JP6077735B2 - Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation - Google Patents
Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation Download PDFInfo
- Publication number
- JP6077735B2 JP6077735B2 JP2011128424A JP2011128424A JP6077735B2 JP 6077735 B2 JP6077735 B2 JP 6077735B2 JP 2011128424 A JP2011128424 A JP 2011128424A JP 2011128424 A JP2011128424 A JP 2011128424A JP 6077735 B2 JP6077735 B2 JP 6077735B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- electron microscope
- staining
- sample
- microscope observation
- stained
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Description
本発明は、電子顕微鏡観察用染色剤および電子顕微鏡観察用試料の染色方法に関する。 The present invention relates to a staining agent for electron microscope observation and a staining method for a sample for electron microscope observation.
生体試料の微細な構造等を観察する装置として、光学顕微鏡や電子顕微鏡が知られている。特に、電子顕微鏡は光学顕微鏡と比べて分解能が高いため、より微細な構造を観察する際に有効である。しかしながら、生体試料は、炭素、酸素、窒素、水素などの軽元素を含んで構成されているため、電子線を十分に散乱させることができない。したがって、電子顕微鏡で観察しても、電子顕微鏡像に十分なコントラストが得られない場合がある。そのため、電子顕微鏡で生体試料を観察する際には、一般的に、試料を重金属等で電子染色する。試料を電子染色することにより、電子線の散乱を促し、電子顕微鏡像にコントラストをつけることができる。 As an apparatus for observing the fine structure of a biological sample, an optical microscope and an electron microscope are known. In particular, since the electron microscope has a higher resolution than the optical microscope, it is effective for observing a finer structure. However, since the biological sample is configured to include light elements such as carbon, oxygen, nitrogen, and hydrogen, the electron beam cannot be sufficiently scattered. Therefore, even when observed with an electron microscope, sufficient contrast may not be obtained in the electron microscope image. Therefore, when observing a biological sample with an electron microscope, the sample is generally electronically stained with heavy metal or the like. By electron-staining the sample, scattering of the electron beam can be promoted, and contrast can be given to the electron microscope image.
従来、電子染色剤として、酢酸ウラニルが用いられていた。酢酸ウラニルは、高い染色効果を有しており、酢酸ウラニルで生体試料を染色することにより、高いコントラストの電子顕微鏡像を得ることができる。 Conventionally, uranyl acetate has been used as an electronic stain. Uranyl acetate has a high staining effect, and a high contrast electron microscope image can be obtained by staining a biological sample with uranyl acetate.
また、特許文献１には、電子染色剤として、白金ブルー（［Ｐｔ４（ＮＨ３）８（Ｃ６Ｈ１３Ｏ５）４］＋５）が開示されている。 Patent Document 1 discloses platinum blue ([Pt 4 (NH 3 ) 8 (C 6 H 13 O 5 ) 4 ] +5 ) as an electron stain.
上述したように、酢酸ウラニルは高い染色効果を有しているが、放射性物質のため、入手や使用に厳しい規制がある。そのため、酢酸ウラニルに代替する電子染色剤が求められている。上述した特許文献１に開示された白金ブルーは、酢酸ウラニルに代替する電子染色剤の１つとして知られている。 As described above, uranyl acetate has a high staining effect, but because of the radioactive substance, there are strict regulations on its availability and use. Therefore, there is a need for an electronic stain that replaces uranyl acetate. Platinum blue disclosed in Patent Document 1 described above is known as one of electron staining agents that substitute for uranyl acetate.
白金ブルーは、時間が経過すると変質する場合があるため、使用にあわせて合成することが望ましい。しかしながら、白金ブルーの合成には、通常５〜７日程度の時間が必要であり、かつ高度な化学的知識を必要とする。したがって、白金ブルーを用いた電子染色では、白金ブルーの合成に時間や手間がかかってしまい、簡便に電子染色を行うことができないという問題があった。 Since platinum blue may change in quality over time, it is desirable to synthesize it according to use. However, the synthesis of platinum blue usually requires about 5-7 days and requires advanced chemical knowledge. Therefore, in the electron staining using platinum blue, there is a problem that the synthesis of platinum blue takes time and labor, and the electron staining cannot be easily performed.
本発明は、以上のような問題点に鑑みてなされたものであり、本発明のいくつかの態様によれば、簡便に電子染色を行うことができ、かつ高い染色効果を有する電子顕微鏡観察用染色剤および電子顕微鏡観察用試料の染色方法を提供することができる。 The present invention has been made in view of the above-described problems, and according to some embodiments of the present invention, it is possible to easily perform electron staining and for electron microscope observation having a high staining effect. A staining method and a staining method of a sample for electron microscope observation can be provided.
（１）本発明に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、トランスプラチンを含有する。 ( 1 ) The staining for electron microscope observation according to the present invention contains transplatin.
このような電子顕微鏡観察用染色剤によれば、高い染色効果を有することができる。さらに、トランスプラチンは、合成等の必要がなく、例えば、水に溶解させるだけで電子染色剤として用いることができる。また、トランスプラチンは、水溶液として安定した保存が可能であり、例えば、白金ブルーのように使用にあわせて合成する必要がない。したがって、簡便に電子染色を行うことができる。 Such a staining agent for electron microscope observation can have a high staining effect. Furthermore, transplatin does not need to be synthesized or the like, and can be used as an electron stain simply by dissolving it in water, for example. In addition, transplatin can be stably stored as an aqueous solution, and for example, it is not necessary to synthesize it according to use like platinum blue. Therefore, it is possible to easily perform electron staining.
（２）本発明に係る電子顕微鏡観察用試料の染色方法は、
本発明に係る電子顕微鏡観察用染色剤に試料を接触させる工程を含む。
( 2 ) The staining method of the sample for electron microscope observation according to the present invention is as follows:
A step of bringing the sample into contact with the electron microscope observation stain according to the present invention.
このような電子顕微鏡観察用試料の染色方法によれば、試料を、簡便かつ良好に電子染色することができる。 According to such a method for staining an electron microscope observation sample, the sample can be easily and satisfactorily electron-stained.
（３）本発明に係る電子顕微鏡観察用試料の染色方法において、
前記電子顕微鏡観察用染色剤に接触した試料を、鉛化合物を含有する染色液に接触させる工程をさらに含んでいてもよい。
( 3 ) In the method for staining an electron microscope observation sample according to the present invention,
A step of contacting the sample in contact with the electron microscope observation stain with a staining solution containing a lead compound may be further included.
このような電子顕微鏡観察用試料の染色方法によれば、染色効果を高めることができる。 According to such a method for staining an electron microscope observation sample, the staining effect can be enhanced.
以下、本発明の好適な実施形態について詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、特許請求の範囲に記載された本発明の内容を不当に限定するものではない。また以下で説明される構成の全てが本発明の必須構成要件であるとは限らない。 Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail. The embodiments described below do not unduly limit the contents of the present invention described in the claims. Also, not all of the configurations described below are essential constituent requirements of the present invention.
１． 第１実施形態
１．１． 電子顕微鏡観察用染色剤
まず、第１実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤について説明する。
1. 1. First embodiment 1.1. Electron Microscope Observation Staining Agent First, the electron microscope observation staining agent according to the first embodiment will be described.
第１実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、シスプラチンを含有する。 The electron microscope observation stain according to the first embodiment contains cisplatin.
シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ、シス−ジアミンジクロロ白金（II）、ｃｉｓ−［ＰｔＣｌ２（ＮＨ３）２］）は、白金錯体に分類される物質である。 Cisplatin (cisplatin, cis-diamine dichloroplatinum (II), cis- [PtCl 2 (NH 3 ) 2 ]) is a substance classified as a platinum complex.
ここで、電子顕微鏡観察用染色剤とは、電子顕微鏡観察の対象となる試料を染色するための染色剤をいう。なお、本発明に係る記載では、染色とは、いわゆる電子染色をいい、試料の特定の部位に電子の散乱を促す物質（重金属等）を吸着または結合させることをいう。電子染色剤を用いて試料を染色することにより、電子顕微鏡像にコントラストをつけることができる。 Here, the stain for electron microscope observation refers to a stain for staining a sample to be observed with an electron microscope. In the description of the present invention, staining refers to so-called electron staining, which means that a substance (such as heavy metal) that promotes electron scattering is adsorbed or bound to a specific part of a sample. By staining the sample with an electron staining agent, contrast can be given to the electron microscope image.
また、染色された試料の観察に用いられる電子顕微鏡としては、例えば、走査電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＳＥＭ）、透過電子顕微鏡（Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＴＥＭ）、走査透過電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ、ＳＴＥＭ）などが挙げられる。 Examples of the electron microscope used for observing the stained sample include a scanning electron microscope (SEM), a transmission electron microscope (Transmission Electron Microscope, TEM), a scanning transmission electron microscope (Scanning Transmission Electron Microscope, TEM), and the like. STEM).
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、例えば、シスプラチン水溶液である。シスプラチン水溶液の濃度は特に限定されず、例えば、飽和水溶液濃度（約０．０２質量％）である。なお、本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤の溶媒は、水に限定されず、例えば、エタノールや、エタノールと水の混合溶媒であってもよい。 The electron microscope observation stain according to this embodiment is, for example, an aqueous cisplatin solution. The concentration of the cisplatin aqueous solution is not particularly limited, and is, for example, a saturated aqueous solution concentration (about 0.02% by mass). In addition, the solvent of the staining agent for electron microscope observation which concerns on this embodiment is not limited to water, For example, ethanol and the mixed solvent of ethanol and water may be sufficient.
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、さらに、シスプラチン以外の物質を含有していてもよい。本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、例えば、シスプラチンに加えて、その幾何異性体であるトランスプラチンを含有していてもよい。 The electron microscope observation stain according to this embodiment may further contain a substance other than cisplatin. The electron microscope observation stain according to this embodiment may contain, for example, transplatin, which is a geometric isomer, in addition to cisplatin.
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、例えば、タンパク質などの生体高分子を含んで構成される生体試料や、炭素、酸素、窒素、水素などの軽元素を含んで構成される試料を染色することができる。 The stain for electron microscope observation according to the present embodiment includes, for example, a biological sample including a biopolymer such as a protein or a sample including a light element such as carbon, oxygen, nitrogen, and hydrogen. Can be dyed.
１．２． 電子顕微鏡観察用試料の作製方法
次に、第１実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、本発明に係る電子顕微鏡観察用試料の染色方法を含む。以下、本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法の一例として、本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法を、生体試料に適用した場合について説明する。
1.2. Next, a method for producing an electron microscope observation sample according to the first embodiment will be described. The method for producing an electron microscope observation sample according to the present embodiment includes the electron microscope observation sample staining method according to the present invention. Hereinafter, as an example of a method for producing an electron microscope observation sample according to the present embodiment, a case where the electron microscope observation sample preparation method according to the present embodiment is applied to a biological sample will be described.
まず、生体試料をエポキシ樹脂に包埋する。具体的には、まず、灌流固定または浸漬固定した生体試料を切り出す。そして、切り出された生体試料を、カコジル酸緩衝１〜４％パラホルムアルデヒドと１〜４％グルタールアルデヒドとの混合液に浸漬し、追固定する。なお、追固定は、カコジル酸緩衝１〜４％パラホルムアルデヒドだけで行ってもよいし、１〜４％グルタールアルデヒドだけで行ってもよい。次に、追固定された生体試料を、カコジル酸緩衝液で洗浄し、１〜２％四酸化オスミウムで後固定する。そして、後固定された生体試料を上昇エタノール系列で脱水した後、エポキシ樹脂に包埋する。このようにして、生体試料をエポキシ樹脂に包埋することができる。なお、生体試料を包埋するための材料はエポキシ樹脂に限定されず、例えば、メタクリル酸樹脂、ポリエステル樹脂、パラフィン等を用いてもよい。 First, a biological sample is embedded in an epoxy resin. Specifically, first, a biological sample fixed with perfusion or immersion is cut out. Then, the cut-out biological sample is immersed in a mixed solution of cacodylate buffered 1 to 4% paraformaldehyde and 1 to 4% glutaraldehyde and additionally fixed. The additional fixation may be performed with cacodylic acid buffered 1 to 4% paraformaldehyde alone or with 1 to 4% glutaraldehyde alone. Next, the additionally fixed biological sample is washed with a cacodylate buffer solution and post-fixed with 1-2% osmium tetroxide. Then, the post-fixed biological sample is dehydrated with an ascending ethanol series and then embedded in an epoxy resin. In this way, the biological sample can be embedded in the epoxy resin. In addition, the material for embedding a biological sample is not limited to an epoxy resin, For example, you may use a methacrylic acid resin, a polyester resin, a paraffin, etc.
次に、エポキシ樹脂に包埋された生体試料を薄片化する。薄片化は、例えば、ミクロトーム（ウルトラミクロトーム）を用いて行われる。 Next, the biological sample embedded in the epoxy resin is sliced. Thinning is performed using, for example, a microtome (ultra microtome).
次に、薄片化された生体試料を染色する。染色は、本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤を薄片化された生体試料に接触させることにより行われる。具体的には、染色は、シスプラチン水溶液に、薄片化された生体試料を浸漬させることにより行われる。ここで、シスプラチン水溶液の温度は、例えば、５℃以上５０℃以下である。また、浸漬時間は、例えば、１分以上１０時間以下である。その後、染色された生体試料を純水等で洗浄する。 Next, the sliced biological sample is stained. Staining is performed by bringing the electron microscope observation stain according to the present embodiment into contact with a thinned biological sample. Specifically, staining is performed by immersing a sliced biological sample in an aqueous cisplatin solution. Here, the temperature of the cisplatin aqueous solution is, for example, 5 ° C. or more and 50 ° C. or less. Moreover, immersion time is 1 minute or more and 10 hours or less, for example. Thereafter, the stained biological sample is washed with pure water or the like.
以上の工程により、電子顕微鏡観察用試料を作製することができる。 Through the above steps, an electron microscope observation sample can be produced.
１．３． 実施例１
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
1.3. Example 1
EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this embodiment is described in detail, this invention is not restrict | limited by this.
（１）試料作製
本実施例では、シスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の（透過）電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、まず、灌流固定した腎臓糸球体を切り出し、カコジル酸緩衝２％パラホルムアルデヒドと２％グルタールアルデヒドとの混合液に浸漬し、前固定した。次に、前固定された腎臓糸球体を、カコジル酸緩衝液で洗浄し、２％四酸化オスミウムで後固定した。そして、上昇エタノール系列で脱水し、エポキシ樹脂に包埋した。
(1) Sample preparation In this example, samples for (transmission) electron microscope observation of kidney glomeruli stained with a cisplatin aqueous solution were prepared. Specifically, first, the perfusion-fixed kidney glomeruli were cut out, immersed in a mixed solution of cacodylate buffered 2% paraformaldehyde and 2% glutaraldehyde, and prefixed. Next, the pre-fixed kidney glomeruli were washed with cacodylate buffer and post-fixed with 2% osmium tetroxide. And it dehydrated with the rising ethanol series, and was embedded in the epoxy resin.
次に、エポキシ樹脂に包埋された腎臓糸球体を薄片化した。薄片化は、ウルトラミクロトームを用いて行った。次に、薄片化された腎臓糸球体を、シスプラチン水溶液に室温で３０分間浸漬した。なお、シスプラチン水溶液は、シスプラチン（ＳＩＧＭＡ社製）を、蒸留水で溶解させることによって作製した。また、シスプラチン水溶液の濃度は、０．０２質量％（飽和水溶液濃度）とした。その後、染色された腎臓糸球体を純水で洗浄した。このようにして、シスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。 Next, the kidney glomerulus embedded in the epoxy resin was sliced. Thinning was performed using an ultramicrotome. Next, the sliced kidney glomeruli were immersed in an aqueous cisplatin solution at room temperature for 30 minutes. In addition, the cisplatin aqueous solution was produced by dissolving cisplatin (made by SIGMA) with distilled water. The concentration of the cisplatin aqueous solution was 0.02% by mass (saturated aqueous solution concentration). Thereafter, the stained kidney glomeruli were washed with pure water. In this way, a sample for electron microscope observation of kidney glomeruli stained with an aqueous cisplatin solution was prepared.
なお、比較例として、白金ブルー（日新ＥＭ社製、１０倍希釈）で染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料、および酢酸ウラニル（２％）で染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、シスプラチン水溶液にかえてそれぞれ白金ブルー、酢酸ウラニルを用いて染色した点を除いて、上述したシスプラチン水溶液で染色した場合の試料作製工程と同様の工程でこれらの試料を作製した。 As comparative examples, an electron microscope observation sample of kidney glomeruli stained with platinum blue (manufactured by Nissin EM Co., Ltd., 10-fold dilution) and an electron microscope of kidney glomeruli stained with uranyl acetate (2%) An observation sample was prepared. Specifically, these samples were prepared in the same steps as the sample preparation step in the case of staining with the above-described cisplatin aqueous solution except that each was stained with platinum blue and uranyl acetate instead of the cisplatin aqueous solution.
（２）観察結果
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。
(2) Observation result The sample for electron microscope observation produced in this way was observed with the transmission electron microscope.
図１は、シスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。図２は、白金ブルーで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。図３は、酢酸ウラニルで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。 FIG. 1 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli stained with an aqueous cisplatin solution. FIG. 2 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli stained with platinum blue. FIG. 3 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli stained with uranyl acetate.
図１に示すように、シスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像では、核Ｎ、蛸足細胞Ｐ、内皮細胞Ｅ、赤血球Ｒ等が染色されていることが確認でき、これらが高いコントラストで鮮明に観察できた。また、図１に示す透過電子顕微鏡像では、図２に示す白金ブルーで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像、および図３に示す酢酸ウラニルで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像と同程度の高いコントラストが得られた。このように、シスプラチン水溶液は、高い染色効果（電子染色効果）を有することがわかった。 As shown in FIG. 1, in the transmission electron microscopic image of the kidney glomeruli stained with the cisplatin aqueous solution, it can be confirmed that the nucleus N, the podocyte P, the endothelial cell E, the red blood cell R, and the like are stained. It was possible to observe clearly with high contrast. Further, in the transmission electron microscope image shown in FIG. 1, the transmission electron microscope image of the kidney glomerule stained with platinum blue shown in FIG. 2, and the transmission electron microscope image of the kidney glomerule stained with uranyl acetate shown in FIG. As high a contrast as that obtained was obtained. Thus, it was found that the cisplatin aqueous solution has a high staining effect (electronic staining effect).
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤によれば、シスプラチンを含有していることにより、高い染色効果を有することができる。さらに、シスプラチンは、合成等の必要がなく、例えば、水等に溶解させるだけで電子染色剤として用いることができる。また、シスプラチンは、水溶液として安定した保存が可能であり、例えば、白金ブルーのように使用にあわせて合成する必要がない。したがって、簡便に電子染色を行うことができる。 According to the stain for electron microscope observation according to the present embodiment, it can have a high staining effect by containing cisplatin. Furthermore, cisplatin does not need to be synthesized or the like, and can be used as an electron stain only by being dissolved in water, for example. In addition, cisplatin can be stably stored as an aqueous solution, and does not need to be synthesized according to use, for example, like platinum blue. Therefore, it is possible to easily perform electron staining.
なお、シスプラチンは、その幾何異性体であるトランスプラチンに変換してしまう場合があるが、後述する第３実施形態で述べるように、トランスプラチンもシスプラチンと同程度の高い染色効果が得られる。 Cisplatin may be converted to its geometric isomer, transplatin, but as described in the third embodiment described later, transplatin can provide a staining effect as high as cisplatin.
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の染色方法によれば、上述したように、簡便に電子染色を行うことができ、かつ高い染色効果を有する本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤を用いて染色するため、試料を、簡便かつ良好に染色することができる。 According to the method for staining an electron microscope observation sample according to this embodiment, as described above, the electron microscope observation staining agent according to this embodiment can be easily dyed and has a high staining effect. Since it is used and dye | stained, a sample can be dye | stained simply and favorably.
２． 第２実施形態
２．１． 電子顕微鏡観察用試料の作製方法
次に、第２実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。
2. Second Embodiment 2.1. Next, a method for producing an electron microscope observation sample according to the second embodiment will be described.
第２実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、上述した第１実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製工程に加えて、さらに、第１実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤に接触した試料を、鉛化合物を含有する染色液に接触させる工程を含む。 The electron microscope observation sample preparation method according to the second embodiment includes the electron microscope observation stain according to the first embodiment in addition to the electron microscope observation sample preparation step according to the first embodiment described above. A step of contacting the sample in contact with a staining solution containing a lead compound.
具体的には、第２実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、シスプラチン水溶液で染色された試料を、鉛化合物を含有する染色液に浸漬する工程を含む。すなわち、第２実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法では、試料を、シスプラチン水溶液と鉛化合物を含有する染色液とによって二重染色する。 Specifically, the method for producing an electron microscope observation sample according to the second embodiment includes a step of immersing a sample dyed with a cisplatin aqueous solution in a staining solution containing a lead compound. That is, in the method for producing an electron microscope observation sample according to the second embodiment, the sample is double-stained with a cisplatin aqueous solution and a staining solution containing a lead compound.
鉛化合物としては、例えば、クエン酸鉛が挙げられる。このクエン酸鉛を含有する染色液（クエン酸鉛染色液）としては、例えば、レイノルド（Ｒｅｙｎｏｌｄｓ）法で処方されたものが挙げられる。クエン酸鉛染色液の温度は、例えば、５℃以上５０℃以下である。また、浸漬時間は、例えば、１分以上１０時間以下程度である。クエン酸鉛染色液に浸漬された試料は、純水等によって洗浄される。また、鉛化合物として、例えば、硝酸鉛を用いてもよい。以上の工程により、電子顕微鏡観察用試料を作製することができる。 Examples of the lead compound include lead citrate. Examples of the staining solution containing lead citrate (lead citrate staining solution) include those formulated by the Reynolds method. The temperature of the lead citrate staining solution is, for example, 5 ° C. or more and 50 ° C. or less. Moreover, immersion time is about 1 minute or more and 10 hours or less, for example. The sample immersed in the lead citrate staining solution is washed with pure water or the like. Further, as the lead compound, for example, lead nitrate may be used. Through the above steps, an electron microscope observation sample can be produced.
２．２． 実施例２
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
2.2. Example 2
EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this embodiment is described in detail, this invention is not restrict | limited by this.
（１）試料作製
本実施例では、シスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、上述した実施例１と同様の工程で、腎臓糸球体をシスプラチン水溶液で染色し、このシスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体をレイノルドのクエン酸鉛染色液に室温で１０分間浸漬し、その後、純水で洗浄した。
(1) Sample preparation In this example, an electron microscope observation sample of kidney glomeruli double-stained with a cisplatin aqueous solution and a lead citrate staining solution was prepared. Specifically, in the same process as in Example 1 described above, kidney glomeruli were stained with cisplatin aqueous solution, and kidney glomeruli stained with this cisplatin aqueous solution were immersed in Reynold's lead citrate staining solution at room temperature for 10 minutes. And then washed with pure water.
また、比較例として、白金ブルーとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料、および酢酸ウラニルとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、シスプラチン水溶液にかえて、それぞれ白金ブルー、酢酸ウラニルを用いる点を除いて、上述したシスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された試料の試料作製工程と同様の工程でこれらの試料を作製した。 Further, as comparative examples, a sample for electron microscopic observation of kidney glomeruli double-stained with platinum blue and lead citrate stain, and a kidney glomeruli double-stained with uranyl acetate and lead citrate stain Samples for electron microscope observation were prepared. Specifically, in place of the cisplatin aqueous solution, except for the use of platinum blue and uranyl acetate, respectively, the same process as the sample preparation process of the sample double-stained with the cisplatin aqueous solution and the lead citrate staining solution described above These samples were prepared.
（２）観察結果
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。図４は、シスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。図５は、白金ブルーとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。図６は、酢酸ウラニルとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。
(2) Observation result The sample for electron microscope observation produced in this way was observed with the transmission electron microscope. FIG. 4 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli double-stained with a cisplatin aqueous solution and a lead citrate staining solution. FIG. 5 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli double-stained with platinum blue and lead citrate staining solution. FIG. 6 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli double-stained with uranyl acetate and lead citrate staining solution.
図４に示すように、シスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像では、核Ｎ、蛸足細胞Ｐ、内皮細胞Ｅ、赤血球Ｒ等が染色されていることが確認でき、これらが高いコントラストで鮮明に観察できた。また、図４に示す透過電子顕微鏡像では、図５に示す白金ブルーとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像、および図６に示す酢酸ウラニルとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像と同程度の高いコントラストが得られた。また、図４に示す透過電子顕微鏡像では、図１に示すシスプラチン水溶液のみで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像と比べて、より高いコントラストが得られた。このように、シスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色した場合、シスプラチン水溶液のみで染色した場合と比べて、より染色効果を高めることができることがわかった。 As shown in FIG. 4, in the transmission electron microscope image of the kidney glomeruli double-stained with the cisplatin aqueous solution and the lead citrate staining solution, the nucleus N, the podocyte P, the endothelial cell E, the red blood cell R, etc. are stained. It was confirmed that these were clearly observed with high contrast. Further, in the transmission electron microscope image shown in FIG. 4, a transmission electron microscope image of kidney glomeruli double-stained with platinum blue and lead citrate staining solution shown in FIG. 5, and uranyl acetate and citric acid shown in FIG. Contrast as high as the transmission electron microscopic image of kidney glomeruli double-stained with lead staining solution was obtained. Further, in the transmission electron microscope image shown in FIG. 4, a higher contrast was obtained compared to the transmission electron microscope image of the kidney glomerulus stained with only the cisplatin aqueous solution shown in FIG. Thus, it was found that when the double staining was performed with the cisplatin aqueous solution and the lead citrate staining solution, the staining effect could be further enhanced as compared with the case of staining with only the cisplatin aqueous solution.
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法によれば、シスプラチン水溶液と鉛染色液とで二重染色を行うことにより、シスプラチン水溶液のみで染色を行った場合と比較して、より染色効果を高めることができる。 According to the method for preparing a sample for electron microscope observation according to the present embodiment, by performing double staining with a cisplatin aqueous solution and a lead staining solution, the staining effect is further improved as compared with the case where staining is performed only with the cisplatin aqueous solution. Can be increased.
３． 第３実施形態
３．１． 電子顕微鏡観察用染色剤
次に、第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤について説明する。
3. Third Embodiment 3.1. Electron Microscope Observation Staining Agent Next, an electron microscope observation staining agent according to the third embodiment will be described.
第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、トランスプラチンを含有する。 The staining for electron microscope observation according to the third embodiment contains transplatin.
トランスプラチン（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎ、トランス−ジアミンジクロロ白金（II）、ｔｒａｎｓ−［ＰｔＣｌ２（ＮＨ３）２］）は、シスプラチンの幾何異性体（シス−トランス異性体）である。シスプラチンは、短時間でトランスプラチンに変換するが、トランスプラチンは、安定な物質である。したがって、トランスプラチンは、シスプラチンに比べて、試薬の管理が容易である。 Transplatin (transplatin, trans-diamine dichloroplatinum (II), trans- [PtCl 2 (NH 3 ) 2 ]) is a geometric isomer of cisplatin (cis-trans isomer). Cisplatin converts to transplatin in a short time, but transplatin is a stable substance. Therefore, transplatin is easier to manage the reagents than cisplatin.
第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、例えば、トランスプラチン水溶液である。トランスプラチン水溶液の濃度は特に限定されず、例えば、飽和水溶液濃度（約０．０２質量％）である。なお、第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤の溶媒は、水に限定されず、例えば、エタノールや、エタノールと水の混合溶媒であってもよい。 The electron microscope observation stain according to the third embodiment is, for example, a transplatin aqueous solution. The concentration of the transplatin aqueous solution is not particularly limited, and is, for example, a saturated aqueous solution concentration (about 0.02% by mass). In addition, the solvent of the staining agent for electron microscope observation which concerns on 3rd Embodiment is not limited to water, For example, ethanol and the mixed solvent of ethanol and water may be sufficient.
なお、第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤は、さらに、トランスプラチン以外の物質を含有していてもよい。 In addition, the stain for electron microscope observation according to the third embodiment may further contain a substance other than transplatin.
３．２． 電子顕微鏡観察用試料の作製方法
次に、第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、上述した第１実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法と、シスプラチン水溶液にかえてトランスプラチン水溶液を用いる点を除いて、同じである。そのため、その詳細な説明を省略する。
3.2. Next, a method for producing an electron microscope observation sample according to the third embodiment will be described. The method for preparing the sample for electron microscope observation according to the third embodiment is the same as the method for preparing the sample for electron microscope observation according to the first embodiment described above, except that a transplatin aqueous solution is used instead of the cisplatin aqueous solution. It is. Therefore, the detailed description is abbreviate | omitted.
３．３． 実施例３
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
3.3. Example 3
EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this embodiment is described in detail, this invention is not restrict | limited by this.
（１）試料作製
本実施例では、トランスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、シスプラチン水溶液にかえてトランスプラチン水溶液を用いる点を除いて、上述した実施例１に記載した試料作製工程と同様の工程で作製した。なお、トランスプラチン水溶液は、トランスプラチン（ＳＩＧＭＡ社製）を、蒸留水で溶解させることによって作製した。また、トランスプラチン水溶液の濃度は、０．０２質量％（飽和水溶液濃度）とした。
(1) Sample preparation In this example, a sample for electron microscope observation of kidney glomeruli stained with transplatin aqueous solution was prepared. Specifically, the sample was prepared in the same process as the sample preparation process described in Example 1 except that a transplatin aqueous solution was used instead of the cisplatin aqueous solution. The transplatin aqueous solution was prepared by dissolving transplatin (manufactured by SIGMA) with distilled water. The concentration of the transplatin aqueous solution was 0.02% by mass (saturated aqueous solution concentration).
（２）観察結果
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。図７は、トランスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。
(2) Observation result The sample for electron microscope observation produced in this way was observed with the transmission electron microscope. FIG. 7 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli stained with transplatin aqueous solution.
図７に示すように、トランスプラチン水溶液で染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像では、核Ｎ、蛸足細胞Ｐ、内皮細胞Ｅ、赤血球Ｒ等が染色されていることが確認でき、これらが高いコントラストで鮮明に観察できた。また、図７に示す透過電子顕微鏡像では、図１に示すシスプラチンで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像、図２に示す白金ブルーで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像、および図３に示す酢酸ウラニルで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像と同程度の高いコントラストが得られた。このように、トランスプラチン水溶液は、高い染色効果（電子染色効果）を有することがわかった。 As shown in FIG. 7, in the transmission electron microscopic image of the kidney glomeruli stained with the transplatin aqueous solution, it can be confirmed that the nucleus N, the podocyte P, the endothelial cell E, the red blood cell R and the like are stained. Could be observed clearly with high contrast. Further, in the transmission electron microscope image shown in FIG. 7, the transmission electron microscope image of the kidney glomerule stained with cisplatin shown in FIG. 1, the transmission electron microscope image of the kidney glomerule stained with platinum blue shown in FIG. Contrast as high as the transmission electron microscopic image of the kidney glomeruli stained with uranyl acetate shown in FIG. 3 was obtained. Thus, it was found that the transplatin aqueous solution has a high staining effect (electronic staining effect).
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤によれば、トランスプラチンを含有していることにより、高い染色効果を有することができる。トランスプラチンは、合成等の必要がなく、例えば、水に溶解させるだけで電子染色剤として用いることができる。また、トランスプラチンは、水溶液として安定した保存が可能であり、例えば、白金ブルーのように使用にあわせて合成する必要がない。したがって、簡便に電子染色を行うことができる。 According to the stain for electron microscope observation according to the present embodiment, it can have a high staining effect by containing transplatin. Transplatin does not need to be synthesized or the like, and can be used, for example, as an electron stain simply by dissolving in water. In addition, transplatin can be stably stored as an aqueous solution, and for example, it is not necessary to synthesize it according to use like platinum blue. Therefore, it is possible to easily perform electron staining.
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の染色方法によれば、上述したように、簡便に電子染色を行うことができ、かつ高い染色効果を有する本実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤を用いて染色するため、試料を、簡便かつ良好に染色することができる。 According to the method for staining an electron microscope observation sample according to this embodiment, as described above, the electron microscope observation staining agent according to this embodiment can be easily dyed and has a high staining effect. Since it is used and dye | stained, a sample can be dye | stained simply and favorably.
４． 第４実施形態
４．１． 電子顕微鏡観察用試料の作製方法
次に、第４実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法について説明する。
4). Fourth embodiment 4.1. Next, a method for producing an electron microscope observation sample according to the fourth embodiment will be described.
第４実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、上述した第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製工程に加えて、さらに、第３実施形態に係る電子顕微鏡観察用染色剤に接触した試料を、鉛化合物を含有する染色液に接触させる工程を含む。 The electron microscope observation sample preparation method according to the fourth embodiment includes, in addition to the above-described electron microscope observation sample preparation step according to the third embodiment, an electron microscope observation stain according to the third embodiment. A step of contacting the sample in contact with a staining solution containing a lead compound.
具体的には、第４実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法は、トランスプラチン水溶液で染色された試料を、鉛化合物を含有する染色液に浸漬する工程を含む。すなわち、第４実施形態に係る電子顕微鏡用試料の作製方法では、試料を、シスプラチン水溶液と、鉛化合物を含有する染色液とによって二重染色する。 Specifically, the method for producing a sample for electron microscope observation according to the fourth embodiment includes a step of immersing a sample stained with a transplatin aqueous solution in a staining solution containing a lead compound. That is, in the method for producing a sample for an electron microscope according to the fourth embodiment, the sample is double-stained with a cisplatin aqueous solution and a staining solution containing a lead compound.
第４実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の具体的な作製方法は、第２実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法と、シスプラチン水溶液にかえてトランスプラチン水溶液を用いる点を除いて、同様である。そのため、その詳細な説明を省略する。 The specific method for preparing the sample for electron microscope observation according to the fourth embodiment is the same as the method for preparing the sample for electron microscope observation according to the second embodiment, except that a transplatin aqueous solution is used instead of the cisplatin aqueous solution. It is the same. Therefore, the detailed description is abbreviate | omitted.
４．２． 実施例４
以下、実施例を挙げて本実施形態をさらに詳細に説明するが、本発明はこれによって制限されるものではない。
4.2. Example 4
EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this embodiment is described in detail, this invention is not restrict | limited by this.
（１）試料作製
本実施例では、トランスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の電子顕微鏡観察用試料を作製した。具体的には、シスプラチン水溶液にかえてトランスプラチン水溶液を用いる点を除いて、上述した実施例２に記載した試料作製工程と同様の工程で作製した。
(1) Sample preparation In this example, an electron microscope observation sample of kidney glomeruli double-stained with a transplatin aqueous solution and a lead citrate staining solution was prepared. Specifically, the sample was prepared in the same process as the sample preparation process described in Example 2 except that a transplatin aqueous solution was used instead of the cisplatin aqueous solution.
（２）観察結果
このようにして作製された電子顕微鏡観察用試料を、透過電子顕微鏡で観察した。図８は、トランスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像である。
(2) Observation result The sample for electron microscope observation produced in this way was observed with the transmission electron microscope. FIG. 8 is a transmission electron microscope image of kidney glomeruli double-stained with an aqueous transplatin solution and a lead citrate staining solution.
図８に示すように、トランスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像では、核Ｎ、蛸足細胞Ｐ、内皮細胞Ｅ、赤血球Ｒ等が染色されていることが確認でき、これらが高いコントラストで鮮明に観察できた。また、図８に示す透過電子顕微鏡像では、図５に示す白金ブルーとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像、および図６に示す酢酸ウラニルとクエン酸鉛染色液とで二重染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像と同程度の高いコントラストが得られた。また、図８に示す透過電子顕微鏡像では、図７に示すトランスプラチン水溶液のみで染色された腎臓糸球体の透過電子顕微鏡像と比べて、より高いコントラストが得られた。このように、トランスプラチン水溶液とクエン酸鉛染色液とで二重染色した場合、トランスプラチン水溶液のみで染色した場合と比べて、より染色効果を高めることができる。 As shown in FIG. 8, in the transmission electron microscopic image of the kidney glomeruli double-stained with the transplatin aqueous solution and the lead citrate staining solution, the nucleus N, the podocyte P, the endothelial cell E, the red blood cell R, etc. are stained. It was confirmed that these were observed, and these were clearly observed with high contrast. Moreover, in the transmission electron microscope image shown in FIG. 8, the transmission electron microscope image of the kidney glomeruli double-stained with platinum blue and lead citrate staining solution shown in FIG. 5, and uranyl acetate and citric acid shown in FIG. Contrast as high as the transmission electron microscopic image of kidney glomeruli double-stained with lead staining solution was obtained. Further, in the transmission electron microscope image shown in FIG. 8, a higher contrast was obtained as compared with the transmission electron microscope image of the kidney glomerulus stained only with the transplatin aqueous solution shown in FIG. As described above, when the double staining is performed with the transplatin aqueous solution and the lead citrate staining solution, the staining effect can be further enhanced as compared with the case of staining with the transplatin aqueous solution alone.
本実施形態に係る電子顕微鏡観察用試料の作製方法によれば、トランスプラチン水溶液と鉛染色液とで二重染色を行うことにより、トランスプラチン水溶液のみで染色を行った場合と比較して、より染色効果を高めることができる。 According to the method for preparing an electron microscope observation sample according to the present embodiment, by performing double staining with a transplatin aqueous solution and a lead staining solution, compared with the case where staining is performed with only the transplatin aqueous solution, The dyeing effect can be enhanced.
なお、上述した実施形態は一例であって、これらに限定されるわけではない。 The above-described embodiment is an example, and the present invention is not limited to these.
また、本発明は、実施の形態で説明した構成と実質的に同一の構成（例えば、機能、方法および結果が同一の構成、あるいは目的及び効果が同一の構成）を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成の本質的でない部分を置き換えた構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成と同一の作用効果を奏する構成又は同一の目的を達成することができる構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成に公知技術を付加した構成を含む。 Further, the invention includes substantially the same configuration (for example, a configuration having the same function, method, and result, or a configuration having the same purpose and effect) as the configuration described in the embodiment. In addition, the invention includes a configuration in which a non-essential part of the configuration described in the embodiment is replaced. In addition, the present invention includes a configuration that exhibits the same operational effects as the configuration described in the embodiment or a configuration that can achieve the same object. Further, the invention includes a configuration in which a known technique is added to the configuration described in the embodiment.
Ｎ 核、Ｐ 蛸足細胞、Ｅ 内皮細胞、Ｒ 赤血球 N nuclei, P podocytes, E endothelial cells, R erythrocytes
Claims (3)
前記電子顕微鏡観察用染色剤に接触した試料を、鉛化合物を含有する染色液に接触させる工程をさらに含む、電子顕微鏡観察用試料の染色方法。 In claim 2 ,
The dyeing | staining method of the sample for electron microscope observation which further includes the process of contacting the sample which contacted the said stain | dye for electron microscope observation with the dyeing | staining liquid containing a lead compound.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2011128424A JP6077735B2 (en) | 2011-06-08 | 2011-06-08 | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2011128424A JP6077735B2 (en) | 2011-06-08 | 2011-06-08 | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2012255697A JP2012255697A (en) | 2012-12-27 |
| JP6077735B2 true JP6077735B2 (en) | 2017-02-08 |
Family
ID=47527393
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2011128424A Active JP6077735B2 (en) | 2011-06-08 | 2011-06-08 | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6077735B2 (en) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6077757B2 (en) * | 2012-04-17 | 2017-02-08 | 日本電子株式会社 | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation |
| JP6104703B2 (en) * | 2013-05-17 | 2017-03-29 | 日本電子株式会社 | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation |
| JP2015145854A (en) * | 2014-02-04 | 2015-08-13 | 日本電子株式会社 | Manufacturing method of staining agent for electron microscope observation, staining method of sample for electron microscope observation, and stock solution of the staining agent for electron microscope observation |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5410036A (en) * | 1992-06-30 | 1995-04-25 | Hawaiian Sugar Planters' Association | 1',6,6'-triamino- and 6,6'-diamino- sucrose derivatives |
| JPH06288882A (en) * | 1993-03-31 | 1994-10-18 | Tonen Corp | Preparation of sample for transmission electron microscope and apparatus for dyeing of sample |
| JP3723652B2 (en) * | 1997-01-17 | 2005-12-07 | 辰夫 小黒 | Electron microscope observation, biological specimen preparation method, and biological specimen card |
| EP1262778B1 (en) * | 2001-05-28 | 2007-10-24 | Kreatech Biotechnology B.V. | A differential labelling method using platinum complexes |
| JP2003300888A (en) * | 2002-04-10 | 2003-10-21 | Taiho Yakuhin Kogyo Kk | Antitumor effect enhancer |
| JP4292296B2 (en) * | 2004-07-28 | 2009-07-08 | 国立大学法人 大分大学 | Electron staining method for samples for transmission electron microscope observation. |
| CA2640572C (en) * | 2006-01-26 | 2017-09-26 | Charles Keller | Process and apparatus for microct imaging |
| JP2008013533A (en) * | 2006-06-07 | 2008-01-24 | Toyota Motor Corp | Amidine-carboxylic acid complex and multiple-complex-containing compound |
| AR060424A1 (en) * | 2007-04-11 | 2008-06-18 | Consejo Nac Invest Cient Tec | CELLULAR LINES, COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MELANOMS THAT UNDERSTAND PROCEDURES TO PREPARE COMPOSITIONS AND TREATMENT METHODS |
| JP4831692B2 (en) * | 2007-05-21 | 2011-12-07 | 国立大学法人鳥取大学 | Staining kit |
| JP2011105792A (en) * | 2009-11-12 | 2011-06-02 | Japan Science & Technology Agency | Block copolymer, block copolymer-metal complex composite material, and hollow structure carrier using the same |
-
2011
- 2011-06-08 JP JP2011128424A patent/JP6077735B2/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2012255697A (en) | 2012-12-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Miyazono et al. | Uncoupled mitochondria quickly shorten along their long axis to form indented spheroids, instead of rings, in a fission-independent manner | |
| JP6077735B2 (en) | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation | |
| Wang et al. | Ag dendritic nanostructures for rapid detection of thiram based on surface-enhanced Raman scattering | |
| Loussert-Fonta et al. | Correlation of fluorescence microscopy, electron microscopy, and NanoSIMS stable isotope imaging on a single tissue section | |
| Xia et al. | Aggregation-induced emission enhancement of gold nanoclusters in metal–organic frameworks for highly sensitive fluorescent detection of bilirubin | |
| Tolochko | History of nanotechnology | |
| Boatman et al. | Mechanisms of soft tissue and protein preservation in Tyrannosaurus rex | |
| US9562836B2 (en) | Formalin-free fixation agent for histological stains of tissue samples | |
| JP6950922B2 (en) | Dyeing method, dyeing agent, and dyeing kit | |
| Point et al. | Towards the development of a standardized method for extraction and analysis of PFAS in biological tissues | |
| JP5921386B2 (en) | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation | |
| JP6077757B2 (en) | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation | |
| Lum et al. | Current developments in clinical sample preconcentration prior to elemental analysis by atomic spectrometry: a comprehensive literature review | |
| JP4292296B2 (en) | Electron staining method for samples for transmission electron microscope observation. | |
| Mello et al. | Immunolabelling perturbs the endogenous and antibody-conjugated elemental concentrations during immuno-mass spectrometry imaging | |
| CN108568519A (en) | A kind of preparation method and application of argentum nano composite material | |
| JP6357354B2 (en) | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation | |
| Bilinski et al. | Electron microscopy, immunostaining, cytoskeleton visualization, in situ hybridization, and three-dimensional reconstruction of Xenopus oocytes | |
| JP6104703B2 (en) | Staining agent for electron microscope observation and staining method for sample for electron microscope observation | |
| Pirozzi et al. | Sample preparation for energy dispersive X-ray imaging of biological tissues | |
| CN107290198B (en) | A method of biomaterial is dyed using PIP | |
| Wen et al. | HiFi-SIM: reconstructing high-fidelity structured illumination microscope images | |
| CN102329856B (en) | Sanger sequencing reaction optimizing agent as well as preparation method and application thereof | |
| Mamián-López et al. | Hotspot Stabilization of Gold Nanoparticles for Application of Quantitative SERS in Bioanalytical Systems | |
| CN104931476A (en) | Detection method of polybromodiphenyl ether |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140513 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141210 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20141210 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150206 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150729 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20151118 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160108 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160330 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20160530 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160726 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20161221 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170113 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6077735 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |