に「阻害剤」とも称する）である。 One embodiment of the present invention is an angiotensin converting enzyme inhibitor (hereinafter also simply referred to as “inhibitor”), which contains water-soluble elastin or a hydrolyzate thereof (hereinafter also simply referred to as “degradation product”) as an active ingredient. It is.
当該形態に係るアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、その有効成分として、「水溶性エラスチン」または「水溶性エラスチンのエラスターゼ加水分解物」を含有する点に特徴を有する。エラスチンは、動物、特に哺乳動物の皮膚の真皮、靭帯、腱、血管壁等の結合組織の中に、コラーゲンとともに存在するタンパク質である。エラスチンは、通常、生体内においては、３次元の網目構造の不溶性のタンパク質として存在している。このエラスチンを、酸またはアルカリで加水分解したり、酵素で処理することによって水溶性エラスチンが得られることは広く知られている。また、上述したように水溶性エラスチンが動脈硬化の抑制、脂質代謝異常の改善、血栓形成の抑制といった作用を示すことが本発明者らの研究によって見出されているが、本発明は、水溶性エラスチンやそのエラスターゼ加水分解物がＡＣＥ阻害作用（血圧降下作用）を示すという新たな知見に基づき完成されたものである。 The angiotensin converting enzyme inhibitor according to this embodiment is characterized in that it contains “water-soluble elastin” or “water-soluble elastin elastase hydrolyzate” as its active ingredient. Elastin is a protein that is present together with collagen in connective tissues such as the dermis, ligaments, tendons and blood vessel walls of animals, particularly mammalian skin. Elastin usually exists as an insoluble protein having a three-dimensional network structure in vivo. It is widely known that water-soluble elastin can be obtained by hydrolyzing this elastin with an acid or an alkali or treating it with an enzyme. Further, as described above, it has been found by the present inventors that water-soluble elastin exhibits actions such as suppression of arteriosclerosis, improvement of lipid metabolism abnormality, and suppression of thrombus formation. It has been completed based on the new finding that sex elastin and its elastase hydrolyzate show ACE inhibitory action (blood pressure lowering action).
本形態の阻害剤の有効成分として用いられる「水溶性エラスチン」の具体的な形態について特に制限はなく、従来公知の知見（例えば、上述した特許文献１など）により提供されている種々の形態が採用されうる。また、「水溶性エラスチン」としては、市販品が存在する場合には当該市販品を購入したものであってもよいし、上記特許文献１などに記載の公知の手法に従って動物性生体組織（例えば、ヒト以外の哺乳動物）等から自ら調製したものであってもよい。以下、動物性生体組織から水溶性エラスチンを自ら調製する手法について、特許文献１の記載に従い、簡単に説明する。 There is no restriction | limiting in particular about the specific form of "water-soluble elastin" used as an active ingredient of the inhibitor of this form, The various form provided by conventionally well-known knowledge (for example, patent document 1 mentioned above etc.) is provided. It can be adopted. In addition, the “water-soluble elastin” may be a product obtained by purchasing a commercially available product when it is commercially available, or an animal biological tissue (for example, according to a known technique described in Patent Document 1 above). , Self-prepared from non-human mammals) and the like. Hereinafter, a method for self-preparing water-soluble elastin from animal living tissue will be briefly described according to the description in Patent Document 1.
動物性生体組織から水溶性エラスチンを製造する手法の一例としては、
（Ａ１）動物性生体組織をコラーゲン除去処理することによって不溶性エラスチンを得る工程、
（Ａ２）該不溶性エラスチンを可溶化液に溶解しエラスチン溶解可溶化液を得る工程、および、
（Ａ３）該エラスチン溶解可溶化液を相分離操作によって２層に分離し、上層または下層から水溶性エラスチンを回収する工程、
を順次実施するという手法が例示される。
As an example of a method for producing water-soluble elastin from animal living tissue,
(A1) A step of obtaining insoluble elastin by subjecting animal biological tissue to collagen removal treatment,
(A2) dissolving the insoluble elastin in a solubilizing solution to obtain an elastin-dissolving solubilizing solution
(A3) a step of separating the elastin-dissolved lysate into two layers by a phase separation operation, and recovering water-soluble elastin from the upper layer or the lower layer;
A method of sequentially performing the above is exemplified.
また、動物性生体組織から水溶性エラスチンを製造する他の手法としては、
（Ｂ１）動物性生体組織を前処理する工程、
（Ｂ２）前処理された動物性生体組織を、アルカリ性溶液中に浸漬し、動物性生体組織から抽出されるコラーゲンやその他の不要タンパク質を含む溶液を除去するアルカリ抽出工程、
（Ｂ３）前記（Ｂ２）の操作を繰り返した後に、動物性生体組織残渣を溶解することにより、遊離した水溶性エラスチンを含む溶液を回収するアルカリ溶解工程、
（Ｂ４）該アルカリ溶解工程で回収された水溶性エラスチンを含有する溶液を相分離操作によって２層に分離し、上層または下層から水溶性エラスチンを回収する工程、
を順次実施するという手法が例示される。
As another method for producing water-soluble elastin from animal living tissue,
(B1) a step of pretreating animal biological tissue;
(B2) an alkaline extraction step of immersing the pretreated animal biological tissue in an alkaline solution to remove a solution containing collagen and other unnecessary proteins extracted from the animal biological tissue;
(B3) An alkali dissolution step of recovering a solution containing free water-soluble elastin by dissolving animal biological tissue residues after repeating the operation of (B2),
(B4) a step of separating the solution containing water-soluble elastin recovered in the alkali dissolution step into two layers by a phase separation operation, and recovering water-soluble elastin from the upper layer or the lower layer,
A method of sequentially performing the above is exemplified.
上述した２つの手法については、特許文献１（再表２００６／０４６６２６号公報）および本願出願時の技術常識を参照することにより適宜実施可能であるため、ここでは詳細な説明を省略する。 The above-described two methods can be appropriately implemented by referring to Patent Document 1 (Re-Table 2006/046626) and technical common sense at the time of filing of the present application, and thus detailed description thereof is omitted here.
上述の手法によって回収（製造）された水溶性エラスチンは、最終工程（上記工程（Ａ３）または工程（Ｂ４））における相分離によって低分子量（分子量約１〜３万）水溶性エラスチンと高分子量（分子量約３〜３０万）水溶性エラスチンとに分画される。すなわち、水溶性エラスチンを３０〜５０℃に加熱すると相分離して白濁し、そのまま放置すると２層に分離する。この上層画分の平衡液相からは低分子量水溶性エラスチンが回収され、下層画分のコアセルベート相からは高分子量水溶性エラスチンが回収される。 The water-soluble elastin recovered (manufactured) by the above-described method has a low molecular weight (molecular weight of about 1 to 30,000) water-soluble elastin and a high molecular weight (by molecular separation in the final step (step (A3) or step (B4))). It is fractionated into water-soluble elastin (molecular weight about 3 to 300,000). That is, when water-soluble elastin is heated to 30 to 50 ° C., it phase separates and becomes cloudy, and when left as it is, it separates into two layers. Low molecular weight water-soluble elastin is recovered from the equilibrium liquid phase of the upper layer fraction, and high molecular weight water-soluble elastin is recovered from the coacervate phase of the lower layer fraction.
また、低分子量水溶性エラスチンと高分子量水溶性エラスチンのコアセルベーション特性（温度上昇で濁度が上昇し、温度降下で濁度がもとに戻る可逆的な性質）の検討の結果、高分子量水溶性エラスチンは加熱すると白濁することが確認でき、その濁度曲線が可逆的である。一方、低分子量水溶性エラスチンは、加熱しても白濁しない。本発明の阻害剤が「水溶性エラスチン」を含有する形態においては、当該阻害剤はこれらの低分子量水溶性エラスチンまたは高分子量水溶性エラスチンのいずれか、または双方を含有しうるが、少なくとも低分子量水溶性エラスチンを含有することが好ましい。これは、低分子量水溶性エラスチンは分子量サイズが小さく、阻害剤が飲食品や医薬などの用途（特に、経口用途）に用いられた際に消化吸収の面で好ましいためである。 In addition, as a result of examination of coacervation characteristics (reversible property that turbidity increases with increasing temperature and returns to turbidity with decreasing temperature) of low molecular weight water-soluble elastin and high molecular weight water-soluble elastin. Water-soluble elastin can be confirmed to become cloudy when heated, and its turbidity curve is reversible. On the other hand, low molecular weight water-soluble elastin does not become cloudy even when heated. In the form in which the inhibitor of the present invention contains “water-soluble elastin”, the inhibitor may contain either or both of these low-molecular-weight water-soluble elastin and high-molecular-weight water-soluble elastin, but at least the low-molecular weight It is preferable to contain water-soluble elastin. This is because low molecular weight water-soluble elastin has a small molecular weight size and is preferable in terms of digestion and absorption when the inhibitor is used for food and drink, medicine and other uses (particularly oral use).
本発明の阻害剤に用いられうる水溶性エラスチンのうち、エラスチンを構成するアミノ酸の７９〜８４％がプロリン、グリシン、アラニン、バリンからなり、２〜３％がアスパラギン酸とグルタミン酸からなり、０．７〜１．３％がリジン、ヒスチジン、アルギニンからなり、０．２〜０．４％がデスモシンとイソデスモシンからなる、分子量が約１〜３万の低分子量水溶性エラスチンは、消化吸収性に優れているため、医薬や飲食品として利用できる。 Among the water-soluble elastins that can be used in the inhibitor of the present invention, 79 to 84% of the amino acids constituting elastin are composed of proline, glycine, alanine, and valine, and 2-3% are composed of aspartic acid and glutamic acid. Low molecular weight water-soluble elastin having a molecular weight of about 1 to 30,000, consisting of lysine, histidine, and arginine, 7 to 1.3%, and desmosine and isodesmosine is excellent in digestibility Therefore, it can be used as medicine or food and drink.
一方、本形態の阻害剤の有効成分として用いられる「水溶性エラスチンのエラスターゼ加水分解物（分解物）」の具体的な形態について特に制限はなく、従来公知の知見により提供されている種々の形態が採用されうる。また、当該分解物としては、市販品が存在する場合には当該市販品を購入したものであってもよいし、上述した入手経路から入手された水溶性エラスチンを原料として自らエラスターゼ酵素処理することにより調製したものであってもよい。以下、上記で得られた低分子量水溶性エラスチン（分子量約１〜３万）を原料として、これをエラスターゼ酵素処理することにより分解物を自ら調製する手法について、説明する。 On the other hand, there is no particular limitation on the specific form of “water-soluble elastin elastase hydrolyzate (decomposition product)” used as an active ingredient of the inhibitor of the present form, and various forms provided by conventionally known knowledge Can be adopted. Moreover, as the said decomposition product, when the commercial item exists, the said commercial item may be purchased, and the elastase enzyme process is carried out by using water-soluble elastin obtained from the above-mentioned acquisition route as a raw material. It may be prepared by. Hereinafter, a method for preparing a degradation product by using the low molecular weight water-soluble elastin obtained above (molecular weight of about 1 to 30,000) as a raw material and treating it with an elastase enzyme will be described.
当該手法では、まず、原料として、分子量１〜３万の水溶性エラスチン（低分子量水溶性エラスチン）を準備する。その具体的な手法および準備された水溶性エラスチンの具体的な構成については上述したとおりである。 In this method, first, water-soluble elastin having a molecular weight of 1 to 30,000 (low molecular weight water-soluble elastin) is prepared as a raw material. The specific method and the specific structure of the prepared water-soluble elastin are as described above.
続いて、準備された低分子量水溶性エラスチンを、エラスターゼの存在下、インキュベートする。これにより、当該低分子量水溶性エラスチンを加水分解して、水溶性エラスチンの分解物を得る。 Subsequently, the prepared low molecular weight water-soluble elastin is incubated in the presence of elastase. Thereby, the low molecular weight water-soluble elastin is hydrolyzed to obtain a water-soluble elastin degradation product.
エラスターゼは、エラスチンを特異的な基質とするセリンプロテアーゼの１種であり、ウシの膵臓から最初に精製されたものである。エラスターゼの具体例としては、膵臓エラスターゼ（ＥＣ３．４．２１．３６）や白血球エラスターゼ（ＥＣ３．４．２１．３７）などが知られている。上述した手法において、インキュベートに用いられるエラスターゼの入手経路について特に制限はなく、従来公知の知見が適宜参照されうる。 Elastase is a kind of serine protease that uses elastin as a specific substrate, and was first purified from bovine pancreas. Specific examples of elastase include pancreatic elastase (EC 3.4.21.36) and leukocyte elastase (EC 3.4.21.37). In the above-described method, there is no particular limitation on the route for obtaining elastase used for incubation, and conventionally known knowledge can be referred to appropriately.
また、インキュベートする際の反応系におけるエラスターゼ濃度は、ｗ／ｖ換算で、水溶性エラスチンの０．００１〜０．５倍であることが好ましく、０．００５〜０．４倍であることがより好ましく、０．００８〜０．３倍であることがさらに好ましく、０．０１〜０．１倍であることが特に好ましい。この値が０．００１倍未満であると、水溶性エラスチンの分解反応が十分に進行せず、分解物が効率的に得られない虞がある。一方、この値が０．５倍を超えると、水溶性エラスチンの分解反応自体は十分に進行しうるものの、エラスターゼ自身の分解物が生じて水溶性エラスチンの分解物へ混入してしまう虞がある。インキュベート時の温度およびインキュベート時間についても特に制限はないが、温度は好ましくは２０〜５０℃であり、より好ましくは３０〜４０℃であり、最も好ましくは３７℃である。また、インキュベート時間は、好ましくは３〜７２時間であり、より好ましくは６〜３６時間であり、特に好ましくは１２〜２４時間である。 Moreover, the elastase concentration in the reaction system at the time of incubation is preferably 0.001 to 0.5 times, more preferably 0.005 to 0.4 times that of water-soluble elastin in terms of w / v. Preferably, it is 0.008 to 0.3 times, more preferably 0.01 to 0.1 times. If this value is less than 0.001 times, the decomposition reaction of water-soluble elastin does not proceed sufficiently, and there is a possibility that a decomposition product cannot be obtained efficiently. On the other hand, if this value exceeds 0.5 times, the decomposition reaction of water-soluble elastin itself can proceed sufficiently, but a decomposition product of elastase itself may be produced and mixed into the decomposition product of water-soluble elastin. . The temperature during incubation and the incubation time are not particularly limited, but the temperature is preferably 20 to 50 ° C, more preferably 30 to 40 ° C, and most preferably 37 ° C. The incubation time is preferably 3 to 72 hours, more preferably 6 to 36 hours, and particularly preferably 12 to 24 hours.
上記のエラスターゼ酵素処理により得られた分解物は、そのまま阻害剤として用いられてもよいし、適宜精製処理が施された後に阻害剤として用いられてもよい。分解物の精製には、好ましくはシリカゲルカラム（より好ましくはオクタデシル（ＯＤＳ）−シリカゲルカラム）を用いたカラムクロマトグラフィ法が用いられる。この際、溶離液としては、Ａ液（０．１％トリフルオロ酢酸 ｉｎ ５％アセトニトリル）とＢ液（０．１％トリフルオロ酢酸 ｉｎ ９５％アセトニトリル）との混合液が用いられうる。この場合、分解物は、Ａ液とＢ液との混合比が８０／２０〜５０／５０（Ａ液／Ｂ液（ｖ／ｖ））である溶離液によって溶出される画分から精製されうる。もちろん、他の組成を有する溶離液を用いた溶出によっても分解物は精製可能であって、本発明の技術的範囲が上記の形態のみに限定されるわけではない。また、上記特定のシリカゲルカラムを用いたカラムクロマトグラフィ法以外にも、限外ろ過法、逆相クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法などの従来公知の手法によって、分解物を精製してもよい。 The degradation product obtained by the above elastase enzyme treatment may be used as an inhibitor as it is, or may be used as an inhibitor after appropriate purification treatment. For purification of the degradation product, a column chromatography method using a silica gel column (more preferably an octadecyl (ODS) -silica gel column) is preferably used. At this time, as an eluent, a mixed liquid of liquid A (0.1% trifluoroacetic acid in 5% acetonitrile) and liquid B (0.1% trifluoroacetic acid in 95% acetonitrile) can be used. In this case, the decomposed product can be purified from a fraction eluted by an eluent having a mixing ratio of A liquid and B liquid of 80/20 to 50/50 (A liquid / B liquid (v / v)). Of course, the decomposed product can be purified by elution using an eluent having another composition, and the technical scope of the present invention is not limited to the above-described form. In addition to the column chromatography method using the specific silica gel column, the degradation product may be purified by a conventionally known method such as an ultrafiltration method or a reverse phase chromatography (HPLC) method.
例えば上述の分解物を含む溶出画分に対して凍結乾燥処理を施してもよい。これにより、水溶性エラスチンのエラスターゼ分解物を粉末形態で得ることが可能である。ここで、凍結乾燥処理の具体的な手法について特に制限はなく、従来公知の知見が適宜参照されうる。 For example, lyophilization treatment may be performed on the elution fraction containing the degradation product. Thereby, it is possible to obtain the elastase degradation product of water-soluble elastin in powder form. Here, there is no restriction | limiting in particular about the specific method of a freeze-drying process, A conventionally well-known knowledge can be referred suitably.
例えば上記のようにして得られた分解物の平均分子量その他の具体的な形態について特に制限はないが、平均分子量は２，０００〜２０，０００程度であり、好ましくは５，０００〜１５，０００である。分子量がこれらの範囲に存在する分解物を阻害剤として用いた場合には、特に経口用途（飲食品、経口投与が予定される医薬）に用いられた場合の消化吸収に優れるため、好ましい。かような観点から、本発明により提供される阻害剤は、水溶性エラスチンのエラスターゼ分解物を必須に含有するものであることが、当該分解物を含有しないものよりも好ましい。かような形態によれば、ＡＣＥ阻害活性がより一層高い阻害剤が提供されうるという利点も存在する（後述する実施例を参照）。なお、水溶性エラスチンのエラスターゼ分解物の平均分子量の値としては、ＳＤＳ−ＰＡＧＥの泳動結果における中央値を算出することにより測定された値を採用するものとする。 For example, although there is no restriction | limiting in particular about the average molecular weight other specific form of the decomposition product obtained as mentioned above, An average molecular weight is about 2,000-20,000, Preferably it is 5,000-15,000. It is. When a degradation product having a molecular weight in these ranges is used as an inhibitor, it is preferable because it is excellent in digestion and absorption particularly when used for oral use (food and beverages, pharmaceuticals scheduled for oral administration). From such a viewpoint, it is preferable that the inhibitor provided by the present invention essentially contains an elastase degradation product of water-soluble elastin than that which does not contain the degradation product. According to such a form, there exists an advantage that an inhibitor with much higher ACE inhibitory activity can be provided (refer the Example mentioned later). In addition, the value measured by calculating the median value in the electrophoresis result of SDS-PAGE shall be adopted as the value of the average molecular weight of the elastase degradation product of water-soluble elastin.
なお、食品産業センター技術研究報告書No.27, 2001, 21〜26頁には、エラスターゼ活性を持つ酵素処理によって製造した水溶性エラスチン（分子量は不明）を、高脂肪食負荷ラットおよび健常者に投与したところ、血中の総コレステロール、中性脂肪等が低下し、血中脂質代謝異常が改善されたことが報告されている。しかし、この報告で用いられている水溶性エラスチンは、これまで高純度と評価されている水溶性エラスチンとはアミノ酸組成がかなり異なっている（プロリン、グリシン、アラニン、バリンが６８％に過ぎない）。そればかりか、エラスチンに特有のアミノ酸であるデスモシンおよびイソデスモシンも検出されていないことから、極度に低純度のもの、あるいはエラスチンとは異なるものではないかと推定される。 In addition, the Food Industry Center Technical Research Report No.27, 2001, pp. 21-26, water-soluble elastin (molecular weight unknown) produced by an enzyme treatment with elastase activity was applied to high-fat diet-fed rats and healthy subjects. When administered, it has been reported that blood total cholesterol, triglycerides and the like are reduced, and abnormal lipid metabolism in blood is improved. However, the water-soluble elastin used in this report is considerably different in amino acid composition from the water-soluble elastin which has been evaluated as high purity so far (only 68% of proline, glycine, alanine and valine). . In addition, since desmosine and isodesmosine, which are amino acids peculiar to elastin, have not been detected, it is presumed that they are extremely low-purity or different from elastin.
本発明の阻害剤において用いられる水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物は、易水溶性であり、水溶液として安定な性状を維持することができる。このため、医薬および飲食品に通常添加されうる成分との混和性に優れている。また、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物は、無毒、無味、無臭であって、安全性にも優れている。このため、においや味といった官能特性への影響や、副作用の心配がなく、日常の食生活に適宜取り入れて無理なく摂取することができる。また、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物は天然タンパク質としての特性を持ち、たとえ大量に摂取したとしても無害であり、体内では栄養源として利用されうる。 The water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate used in the inhibitor of the present invention is easily water-soluble and can maintain stable properties as an aqueous solution. For this reason, it is excellent in miscibility with the component which can be normally added to a pharmaceutical and food-drinks. In addition, water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate is non-toxic, tasteless and odorless and has excellent safety. For this reason, there is no influence on sensory characteristics such as odor and taste, and there is no worry about side effects. In addition, water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate has properties as a natural protein, is harmless even if ingested in large amounts, and can be used as a nutrient source in the body.
本発明の一形態によるアンジオテンシン変換酵素阻害剤は、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を有効成分として含む。ここで、「有効成分として含む」とは、本発明に係る阻害剤が、所望のＡＣＥ阻害効果を発揮するのに充分な量（すなわち、有効量）の水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を含有することを意味する。 The angiotensin converting enzyme inhibitor by one form of this invention contains water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate as an active ingredient. Here, “containing as an active ingredient” means that the inhibitor according to the present invention contains an amount of water-soluble elastin or an elastase hydrolyzate thereof sufficient to exhibit a desired ACE inhibitory effect (that is, an effective amount). It means to contain.
したがって、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を、そのままＡＣＥ阻害剤として用いてもよいが、このような有効量で有効成分を含み、かつＡＣＥ阻害効果を損なわない限りにおいて、本発明に係る阻害剤は、所望の製品形態に応じた薬理学的に許容されうる担体や、他の添加剤を含んでもよい。このような担体、および添加剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、香料、緩衝剤、増粘剤、着色剤、安定剤、乳化剤、分散剤、懸濁化剤、崩壊剤、滑沢剤、防腐剤等が挙げられる。本発明に係る阻害剤は、経口または非経口的に投与または摂取することができる。経口用の形態としては、例えば、食品、食品添加剤、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤などの固形製剤、溶液、懸濁液、乳濁液などの液状製剤の形態が挙げられる。非経口用の形態としては、例えば、注射剤、点滴剤、外用剤や座剤の形態が挙げられる。これらは、当該技術分野で通常行われている手法により、必要に応じて担体や添加剤とともに、製剤化もしくは製品化することができる。なお、上述したように、経口的に投与・摂取される製剤の形態を有する阻害剤は、水溶性エラスチンのエラスターゼ加水分解物を含むことが、当該阻害剤の投与・摂取後の消化吸収の観点から、好ましい。 Therefore, water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate may be used as it is as an ACE inhibitor, but as long as it contains an active ingredient in such an effective amount and does not impair the ACE inhibitory effect, the inhibition according to the present invention The agent may contain a pharmacologically acceptable carrier according to the desired product form and other additives. Examples of such carriers and additives include excipients, binders, fragrances, buffers, thickeners, colorants, stabilizers, emulsifiers, dispersants, suspending agents, disintegrating agents, lubricants. Agents, preservatives and the like. The inhibitor according to the present invention can be administered or ingested orally or parenterally. Examples of oral forms include solid preparations such as foods, food additives, tablets, powders, fine granules, granules, capsules, pills, sustained release agents, solutions, suspensions, emulsions, and the like. The form of the liquid formulation is mentioned. Examples of parenteral forms include injections, drops, external preparations, and suppositories. These can be formulated or commercialized, together with carriers and additives as necessary, by techniques commonly used in the art. In addition, as described above, the inhibitor having the form of a preparation that is orally administered / ingested contains an elastase hydrolyzate of water-soluble elastin, so that digestive absorption after administration / ingestion of the inhibitor is considered. Therefore, it is preferable.
本発明に係る阻害剤において、所望のＡＣＥ阻害効果を得るためには、上述した有効成分を、有効成分である水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物換算で、成人一人の体重１ｋｇ当たり、１日に３０〜６０００ｍｇ投与または摂取することが好ましく、より好ましくは５０〜２０００ｍｇであり、さらに好ましくは１００〜１０００ｍｇである。１日の投与量もしくは摂取量が上記下限値未満であると、充分な効果が得られない虞がある。また上記上限値を超えて投与または摂取しても、それ以上の効果の増加はあまり望めない。本発明においては、この量の有効成分を１日１〜数回に分けて、阻害剤そのままの形態で、または、医薬、飲食品等の所望の形態とした上で、投与または摂取すればよい。 In the inhibitor according to the present invention, in order to obtain a desired ACE inhibitory effect, the above-mentioned active ingredient is converted to the active ingredient water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate in 1 day per kg of body weight of one adult. It is preferable to administer or ingest 30 to 6000 mg, more preferably 50 to 2000 mg, and still more preferably 100 to 1000 mg. If the daily dose or intake is less than the above lower limit, sufficient effects may not be obtained. Moreover, even if it is administered or ingested in excess of the above upper limit value, further increase in the effect cannot be expected. In the present invention, this amount of the active ingredient is divided into 1 to several times a day, and it may be administered or ingested in the form of the inhibitor as it is or in a desired form such as a medicine, food or drink. .
本発明の阻害剤における有効成分である水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物は、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ；Angiotensin Converting Enzyme）の阻害作用を有する（後述する実施例を参照）。ＡＣＥはアンジオテンシンＩから生理活性を有するアンジオテンシンＩＩを生成する反応を触媒する酵素である。そして、アンジオテンシンＩＩは血圧調節系において昇圧作用を示す生理活性ペプチドであることから、ＡＣＥ阻害作用を有することが今般見出された水溶性エラスチンおよびそのエラスターゼ加水分解物は、血圧降下剤として作用することが期待されている。また、ＡＣＥはキニンの分解に関与するキニナーゼＩＩと同一の酵素であることから、ＡＣＥ阻害によってブラジキニン、さらにはプロスタグランジンや一酸化窒素（ＮＯ）の増量を介してもまた、血圧調節系における降圧系が活性化される。したがって、本発明のＡＣＥ阻害剤は、高血圧症の予防および／または治療のための、血圧降下剤として使用できる。すなわち、本発明によれば、上記ＡＣＥ阻害剤を含有する血圧降下剤が提供される。 The water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate, which is an active ingredient in the inhibitor of the present invention, has an inhibitory action on angiotensin converting enzyme (ACE) (see Examples described later). ACE is an enzyme that catalyzes the reaction of producing angiotensin II having physiological activity from angiotensin I. And since angiotensin II is a physiologically active peptide that exhibits a pressor action in the blood pressure regulation system, water-soluble elastin and its elastase hydrolyzate that have been found to have an ACE inhibitory action act as a blood pressure lowering agent. It is expected that. In addition, since ACE is the same enzyme as kininase II involved in the degradation of kinin, ACE inhibition also causes an increase in bradykinin, prostaglandin and nitric oxide (NO), and also in the blood pressure regulation system. The hypotensive system is activated. Therefore, the ACE inhibitor of the present invention can be used as an antihypertensive agent for the prevention and / or treatment of hypertension. That is, according to the present invention, a blood pressure lowering agent containing the ACE inhibitor is provided.
また、本発明の他の形態によれば、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物の有効量を、哺乳動物に投与するかまたは摂取させることを含む、当該哺乳動物におけるＡＣＥを阻害する方法、当該哺乳動物の血圧を低下させる方法、あるいは、当該哺乳動物における高血圧症を予防および／または治療する方法が提供される。なお、「有効量」とは、ＡＣＥ阻害や、これによる血圧の低下、高血圧の予防および／または治療といった所望の効果を発揮する上で少なくとも必要とされる有効成分の量を意味する。 According to another aspect of the present invention, there is provided a method for inhibiting ACE in a mammal, comprising administering or ingesting the mammal with an effective amount of water-soluble elastin or an elastase hydrolyzate thereof, Methods are provided for reducing blood pressure in a mammal, or for preventing and / or treating hypertension in the mammal. The “effective amount” means an amount of an active ingredient that is at least required for exerting a desired effect such as ACE inhibition, a decrease in blood pressure, and prevention and / or treatment of hypertension.
本発明に係る阻害剤は、それ単独でも使用することができるが、医薬、飲食品などの種々の組成物に添加剤として含有させることができ、ＡＣＥ阻害効果を有する組成物を提供することができる。 Although the inhibitor according to the present invention can be used alone, it can be added as an additive to various compositions such as pharmaceuticals, foods and drinks, and provides a composition having an ACE inhibitory effect. it can.
本発明に係る血圧降下剤として用いられうる医薬組成物は、上述したように、本発明に係るＡＣＥ阻害剤を含むことを特徴とする。ここで、該医薬組成物において、ＡＣＥ阻害剤の有効成分を有効量含むように、医薬組成物は、該阻害剤を適切な量で含むことが好ましい。 As described above, the pharmaceutical composition that can be used as the antihypertensive agent according to the present invention includes the ACE inhibitor according to the present invention. Here, it is preferable that the pharmaceutical composition contains the inhibitor in an appropriate amount so that the pharmaceutical composition contains an effective amount of the active ingredient of the ACE inhibitor.
したがって、本発明による医薬組成物は、所望の効果を発揮するのに充分な量（すなわち、有効量）の水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を含有するものであって、製剤化のために許容されうる添加剤を併用して、常法に従い、経口製剤または非経口製剤として調製したものである。このような製剤化のために許容されうる添加剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、緩衝剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、結合剤、増粘剤、分散剤、懸濁化剤、崩壊剤などを挙げることができる。本発明において、医薬組成物が経口製剤の場合には、食品、食品添加剤、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、徐放剤などの固形製剤、溶液、懸濁液、乳濁液などの液状製剤の形態をとることができる。また、非経口製剤の場合には、注射剤、点滴剤、外用剤や坐剤の形態をとることができる。簡易性の点からは、経口製剤であることが好ましい。 Accordingly, the pharmaceutical composition according to the present invention contains an amount of water-soluble elastin or an elastase hydrolyzate thereof sufficient to exert a desired effect, It was prepared as an oral preparation or a parenteral preparation according to a conventional method using an acceptable additive in combination. Additives that are acceptable for such formulations include, for example, excipients, stabilizers, preservatives, wetting agents, emulsifiers, lubricants, sweeteners, colorants, flavors, buffers, antioxidants. Agents, pH adjusters, binders, thickeners, dispersants, suspending agents, disintegrating agents and the like. In the present invention, when the pharmaceutical composition is an oral preparation, it is a solid preparation such as a food, a food additive, a tablet, a powder, a fine granule, a granule, a capsule, a pill, or a sustained release agent, a solution, a suspension. It can take the form of liquid preparations such as liquids and emulsions. In the case of parenteral preparations, it can take the form of injections, drops, external preparations, and suppositories. From the viewpoint of simplicity, an oral preparation is preferable.
本発明に係る医薬組成物は、必要に応じて、他の補助成分をさらに含んでいてもよい。このような併用可能な他の補助成分としては、例えば、ビタミン成分（例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ）、抗生物質、アミノ酸類、ペプチド類、ミネラル類（例えば、亜鉛、鉄、銅、マンガンなど）、核酸、多糖類、脂肪酸類、生薬などが挙げられる。 The pharmaceutical composition according to the present invention may further contain other auxiliary components as necessary. Examples of other auxiliary components that can be used in combination include vitamin components (for example, vitamin C and vitamin E), antibiotics, amino acids, peptides, and minerals (for example, zinc, iron, copper, manganese, etc.) , Nucleic acids, polysaccharides, fatty acids, herbal medicines and the like.
さらに製剤化にあたって、本発明に係る有効成分以外の１種以上の医療上有効な有効成分（活性成分）をさらに添加し配合してもよい。また本発明に係る有効成分の投与にあたっては、本発明に係る有効成分以外の１種以上の医療上有効な有効成分を組み合わせて投与してもよい。 Furthermore, in formulating, one or more medically effective active ingredients (active ingredients) other than the active ingredient according to the present invention may be further added and blended. In administration of the active ingredient according to the present invention, one or more kinds of medically effective active ingredients other than the active ingredient according to the present invention may be administered in combination.
本発明によれば、上述したＡＣＥ阻害剤を含有する飲食品もまた、提供される。ここで、当該飲食品は、ＡＣＥ阻害剤の有効成分を有効量含むように、当該阻害剤を適切な量で含むことが好ましい。ここで「有効成分を有効量含む」とは、個々の飲食品を通常喫食される量摂取した結果、有効成分としての効果を発揮しうるような量で有効成分を含有することを意味する。本発明に係る飲食品には、本発明に係る有効成分をそのまま、または上述したような阻害剤の形態で、飲食品に配合してもよい。また、本発明に係る飲食品は、本発明に係る有効成分に安定剤等の慣用の添加成分を加えて飲食品として調製したもの、各種タンパク質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類等を、それらにさらに配合して調製したもの、液状、半液体状若しくは固体状にしたもの、ペースト状にしたもの、または、一般の飲食品へ有効成分を添加したものであってもよい。 According to this invention, the food / beverage products containing the ACE inhibitor mentioned above are also provided. Here, it is preferable that the said food / beverage products contain the said inhibitor in an appropriate quantity so that the effective amount of the active ingredient of an ACE inhibitor may be included. Here, “including an effective amount of an active ingredient” means that the active ingredient is contained in such an amount that an effect as an active ingredient can be exhibited as a result of ingesting an amount of each food or drink normally consumed. In the food and drink according to the present invention, the active ingredient according to the present invention may be blended in the food and drink as it is or in the form of an inhibitor as described above. In addition, the food and drink according to the present invention are prepared as food and drink by adding conventional additives such as stabilizers to the active ingredient according to the present invention, various proteins, sugars, fats, trace elements, vitamins, etc. Those prepared by further blending them, liquids, semi-liquids or solids, pastes, or general foods and drinks with active ingredients added may be used.
本発明において、「飲食品」は、医薬以外のものであって、哺乳動物が経口摂取可能な形態のものであれば特に制限はなく、その形態も液状物（溶液、懸濁液、乳濁液など）、半液体状物、粉末、または固体成形物のいずれのものであってもよい。このため飲食品は、例えば飲料の形態であってもよく、また、サプリメントのような栄養補助食品の錠剤形態であってもよい。 In the present invention, the “food or drink” is not a drug and is not particularly limited as long as it is in a form that can be taken orally by mammals, and the form is also a liquid (solution, suspension, emulsion). Liquid, etc.), semi-liquid, powder, or solid molded product. Therefore, the food and drink may be in the form of a beverage, for example, or may be in the form of a dietary supplement tablet such as a supplement.
飲食品として具体的には、例えば、即席麺、レトルト食品、缶詰、電子レンジ食品、即席スープ・みそ汁類、フリーズドライ食品などの即席食品類；清涼飲料、果汁飲料、野菜飲料、豆乳飲料、コーヒー飲料、茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、栄養飲料、アルコール飲料などの飲料類；パン、パスタ、麺、ケーキミックス、唐揚げ粉、パン粉などの小麦粉製品；飴、キャラメル、チューイングガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、デザート菓子などの菓子類；ソース、トマト加工調味料、風味調味料、調理ミックス、たれ類、ドレッシング類、つゆ類、カレー・シチューの素類などの調味料；加工油脂、バター、マーガリン、マヨネーズなどの油脂類；乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料、アイスクリーム類、クリーム類などの乳製品；魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品などの水産加工品；畜肉ハム・ソーセージなどの畜産加工品；農産缶詰、ジャム・マーマレード類、漬け物、煮豆、シリアルなどの農産加工品；冷凍食品；栄養食品などが挙げられる。 Specific examples of food and drink include instant noodles, retort foods, canned foods, microwave foods, instant soups and miso soups, freeze-dried foods, etc .; soft drinks, fruit juice drinks, vegetable drinks, soy milk drinks, coffee Beverages such as beverages, tea beverages, powdered beverages, concentrated beverages, nutritional beverages, alcoholic beverages; flour products such as bread, pasta, noodles, cake mixes, fried flour, bread crumbs; rice cakes, caramels, chewing gums, chocolates, cookies, Confectionery such as biscuits, cakes, pies, snacks, crackers, Japanese confectionery, dessert confectionery; sauces, processed tomato seasonings, flavor seasonings, cooking mixes, sauces, dressings, soups, curry and stew Seasonings; processed fats and oils, butter, margarine, mayonnaise, etc .; milk drinks, yogurts, lactic acid bacteria drinks Dairy products such as ice cream and cream; processed fishery products such as fish ham and sausages and fish paste products; processed livestock products such as livestock ham and sausages; canned agricultural products, jams and marmalades, pickles, boiled beans, cereals, etc. Processed agricultural products; frozen foods; nutritional foods.
本発明に係る飲食品は、高血圧症に罹患しているか、または罹患していることが疑われる者、あるいは高血圧症への罹患のリスクが高い者に対して好適に使用することができる。ここで、高血圧症への罹患のリスクが高い者としては、例えば、体組成や食生活をはじめとする各種の指標を考慮して、または、健康診断等の診断・診察から、当該リスクが高いと判断された者や、そのようなリスクが高いと本人または周囲の者から認識されるに至った者が含まれる。 The food / beverage products according to the present invention can be suitably used for those who have or are suspected of suffering from hypertension, or who have a high risk of suffering from hypertension. Here, as a person having a high risk of suffering from hypertension, for example, taking into account various indicators including body composition and dietary life, or from a diagnosis / diagnosis such as a health checkup, the risk is high And those who have been perceived by the person or others as having such a high risk.
本発明において「飲食品」には、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、疾病リスク低減表示が付された食品、または、病者用食品のような分類のものも包含される。さらに「飲食品」という用語は、ヒト以外の哺乳動物を対象として使用される場合には、飼料を含む意味で用いられうる。ここでいう特定保健用食品とは、高血圧症の予防および／または改善等を目的として食品の製造または販売等を行う場合に、保健上の観点から、各国（例えば我が国）において法上の何らかの制限を受けることがある食品をいう。このような食品は、食品が疾病リスクを低減する可能性があること表示した食品、すなわち、疾病リスク低減表示を付した食品であってもよい。ここで、疾病リスク低減表示とは、疾病リスクを低減する可能性のある食品の表示であって、ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品規格委員会（コーデックス委員会）の定める規格に基づいて、またはその規格を参考にして、定められた表示または認められた表示でありうる。 In the present invention, “food and beverage” includes foods classified as health foods, functional foods, foods for specified health use, dietary supplements, foods with a disease risk reduction label, or foods for the sick. Is done. Furthermore, the term “food or drink” can be used to include feed when used for mammals other than humans. The food for specified health here refers to any legal restrictions in each country (for example, Japan) from the viewpoint of health when manufacturing or selling food for the purpose of prevention and / or improvement of hypertension. It means food that may be received. Such a food may be a food that indicates that the food may reduce the risk of disease, that is, a food with a disease risk reduction label. Here, the disease risk reduction label is a label for foods that may reduce the disease risk, and is based on or based on the standard established by the FAO / WHO Joint Food Standards Committee (Codex Committee). The display may be a prescribed display or an approved display with reference to FIG.
本発明の飲食品においては、上述した有効成分に加えて、他の機能を有する成分をさらに添加してもよい。また例えば、日常生活で摂取する食品、健康食品、機能性食品、サプリメント（例えば、カルシウム、マグネシウム等のミネラル類、ビタミンＫ等のビタミン類を１種以上含有する食品）に本発明の有効成分を配合することにより、本発明による効果に加えて、他の成分に基づく機能を併せ持つ飲食品を提供することができる。 In the food / beverage products of this invention, in addition to the active ingredient mentioned above, you may further add the component which has another function. Further, for example, the active ingredient of the present invention is added to foods, health foods, functional foods and supplements (for example, foods containing one or more vitamins such as minerals such as calcium and magnesium and vitamin K) consumed in daily life. By mix | blending, in addition to the effect by this invention, the food / beverage products which have the function based on another component can be provided.
本発明の他の形態によれば、上述したＡＣＥ阻害剤の有効成分である水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を有効量含有する飲食品であって、高血圧症を予防および／または改善する機能を有し、その機能表示が付された飲食品が提供される。ここで飲食品に付される機能表示は、例えば、製品の本体、容器、包装、説明書、添付文書、または宣伝物のいずれかに付することができる。 According to another aspect of the present invention, there is provided a food / beverage product containing an effective amount of water-soluble elastin or an elastase hydrolyzate thereof, which is an active ingredient of the above-mentioned ACE inhibitor, and has a function of preventing and / or improving hypertension. The food / beverage products which have the function display are provided. Here, the function display attached to the food or drink can be attached to, for example, any of the main body of the product, the container, the packaging, the instruction, the attached document, or the promotional material.
本発明による飲食品の製造にあたっては、通常の飲食品の処方設計に用いられている糖類、香料、果汁、食品添加剤、安定剤などを適宜添加することができる。飲食品の製造は、当該技術分野に公知の製造技術を参照して実施することができる。本発明に係る飲食品は様々な形態を取ることができ、公知の医薬品の製造技術に準じて本発明に係る飲食品を製造してもよい。その場合には、本発明に係る阻害剤や医薬組成物の製造の項目において述べたような担体や添加剤を用いて製造することができる。また、製造段階において、本発明における機能以外の機能を発揮する他の成分または他の機能性食品と組み合わせることによって、多機能性の飲食品としてもよい。 In the production of foods and drinks according to the present invention, sugars, fragrances, fruit juices, food additives, stabilizers and the like that are used in the usual food and beverage product design can be added as appropriate. Manufacture of food-drinks can be implemented with reference to a manufacturing technique well-known in the said technical field. The food / beverage products according to the present invention can take various forms, and the food / beverage products according to the present invention may be manufactured according to known pharmaceutical manufacturing techniques. In that case, it can be produced using a carrier or additive as described in the item of production of the inhibitor or pharmaceutical composition according to the present invention. Moreover, in a manufacturing stage, it is good also as multifunctional food / beverage products by combining with the other component which exhibits functions other than the function in this invention, or another functional food.
本発明に係る医薬組成物および飲食品を投与または摂取する場合、本発明に係る有効成分の投与量または摂取量は、受容者、受容者の年齢および体重、症状、投与時間、剤形、投与方法、薬剤の組み合わせ等に依存して決定されうる。本発明においては、少なくともＡＣＥ阻害効果を得るために必要な１日あたりの有効成分の量を投与または摂取できるように、１日あたりの組成物または飲食品の投与量または摂取量を考慮し、組成物または飲食品中の含有量を適宜設定することが好ましい。 When administering or ingesting the pharmaceutical composition and food or drink according to the present invention, the dose or intake of the active ingredient according to the present invention is the recipient, the age and weight of the recipient, symptoms, administration time, dosage form, administration It can be determined depending on the method, the combination of drugs and the like. In the present invention, taking into account the dose or intake of the composition or food / drink per day so that at least the amount of the active ingredient per day necessary for obtaining the ACE inhibitory effect can be administered or ingested, It is preferable to appropriately set the content in the composition or food or drink.
したがって、本発明による医薬組成物または飲食品は、好ましくは、有効成分である水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ加水分解物を、当該有効成分換算で成人一人に１日あたり好ましくは３０〜６０００ｍｇ、より好ましくは５０〜２０００ｍｇ、さらに好ましくは１００〜１０００ｍｇの範囲で提供される量含む。 Therefore, the pharmaceutical composition or food or drink according to the present invention preferably contains water-soluble elastin or its elastase hydrolyzate as an active ingredient, preferably 30 to 6000 mg per day per adult in terms of the active ingredient. Includes an amount provided in the range of 50-2000 mg, more preferably 100-1000 mg.
以下、実施例を用いて本発明の好適な実施形態についてより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲が下記の実施例のみに限定して解釈されるべきではない。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in more detail by way of examples. However, the technical scope of the present invention should not be construed as being limited to the following examples.
（概要）
以下ではまず、ＢＳＥ等の問題のないブタの大動脈組織から高純度の水溶性エラスチンを調製し、種々の酵素を用いて高分子の水溶性エラスチンを低分子化してエラスチン由来ペプチドを得る条件検討を実施した。具体的には、酵素の種類、濃度、反応時間等を検討し、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ装置を用いて反応の進行状況を追跡した。次に、得られたエラスチン由来ペプチドについて、ＡＣＥ阻害能の測定を実施した。
(Overview)
In the following, we will first examine the conditions for obtaining elastin-derived peptides by preparing high-purity water-soluble elastin from porcine aortic tissues such as BSE, etc., and reducing the molecular weight of water-soluble elastin as a polymer using various enzymes. Carried out. Specifically, the type, concentration, reaction time, etc. of the enzyme were examined, and the progress of the reaction was followed using an SDS-PAGE apparatus. Next, the ACE inhibitory ability was measured about the obtained elastin origin peptide.
（ブタ大動脈組織からの高純度水溶性エラスチンの調製）
以下の手法により、特許文献１の記載を参照しつつ、ブタ大動脈組織から、水溶性エラスチンを調製した。
(Preparation of high purity water-soluble elastin from porcine aortic tissue)
Water-soluble elastin was prepared from porcine aorta tissue by the following method with reference to the description of Patent Document 1.
まず、ブタ大動脈をマスコロイダー（磨砕機）で処理し、処理後の組織に湿重量の約５倍量のアセトンを加え、室温にて２４時間撹拌した。次いで、ろ過脱水式遠心分離機にて遠心分離（２，０００ｒｐｍ、室温、５分）を行い、アセトンを除去後、乾燥（５０℃、３日間）して、アセトン脱脂組織を得た。 First, the porcine aorta was treated with a mass colloid (grinding machine), about 5 times the wet weight of acetone was added to the treated tissue, and the mixture was stirred at room temperature for 24 hours. Next, centrifugation (2,000 rpm, room temperature, 5 minutes) was performed with a filtration dehydration-type centrifuge, and acetone was removed, followed by drying (50 ° C., 3 days) to obtain an acetone defatted tissue.
得られた脱脂組織に、脱脂組織重量の約１０倍量の1M NaClを加え、室温にて１時間撹拌した。（室温、１時間）。次いで、ろ過脱水式遠心分離機にて遠心分離（２，０００ｒｐｍ、室温、５分）を行い、残渣を回収した。この残渣に、脱脂組織重量の約１０倍量の蒸留水を加え、当該残渣を洗浄（室温、１時間）した。その後、再度、ろ過脱水式遠心分離機にて遠心分離（２，０００ｒｐｍ、室温、５分）を行い、残渣を回収して、NaCl抽出残渣を得た。 To the obtained defatted tissue, 1M NaCl of about 10 times the weight of the defatted tissue was added and stirred at room temperature for 1 hour. (Room temperature, 1 hour). Subsequently, the residue was collected by centrifugal separation (2,000 rpm, room temperature, 5 minutes) using a filtration dehydration centrifuge. Distilled water of about 10 times the degreased tissue weight was added to this residue, and the residue was washed (room temperature, 1 hour). Thereafter, the mixture was again centrifuged (2,000 rpm, room temperature, 5 minutes) with a filtration dehydration centrifuge, and the residue was recovered to obtain a NaCl extraction residue.
脱脂組織重量の約１０倍量の0.1M NaOHを１００℃に加熱し、そこに上記で得られたNaCl残渣を加え、撹拌（１００℃、１５分）した。次いで、ろ過脱水式遠心分離機にて遠心分離（２，０００ｒｐｍ、室温、５分）を行い、残渣を回収した。この残渣に、脱脂組織重量の約１０倍量の蒸留水を加え、残渣を洗浄（室温、１時間）した。その後、再度、ろ過脱水式遠心分離機にて遠心分離（２，０００ｒｐｍ、室温、５分）を行い、残渣を回収して、不溶性エラスチンを得た。 About 10 times the amount of the defatted tissue weight 0.1M NaOH was heated to 100 ° C., and the NaCl residue obtained above was added thereto and stirred (100 ° C., 15 minutes). Subsequently, the residue was collected by centrifugal separation (2,000 rpm, room temperature, 5 minutes) using a filtration dehydration centrifuge. Distilled water of about 10 times the degreased tissue weight was added to this residue, and the residue was washed (room temperature, 1 hour). Thereafter, centrifugation (2,000 rpm, room temperature, 5 minutes) was performed again using a filtration dehydration centrifuge, and the residue was recovered to obtain insoluble elastin.
脱脂組織重量の約１５倍量の0.75M NaOHを１００℃に加熱し、そこに上記で得られた不溶性エラスチンを加え、撹拌（１００℃、５０分）した。次いで、撹拌後の溶液を氷冷後、酢酸を用いて中和し、冷却遠心分離機にて遠心分離（５，０００rpm、４℃、２０分）を行い、上清を回収した。得られた上清を透析（４℃、４日）した後、凍結乾燥処理を施して、粉末状の高純度水溶性エラスチンを得た。 About 15 times the weight of the defatted tissue, 0.75 M NaOH was heated to 100 ° C., and the insoluble elastin obtained above was added thereto and stirred (100 ° C., 50 minutes). Next, the stirred solution was ice-cooled, neutralized with acetic acid, centrifuged (5,000 rpm, 4 ° C., 20 minutes) with a cooling centrifuge, and the supernatant was collected. The obtained supernatant was dialyzed (4 ° C., 4 days) and then freeze-dried to obtain a powdery high-purity water-soluble elastin.
（エラスターゼを用いた水溶性エラスチンの分解）
上記で調製したブタ大動脈組織由来の水溶性エラスチンについて、消化酵素としてエラスターゼを用いた分解反応の検討を行った。エラスターゼの濃度を０．０１ｍｇ／ｍｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ、１．０ｍｇ／ｍｌの３種に設定し、それぞれをＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ８．８）に溶解した水溶性エラスチン（２．０ｍｇ／ｍｌ）とともに、反応温度３７℃で３時間、６時間、２４時間インキュベートして、分解反応を進行させた。この際、水溶性エラスチンが分解される様子をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＣＢＢ染色）により追跡した。
(Decomposition of water-soluble elastin using elastase)
The water-soluble elastin derived from porcine aorta tissue prepared above was examined for a decomposition reaction using elastase as a digestive enzyme. Water-soluble elastin in which the concentration of elastase is set to 0.01 mg / ml, 0.1 mg / ml, and 1.0 mg / ml, and each is dissolved in Tris-HCl buffer (0.2 M, pH 8.8) (2.0 mg / ml) was incubated at 37 ° C. for 3 hours, 6 hours, and 24 hours to allow the degradation reaction to proceed. At this time, the state of decomposition of water-soluble elastin was followed by SDS-PAGE (CBB staining).
その結果、０．０１ｍｇ／ｍｌの酵素濃度においては、図１に示すように、２４時間後においても水溶性エラスチンの分子量分布がほとんど変化することなく、分解が不十分であったことがわかる。一方、０．１ｍｇ／ｍｌの酵素濃度においては、図２に示すように、反応時間が３時間、６時間と経過するにつれて分子量が低分子量側（下方向）へと変化していく様子が観察され、２４時間後には水溶性エラスチンが十分に分解されることが確認された。なお、図２に示す結果において分子量２８．０ｋＤａ付近に検出されている濃いバンドはエラスターゼに由来するものである。また、１ｍｇ/ｍｌの酵素濃度では、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて短時間での分解が観察され、効率的な分解が期待されるものの、反応溶液の様子をＨＰＬＣで検討したところ、溶出時間１０分から２０分の範囲にエラスターゼ自身の分解物が溶出され、それらは水溶性エラスチンの分解物と同時に溶出され混ざり合ってしまう。また、エラスターゼの濃度が濃いために、酵素の自己消化由来の溶出物が多くなってしまい、水溶性エラスチン分解物の分離・分析に困難を伴うものと考えられた。そこで、水溶性エラスチンを十分に分解することができ、かつ、水溶性エラスチン分解物を効率的に精製することのできる最適なエラスターゼの濃度は０．１ｍｇ／ｍｌ程度であると推定された。 As a result, at an enzyme concentration of 0.01 mg / ml, as shown in FIG. 1, it was found that the molecular weight distribution of water-soluble elastin hardly changed even after 24 hours, and the degradation was insufficient. On the other hand, at the enzyme concentration of 0.1 mg / ml, as shown in FIG. 2, it was observed that the molecular weight changed to the lower molecular weight side (downward) as the reaction time passed 3 hours and 6 hours. It was confirmed that the water-soluble elastin was sufficiently degraded after 24 hours. In the results shown in FIG. 2, the dark band detected in the vicinity of a molecular weight of 28.0 kDa is derived from elastase. In addition, when the enzyme concentration was 1 mg / ml, degradation in a short time was observed in SDS-PAGE and efficient degradation was expected, but when the reaction solution was examined by HPLC, the elution time was 10 minutes to 20 minutes. The elastase degradation product is eluted in the range, and they are eluted and mixed together with the water-soluble elastin degradation product. Moreover, since the concentration of elastase was high, the amount of eluate derived from the enzyme's self-digestion increased, and it was thought that separation / analysis of water-soluble elastin degradation products would be difficult. Thus, it has been estimated that the optimum concentration of elastase capable of sufficiently degrading water-soluble elastin and efficiently purifying the water-soluble elastin degradation product is about 0.1 mg / ml.
（他の消化酵素による水溶性エラスチンの分解）
上記で調製したブタ大動脈組織由来の水溶性エラスチンについて、エラスターゼ以外のタンパク質分解酵素であるキモトリプシンおよびトリプシンを用いて分解反応を検討した。各酵素濃度はエラスターゼの最適濃度である０．１ｍｇ／ｍｌとし、反応温度は３７℃で、３時間、６時間、２４時間後の分解の様子をエラスターゼの場合と同様にＳＤＳ−ＰＡＧＥにより調べた（図３（キモトリプシン処理）および図４（トリプシン処理））。
(Degradation of water-soluble elastin by other digestive enzymes)
For the water-soluble elastin derived from porcine aorta tissue prepared above, the degradation reaction was examined using chymotrypsin and trypsin, which are proteolytic enzymes other than elastase. Each enzyme concentration was 0.1 mg / ml which is the optimal concentration of elastase, the reaction temperature was 37 ° C., and the degradation after 3 hours, 6 hours and 24 hours was examined by SDS-PAGE as in the case of elastase. (FIG. 3 (chymotrypsin treatment) and FIG. 4 (trypsin treatment)).
その結果、キモトリプシンまたはトリプシンを用いた分解処理では、２４時間後においても分子量分布の変化が小さく顕著な分子量の低下が認められず、十分に分解することができなかった。このように両酵素を用いた場合には水溶性エラスチンを十分に低分子量化することが困難であることが示されたことから、水溶性エラスチンの分解反応にはエラスターゼ（酵素濃度０．１ｍｇ／ｍｌ程度）が最適であることが確認された。 As a result, in the degradation treatment using chymotrypsin or trypsin, even after 24 hours, the change in the molecular weight distribution was small and no significant decrease in molecular weight was observed, and the degradation could not be sufficiently achieved. Thus, when both enzymes were used, it was shown that it was difficult to sufficiently reduce the molecular weight of water-soluble elastin. Therefore, elastase (enzyme concentration 0.1 mg / ml) was used for the decomposition reaction of water-soluble elastin. (about ml) was confirmed to be optimal.
（簡易カラムを用いた水溶性エラスチン分解物の精製）
上記で、水溶性エラスチンの分解には濃度０．１ｍｇ／ｍｌ程度のエラスターゼを用いて約３７℃にて２４時間程度、処理を行うことが好ましいことが示された。ここでは、最終的に水溶性エラスチン分解物のみを精製するために、Ｓｅｐ−Ｐａｋ Ｃ−１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いたエラスチン分解物の分離を実施した。試料の溶出にはＡ液（０．１％ＴＦＡ ｉｎ ５％ＣＨ３ＣＮ）およびＢ液（０．１％ＴＦＡ ｉｎ ９５％ＣＨ３ＣＮ）（ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、ＣＨ３ＣＮ：アセトニトリル）の混合率を調節して溶出を行った。その結果、Ｂ液の割合が０％の段階においては、緩衝液由来の塩のみが溶出され、Ｂ液が３５％の割合において目的の分解物が溶出された。最後にＢ液の割合を１００％に上昇させエラスターゼのみの溶出を行い、順次各々の成分を分離した。このようにして、水溶性エラスチン分解物の画分のみを精製し、溶出試料を凍結乾燥し、目的物を白色粉末で得た。また、収率は１回目の調製が水溶性エラスチン１８．８ｍｇからエラスターゼ分解物１５．９ｍｇ（８４．６％）、２回目の調製が４５．８ｍｇから２７．７ｍｇ（６０．５％）と、いずれも６０〜９０％の高い収率で目的物（水溶性エラスチン分解物）を得ることができた。なお、得られた水溶性エラスチン分解物の平均分子量は１０，０００であった。
(Purification of water-soluble elastin degradation product using a simple column)
As described above, it was shown that it is preferable to perform treatment at about 37 ° C. for about 24 hours using elastase with a concentration of about 0.1 mg / ml for the degradation of water-soluble elastin. Here, in order to finally purify only the water-soluble elastin degradation product, the elastin degradation product was separated using a Sep-Pak C-18 column (manufactured by Waters). For elution of sample, solution A (0.1% TFA in 5% CH 3 CN) and solution B (0.1% TFA in 95% CH 3 CN) (TFA: trifluoroacetic acid, CH 3 CN: acetonitrile) Elution was performed by adjusting the mixing ratio. As a result, when the ratio of the B liquid was 0%, only the salt derived from the buffer solution was eluted, and the target degradation product was eluted at the ratio of the B liquid of 35%. Finally, the ratio of the liquid B was increased to 100%, elastase alone was eluted, and each component was sequentially separated. Thus, only the fraction of the water-soluble elastin degradation product was purified, and the eluted sample was lyophilized to obtain the target product as a white powder. The yield of the first preparation was 18.8 mg of water-soluble elastin to 15.9 mg (84.6%) of an elastase degradation product, and the second preparation was 45.8 mg to 27.7 mg (60.5%). In either case, the target product (water-soluble elastin degradation product) could be obtained with a high yield of 60 to 90%. In addition, the average molecular weight of the obtained water-soluble elastin degradation product was 10,000.
（水溶性エラスチン分解物によるＡＣＥ阻害能の評価）
ＡＣＥ阻害活性の測定には、蛍光基質であるAbz-ε-Acp-Ala-Phe(p-NO2)-Leu-OH（渡辺化学工業）を使用した。反応は０．２Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０＋０．０２Ｍ ＮａＣｌ）緩衝液中で行い、酵素としてはウサギ（rabbit）ＡＣＥ（Ｓｉｇｍａ社製）を使用した。具体的には、基質溶液（０．５ｐｐｍ、２ｍｌ）に酵素（９ｕｎｉｔ、０．５ｍｌ）を加え、上記で調製した水溶性エラスチンまたは水溶性エラスチン分解物を阻害剤として（３ｍｇ、０．５ｍｌ）加えた。全ての活性測定には３７℃で１５分間反応を行った。
(Evaluation of ACE inhibitory ability by water-soluble elastin degradation product)
For measurement of the ACE inhibitory activity, Abz-ε-Acp-Ala-Phe (p-NO 2 ) -Leu-OH (Watanabe Chemical Industries), which is a fluorescent substrate, was used. The reaction was performed in a 0.2 M Tris-HCl (pH 8.0 + 0.02 M NaCl) buffer, and rabbit ACE (manufactured by Sigma) was used as the enzyme. Specifically, an enzyme (9 units, 0.5 ml) is added to a substrate solution (0.5 ppm, 2 ml), and the water-soluble elastin or water-soluble elastin degradation product prepared above is used as an inhibitor (3 mg, 0.5 ml). added. All activities were measured at 37 ° C. for 15 minutes.
阻害剤を加えない場合をＡＣＥ活性１００％として、水溶性エラスチンまたは水溶性エラスチン分解物のＡＣＥ阻害能を調べたところ、図５に示すように、分解前の水溶性エラスチンのサンプルでは６２％、エラスターゼ処理による分解後の水溶性エラスチン分解物のサンプルでは７８％もの阻害能を示していた。したがって、水溶性エラスチンまたはそのエラスターゼ分解物は、ＡＣＥを阻害することにより、有効な血圧降下作用を持つことが示唆された。 When ACE activity was 100% when no inhibitor was added, the ACE inhibitory ability of water-soluble elastin or a water-soluble elastin degradation product was examined. As shown in FIG. The sample of water-soluble elastin degradation product after degradation by elastase treatment showed as much as 78% inhibition ability. Therefore, it was suggested that water-soluble elastin or its elastase degradation product has an effective blood pressure lowering effect by inhibiting ACE.
Claims (14)
高血圧症を予防および／または改善する機能を有し、その機能表示が付された、飲食品。 A food or drink containing an effective amount of an elastase hydrolyzate of water-soluble elastin, wherein the average molecular weight of the elastase hydrolyzate (defined as the median in SDS-PAGE migration results) is 2,000 to 20,000. And
A food or drink product having a function of preventing and / or improving hypertension, and a function indication thereof.
（Ｂ２）前処理された前記動物性生体組織を、アルカリ性溶液中に浸漬し、動物性生体組織から抽出されるコラーゲンおよびその他の不要タンパク質を含む溶液を除去するアルカリ抽出工程、
（Ｂ３）前記（Ｂ２）工程を繰り返した後に、動物性生体組織残渣を溶解することにより、遊離した水溶性エラスチンを含む溶液を回収するアルカリ溶解工程、
（Ｂ４）前記アルカリ溶解工程で回収された水溶性エラスチンを含有する溶液を相分離操作によって分離し、水溶性エラスチンを回収する工程、
を順次実施して、分子量１〜３万の水溶性エラスチンを得た後、
得られた分子量１〜３万の水溶性エラスチンを、ｗ／ｖ換算で０．００１〜０．５倍の濃度のエラスターゼの存在下、２０〜５０℃の温度で３〜７２時間インキュベートすることにより、前記水溶性エラスチンをエラスターゼにより加水分解して前記水溶性エラスチンの分解物を得る工程を含み、
オクタデシル（ＯＤＳ）−シリカゲルカラムを用いたカラムクロマトグラフィ法を用いて前記分解物を精製する工程をさらに含み、
得られる水溶性エラスチン分解物の平均分子量（ＳＤＳ−ＰＡＧＥの泳動結果における中央値として定義される）が２，０００〜２０，０００である、水溶性エラスチン分解物の製造方法。 (B1) a step of pretreating animal biological tissue;
(B2) An alkaline extraction step of immersing the pretreated animal biological tissue in an alkaline solution to remove a solution containing collagen and other unnecessary proteins extracted from the animal biological tissue;
(B3) An alkali dissolution step of recovering a solution containing free water-soluble elastin by dissolving animal biological tissue residues after repeating the step (B2),
(B4) separating the solution containing the water-soluble elastin recovered in the alkali dissolution step by a phase separation operation, and recovering the water-soluble elastin;
In order to obtain water-soluble elastin having a molecular weight of 1 to 30,000,
By incubating the obtained water-soluble elastin having a molecular weight of 1 to 30,000 at a temperature of 20 to 50 ° C. for 3 to 72 hours in the presence of 0.001 to 0.5 times the concentration of elastase in terms of w / v. A step of hydrolyzing the water-soluble elastin with elastase to obtain a degradation product of the water-soluble elastin,
Octadecyl (ODS) - further look including the step of purifying the decomposition product using column chromatography method using silica gel column,
A method for producing a water-soluble elastin degradation product, wherein the obtained water-soluble elastin degradation product has an average molecular weight (defined as a median value in a migration result of SDS-PAGE) of 2,000 to 20,000 .
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