JP6032853B2 - 前立腺関連抗原分子由来ｈｌａ結合ペプチドおよびその使用方法 - Google Patents

Description

前立腺癌の免疫療法の方法と組成物が開示される。より具体的には、免疫アジュバントありまたはなしで、前立腺関連抗原分子由来のＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物を投与するステップを含んでなる、前立腺癌患者を治療する方法が開示される。

前立腺癌は男性で最も頻繁に発生する悪性腫瘍の１つであり、２００６年にヨーロッパでは３４６，０００症例が発生し、約８７，０００人が死亡したと報告されている。米国男性では、前立腺癌は最も頻繁に診断される癌であり、癌に関連した２番目の死因となっている。前立腺特異抗原（ＰＳＡ）のモニタリングアッセイの感度が増大しているため、前立腺癌はより早期に臨床的局在期に発見され、その段階では手術と放射線照射などの治療処置を施し得る。しかしながら、これらの患者は、１０年以内に１０〜６０％の確率で無症状のＰＳＡ増大を起こし、これは「生化学的再発」として知られる。生化学的再発は癌の隠れた局所再発、または未だ検出不能な転移発生を示唆することが多い。

この状況での治療選択肢としては、外部放射線療法とアンドロゲン遮断療法（ホルモン除去療法としても知られる）が挙げられる。しかし、いずれの療法も、特に患者の長期生存を延長させることについては、有効性が立証されていない。さらに、両治療法とも、心血管障害、骨粗鬆症、体重増大、神経認知機能低下、尿道狭窄の発生、性欲弱源およびインポテンツ、骨粗鬆症関連骨格カルシウム塩低下のリスク、および病的骨折リスクの顕著な増大をはじめとする、多くの副作用によって妨げられる。さらに、アンドロゲンの欠損によってアンドロゲン非依存性腫瘍クローンの早期発生が可能となり、最終的にさらなる急速な長期の腫瘍の進行が起きる懸念が一部にある。さらに、特に低ＰＡＳ値または長い平均倍増時間（ＤＴ）によって特徴付けられる生化学的再発に対して、アンドロゲン遮断療法開始の最適なタイミングが論議されている。これらのリスクを考慮すると、アンドロゲン遮断療法および外部放射線療法のどちらも、早期生化学的再発を来たしている患者に対する治療効果は疑わしい。

腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）は、癌の可能な免疫療法剤であると認定されている。前立腺に関連するものをはじめとして、多様な異なる腫瘍および組織タイプに特異的な多くのＴＡＡが同定されている。前立腺腫瘍組織、腫瘍排出リンパ節、および癌患者の末梢血流系中のＴＡＡに特異的なＴ細胞の同定、ならびに免疫療法後の特異的Ｔ細胞応答の増大は、全てＴＡＡを使用した免疫系の操作が、前立腺癌の治療に有用である可能性を示唆する。

（１）自己または同種腫瘍細胞によるワクチン療法；（２）顆粒球マクロファージコロニー刺激因子を発現するように組み換えられた自己腫瘍細胞；（３）ＨＬＡＩおよびＩＩ結合ペプチドで生体外パルスされた樹状細胞；（４）腫瘍ｍＲＮＡトランスフェクト樹状細胞；および（５）ＴＡＡを発現する組み換えワクチンウイルスをはじめとする、前立腺特異的ＴＡＡの生体内抗原提示のための様々なシステムが臨床治験で試験されている。しかし、これらの治験のほとんどは、アンドロゲン抵抗性前立腺癌患者において実施されている。生化学的再発を来たしたアンドロゲン感受性の患者における、アンドロゲン遮断療法前のワクチン療法に関する情報はわずかしかない。

したがって新しい治療の選択肢が、前立腺癌患者、特に早期生化学的再発患者に必要である。

本開示は、免疫療法に使用する組成物およびその使用法に関する。特に本開示は、癌の免疫療法、特に前立腺癌の免疫療法、より具体的にはアンドロゲン遮断療法を未だ受けていない早期生化学的再発患者における、アンドロゲン感受性前立腺癌の免疫療法に関する。本発明の開示は、ＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩ双方のＨＬＡ結合ペプチドの組成物にさらに関するものであり、前記ＨＬＡ結合ペプチドは、前立腺特異抗原、前立腺幹細胞抗原、前立腺特異的膜抗原、サバイビン、プロステイン、およびｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ−ｐ８（「ＴＲＰ−ｐ８」）などの前立腺関連抗原分子に由来する。

一態様では、本開示は、少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、前記ＨＬＡ結合ペプチドは、前立腺関連抗原分子由来のエピトープを含んでなる。

別の態様では、本開示は、少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、前記ＨＬＡ結合ペプチドは、前立腺特異抗原、前立腺幹細胞抗原、前立腺特異的膜抗原、サバイビン、プロステイン、およびｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ−ｐ８からなる群から選択される、前立腺関連抗原分子に由来するエピトープを含んでなる。

本発明の特に好ましい態様は、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、（ａ）少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号２３に記載のエピトープであり、またはＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖の８０Ｎ末端アミノ酸を含んでなる、配列番号２３の融合タンパク質からなるペプチドであり、（ｂ）少なくとも２つのペプチドの少なくとも１つは、配列番号１〜１１、配列番号１３〜２２、および配列番号２４〜４２からなる群から選択されるエピトープを含んでなるペプチドである。

好ましくは、本発明に従った組成物は、グループｂに従ったアミノ酸配列からなる少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

好ましいのは本発明に従った組成物であり、前記組成物は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチド、好ましくは少なくとも４つのペプチド、さらに好ましくは１０個のペプチドと、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４の群から選択される１つのペプチドと、配列番号１５〜２２および配列番号２４〜４２からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドとを含んでなる。

治療される対象のＨＬＡセットに従って追加的なペプチドが選択される、本発明に従った組成物もまた好ましい。

好ましいのは本発明に従った組成物であり、前記組成物は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなる少なくとも４つのペプチドと、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４の群から選択される１つのペプチドと、配列番号１５〜２２および配列番号２４〜４２からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドとを含んでなる。

ペプチドの少なくとも１つがクラスＩＩペプチドである、本発明に従った組成物もまた好ましい。

次に、別の態様は、例えばＧＭＣＳＦおよびイミキモドなどの１種の免疫アジュバント、または２種または３種の免疫アジュバントの混合物をさらに含んでなる、本発明に従った組成物に関する。

好ましいのは本発明に従った組成物であり、前記免疫アジュバントは、例えばトール様受容体７アゴニストなどのトール様受容体アゴニストを含んでなる。

例えばペプチドでパルスされ負荷された自己樹状細胞のような樹状細胞などの、少なくとも１つの抗原提示細胞を含有する、発明に従った組成物もまた好ましい。

次に、別の態様は、前立腺癌の治療に使用される本発明に従った組成物に関する。

好ましいのは本発明に従った組成物であり、前記前立腺癌はアンドロゲン感受性であり、患者はアンドロゲン遮断療法を受けたことがない。

さらに好ましいのは本発明に従った組成物であり、前記前立腺癌はアンドロゲン非感受性である。

次に、別の態様は、本発明に従った組成物の有効量を患者に投与することからなる、前立腺癌を治療する方法に関する。

好ましいのは本発明に従った方法であり、前記前立腺癌はアンドロゲン感受性であり、患者はアンドロゲン遮断療法を受けたことがない。

さらに好ましいのは本発明に従った方法であり、前記前立腺癌はアンドロゲン非感受性である。

さらなる態様では、本発明で開示される組成物は、配列番号２４、配列番号７、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、または配列番号１５〜２３、または配列番号２５〜４０に記載のエピトープを含んでなる。

さらなる態様では、組成物は、前立腺関連抗原分子由来のエピトープからなる少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなり、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つはＨＬＡクラスＩペプチドであり、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つはＨＬＡクラスＩＩペプチドである。

本開示のさらに別の態様は、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、および配列番号１１からなる群から選択されるエピトープからなるＨＬＡクラスＩペプチドであり、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号１３および配列番号１４からなる群から選択されるエピトープからなるＨＬＡクラスＩＩペプチドである。

本開示のさらに別の態様は、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、（ａ）少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号２４、配列番号１５〜２３、および配列番号２５〜３７からなる群から選択されるエピトープを含んでなるペプチドであり、（ｂ）少なくとも２つのペプチドの少なくとも１つは、配列番号７、配列番号１〜６、配列番号８〜１１、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号３８〜４２からなる群から選択されるエピトープを含んでなるペプチドである。

本開示のさらに別の態様は、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、および配列番号１１からなる群から選択されるエピトープから本質的になるＨＬＡクラスＩペプチドであり、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号１３および配列番号１４からなる群から選択されるエピトープから本質的になるＨＬＡクラスＩＩペプチドである。

本開示のさらに別の態様は、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、および配列番号１１からなる群から選択されるエピトープからなるＨＬＡクラスＩペプチドであり、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、配列番号１３および配列番号１４からなる群から選択されるエピトープからなるＨＬＡクラスＩＩペプチドである。

さらに別の態様は、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、ＨＬＡ−Ａ^＊０２以外の対立遺伝子と結合するＨＬＡクラスＩペプチドである。

さらに別の態様は、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つは、ＨＬＡ−Ａ^＊２４、ＨＬＡ−Ａ^＊１１、ＨＬＡ−Ｂ＊４１、ＨＬＡ−Ｂ^＊５１またはＨＬＡ−Ｃの群から選択される対立遺伝子と結合する、ＨＬＡクラスＩペプチドである。

さらに本開示の別の態様は、少なくとも６つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物に関し、（ａ）少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドは前立腺特異抗体由来のエピトープを含んでなり、（ｂ）少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドは前立腺幹細胞抗原由来のエピトープを含んでなり、（ｃ）少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドは前立腺特異的膜抗原由来のエピトープを含んでなり、（ｄ）少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドはサバイビン由来のエピトープを含んでなり、（ｅ）少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドはプロステイン由来のエピトープを含んでなり、（ｆ）少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドはｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ−ｐ８由来のエピトープを含んでなる。

本開示の別の態様は、上述のような組成物に関し、前記組成物は、グループｂ）に記載のアミノ酸配列からなる少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

本開示の別の態様は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、および配列番号４２に記載のＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる、上述のような組成物に関する。

本開示の別の態様は、上述のような組成物に関し、前記組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなるペプチドと、任意に、配列番号１５〜４２からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドとを含んでなる。

本開示の別の態様は、上述のような組成物に関し、前記組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチド、好ましくは少なくとも４つのペプチド、さらに好ましくは１０個のペプチドと、配列番号１５〜４２からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドとを含んでなる。

本開示の別の態様は、上述のような組成物に関し、前記組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチド、好ましくは少なくとも４つのペプチド、さらに好ましくは１０個のペプチドと、配列番号１５〜４２からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドとを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

本開示の別の態様は、上述のような組成物に関し、前記組成物は配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５〜４２に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも４つのペプチドを含んでなる。

本開示のさらなる態様は、あらゆる既述の組成物に関し、少なくとも１つのペプチドはクラスＩＩペプチドである。

本開示のさらなる態様は、例えば、ＧＭＣＳＦおよびイミキモドなどの１種の免疫アジュバント、または２種または３種の免疫アジュバントの混合物をさらに含んでなる、既述のあらゆる組成物に関する。この免疫アジュバントは、トール様受容体７アゴニストである、イミキモドとムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体、さらにサイトカイン顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）をはじめとする、あらゆる既知の免疫アジュバントであり得る。

次に、本開示の追加的態様は、免疫アジュバントありまたはなしで、本明細書で開示されるいずれかの組成物を患者に投与するステップを含んでなる、前立腺癌の治療法に関する。前記前立腺癌はアンドロゲン感受性であり得て、患者はアンドロゲン遮断療法を受けたことがなくてもよい。

次に、本開示の別の態様は、患者において、アンドロゲン感受性またはアンドロゲン非感受性いずれかの前立腺癌を治療する方法に関し、前記方法は、免疫アジュバントありまたはなしで、既述の組成物のいずれかを患者に投与するステップを含んでなる。

前立腺関連抗原分子由来の１３個のエピトープをはじめとする、実施例１で使用される、ＨＬＡ結合ペプチドカクテル中のＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる様々なエピトープを示す。配列番号１〜１２に記載のエピトープはＨＬＡＨＬＡクラスＩエピトープであり、すなわち、ＨＬＡ−Ａ^＊２０１拘束性エピトープである。配列番号１３および１４に記載のエピトープは、ＨＬＡクラスＩＩエピトープである。 治験群全体としてのＤＴの統計データを示す。ＤＴは、月単位で表される。「ｎ」は、その統計が各カテゴリに含まれる患者数を示す。「％」は、各カテゴリに分類される患者の百分率を示す。患者５の倍加時間は負であったため、この患者の倍加時間は治験終了時の幾何平均または範囲の計算には含めなかった。 実施例１で使用されたＨＬＡ結合カクテルによる、患者の治療前、治療中、および治療後のＤＴ変化を示す。正の値はＰＳＡ倍加時間を示し、患者のＰＳＡレベルが増大していることを意味する。負の値はＰＳＡ半減期であり、患者のＰＳＡレベルが減少していることを示す。 免疫アジュバントのタイプにより分別された、治療に対する臨床応答を示す。臨床応答の不在は「−」符号で表される。ＰＳＡ中間値の減少または安定に続くＰＳＡの加速度的上昇は、「＋／−」符号で表される。ＰＳＡ中間値の上昇に続くＰＳＡの減少およびＰＳＡＤＴの増大は、「−／＋」符号で表される。ＰＳＡＤＴの増大は、「＋」符号で表される。 モンタナイド混合ペプチドが投与されているが、アジュバントが投与されずまたは温熱療法を施されていない患者のＰＳＡレベルを示す。 ムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体と共にモンタナイド混合ペプチドを投与されている患者のＰＳＡレベルを示す。 温熱療法と共にモンタナイド混合ペプチドを投与されている患者のＰＳＡレベルを示す。 ＧＭ−ＣＳＦと共にモンタナイド混合ペプチドを投与されている患者のＰＳＡレベルを示す。 は、イミキモドと共にモンタナイド混合ペプチドを投与されている患者のＰＳＡレベルを示す。 ８４日目のベースラインからのＰＳＡ値の変化を百分率で示す。 ワクチン接種中のＰＳＡ値の変化を百分率で示す。 ワクチン接種後、各ペプチドに反応するＴ細胞を有する患者数を示す。 ＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープおよびサバイビン９７−１１１エピトープに対する、患者番号１５および２６のＰＢＭＣに由来するＣＤ４＋Ｔ細胞の特異性を示す。ＰＳＭＡ：−４７３エピトープ；Ｓｕｒｖ：サバイビン９７−１１１エピトープ。 クローンＰｒｏ２６_１ Ｃのペプチド活性を示す。ＰＭＡ／イオノマイシン＝抗原非依存性非特異的活性化；サバイビン（ＩＩ）：サバイビン９７−１１１エピトープによる刺激；ＰＳＭＡ（ＩＩ）：ＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープによる刺激。全ての反応細胞はＣＤ４陽性である。 クローンＰｒｏ１５_１０ Ｏのペプチド活性を示す。ＰＭＡ／イオノマイシン＝抗原非依存性非特異的活性化；サバイビン（ＩＩ）：サバイビン９７−１１１エピトープによる刺激；ＰＳＭＡ（ＩＩ）：ＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープによる刺激。全ての反応細胞はＣＤ４陽性である。 完全長サバイビンまたはサバイビン９７−１１１エピトープで初回抗原刺激を受けた樹状細胞に対する、ＣＤ４＋サバイビン特異的Ｔ細胞クローンＰｒｏ１５_「Ｄ」の応答を特性解析する。細胞内サイトカイン染色で示されるように、組み換えサバイビンタンパク質またはサバイビン９７−１１１エピトープと共にインキューベートされた未成熟樹状細胞は、ワクチン接種患者のサバイビン特異的Ｔ細胞によって認識される。これらの結果は、サバイビンが樹状細胞内のタンパク質分解酵素によって自然にプロセシングされ、サバイビン９７−１１１エピトープがプロセシングによって破壊されないことを示唆する。さらに、これらのＣＤ４＋Ｔ細胞は、サイトカインＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２を分泌し、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）の表面発現を有し、ＤＣ１０７ａの表面発現で示されるように脱顆粒するので、多機能性である。Ｔ細胞は無関係のタンパク質ＲＡＰ８０またはＨＩＶ−００１ペプチドと共にインキュベートされた樹状細胞によっては活性化されないので、上記のＴ細胞応答は抗原特異的である。 完全長サバイビン、サバイビン９７−１１１エピトープまたはＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープで初回抗原刺激を受けた樹状細胞に対する、ＣＤ４＋サバイビン特異的Ｔ細胞クローンＰｒｏ２６−１０−Ｃの応答を示す。細胞内サイトカイン染色で示されるように、組み換えサバイビンタンパク質、サバイビン９７−１１１エピトープ、およびＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープと共にインキュベートされた未成熟樹状細胞は、ワクチン接種患者の抗原特異的Ｔ細胞によって認識される。Ｔ細胞はサバイビンとＰＳＭＡの双方のエピトープに応答するが、サバイビンエピトープによる刺激への応答の方がより強かった。これらのＣＤ４＋Ｔ細胞は、サイトカインＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２を分泌し、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）の表面発現を有し、ＤＣ１０７ａの表面発現で示されるように脱顆粒するので、多機能性である。Ｔ細胞は無関係のタンパク質ＲＡＰ８０と共にインキュベートされた樹状細胞によっては活性化されないので、上記のＴ細胞応答は抗原特異的である。 完全長ＰＳＭＡタンパク質、タンパク質分解酵素Ｋで処理されたＰＳＭＡタンパク質、またはプロテイナ−ゼＫで処理されたサバイビンタンパク質で初回抗原刺激を受けた樹状細胞に対する、ＣＤ４＋サバイビン特異的Ｔ細胞クローンＰｒｏ２６−１０−Ｃの応答を示す。 完全長サバイビン、サバイビン９７−１１１エピトープ、完全長ＰＳＭＡ、またはＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープと共にインキュベートされた固定樹状細胞に対する、ＣＤ４＋サバイビン特異的Ｔ細胞クローンＰｒｏ２６−１０−Ｃの応答を示す。細胞内サイトカイン染色で示されるように、（完全長でない）サバイビン９７−１１１エピトープと共にインキュベートされた固定樹状細胞は、ワクチン接種患者の抗原特異的Ｔ細胞によって認識される。このことから、抗原性であるためには、完全長サバイビンが抗原提示細胞によって切断されなければならないことが確認される。 完全長サバイビン、サバイビン９７−１１１エピトープ、完全長ＰＳＭＡ、またはＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープで初回抗原刺激を受けた樹状細胞に対する、ＣＤ４＋ＰＳＭＡ特異的Ｔ細胞クローンＰｒｏ２６−１０−Ｄの応答を示す。細胞内サイトカイン染色で示されるように、ＰＳＭＡ ４５９−４７３エピトープと共にインキュベートされた未成熟樹状細胞は、ワクチン接種患者の抗原特異的Ｔ細胞によって認識される。これらのＣＤ４＋Ｔ細胞は、サイトカインＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、およびＩＬ−２を分泌し、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ１５４）の表面発現を有し、ＤＣ１０７ａの表面発現で示されるように脱顆粒するので、多機能性である。Ｔ細胞はサバイビンまたはサバイビン９７−１１１エピトープと共にインキュベートした樹状細胞によっては活性化されないので、上記のＴ細胞応答は、抗原特異的である。 異なるＨＬＡ−ＤＲ対立遺伝子を発現するいくつかの腫瘍細胞系が、患者由来のＰＢＭＣによって認識されることを示す（患者Ｐｒｏ２６とＰｒｏ１５について示す）。患者は、サバイビン９７−１１１のワクチン接種後、多クローン性Ｔ細胞の応答を生じる。サバイビン９７−１１１は、以下のいくつかのＨＬＡクラスＩＩ対立遺伝子との無差別な結合を示す。ＤＲ１；（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．もまた参照されたい）；ＤＱ５（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．によっては未試験）；ＤＲ１１（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．もまた参照されたい）、またはＤＲＢ３（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００８の表１と対照をなす）。サバイビン９７−１１１の機能的提示は、いくつかのＨＬＡクラスＩＩ分子（ＴＮＦ−α産生）との関連で可能である。ＨＬＡクラスＩ（ＨＬＡ−Ａ，Ｂ，Ｃ）でもまた、機能的クラスＩＩ分子、すなわちＨＬＡ−ＤＱ、ＨＬＡ−ＤＰ、およびＨＬＡ−ＤＲを細胞表面で発現するＨＬＡクラスＩＩに、原則として、３つの異なる遺伝子座を見ることができる。クラスＩ分子は、重鎖（−Ａ、−Ｂ、−Ｃ）およびβ２−ミクログロブリンから構成され、それは３つの全遺伝子で不変である。しかしながらクラスＩＩ分子は、各々２つずつの可変鎖（αおよびβ）から構成される。したがってクラスＩＩについては、高度な遺伝子型決定（ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｔｙｐｉｎｇ）は常に複雑である。図では、抗体結合に基づく、いわゆる血清型が示される。したがって、例えば「ＤＱ３」は、通常一緒に見られて、特定の抗体と反応する、ＨＬＡ−ＤＱのαおよびβ鎖の異なる対立遺伝子を含んでなる。図中の細胞は、以下の通りである。ＡＬ＝Ｅ４１８ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞系（Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌｕｍｅ ５１，Ｉｓｓｕｅ １，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ １９９６，Ｐａｇｅｓ １３−２２）；ＬＡＭ＝Ｂリンパ腫細胞系（Ｏｎｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ １９ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００２，Ｖｏｌｕｍｅ ２１，Ｎｕｍｂｅｒ ４２，Ｐａｇｅｓ ６５４９−６５５６）；ＨＯ３０１＝ＥＢＶ形質転換Ｂ細胞系（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９８，１６０：３３６３−３３７３）；ＢＭ１５＝Ｄｒ１１＋ＡＰＣ細胞系（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００４，１７３：１８７６−１８８６）；ＭＧＡＲ＝ホモ接合型Ｂ−ＬＣＬ（Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００４）１１，１４０８−１４１５）；ＬＧ２−ＥＢＶ＝自己Ｂ細胞系（Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｖｏｌ．２，ｐ．９（１９ Ｊｕｌｙ ２００２））；ＥＭＪ＝Ｂリンパ芽球様細胞系（ＥＣＡＣＣ ＮＯ：８６０２１０３ ＩＨＷ Ｎｕｍｂｅｒ ９０９７：ａｎｄ Ｈｕｍ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９８０ Ｄｅｃ；１（４）：３６３−８）。

本発明の開示は、前立腺組織および／または前立腺腫瘍に特異的な抗原ペプチドの使用を通じた、前立腺癌細胞の免疫応答の操作で使用される組成物とその方法に関する。

免疫応答の刺激は、宿主の免疫系によって異物と認識される抗原の存在に依存する。近年、（１）前立腺組織または前立腺腫瘍中で特異的に発現されて、（２）Ｔ細胞によって認識される、様々な抗原が成功裏に同定されている。このような抗原は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）上でＨＬＡ分子とペプチドの複合体として発現されると、Ｔ細胞を刺激して、前立腺癌細胞に対する抗原特異的Ｔ細胞応答を誘導でき、最終的に腫瘍細胞の溶解をもたらす。例えば、タンパク質サバイビンの様々なエピトープが、前立腺ＴＡＡ（腫瘍関連抗原）として認識されている。前立腺に特異的なＴＡＡの発見と特性解析から、今や、宿主の免疫系を使用して腫瘍増殖に介入する可能性が出てきた。体液性免疫系と細胞性免疫系の双方を使用する様々なメカニズムが、現在、癌の免疫療法において研究されている。

細胞性免疫応答の特定の要素は、腫瘍細胞を特異的に認識して破壊できる。腫瘍浸潤細胞群または末梢血からのＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の単離は、このような細胞が癌に対する自然免疫防御において重要な役割を果たしていることを示唆する。サイトゾルに存在するタンパク質または欠陥リボソーム産物（ｄｅｆｅｃｔ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ（ＤＲＩＰ）に由来する、通常８〜１０個の残基のペプチドを持つ、主要組織適合遺伝子複合体のクラスＩ分子（ＭＨＣクラスＩ分子）を認識するＣＤ８＋Ｔ細胞は、この応答において特に重要な役割を果たしている。（Ｓｃｈｕｂｅｒｔ Ｕ，Ａｎｔｏｎ ＬＣ，Ｇｉｂｂｓ Ｊ，Ｎｏｒｂｕｒｙ ＣＣ，Ｙｅｗｄｅｌｌ ＪＷ，Ｂｅｎｎｉｎｋ ＪＲ．；Ｒａｐｉｄ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌａｒｇｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｗｌｙ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｂｙ ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｓ；Ｎａｔｕｒｅ ２０００；４０４（６７７９）：７７０−７７４））。

抗原は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の２つの主要クラス、ＭＨＣクラスＩおよびＭＨＣクラスＩＩの１つを介して提示される。ヒトにおいて、ＭＨＣ分子は、ヒト白血球抗原（「ＨＬＡ」）分子と称されている。ＭＨＣ分子には２つのクラスがある。核を有するほとんどの細胞に見ることができるＭＨＣクラスＩ分子は、主に内在性タンパク質、細胞質タンパク質、または核タンパク質、ＤＲＩＰＳ、より大型のペプチドのタンパク質分解切断から生じるペプチドを提示する。しかし、エンドソーム区画または外因性源に由来するペプチドも、ＭＨＣクラスＩ分子に認められることが多い。このクラスＩの非古典的提示方法は、文献中では交差提示と称されている。ＭＨＣクラスＩＩ分子は、主にプロフェッショナル抗原提示細胞（ＡＰＣ）に見ることができ、エンドサイトーシスの過程でＡＰＣによって取り込まれて引き続いてプロセッシングされる、外因性タンパク質のペプチドを主に提示する。クラスＩについては、内因性源に由来するペプチドをＭＨＣクラスＩＩ分子に提示させる、代案の抗原プロセシング様式について記載されている（例えば自己貪食）。ペプチドとＭＨＣクラスＩ分子との複合体は、適切なＴＣＲを持つＣＤ８＋細胞傷害性Ｔリンパ球により認識され、ペプチドとＭＨＣクラスＩＩ分子との複合体は、適切なＴＣＲを持つＣＤ４陽性ヘルパーＴ細胞により認識される。

ＨＬＡクラスＩ分子は身体の全ての有核細胞に見られ、細胞質タンパク質断片をＣＤ８＋細胞障害性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）に提示するように機能する。このタンパク質はプロテアソーム内で切断され、その結果得られるペプチドは、サイトゾルから小胞体の内腔に輸送されて、ＨＬＡクラスＩ分子に結合される。次に、抗原とＨＬＡクラスＩ分子との複合体は、抗原がＣＴＬに提示され得る細胞表面に輸送される。ＣＴＬへの抗原提示は、その表面に抗原／ＨＬＡ複合体が結合した細胞を直接死滅させる、抗原特異的ＣＴＬの増殖に最終的に導く、カスケードを誘導する。このプロセスは全ての有核細胞で起こり、それによって免疫系が、異質、変性、または胚性タンパク質の存在について、個々の細胞を正確にモニターできるようになる。ＨＬＡクラスＩ分子によって提示されるペプチドは、典型的に内因性細胞内タンパク質分子に由来するが、マクロピノサイトーシスまたは食作用によって細胞に取り込まれた外因性抗原もまた提示され得ることが示唆されている。したがって抗原特異的ＣＴＬ応答は、宿主をＨＬＡクラスＩ分子特異的エピトープを含有するペプチドで直接免疫化することで、誘導し得る。

構造的に発現されるＨＬＡクラスＩ分子とは対照的に、ＨＬＡクラスＩＩ分子は、ほぼ独占的に、マクロファージ、樹状細胞、およびＢ細胞をはじめとする、プロフェッショナル抗原提示細胞上に見られる。プロフェッショナルＡＰＣは、細胞外タンパク質をプロフェッショナルＡＰＣによって取り込み、リソソーム中で消化され、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって、分子の細胞膜への移動に先立って結合される。ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドは、ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞（「Ｔヘルパー細胞」）に提示される。Ｔヘルバー細胞はいかなる直接的細胞傷害活性または食作用活性も持たず、したがって感染したまたは機能不全な宿主細胞を直接死滅させることはないが、その代わり、感染したまたは機能不全な細胞に対する、他の免疫系構成要素の応答を誘発または促進することで機能する。例として、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）の局部レベルを増大させ得る。

ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞は、抗腫瘍Ｔ細胞応答のエフェクター機能を調整するのに重要な役割を果たしており、この理由から、ＴＡＡ由来ＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープの同定は、抗腫瘍免疫応答を開始させる薬剤製品の開発にとって非常に重要である可能性がある。ＣＴＬが不在であっても、Ｔヘルバー細胞によるインターフェロンＩＦＮ−γの局所分泌が、血管発生の抑制を通じて腫瘍形成を阻害し得ることが、哺乳類モデルで示されている。Ｑｉｎ，Ｚ．ａｎｄ Ｔ．Ｂｌａｎｋｅｎｓｔｅｉｎ．ＣＤ４＋Ｔ−ｃｅｌｌ−−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ｉｎｖｏｌｖｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ｔｈａｔ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ＩＦＮ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｎｏｎ−ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０００，１２：６７７−６８６を参照されたい。さらに、ＨＬＡクラスＩＩ分子によって提示されるＴＡＡを認識するＴヘルパー細胞は、抗体応答を誘導することで、腫瘍の進行に対抗し得る（Ｋｅｎｎｅｄｙ，Ｒ．Ｃ．，Ｍ．Ｈ．Ｓｈｅａｒｅｒ，Ａ．Ｍ．Ｗａｔｔｓ，ａｎｄ Ｒ．Ｋ．Ｂｒｉｇｈｔ．ＣＤ４＋Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｐｌａｙ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ａｇａｉｎｓｔ ｓｉｍｉａｎ ｖｉｒｕｓ ４０ ｌａｒｇｅ ｔｕｍｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００３，６３：１０４０−１０４５）。

ＨＬＡクラスＩ分子に結合するＴＡＡとは対照的に、わずかなＨＬＡクラスＩＩ結合ＴＡＡしか、これまでに報告されていない（ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｉｍｍｕｎｉｔｙ．ｏｒｇ、ｗｗｗ．ｓｙｆｐｅｉｔｈｉ．ｄｅ）。ＨＬＡクラスＩＩ分子の構成的発現は、通常免疫系の細胞に限られているため、原発性腫瘍から直接クラスＩＩペプチドを単離することは不可能であると考えられていた。しかし、最近多数のＭＨＣクラスＩＩエピトープが、腫瘍から直接同定されている。さらに、腫瘍患者では、驚くべきことに、腫瘍細胞がＭＨＣクラスＩＩ分子を発現していることが分かった（ＥＰ １６４２９０５，ＥＰ １７６００８８；Ｄｅｎｇｊｅｌ Ｊ，Ｎａｓｔｋｅ ＭＤ，Ｇｏｕｔｔｅｆａｎｇｅａｓ Ｃ，Ｇｉｔｓｉｏｕｄｉｓ Ｇ，Ｓｃｈｏｏｒ Ｏ，Ａｌｔｅｎｂｅｒｅｎｄ Ｆ，Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｍ，Ｋｒａｅｍｅｒ Ｂ，Ｍｉｓｓｉｏｕ Ａ，Ｓａｕｔｅｒ Ｍ，Ｈｅｎｎｅｎｌｏｔｔｅｒ Ｊ，Ｗｅｒｎｅｔ Ｄ，Ｓｔｅｎｚｌ Ａ，Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ ＨＧ，Ｋｌｉｎｇｅｌ Ｋ，Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ Ｓ．；Ｕｎｅｘｐｅｃｔｅｄ ａｂｕｎｄａｎｃｅ ｏｆ ＨＬＡ ｃｌａｓｓ ＩＩ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｒｙ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ；Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００６；１２：４１６３−４１７０）。

ペプチドが細胞性免疫応答を引き起こすには、それはＭＨＣ分子に結合しなくてはならない。この過程は、ＭＨＣ分子の対立遺伝子およびペプチドのアミノ酸配列の特異的多型性に依存する。ＭＨＣクラスＩ結合ペプチドは、通常は８〜１０個のアミノ酸残基の長さであり、ＭＨＣ分子の対応する結合溝と相互作用するペプチドの配列内に、通常２つの保存された残基（「アンカー」）を含有する。このようにして、それぞれのＭＨＣ対立遺伝子には、どのペプチドが結合溝と特異的に結合し得るかを決定する「結合モチーフ」がある（Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ ＨＧ，Ｂａｃｈｍａｎｎ Ｊ，Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ Ｓ．ＭＨＣ ｌｉｇａｎｄｓ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｏｔｉｆｓ，Ｌａｎｄｅｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ＵＳＡ，１９９７）。

ＭＨＣ依存性免疫応答では、ペプチドは、腫瘍細胞によって発現される特定のＭＨＣ分子と結合できるだけでなく、特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を保有するＴ細胞によって認識されなくてはならない。

腫瘍に特異的なＴリンパ球に認識される抗原、すなわちＴリンパ球のエピトープは、酵素、受容体、転写因子など全ての種類のタンパク質に由来する分子であり得る。さらに腫瘍関連抗原はまた、例えば変異遺伝子の生成物として、例えば腫瘍細胞中のみで提示され得る。もう１つの重要なクラスの腫瘍関連抗原は、様々な種類の腫瘍および健常精巣組織中で発現されるＣＴ（「ｃａｎｃｅｒ ｔｅｓｔｉｓ（癌・精巣）」）抗原などの組織特異的抗原である。

近年、多数のＴＡＡが成功裏に同定され、特性解析されている。さらに、追加の腫瘍関連抗原を同定するために、多くの研究努力が費やされている。技術分野で腫瘍特異抗原とも称されるいくつかの腫瘍関連抗原群は、組織特異的である。例としては、メラノーマに対するチロシナーゼ、前立腺癌に対するＰＳＡおよびＰＳＭＡ、リンパ腫におけるｂｃｒ／ａｂｌなどの染色体交差（転座）などが挙げられるが、これに限定されるものではない。しかし、同定された多くの腫瘍関連抗原は多数の腫瘍タイプで発生し、実際に形質転換インベント引き起こす、発癌タンパク質および／または癌抑制遺伝子（癌抑制遺伝子は、例えば、Ｌｉｎｅｈａｎ ＷＭ，Ｗａｌｔｈｅｒ ＭＭ，Ｚｂａｒ Ｂ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｋｉｄｎｅｙ．Ｊ Ｕｒｏｌ．２００３ Ｄｅｃ；１７０（６Ｐｔ１）：２１６３−７２で腎臓癌について検討されている）などのいくつかの抗原は、ほぼ全ての腫瘍タイプに発生する。例えば、ｐ５３（癌抑制遺伝子の一例）、ｒａｓ、ｃ−ｍｅｔ、ｍｙｃ、ｐＲＢ、ＶＨＬ、ＨＥＲ−２／ｎｅｕなどの細胞増殖および分化を制御する通常の細胞タンパク質が突然変異を蓄積し得て、これらの遺伝子産物発現の上方制御をもたらし、それらを発癌性にする（ＭｃＣａｒｔｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，１５：５８ ２６０１−５；Ｄｉｓｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｉｂａ Ｆｏｕｎｄ．Ｓｙｍｐ．１９９４，１８７：１９８−２１１）。これらの変異タンパク質もまた、複数の癌タイプで腫瘍特異的免疫応答の標的になり得る。

効率的または非効率的な提示が、誘発される免疫応答のタイプおよび程度を決定し、それは免疫性から耐性まで及び得る。休止期の未処置ＣＴＬを抗原特異的な様式で刺激するためには、ＣＴＬは２つのシグナルを抗原提示細胞から受け取らなければならない。１つ目は、ＨＬＡ／ペプチド複合体と相互作用する抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介して、２つ目は共刺激因子（Ｂ７分子、ＩＣＡＭ−１、およびその他の接着分子）またはサイトカイン（例えばＩＬ−２）を介して受け取る。Ｔリンパ球がこれらのシグナルの１つだけを受け取ると、Ｔ細胞のアネルギーが生じる。腫瘍細胞は、共刺激分子を保有せずＨＬＡクラスＩの低発現のみを示すことが多いので、不良なＡＰＣである。さらに、癌細胞は、それらに向けられた免疫応答を抑制する、サイトカインまたは表面分子を発現することが多い。したがって、ＴＡＡがＴ細胞に提示される様式は、腫瘍特異的免疫応答の誘発にとってかなり重要である。

タンパク質が腫瘍特異抗原または腫瘍関連抗原としてＣＴＬに認識され、治療に使用されるには、特定の条件を満たさなければならない。この抗原は主に腫瘍細胞によって発現されなくてはならず、正常な健常組織によっては発現されないか、または比較的少量発現される。個々の抗原が、ある種の腫瘍細胞に存在するだけでなく、高い濃度（すなわち細胞あたりの各ペプチドのコピー数）で存在することがさらに好ましい。腫瘍特異抗原および腫瘍関連抗原は、例えば細胞周期の制御やアポトーシスのような機能のために、正常細胞から腫瘍細胞への形質転換に直接関わるタンパク質に由来することが多い。さらに、形質転換の直接原因となるタンパク質の下流ターゲットが上方制御されることもあり、したがって間接的に腫瘍に関連することもある。このような間接的腫瘍関連抗原もまた、ワクチン療法のターゲットであってもよい。いずれの場合も、エピトープが抗原のアミノ酸配列に存在することが不可欠であり、これは、このような腫瘍関連抗原由来のペプチド（「免疫原性ペプチド」）が、生体外または生体内でＴ細胞応答を引き起こすためである。

基本的に、ＭＨＣ分子に結合できるあらゆるペプチドが、Ｔ細胞エピトープとして機能してもよい。生体外または生体内のＴ細胞応答の誘発には、対応するＴＣＲを有するＴ細胞の存在、そしてこの特定エピトープに対する耐性の不在が必須条件である。ヘルパーＴ細胞は、抗腫瘍免疫性において、ＣＴＬのエフェクター機能を統合する際に重要な役割を果たす。ＴＨ１タイプのヘルパーＴ細胞応答を始動させるヘルパーＴ細胞のエピトープは、腫瘍関連ペプチド／ＭＨＣ複合体を細胞表面に提示している腫瘍細胞に対する傷害機能をはじめとする、ＣＤ８陽性キラーＴ細胞のエフェクター機能をサポートしている。このようにして、腫瘍関連ヘルパーＴ細胞ペプチドのエピトープは、単独で、または他の主要関連ペプチドと共に、抗腫瘍免疫応答を刺激するワクチン組成物の活性薬剤成分として機能し得る。

大部分の腫瘍では、ほんのわずかなＴＡＡしか知られていないか、または１つの特定ＨＬＡタイプについてしか、定義されていない。対照的に、多数の前立腺特異抗原および前立腺癌関連抗原、およびＣＴＬによって認識されるペプチドが成功裏に同定されている。これらのＴＡＡは、抗原提示細胞上でＨＬＡ分子とペプチドとの複合体として発現されると、Ｔ細胞を刺激して抗原特異的ＣＴＬを誘発できる。

免疫療法に関して最多の経験が得られている悪性メラノーマの研究からは、１種または２種のＴＡＡによる免疫化は、腫瘍細胞の選択をもたらし、その結果、ＤＣによる継続治療中に疾患が進行することが示された。ＣＤ８依存型およびＣＤ４依存型の２つの免疫応答型は、連携して相乗的に抗腫瘍効果に寄与するため、ＣＤ８＋ＣＴＬ（ＭＨＣクラスＩ分子）またはＣＤ４陽性ＣＴＬ（ＭＨＣクラスＩＩ分子）のいずれかによって認識される腫瘍関連抗原の同定と特性解析は、腫瘍ワクチンの開発において重要である。

しかし、１種類のＣＴＬを初回抗原刺激しても、通常は全ての腫瘍細胞を除去するには不十分である。腫瘍は非常に変異原性が高いため、タンパク質パターンを変化させてＣＴＬによる認識を逃れることで、ＣＴＬの攻撃に急速に対応することができる。腫瘍の回避メカニズムに抵抗するため、様々な特異的ペプチドがワクチンに使用されている。このようにして、いくつかのＣＴＬクローンによって、腫瘍を同時かつ広範に攻撃し得る。これは、腫瘍が免疫応答を逃れる機会を減少させる可能性がある。この仮説は、最近、末期メラノーマ患者を治療する臨床治験で確認された。わずか数例の例外を除き、少なくとも３回の明確なＴ細胞応答のあった患者は、客観的な臨床的応答または病態安定（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ ｅｔ ａｌ．，２００１）を示して生存率が増大したが、Ｔ細胞応答が３回未満であったほとんどの患者は、進行性疾患と診断された。

腎臓細胞癌患者を１３の異なるペプチドを有するワクチンで治療したところ、同様の効果が示された（Ｈ．Ｓｉｎｇｈ−Ｊａｓｕｊａ，Ｓ．Ｗａｌｔｅｒ，Ｔ．Ｗｅｉｎｓｃｈｅｎｋ，Ａ．Ｍａｙｅｒ，Ｐ．Ｙ．Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｍ．Ｓｔａｅｈｌｅｒ，Ａ．Ｓｔｅｎｚｌ，Ｓ．Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ，Ｈ．Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ，Ｊ．Ｆｒｉｓｃｈ；Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ−ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ，ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｔ−ｃｅｌｌ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｒｅｎａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＩＭＡ９０１，ａ ｎｏｖｅｌ ｍｕｌｔｉ−ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎｅ；ＡＳＣＯ Ｍｅｅｔｉｎｇ ２００７ Ｐｏｓｔｅｒ ＃３０１７；Ｍ．Ｓｔａｅｈｌｅｒ，Ａ．Ｓｔｅｎｚｌ，Ｐ．Ｙ．Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｔ．Ｅｉｓｅｎ，Ａ．Ｈａｆｅｒｋａｍｐ，Ｊ．Ｂｅｃｋ，Ａ．Ｍａｙｅｒ，Ｓ．Ｗａｌｔｅｒ，Ｈ．Ｓｉｎｇｈ，Ｊ．Ｆｒｉｓｃｈ，Ｃ．Ｇ．Ｓｔｉｅｆ；Ａｎ ｏｐｅｎ ｌａｂｅｌ ｓｔｕｄｙ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｂａｓｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｖａｃｃｉｎｅ ＩＭＡ９０１，ＡＳＣＯ ｍｅｅｔｉｎｇ ２００７；Ｐｏｓｔｅｒ ＃３０１７）。

したがって、腫瘍ワクチンの開発における重要な課題は、新規腫瘍関連抗原およびそれに由来する免疫原性Ｔヘルパーエピトープだけでなく、異なるエピトープの組み合わせもまた同定して特性解析し、各患者が複数のエピトープに反応する可能性を高めることである。

このようにして、立腺関連抗原分子由来のエピトープを含んでなる、それから本質的になる、またはそれからなる、少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物が提供される。

本明細書の用法では、「ＨＬＡ結合ペプチド」という用語は、ヒトＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩの白血球抗原分子と結合できるあらゆるペプチドを指す。

本明細書の用法では、「エピトープ」という用語は、その中にそれが含有される分子を、ヒトＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩの白血球抗原分子と結合させるのに十分なアミノ酸配列を指す。エピトープの同定方法は技術分野では良く知られている。これらとしては以下が挙げられるが、これに限定されるものではない。（ａ）個々の患者のＴ細胞を使用した遺伝子発現解析、ｖａｎ ｄｅｒ Ｂｒｕｇｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｏｎ ａ ｈｕｍａｎ ｍｅｌａｎｏｍａ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９１；２５４（５０３８）：１６４３-１６４７を参照されたい；（ｂ）腫瘍関連ペプチドの質量分析による配列決定、Ｃｏｘ ｅｔ ａｌ．，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ｆｉｖｅ ｍｅｌａｎｏｍａ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｕｍａｎ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９４；２６４（５１５９）：７１６-７１９を参照されたい；および（ｃ）対立遺伝子特異的ペプチドモチーフに従って、既知のＴＡＡを使用してエピトープを予測する「逆免疫学的方法」、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ ２００２；２（７）：５１４-５２０；Ｃｅｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｈｕｍａｎｓ ｕｓｉｎｇ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｅｐｉｔｏｐｅｓ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ'ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９９４；９１（６）：２１０５-２１０９を参照されたい。

本明細書の用法では、「前立腺関連抗原分子」という用語は、（ａ）前立腺組織、または（ｂ）前立腺癌細胞中で特異的に発現するあらゆるエピトープ含有分子を指すものとする。典型的な前立腺関連抗原分子としては、前立腺特異抗原、前立腺幹細胞抗原、前立腺特異的膜抗原、サバイビン、プロステイン、およびｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ−ｐ８が挙げられる。これらの前立腺関連抗原分子由来の典型的なエピトープを図１に示す。しかし、あらゆる前立腺関連抗原分子に由来する、あらゆるエピトープを使用してもよい。

本明細書で開示されるＨＬＡ結合ペプチドは、特に断りのない限り、異なる、おそらくは選択的である、ペプチド鎖内の部位における、１つまたは複数の残基の置換によって修飾され得る。このような置換は保存的性質であってもよく、例えば疎水性アミノ酸が別の疎水性アミノ酸で置換される場合のように、１つのアミノ酸が類似構造および特性のアミノ酸で置換される。さらにより保存的なのは、ロイシンがイソロイシンで置換される場合のように、サイズと化学的性質が同じあるいは類似するアミノ酸の置換である。天然の相同タンパク質ファミリー中の配列多様性の研究では、ある種のアミノ酸置換は他よりも認容されることが多く、これらは元のアミノ酸と置換アミノ酸の間のサイズ、電荷、極性、疎水性の類似性と、相関関係を示すことが多い。

本明細書では、保存的置換は、次の５群の１つの中での交換と定義される。第１群：小型脂肪族非極性または微極性残基（Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ）、第２群：極性負電荷残基とそれらのアミド（Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ）、第３群：極性、正電荷残基（Ｈｉｓ、Ａｒ、Ｌｙｓ）、第４群：大型脂肪族非極性残基（Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ）、第５群：大型芳香残基（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）。

より保存性の低い置換は、イソロイシン残基によるアラニンの置換のように、特性が類似しているがサイズが多少異なる別のアミノ酸による１個のアミノ酸の置換を伴うかもしれない。非常に非保存的な置換は、酸性アミノ酸を極性のまたは塩基性でさえあるアミノ酸で置換することを伴う可能性もある。しかしながら化学的効果は完全には予測できず、極端な置換が、さもなければ単純な化学原理からは予測不能な想定外の結果を生じるかもしれないので、そのような「極端な」置換を効果がないものとして却下し得ない。

もちろん、そのような置換には、一般的なＬ−アミノ酸以外の構造が関与してもよい。したがってＤ−アミノ酸が、開示される抗原ペプチドに一般に見られるＬ−アミノ酸を置換するかもしれず、本明細書の開示に包含されるものとする。さらに非標準Ｒ基（すなわち天然タンパク質の一般的な２０種のアミノ酸に見られるもの以外のＲ基）を有するアミノ酸も置換目的で使用して、本開示に従った免疫原および免疫原性ポリペプチドを生成してもよい。

複数位置での置換が、以下で定義するように実質的に同等かまたはより大きな抗原活性を有するペプチドをもたらすことが分かった場合、これらの置換の組み合わせを試験して、組み合わさった置換が、ペプチドの抗原性に相加的あるいは相乗的効果をもたらすかどうかを判定する。最大でも４箇所を超えない位置が、ペプチド内で同時に置換される。

別の態様では、少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物が提供され、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つはＨＬＡクラスＩペプチドであり、ＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つはＨＬＡクラスＩＩペプチドである。

本明細書の用法では、「ＨＬＡクラスＩペプチド」という用語は、ＨＬＡクラスＩペプチドのヒト白血球抗原分子と結合できる、またはできると予測されるエピトープを含んでなるあらゆるポリペプチドを指すものとする。例として、「ＨＬＡクラスＩペプチド」としてはＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドが挙げられ、このペプチドは、ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１、^＊０２０２、^＊０２０３、^＊０２０６、または^＊０２０７α鎖を有する血清型ＨＬＡ−Ａ２をはじめとするが、これに限定されるものではない、血清型ＨＬＡ−Ａ２の特異的対立遺伝子と結合する。代表的な「ＨＬＡクラスＩペプチド」は、そのそれぞれがＨＬＡ−Ａ２拘束性ペプチドである、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１である。

本開示では、腫瘍形成に関連して、ヒト白血球、特にリンパ球、特にＴリンパ球、特にＣＤ４陽性Ｔリンパ球の免疫応答、特にＣＤ４陽性Ｔリンパ球仲介Ｔ_Ｈ１タイプ免疫応答を誘発するのに十分であるようにＭＨＣ（ＨＬＡ）クラスＩＩ分子に結合する能力がある、抗原由来のペプチドがさらに提供される。本明細書の用法では、「ＨＬＡクラスＩＩペプチド」という用語は、ＨＬＡクラスＩＩのヒト白血球抗原分子と結合できる、またはできると予測されるエピトープを含んでなる、あらゆるポリペプチドを指すものとする。典型的な「ＨＬＡクラスＩＩペプチド」を配列番号１３および１４として図１に列挙する。

本発明のさらなるペプチドを以下に示す。

ＨＬＡクラスＩＩペプチドは、特定のＨＬＡ特異的アミノ酸モチーフを有する「コア配列」と、任意に、コア配列の機能を阻害しない（すなわちペプチドとＴ細胞の相互作用に無関係とみなされる）Ｎ末端および／またはＣ末端伸長から構成されることが知られている。Ｎ末端および／またはＣ末端の伸長は、例えば、それぞれ１から１０アミノ酸長であり得る。これらのペプチドはＨＬＡクラスＩＩ分子を負荷するために直接使用するか、または以下に示す方法で配列をベクターにクローンし得る。これらのペプチドは、細胞内におけるより大きなペプチドのプロセシングの最終産物を形成するので、より長いペプチドも同様に使用し得る。本明細書で開示されるＨＬＡクラスＩＩペプチドは、分子量１００，０００ダルトン未満、分子量５０，０００ダルトン未満、分子量１０，０００ダルトン未満、分子量５，０００ダルトン未満、分子量２，５００ダルトン未満、または分子量約１０００〜２０００ダルトンのサイズをはじめとするあらゆるサイズであってもよいが、これに限定されるものではない。アミノ酸残基数に関しては、本開示のペプチドは、例として除外は意図せず、１０００個未満の残基、５００個未満の残基、または１００個未満の残基であってもよい。

したがってペプチドおよびその変異体の組成物が開示され、ペプチドまたは変異体の全長は、８〜１００、８〜６０個のアミノ酸、８〜３０、および８〜１７であり、あるいはペプチドまたは変異体は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６個のアミノ酸を有する。別の態様では、ペプチドは、Ｃ末端および／またはＮ末端に１〜１０個の伸張アミノ酸を有する、配列番号１３および１４からなる群から選択されるコア配列を有し、これらの隣接アミノ酸の総数は、１〜１２、１〜１０、１〜８、１〜６、２〜１２、２〜１０、２〜８、２〜６、３〜１２、３〜１０、３〜８、３〜６、４〜１２、４〜１０、４〜８、４〜６、５〜１２、５〜１０、５〜８、５〜６、６〜１２、６〜１０、６〜８、７〜１２、７〜１０、７〜８、８〜１２、８〜１０、９〜１２、９〜１０、または１０〜１２個であり、ペプチドがなおも前記ペプチドと同じ方法でＨＬＡ分子に結合できれば、隣接アミノ酸はＣ末端とＮ末端にあらゆる比率で配分し得る（例えば、全ての隣接アミノ酸を１つの末端に付加し得て、またはアミノ酸を両末端に等しく付加し得て、またはその他のあらゆる比率で付加し得る）。

ＭＨＣクラスＩエピトープは通常８〜１０アミノ酸長であるが、実際のエピトープを含むより長いペプチドまたはタンパク質のペプチドプロセッシングによって作成することも可能である。ＭＨＣクラスＩＩエピトープと同様に、ＣＴＬへのペプチド提示に実質的に影響せず、また伸長したペプチドのプロセシングによって仲介される実際のエピトープを生じるのに必要なタンパク質分解切断部位を隠さないように、実際のエピトープのＮおよびＣ末端上流および／または下流の伸長前駆ペプチドの隣接残基を選択してもよい。

したがって別の態様では、ペプチドは、Ｃ末端および／またはＮ末端に１〜１０個の伸張隣接アミノ酸を有する、配列番号１〜１１および配列番号１５〜３７からなるコア配列を有する。さらなる態様では、これらの隣接アミノ酸の総数は、１〜１２、１〜１０、１〜８、１〜６、２〜１２、２〜１０、２〜８、２〜６、３〜１２、３〜１０、３〜８、３〜６、４〜１２、４〜１０、４〜８、４〜６、５〜１２、５〜１０、５〜８、５〜６、６〜１２、６〜１０、６〜８、７〜１２、７〜１０、７〜８、８〜１２、８〜１０、９〜１２、９〜１０、または１０〜１２個であり、ペプチドがなおも配列番号１〜１２および配列番号１５〜４０のいずれかに記載の前記ペプチドと同じ方法でＨＬＡ分子に結合できれば、隣接アミノ酸はＣ末端とＮ末端にあらゆる比率で配分し得る（例えば、全ての隣接アミノ酸を１つの末端に付加し得て、またはアミノ酸を両末端に等しく付加し得て、またはその他のあらゆる比率で付加し得る）。

本開示のさらなる態様では、全長８〜１００個のアミノ酸、８〜６０個のアミノ酸、８〜３０個のアミノ酸、８〜１８個のアミノ酸、または８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６または１７個のアミノ酸を有する、ＭＨＣクラスＩエピトープのペプチドおよび変異体が提供される。

当然のことながら、開示されるペプチドまたは変異体は、ヒトＭＨＣクラスＩあるいはＩＩ分子に結合する能力を持つ。ペプチドまたは変異体のＭＨＣ複合体への結合は、例えば、本開示の実施例で下述する方法、またはＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子に関する文献で述べられているものなどの当業者に知られている方法によって試験してもよい（例えば、Ｖｏｇｔ ＡＢ，Ｋｒｏｐｓｈｏｆｅｒ Ｈ，Ｋａｌｂａｃｈｅｒ Ｈ，Ｋａｌｂｕｓ Ｍ，Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ ＨＧ，Ｃｏｌｉｇａｎ ＪＥ，Ｍａｒｔｉｎ Ｒ；Ｌｉｇａｎｄ ｍｏｔｉｆｓ ｏｆ ＨＬＡ−ＤＲＢ５＊０１０１ ａｎｄ ＤＲＢ１＊１５０１ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｄｅｌｉｎｅａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｅｌｆ−ｐｅｐｔｉｄｅｓ；Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４；１５３（４）：１６６５−１６７３；Ｍａｌｃｈｅｒｅｋ Ｇ，Ｇｎａｕ Ｖ，Ｓｔｅｖａｎｏｖｉｃ Ｓ，Ｒａｍｍｅｎｓｅｅ ＨＧ，Ｊｕｎｇ Ｇ，Ｍｅｌｍｓ Ａ；Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｌｌｅｌｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔａｃｔ ｓｉｔｅｓ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ＨＬＡ−ＤＲ１７ ｌｉｇａｎｄｓ；Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４；１５３（３）：１１４１−１１４９；Ｍａｎｉｃｉ Ｓ，Ｓｔｕｒｎｉｏｌｏ Ｔ，Ｉｍｒｏ ＭＡ，Ｈａｍｍｅｒ Ｊ，Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ Ｆ，Ｎｏｐｐｅｎ Ｃ，Ｓｐａｇｎｏｌｉ Ｇ，Ｍａｚｚｉ Ｂ，Ｂｅｌｌｏｎｅ Ｍ，Ｄｅｌｌａｂｏｎａ Ｐ，Ｐｒｏｔｔｉ ＭＰ；Ｍｅｌａｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ ｐｒｅｓｅｎｔ ａ ＭＡＧＥ−３ ｅｐｉｔｏｐｅ ｔｏ ＣＤ４（＋） ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ａｎｔｉｇｅｎ ＤＲ１１；Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９９９；１８９（５）：８７１−８７６；Ｈａｍｍｅｒ Ｊ，Ｇａｌｌａｚｚｉ Ｆ，Ｂｏｎｏ Ｅ，Ｋａｒｒ ＲＷ，Ｇｕｅｎｏｔ Ｊ，Ｖａｌｓａｓｎｉｎｉ Ｐ，Ｎａｇｙ ＺＡ，Ｓｉｎｉｇａｇｌｉａ Ｆ；Ｐｅｐｔｉｄｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ＨＬＡ−ＤＲ４ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ；．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．１９９５ １８１（５）：１８４７−１８５５；Ｔｏｍｐｋｉｎｓ ＳＭ，Ｒｏｔａ ＰＡ，Ｍｏｏｒｅ ＪＣ，Ｊｅｎｓｅｎ ＰＥ；Ａ ｅｕｒｏｐｉｕｍ ｆｌｕｏｒｏ−ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｔｏ ｃｌａｓｓ ＩＩ ＭＨＣ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ；Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．１９９３；１６３（２）：２０９−２１６；Ｂｏｙｔｏｎ ＲＪ，Ｌｏｈｍａｎｎ Ｔ，Ｌｏｎｄｅｉ Ｍ，Ｋａｌｂａｃｈｅｒ Ｈ，Ｈａｌｄｅｒ Ｔ，Ｆｒａｔｅｒ ＡＪ，Ｄｏｕｅｋ ＤＣ，Ｌｅｓｌｉｅ ＤＧ，Ｆｌａｖｅｌｌ ＲＡ，Ａｌｔｍａｎｎ ＤＭ；Ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ ｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｉａｂｅｔｅｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｉｓｃｏｒｄａｎｔ ｈｕｍａｎ ｔｗｉｎｓ，ｎｏｎ−ｏｂｅｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ ａｎｄ ＨＬＡ−ＤＱ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ；Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８（１２）：１７６５−１７７６）．）。

追加的なＮおよび／またはＣ末端に位置するアミノ酸配列は、必ずしも、ＭＨＣ分子の実際のエピトープとして機能するペプチドの一部を形成しているわけではないが、それでもなお、本開示に従ったペプチドを細胞に効率的に導入するために重要なこともある。一実施形態では、本開示のペプチドは、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｘ００４９７のＮＣＢＩに由来するＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖（ｐ３３、以下における「Ｉｉ」）の８０Ｎ末端アミノ酸を含んでなる融合タンパク質である（Ｓｔｒｕｂｉｎ，Ｍ．，Ｍａｃｈ，Ｂ．ａｎｄ Ｌｏｎｇ，Ｅ．Ｏ．Ｔｈｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｍＲＮＡ ｆｏｒ ｔｈｅ ＨＬＡ−ＤＲ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｉｎｖａｒｉａｎｔ ｃｈａｉｎ ｒｅｖｅａｌｓ ａ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｗｉｔｈ ａｎ ｕｎｕｓｕａｌ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｌａｒｉｔｙ ＥＭＢＯ Ｊ．３（４），８６９−８７２（１９８４））。

さらなる態様では、ペプチドは、全長８〜１００個のアミノ酸、８〜６０個のアミノ酸、８〜３０個のアミノ酸、８〜１７個のアミノ酸、または９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、または１６個のアミノ酸を有する。

加えて、ペプチドまたは変異体をさらに修飾して、安定性および／またはＭＨＣ分子に対する結合性を向上させ、より強い免疫応答を引き起こしてもよい。このようなペプチド配列の最適化の方法は技術分野で周知であり、例えば逆ペプチド結合または非ペプチド結合の導入などが挙げられる。

したがって、本開示の別の態様では、少なくとも１つのペプチドまたは変異体が非ペプチド結合を含む、１つの組成物が提供される。

逆ペプチド結合では、アミノ酸残基はペプチド連鎖（−ＣＯ−ＮＨ−）によって結合せず、ペプチド結合が逆転している。このようなレトロインベルソ型ペプチド模倣薬は、例えば、参照によって本明細書に引用されるＭｅｚｉｅｒｅ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５９，３２３０−３２３７に記載される方法などの技術分野で既知の方法によって作成してもよい。この方法では、骨格の変化はあるが側鎖方向は変化させずに擬ペプチドを作成する。Ｍｅｚｉｅｒｅ ｅｔ ａｌ（１９９７）は、これらの擬ペプチドが、ＭＨＣとヘルパーＴ細胞応答に有用であることを示している。ＣＯ−ＮＨペプチド結合の代わりにＮＨ−ＣＯ結合を含有するレトロインバーソ型ペプチドは、タンパク質分解に対してはるかにより耐性がある。

非ペプチド結合は、例えば、−ＣＨ_２−ＮＨ、−ＣＨ_２Ｓ−、−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＯＣＨ_２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ_２−、および−ＣＨ_２ＳＯ−である。米国特許第４，８９７，４４５号明細書は、標準法によって合成されたポリペプチドと、ＮａＣＮＢＨ_３の存在下におけるアミノアルデヒドとアミノ酸の反応によって合成された非ペプチド結合とが関与する、ポリペプチド鎖内の非ペプチド結合（−ＣＨ_２−ＮＨ）の固相合成法を提供する。

アミノ末端および／またはカルボキシ末端に化学基を追加して、上述の本開示の配列を含んでなるペプチドを合成し、例えば、ペプチドの安定性、生体使用効率、および／または親和性を向上させてもよい。例えば、カルボベンゾキシル基、デンシル基、またはＴ−ブチルオキシカルボニル基などの疎水基をペプチドのアミノ末端に付加してもよい。同様に、アセチル基または９−フルオレニルメトキシカルボニル基をペプチドのアミノ末端に配置させてもよい。さらに、例えば、疎水基、ｔ−ブチルオキシカルボニル基、またはアミノ基をペプチドのカルボキシ末端に付加してもよい。

さらに、本開示の全てのペプチドは、その立体配置を変化させるように合成されてもよい。例えば、通常のＬ異性体の代わりに、１つまたは複数のアミノ酸残基のＤ異性体を使用してもよい。なおもさらに、本開示のペプチドのアミノ酸残基の少なくとも１つを周知の非天然アミノ酸残基の１つで置換してもよい。このような改変が、本開示のペプチドの安定性、生体使用効率、および／または結合反応を増大させるのに役立つこともある。

同様に、ペプチド合成の前後に特定のアミノ酸を反応させて、本開示のペプチドまたは変異体を化学的に修飾してもよい。このような修飾は技術分野で良く知られており、例えば、参照によって本明細書に援用される、Ｒ．Ｌｕｎｄｂｌａｄ，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔｓｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ，３ｒｄ ｅｄ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２００５に要約されている。アミノ酸の化学的修飾としては、アシル化による修飾、アミド化、リジンのピリドキシル化、還元的アルキル化、２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるアミノ酸のトリニトロベンジル化、カルボキシル基のアミド修飾とシステインからシステイン酸への過ギ酸酸化によるスルフヒドリル修飾、水銀誘導体形成、他のチオール化合物との混合ジスルフィドの形成、マレイミドとの反応、ヨード酢酸またはヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化、およびアルカリ性ｐＨでのシアン酸塩によるカルバモイル化が挙げられるが、これに限定されるものではない。この関連で、タンパク質の化学修飾に関するより詳細な方法論について、当業者は、Ｅｄｓ．ＣｏｌｉｇａｎらのＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ ＮＹ １９９５−２０００）の１５章を参照されたい。

ＰＥＧによる治療用タンパク質およびペプチドの成功裏の修飾が、しばしば循環半減期の延長に付随するのに対し、グルタルアルデヒト、ポリエチレングリコールジアクリレート、およびホルムアルデヒドによるタンパク質の架橋は、ハイドロゲルの調製のために使用される。免疫療法のためのアレルゲンの化学的修飾は、シアン酸カリウムによるカルバミル化によって達成されることが多い。

一般に、ペプチドおよび変異体（少なくともペプチド連鎖をアミノ酸残基間に含有するもの）は、例えばＬｕｂｅｔｂａｌ（１９８１）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．４６，３４３３とその中の参考文献で開示されるように、例えば固相ペプチド合成のＦｍｏｃ−ポリアミドモードを使用して合成してもよい。

精製は、再結晶、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、および例えばアセトニトリル／水の勾配分離を使用した（通常は）逆相高速液体クロマトグラフィーのいずれか１つ、またはその組み合わせによって達成してもよい。

ペプチド分析は、薄層クロマトグラフィー、電気泳動、特にキャピラリー電気泳動、固相抽出（ＣＳＰＥ）、逆相高速液体クロマトグラフィー、酸加水分解後のアミノ酸分析、および高速原子衝撃（ＦＡＢ）質量分析法、ならびにＭＡＬＤＩおよびＥＳＩ−Ｑ−ＴＯＦ質量分析法を使用して実施してもよい。

本開示のさらなる態様では、開示されるペプチドまたは変異体の１つをコードする核酸（例えばポリヌクレオチド）が提供される。ポリヌクレオチドは、例えば、一本鎖および／または二本鎖のＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＰＮＡ、ＣＡＮ、ＲＮＡであってもよく、天然型ヌクレオチドまたは例えばホスホロチオエート結合骨格を有するポリヌクレオチドなどの安定型ヌクレオチド、あるいはその組み合わせであってもよく、ペプチドをコードする限り、イントロンを含有してもまたは含有しなくてもよい。当然のことながら、天然ペプチド結合によって連結される天然アミノ酸残基を含有するペプチドのみが、ポリヌクレオチドによってコード可能である。本開示のなおもさらなる態様では、本開示に従ったポリペプチドを発現できる発現ベクターが提供される。異なる細胞タイプの発現ベクターは技術分野で周知であり、過度の実験を要することなく選択され得る。

一般に、ＤＮＡは、発現に適した配向と正確な読み枠で、プラスミドなどの発現ベクターに挿入される。必要に応じて、ＤＮＡは、目的とする宿主に認識される適切な転写および翻訳の制御調節核酸の配列に連結されてもよいが、このような調節は一般に発現ベクター内で利用できる。次にベクターは、当業者に良く知られている標準法によって、宿主に導入される。

一実施形態では、組成物は、配列番号１〜１１および配列番号１３〜４０に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３〜４０に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３〜４０に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも４つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３〜４０に記載のアミノ酸配列から本質的になる、１０個のペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

一実施形態では、組成物は配列番号１〜１１および配列番号１３〜４２に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３〜４２に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３〜４２に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも４つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３〜４２に記載のアミノ酸配列からなる、１０個のペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１，配列番号２，配列番号５，配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドはそれを必要とする（ｉｎ ｎｅｅｄ）対象のＨＬＡセットに従って選択される。

一実施形態では、組成物は、配列番号１〜１１、配列番号１３〜１４、および配列番号１５〜３１に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に従ったアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも４つのペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になり、および上記配列からなる群から選択される１０個のペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になり、上記配列からなる群から選択される、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２；配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２の一実施形態では、組成物は、配列番号２３および配列番号２４に記載のアミノ酸配列からなる少なくとも１つのペプチドと、配列番号１〜１１および配列番号１３〜１４に記載のアミノ酸配列からなる少なくとも１つのペプチドとを含んでなる。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２の一実施形態では、組成物は、配列番号２３、および配列番号２４、および配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも１つのペプチドを含んでなる。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２の一実施形態では、組成物は、配列番号２３、および配列番号２４、および配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも１つのペプチドを含んでなる。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２の別の実施形態では、組成物は、配列番号２３、および配列番号２４、および配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、１０個のペプチドを含んでなる。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２の別の実施形態では、組成物は、配列番号２３および配列番号２４、および配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜配列番号１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなる。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２の別の実施形態では、組成物は、配列番号２３、および配列番号２４、および配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来とする配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドはそれを必要とする（ｉｎ ｎｅｅｄ）対象のＨＬＡセットに従って選択される。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２と組み合わされたＨＬＡ−Ａ^＊２４の一実施形態では、組成物は、配列番号２０、配列番号２５、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列と、配列番号１〜１１および配列番号１３または１４からなる群のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２と組み合わされたＨＬＡ−Ａ^＊２４の別の実施形態では、組成物は、配列番号２０、配列番号２５、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列と、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜配列番号１１、配列番号１３、および配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２からなる群から本質的になる、異なる少なくとも２つのペプチドを含んでなる。

ＨＬＡ−Ａ^＊０２と組み合わされたＨＬＡ−Ａ^＊２４の別の実施形態では、組成物は、配列番号２０、配列番号２５、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列と、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜配列番号１１、配列番号１３、および配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２からなる群から本質的になる、少なくとも２つの異なるペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になり、上記配列からなる群から選択される、１０個のペプチドを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になり、また上記配列からなる群から選択される、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなる。

別の実施形態では、組成物は、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２０、配列番号３１、および配列番号３２に記載のアミノ酸配列から本質的になる、少なくとも２つのペプチド、少なくとも４つのペプチド、または少なくとも１０個のペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲ由来にする配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

一実施形態では、組成物は、配列番号２０、配列番号２３〜２５、配列番号３１、配列番号３２、配列番号１〜１１、および配列番号１３〜１４に記載のアミノ酸配列からなる少なくとも２つのペプチドと、治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される、配列番号１５〜１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２６〜３０、および配列番号３３に記載の少なくとも１つの追加のペプチドと、任意に、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

別の実施形態では、組成物は、配列番号２０、配列番号２３〜２５、配列番号３１、配列番号３２、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる少なくとも２つのペプチドと、それを必要とする（ｉｎ ｎｅｅｄ）対象のＨＬＡセットに従って選択される、配列番号１５〜１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２６〜３０、および配列番号３３に記載の少なくとも１つの追加のペプチドと、任意に、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来すると配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

別の実施形態では、組成物は、配列番号２０、配列番号２３〜２５、配列番号３１、配列番号３２、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる少なくとも４つのペプチドと、治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される、配列番号１５〜１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２６〜３０、および配列番号３３に記載の少なくとも１つの別のペプチドと、任意に、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、サバイビンＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

別の実施形態では、組成物は、配列番号２０、配列番号２３〜２５、配列番号３１、配列番号３２、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、および配列番号１３、および配列番号１４に記載のアミノ酸配列からなる１０個のペプチドと、それを必要とする（ｉｎ ｎｅｅｄ）対象のＨＬＡセットに従って選択される、配列番号１５〜１９、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２６〜３０、および配列番号３３に記載の少なくとも１つの追加のペプチドと、任意に、サバイビンＨＬＡ−Ａ１に由来する配列番号３８のＢＩＲ−００２ｂ ＦＴＥＬＴＬＧＥＦ、サバイビンＨＬＡ−Ａ２に由来する配列番号３９のＢＩＲ−００２ｃ ＬＭＬＧＥＦＬＫＬ、サバイビンＨＬＡ−Ｂ３５に由来する配列番号４０のＢＩＲ−００２ｄ ＥＰＤＬＡＱＣＦＹ、サバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４１のＢＩＲ−００２ａ ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＤ、およびサバイビンＨＬＡ−ＤＲに由来する配列番号４２のＢＩＲ−００４ ＥＬＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮからなる群から選択される少なくとも１つのペプチドと、ＨＬＡ−Ａ^＊０２とを含んでなり、追加のペプチドは治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される。

国際公開第２００４／０６７０２３号パンフレットは、腫瘍関連抗原サバイビンに由来するＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドについて記載し、このペプチドは高い親和性でクラスＩＨＬＡ分子に結合できる。

ワクチンに含める各ペプチドの最適量、および最適投与計画は、当業者によって過度の実験を要することなく決定され得る。例えば、ペプチドまたはその変異体は、静脈内注射（ｉ．ｖ．）、皮下注射（ｓ．ｃ．）、皮内注射（ｉ．ｄ．）、腹腔内注射（ｉ．ｐ．）、筋肉内注射（ｉ．ｍ．）用に調製されてもよい。例として、ペプチド注射は、ｓ．ｃ．、ｉ．ｄ．、ｉ．ｐ．、ｉ．ｍ．、およびｉ．ｖ．で実施されてもよいが、これに限定されるものではない。例として、ＤＮＡ注射は、ｉ．ｄ．、ｉ．ｍ．、ｓ．ｃ．、ｉ．ｐ．、およびｉ．ｖ．で実施されてもよいが、これに限定されるものではない。例えば１〜５００ｍｇ、５０μｇおよび１．５ｍｇ、または１２５μｇ〜５００μｇの用量のペプチドまたはＤＮＡを投与してもよく、それぞれのペプチドまたはＤＮＡに左右される。この範囲の投与量は、以前の治験で成功裏に使用された（Ｂｒｕｎｓｖｉｇ ＰＦ，Ａａｍｄａｌ Ｓ，Ｇｊｅｒｔｓｅｎ ＭＫ，Ｋｖａｌｈｅｉｍ Ｇ，Ｍａｒｋｏｗｓｋｉ−Ｇｒｉｍｓｒｕｄ ＣＪ，Ｓｖｅ Ｉ，Ｄｙｒｈａｕｇ Ｍ，Ｔｒａｃｈｓｅｌ Ｓ，Ｍｏｌｌｅｒ Ｍ，Ｅｒｉｋｓｅｎ ＪＡ，Ｇａｕｄｅｒｎａｃｋ Ｇ；Ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ：ａ ｐｈａｓｅ Ｉ／ＩＩ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ；Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００６；５５（１２）：１５５３−１５６４；Ｍ．Ｓｔａｅｈｌｅｒ，Ａ．Ｓｔｅｎｚｌ，Ｐ．Ｙ．Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｔ．Ｅｉｓｅｎ，Ａ．Ｈａｆｅｒｋａｍｐ，Ｊ．Ｂｅｃｋ，Ａ．Ｍａｙｅｒ，Ｓ．Ｗａｌｔｅｒ，Ｈ．Ｓｉｎｇｈ，Ｊ．Ｆｒｉｓｃｈ，Ｃ．Ｇ．Ｓｔｉｅｆ；Ａｎ ｏｐｅｎ ｌａｂｅｌ ｓｔｕｄｙ ｔｏ ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｂａｓｅｄ ｃａｎｃｅｒ ｖａｃｃｉｎｅ ＩＭＡ９０１，ＡＳＣＯ ｍｅｅｔｉｎｇ ２００７；Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ ３０１７。

本明細書で開示される組成物は、組成物中に存在するペプチドの選択、数、および／または量が、組織、癌、および／または患者に特有であるように編成されてもよい。例えば、特定組織中の親タンパク質の発現パターンによってペプチドの正確な選択を導いて、副作用を回避し得る。選択は、治療される患者が罹患している特定タイプの癌、ならびに病状、以前の治療計画、患者の免疫状態、また当然ながら患者のＨＬＡハプロタイプに左右されてもよい。さらに、本開示に従ったワクチンは、特定患者の個人的必要性次第で、個別の構成要素を含有し得る。例としては、特定患者における関連ＴＡＡの発現、個人的なアレルギーまたは他の治療に起因する望ましくない副作用、初回の治療または治療計画に続く二次治療のための調節に合わせた、異なる量のペプチドが挙げられる。

当業者は、例えば、生体外におけるＴ細胞の産生、ならびにその有効性と全体的な存在、特定ペプチドに対する特定Ｔ細胞の増殖、親和性、増大を試験し、例えばＩＦＮ−γ産生を分析することによりＴ細胞の機能性を試験することで、免疫原性ペプチドの好ましい組み合わせを選択できる（下記の例も参照されたい）。次に、通常、最も効果の高いペプチドが、上述の目的のためにワクチンとして組み合わせられる。

適切なワクチンは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個の異なるペプチドを含有してもよい。癌ワクチンに使用されるペプチドの長さは、あらゆる適切なペプチドであってもよい。特に、それは適切な９量体のペプチド、または適切な８量体または９量体または１０量体または１１量体のペプチド、または１２量体、１３量体、１４量体、または１５量体であってもよい。より長いペプチドもまた適当であってもよく、添付の表１および２に記載される９量体または１０量体のペプチドがＭＨＣクラスＩペプチドに好ましいのに対し、１２〜１５量体はＭＨＣクラスＩＩペプチドに好ましい。

ペプチドは、腫瘍または癌ワクチンの構成要素となる。ワクチンは患者、罹患臓器、または全身に直接投与され、または患者またはヒト細胞系由来の細胞に生体外で適用されて、その細胞が引き続いて患者に投与され、あるいは生体外で使用されてもよく、患者に再投与される患者由来の免疫細胞の亜集団が選択される。

ペプチドは実質的に純粋であり、または免疫刺激アジュバント（下記参照）と組み合わされ、または免疫刺激的サイトカインと併用され、または例えばリポソームなどの適切な送達システムによって投与されてもよい。ペプチドはまた、スカシガイヘモシアニン（ＫＬＨ）またはマンナンなどにの適切な担体にコンジュゲートされてもよい（国際公開第９５／１８１４５号パンフレット、およびＬｏｎｇｅｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９３）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６９０，２７６−２９１を参照されたい）。ペプチドは標識化されてもよく、融合タンパク質であっても、ハイブリッド分子であってもよい。その配列が示されるペプチドは、ＣＤ４Ｔ細胞またはＣＤ８ＣＴＬを刺激することが期待される。ただし、逆ＣＤに陽性のＴ細胞による助けがあると、刺激はより効率的となる。したがってＣＤ４Ｔ細胞を刺激するＭＨＣクラスＩＩエピトープでは、融合パートナーまたは選択されたハイブリッド分子は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞を刺激するエピトープを適切に提供する。他方、ＣＤ８ＣＴＬを刺激するＭＨＣクラスＩエピトープでは、融合パートナーまたは選択されたハイブリッド分子が、ＣＤ４陽性Ｔ細胞を刺激するエピトープを適切に提供する。ＣＤ４およびＣＤ８刺激エピトープは技術分野で良く知られており、本開示で同定されるものが含まれる。

薬理学的に許容される担体は良く知られており、通常は液体であり、その中で有効な治療薬が調剤される。担体は製剤に薬理活性を与えないが、化学的および／または生物学的安定性、放出特性などを与えることもある。典型的製剤は、例えばＡｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００などに見ることができ、生理食塩水、水、緩衝用水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸、デキストロースなどが挙げられるが、これに限定されるものではない。最近、長年、ヒト患者の静脈栄養に使用されている特定の脂肪乳剤が、ペプチドのビヒクルとして機能し得ることが分かった。このような乳剤の２つの例は、イントラリピッド（Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ）およびリポフンディン（Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ）として知られる市販の脂肪乳剤である。「イントラリピッド」はＫａｂｉ Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｓｗｅｄｅｎの登録商標であり、米国特許第３，１６９，０９４号明細書に記載される静脈栄養用脂肪乳剤である。「リポフンディン」はＢ．Ｂｒａｕｎ Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙの登録商標である。いずれも脂肪として大豆油を含有する（１，０００ｍｌの蒸留水中に１００ｇまたは２００ｇ：それぞれ１０％または２０％）。イントラリピッドでは卵黄リン脂質が乳化剤として使用され（１２ｇ／ｌ蒸留水）、リポフンディンでは卵黄レシチンが使用されている（１２ｇ／ｌ蒸留水）。イントラリピッドおよびリポフンディンの双方において、グリセロール（２５ｇ／ｌ）が添加されて等張性が保たれている。

免疫応答を誘発するため、通常、組成物により高い免疫原性を与えるアジュバントを含める必要がある。さらなる態様では、少なくとも１つのＨＬＡ結合ペプチドと１つの免疫アジュバントとを含んでなる組成物が提供され、ＨＬＡ結合ペプチドは、前立腺関連抗原分子由来のエピトープを含んでなる。

本明細書の用法では、「免疫アジュバント」という用語は、抗原分子との組み合わせで使用する場合、抗原特異的免疫応答を非特異的に促進、延長、そうでなければそれを強めるあらゆる物質を指すものとする。免疫アジュバントは技術分野で周知であり、あらゆる免疫アジュバントを使用してもよい。適切なアジュバントとしては、１０１８ＩＳＳ、アルミニウム塩、Ａｍｐｌｉｖａｘ（登録商標）、ＡＳ１５、ＢＣＧ、ＣＰ−８７０，８９３、ＣｐＧ７９０９、ＣｙａＡ、Ｍｏｌｏｇｅｎ'ｓｄＳＬＩＭ（登録商標）、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＣ３０、ＩＣ３１、Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（登録商標）、ＩｍｕＦａｃｔＩＭＰ３２１、インターフェロンαまたはβ、ＩＳＰａｔｃｈ、ＩＳＳ、ＩＳＣＯＭｓ、ＪｕｖＩｍｍｕｎｅ（登録商標）、ＬｉｐｏＶａｃ（登録商標）、ＭＦ５９、モノホスホリルリピドＡ、および他の非毒性ＬＰＳ誘導体、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＭＳ１３１２、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ２０６、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ５０Ｖ、ＭｏｎｔａｎｉｄｅＩＳＡ−５１、ＯＫ−４３２、ＯＭ−１７４、ＯＭ−１９７−ＭＰ−ＥＣ，ＯＮＴＡＫ、ＰｅｐＴｅｌ（登録商標）ベクターシステム、ＰＬＧミクロ粒子、ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ（登録商標）、ＳＲＬ１７２、Ｖｉｒｏｓｏｍｅｓおよび他のウイルス様粒子、ＹＦ−１７Ｄ、ＶＥＧＦｔｒａｐ、Ｒ８４８、βグルカン、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、サポニン、マイコバクテリア、および合成バクテリア細胞壁模倣体由来のＡｑｕｉｌａ'ｓ ＱＳ２１ ｓｔｉｍｕｌｏｎ（Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ，ＭＡ，ＵＳＡ）、およびＲｉｂｉ'ｓ Ｄｅｔｏｘ、ＱｕｉｌまたはＳｕｐｅｒｆｏｓ（登録商標）などのその他の適切なアジュバントが挙げられるが、これに限定されるものではない。Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（登録商標）、Ｒｅｓｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（登録商標）、不完全フロイトアジュバント、インターフェロンαまたはＧＭ−ＣＳＦのようなアジュバントが好ましい。樹状細胞に特異的ないくつかの免疫アジュバントおよびその調製については既に報告がある（Ｄｕｐｕｉｓ Ｍ，Ｍｕｒｐｈｙ ＴＪ，Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ，Ｕｇｏｚｚｏｌｉ Ｍ，ｖａｎ Ｎｅｓｔ Ｇ，Ｏｔｔ Ｇ，ＭｃＤｏｎａｌｄ ＤＭ；Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｅ ｖａｃｃｉｎｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｍｕｓｃｕｌａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ；Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８；１８６（１）：１８−２７；Ａｌｌｉｓｏｎ ＡＣ；Ｔｈｅ ｍｏｄｅ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ａｄｊｕｖａｎｔｓ；Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ Ｓｔａｎｄ．１９９８；９２：３−１１）。サイトカインもまた使用してもよい。いくつかのサイトカインは、リンパ系組織（例えばＴＮＦα）への樹状細胞の移動に対する影響、Ｔリンパ球（例えばＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−４）のために効率的な抗原提示細胞への樹状細胞の成熟の加速（その内容全体を参照により明示的に本明細書に援用する米国特許第５，８４９，５８９号明細書）、さらに免疫アジュバントとしての作用（例えばＩＬ−１２）などに、直接関連がある（Ｇａｂｒｉｌｏｖｉｃｈ ＤＩ，Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ＨＴ，Ｃａｒｂｏｎｅ ＤＰ；ＩＬ−１２ ａｎｄ ｍｕｔａｎｔ Ｐ５３ ｐｅｐｔｉｄｅ−ｐｕｌｓｅｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ；Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ Ｅｍｐｈａｓｉｓ Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６（６）：４１４−４１８）。

免疫活性化ＣｐＧオリゴヌクレオチドもまた、ワクチン状況において、アジュバントの効果を増強し、アジュバントそれ自体として作用することが報告されている。理論に拘束されることなく、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、主としてＴＬＲ９であるＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）を介して、生来の（非獲得）免疫系を活性化することによって作用する。ＣｐＧに誘導されるＴＬＲ９の活性化は、ペプチドまたはタンパク質抗原、生または死滅ウイルス、樹状細胞ワクチン、自己細胞ワクチン、および予防ワクチンおよび治療ワクチン双方内の多糖類複合体をはじめとする、多種多様な抗原に対する、抗原特異的体液性および細胞性応答を高める。より重要なことには、この活性化は、ＣＤ４Ｔ細胞の助けのない場合でさえ、樹状細胞の成熟と分化を増強し、ＴＨ１細胞活性化の増強と、強力な細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の生成をもたらす。ＴＬＲ９刺激によって誘発されるＴＨ１バイアスは、ミョウバンまたは不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）のような、通常はＴＨ２バイアスを促進するワクチンアジュバントの存在下であってさえも、維持される。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、他のアジュバントと共に処方されまたは同時投与された場合、あるいは微粒子、ナノ粒子、脂肪乳剤等の製剤または類似製剤中にある場合、さらにより大きなアジュバント活性を示すが、それは抗原が比較的弱い場合に、強い応答を誘発するために特に必要である。ＣｐＧオリゴヌクレオチドはまた免疫応答を加速して、いくつかの実験では、ＣｐＧなしの十分量のワクチンと同等の抗体応答で、抗原投与量を約２桁減少させることができた（Ａｒｔｈｕｒ Ｍ．Ｋｒｉｅｇ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ９ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，２００６，５，４７１−４８４）。米国特許第６，４０６，７０５Ｂ１号明細書は、抗原特異的免疫応答を誘発する、ＣｐＧオリゴヌクレオチド、非核酸アジュバント、および抗原の組み合わせ使用について記述している。市販されるＣｐＧＴＬＲ９拮抗薬は、Ｍｏｌｏｇｅｎ（Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）のｄＳＬＩＭ（登録商標）（二重ステムループ免疫調節剤（ｄｏｕｂｌｅ Ｓｔｅｍ Ｌｏｏｐ Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒ））である。ＲＮＡ結合ＴＬＲ７、ＴＬＲ８および／またはＴＬＲ９などのその他のＴＬＲ結合分子を使用してもよい。

有用なアジュバントのその他の例としては、化学変性ＣｐＧｓ（例えば、ＣｐＲ、Ｉｄｅｒａ）と、ムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体と、Ｐｏｌｙ（Ｉ：Ｃ）（例えばｐｏｌｙＩ：Ｃ１２Ｕ）と、非ＣｐＧ細菌ＤＮＡまたはＲＮＡと、ならびにイミダゾキノリン、シクロホスファミド、スニチニブ、ベバシズマブ、セレブレックス、ＮＣＸ−４０１６、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ソラフィニブ（ｓｏｒａｆｉｎｉｂ）、ＸＬ−９９９、ＣＰ−５４７６３２、パゾパニブ、ＺＤ２１７１、ＡＺＤ２１７１、イピリムマブ、トレメリムマブ、およびＳＣ５８１７５などの免疫活性小分子および抗体とが挙げられるが、これに限定されるものではなく、これらは治療的におよび／またはアジュバントとして機能してもよい。本開示の状況において有用なアジュバントおよび添加物の量と濃度は、熟練した当業者によって、過度の実験を要することなく容易に決定され得る。

一実施形態では、アジュバントはｄＳＬＩＭ（登録商標）、ＢＣＧ、ＯＫ４３２、イムキモド、ムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体、レスイミキモド、ＧＭ−ＣＳＦ、インターフェロンα、ＰｅｖｉＴｅｒ（登録商標）、およびＪｕｖＩｍｍｕｎｅ（登録商標）、またはその組み合わせからなる群から選択される。

別の実施形態では、アジュバントは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ、サルグラモスチム）、ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ（登録商標）、ムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体、レスイミキモド、およびインターフェロン−などのコロニー刺激因子からなる群から選択される。

開示に従った組成物の別の実施形態では、アジュバントは、ムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体、イミキモド、またはレシミキモドである。

本明細書で開示される組成物は、皮下、皮内、筋肉内、腹腔内などの非経口投与のために、または経口投与のために使用し得る。このためには、ペプチドと任意にその他の分子は、薬学的に認容可能な、好ましくは水性担体に溶解または懸濁される。さらに、組成物は緩衝剤、結合剤、爆破剤、希釈剤、香料、潤滑剤などの添加剤を含有し得る。ペプチドは、サイトカインなどの免疫刺激物質と共に投与し得る。このような組成物中で使用し得る賦形剤の大規模な一覧は、例えばＡ．Ｋｉｂｂｅ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄ Ｅｄ．２０００，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｒｅｓｓなどにある。組成物は、腺腫または癌性疾患、好ましくはＣＲＣの阻止、予防および／または治療に使用し得る。

細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）は、無傷の外来抗原それ自体でなく、ＭＨＣ分子に結合したペプチドの形で抗原を認識する。ＭＨＣ分子自体は抗原提示細胞の細胞表面にある。したがって、ペプチド抗原、ＭＨＣ分子、およびＡＰＣの三量体複合体が存在する場合にのみ、ＣＴＬの活性化が可能である。それに応じて、ＣＴＬの活性化のために、ペプチドが使用されるだけでなく、さらにそれぞれのＭＨＣ分子と共にＡＰＣが追加されると、免疫応答が増進されることもある。

別の実施形態では、本開示に従った組成物は、少なくとも１つの抗原提示細胞をさらに含有する。

抗原提示細胞（または刺激細胞）は典型的に表面にＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子を有し、一実施形態では、実質的に抗原提示細胞それ自体は、選択された抗原をＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子に負荷できない。以下で詳細に説明するように、生体外において、ＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子に選択された抗原を容易に負荷してもよい。

一実施形態では、哺乳類細胞には、ＴＡＰペプチドトランスポーターが欠如し、またはそのレベルが低下し、またはその機能が低下している。ＴＡＰペプチドトランスポーターを欠く適切な細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ ＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ ２０８５２，ＵＳＡ）からカタログ番号ＣＲＬ１９９２として入手できる、ヒトペプチドを負荷した欠損細胞系Ｔ２が挙げられる。Ｔ２などのＴＡＰ欠損細胞系はＡＰＣとして使用し得て、ＴＡＰがないため、ＭＨＣクラスＩによって提示されるほぼ全てのペプチドは、これら細胞系の空のＭＨＣクラスＩ分子を細胞外で負荷するために使用される、監視下のペプチドとなる。したがって全ての効果が、使用されたペプチドに明確に帰着することになる。

別の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。適切には、樹状細胞は、抗原ペプチドでパルスされた自己樹状細胞である。抗原ペプチドは、適切なＴ細胞応答を引き起こすあらゆる適切な抗原ペプチドであってもよい。腫瘍関連抗原からのペプチドをパルスした自己樹状細胞を使用したＴ細胞療法は、Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ２９，３７１−３８０、およびＴｊｕａ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ ３２，２７２−２７８で開示されている。

別の実施形態では、少なくとも１つの抗原提示細胞を含有する組成物は、ペプチドでパルスされまたは負荷される。

代案としては、抗原提示細胞はペプチドをコードする発現コンストラクトを含んでなる。ポリヌクレオチドは、あらゆる適切なポリヌクレオチドであってもよい。一実施形態では、ポリヌクレオチドは樹状細胞を形質導入でき、したがってペプチドの提示と免疫誘導をもたらす。

都合の良くは、本開示の核酸は、ウイルスのポリヌクレオチドまたはウイルスに含まれていてもよい。例えば、アデノウイルス形質導入樹状細胞は、ＭＵＣ１に関連して、抗原特異的抗腫瘍免疫を誘導することが示されている（Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．４，１０２３−１０２８を参照されたい）。同様に、アデノウイルスベースのシステムを使用してもよく（例えば、Ｗａｎ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８，１３５５−１３６３を参照）、レトロウイルスのシステムを使用してもよい（Ｓｐｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６，１２１３−１２２１およびＳｚａｂｏｌｃｓ ｅｔ ａｌ（１９９７））。樹状細胞への血液粒子介在転移も使用してもよく（Ｔｕｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７，２７０２−２７０７）、ＲＮＡもまた使用してもよい（Ａｓｈｌｅｙ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６，１１７７１１８２）。

一般に、本開示の核酸を含有する本開示の組成物は、本開示のペプチドを含有する薬剤組成物と同様に、例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、経皮、腫瘍内、経口、経皮、経鼻、バッカル、直腸、吸入、または局所投与により、投与し得る。

回避メカニズムのために、腫瘍は、その治療薬に対して耐性を生じることが多い。薬物耐性は投与中に発生し、転移および腫瘍の再発として現れることもある。そのような薬物耐性を回避するため、腫瘍は一般に薬物の組み合わせによって治療され、無病期間後の転移と腫瘍の再発には、異なる組み合わせが必要となることが多い。したがって本開示の一態様では、組成物は、第２の抗癌剤と併せて投与される。第２の薬剤は、本開示の組成物の前後にまたは同時に投与してもよい。同時投与は、化学的性質が適合性であれば、例えば、本開示の組成物を第２の抗癌剤と混合することで達成し得る。同時投与の別の方法は、本開示の組成物を例えば注射し、第２の抗癌剤を例えば経口投与するなど、投与経路とは無関係に、組成物と抗癌剤を同日に投与することである。組成物と第２の抗癌剤はまた、同一治療クール内であるが異なる日に投与してもよく、および／または別の治療クール内で投与してもよい。

別の実施形態では、患者において癌を治療または予防する方法が提供され、前記方法は本開示の組成物のいずれか１つの治療有効量を患者に投与するステップを含む。

治療有効量は、免疫応答、特にＣＴＬ亜集団の活性化を誘発するのに十分な量である。当業者は、本明細書の実施例で提供されるものなどの標準免疫学的方法を使用して、ある量が有効か否かを容易に判定してもよい。特定の量の組成物の効果をモニターする別の方法は、治療される腫瘍の増殖および／またはその再発を観察することである。

別の実施形態では、組成物は抗癌ワクチンとして使用される。

ペプチドまたはペプチドをコードする核酸を含有する組成物もまた、腫瘍または癌ワクチンの構成要素となり得る。ワクチンは患者、罹患臓器、または全身に直接投与され、または患者またはヒト細胞系由来の細胞に生体外で適用されて、その細胞が引き続いて患者に投与され、あるいは生体外で使用されて、患者に再投与される患者由来の免疫細胞の亜集団が選択されてもよい。

一態様では、ワクチンは、前立腺癌治療用の複数のペプチド腫瘍ワクチンである。さらなる態様では、ワクチンは、原発性前立腺細胞および／または前立腺癌上に存在して同定されている、配列番号１〜１１および配列番号１３〜１４から選択される腫瘍関連ペプチドのセットを含んでなる。このセットは、ＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩペプチドを含む。ペプチドセットは、インフルエンザコア抗原のペプチドなどの少なくとも１つのペプチドもまた含有し得て、皮内投与の効率を検証する免疫マーカーとして機能する陽性対照ペプチドとして使用される。特定の一実施形態では、ワクチンは１４個の個々のペプチド（配列番号１〜１４に記載される）からなり、各ペプチドは、約１５００μｇ〜約７５μｇ、約１０００μｇ〜約１７５μｇ、約１０００μｇ〜約１７５μｇ、約５００μｇ〜約６００μｇ、約５７８μｇからなる群から選択される量で存在し、全てのペプチドは、ＨＰＬＣおよびイオン交換クロマトグラフィーにより精製されてもよく、白色からオフホワイトの粉末の外観を有する。凍結乾燥品を炭酸水素ナトリウムに溶解し、室温で戻した後３０分以内に皮内注射のために使用してもよい。溶液５００μｌ当たりの総ペプチド量は、約０．１〜１００ｍｇ、約０．１〜１ｍｇ、および約３００μｇ〜８００μｇで変動してもよい。本明細書では、「約」という用語は、特に断りのない限り、所定の値の平均＋／−１０％を意味するものとする。当業者は、例えば個々の患者の免疫状態および／または特定の癌タイプに存在するＴＵＭＡＰの量などのいくつかの要因に基づき、実際に使用されるペプチドの量を調節することができる。本発明のペプチドは、凍結乾燥品の代わりに他の適切な形態（滅菌溶液など）で提供されることもある。

薬剤組成物は、遊離形態または薬学的に認容可能な塩の形態で、ペプチドを含んでなってもよい。

本明細書の用法では、「薬学的に認容可能な塩」は、開示されるペプチドの誘導体を指し、作用薬の酸または塩基の塩を作成することでペプチドが修飾される。例えば、酸性塩は、適切な酸との反応に関与する遊離塩基（典型的に、中性形態の薬物は中性ＮＨ２基を有する）から調製される。酸性塩の調製に適する酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの有機酸と、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸との双方が挙げられる。反対に、ペプチド上に存在する酸部分の塩基性塩製剤は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンのような薬学的に認容可能な塩基を使用して調製される。例として、組成物は酢酸（酢酸塩）、アンモニウム、あるいは塩酸（塩化物）の塩としてペプチドを含んでなってもよいが、これに限定されるものではない。

別の実施形態では、本開示の組成物は、骨格形成物質として糖類、糖アルコール、グリシン、アルギニン、グルタミン酸などのアミノ酸、その他を含んでもよい。糖類は単糖類、二糖類、三糖類であってもよい。これらの糖類は単独で使用され、ならびに糖アルコールと組み合わせて使用されてもよい。糖類の例としては、単糖としてグルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、またはソルボース、二糖類としてスクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、三糖類としてラフィノースが挙げられる。糖アルコールは、例えば、マンニトースであってもよい。一実施形態では、組成物は、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、マンニトールおよび／またはソルビタンを含んでなる。別の実施形態では、前基礎生物はマンイトールを含んでなる。

さらに、組成物は、アスコルビン酸またはグルタチオンのような抗酸化剤；フェノール、ｍ−クレゾール、メチル−またはプロピルパラベン、クロロブタノール、チオマーサル、またはベンズアルコニウムクロライドのような保存料；安定剤；スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、マンニトース、マンニットおよび／またはソルビット、マンニットおよび／またはラクトースなどの骨格形成物質；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、すなわちＰＥＧ３０００、３３５０、４０００または６０００；またはシクロデキストリン、すなわちヒドロキシプロピレン−β−シクロデキストリン、スルホブチルエチル−β−シクロデキストリンまたはγ−シクロデキストリン；またはデキストランまたはポロキサマー、すなわちポロキサマー４０７、ポロキサマー１８８、またはＴｗｅｅｎ（登録商標）２０、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０などの生理的耐容性良好な賦形剤を含んでもよい（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，５ｔｈ ｅｄ．，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｒａｙｍｏｎｄ Ｒｏｗｅ，Ｐａｕｌ Ｓｈｅｓｋｅｙ ａｎｄ Ｓｉａｎ Ｏｗｅｎ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（２００６）を参照されたい）。別の態様では、抗酸化剤、骨格形成物質、および安定剤からなる群から選択される、１つまたは複数の耐容性良好な賦形剤が含まれもよい。

別の態様では、静脈内および筋肉内投与のｐＨはｐＨ２〜ｐＨ１２から選択され、一方皮下投与では、生体内希釈率が低下して、注射部位におけるより強力な照射をもたらすために、ｐＨ２．７〜Ｈ９．０から選択される。Ｓｔｒｉｃｋｌｅｙ Ｒｏｂｅｒｔ Ｇ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２１，ＮＯ：２，２０１ − ２３０（２００４）．。

さらなる態様では、本開示に従ったペプチドおよび／または核酸を含む製剤が、それぞれのペプチドまたは抗原と関連した腺腫様または癌性疾患に罹患した患者に投与される。これにより、Ｔ細胞性免疫応答が誘導され得る。

組成物中に存在する、本発明に従った（特に腫瘍関連）ペプチド、核酸、または発現ベクターの量が、組織、癌、および／または患者に特異的である組成物もさらに開示される。

別の実施形態では、ワクチンは核酸ワクチンである。ポリペプチドをコードする、ＤＮＡワクチンなどの核酸ワクチンを接種すると、Ｔ細胞応答が誘発されることが知られている。ワクチンは患者、罹患臓器、または全身に直接投与され、または患者またはヒト細胞系由来の細胞に生体外で適用されて、その細胞が引き続いて患者に投与され、あるいは生体外で使用されて、患者に再投与される患者由来の免疫細胞の亜集団が選択されてもよい。細胞に生体外で核酸を投与する場合は、インターロイキン−２またはＧＭ−ＣＳＦなどの免疫刺激サイトカインを同時発現するように、核酸を細胞に形質移入することが有用なこともある。核酸は実質的に純粋であり、免疫刺激アジュバントと組み合わされ、または免疫刺激性サイトカインと組み合わせて使用され、または例えばリポソームなどの適切な送達システムを使用して投与されてもよい。核酸ワクチンは、上でペプチドワクチンについて記載したようなアジュバントと共に投与されてもよい。核酸ワクチンは、アジュバントなしで投与されてもよい。

ポリヌクレオチドは実質的に純粋であり、または適切なベクターまたは送達系に含有されてもよい。適切なベクターおよび送達系としては、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、レトロウイルス、ヘルペスウイルス、アデノ随伴ウイルス、または複数のウイルスの要素を含有するハイブリッドなどのウイルスベース系が挙げられる。非ウイルス送達系としては、陽イオン性脂質や陽イオン性ポリマーが挙げられ、ＤＮＡ送達に関する技術分野で周知である。「遺伝子銃」などの物理的送達法もまた使用してもよい。ペプチドまたは核酸でコードされたペプチドは、例えば、ＣＤ４陽性Ｔ細胞を刺激する破傷風トキソイドのエピトープとの融合タンパク質であってもよい。

当然のことながら、患者に投与される核酸は滅菌されており、発熱性物質を含まない。裸のＤＮＡは、筋肉内または経皮または皮下投与されてもよい。都合良くは、核酸ワクチンは、あらゆる適切な核酸送達手段を含んでなってもよい。核酸は、リポソーム内で、またはウイルスベクター送達系の一部として、送達されてもよい。一実施形態では、ＤＮＡワクチンなどの核酸ワクチンは、筋肉内に投与される。別の実施形態では、ペプチドワクチンはｓ．ｃ．またはｉ．ｄ．で投与される。さらなる実施形態では、ワクチンは皮膚内に投与される。

樹状細胞などのプロフェッショナル抗原提示細胞による核酸の取り込みとコードされたポリペプチドの発現は、免疫応答の初回抗原刺激のメカニズムであると考えられる。しかし樹状細胞は組織中の形質移入された細胞から、発現されたペプチドを受け取ることができるため、樹状細胞は形質移入されないかもしれないが、なおも重要である（「交差提示」、例えば、，Ｔｈｏｍａｓ ＡＭ，Ｓａｎｔａｒｓｉｅｒｏ ＬＭ，Ｌｕｔｚ ＥＲ，Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＴＤ，Ｃｈｅｎ ＹＣ，Ｈｕａｎｇ ＬＱ，Ｌａｈｅｒｕ ＤＡ，Ｇｏｇｇｉｎｓ Ｍ，Ｈｒｕｂａｎ ＲＨ，Ｊａｆｆｅｅ ＥＭ．Ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＣＤ８（＋） Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｐｒｏｖｉｄｅ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｏｆ ｉｎ ｖｉｖｏ ｃｒｏｓｓ−ｐｒｉｍｉｎｇ ｂｙ ａｎｔｉｇｅｎ−ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｖａｃｃｉｎａｔｅｄ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００４ Ａｕｇ ２；２００（３）：２９７−３０６）。

ポリヌクレオチドによる癌の免疫療法については、全てその内容全体を参照によって本明細書に援用する、Ｃｏｎｒｙ ｅｔ ａｌ（１９９６） Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２３，１３５−１４７；Ｃｏｎｄｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９６） Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２，１１２２−１１２７；Ｇｏｎｇ ｅｔ ａｌ（１９９７） Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３，５５８−５６１；Ｚｈａｉ ｅｔ ａｌ（１９９６） Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６，７００−７１０；Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ（１９９６） Ｉｎｔ Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６５，６６４−６７０；ａｎｄ Ｂｕｒｃｈｅｌｌ ｅｔ ａｌ（１９９６） ３０９−３１３ Ｉｎ：Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｃａｌｖｏ ｅｔ ａｌ（Ｅｄｓ），Ｊｏｈｎ Ｌｉｂｂｅｙ Ｅｕｒｏｔｅｘｔ，に記載される。

注射部位によって、または標的化ベクターと送達系の使用によって、または患者から特定細胞集団を選択的に精製してペプチドまたは核酸を生体外投与することで、ワクチンの標的を例えば抗原提示細胞などの特定細胞集団にすることが有用なこともある。（例えば、樹状細胞は、Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ（１９９５） Ｂｌｏｏｄ ８６，３２９５−３３０１；Ｒｏｔｈ ｅｔ ａｌ（１９９６） Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４３，６４６−６５１に記載されるように分類されてもよい）。例えば、標的化ベクターは、適切な場所における抗原発現を誘導する、組織または腫瘍特異的プロモーターを含んでなってもよい。

ワクチンは、治療される患者が罹患している特定タイプの癌、ならびに病状、以前の治療計画、患者の免疫状態、また当然ながら患者のＨＬＡハプロタイプに左右され得る。さらに、ワクチンは、特定患者の個人的必要性次第で、個別の構成要素を含有し得る。例は、特定患者における関連ＴＡＡの発現、個人的なアレルギーまたは他の治療に起因する望ましくない副作用、初回の治療または治療計画後の二次的治療のための調節に準じて、ペプチドの量を変えることである。

本明細書で開示されるペプチドは、癌の治療に有効であるのに加えて、診断にも有効である。ペプチドの多くは前立腺癌から生成されており、正常組織には存在しないことが判定されているために、これらのペプチドを使用して癌の存在を診断し得る。

組織生検上のペプチドの存在は、病理学者が癌を診断する上で役立ち得る。抗体、質量分析法、または技術分野で既知のその他の方法による、特定の開示されたペプチドの検出は、組織が悪性または炎症性、あるいは病変組織あることを病理学者に示し得る。本開示のペプチド群の存在は、病変組織の分類または下位分類を可能にし得る。

特にＴリンパ球の作用機序への関与が知られており、または予測される場合は、病変組織標本上の本開示ペプチドの検出によって、免疫系関与療法の有益性が判定できるようになる。ＭＨＣ発現の欠失は、詳細に記載されている、感染悪性腫瘍細胞が免疫監視から逃れる機序である。したがって、本開示のペプチドの存在は、分析された細胞がこの機序を利用していないことを示す。

本開示のペプチドを使用して、ペプチドまたはＭＨＣ分子と複合体形成したペプチドに対するＴ細胞応答または抗体応答など、これらのペプチドに対するリンパ球応答を分析してもよい。これらのリンパ球応答は、さらなる治療ステップを決定する上で、予後マーカーとして使用し得る。これらの応答はまた、タンパク質ワクチン、核酸、自己物質、リンパ球養子免疫療法などの異なる手段による、リンパ球応答誘発を目的とした免疫療法的アプローチにおいて、代理マーカーとしても使用し得る。遺伝子療法では、副作用の評価において、本開示のペプチドに対するリンパ球応答を考慮し得る。リンパ球応答の監視はまた、例えば移植片対宿主病の検出などの移植治療のフォローアップ検査の有用な手段にもなり得る。

本発明のさらに別の態様では、（ａ）上述の組成物を溶液または凍結乾燥形態で含有する容器；（ｂ）任意に、凍結乾燥製剤のための希釈剤または戻し溶液を含有する第２の容器、および（ｃ）任意に、（ｉ）溶液の使用方法または（ｉｉ）凍結乾燥製剤の戻し方および／または使用法の説明書を含んでなる、キットが開示される。キットは、１つまたは複数の（ｉｉｉ）緩衝剤、（ｉｖ）希釈剤、（ｖｉ）フィルター、（ｖｉ）注射針、または（ｖ）注射器ををさらに含んでなってもよい。一実施形態では、容器は、ボトル、バイアル、シリンジ、試験管、または再使用可能容器からなる群から選択される。別の実施形態では、組成物は凍結乾燥される。

一態様では、キットは、適切な容器内の本開示の組成物および／またはウイルスの凍結乾燥調製物と、その戻し方および使用説明書を含んでなってもよい。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、（例えば二腔バイアル）、シリンジ（二腔シリンジなど）、および試験管が挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックのような様々な材料から形成されてもよい。一実施形態では、キットおよび／または容器は、戻し方および／または使用法を示す、容器上のまたはそれに付随する説明書を含有する。例えば、ラベルは、凍結乾燥製剤が上述のペプチド濃縮物に戻されることを表示してもよい。ラベルは、調製物が、皮下投与に有用であり、皮下投与を意図することをさらに表示してもよい。

製剤を保持する容器は、戻された製剤が反復投与（例えば２〜６回）できるようにする、再使用可能なバイアルであってもよい。キットは、適切な希釈液（例えば炭酸水素ナトリウム溶液）を含んでなる、第２の容器をさらに含んでなってもよい。

一実施形態では、希釈剤および凍結乾燥製剤の混合に際して、再溶解した製剤の最終ペプチド濃度は、少なくとも０．１５ｍｇ／ｍＬ／ペプチド（＝７５μｇ）であり、最高３ｍｇ／ｍＬ／ペプチド（＝１５００μｇ）までである。キットは、他の緩衝剤、賦形剤、フィルター、注射針、注射器、および使用方法の添付文書をはじめとする、商業上および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。

キットは、他の構成要素（例えば他の化合物またはこれらの他の化合物の成分）ありまたはなしで、組成物の製剤を含有する単一容器を有してもよく、または各構成要素毎に別個の容器を有してもよい。

さらに、キットは、第２の化合物（例えばアジュバント（イミキモド）、化学療法剤、天然産物、ホルモンまたは拮抗薬、抗血管新生薬または阻害剤、アポトーシス誘導剤またはキレート化剤）の同時投与を組み合わせた使用のために包装された、本開示の組成物および／またはワクチン製剤、または組成物それ自体を含んでもよい。キットの構成要素はあらかじめ複合体を形成してもよく、または各構成要素は患者への投与前に個別の容器内にあってもよい。キットの構成要素は、１つまたは複数の溶液中に提供されてもよい。一実施形態では、溶液は水溶液である。さらなる実施形態では、溶液は滅菌水溶液である。キットの構成要素はまた固体として提供されてもよく、他の別個の容器内に提供されてもよい適切な溶剤を添加することで、液体に転換されてもよい。

治療キットの容器は、バイアル、試験管、フラスコ、ボトル、注射器、あるいは固体または液体を包含するその他のあらゆる手段であってもよい。通常、少なくとも２つの構成要素がある場合、キットは第２のバイアルあるいは他の容器を含有し、それにより別々の投与が可能となる。キットはまた、薬学的に認容可能な液体用の別の容器を含んでもよい。一実施形態では、治療用キットは、本キットの構成要素である本開示の製剤を投与できるようにする、器具（例えば、１つまたは複数の注射針、シリンジ、点眼器、ピペットなど）も含有する。

薬剤調製物は、経口（腸内）、経鼻、眼内、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、または経皮などのあらゆる容認される経路を介したペプチドの投与に適するものであってもよい。一態様では、投与は皮下投与であり、輸液ポンプによって投与されてもよい。

「Ｔ細胞応答」という用語は、生体外または生体内で、ペプチドによって引き起こされるエフェクター機能の特異的増殖および活性化を意味する。ＭＨＣクラスＩ拘束性ＣＴＬでは、エフェクター機能は、ペプチドでパルスされ、ペプチド前駆体でパルスされ、または天然にペプチドを提示する標的細胞の溶解、サイトカインの分泌、エフェクター分子の分泌または脱顆粒であってもよい。一実施形態では、Ｔ細胞応答は、ペプチドにより誘発されたサイトカインの分泌であり、ペプチドはインターフェロン−γ、ＴＮＦ−α、またはＩＬ−２からなる群から選択される。一実施形態では、Ｔ細胞応答は、ペプチドにより誘発されたエフェクター分子の分泌であり、エフェクター分子はグランザイムおよびパーフォリンからなる群から選択される。ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ヘルパーＴ細胞では、エフェクター機能は、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０またはＩＬ−２をはじめとするが、これに限定されるものではないサイトカインのペプチド誘導性分泌、またはペプチド誘導性脱顆粒であってもよい。ＣＴＬおよびヘルパーＴ細胞に可能なエフェクター機能は、この一覧に限定されるものではない。

さらなる開示は、ヒト主要組織適合複合体（ＭＨＣ）クラス−Ｉ（ＨＬＡクラスＩ）またはＩＩ（ＨＬＡクラスＩＩ）分子に結合する能力を有するペプチドのアミノ酸配列の組み合わせを含んでなる組成物である。

組成物は、ペプチドの組み合わせをベースとした、効果的な抗前立腺癌ワクチンとして使用されてもよい。

別の態様は、本明細書で開示されるいずれかの組成物を患者に投与するステップを含む、前立腺癌の治療法である。これらの組成物は、免疫アジュバントによる付随的治療ありまたはなしで投与し得る。免疫アジュバントを使用する場合、そのアジュバントは本明細書で開示される組成物中に含め得て、または同一の投与経路あるいは異なる投与経路によって別に投与し得る。

本明細書で開示される組成物と方法は、一次療法、補助療法、または緩和療法として使用し得て、単独で、または（前立腺摘出術をはじめとする）外科療法、照射療法、および化学療法をはじめとするが、これに限定されるものではない、他の療法と併せて使用し得る。開示される方法は、さらに、原発性腫瘍、生物学的再発、局所再発、または転移再発に応えて使用し得る。本開示の方法は、さらに、アンドロゲン感受性前立腺癌およびアンドロゲン非依存性前立腺癌の双方で、アンドロゲン遮断療法の前後に、または同時に使用し得る。

本明細書の用法では、「アンドロゲン感受性前立腺癌」という用語は、腫瘍増殖にアンドロゲンを必要とするあらゆる前立腺癌を指すものとする。

本明細書の用法では、「アンドロゲン非依存性前立腺癌」という用語は、腫瘍増殖がアンドロゲン不在下で起きるあらゆる前立腺癌を指すものとする。

本明細書の用法では、「アンドロゲン遮断療法」という用語は、アンドロゲンシグナル伝達またはアンドロゲン産生の抑制が主作用であるあらゆる治療法を指す。

以下の実施例は特定の態様の例証に役立つものであり、本開示を制限することは意図されない。本明細書で引用される全ての参考文献は、その内容全体を参照により援用する。

実施例
実施例１：
転移発現の診断証拠がなく、根治的前立腺全摘除術後に生化学的に再発した患者において、ＨＬＡ結合ペプチドカクテルを試験し、このような組成物が、ＰＳＡ倍加時間（「ＤＴ」）の安定化および／または増大に有効であるか否かを判定した。

患者の選択
全ての患者は、根治的前立腺全摘除術による初回治療処置後に、生化学的再発を起こしていた。生化学的再発は、手術後または手術に加えた放射線療法後、少なくとも１４日間の間隔で２回測定したとき、最低レベルを５０％上回るＰＳＡ値の増大と定義された。他の適格基準には、以下の項目を含めた。すなわち、転移疾病あるいは骨スキャン、軸方向画像、およびＣＴにより確定される局所腫瘍再発なし、東海岸癌臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）による一般状態が０または１、年齢＞４５および＜８０歳、コルチコイドまたは他の免疫調節療法なし、照射またはホルモンまたは化学療法なし、他の悪性腫瘍またはてんかんまたは肺疾患なし。治験参加時に全ての患者はアンドロゲン感受性であり、参加に先立つ少なくとも１２ヶ月間にわたりアンドロゲン遮断療法が中止されていた。全ての患者は、ＨＬＡ−Ａ^＊０２陽性であった。患者背景を以下の表に示す。

治療
遺伝子変異および抗原欠損を通じて腫瘍が逃避するのを避けるために、広範なスペクトルの特異的Ｔ細胞を標的とする多価ペプチド組成物を使用した。組成物は、細胞傷害性ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞を活性化する前立腺関連抗原分子からのＨＬＡクラスＩおよびクラスＩＩの双方に特異的な、１３個の合成ＨＬＡ結合ペプチドを含んでなった。ペプチドの内１１個（配列番号１〜１１）は、ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１拘束性エピトープを含んでなった。２つのペプチド（配列番号１３および１４）は、ＨＬＡクラスＩＩ結合エピトープを含んでなった。インフルエンザウイルスに由来するＨＬＡ−Ａ^＊０２０１エピトープを含んでなる追加のペプチド（配列番号１２）が、リコールＣＤ８＋Ｔ細胞応答の活性化に対する、マーカーペプチドとして追加された。ペプチドは５００ｍｌモンタニドＩＳＡ−５１と共に乳化され、個々のペプチド毎に３００ｍｇの用量で皮下注射された。

さらに、患者は（１）免疫アジュバント；（２）温熱療法；または（３）免疫アジュバントまたは温熱療法なしの試験群に無作為に割り当てられた。使用された免疫アジュバントは、Ｓｃｈｅｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉ−ｔｕｍｏｒ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｂｙ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００６；３６（１０）：２８０７-２８１６．に記載される、（１）イムキモド（Ａｌｄａｒａ（登録商標），Ｍｅｄａ Ｐｈａｒｍａ，ＢａｄＨｏｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、（２）ＧＭ−ＣＳＦ（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標），Ｂａｙｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｌｅｖｅｒｋｕｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、および（３）ムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体であった。。

３名の患者（患者１、２、５）に、免疫アジュバントまたは温熱療法を施した。

４名の患者（患者１６、１７、１８、１９）に、免疫アジュバントとしてムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体を投与した。ムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体を投与した患者では、１１０μｇの免疫アジュバントをペプチドおよびモンタニドＩＳＡ−５１と共に乳化した。全ての構成要素は一回の注射で投与した。

４名の患者（患者３、７、８、１１）に、免疫アジュバントとしてイミキモドを投与した。これらの患者では、ペプチド投与後にイミキモドクリームを注射部位に局所塗布して塞いだ。患者は、８時間後にイミキモド塗布部位を水で洗浄するよう指示された。

６名の患者（患者４、６、９、１２、１４、１５）に、免疫アジュバントとしてＧＭ−ＣＳＦを投与した。これらの患者では、免疫アジュバントを２２５μｇの用量で、注射部位の近くに皮下注射した。

２名の患者（患者１０および１３）に、温熱療法を施した。これらの患者では、治療直後、２０ｃｍ２の露出腹部皮膚の注射部位に、４１℃に保持される熱源を当てて２０分間保持した。

ペプチド組成物、免疫アジュバント、および／または温熱療法による治療は、初回投与後７、１４、２８、４２、および５６日目に、各適用と同じ場所で繰り返された。その後、目的とするＰＳＡ値の減少または安定化があった場合、治療を４週毎に４２０日目まで継続した。
応答の評価
治療応答は、代替えパラメータとしてのＰＳＡ測定によって、各治療来診時に判定した。血液学的検査および血液生化学検査は、最初の６回の治療後（８週目）と、その後３ヶ月毎に繰り返した。臨床的進行の評価と同様のスケジュールで、臨床検査および直腸指診を実施した。

データ解析
応答は、幾何平均倍加時間を計算することにより評価した。各患者のＰＳＡ値の対数を可変勾配による直線に適合させた。２つの勾配間のスイッチポイント（ｓｗｉｔｃｈ ｐｏｉｎｔ）、異なる勾配、および初期値を非線形最小二乗適合法により評価した。完全応答は、測定不能なＰＳＡ値、部分応答は５０％のＰＳＡ値低下、病態安定は５０％以下の低下または１０％以下の増大、病態進行はベースラインＰＳＡ値から１０％を超える上昇と定義された。これらの測定値は、４週間後に確認しなくてはならなかった。治験を中止した患者の生化学的応答は、患者が局所放射線照射またはアンドロゲン遮断療法によってさらに治療されるまで追跡された。

結果
治療前の平均ＰＳＡ倍加時間（ＤＴ）は、全患者とも８．４ヶ月であり、治療終了後には１１．２ヶ月に増大した。４名の患者（２１％）では、治療による生化学的検査の改善が見られた。、ＰＳＡ値が増大している２名の患者では、直腸指診によって臨床的な腫瘍再発が検出され、ＰＥＴ−ＣＴスキャンで確認された。治療応答、すなわちＰＳＡ値は患者間で異なり、５つの異なる応答群に分類し得た。データを図２に集計する。

ＰＳＡの安定性とＤＴの増大
２名の患者（患者３および患者８；１１％）は、治療中および最終治療後のフォローアップ１４ヶ月および１６ヶ月目に、ＰＳＡの安定性を示した（図３）。治療開始から安定までの平均期間は、データカットオフ時に２９．５ヶ月であり、平均で１７回（１４および２０回）の治療を受けた。患者３は、９ヶ月間にわたり部分的ＰＳＡ応答（＞５０％）を示し、ＰＳＡの緩慢な上昇期間がそれに続いて、倍加時間は治療前の９．８ヶ月に比べ２０．５ヶ月となった。治験に先立つ初期ＰＳＡ再発は、前立腺全摘出術後１８ヶ月目に始まった（ｐＴ２ｐＮ０症例ＧＳ５療法）。患者３は、２０回目の治療時にアレルギー反応のため脱落しなければならなかった。患者８は、治療開始後に病態安定を示した。この患者は、１０ヶ月後に１４回目の治療時に、アレルギー反応のため治療を中止した。この患者は、根治的前立腺全摘除術後ＰＳＡ最下点が０．６ｎｇ／ｍｌのｐＴ３ｂグリーソン３＋４腫瘍を有し、術後の初期下降後、治験参加に先立ってＰＳＡの上昇を示した。この男性患者のＤＴは、６．６ヶ月から１４８．０ヶ月に増大した。どちらの患者も、免疫アジュバントとしてイミキモドを経皮投与された（図４）。

ＰＳＡ安定性欠如状態におけるＰＳＡＤＴ増大
２名の患者（患者１１および１６、１１％）は、治療期間中に、ＰＳＡＤＴが増大し、同時にＰＳＡ値が緩慢に増大した。患者１１のＰＳＡＤＴは、治療開始後６ヶ月間で１．５ヶ月から１０．１ヶ月に上昇した。この患者は１０．８ｎｇ／ｍｌのＰＳＡ値で治療を開始し、治療６ヶ月後に１７．８ｎｇ／ｍｌまで増大した。治験を終了させて、ホルモン補充療法を開始した。この患者では、観察可能な悪性病変はＰＥＴ−ＣＴスキャンで認められなかった。イミキモドが免疫アジュバントとして使用された。患者１６では、ＤＴは治験開始時に６．１ヶ月であった。この患者のＰＳＡは低下してＤＴを治療開始５ヶ月間で２．７ヶ月の半減期に変化させた。その後、この患者の統計的に計算されたＤＴは１４．４ヶ月に増大し、治療開始後１６ヶ月間にわたって持続した。治療開始時には、この患者のＰＳＡ値は０．２９ｎｇ／ｍｌであり、フォローアップ終了時には０．４１ｎｇ／ｍｌであった。この患者は、免疫アジュバントとしてムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体を投与された（図３および図４）。

中間ＰＳＡの上昇とそれに続くＰＳＡ下降およびＰＳＡＤＴ増大
１名の患者（患者５、５％）は、治療開始後に無影響のＰＳＡ増大を示し、１１回目のペプチド投与後に、１．３１ｎｇ／ｍｌのＰＳＡ値で治療を中止した。その後、この患者のＰＳＡは低下して、ＤＴはフォローアップが終わるまで２０．２ヶ月に増大した。患者は、この期間中にいかなる追加治療も受けなかった。この患者では、免疫アジュバントは使用されず、ペプチドはモンタニド中で単独で乳化された（図３および図４）。

中間ＰＳＡの下降または安定とそれに続くＰＳＡ上昇の加速
３名の患者（患者７、１５、および１７；１６％）のＰＳＡ値は、安定を保ち、または下降し、次に上昇の加速がそれに続いた。患者７のＤＴは治療開始時に３．７ヶ月であり、２１．５ヶ月に上昇して４ヶ月の治療期間中持続して、その後ＤＴ２．８ヶ月に増大した。この患者は組織像でｐＴ２ｂ腫瘍を有し、外科切除縁陽性であったた。この患者は、いかなる局所放射線治療も拒否した（図３）。患者１５のＤＴは、治験開始時に１．３ヶ月であった。初回治療に先立ち、直近２回のＰＳＡ値は我々のクリニックで４ヶ月間に測定された。それにより施設間差のため、ＰＳＡＤＴの結果が１．３ヶ月から２５．８ヶ月に変化した。ＧＭ−ＣＳＦを併用した治療中に、ＤＴは９．９ヶ月に低下してし、６ヶ月間安定であった。次に、ＰＳＡは再度７．４ヶ月のＤＴまで増大した。このＰＳＡ経過の解釈は、治療開始に先立つベースラインＰＳＡＤＴが短期間に変化したことで妨げられた。患者１７では、治療期間内における半減期１．９の中間ＰＳＡ低下後の治療期間内に、ＰＳＡＤＴが１０．２ヶ月から４．８ヶ月に低下して２ヶ月間継続し、ＰＳＡの増大がそれに続いた（図３）。

ＰＳＡの増大
１１名の患者（５８％）のＰＳＡ値は、治験期間中、ＰＳＡＤＴが一定のまま無影響で増大し、治験は早期に終了された（図４）。平均１３回（７〜１８回の範囲）の治療が実施された。

免疫アジュバントの影響
ＰＳＡＤＴ増大またはＰＳＡ値減少を示した８名の患者の内４名は、免疫アジュバントとしてイミキモドを投与された。１名の患者はＧＭ−ＣＳＦ、２名の患者はムチン−１−ｍＲＮＡ／プロタミン複合体を投与され、１名の患者は免疫アジュバントを投与されなかった。局所温熱療法で治療された２名の患者の内、応答または臨床的改善を示した者はいなかった（図４）。

実施例２：
マルチペプチドカクテルに含まれる特異的ＨＬＡクラスＩ結合ペプチドに対する応答性もまた、実施例１の処置に続いて試験した。

特異的Ｔ細胞の生体外増幅
前立腺癌患者の末梢血単核細胞をワクチン接種中の異なる時点で採取し、９０％仔牛胎児血清および１０％ＤＭＳＯを添加し、液体窒素中で凍結保存した。解凍後、約５×１０６個の細胞を５０Ｕ／ｍｌのペニシリンと５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（全てＢｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｏｇｉｕｍ）、１０％熱不活性化ヒト血清（ｃ．ｃ．ｐｒｏ，Ｎｅｕｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、および５０μＭのβメルカプトエタノールを添加したＩＭＤＭ培地中で、３７℃、７５％ＣＯ_２で培養した（２４ウェル細胞培養プレート；Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ，Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。プールした合成ＨＬＡクラスＩまたはＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドを、ＨＬＡクラスＩは１μｇ／ｍｌで、ＨＬＡクラスＩＩは５μｇ／ｍｌで、各々１日目に添加した。ＨＬＡクラスＩでは、Ｔ細胞刺激の３、５、７、および９日目に組み換えヒトＩＬ−２（ｒ−ｈＩＬ２，Ｒ ＆ ＤＳｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ、０日目にｐｒｏｍｏｋｉｎとＩＬ−４および７を培養物に添加し、ＨＬＡクラスＩＩでは、Ｔ細胞刺激の３、５、７、および９日目に組み換えヒトＩＬ−２（ｒ−ｈＩＬ２，Ｒ ＆ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびｐｒｏｍｏｋｉｎを添加した。

酵素免疫スポットアッセイ法（ＥＬＩＳＰＯＴ）
癌免疫療法協会（Ｃａｎｃｅｒ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ：ＣＩＰ）の免疫ガイドプログラムの勧告に従って、増殖させたＴ細胞の機能を標準インターフェロン−γＥＬＩＳＰＯＴ法で試験した。簡単に述べると、細胞を培養１２日目に収集して洗浄して計測し、ＥＬＩＳＰＯＴプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｓｃｈｗａｌｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）培地に接種した。ｉ）ペプチド提示細胞系Ｋ５６２−Ａ２および１μｇ／ｍｌの個々のＨＬＡクラスＩ結合ペプチド存在下、またはｉｉ）２．５μｇ／ｍｌの個々のＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドの存在下で、０．２０〜０．４０×１０６個の細胞を２連または３連で試験した。ＰＨＡ（１０μｇ／ｍｌ）またはＳＥＢ（１μｇ／ｍｌ）を陽性対照刺激として使用した。３７℃、７．５％ＣＯ_２で２６時間の培養後、１対の特異的モノクローナル抗体（１Ｄ１−ｋおよび７−Ｂ６−１、どちらもＭａｂｔｅｃｈ，Ｎａｃｋａ Ｓｔｒａｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）によって、ＩＦＮ−γの生成を検出した。ＥｘｔｒａＡｖｉｄｉｎアルカリホスファダーゼおよびＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質（どちらもＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）をそれぞれ１時間後と１０分後に添加した。ＩｍｍｕｎｏＳｐｏｔリーダー（シリーズ３Ａおよび５；Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｔｄ，Ａａｌｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ＥＬＩＳＰＯＴ分析を実施した。

各患者からの各ペプチドについて、ＩＦＮ−γ産生Ｔ細胞の存在を記録して表にした。図１３に見られるように、１１個のＨＬＡクラスＩ結合ペプチドの内８個が、少なくとも１名の患者で応答を誘発した。最も頻繁にみられる応答は、ＰＳＭＡ７１１（配列番号７）で誘発され、分析された患者２９名の内２５名でペプチド反応性を誘発した。

実施例３：
マルチペプチドカクテルに含まれる特異的ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドに対する反応性もまた、実施例１の処置後に試験した。

合成ペプチドと刺激
刺激および機能試験で使用された合成ペプチドは、ＨＩＶ由来エピトープ（ＨＩＶｇａｇ１６４−１８１：ＹＶＤＲＦＹＫＴＬＲＡＥＱＡＳＱＥＶ（配列番号１５）、陰性対照）；ＰＳＭＡ ４５９−４７３：ＮＹＴＬＲＶＤＣＴＰＬＭＹＳＬ（配列番号１３）、およびサバイビン９７−１１１：ＴＬＧＥＦＬＫＬＤＲＥＲＡＫＮ（配列番号１４）であった。

特異的Ｔ細胞の生体外増幅
前立腺癌患者１５および２６の末梢血単核細胞をワクチン接種中の異なる時点で採取し、９０％仔牛胎児血清および１０％ＤＭＳＯを添加して、液体窒素中で凍結保存した。解凍後、約５×１０６個の細胞を５０Ｕ／ｍｌのペニシリン、５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（全てＢｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｖｅｒｖｉｅｒｓ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）、１０％熱不活性化ヒト血清（ｃ．ｃ．ｐｒｏ，Ｎｅｕｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、および５０μＭのβメルカプトエタノールを添加したＩＭＤＭ培地中で、３７℃、７５％ＣＯ２で培養した（２４ウェル細胞培地プレート、Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ，Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）。プールした合成ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチドを各５μｇ／ｍｌで１日目に添加して、組み換えヒトＩＬ−２（ｒ−ｈＩＬ２；Ｒ ＆ ＤＳｙｓｔｅｍｓＧｍｂＨ，Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）をＴ細胞刺激の３，５，７、９日目に培養物に添加した。１２日間の刺激期間後、細胞を収集して洗浄し、計数してペプチド（１０μｇ／ｍ）で６時間再刺激した。ＭＡＣＳＩＦＮ−γ分泌アッセイプロトコル（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）に従って、ＩＦＮ−γ分泌細胞をＩＦＮ−γ Ｃａｔｃｈ ＲｅａｇｅｎｔおよびＩＦＮ−γＰＥ Ａｎｔｉｂｏｄｙで標識し、次にＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、１５０Ｕ／ｍｌのＩＬ−２、１μｇ／ｍｌのＰＨＡ、および照射同種異系フィーダーと共に、１０％ＨＳ添加ＩＭＤＭを含有する９６ウェルプレート内でソートした。４日毎にＩＬ−２（１５０Ｕ／ｍｌ）を添加し、３週間毎にフィーダー細胞を添加した。

細胞内サイトカイン染色
製造元の使用説明書に従って、エフェクターを収集して洗浄し、Ｇｏｌｇｉ−ＳＴＯＰ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＢｒｅｆｅｌｄｉｎＡ（１０μｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）の存在下で、５μｇ／ｍｌのＨＩＶとＰＳＭＡとサバイビンペプチド、またはＰＭＡとイオノマイシン（各々５０ｎｇ／ｍｌおよび１μＭ）による標準アッセイ中で刺激した。４〜６時間のインキュベートに続いて、細胞を２％ＦＣＳおよび０．０２％ＮａＮ_３添加ＰＢＳで洗浄し、モノクローナル抗体（ＭｏＡｂ）ＣＤ４−ＡＰＣ−Ｃｙ７（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびＣＤ８−ＰＥ−Ｃｙ７（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）によって、暗所において４＝獅ナ２０分間染色した。洗浄ステップ後、細胞をＣｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ試薬（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で２０分間透過処理し、次にモノクローナルＩＦＮ−γ−ＦＩＴＣ抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、細胞内ＩＦＮ−γを染色した。ソフトウェアＤｉｖａと、ＦｌｏｗＪｏ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）による分析を使用して、Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ ＣａｎｔｏＩＩ上で細胞を捕捉した。多機能試験では、細胞膜染色にはＣＤ４−ＡＰＣ−Ｃｙ７およびＣＤ８−ＰｅｒＣＰを使用し、細胞内染色にはＩＦＮ−ｇＰＥ−Ｃｙ７、ＴＮＦ−Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、ＩＬ−２−ＰＥを使用した（ＴＮＦ−Ｐａｃｉｆｉｃ ＢｌｕｅのみＢｉｏｌｅｇｅｎｄ；他は全てＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。ＣＤ１０７ａ−ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を１．５μｌ／試験で刺激期間中に添加した。

自己樹状細胞を使用したＴ細胞クローンの機能性試験
単球由来未成熟自己樹状細胞は、１０００Ｕ／ｍｌのＩＬ−４および８００Ｕ／ｍｌのＧＭ−ＣＳＦを添加した、ＩＭＤＭ１０％ＨＳ、１％ＰｅｎＳｔｒｅｐ、５０μＭβメルカプトエタノール中で、単球を７日間培養して生成された。機能の実験では、樹状細胞は関連ＨＬＡクラスＩＩ結合ペプチド（ＨＩＣ、サバイビンまたはＰＳＭＡ、１０μｇ／ｍｌ）で負荷され、または組み換えタンパク質でパルスされ（サバイビン、ＰＳＭＡまたはＲＡＰ−８０、２０μｇ／ｍｌ））、収集されて、数回洗浄され、細胞内サイトカイン染色前に、樹状細胞：エフェクター比１：５で、特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞クローンにより１２時間インキュベートされた。

対照実験では、１μｇの組み換えタンパク質を１ｍＭのＣａＣｌ_２存在下において、１０μｇのタンパク質分解酵素Ｋ（Ｍａｃｈｅｒｅｙ−Ｎａｇｅｌ，Ｄｕｅｒｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を含む１００μｌのＰＢＳ、ｐＨ７．２中で、３７℃で２時間前処理した。代案としては、ＤＣを最終濃度０．０５％のグルタルアルデヒド（Ｓｉｇｍａ）中で１５秒間固定した。反応を０．２ＭのＬ−リジン（Ｓｉｇｍａ）で停止させ、ペプチドまたはタンパク質を負荷する前に、ＤＣを２回洗浄した。

ＨＬＡクラスＩＩ拘束性の決定
エフェクター細胞として患者１５および２６の１２日目ペプチド事前感作ＰＢＭＣを使用し、刺激細胞としてペプチド負荷（１０μｇ／ｍｌのペプチド、２％ＦＣＳＭ添加ＩＭＤＭ中で一晩）ＥＢＶ形質転換細胞系（図２１のＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、およびＤＱの対立遺伝子を参照されたい）を使用して、エフェクター対ペプチド提示細胞比１：１で、ペプチド提示アッセイを実施した。５時間共インキュベーション後、細胞内サイトカイン染色を前述のように実施した。

Claims (15)

1. 少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドを含んでなる組成物であって、
   （ａ）少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるペプチド、または、ＨＬＡ−ＤＲ抗原関連不変鎖のＮ末端から１〜８０番目のアミノ酸配列からなるペプチドおよび配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるペプチドからなる融合タンパク質であり、
   （ｂ）少なくとも２つのＨＬＡ結合ペプチドの少なくとも１つが、配列番号１〜１１、配列番号１３〜２２、および配列番号２４〜４２からなる群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列からなるペプチドである、
   組成物。
2. 前記組成物が、グループ（ｂ）に記載のペプチドから選択される少なくとも２つのペプチドを含む、請求項１に記載の組成物。
3. 前記組成物が、配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるペプチドと少なくとも１つのペプチドを含み、
   該少なくとも１つのペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４、配列番号１５〜２２および配列番号２４〜４２からなる群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列からなるペプチドである、請求項１に記載の組成物。
4. 追加のペプチドが、治療される対象のＨＬＡセットに従って選択される、請求項３に記載の組成物。
5. 前記組成物が、少なくとも４つのペプチドを含み、
   少なくとも４つのペプチドのうち、
   少なくとも１つのペプチドは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列からなるペプチドであり、
   少なくとも１つのペプチドは、配列番号１、配列番号２、配列番号５、配列番号７、配列番号９〜１１、配列番号１３、および配列番号１４からなる群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列からなるペプチドであり、ならびに、
   少なくとも１つのペプチドは、配列番号１５〜２２および配列番号２４〜４２からなる群から選択されるいずれか１つのアミノ酸配列からなるペプチドである、請求項１に記載の組成物。
6. 少なくとも１つのペプチドがクラスＩＩペプチドである、請求項５に記載の組成物。
7. ＧＭＣＳＦおよびイミキモドを免疫アジュバントの選択肢の１つとして含む、１種の免疫アジュバント、または２種または３種の免疫アジュバントの混合物をさらに含む、請求項１〜６に記載の組成物。
8. 前記免疫アジュバントが、トール様受容体７アゴニストを選択肢の１つとして含むトール様受容体アゴニストを含む、請求項７に記載の組成物。
9. ペプチドでパルスされ負荷される自己樹状細胞、樹状細胞を選択肢の一つとして含む少なくとも１つの抗原提示細胞を含有する、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
10. 前立腺癌の患者の治療において使用される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
11. 前立腺癌がアンドロゲン感受性であり、前記患者がアンドロゲン遮断療法を受けたことがない、請求項１０に記載の組成物。
12. 前立腺癌がアンドロゲン非感受性である、請求項１０に記載の組成物。
13. 請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物の有効量を含む、前立腺癌治療剤。
14. 前記前立腺癌がアンドロゲン感受性であり、前記治療剤がアンドロゲン遮断療法を受けたことがない患者に投与されるものである、請求項１３に記載の治療剤。
15. 前記前立腺癌がアンドロゲン非感受性である、請求項１３に記載の治療剤。