JP6062666B2 - Water solubility improver, water solubility enhancement method, and aqueous solution preparation method - Google Patents
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Description
本発明は、水溶性向上剤、水溶性向上方法、及び、水溶液調製方法に関する。 The present invention relates to a water solubility improver, a water solubility enhancement method, and an aqueous solution preparation method.
有機化合物は、様々な機能や活性を有することから、例えば、機能性材料や医薬品として、現在社会において不可欠な存在になっている。しかし、例えば医薬品として用いる場合には、ヒトへの投与、医薬への混合、そして、保存の効率を踏まえると、高濃度の水溶液を調製することが好ましいが、有機化合物は、その構造ゆえに、有機溶媒に溶けやすいが、水には溶けにくい傾向があることが知られている（例えば、非特許文献１を参照）。 Since organic compounds have various functions and activities, they are now indispensable in society as functional materials and pharmaceuticals, for example. However, in the case of use as a pharmaceutical, for example, it is preferable to prepare a high-concentration aqueous solution in view of the efficiency of administration to humans, mixing with pharmaceuticals, and storage, but organic compounds are organic due to their structure. It is known that it tends to dissolve in a solvent, but tends to be difficult to dissolve in water (for example, see Non-Patent Document 1).
本発明は、水溶性向上剤、水溶性向上方法、及び、水溶液調製方法を提供することを目的とする。 It is an object of the present invention to provide a water solubility improver, a water solubility enhancement method, and an aqueous solution preparation method.
本発明に係る水溶性向上剤は、ベンゼン環を含む有機化合物の水に対する溶解度を向上させるための水溶性向上剤であって、下記一般式（Ｉ）で表される化合物である
ベンゼン環が、メトキシ基で置換されたベンゼン環、エトキシ基で置換されたベンゼン環、水酸基で置換されたベンゼン環、または、無置換のベンゼン環であることが好ましい。 The benzene ring is preferably a benzene ring substituted with a methoxy group, a benzene ring substituted with an ethoxy group, a benzene ring substituted with a hydroxyl group, or an unsubstituted benzene ring.
有機化合物がポリフェノールであることが好ましく、また、ポリフェノールがフラボノイドであることが好ましい。
または、有機化合物が、ケルセチン、ヘスペリジン、ルチン、レスベラトロール、フェルラ酸、カルコン、ゲニステイン、ピセアタンノール、３”Ｍｅ−ＥＧＣｇ、ルテオリン、または、カプサイシンであることが好ましい。
The organic compound is preferably a polyphenol, and the polyphenol is preferably a flavonoid.
Alternatively, the organic compound is preferably quercetin, hesperidin, rutin, resveratrol, ferulic acid, chalcone, genistein, piceatannol, 3 ″ Me-EGCg, luteolin, or capsaicin.
本発明に係る水溶性向上方法は、ベンゼン環を含む有機化合物の水に対する溶解度を向上させる方法であって、下記一般式（Ｉ）で表される化合物を水に溶解させる工程を含む
また、本発明に係る水溶液調製方法は、ベンゼン環を含む有機化合物の水溶液を調製する方法であって、水に、有機化合物と、下記一般式（Ｉ）で表される化合物とを溶解させる工程を含む
本発明によって、水溶性向上剤、水溶性向上方法、及び、水溶液調製方法を提供することが可能になった。 According to the present invention, it is possible to provide a water solubility improver, a water solubility enhancement method, and an aqueous solution preparation method.
以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。なお、本発明の目的、特徴、利点、および、そのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。 Hereinafter, embodiments of the present invention completed based on the above knowledge will be described in detail with reference to examples. The objects, features, advantages, and ideas of the present invention will be apparent to those skilled in the art from the description of the present specification, and those skilled in the art can easily reproduce the present invention from the description of the present specification. it can. The embodiments and specific examples of the invention described below show preferred embodiments of the present invention and are shown for illustration or explanation, and the present invention is not limited to them. It is not limited. It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made based on the description of the present specification within the spirit and scope of the present invention disclosed herein.
本発明に係る水溶性向上剤は、溶質として有機化合物を水に溶解させるとき、その溶解度を向上させることができ、下記一般式（Ｉ）で表される化合物である
なお、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の内、一つ以上が水酸基であることが好ましく、二つ以上が水酸基であることがより好ましく、三つ全てが水酸基であることがさらに好ましい。また、Ｃ１−４アルキル基とは、メチル基、エチル基、n-プロピル基、ｉ-プロピル基、n-ブチル基、ｉ-ブチル基、s-ブチル基、または、t-ブチル基をいうが、メチル基、またはエチル基であることが好ましい。
一般式（Ｉ）で表される化合物において、２位および３位の立体化学は、それぞれ独立に、Ｒであっても良く、Ｓであっても良い。
The water solubility improver according to the present invention is a compound represented by the following general formula (I), which can improve the solubility when an organic compound is dissolved in water as a solute.
Of R 1 , R 2 and R 3 , one or more are preferably hydroxyl groups, more preferably two or more are hydroxyl groups, and all three are more preferably hydroxyl groups. The C 1-4 alkyl group means a methyl group, ethyl group, n-propyl group, i-propyl group, n-butyl group, i-butyl group, s-butyl group, or t-butyl group. Is preferably a methyl group or an ethyl group.
In the compound represented by the general formula (I), the stereochemistry at the 2-position and the 3-position may be independently R or S.
この化合物は、下記構造式（ＩＩ）で表されるように、４”Ｍｅ−ＥＧＣｇ（（−）−エピガロカテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−メチル）ガレート）、４”Ｍｅ−ＧＣｇ（（−）−ガロカテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−メチル）ガレート）、４”Ｅｔ−ＥＧＣｇ（（−）−エピガロカテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−エチル）ガレート）、４”Ｅｔ−ＧＣｇ（（−）−ガロカテキン−３−Ｏ−（４−Ｏ−エチル）ガレート）、ＥＧＣｇ（（−）−エピガロカテキン−３−Ｏ−ガレート）、または、ＧＣｇ（（−）−ガロカテキン−３−Ｏ−ガレート）であることが好ましい。
ここで溶質として用いる有機化合物は、ベンゼン環を１個以上含んでいれば、その構造は特に限定されない。そして、ベンゼン環は、置換されていても良く、無置換であっても良いが、メトキシ基で置換されたベンゼン環、エトキシ基で置換されたベンゼン環、水酸基で置換されたベンゼン環、または、無置換のベンゼン環であることがより好ましい。
水酸基で置換されたベンゼン環は、この水酸基が糖（鎖）残基と結合し、配糖体を形成していても良い。ここで、糖（鎖）残基を形成する糖は、天然型であっても良く、非天然型であっても良く、例えば、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、フコース、ラムノース、アラビノース、キシロース、及び、ジギトキソースなどが挙げられるが、これらに限定されない。
The structure of the organic compound used as the solute is not particularly limited as long as it contains one or more benzene rings. The benzene ring may be substituted or unsubstituted, but a benzene ring substituted with a methoxy group, a benzene ring substituted with an ethoxy group, a benzene ring substituted with a hydroxyl group, or An unsubstituted benzene ring is more preferable.
The benzene ring substituted with a hydroxyl group may be bonded to a sugar (chain) residue to form a glycoside. Here, the sugar forming the sugar (chain) residue may be a natural type or a non-natural type. For example, glucose, mannose, galactose, fructose, fucose, rhamnose, arabinose, xylose, And digitoki sauce etc. are mentioned, However, It is not limited to these.
溶質である有機化合物の分子量は、特に限定されないが、１２００以下であることが好ましく、１０００以下であることが好ましく、８００以下であることがさらに好ましく、６５０以下であることが特に好ましい。なお、有機化合物は、無水物であっても良く、水和物であっても良い。 The molecular weight of the organic compound as the solute is not particularly limited, but is preferably 1200 or less, preferably 1000 or less, more preferably 800 or less, and particularly preferably 650 or less. The organic compound may be an anhydride or a hydrate.
このような有機化合物は、ポリフェノールであることが好ましく、フラボノイドであることがより好ましい。フラボノイドの例として、ケルセチン（quercetin）、ヘスペリジン（hesperidin）、ルチン（rutin）、ゲニステイン（genistein）、ルテオリン（luteolin）、および、３”Ｍｅ−ＥＧＣｇ（(-)-epigallocatechin-3-O-(3-O-methyl)gallate））が挙げられる。
溶質である有機化合物のうち、フラボノイド以外の例として、レスベラトロール（resveratrol）、フェルラ酸（ferulic acid）、カルコン（chalcone）、ピセアタンノール（piceatannol）、および、カプサイシン（capsaicin）が挙げられる。
有機化合物は、一般的に、その構造ゆえに水に溶けにくい傾向がある。特に、ベンゼン環を含む有機化合物は水に溶けにくく、有機化合物中に占めるベンゼン環の割合が高いほど、水に溶けにくい傾向が上昇する。
しかし、本発明に係る水溶性向上剤を、ベンゼン環を含む有機化合物と共に水に溶解させることによって、その有機化合物の水溶性を著しく向上させることが可能となる。即ち、ベンゼン環を含む有機化合物の、水溶性向上剤を溶解させた水に対する溶解度は、水溶性向上剤を溶解させていない水に対する溶解度に比べて、著しく向上する。
なお、水溶性向上剤、および有機化合物を溶解させる水は、実質的に水のみであっても良いが、例えば、アセトン、メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、および、Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）などの、水と混和する有機溶媒との混合物であっても良い。また、例えば塩などの他の溶質を含んでいても良く、塩を含む場合には、その濃度は、１ｍｏｌ／Ｌ以下であることが好ましく、０．１ｍｏｌ／Ｌ以下であることがより好ましく、０．０１ｍｏｌ／Ｌ以下であることがさらに好ましく、０．００１ｍｏｌ／Ｌ以下であることが特に好ましい。
Organic compounds generally tend to be less soluble in water due to their structure. In particular, an organic compound containing a benzene ring is less soluble in water, and the higher the proportion of the benzene ring in the organic compound, the higher the tendency for it to be less soluble in water.
However, the water solubility of the organic compound can be remarkably improved by dissolving the water solubility improver according to the present invention in water together with the organic compound containing a benzene ring. That is, the solubility of the organic compound containing a benzene ring in water in which the water solubility improver is dissolved is significantly improved compared to the solubility in water in which the water solubility improver is not dissolved.
In addition, the water in which the water solubility improver and the organic compound are dissolved may be substantially only water. For example, acetone, methanol, ethanol, dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO), acetonitrile, Also, it may be a mixture with an organic solvent miscible with water, such as N-methylpyrrolidone (NMP). Further, for example, other solutes such as a salt may be contained, and when the salt is contained, the concentration is preferably 1 mol / L or less, more preferably 0.1 mol / L or less, More preferably, it is 0.01 mol / L or less, and particularly preferably 0.001 mol / L or less.
溶質である有機化合物を、水に溶解させる時、水溶性向上剤は、有機化合物と同時に加えても良く、前または後に加えても良い。水溶性向上剤を後に加える場合には、有機化合物は、水に懸濁していても、完全に溶解していても良い。懸濁液である場合には、水溶性向上剤を溶解させるに伴って、有機化合物の水に対する溶解度が向上するため、懸濁液が水溶液になったり、析出している有機化合物の量が減少したりするような変化が観察される。 When the organic compound which is a solute is dissolved in water, the water solubility improver may be added simultaneously with the organic compound, or may be added before or after. When the water solubility improver is added later, the organic compound may be suspended in water or completely dissolved. In the case of a suspension, as the water solubility improver is dissolved, the solubility of the organic compound in water improves, so that the suspension becomes an aqueous solution or the amount of precipitated organic compound decreases. Changes are observed.
水溶性向上剤と有機化合物を水に溶解させる方法は特に限定されず、公知の方法を使用することができる。例えば、これらを同時に水に溶解させる場合には、マグネティックスターラーを用いて攪拌したり、超音波を照射したりすることによって、水溶性向上剤や有機化合物を容易に水に溶解させることができる。 The method for dissolving the water solubility improver and the organic compound in water is not particularly limited, and a known method can be used. For example, when these are simultaneously dissolved in water, the water solubility improver and the organic compound can be easily dissolved in water by stirring using a magnetic stirrer or irradiating with ultrasonic waves.
水溶液中の水溶性向上剤の濃度は、特に限定されず、当業者であれば、ベンゼン環を含む有機化合物の溶解する様子を観察しながら、または、水溶液の使用用途や目的に応じて、適宜必要な濃度を決めることができる。例えば、水溶性向上剤の濃度が高いほど、有機化合物の水溶性が向上することから、水溶性向上剤の濃度は、０．１ｍＭ以上であることが好ましく、１ｍＭ以上であることがより好ましく、１０ｍＭ以上であることがさらに好ましく、５０ｍＭ以上であることが特に好ましい。 The concentration of the water solubility improver in the aqueous solution is not particularly limited, and those skilled in the art can appropriately observe the state of dissolution of the organic compound containing a benzene ring, or depending on the intended use and purpose of the aqueous solution. The required concentration can be determined. For example, the higher the concentration of the water solubility improver, the better the water solubility of the organic compound. Therefore, the concentration of the water solubility improver is preferably 0.1 mM or more, more preferably 1 mM or more, More preferably, it is 10 mM or more, and particularly preferably 50 mM or more.
水溶液中の溶質である有機化合物の濃度は、特に限定されず、当業者であれば、有機化合物の溶解する様子を観察しながら、または、水溶液の使用用途や目的に応じて、適宜必要な濃度を決めることができる。
例えば、有機化合物がケルセチン２水和物であって、水溶性向上剤が４”Ｍｅ−ＥＧＣｇである場合には、ケルセチン２水和物を水溶性向上剤を含まない水に溶解させた時に比べて、有機化合物の濃度を、水溶性向上剤の濃度が１ｍＭである時には２．６倍、水溶性向上剤の濃度が１０ｍＭである時には１０．０倍、そして、水溶性向上剤の濃度が５０ｍＭである時には３３．２倍にすることができる。
The concentration of the organic compound that is the solute in the aqueous solution is not particularly limited, and those skilled in the art can appropriately observe the concentration of the organic compound while observing the dissolution of the organic compound or depending on the intended use and purpose of the aqueous solution. Can be decided.
For example, when the organic compound is quercetin dihydrate and the water solubility improver is 4 "Me-EGCg, compared to when quercetin dihydrate is dissolved in water not containing the water solubility improver. Thus, the concentration of the organic compound is 2.6 times when the concentration of the water-soluble improving agent is 1 mM, 10.0 times when the concentration of the water-soluble improving agent is 10 mM, and the concentration of the water-soluble improving agent is 50 mM. Can be increased by 33.2 times.
このように、水溶性向上剤を含む水溶液は、水溶性向上剤を含まない水溶液と比べて、溶質である有機化合物を高濃度で含むことができる。
このような水溶液の使用方法は特に限定されないが、溶質である有機化合物を高濃度で含有することから、水溶液を非常に効率的に保存することができ、また、例えば、有機化合物が生理活性を有する場合には、ヒト、医薬、または食品などに、非常に効率的に投与、摂取、または混合することが可能である。
As described above, the aqueous solution containing the water solubility improver can contain the organic compound as a solute at a higher concentration than the aqueous solution not containing the water solubility improver.
The method of using such an aqueous solution is not particularly limited, but since the organic compound that is a solute is contained at a high concentration, the aqueous solution can be stored very efficiently. For example, the organic compound has physiological activity. If so, it can be administered, ingested, or mixed very efficiently into humans, medicines, foods, and the like.
ここで、水溶性向上剤によって有機化合物の水溶性が向上するメカニズムは、確かではないが、以下のように推察される。
水中でのベンゼン環を含む有機化合物の分子間相互作用は、ベンゼン環のπ-π相互作用による垂直方向のスタッキングが主であるが、ここに、水溶性向上剤を共存させることによって、有機化合物と水溶性向上剤とが相互作用し、これらの複合体を形成することによって、有機化合物が水中に溶解するようになるのではないかと考えられる。実際に、ケルセチンと４”Ｍｅ−ＥＧＣｇとを溶解させた溶液の１Ｈ−ＮＭＲ分析を行ったところ、溶液中の４”Ｍｅ−ＥＧＣｇ濃度を高くするにつれて、ケルセチンの濃度は一定であるにも関わらず、ケルセチンの、特にＨ−５、Ｈ−５’及びＨ−６’の、ピークが低磁場シフトしたとの結果が得られており、これはこの推察の裏づけとなる。
なお、水溶性向上剤は、例えばＥＧＣ（（−）−エピガロカテキン）やＥＣ（（−）−エピカテキン）などの、一般式（Ｉ）で表される化合物からガレート基または４−Ｏ−アルキルガレート基を除去した化合物に比べて、極めて高い水溶性向上効果を発揮することから、一般式（Ｉ）で表される化合物が含有するガレート基または４−Ｏ−アルキルガレート基の存在が、有機化合物との水中における相互作用に、大きな役割を果たしていると考えられる。
Here, the mechanism by which the water solubility of the organic compound is improved by the water solubility improver is not certain, but is presumed as follows.
The intermolecular interaction of organic compounds containing benzene rings in water is mainly vertical stacking due to π-π interaction of benzene rings. It is considered that the organic compound can be dissolved in water by the interaction between the water-soluble improver and the water-soluble improver to form these complexes. Actually, when 1 H-NMR analysis of a solution in which quercetin and 4 ″ Me-EGCg were dissolved, the concentration of quercetin was constant as the concentration of 4 ″ Me-EGCg in the solution was increased. Nevertheless, quercetin, especially H-5, H-5 ′ and H-6 ′, showed that the peaks were shifted in a low magnetic field, supporting this assumption.
The water solubility improver is selected from compounds represented by the general formula (I) such as EGC ((−)-epigallocatechin) and EC ((−)-epicatechin), or a gallate group or 4-O—. Compared with the compound from which the alkyl gallate group has been removed, it exhibits an extremely high water-solubility improving effect. Therefore, the presence of the gallate group or 4-O-alkyl gallate group contained in the compound represented by the general formula (I) It is thought to play a major role in the interaction of organic compounds with water.
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further more concretely, the scope of the present invention is not limited to the following Example.
以下の実施例において、例として、４”Ｍｅ−ＥＧＣｇ、４”Ｍｅ−ＧＣｇ、４”Ｅｔ−ＥＧＣｇ、ＥＧＣｇ、及び、ＧＣｇを用いて、本発明に係る水溶性向上剤が、様々な構造を有する、ベンゼン環を含む有機化合物の水溶性を著しく向上させられることを示す。
また、比較例として、ガレート基または４−Ｏ−アルキルガレート基を有さないＥＧＣ及びＧＣは、本発明に係る水溶性向上剤に比べて、ベンゼン環を含む有機化合物の水溶性を向上させられないことを、併せて示す。
In the following examples, as an example, the water solubility improver according to the present invention has various structures using 4 ″ Me-EGCg, 4 ″ Me-GCg, 4 ″ Et-EGCg, EGCg, and GCg. It shows that the water solubility of the organic compound containing a benzene ring can be remarkably improved.
As a comparative example, EGC and GC having no gallate group or 4-O-alkyl gallate group can improve the water solubility of an organic compound containing a benzene ring as compared with the water solubility improver according to the present invention. It shows together that there is no.
［実施例１］水溶性向上剤および３”Ｍｅ−ＥＧＣｇの調製
（１）４”Ｍｅ−ＥＧＣｇおよび３”Ｍｅ−ＥＧＣｇの調製、ならびに、ＥＧＣｇの精製
テアビゴＴＭ（ＥＧＣｇ≧９４％、１３７．５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶解した後、酢酸ナトリウム（９８．４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、４．０当量）とヨウ化メチル（１４４．８μＬ、２．４ｍｍｏｌ、８．０当量）とを加え、１００℃で５分間撹拌した。
その後、ＯＤＳ−ＨＰＬＣ［カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ＧＰ ２０ｘ２５０ｍｍ（粒子径：５μｍ）関東化学株式会社製、展開溶媒：アセトニトリル：水：酢酸（２：１８：１）、流速：５．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出波長２１０ｎｍ］により分離・精製を行い、保持時間２７．７分に未反応のＥＧＣｇ６４．９ｍｇ（回収率４７．２％）を得、保持時間４４．９分に４”Ｍｅ−ＥＧＣｇを収率４７．３％にて得、そして、保持時間４９．０分に３“Ｍｅ−ＥＧＣｇ７．７ｍｇ（回収率１．８％）を得た。
[Example 1] Preparation of water solubility improver and 3 "Me-EGCg (1) Preparation of 4" Me-EGCg and 3 "Me-EGCg and purification of EGCg Theavigo TM (EGCg ≧ 94%, 137.5 mg , 0.3 mmol) in DMF (1.0 mL), sodium acetate (98.4 mg, 1.2 mmol, 4.0 eq) and methyl iodide (144.8 μL, 2.4 mmol, 8.0 eq) And stirred at 100 ° C. for 5 minutes.
Then, ODS-HPLC [column: Lighttysil RP-18GP 20 × 250 mm (particle size: 5 μm), manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd., developing solvent: acetonitrile: water: acetic acid (2: 18: 1), flow rate: 5.0 mL / min, detection The product was separated and purified at a wavelength of 210 nm] to obtain 64.9 mg (recovery rate 47.2%) of unreacted EGCg at a retention time of 27.7 minutes, and yield of 4 "Me-EGCg at a retention time of 44.9 minutes. And 3 "Me-EGCg 7.7 mg (recovery 1.8%) was obtained at a retention time of 49.0 minutes.
得られた４”Ｍｅ−ＥＧＣｇは、旋光度、１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲの測定、並びに、質量分析によって、目的物であると同定した。また、得られた３”Ｍｅ−ＥＧＣｇは、１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲの測定によって、目的物であると同定した。回収されたＥＧＣｇは、上記ＨＰＬＣを用いて、標品（和光純薬工業株式会社製、生化学用、ＥＧＣｇ≧９０％）と保持時間を比較することにより目的物であると同定した。
<<4”Me-EGCg>>
[α]D 20 -157.1°(c = 1.0, acetone)
1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 2.84 (1H, dd, J = 17.4, 2.5), 2.98 (1H, dd, J = 17.4, 4.4), 3.81 (3H, s), 4.97 (1H, bs), 5.53(1H, m), 5.95 (2H, bs), 6.49 (2H, bs), 6.91 (2H, bs)
13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 26.8, 60.7, 70.3, 78.5, 95.9, 96.5, 99.3, 106.8, 110.3, 126.6, 130.7, 133.8, 141.2, 146.7, 151.5, 157.2, 157.8, 157.9, 167.1
MS (ESI) m/z : 471.1 (M-)
<<3”Me-EGCg>>
1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 2.87 (1H, dd, J = 17.3, 2.5), 2.99 (1H, dd, J = 17.3, 4.4), 3.80 (3H, s), 4.99 (1H, bs), 5.49(1H, m), 5.96 (1H, bd, J = 2.2), 5.97 (1H, bd, J = 2.2), 6.51 (2H, bs), 7.01 (1H, bd, J = 1.9), 7.06 (1H, bd, J = 1.9)
13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 26.5, 56.6, 70.4, 78.5, 95.7, 96.5, 99.3, 106.2, 106.7, 111.9, 121.5, 130.9, 133.7, 140.5, 146.0, 146.7, 148.9, 157.1, 157.8, 157.9, 167.6
The obtained 4 ″ Me-EGCg was identified as an object by measurement of optical rotation, 1 H-NMR and 13 C-NMR, and mass spectrometry. The obtained 3 ″ Me-EGCg was , 1 H-NMR and 13 C-NMR were identified as the desired product. The recovered EGCg was identified as the target product by comparing the retention time with a standard product (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., for biochemistry, EGCg ≧ 90%) using the above-mentioned HPLC.
<< 4 ”Me-EGCg >>
[α] D 20 -157.1 ° (c = 1.0, acetone)
1 H-NMR (500 MHz, CD 3 OD): 2.84 (1H, dd, J = 17.4, 2.5), 2.98 (1H, dd, J = 17.4, 4.4), 3.81 (3H, s), 4.97 (1H, bs), 5.53 (1H, m), 5.95 (2H, bs), 6.49 (2H, bs), 6.91 (2H, bs)
13 C-NMR (125 MHz, CD 3 OD): 26.8, 60.7, 70.3, 78.5, 95.9, 96.5, 99.3, 106.8, 110.3, 126.6, 130.7, 133.8, 141.2, 146.7, 151.5, 157.2, 157.8, 157.9, 167.1
MS (ESI) m / z: 471.1 (M -)
<< 3 ”Me-EGCg >>
1 H-NMR (500 MHz, CD 3 OD): 2.87 (1H, dd, J = 17.3, 2.5), 2.99 (1H, dd, J = 17.3, 4.4), 3.80 (3H, s), 4.99 (1H, bs), 5.49 (1H, m), 5.96 (1H, bd, J = 2.2), 5.97 (1H, bd, J = 2.2), 6.51 (2H, bs), 7.01 (1H, bd, J = 1.9), 7.06 (1H, bd, J = 1.9)
13 C-NMR (125 MHz, CD 3 OD): 26.5, 56.6, 70.4, 78.5, 95.7, 96.5, 99.3, 106.2, 106.7, 111.9, 121.5, 130.9, 133.7, 140.5, 146.0, 146.7, 148.9, 157.1, 157.8 , 157.9, 167.6
（２）４”Ｍｅ−ＧＣｇの調製
ＧＣｇ（和光純薬工業株式会社製、５６．４ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．４１ｍＬ）に溶解した後、酢酸ナトリウム（４０．４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、４．０当量）とヨウ化メチル（５９．４μＬ、０．９８ｍｍｏｌ、８．０当量）とを加え、１００℃で５分間撹拌した。
その後、下記の条件にてＯＤＳ−ＨＰＬＣにより分離・精製を行い、保持時間３３．４分に未反応のＧＣｇ２３．４ｍｇ（回収率：４１．５％）を得、そして、保持時間５８．８分に４”Ｍｅ−ＧＣｇ２４．８ｍｇ（収率：４２．６％）を得た。
(2) Preparation of 4 ″ Me-GCg After dissolving GCg (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd., 56.4 mg, 0.12 mmol) in DMF (0.41 mL), sodium acetate (40.4 mg, 0.49 mmol) 4.0 equivalents) and methyl iodide (59.4 μL, 0.98 mmol, 8.0 equivalents) were added and stirred at 100 ° C. for 5 minutes.
Thereafter, separation and purification were performed by ODS-HPLC under the following conditions to obtain 23.4 mg of unreacted GCg (recovery rate: 41.5%) at a retention time of 33.4 minutes, and a retention time of 58.8 minutes. 4 ″ Me-GCg 24.8 mg (yield: 42.6%) was obtained.
＜＜ＯＤＳ−ＨＰＬＣによる分離・精製の条件＞＞
カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ＧＰ ２０×２５０ｍｍ（粒子径：５μｍ）関東化学株式会社製
検出波長：２１０ｎｍ
流速：５．０ｍＬ／ｍｉｎ
展開溶媒：Ｈ２Ｏ＋５％ＡｃＯＨ／ＭｅＣＮ＋５％ＡｃＯＨ
Column: Mightysil RP-18GP 20 × 250 mm (particle diameter: 5 μm) Detection wavelength: 210 nm, manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.
Flow rate: 5.0 mL / min
Developing solvent: H 2 O + 5% AcOH / MeCN + 5% AcOH
得られた４”Ｍｅ−ＧＣｇは、１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲの測定、並びに、質量分析によって、目的物であると同定した。
<<4”Me-GCg>>
1H-NMR (700 MHz, acetone-d6): 2.77 (1H, dd, J = 16.6, 5.3), 2.82 (1H, dd, J = 16.6, 4.8), 3.83 (3H, s), 5.13 (1H, d, J = 5.3), 5.40(1H, m), 5.97 (1H, d, J = 2.2), 6.05 (1H, d, J = 2.2), 6.47 (2H, bs), 7.01 (2H, bs)
13C-NMR (175 MHz, acetone-d6): 23.6, 60.6, 70.6, 78.5, 95.4, 96.3, 98.9, 106.1, 109.8, 126.3, 130.7, 133.3, 140.5, 146.5, 151.1, 156.1, 157.2, 158.0 165.8
MS (ESI) m/z : 471.1 (M-)
The obtained 4 ″ Me-GCg was identified as a target product by 1 H-NMR and 13 C-NMR measurements and mass spectrometry.
<< 4 ”Me-GCg >>
1 H-NMR (700 MHz, acetone-d 6 ): 2.77 (1H, dd, J = 16.6, 5.3), 2.82 (1H, dd, J = 16.6, 4.8), 3.83 (3H, s), 5.13 (1H , d, J = 5.3), 5.40 (1H, m), 5.97 (1H, d, J = 2.2), 6.05 (1H, d, J = 2.2), 6.47 (2H, bs), 7.01 (2H, bs)
13 C-NMR (175 MHz, acetone-d 6 ): 23.6, 60.6, 70.6, 78.5, 95.4, 96.3, 98.9, 106.1, 109.8, 126.3, 130.7, 133.3, 140.5, 146.5, 151.1, 156.1, 157.2, 158.0 165.8
MS (ESI) m / z: 471.1 (M -)
（３）４”Ｅｔ−ＥＧＣｇの調製
テアビゴＴＭ（ＥＧＣｇ≧９４％、１３７．５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．０ｍＬ）に溶解した後、酢酸ナトリウム（９８．４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、４．０当量）とヨウ化エチル（１９３．０μＬ、２．４ｍｍｏｌ、８．０当量）を加え、１００℃で５分間撹拌した。
その後、ＯＤＳ−ＨＰＬＣにより分離・精製を行い、保持時間２８．５分に未反応のＥＧＣｇ６６．８ ｍｇ（回収率：４８．６％）を得、そして、保持時間４９．２分に４”Ｅｔ−ＥＧＣｇ６０．２ ｍｇ（収率：４１．３％）を得た。
(3) Preparation of 4 ″ Et-EGCg Teaavigo ™ (EGCg ≧ 94%, 137.5 mg, 0.3 mmol) was dissolved in DMF (1.0 mL) and then sodium acetate (98.4 mg, 1.2 mmol, 4 mmol 0.0 equivalent) and ethyl iodide (193.0 μL, 2.4 mmol, 8.0 equivalent) were added, and the mixture was stirred at 100 ° C. for 5 minutes.
Thereafter, separation and purification were performed by ODS-HPLC to obtain 66.8 mg of unreacted EGCg (recovery: 48.6%) at a retention time of 28.5 minutes, and 4 "Et at a retention time of 49.2 minutes. -60.2 mg of EGCg (yield: 41.3%) was obtained.
＜＜ＯＤＳ−ＨＰＬＣによる分離・精製の条件＞＞
カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ＧＰ ２０×２５０ｍｍ（粒子径：５μｍ）関東化学株式会社製
検出波長：２１０ｎｍ
流速：５．０ｍＬ／ｍｉｎ
展開溶媒：Ｈ２Ｏ＋５％ＡｃＯＨ／ＭｅＣＮ＋５％ＡｃＯＨ
Column: Mightysil RP-18GP 20 × 250 mm (particle diameter: 5 μm) Detection wavelength: 210 nm, manufactured by Kanto Chemical Co., Inc.
Flow rate: 5.0 mL / min
Developing solvent: H 2 O + 5% AcOH / MeCN + 5% AcOH
得られた４”Ｅｔ−ＥＧＣｇは、１Ｈ−ＮＭＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲの測定、並びに、質量分析によって、目的物であると同定した。
<<4”Et-EGCg>>
1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 1.30 (3H, t, J = 7.0), 2.84 (1H, dd, J = 17.5, 2.5), 2.98 (1H, dd, J = 17.5, 5.0), 4.09 (2H, q, J = 7.0), 4.97 (1H, bs), 5.53(1H, m), 5.95 (2H, bs), 6.49 (2H, bs), 6.91 (2H, bs)
13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 15.6, 26.8, 69.3, 70.3, 78.5, 95.9, 96.5, 99.3, 106.8, 110.2, 126.4, 130.7, 133.8, 139.8, 146.7, 151.7, 157.2, 157.8, 157.9, 167.2
MS (ESI) m/z : 485.1 (M-)
The obtained 4 ″ Et-EGCg was identified as the target product by 1 H-NMR and 13 C-NMR measurements and mass spectrometry.
<< 4 ”Et-EGCg >>
1 H-NMR (500 MHz, CD 3 OD): 1.30 (3H, t, J = 7.0), 2.84 (1H, dd, J = 17.5, 2.5), 2.98 (1H, dd, J = 17.5, 5.0), 4.09 (2H, q, J = 7.0), 4.97 (1H, bs), 5.53 (1H, m), 5.95 (2H, bs), 6.49 (2H, bs), 6.91 (2H, bs)
13 C-NMR (125 MHz, CD 3 OD): 15.6, 26.8, 69.3, 70.3, 78.5, 95.9, 96.5, 99.3, 106.8, 110.2, 126.4, 130.7, 133.8, 139.8, 146.7, 151.7, 157.2, 157.8, 157.9 , 167.2
MS (ESI) m / z: 485.1 (M -)
［実施例２］水溶性向上試験
本発明に係る水溶性向上剤として、実施例１で調製または精製した、４”Ｍｅ−ＥＧＣｇ、４”Ｍｅ−ＧＣｇ、４”Ｅｔ−ＥＧＣｇ、および、ＥＧＣｇ、並びに、市販のＧＣｇを用い、溶質として、ベンゼン環を含む有機化合物を用いて、この溶質の水溶性向上試験を行った。また、比較例として、上記本発明に係る水溶性向上剤の代わりに、ＥＧＣ（和光純薬工業株式会社製）、および、ＥＣ（ＥＣ≧９０％、シグマアルドリッチ社製）を用いて、有機化合物の水溶性向上試験を行った。
溶質としては、代表的なものとして、ケルセチン２水和物、ヘスペリジン、ルチン３水和物、レスベラトロール、フェルラ酸、カルコン、ゲニステイン、ピセアタンノール、３”Ｍｅ−ＥＧＣｇ、ルテオリン、および、カプサイシンを用いた。
具体的な実験方法は、以下の通りである。
[Example 2] Water solubility improvement test As a water solubility improver according to the present invention, 4 "Me-EGCg, 4" Me-GCg, 4 "Et-EGCg, and EGCg prepared or purified in Example 1, In addition, a commercially available GCg was used, and an organic compound containing a benzene ring was used as a solute, and a water solubility improvement test of this solute was conducted.As a comparative example, instead of the water solubility improver according to the present invention, , EGC (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and EC (EC ≧ 90%, manufactured by Sigma-Aldrich) were used to conduct a water solubility improvement test of organic compounds.
Typical solutes include quercetin dihydrate, hesperidin, rutin trihydrate, resveratrol, ferulic acid, chalcone, genistein, piceatannol, 3 "Me-EGCg, luteolin, and capsaicin. Was used.
The specific experimental method is as follows.
（１）ケルセチン２水和物
溶質として、市販のケルセチン２水和物（純度９５％以上、エンゾライフサイエンス社製）５ｍｇに、超純水、または、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇの水溶液（１、１０、または、５０ ｍＭ）２００μＬを加えた後、遮光下、２５℃で２４時間攪拌した。
その後、遠心分離にて上清を回収し、下記および図１の条件、そして、適切な展開溶媒比でＨＰＬＣを用いて、超純水、または、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇの各濃度の水溶液における、ケルセチン２水和物の溶解量を面積値としてそれぞれ求めた。得られた面積値から、超純水に溶解したケルセチン２水和物の面積値を１として、１、１０、または、５０ ｍＭの４”Ｍｅ-ＥＧＣｇ水溶液におけるケルセチン２水和物の溶解量を算出した。
(1) Quercetin dihydrate As a solute, 5 mg of commercially available quercetin dihydrate (purity 95% or more, manufactured by Enzo Life Science), ultrapure water, or an aqueous solution of 4 ″ Me-EGCg (1, 10 Or 50 mM), and then stirred at 25 ° C. for 24 hours in the dark.
Thereafter, the supernatant was collected by centrifugation, and was used in ultrapure water or an aqueous solution of each concentration of 4 ″ Me-EGCg using HPLC under the conditions shown below and in FIG. 1 and an appropriate developing solvent ratio. The amount of quercetin dihydrate dissolved was determined as an area value, and from the obtained area value, the area value of quercetin dihydrate dissolved in ultrapure water was defined as 1, which was 1, 10, or 50 mM. The amount of quercetin dihydrate dissolved in the 4 ″ Me-EGCg aqueous solution was calculated.
また、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇの代わりに、４”Ｍｅ−ＧＣｇ、４”Ｅｔ−ＥＧＣｇ、および、ＥＧＣｇ、ＧＣｇ、ＥＧＣ、または、ＥＣを用いて、同様の実験を行った。
結果を、図２に示す。
Moreover, the same experiment was conducted using 4 ″ Me-GCg, 4 ″ Et-EGCg, and EGCg, GCg, EGC, or EC instead of 4 ″ Me-EGCg.
The results are shown in FIG.
＜＜ＯＤＳ−ＨＰＬＣによる分離・精製の条件＞＞
カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ＧＰ ４．６×１５０ｍｍ（粒子径：３μｍ）関東化学株式会社製
流速：０．７ｍＬ／ｍｉｎ
展開溶媒：Ｈ２Ｏ＋０．１％リン酸／ＭｅＣＮ＋０．１％リン酸
<< Conditions for Separation / Purification by ODS-HPLC >>
Column: Mightysil RP-18GP 4.6 × 150 mm (particle diameter: 3 μm), manufactured by Kanto Chemical Co., Inc. Flow rate: 0.7 mL / min
Developing solvent: H 2 O + 0.1% phosphoric acid / MeCN + 0.1% phosphoric acid
図２が示すように、本発明に係る水溶性向上剤を用いた場合には、ケルセチン２水和物の水溶性が著しく向上した。例えば、水溶性向上剤の濃度がわずか１ｍＭであっても、ケルセチン２水和物の水溶性は、超純水に溶解させた場合に比べて、１．６倍〜２．６倍に向上した。さらに、水溶性向上剤の濃度が１０ｍＭ以上の場合には、本発明に係る水溶性向上剤による水溶性向上効果はより顕著になり、例えば１０ｍＭの場合で、ケルセチン２水和物の水溶性は、超純水に溶解させた場合に比べて、７．４倍〜１０．０倍と飛躍的に向上し、水溶性向上剤の代わりに同程度の濃度のＥＧＣやＥＣを溶解させた場合と比較しても、非常に高い水溶性を示した。水溶性向上剤の濃度を５０ｍＭとした場合には、ケルセチン２水和物の水溶性は、超純水に溶解させた場合に比べて、３３．２倍〜５１．１倍と桁違いに上昇した。 As shown in FIG. 2, when the water solubility improver according to the present invention was used, the water solubility of quercetin dihydrate was significantly improved. For example, even when the concentration of the water solubility improver is only 1 mM, the water solubility of quercetin dihydrate is improved 1.6 to 2.6 times compared to the case where it is dissolved in ultrapure water. . Furthermore, when the concentration of the water-solubility improver is 10 mM or more, the water-solubility improving effect by the water-solubility improver according to the present invention becomes more prominent. For example, in the case of 10 mM, the water-solubility of quercetin dihydrate is Compared with the case where it is dissolved in ultrapure water, it is drastically improved from 7.4 times to 10.0 times, and in the case where EGC or EC having the same concentration is dissolved instead of the water solubility improver. Even in comparison, it showed very high water solubility. When the concentration of the water solubility improver is 50 mM, the water solubility of quercetin dihydrate increases by an order of magnitude from 33.2 times to 51.1 times compared to when dissolved in ultrapure water. did.
（２）ヘスペリジン
溶質として、ヘスペリジン（純度９２％以上、和光純薬製）５．０ｍｇを用いた以外は、「（１）ケルセチン２水和物」と同様の実験を行った。
(2) Hesperidin The same experiment as “(1) Quercetin dihydrate” was performed except that 5.0 mg of hesperidin (purity 92% or more, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was used as the solute.
（３）ルチン３水和物
溶質として、ルチン３水和物（純度９８％以上、東京化成製）５．０ｍｇを用いた以外は、「（１）ケルセチン２水和物」と同様の実験を行った。
(3) Rutin trihydrate The same experiment as “(1) Quercetin dihydrate” except that 5.0 mg of rutin trihydrate (purity 98% or more, manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) was used as the solute. went.
（４）レスベラトロール
溶質として、ｔｒａｎｓ−レスベラトロール（純度９８％以上、東京化成製）３．０ｍｇを用いた以外は、「（１）ケルセチン２水和物」と同様の実験を行った。
(4) Resveratrol The same experiment as “(1) Quercetin dihydrate” was performed except that 3.0 mg of trans-resveratrol (purity 98% or more, manufactured by Tokyo Chemical Industry) was used as the solute. .
（５）フェルラ酸
溶質として、ｔｒａｎｓ−フェルラ酸（純度９８％以上、東京化成製）５．０ｍｇを用いた以外は、「（１）ケルセチン２水和物」と同様の実験を行った。
(5) Ferulic acid The same experiment as “(1) Quercetin dihydrate” was performed except that 5.0 mg of trans-ferulic acid (purity 98% or more, manufactured by Tokyo Chemical Industry) was used as the solute.
（６）カルコン
溶質として、カルコン（純度９５％以上、和光純薬製）５．０ｍｇを用い、水溶性向上剤として、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇ、４”Ｍｅ−ＧＣｇ、または、４”Ｅｔ−ＥＧＣｇを用いた以外は、「（１）ケルセチン２水和物」と同様の実験を行った。
(6) Chalcone As a solute, 5.0 mg of chalcone (purity 95% or more, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) is used, and as a water solubility improver, 4 "Me-EGCg, 4" Me-GCg, or 4 "Et-EGCg An experiment similar to “(1) Quercetin dihydrate” was performed except that was used.
（７）ゲニステイン
溶質として、ゲニステイン（純度９６％以上、東京化成製）３．０ｍｇを用いた以外は、「（６）カルコン」と同様の実験を行った。
(7) Genistein An experiment similar to “(6) Chalcone” was conducted except that 3.0 mg of genistein (purity 96% or more, manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) was used as the solute.
（８）ピセアタンノール
溶質として、市販のｔｒａｎｓ−ピセアタンノール（純度９８％以上、東京化成製）２．５ｍｇに、超純水、または、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇの水溶液（１、１０、または、５０ ｍＭ）２００μＬを加えた後、１０分間超音波を照射した。
その後、遠心分離にて上清を回収し、下記および図１の条件、そして、適切な展開溶媒比でＨＰＬＣを用いて、超純水、または、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇの各濃度の水溶液における、ピセアタンノールの溶解量を面積値としてそれぞれ求めた。得られた面積値から、超純水に溶解したピセアタンノールの面積値を１として、１、１０、または、５０ ｍＭの４”Ｍｅ-ＥＧＣｇ水溶液におけるピセアタンノールの溶解量を算出した。
(8) Piceatannol As a solute, 2.5 mg of commercially available trans-piceatannol (purity 98% or more, manufactured by Tokyo Chemical Industry), ultrapure water, or an aqueous solution of 4 ″ Me-EGCg (1, 10, or , 50 mM) and 200 μL, followed by irradiation with ultrasonic waves for 10 minutes.
Thereafter, the supernatant was collected by centrifugation, and was used in ultrapure water or an aqueous solution of each concentration of 4 ″ Me-EGCg using HPLC under the conditions shown below and in FIG. 1 and an appropriate developing solvent ratio. The amount of dissolved piceatannol was determined as an area value, and from the obtained area value, the area value of piceatannol dissolved in ultrapure water was 1, and 1, 10, or 50 mM of 4 "Me- The amount of piceatannol dissolved in the EGCg aqueous solution was calculated.
また、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇの代わりに、４”Ｍｅ−ＧＣｇ、または、４”Ｅｔ−ＥＧＣｇを用いて、同様の実験を行った。 In addition, the same experiment was performed using 4 "Me-GCg or 4" Et-EGCg instead of 4 "Me-EGCg.
＜＜ＯＤＳ−ＨＰＬＣによる分離・精製の条件＞＞
カラム：Ｍｉｇｈｔｙｓｉｌ ＲＰ−１８ＧＰ ４．６×１５０ｍｍ（粒子径：３μｍ）関東化学株式会社製
流速：０．７ｍＬ／ｍｉｎ
展開溶媒：Ｈ２Ｏ＋０．１％リン酸／ＭｅＣＮ＋０．１％リン酸
<< Conditions for Separation / Purification by ODS-HPLC >>
Column: Mightysil RP-18GP 4.6 × 150 mm (particle diameter: 3 μm), manufactured by Kanto Chemical Co., Inc. Flow rate: 0.7 mL / min
Developing solvent: H 2 O + 0.1% phosphoric acid / MeCN + 0.1% phosphoric acid
（９）３”Ｍｅ−ＥＧＣｇ
溶質として、３”Ｍｅ−ＥＧＣｇ２．５ｍｇを用いた以外は、「（８）ピセアタンノール」」と同様の実験を行った。
(9) 3 "Me-EGCg
An experiment similar to “(8) Piceatannol” was conducted except that 2.5 mg of 3 ″ Me-EGCg was used as the solute.
（１０）ルテオリン
溶質として、ルテオリン（純度９０％以上、和光純薬製）１．５ｍｇを用い、水溶性向上剤として、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇ、または、４”Ｍｅ−ＧＣｇを用いた以外は、「（８）ピセアタンノール」」と同様の実験を行った。
(10) Luteolin Luteolin (purity 90% or more, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 1.5 mg was used as a solute, and 4 "Me-EGCg or 4" Me-GCg was used as a water solubility improver. The same experiment as “(8) Piceatannol” was performed.
（１１）カプサイシン
溶質として、カプサイシン（純度６０％以上、和光純薬製）３．０ｍｇを用い、水溶性向上剤として、４”Ｍｅ-ＥＧＣｇを用いた以外は、「（８）ピセアタンノール」」と同様の実験を行った。
(11) Capsaicin “(8) Piceatannol” except that capsaicin (purity 60% or more, manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 3.0 mg was used as the solute, and 4 ”Me-EGCg was used as the water solubility improver. The same experiment was conducted.
（２）ヘスペリジン〜（１１）カプサイシンについて、ＨＰＬＣの測定条件を図１に、そして、溶解量の算定値を図２にまとめて示す。
図２が示すように、本発明に係る水溶性向上剤を用いた場合には、その構造に関わらず、様々な有機化合物の水溶性が著しく向上した。特に、水溶性向上剤の濃度が１０ｍＭ以上の場合には、本発明に係る水溶性向上剤による水溶性向上効果はより顕著になり、水溶性向上剤の代わりに同程度の濃度のＥＧＣやＥＣを溶解させた場合と比較しても、非常に高い水溶性を示した。さらに、水溶性向上剤の濃度が５０ｍＭの場合には、極めて高い水溶性向上効果を示した。
For (2) hesperidin to (11) capsaicin, the HPLC measurement conditions are shown in FIG. 1, and the calculated amount of dissolution is shown in FIG.
As shown in FIG. 2, when the water solubility improver according to the present invention was used, the water solubility of various organic compounds was remarkably improved regardless of the structure. In particular, when the concentration of the water solubility improver is 10 mM or more, the effect of improving the water solubility by the water solubility improver according to the present invention becomes more prominent. Compared with the case where was dissolved, water solubility was very high. Furthermore, when the concentration of the water solubility improver was 50 mM, a very high water solubility enhancement effect was shown.
［実施例３］水溶性向上のメカニズム
本発明に係る水溶性向上剤と、ベンゼン環を含む有機化合物とが、水中で相互作用をしていることを示すべく、以下の実験を行った。
ケルセチン２水和物の濃度を３８．１ｍＭと一定にして、ケルセチン２水和物と４”Ｍｅ−ＥＧＣｇとの比が、１：０、１：１、または、１：５である溶液を調製し、得られた溶液の１Ｈ−ＮＭＲ分析をそれぞれ行った。なお、溶液の溶媒は、Ｄ２Ｏではケルセチンの溶解度が低く、解析に必要な分解能を得ることが困難であったため、Ｄ２Ｏと同じく極性溶媒であることからＤ２Ｏと同様の挙動を示すと考えられるＤＭＳＯ−ｄ６を用いた。
結果を図３に示す。
[Example 3] Mechanism of water solubility improvement The following experiment was conducted to show that the water solubility improver according to the present invention and an organic compound containing a benzene ring interact in water.
Prepare a solution with a constant quercetin dihydrate concentration of 38.1 mM and a ratio of quercetin dihydrate to 4 ″ Me-EGCg of 1: 0, 1: 1, or 1: 5. and it was conducted respectively of 1 H-NMR analysis of the resulting solution. since the solvent of the solution, D 2 O at low solubility of quercetin, it is difficult to obtain a necessary resolution analysis, D 2 Since it is a polar solvent like O, DMSO-d 6 considered to exhibit the same behavior as D 2 O was used.
The results are shown in FIG.
図３が示すように、溶液中の４”Ｍｅ−ＥＧＣｇ濃度を高くするにつれて、ケルセチンの濃度は一定であるにも関わらず、ケルセチンのピークが低磁場シフトした。特に、ケルセチンのＨ−５、Ｈ−５’およびＨ−６は、ベンゼン環上のプロトンであるため、通常は溶液中の化合物の濃度や温度などの測定条件が異なってもシフトが生じにくいが、４”Ｍｅ−ＥＧＣｇ濃度を高くするにつれて、これらのプロトンのピークが低磁場シフトするという特徴的な変化を示した。
この１Ｈ−ＮＭＲ分析の結果が示すように、溶液中では、４”Ｍｅ−ＥＧＣｇとケルセチンとが相互作用し、複合体を形成すると考えられる。この結果、純水に溶解させるのよりも遥かに高濃度で、４”Ｍｅ−ＥＧＣｇ水溶液にケルセチンを溶解させることができると推察される。
As FIG. 3 shows, as the concentration of 4 ″ Me-EGCg in the solution was increased, the quercetin peak was shifted in the low magnetic field even though the quercetin concentration was constant. In particular, the quercetin H-5, Since H-5 ′ and H-6 are protons on the benzene ring, it is difficult for a shift to occur even if the measurement conditions such as the concentration and temperature of the compound in the solution are different, but the 4 ″ Me-EGCg concentration As the value increased, these proton peaks showed a characteristic change that shifted to a lower magnetic field.
As shown by the results of the 1 H-NMR analysis, in the solution, 4 ″ Me-EGCg and quercetin interact with each other to form a complex. As a result, it is far more than that dissolved in pure water. It is speculated that quercetin can be dissolved in a 4 "Me-EGCg aqueous solution at a high concentration.
Claims (7)
下記一般式（Ｉ）で表される化合物である水溶性向上剤
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、Ｈまたは水酸基から選択され、
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキル基である）。（ただし、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレートを除く。） A water solubility improver for improving the solubility of an organic compound containing a benzene ring in water,
Water solubility improver which is a compound represented by the following general formula (I)
R 1 , R 2 and R 3 are each independently selected from H or a hydroxyl group;
R 4 is H or a C 1-4 alkyl group). (However, catechin gallate, gallocatechin gallate, epicatechin gallate, and epigallocatechin gallate are excluded.)
下記一般式（Ｉ）で表される化合物を前記水（３０体積％以上９０体積％以下のエタノールを含むものを除く。）に溶解させる工程（１００℃以上に加熱する場合を除く。）を含む、水溶性向上方法
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、Ｈまたは水酸基から選択され、
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキル基である）。 A method for improving the solubility of an organic compound containing a benzene ring in water,
A step (excluding the case of heating to 100 ° C. or higher ) in which the compound represented by the following general formula (I) is dissolved in the water (excluding those containing 30% by volume to 90% by volume of ethanol ) is included . , Method for improving water solubility
R 1 , R 2 and R 3 are each independently selected from H or a hydroxyl group;
R 4 is H or a C 1-4 alkyl group).
水（３０体積％以上９０体積％以下のエタノールを含むものを除く。）に、前記有機化合物と下記一般式（Ｉ）で表される化合物とを溶解させる工程（１００℃以上に加熱する場合を除く。）を含む、水溶液調製方法
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、それぞれ独立に、Ｈまたは水酸基から選択され、
Ｒ4は、ＨまたはＣ1-4アルキル基である）。 A method for preparing an aqueous solution of an organic compound containing a benzene ring,
A step of dissolving the organic compound and a compound represented by the following general formula (I) in water (excluding those containing 30% by volume or more and 90% by volume or less of ethanol) (in the case of heating to 100 ° C. or more). excluded.) containing, aqueous preparation
R 1 , R 2 and R 3 are each independently selected from H or a hydroxyl group;
R 4 is H or a C 1-4 alkyl group).
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