JP6014592B2 - ペプチド放射性トレーサー組成物 - Google Patents

Description

本発明は、インビボでの陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに適した放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを含んでなるイメージング剤組成物に関する。ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドは放射性同位体¹⁸Ｆで標識されている。また、医薬組成物、かかる薬剤及び組成物の製造方法、並びに特に癌の診断で使用するための、かかる組成物を用いたインビボイメージング方法も開示される。

散乱因子（ＳＦ）としても知られる肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、創傷治癒や血管形成のような各種の生理学的過程に関与する増殖因子である。ＨＧＦとその受容体（ｃ−Ｍｅｔ）との高親和性相互作用は、腫瘍の増殖、浸潤及び転移に関係している。

Ｋｎｕｄｓｅｎ ｅｔ ａｌは、前立腺癌におけるＨＧＦ及びｃ−Ｍｅｔの役割を、イメージング及び治療との可能な関与を含めて総説している［Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，９１，３１−６７（２００４）］。診断及び治療用の標識抗ｍｅｔ抗体は、国際公開第０３／０５７１５５号に記載されている。

ｃ−Ｍｅｔは、上皮由来の多くのヒト癌における腫瘍の増殖、浸潤及び転移に関関与することが証明されている。ｃ−Ｍｅｔはほとんどの癌によって発現され、正常組織に比べて上昇したその発現は肺癌、乳癌、結腸直腸癌、膵臓癌、頭頸部癌、胃癌、肝細胞癌、卵巣癌、腎臓癌、神経膠腫、黒色腫及び多数の肉腫において検出されてきた。結腸直腸癌（ＣＲＣ）では、この疾患の最も早期の新生物発生前病変である異形成の異常陰窩病巣においてｃ−Ｍｅｔの過剰発現が検出されている。頭頸部の扁平上皮細胞癌では、報告によれば、ｃ−Ｍｅｔは原発腫瘍のおよそ８０％で発現又は過剰発現されるという。骨への前立腺癌転移では、ｃ−Ｍｅｔは骨転移の８０％超で過剰発現されると報告された。

正常条件下では、ｃ−Ｍｅｔは上皮細胞上に発現され、間葉由来のＨＧＦによってパラクリン的に活性化される。正常細胞におけるｃ−Ｍｅｔの活性化は一時的なイベントであり、緊密に調節される。しかし、腫瘍細胞では、ｃ−Ｍｅｔは本質的に活性である。癌では、ｃ−Ｍｅｔの増幅／過剰発現、活性化をもたらすｃ−Ｍｅｔの突然変異（例えば、構造変化）、及び自己分泌シグナリングループの創製による自律増殖調節の獲得によって異常なｃ−Ｍｅｔ亢進が達成されることがある。加えて、ｃ−Ｍｅｔ受容体の不完全なダウンレギュレーションもまた、細胞膜における異常なｃ−Ｍｅｔ発現の一因となる。ｃ−Ｍｅｔの過剰発現はＨＧＦ依存性（自己分泌性／パラクリン性）であるが、突然変異によって引き起こされる構造変化はＨＧＦ非依存性（例えばも゜細胞外ドメインの喪失）である。

国際公開第２００４／０７８７７８号は、ｃ−Ｍｅｔ又はｃ−Ｍｅｔ及びＨＧＦを含む複合体と結合するポリペプチド又は多量体ペプチド構築物を開示している。約１０の異なるペプチド構造クラスが記載されている。国際公開第２００４／０７８７７８号には、インビトロ及びインビボ用途のための検出可能な標識或いは治療用途のための薬物でペプチドを標識できることが開示されている。検出可能な標識は、酵素、蛍光化合物、光学色素、常磁性金属イオン、超音波造影剤又は放射性核種であり得る。国際公開第２００４／０７８７７８号の好ましい標識は放射性又は常磁性であると述べられており、最も好ましくは金属キレーターでキレート化される金属からなる。国際公開第２００４／０７８７７８号には、そこにおける放射性核種は¹⁸Ｆ、¹²⁴Ｉ、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、¹²³Ｉ、⁷⁷Ｂｒ、⁷⁶Ｂｒ、^99mＴｃ、⁵¹Ｃｒ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、⁴⁷Ｓｃ、¹⁶⁷Ｔｍ、¹⁴¹Ｃｅ、¹¹¹Ｉｎ、¹⁶⁸Ｙｂ、¹⁷⁵Ｙｂ、¹⁴⁰Ｌａ、⁹⁰Ｙ、⁸⁸Ｙ、¹⁵³Ｓｍ、¹⁶⁶Ｈｏ、¹⁶⁵Ｄｙ、¹⁶⁶Ｄｙ、⁶²Ｃｕ、⁶⁴Ｃｕ、⁶⁷Ｃｕ、⁹⁷Ｒｕ、¹⁰³Ｒｕ、¹⁸⁶Ｒｅ、²⁰³Ｐｂ、²¹¹Ｂｉ、²¹²Ｂｉ、^2l3Ｂｉ、^2l4Ｂｉ、¹⁰⁵Ｒｈ、¹⁰⁹Ｐｄ、^117mＳｎ、¹⁴⁹Ｐｍ、¹⁶¹Ｔｂ、¹⁷⁷Ｌｕ、¹⁹⁸Ａｕ及び¹⁹⁹Ａｕから選択できると述べられている。国際公開第２００４／０７８７７８号（６２頁）には、診断目的のための好ましい放射性核種は⁶⁴Ｃｕ、⁶⁷Ｇａ、⁶⁸Ｇａ、^99mＴｃ及び¹¹¹Ｉｎであり、^99mＴｃが特に特に好ましいと述べられている。

国際公開第２００８／１３９２０７号は、緑色乃至近赤外波長６００〜１２００ｎｍの光を用いて哺乳動物体をインビボでイメージングするのに適した光学レポーターイメージング部分で標識された１７〜３０アミノ酸のｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを開示している。かかるｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドは次のアミノ酸配列を含んでいる。
Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶
式中、Ｘ¹はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、Ｘ²はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、Ｘ³はＴｈｒ又はＡｒｇであり、Ｘ⁴はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ｘ⁵はＳｅｒ又はＴｈｒであり、Ｘ⁶はＡｓｐ又はＧｌｕであり、Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。国際公開第２００８／１３９２０７号の光学レポーターは、好ましくはシアニン色素である。

国際公開第２００９／０１６１８０号は、同第２００８／１３９２０７号のものに類似したｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドであって、光学レポーターがベンゾピリリウム色素であるものを開示している。国際公開第２００８／１３９２０７号及び同第２００９／０１６１８０号の薬剤は、インビトロ及びインビボ光学用途のため、特に人体のインビボ光学イメージングのために有用であると述べられている。結腸直腸癌の光学イメージングが好ましい用途である。

国際公開第２００４／０７８７７８号パンフレット

本発明は、インビボでの陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）イメージングに適した¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを含んでなるイメージング剤組成物に関する。かかるｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドは、リシン（Ｌｙｓ）残基を介して標識される。

本イメージング剤組成物は、好ましくは存在する非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドのレベルを抑制する。それが有利なのは、¹⁸Ｆ標識ｃＭＢＰが極めて低い化学濃度で存在しかつ投与される放射性トレーサーであるからである。したがって、非標識ｃＭＢＰが除去されなければ、それは大きな化学的過剰量で存在するであろう。これは、ＰＥＴインビボイメージング用途にとって重要であると立証された。さもなければ、非標識ｃＭＢＰはインビボでｃ−Ｍｅｔ結合部位に対して¹⁸Ｆ標識ｃＭＢＰと効果的に競合する。かくして、それはインビボでの取込み、したがって信号−バックグラウンド比に対して有害な効果を及ぼす。この問題は、先行技術では報告されなかった。なぜなら、例えばｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを光学レポーター色素で標識した場合、関係する標識ペプチドの化学量はＰＥＴの場合より実質的に多く、したがって競合の問題は起こらないからである。

本発明のイメージング剤組成物はまた、放射性標識ｃＭＢＰペプチドがフィルターを含む各種の材料に対する付着の問題を受けるという、以前には認識されていなかった問題も解決する。可溶化組成物が提供されるが、これはフィルターへの吸着による放射性トレーサーの実質的な損失なしに¹⁸Ｆ標識ｃＭＢＰ放射性トレーサーを製造して無菌濾過に付し得ることを意味する。

図１は、実施例１１のためのＦａｓｔＬａｂ（商標）カセット構成を示している。

第１の態様では、本発明は、¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを含んでなるイメージング剤であって、前記ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドが次の式Ｉの１８〜３０量体環状ペプチドであるイメージング剤を提供する。
Ｚ¹−［ｃＭＢＰ］−Ｚ² （Ｉ）
式中、
ｃＭＢＰは次の式ＩＩを有し、
−（Ａ）_x−Ｑ−（Ａ'）_y− （ＩＩ）
（式中、
Ｑは次のアミノ酸配列（配列番号１）であり、
−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−
（式中、Ｘ¹はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、Ｘ²はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、Ｘ³はＴｈｒ又はＡｒｇであり、Ｘ⁴はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ｘ⁵はＳｅｒ又はＴｈｒであり、Ｘ⁶はＡｓｐ又はＧｌｕであり、Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）
Ａ及びＡ’は独立にＣｙｓ以外の任意のアミノ酸であって、Ａ及びＡ’の少なくとも一方は存在しかつＬｙｓであることを条件とし、
ｘ及びｙは独立に０〜１３の値を有する整数であって、［ｘ＋ｙ］＝１〜１３となるように選択される。）
Ｚ¹はｃＭＢＰのＮ末端に結合していて、Ｈ又はＭ^IGであり、
Ｚ²はｃＭＢＰのＣ末端に結合していて、ＯＨ、ＯＢ^c（式中、Ｂ^cは生体適合性陽イオンである。）又はＭ^IGであり、
各Ｍ^IGは独立に、ｃＭＢＰペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、
ｃＭＢＰはＡ又はＡ’基のＬｙｓ残基において¹⁸Ｆで標識されている。

「イメージング剤」という用語は、哺乳動物体をイメージングするのに適した化合物を意味する。好ましくは、哺乳動物はインタクトな哺乳動物生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。好ましくは、イメージング剤は最小限に侵襲的なやり方（即ち、職業的な医学専門技術の下で実施した場合に哺乳動物被験体に対して実質的な健康リスクのないやり方）で哺乳動物体に投与できる。かかる最小限に侵襲的な投与は、好ましくは、局所又は全身麻酔の必要なしに行われる、前記被験体の末梢静脈への静脈内投与である。

本明細書中で使用される「インビボイメージング」という用語は、哺乳動物被験体の内部構造の全部又は一部の画像を非侵襲的に生成する技法をいう。

「ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド」という用語は、ｃ−Ｍｅｔ（又は単にＭＥＴ）としても知られる肝細胞増殖因子受容体に結合するペプチドを意味する。本発明の好適なかかるペプチドは、式Ｉの１８〜３０アミノ酸の環状ペプチドである。かかるペプチドは、ｃ−Ｍｅｔに対して約２０ｎＭ未満の見掛けＫ_Dを有している。前記ペプチドのｃＭＢＰ配列はプロリン残基を含み、かかる残基は主鎖アミド結合のシス／トランス異性化を示し得ることが知られている。本発明のｃＭＢＰペプチドは、任意のかかる異性体を含んでいる。

Ｚ¹基は、ｃＭＢＰの最後のアミノ酸残基のアミン基（即ち、アミノ末端）を置換する。したがって、Ｚ¹がＨである場合、ｃＭＢＰのアミノ末端は最後のアミノ酸残基の遊離ＮＨ₂基で終わる。Ｚ²基は、ｃＭＢＰの最後のアミノ酸残基のカルボニル基（即ち、カルボキシ末端）を置換する。したがって、Ｚ²がＯＨである場合、ｃＭＢＰのカルボキシ末端は最後のアミノ酸残基の遊離ＣＯ₂Ｈ基で終わり、Ｚ²がＯＢ^cである場合、末端カルボキシ基はＣＯ₂Ｂ^c基としてイオン化される。

「生体適合性陽イオン」（Ｂ^c）という用語は、イオン化して負に帯電した基と共に塩を形成する正に帯電した対イオンを意味する。この場合、前記正に帯電した対イオンも無毒性であり、したがって哺乳動物体（特に人体）への投与に適している。好適な生体適合性陽イオンの例には、アルカリ金属であるナトリウム及びカリウム、アルカリ土類金属であるカルシウム及びマグネシウム、並びにアンモニウムイオンがある。好ましい生体適合性陽イオンはナトリウム及びカリウムであり、最も好ましくはナトリウムである。

「代謝阻害基」（Ｍ^IG）という用語は、アミノ末端（Ｚ¹）又はカルボキシ末端（Ｚ²）におけるｃＭＢＰペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基を意味する。かかる基は当業者にとって公知であり、ペプチドのアミン末端については、好適にはＮ−アシル化基−ＮＨ（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^G（式中、アシル基−（Ｃ＝Ｏ）Ｒ^GはＣ_1-6アルキル基及びＣ_3-10アリール基から選択されるＲ^Gを有するか、或いはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位を含む。）から選択される。ペプチドのカルボキシ末端については、カルボキサミド、ｔｅｒｔ−ブチルエステル、ベンジルエステル、シクロヘキシルエステル、アミノアルコール又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位がある。好ましいかかるＰＥＧ基は、次の式ＩＡ又はＩＢのバイオモディファイアーである。

式中、ｐは１〜１０の整数である。別法として、式ＩＢのプロピオン酸誘導体に基づくＰＥＧ様構造も使用できる。

式中、ｐは式ＩＡに関して定義した通りであり、ｑは３〜１５の整数である。式ＩＢ中、ｐは好ましくは１又は２であり、ｑは好ましくは５〜１２である。

好ましいかかるアミノ末端Ｍ^IG基は、アセチル、ベンジルオキシカルボニル又はトリフルオロアセチルであり、最も好ましくはアセチルである。

「¹⁸Ｆ放射性標識」という用語は、ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドに放射性同位体¹⁸Ｆが共有結合していることを意味する。¹⁸Ｆは、好適にはＣ−Ｆフルオロアルキル又はフルオロアリール結合を介して結合される。これは、かかる結合がインビボで比較的安定であり、したがってｃＭＢＰペプチドからの¹⁸Ｆ放射性ラベルの代謝的開裂に対する抵抗性を与えるからである。¹⁸Ｆは、好ましくはＣ−Ｆフルオロアリール結合を介して結合される。¹⁸ＦはｃＭＢＰのアミノ酸の１つに直接結合してもよいが、好ましくはｃＭＢＰ上における放射性フッ素化置換基の一部としてコンジュゲートされる。前記置換基は、好ましくは次の式を有する。
−（Ｌ）_n−¹⁸Ｆ
式中、
Ｌは式−（Ａ）_m−（式中、各Ａは独立に−ＣＲ₂−、−ＣＲ＝ＣＲ−、−Ｃ≡Ｃ−、−ＣＲ₂ＣＯ₂−、−ＣＯ₂ＣＲ₂−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ−、−ＮＲ（Ｃ＝Ｓ）ＮＲ−、−ＳＯ₂ＮＲ−、−ＮＲＳＯ₂−、−ＣＲ₂ＯＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＳＣＲ₂−、−ＣＲ₂ＮＲＣＲ₂−、−ＣＲ₂−Ｏ−Ｎ＝、−ＣＲ₂−Ｏ−ＮＲ−、−ＣＲ₂−Ｏ−ＮＨ（ＣＯ）−、Ｃ_4-8シクロヘテロアルキレン基、Ｃ_4-8シクロアルキレン基、Ｃ_5-12アリーレン基又はＣ_3-12ヘテロアリーレン基、或いはアミノ酸、糖又は単分散ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）構成単位であり、各Ｒは独立にＨ、Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-4アルケニル、Ｃ_2-4アルキニル、Ｃ_1-4アルコキシアルキル及びＣ_1-4ヒドロキシアルキルから選択され、ｍは１〜２０の値を有する整数である。）の合成リンカー基であり、
ｎは０又は１の値を有する整数である。

「アミノ酸」という用語は、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、アミノ酸類似体（例えば、ナフチルアラニン）或いはアミノ酸模倣体を意味し、これらは天然のもの又は純粋に合成由来のものであってよく、光学的に純粋なもの（即ち、単一の鏡像異性体）、したがってキラルなものであるか、或いは鏡像異性体の混合物であってよい。本明細書中では、アミノ酸に関する通常の三文字略語又は一文字略語が使用される。好ましくは、本発明のアミノ酸は光学的に純粋なものである。「アミノ酸模倣体」という用語は、アイソスター（即ち、天然化合物の立体構造及び電子構造を模倣するように設計されたもの）である天然アミノ酸の合成類似体を意味する。かかるアイソスターは当業者にとって公知であり、特に限定されないが、デプシペプチド、レトロ−インベルソペプチド、チオアミド、シクロアルカン又は１，５−二置換テトラゾールを包含する［Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２４，１３７（１９８５）を参照されたい］。

「ペプチド」という用語は、ペプチド結合（即ち、１つのアミノ酸のアミンを別のアミノ酸のカルボキシルに連結するアミド結合）によって連結された（上記に定義したような）２以上のアミノ酸を含む化合物を意味する。

「糖」という用語は、単糖、二糖又は三糖を意味する。好適な糖には、グルコース、ガラクトース、マルトース、マンノース及びラクトースがある。任意には、アミノ酸への容易なカップリングを可能にするように糖を官能化することができる。即ち、例えばアミノ酸のグルコサミン誘導体は、ペプチド結合を介して他のアミノ酸にコンジュゲートすることができる。（ＮｏｖａＢｉｏｃｈｅｍ社から商業的に入手できる）アスパラギンのグルコサミン誘導体はこれの一例である。

Ａ及びＡ’が「Ｃｙｓ以外の任意のアミノ酸」であるとは、Ａ及びＡ’基の追加のアミノ酸が遊離チオール基（特にＣｙｓ残基）を含まないことを意味する。なぜなら、追加のＣｙｓ残基はＱ配列のＣｙｓ^a−Ｃｙｓ^b及びＣｙｓ^c−Ｃｙｓ^dジスルフィドブリッジとジスルフィドブリッジスクランブリングを起こす危険があり、その結果としてｃ−Ｍｅｔ結合親和性の喪失又は低下をもたらすからである。

好ましい特徴
本発明の好ましいｃＭＢＰペプチドは、ｃ−Ｍｅｔが結合してｃ−Ｍｅｔ／ＨＧＦ複合体を形成する反応に関して（蛍光偏光アッセイ測定に基づいて）約１０ｎＭ未満、最も好ましくは１〜５ｎＭの範囲内のＫ_Dを有し、３ｎＭ未満が理想的である。

式Ｉ及び式ＩＩのｃＭＢＰペプチドは、好ましくは次の式ＩＩＡを有する。
−（Ａ）_x−Ｑ−（Ａ'）_z−Ｌｙｓ−
（ＩＩＡ）
式中、
Ａは式ＩＩに関して定義した通りであり、
ｚは０〜１２の値を有する整数であって、［ｘ＋ｚ］＝０〜１２であり、
ｃＭＢＰはただ１つのＬｙｓ残基を含む。

このように、式ＩＩＡでは、単一のＬｙｓ残基がｃＭＢＰのＣ末端に特異的に位置している。これはまた、¹⁸Ｆ放射性ラベルが好ましくはＣ末端位置に位置することを意味している。

Ｑは、好ましくは次の配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列を含んでいる。
Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶（配列番号２）、
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（配列番号３）。

配列番号１、配列番号２及び配列番号３中では、Ｘ³は好ましくはＡｒｇである。式Ｉ及び式ＩＩ中では、−（Ａ）_x−又は−（Ａ'）_y−基は、好ましくは
−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（配列番号４）、
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（配列番号５）及び
−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−（配列番号６）
から選択されるリンカーペプチドを含んでいる。

第１の態様のｃＭＢＰペプチドは、好ましくは次のアミノ酸配列（配列番号７）を有している。
Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ^c−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ。

本発明の好ましいイメージング剤は、両方のｃＭＢＰペプチド末端がＭ^IG基によって保護されている。即ち、好ましくはＺ¹及びＺ²が共にＭ^IGであり、これらは通常異なっている。このようにして両ペプチド末端を保護することは、インビボイメージング用途にとって重要である。さもないと、急速なペプチド代謝の結果としてｃ−Ｍｅｔに対する選択的結合親和性の喪失が予想されるからである。Ｚ¹及びＺ²が共にＭ^IGである場合、好ましくはＺ¹はアセチルであり、Ｚ²は第一アミドである。最も好ましくは、Ｚ¹はアセチルであり、Ｚ²は第一アミドであり、¹⁸Ｆ部分はｃＭＢＰのリシン残基のε−アミン側鎖に結合している。

放射性フッ素化置換基−（Ｌ）_n−¹⁸Ｆは、ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドのＮ末端のα−アミノ基に結合していてもよいし、或いは別法として任意のアミノ置換アミノ酸（例えば、Ｌｙｓ残基）のアミン側鎖に結合していてもよい。好ましくは、それはｃＭＢＰのＬｙｓ残基のε−アミン基に結合している。

好ましい放射性フッ素化置換基−（Ｌ）_n−¹⁸Ｆは、ｎ＝１を有している。即ち、上記に定義した合成リンカー基が存在している。さらに好ましいかかる置換基は、フェニル基に結合した¹⁸Ｆ放射性ラベルを有している。即ち、かかる置換基は次の式を有する。
−（Ａ）_xＣ₆Ｈ₄−¹⁸Ｆ
式中、Ａは上記に定義した通りであり、ｘは０〜５の値を有する整数である。

最も好ましいかかる置換基は、フッ素化活性エステルによるＬｙｓアミン残基のＮ−アセチル化又はＬｙｓアミン残基のアミノオキシ誘導体とフッ素化ベンズアルデヒドとの縮合から生じ、次の式を有している。

第１の態様のイメージング剤は、第５の態様（下記）に記載されるようにして製造できる。

第２の態様では、本発明は、
（ｉ）第１の態様の¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド、及び
（ｉｉ）非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド
を含んでなるイメージング剤組成物であって、前記ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドは（ｉ）及び（ｉｉ）において同じアミノ酸配列を有し、非標識ｃＭＢＰペプチドは前記¹⁸Ｆ標識ｃＭＢＰペプチドのモル量の５０倍以下のモル量で前記組成物中に存在するイメージング剤組成物を提供する。

第２の態様における¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドの好ましい実施形態は、第１の態様（上記）に記載した通りである。

「組成物」という用語はその通常の意味を有する（即ち、明記された成分の混合物を意味する）。組成物は、固体又は液体／溶液の形態であり得る。

「非標識」という用語は、ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドが非放射性であること、即ち¹⁸Ｆ又はその他任意の放射性同位体で放射性標識されていないことを意味する。組成物中には１種以上のかかるペプチドが存在していてよく、かかる非標識ペプチドは主として第４の態様（下記）の非放射性前駆体を包含する。「非標識」という用語は、¹⁹Ｆで標識されたｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを除外する。この場合、前記¹⁹Ｆは前記ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを標識するために使用される¹⁸Ｆ−フッ化物イオン中に存在し、したがって同じ放射性標識反応の生成物である。当技術分野で公知の通り、２種のフッ素置換化合物がフッ素原子の同位体に関してのみ異なる場合、これらは化学的にほとんど同一の挙動を示し、したがってこれらの分離は極めて難しいであろう。非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド又は前駆体は、好ましくは既に結合したＺ¹基及び／又はＺ²基を有している。本発明者らは、アミノオキシ官能化ｃＭＢＰペプチド前駆体とコンジュゲートするために¹⁸Ｆ標識アルデヒドを使用する場合、非放射性アルデヒド不純物が副生物の主な原因であることを見出した。¹⁸Ｆ−ベンズアルデヒド中における重要なかかるアルデヒド不純物はＤＭＡＰ（即ち、４−ジメチルアミノベンズアルデヒド）である。したがって、非放射性アルデヒド（例えば、ＤＭＡＰ）とアミノオキシ官能化ｃＭＢＰペプチドとのコンジュゲーション生成物もまた、「非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド」という用語の範囲内にある。

好ましくは、非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドは、対応する¹⁸Ｆ標識ペプチドのモル量の３０倍以下、さらに好ましくは２０倍以下、最も好ましくは１０倍未満のモル量で前記組成物中に存在している。

第２の態様の組成物は好ましくは溶液形態であり、成分（ｉ）及び（ｉｉ）は共に溶液中に存在している。さらに好ましくは、溶液は生体適合性溶媒又は２種以上のかかる溶媒の混合物である。好ましいかかる生体適合性溶媒は第３の態様（下記）に記載されており、好ましくは水性溶媒からなる。

本発明者らは、放射性トレーサー濃度（１〜５０μｇ／ｍｌの概略濃度範囲）では、本発明の１８Ｆ標識ｃＭＢＰペプチドが各種の材料に対して不要の結合を示すことを見出した。放射性トレーサーはこのように非常に低い濃度で存在するので、僅かな化学量の吸着でも、存在する放射性同位体のかなり高い割合を占めることがある。放射性トレーサー濃度は、例えば、対応するシアニン色素標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチド（その濃度は約２〜１０ｍｇ／ｍｌであって、ほぼ１０００倍高い）と比較すべきである。このような場合、吸着によるμｇ量の物質の損失は、なお溶液中に存在する色素標識ペプチドのごく僅かな割合にすぎないであろう。放射性トレーサーの付着が認められた材料には、プラスチック、ガラス及びシリカがある。フィルターの場合、それは無菌濾過を実施する際に高率の放射能損失が生じることを意味し得る。

本発明者らは、上記の付着現象は、ｃＭＢＰペプチドが（特に低温において）酸性条件下で沈殿するという事実に由来することを見出した。したがって、所望の¹⁸Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを溶液中に保つためには、組成物をｐＨ７．５以上、さらに好ましくはｐＨ８．０以上に維持し、それによって物質の損失を回避することが好ましい。調節されたｐＨの使用に代わる手段として、又はそれに加えて、可溶化剤を含めることができる。

「可溶化剤」という用語は、溶媒に対するイメージング剤の溶解性を高める、組成物中に存在する添加剤を意味する。好ましいかかる溶媒は水性媒質であり、したがって可溶化剤は好ましくは水に対する溶解性を高める。好適なかかる可溶化剤には、Ｃ_1-4アルコール、グリセリン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、プロピレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノオレエート、ポリソルベート、ポリ（オキシエチレン）ポリ（オキシプロピレン）ポリ（オキシエチレン）ブロック共重合体（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標））、シクロデキストリン（例えば、α−、β−又はγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン或いはヒドロキシプロピル−γ−シクロデキストリン）及びレシチンがある。

好ましい可溶化剤は、シクロデキストリン、Ｃ_1-4アルコール及びＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）であり、さらに好ましくはシクロデキストリン及びＣ_1-4アルコールである。可溶化剤がアルコールである場合、それは好ましくはエタノール又はプロパノールであり、さらに好ましくはエタノールである。エタノールは潜在的に二重の役割を有している。それは、放射線防護剤としても機能し得るからである。可溶化剤がシクロデキストリンである場合、それは好ましくはシクロデキストリンであり、さらに好ましくはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＣＤ）である。シクロデキストリンの濃度は約０．１〜約４０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約５〜約３５ｍｇ／ｍｌ、さらに好ましくは２０〜３０ｍｇ／ｍｌ、最も好ましくは２５ｍｇ／ｍｌ付近であり得る。単一の可溶化剤を使用する場合、それは好ましくはエタノール又はヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンであり、さらに好ましくはエタノールである。可溶化剤の組合せを使用する場合、それは好ましくはエタノール及びヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンである。

好ましくは、第２の態様の組成物はｐＨ７．５以上に維持されると共に、任意には５〜１０％ｖ／ｖのエタノールを可溶化剤として使用する。

第２の態様のイメージング剤組成物は、好ましくはさらに１種以上の放射線防護剤を含んでいる。「放射線防護剤」という用語は、水の放射線分解から生じる含酸素フリーラジカルのような高反応性フリーラジカルを捕捉することにより、レドックス過程のような分解反応を阻止する化合物を意味する。本発明の放射線防護剤は、好適には、エタノール、アスコルビン酸、ｐ−アミノ安息香酸（即ち、４−アミノ安息香酸又はｐＡＢＡ）、ゲンチシン酸（即ち、２，５−ジヒドロキシ安息香酸）及び（適用できる場合には）かかる酸と上記に定義した生体適合性陽イオンとの塩から選択される。本発明の放射性防護剤は、好ましくはｐ−アミノ安息香酸又はｐ−アミノ安息香酸ナトリウムからなっている。

本発明の最も好ましいイメージング剤組成物は、Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｍ^IGが結合した配列番号７のｃＭＢＰペプチド及びアミノ安息香酸放射線防護剤とエタノール放射線防護剤／可溶化剤との組合せを水性緩衝液中に含んでいる。かかる好ましい組成物中における好ましい配列番号７のペプチドはペプチド１であり、好ましい¹⁸Ｆ標識ｃＭＢＰペプチドは化合物３である。放射能濃度は好ましくは３５０得ＭＢｑ／ｍｌ未満であって、２ｍｇ／ｍｌのｐＡＢＡ濃度及び約５〜１０％ｖｏｌ／ｖｏｌ（好ましくは６．５〜７．５％ｖｏｌ／ｖｏｌ）のエタノールが使用される。

第３の態様では、本発明は、第１の態様のイメージング剤又は第２の態様のイメージング剤組成物を、哺乳動物への投与に適した無菌形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物を提供する。

第３の態様におけるイメージング剤及び組成物の好ましい態様は、それぞれ第１及び第２の態様に記載した通りである。

「生体適合性キャリヤー」とは、組成物が生理学的に認容され得るようにして（即ち、毒性又は過度の不快感なしに哺乳動物体に投与できるようにして）イメージング剤を懸濁又は好ましくは溶解するための流体（特に液体）である。生体適合性キャリヤーは、好適には、無菌のパイロジェンフリー注射用水、（有利には注射用の最終生成物が等張性になるように平衡させ得る）食塩水のような水溶液、生体適合性緩衝剤を含む水性緩衝液（例えば、リン酸緩衝液）、或いは１種以上の張度調整物質（例えば、血漿陽イオンと生体適合性対イオンとの塩）、糖（例えば、グルコース又はスクロース）、糖アルコール（例えば、ソルビトール又はマンニトール）、グリコール（例えば、グリセロール）又は他の非イオン性ポリオール物質（例えば、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなど）の水溶液のような注射可能なキャリヤー液体である。好ましくは、生体適合性キャリヤーはパイロジェンフリー注射用水、等張食塩水又はリン酸緩衝液である。ｐＨを調節するためには緩衝液の使用が好ましい。

イメージング剤及び生体適合性キャリヤーはそれぞれ、注射器又はカニューレによる溶液の追加及び抜取りを許しながら、無菌保全性及び／又は放射能安全性の維持、さらに任意には不活性ヘッドスペースガス（例えば、窒素又はアルゴン）の維持を可能にする密封容器からなる適当なバイアル又は容器に入れた状態で供給される。好ましいかかる容器は、気密クロージャーを（通例はアルミニウムからなる）オーバーシールと共にクリンプ加工した隔壁密封バイアルである。クロージャーは、無菌保全性を維持しながら皮下注射針による１回又は数回の穿刺に適したもの（例えば、クリンプ加工した隔壁シールクロージャー）である。かかる容器は、（例えば、ヘッドスペースガスの交換又は溶液のガス抜きのために）所望される場合にはクロージャーが真空に耐え得ると共に、酸素又は水蒸気のような外部大気ガスの侵入を許すことなしに減圧のような圧力変化にも耐え得るという追加の利点を有している。

好ましい複数用量容器は、複数の患者用量を含む（例えば、容積１０〜３０ｃｍ³の）単一のバルクバイアルからなり、したがって臨床的状況に合わせて製剤の実用寿命中に様々な時間間隔で１回分の患者用量を臨床グレードの注射器中に抜き取ることができる。予備充填注射器は１回分のヒト用量又は「単位用量」を含むように設計され、したがって好ましくは臨床用に適した使い捨て注射器又は他の注射器である。本発明の医薬組成物は、好ましくは１人の患者用に適した用量を有し、上述したような適当な注射器又は容器に入れて供給される。

かかる医薬組成物は、抗菌防腐剤、ｐＨ調整剤、フィラー、放射線防護剤、可溶化剤又は重量オスモル濃度調整剤のような追加の任意賦形剤を含むことができる。「放射線防護剤」及び「可溶化剤」という用語並びにこれらの好ましい実施形態は、第２の態様（上記）に記載した通りである。「抗菌防腐剤」という用語は、潜在的に有害な微生物（例えば、細菌、酵母又はかび）の増殖を阻止する薬剤を意味する。抗菌防腐剤はまた、使用する用量に応じて多少の殺菌性を示すこともある。本発明の抗菌防腐剤の主な役割は、医薬組成物中におけるこのような微生物の増殖を阻止することである。しかし、抗菌防腐剤は、任意には投与に先立って前記組成物を製造するために使用されるキットの１種以上の成分中における潜在的に有害な微生物の増殖を阻止するためにも使用できる。好適な抗菌防腐剤には、パラベン類（即ち、メチル、エチル、プロピル又はブチルパラベン或いはこれらの混合物）、ベンジルアルコール、フェノール、クレゾール、セトリミド及びチオメルサールがある。好ましい抗菌防腐剤はパラベン類である。

「ｐＨ調整剤」という用語は、組成物のｐＨがヒト又は哺乳動物への投与のために許容される範囲（およそｐＨ４．０〜１０．５）内にあることを保証するために有用な化合物又は化合物の混合物を意味する。好適なかかるｐＨ調整剤には、トリシン、リン酸塩又はＴＲＩＳ［即ち、トリス（ヒドロキシルメチル）アミノメタン］のような薬学的に許容される緩衝剤、及び炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム又はこれらの混合物のような薬学的に許容される塩基がある。組成物をキットの形態で使用する場合には、ｐＨ調整剤を任意には独立のバイアル又は容器に入れて供給することができ、その結果としてキットのユーザーは多段操作の一部としてｐＨを調整することができる。

「フィラー」という用語は、製造及び凍結乾燥中における材料の取扱いを容易にすることができる薬学的に許容される増量剤を意味する。好適なフィラーには、塩化ナトリウムのような無機塩、及びスクロース、マルトース、マンニトール又はトレハロースのような水溶性糖又は糖アルコールがある。

第３の態様の医薬組成物は、無菌製造条件下で（即ち、クリーンルーム内で）製造して所望の無菌で非発熱性の生成物を得ることができる。基本構成部分、特に関連する試薬並びにイメージング剤に接触する装置部品（例えば、バイアル）は無菌であることが好ましい。かかる構成部分及び試薬は、無菌濾過或いは（例えば、γ線照射、オートクレーブ処理、乾熱又は（例えば、エチレンオキシドによる）化学処理を用いる）終末滅菌をはじめとする、当技術分野で公知の方法によって滅菌できる。一部の構成部分を予め滅菌しておけば、最小数の操作を実施すれば済むので好ましい。しかし、予防策として、医薬組成物の製造における最終段階として少なくとも無菌濾過段階を含めることが好ましい。

上述の通り、本発明の医薬組成物は、好ましくはｐＨ７．５以上に維持され、及び／又は可溶化剤を含んでいる。その結果、濾材に吸着される放射能の過度の損失なしに無菌濾過段階を使用できる。同様な考察は、可溶化剤を使用しないと吸着によって放射能の損失が引き起こされることのある、臨床グレード注射器中又はプラスチックチューブの使用における医薬組成物の操作に対しても適用される。

かかる医薬組成物は、好ましくは第６の態様（下記）に記載されるようにして製造される。

第３の態様の医薬組成物は、任意にはキットから製造できる。かかるキットは、第１の態様に記載した式Ｉのｃ−Ｍｅｔ結合ペプチド又は第４の態様の前駆体を無菌で非発熱性の形態で含む結果、適当な溶媒中で放射性同位体¹⁸Ｆの無菌供給物と反応させれば、放射性標識が起こって所望の¹⁸Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドが得られる。

キットに関しては、ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチド又は前駆体並びに上述したような他の任意賦形剤は、好ましくは凍結乾燥粉末として適当なバイアル又は容器に入れて供給される。かかる薬剤は、次いで生体適合性キャリヤー中において直接に（即ち、再構成物として）¹⁸Ｆで再構成するか、或いはまずキットを生体適合性キャリヤーで再構成してから¹⁸Ｆの供給物と反応させるように設計されている。

ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチド又は前駆体の好ましい無菌形態は凍結乾燥固体である。無菌固体形態は、好ましくは医薬組成物に関して（上記に）記載したような医薬品用容器に入れて供給される。キットを凍結乾燥する場合、配合物は糖（好ましくはマンニトール、マルトース及びトリシン）から選択される凍結保護剤を任意に含むことができる。

第４の態様では、本発明は、第３の態様の¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを製造するのに有用な前駆体であって、（ｉ）第１の態様に記載された式Ｉ（式中、Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｍ^IG）のｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド、又は
（ｉｉ）アミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド
からなる前駆体を提供する。

「アミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド」という用語は、アミノオキシ官能基が共有的にコンジュゲートしている式Ｉのｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを意味する。かかるアミノオキシ基は式−Ｏ−ＮＨ₂、好ましくは−ＣＨ₂Ｏ−ＮＨ₂を有するものであって、アミノオキシ基のアミンはアルデヒドと縮合反応してオキシムエーテルを生成する際にＬｙｓアミン基より高い反応性を示すという利点を有する。かかるアミノオキシ基は、好適には下記に記載されるようにｃＭＢＰの得Ｌｙｓ残基の位置に結合している。

かかる前駆体は非放射性であり、高い化学純度で得ることができるように設計される。それはまた、¹⁸Ｆの適当な供給源と反応させれば、満足すべき放射化学純度（ＲＣＰ）で効率的に反応が起こるように設計される。「¹⁸Ｆの適当な供給源」は、前駆体の性質に依存する。前駆体が式Ｉの非標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドからなる場合、非標識ペプチドのリシン（Ｌｙｓ）残基のアミン基は放射性標識部位であるように設計される。Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｍ^IGであるので、ｃＭＢＰペプチドの末端は保護されている。好ましいかかるｃ−Ｍｅｔ結合ペプチド及び好ましいＺ¹／Ｚ²基は、第１の態様に記載した通りである。このように、¹⁸Ｆの適当な供給源は、リシンアミン基、好ましくはＬｙｓのε−アミンとできるだけ効率的に反応するように設計される。

第３の態様の医薬組成物を製造するためには、前駆体は好ましくは無菌形態にあり、さらに好ましくは凍結乾燥固体である。

第４の態様の前駆体は、好ましくはアミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドである。

式Ｉのｃ−Ｍｅｔ結合ペプチド、即ち本発明のＺ¹−［ｃＭＢＰ］−Ｚ²は、
（ｉ）所望のｃＭＢＰペプチドと同じペプチド配列を有し、Ｃｙｓ^a及びＣｙｓ^bが保護されておらず、Ｃｙｓ^c及びＣｙｓ^d残基がチオール保護基を有する線状ペプチドの固相ペプチド合成を行う段階、
（ｉｉ）段階（ｉ）からのペプチドを塩基水溶液で処理することで、Ｃｙｓ^a及びＣｙｓ^bを連結する第１のジスルフィド結合を有する単環式ペプチドを得る段階、並びに
（ｉｉｉ）Ｃｙｓ^c及びＣｙｓ^dのチオール保護基を除去して環化することで、Ｃｙｓ^c及びＣｙｓ^dを連結する第２のジスルフィド結合を形成し、かくして所望の二環式ペプチド生成物Ｚ¹−［ｃＭＢＰ］−Ｚ²を得る段階
を含んでなる製造方法によって得ることができる。

「保護基」という用語は、望ましくない化学反応を阻止又は抑制するが、分子の残部を変質させない程度に温和な条件下で問題の官能基から脱離させ得るのに十分な反応性を有するように設計された基を意味する。脱保護後には所望の生成物が得られる。アミン保護基は当業者にとって公知であり、好適にはＢｏｃ（ここでＢｏｃはｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニルである。）、Ｆｍｏｃ（ここでＦｍｏｃはフルオレニルメトキシカルボニルである。）、トリフルオロアセチル、アリルオキシカルボニル、Ｄｄｅ［即ち、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル］及びＮｐｙｓ（即ち、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）から選択される。好適なチオール保護基は、Ｔｒｔ（トリチル）、Ａｃｍ（アセトアミドメチル）、ｔ−Ｂｕ（ｔｅｒｔ−ブチル）、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、メトキシベンジル、メチルベンジル及びＮｐｙｓ（３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル）である。さらに他の保護基の使用は、‘Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’，４^th Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ［Ｗｉｌｅｙ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ（２００６）］に記載されている。好ましいアミン保護基はＢｏｃ及びＦｍｏｃであり、最も好ましくはＢｏｃである。好ましいアミン保護基はＴｒｔ及びＡｃｍである。

実施例１及び実施例２は一層具体的な詳細を示している。固相ペプチド合成法のさらなる詳細は、Ｐ．Ｌｌｏｙｄ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｆ．Ａｌｂｅｒｉｃｉｏ ａｎｄ Ｅ．Ｇｉｒａｌｄ；Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９７に記載されている。ｃＭＢＰペプチドは不活性雰囲気下で最もよく貯蔵され、フリーザー内に保存される。溶液として使用する場合には、ジスルフィドブリッジのスクランブリングを生じるリスクがあるので、７より高いｐＨを避けるのが最もよい。

アミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドは、Ｐｏｅｔｈｋｏ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．，４５，８９２−９０２（２００４）］、Ｓｃｈｉｒｒｍａｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１８，２０８５−２０８９（２００７）］、Ｓｏｌｂａｋｋｅｎ ｅｔ ａｌ［Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ，１６，６１９０−６１９３（２００６）］又はＧｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９，９５１−９５７（２００８）］の方法によって製造できる。アミノオキシ基は、任意には２つの段階でコンジュゲートすることができる。第一に、Ｎ−保護アミノオキシカルボン酸又はＮ−保護アミノオキシ活性化エステルをｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドにコンジュゲートする。第二に、中間のＮ−保護アミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを脱保護して所望の生成物を得る［上記に引用したＳｏｌｂａｋｋｅｎ及びＧｌａｓｅｒ
の論文を参照されたい］。Ｂｏｃ−ＮＨ−Ｏ−ＣＨ₂（Ｃ＝Ｏ）ＯＨのようなＮ−保護アミノオキシカルボン酸は、例えばＮｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ社から商業的に入手できる。

第５の態様では、本発明は、第１の態様の¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドの製造方法であって、
（ｉ）第４の態様の前駆体を用意する段階、
（ｉｉ）前記前駆体が式Ｉ（式中、Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｍ^IG）の非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドからなる場合、¹⁸Ｆ標識活性化エステルと反応させるか、又は活性化剤の存在下で¹⁸Ｆ標識カルボン酸と反応させることで、前記環状ペプチドのｃＭＢＰのＬｙｓ残基の位置でアミド結合を介してコンジュゲートされた¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを得る段階、及び
（ｉｉｉ）前記前駆体がアミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドからなる場合、
（ａ）¹⁸Ｆ標識活性化エステルと反応させるか、又は活性化剤の存在下で¹⁸Ｆ標識カルボン酸と反応させることで、前記官能化ペプチドのアミノオキシ位置でアミド結合を介してコンジュゲートされた¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを得る段階、或いは
（ｂ）¹⁸Ｆ標識アルデヒドと反応させることで、前記官能化ペプチドのアミノオキシ位置でオキシムエーテル結合を介してコンジュゲートされた¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを得る段階
を含んでなる方法を提供する。

「活性化エステル」又は「活性エステル」という用語は、良好な脱離基であり、したがってアミンのような求核試薬との一層容易な反応を可能にするように設計された関連カルボン酸のエステル誘導体を意味する。好適な活性エステルの例は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スルホ−スクシンイミジルエステル、ペンタフルオロフェノール、ペンタフルオロチオフェノール、ｐ−ニトロフェノール、ヒドロキシベンゾトリアゾール及びＰｙＢＯＰ（即ち、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）である。好ましい活性エステルは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド又はペンタフルオロフェノールエステル、特にＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。

「活性化剤」という用語は、アミンとカルボン酸とのカップリングによるアミドの生成を容易にするために使用される試薬を意味する。好適なかかる活性化剤は当技術分野で公知であり、ＥＤＣ［Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド］のようなカルボジイミド及びジシクロヘキシルカルボジイミド又はジイソプロピルカルボジイミドのようなＮ，Ｎ’−ジアルキルカルボジイミド、並びにＨＢＴＵ［Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］、ＨＡＴＵ［Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート］及びＰｙＢＯＰ［ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート］のようなトリアゾールを包含する。さらなる詳細は、“Ｍａｒｃｈ'ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，５^th Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐａｇｅｓ ５０８−５１０，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（２００１）に示されている。好ましいかかる活性化剤はＥＤＣである。

［¹⁸Ｆ］ＳＦＢのような¹⁸Ｆ標識活性化エステルは、Ｇｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］の方法及びその中の参考文献によって製造でき、或いはＭａｒｉｋ ｅｔ ａｌ［Ａｐｐｌ．Ｒａｄ．Ｉｓｏｔ．，６５（２），１９９−２０３（２００７）］の自動化方法によって製造できる。

¹⁸Ｆ標識カルボン酸は、上記に引用したＭａｒｉｋ ｅｔ ａｌの方法によって得ることができる。式¹⁸Ｆ（ＣＨ₂）₂Ｏ［ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ］_qＣＨ₂ＣＨＯ（式中、ｑは３である。）の¹⁸Ｆ標識脂肪族アルデヒドは、Ｇｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ［Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．，１９（４），９５１−９５７（２００８）］の方法によって得ることができる。¹⁸Ｆ−フルオロベンズアルデヒドは、Ｇｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，５２，３２７−３３０（２００９）］の方法によって得ることができる。前駆体Ｍｅ₃Ｎ⁺−Ｃ₆Ｈ₄−ＣＨＯ・ＣＦ₃ＳＯ₃ ^-は、Ｈａｋａ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］の方法によって得られる。

アミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔペプチドに対する¹⁸Ｆ標識アルデヒドのコンジュゲーションは、好ましくはＦｌａｖｅｌｌ ｅｔ ａｌ［Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１３０（２８），９１０６−９１１２（２００８）］によって記載されているようにアニリン触媒の存在下で実施される。保護アミノオキシｃ−Ｍｅｔペプチド（例えば、化合物１）を前駆体として使用することも可能であるが、遊離アミノオキシ誘導体（例えば、化合物２）が好ましい。これは、合成全体が自動化しやすくなるからである。保護前駆体を使用すると、手動の脱保護段階が通例必要となる。

第６の態様では、本発明は、第２の態様のイメージング剤組成物又は第３の態様の医薬組成物の製造方法であって、
（ｉ）第５の態様の製造方法に記載されるようにして¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを製造する段階、及び
（ｉｉ）¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドから非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドのクロマトグラフィー分離を行う段階
を含んでなる方法を提供する。

第６の態様におけるイメージング剤組成物及び医薬組成物の好ましい態様は、それぞれ第２及び第３の態様に記載した通りである。

段階（ｉｉ）のクロマトグラフィー分離は、ＨＰＬＣ又は１以上のＳＰＥカートリッジを用いる固相抽出（ＳＰＥ）によって実施できる。自動化合成装置を使用する場合にはＳＰＥが好ましく、他の状況下ではＨＰＬＣが好ましい。実施例５は、本発明の化合物３に関する好適なＨＰＬＣ方法を示している。

第６の態様の方法は、好ましくは第３の態様の医薬組成物を得るために使用される。本方法が第３の態様の医薬組成物を得るために使用される場合、本製造方法は好ましくは自動化合成装置を用いて実施される。

「自動化合成装置」という用語は、Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ［Ｃｌｉｎ．Ｐｏｓｉｔｒ．Ｉｍａｇ．，２（５），２３３−２５３（１９９９）］によって記載されているような単位操作の原理に基づく自動化モジュールを意味する。「単位操作」という用語は、複雑なプロセスが一連の簡単な操作又は反応に還元されることを意味し、これは一定範囲の材料に適用できる。かかる自動化合成装置は、特に放射性医薬組成物が所望される場合、本発明の方法にとって好ましい。これらは、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社、ＣＴＩ Ｉｎｃ、Ｉｏｎ Ｂｅａｍ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｓ．Ａ．（Ｃｈｅｍｉｎ ｄｕ Ｃｙｃｌｏｔｒｏｎ ３，Ｂ−１３４８ Ｌｏｕｖａｉｎ−Ｌａ−Ｎｅｕｖｅ，ベルギー）、Ｒａｙｔｅｓｔ社（ドイツ）及びＢｉｏｓｃａｎ社（米国）を含む一連の供給業者から商業的に入手できる［Ｓａｔｙａｍｕｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ，上記］。

市販の自動化合成装置はまた、放射性医薬品製造の結果として生じる液体放射性廃棄物用の適当な容器を提供する。通例、自動化合成装置は放射線遮蔽を備えていないが、それはかかる装置が適宜に構成された放射能作業セル内で使用するように設計されているからである。放射能作業セルは、オペレーターを潜在的な放射線量から保護するために適した放射線遮蔽を与えると共に、化学薬品蒸気及び／又は放射性蒸気を除去するための換気を可能にする。自動化合成装置は、好ましくはカセットを含んでいる。「カセット」という用語は、合成装置の可動部分の機械的運動がカセットの外側から（即ち、外部から）カセットの動作を制御するようにして、（下記に定義されるような）自動化合成装置上に着脱自在かつ交換可能に装着し得るように設計された装置部分を意味する。好適なカセットは直線状に並んだ弁の列を含み、その各々は倒立隔壁密封バイアルの針穿刺又は気密連結継手によって試薬又はバイアルを装着することができるポートに結合している。各弁は、自動化合成装置の対応する可動アームとかみ合うはめ込み型継手を有している。かくして、カセットを自動化合成装置に装着した場合、アームの外部回転が弁の開閉を制御する。自動化合成装置の追加の可動部分は、注射器のプランジャー先端をつかみ、それによって注射器外筒を上昇又は降下させるように設計されている。

カセットは融通性の高いものであって、通例は試薬を装着することができる複数の位置、及び試薬のシリンジバイアル又はクロマトグラフィー用カートリッジ（例えば、ＳＰＥ）を装着するために適した複数のポートを有している。カセットは常に反応器を含んでいる。かかる反応器は好ましくは１〜１０ｃｍ³、最も好ましくは２〜５ｃｍ³の容積を有しており、カセット上の様々なポートからの試薬又は溶媒の移送を可能にするため、カセットの３以上のポートが反応器に連結されるように構成されている。好ましくは、カセットは直線状に並んだ１５〜４０の弁、最も好ましくは２０〜３０の弁を有しており、２５の弁が特に好ましい。カセットの弁は好ましくはそれぞれ同一であり、最も好ましくは三方弁である。かかるカセットは放射性医薬品製造のために適するように設計されており、したがって医薬品グレードの材料であって理想的には放射線分解にも耐える材料で製造されている。

本発明の好ましい自動化合成装置は、放射性フッ素化放射性医薬品の所定バッチの製造を実施するために必要なすべての試薬、反応器及び機器を含む使い捨て又は１回使用のカセットを含むものである。かかるカセットは、単にカセットを交換するだけで、自動化合成装置が相互汚染のリスクを最小限に抑えながら各種の放射性医薬品を製造できる融通性を有することを意味する。カセットアプローチはまた、次の利点も有する。即ち、装置構成が単純化されてオペレーターエラーのリスクが低減すること、ＧＭＰ（医薬品製造品質管理基準）コンプライアンスが向上すること、マルチトレーサーの使用が可能になること、製造作業間の変更が迅速になること、カセット及び試薬の作業前自動診断検査が行えること、実施すべき合成に対して化学試薬の自動バーコードクロスチェックが行えること、試薬が追跡可能であること、１回使用であるために相互汚染、不正改造及び乱用による耐性のリスクがないことがある。本発明のこの態様には、第２の態様の医薬組成物を製造するための自動化合成装置の使用も包含される。

第７の態様では、本発明は、ｃ−Ｍｅｔの過剰発現部位又は局在部位の画像を得るために哺乳動物体をインビボでイメージングする方法であって、第１の態様のイメージング剤、第２の態様のイメージング剤組成物又は第３の態様の医薬組成物を予め投与した前記哺乳動物体をイメージングすることを含んでなる方法を提供する。

第７の態様におけるイメージング剤、イメージング剤組成物及び医薬組成物の好ましい態様は、それぞれ第１、第２及び第３の態様に記載した通りである。

好ましくは、哺乳動物はインタクトな哺乳動物生体であり、さらに好ましくはヒト被験体である。好ましくは、イメージング剤は最小限に侵襲的なやり方（即ち、職業的な医学専門技術の下で実施した場合に哺乳動物被験体に対して実質的な健康リスクのないやり方）で哺乳動物体に投与できる。かかる最小限に侵襲的な投与は、好ましくは、局所又は全身麻酔の必要なしに行われる、前記被験体の末梢静脈への静脈内投与である。

好ましくは、第３の態様の医薬組成物が使用される。第７の態様のイメージング方法では、ｃ−Ｍｅｔの過剰発現部位又は局在部位は好ましくは癌性の腫瘍又は転移である。かかる薬剤は前癌性及び癌性の腫瘍又は転移の両方においてｃ−Ｍｅｔの発現をイメージングするために有用であり、潜在的には治療法の選択を可能にすると考えられる。加えて、かかるイメージング剤による反復イメージングはまた、確立された治療計画及び新規な治療計画に対する個々の被験体の応答を迅速かつ効果的にモニターし、それによって効果のない治療を中止させる可能性も有している。さらに、ｃ−Ｍｅｔの過剰発現は攻撃的な腫瘍の潜在的な属性であるので、ｃ−Ｍｅｔイメージング剤は発生の初期段階で攻撃的な癌と攻撃性の低い癌とを識別する可能性も有すると予想される。

この態様には、哺乳動物体内のｃ−Ｍｅｔの過剰発現部位又は局在部位をインビボで診断する方法であって、第７の態様のイメージング方法を含んでなる方法も包含される。

下記に詳述する非限定的な実施例によって本発明を例示する。実施例１は、両方の末端に代謝阻害基（Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｍ^IG）を有する本発明のｃＭＢＰペプチド（ペプチド１）の合成を示している。実施例２は、本発明の保護前駆体（化合物１）の合成を示している。実施例３は、フッ素標識ｃ−Ｍｅｔペプチドの非放射性フッ素化（即ち、¹⁹Ｆ）対応物（化合物３Ａ）の合成を示している。実施例４は、本発明の¹⁸Ｆ放射性フッ素化ｃ−Ｍｅｔペプチド（化合物３Ｂ）の合成を示している。実施例５は、標識及び非標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチドを分離するためのＨＰＬＣ条件を示している。

実施例６は、動物腫瘍モデルにおける本発明の¹⁸Ｆ標識ペプチド（化合物３Ｂ）の体内分布を示している。結果は、ＨＴ−２９腫瘍で発現されるヒトｃ−Ｍｅｔ受容体への結合を示し、したがって腫瘍イメージングのための有用性を示している。実施例７は、実施例６の腫瘍取込みが特異的であることを証明している。これは、非放射性¹⁹Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ結合ペプチド（化合物３Ａ）の同時投与によって取込みを阻止し得るからである。ｃ−Ｍｅｔ受容体に対して親和性を有しないこのペプチドの¹⁹Ｆ標識スクランブルドバージョンの同時投与は、肝臓取込みを有意に低減させなかった。肝臓は高いｃ−Ｍｅｔ発現レベルを有し、したがって¹⁹Ｆ標識ｃＭＢＰとの競合後における取込みの低減はインビボでの特異的ｃ−Ｍｅｔ結合の証拠になると考えられる。

実施例９は、可溶化剤であるシクロデキストリンがインビボでの化合物３Ｂの体内分布に対して有意な効果を及ぼさないことを示している。実施例１０は、（化合物２から出発する）化合物３Ｂの完全自動化合成を、化合物１から出発する部分自動化合成と比較している。化合物２の使用が好ましい。なぜなら、それはより高い収率を与えると共に、化合物１の脱保護は（ｉ）放射性標識前に脱保護度を確定するのが困難であり、かつ（ｉｉ）ペプチドを脱保護するために使用するＴＦＡが自動化合成装置のプラスチックとの適合性をもたないという欠点を有するからである。

実施例１１は、さらにＳＰＥカートリッジ精製の自動使用を含む、化合物３Ｂの自動化合成を示している。結果は、このアプローチを用いると、化合物３Ｂが高い純度及び満足すべき放射化学収率で得られることを示している。実施例１２は、本質的の前駆体の凍結乾燥を示している。実施例１３は、本発明のイメージング剤に対するｐＨの効果を証明している。実施例１４は、本発明のイメージング剤を用いたヒトのイメージングを記載している。

略語
通常の一文字又は三文字アミノ酸略語が使用される。
％ｉｄ： パーセント注射量
Ａｃ： アセチル
Ａｃｍ： アセトアミドメチル
ＡＣＮ： アセトニトリル
Ｂｏｃ： ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル
ＤＣＭ： ジクロロメタン
ＤＩＰＥＡ： Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ： ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ： ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ： Ｎ−３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド
Ｆｍｏｃ： ９−フルオレニルメトキシカルボニル
ＨＢＴＵ： Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチ
ルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ： 高速液体クロマトグラフィー
ＨＳＰｙＵ： Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチレン
ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＮＨＳ： Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド
ＮＭＭ： Ｎ−メチルモルホリン
ＮＭＰ： １−メチル−２−ピロリジノン
ｐＡＢＡ： ｐ−アミノ安息香酸ナトリウム塩
Ｐｂｆ： ２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホ
ニル
ＰＢＳ： リン酸緩衝食塩水
ｐ．ｉ．： 注射後
ＰｙＢＯＰ： ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘ
キサフルオロホスフェート
ｔＢｕ： ｔｅｒｔ−ブチル
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＩＳ： トリイソプロピルシラン
Ｔｒｔ： トリチル

実施例１：ペプチド１の合成
段階（ａ）：保護前駆体線状ペプチドの合成
前駆体線状ペプチドは次の構造を有している。
Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−
Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−
Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−
ＮＨ₂。

０．１ｍｍｏｌのＲｉｎｋ Ａｍｉｄｅ Ｎｏｖａｇｅｌ樹脂から出発するＦｍｏｃ化学を用いて、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３３Ａペプチド合成装置上でペプチジル樹脂Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｔｈｒ（ψ^Me,Meｐｒｏ）−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（ｔＢｕ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ポリマーをアセンブルした。カップリング段階では、（ＨＢＴＵを用いて）予備活性化した過剰量の１ｍｍｏｌアミノ酸を適用した。Ｇｌｕ−Ｔｈｒプソイドプロリン（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ ０５−２０−１１２２）を配列中に組み込んだ。樹脂を窒素バブラー装置に移し、無水酢酸（１ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した溶液で６０分間処理した。濾過によって無水物溶液を除去し、樹脂をＤＣＭで洗浄してから窒素流下で乾燥した。

２．５％のＴＩＳ、２．５％の４−チオクレゾール及び２．５％の水を含むＴＦＡ（１０ｍＬ）中で、側鎖保護基の除去及び樹脂からのペプチド切断を２時間３０分にわたり同時に実施した。樹脂を濾過によって取り除き、ＴＦＡを真空中で除去し、残留物にジエチルエーテルを添加した。生じた沈殿をジエチルエーテルで洗浄し、空気乾燥することで、２６４ｍｇの粗ペプチドを得た。

粗ペプチドを分取ＨＰＬＣ（勾配：４０分で２０〜３０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２） ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３０分）によって精製することで、純粋なペプチド１の線状前駆体１００ｍｇを得た。純生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：１０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）によって分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物の特性決定を実施した（ＭＨ₂ ²⁺計算値：１４６４．６、ＭＨ₂ ²⁺実測値：１４６５．１）。

段階（ｂ）：単環式Ｃｙｓ４−１６ジスルフィドブリッジの形成
Ｃｙｓ４−１６；Ａｃ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ（Ａｃｍ）−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−ＮＨ₂。

段階（ａ）からの線状前駆体（１００ｍｇ）を５％ＤＭＳＯ／水（２００ｍＬ）に溶解し、アンモニアを用いて溶液をｐＨ６に調整した。反応混合物を５日間撹拌した。次いで、ＴＦＡを用いて溶液をｐＨ２に調整し、大部分の溶媒を真空中での蒸発によって除去した。生成物の精製のため、残留物（４０ｍＬ）を分取ＨＰＬＣカラム上に少しずつ注入した。

残留物を分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂを１０分間、次いで４０分で０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２） ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４４分）によって精製することで、純粋なペプチド１の単環式前駆体７２ｍｇを得た。

（異性体Ｐ１乃至Ｐ３の混合物としての）純生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：１０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：５．３７分（Ｐ１）、５．６１分（Ｐ２）、６．０５分（Ｐ３））によって分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物の特性決定を実施した（ＭＨ₂ ²⁺計算値：１４６３．６、ＭＨ₂ ²⁺実測値：１４６４．１（Ｐ１）、１４６４．４（Ｐ２）、１４６４．３（Ｐ３））。

段階（ｃ）：第２のＣｙｓ６−１４ジスルフィドブリッジの形成（ペプチド１）
段階（ｂ）からの単環式前駆体（７２ｍｇ）を窒素ブランケット下で７５％ＡｃＯＨ／水（７２ｍＬ）に溶解した。１Ｍ ＨＣｌ（７．２ｍＬ）及びＡｃＯＨ中の０．０５Ｍ Ｉ₂（４．８ｍＬ）をその順序で添加し、混合物を４５分間撹拌した。１Ｍアスコルビン酸（１ｍＬ）を添加して無色の混合物を得た。大部分の溶媒を真空中で蒸発させ、残留物（１８ｍＬ）を水／０．１％ＴＦＡ（４ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。

残留物を分取ＨＰＬＣ（勾配：０％Ｂを１０分間、次いで４０分で２０〜３０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：１０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２） ２５０×２１．２０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：４３〜５３分）によって精製することで、５２ｍｇの純粋なペプチド１を得た。純生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：１０分で１０〜４０％Ｂ（ただし、Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ）、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２） ５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．５４分）によって分析した。さらに、エレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物の特性決定を実施した（ＭＨ₂ ²⁺計算値：１３９１．５、ＭＨ₂ ²⁺実測値：１３９２．５）。

実施例２：化合物１の合成
（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社、１３８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１３８ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（８３ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解した。溶液を２５分間振盪し、次いでＤＭＦ（５ｍｌ）中のペプチド１（１．０ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応混合物を２分間撹拌した。次いで、ｓｙｍ−コリジン（２３９μＬ、１．８０ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３時間確認した。反応混合物を水（５ｍｌ）で希釈し、生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。

ＨＰＬＣ条件：Ｗａｔｅｒｓ Ｐｒｅｐ ４０００システム、溶媒Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及び溶媒Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配：６０分で２０〜４０％Ｂ、流量＝５０ｍｌ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ １０μｍ Ｃ１８（２） ２５０×５０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ。精製化合物１の収量：６９０ｍｇ（６５％）。実測ｍ／ｚ：１４７８．４、予測ＭＨ₂ ²⁺：１４７８．１。

実施例３：化合物３Ａの合成
段階（ａ）：Ｎ−（４−フルオロベンジリデン）アミノオキシ酢酸の製造
（Ｂｏｃ−アミノオキシ）酢酸（９６ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）及び４−フルオロベンズアルデヒド（５３μＬ、０．５０ｍｍｏｌ）をギ酸（０．５ｍｌ）に溶解し、反応混合物を１３５分間撹拌した。次いで、反応混合物を２０％ＡＣＮ／水／０．１％ＴＦＡ（７ｍｌ）で希釈し、生成物を半分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製した。

ＨＰＬＣ条件：Ｂｅｃｋｍａｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｇｏｌｄ、溶媒Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％ＴＦＡ及び溶媒Ｂ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡ、勾配：４０分で２５〜３５％Ｂ、流量＝１０ｍｌ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μｍ Ｃ１８（２） ２５０ｘ２１．２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ。収量：９２ｍｇ（９３％）。

段階（ｂ）：化合物３Ａの製造
Ｎ−（４−フルオロベンジリデン）アミノオキシ酢酸［段階（ａ）から、４３ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ］及びＰｙＢＯＰ（１１２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２ｍｌ）に溶解した。ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＤＩＰＥＡ（１５７μＬ、０．９０ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、混合物を１分間振盪した。次いで、この溶液をＤＭＦ（１０ｍｌ）中のペプチド１（５００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、反応混合物を３０分間振盪した。次いで、反応混合物を水（２０ｍｌ）で希釈し、生成物を分取ＨＰＬＣによって精製した。

ＨＰＬＣ条件（下記の点を除き、実施例２の通り）：溶媒Ａ＝Ｈ₂Ｏ／０．１％酢酸アンモニウム及び溶媒Ｂ＝ＡＣＮ。純物質の収量：２９１ｍｇ（５５％）。実測ｍ／ｚ：９８８．６、予測ＭＨ₃ ³⁺：９８７．７。

実施例４：化合物１からの化合物３Ｂの合成
段階（ａ）：化合物１の脱保護による化合物２の生成
５ｍｌ反応バイアル中の化合物１（７ｍｇ、２．３７μＭ）を水（１０μＬ）及びトリフルオロ酢酸（１９０μＬ）で処理し、次いで密封バイアルに入れて超音波浴中に１０分間浸漬した。次いで、水性ＴＦＡを真空中で除去し（約３０分）、残留物をクエン酸緩衝液（ｐＨ２．６、１．７ｍＬ）中で再構成し、位置１４の自動化合成装置カセット（ＦａｓｔＬａｂ（商標）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ）上に装填した。

段階（ｂ）： ¹⁸ Ｆ−ベンズアルデヒドの合成及び精製
銀ターゲットを有するＧＥＭＳ ＰＥＴトレーサーサイクロトロンを用いて、［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンを［¹⁸Ｏ］（ｐ，ｎ）［¹⁸Ｆ］核反応により生成した。１．５〜３．５ｍＬの総ターゲット体積を使用した。放射性フッ化物イオンを（炭酸塩でプレコンディショニングした）Ｗａｔｅｒｓ ＱＭＡカートリッジ上に捕捉し、水（８０μＬ）及びアセトニトリル（３２０μＬ）中のＫｒｙｐｔｏｆｉｘ_2.2.2（４ｍｇ、１０．７μＭ）及び炭酸カリウム（０．５６ｍｇ、４．１μＭ）の溶液でフッ化物イオンを溶出した。窒素を用いて溶液をＱＭＡカートリッジから反応器に排出した。窒素の定常流及び真空下において、［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンを１２０℃で９分間乾燥した。ジメチルスルホキシド（１．１ｍＬ）中のトリメチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフレート［Ｈａｋａ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｏｍｐ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．，２７，８２３−８３３（１９８９）］（３．３ｍｇ、１０．５μＭ）を乾燥した［¹⁸Ｆ］フッ化物イオンに添加し、混合物を１０５℃で７分間加熱して４−［¹⁸Ｆ］フルオロベンズアルデヒドを生成した。標識効率は６９±３％（崩壊補正値）であった。

次いで、粗標識混合物を水酸化アンモニウム溶液で希釈し、（ＦＡＳＴｌａｂシーケンスの一部として水でプレコンディショニングした）ＭＣＸ＋ ＳＰＥカートリッジ上に装填した。カートリッジを水で洗浄し、窒素ガスで乾燥した後、４−［¹⁸Ｆ］フルオロベンズアルデヒドをエタノール（１ｍＬ）で反応器に戻し溶出した。約１３％（崩壊補正値）の［¹⁸Ｆ］フルオロベンズアルデヒドがカートリッジ上に捕捉されたままに残った。

段階（ｃ）：アミノオキシ誘導体（化合物２）とのアルデヒド縮合
化合物２（５ｍｇ、１．８μｍｏｌ）をＦＡＳＴｌａｂ反応器に移した後、４−［¹⁸Ｆ］フルオロベンズアルデヒドをＭＣＸ＋カートリッジから溶出して戻した。次いで、混合物を７０℃で１７分間加熱した。分析ＨＰＬＣにより、化合物３Ｂ生成物のＲＣＰは６３±９％であることが確認された。

粗反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、分取ＨＰＬＣ上に装填した。１０ｍＭ酢酸アンモニウム／アセトニトリル系により、粗反応混合物の３種の可能な放射性成分、即ち［¹⁸Ｆ］フッ化物イオン（Ｔ_R＝０．５分）、［¹⁸Ｆ］化合物３Ｂ（Ｔ_R＝６分）及び４−［¹⁸Ｆ］フルオロベンズアルデヒド（Ｔ_R＝９分）が完全に分離された。ＨＰＬＣシステムからの放射能の回収は良好であって、９７％の回収効率を示した。約６分の保持時間を収集することで精製された生成物が得られた。

実施例５：非標識ペプチドからの ⁰ Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔ環状ペプチドのＨＰＬＣ分離
実施例３に従って化合物３Ａを製造した。
（ｉ）分析ＨＰＬＣ条件
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８（４．６×５０）ｍｍ、２．５μｍ。
水性移動相Ａ：１０ｍＭ ＮＨ₄Ａｃ（緩衝剤）、ｐＨ約６．８。
有機移動相Ｂ：アセトニトリル。
カラム温度：２５℃。
流量：１．２ｍｌ／分。
勾配：

（ｉｉ）分取ＨＰＬＣ条件
カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｓｈｉｅｌｄ ＲＰ１８（１０×１００）ｍｍ、５μｍ。
水性移動相Ａ：１０ｍＭ ＮＨ₄Ａｃ（緩衝剤）、ｐＨ約６．８。
有機移動相Ｂ：エタノール（９０％）／水性移動相Ａ（１０％）。
カラム温度：２５℃。
流量：４ｍｌ／分。
勾配：

（ｉｉｉ）分析及び分取ＨＰＬＣの結果

実施例６：腫瘍担持ヌードマウスにおける ¹⁸ Ｆ標識ｃ−Ｍｅｔペプチド（化合物３Ｂ）の体内分布
ＣＤ−１雄ヌードマウス（約２０ｇ）を個別換気ケージに収容し、飼料及び水に随意にアクセスさせた。１０％ウシ胎児血清及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＭｃＣｏｙ’ｓ ５ａ培地（Ｓｉｇｍａ ＃Ｍ８４０３）中でＨＴ−２９細胞（ＡＴＣＣ，Ｃａｔ．ｎｏ．ＨＴＢ−３８）を増殖させた。０．２５％トリプシンを用いて７０〜８０％コンフルエントで細胞を週２回１：３に分割し、５％ＣＯ₂中３７℃でインキュベートした。軽いガス麻酔（イソフルラン）下で、ファインボア注射針（２５Ｇ）を用いて１００μｌの量のＨＴ−２９細胞懸濁液をマウスの１つの部位（うなじ）に皮下注射した。公称投与量は注射１回当たり１０⁶個の細胞であった。次いで、腫瘍を２０日間増殖させ、或いは（試験に含めるため）体積が少なくとも２００ｍｍ³に達するまで増殖させた。

２０日の増殖期間後、化合物３Ｂ（０．１ｍｌ、１〜５ＭＢｑ／動物）を静脈内ボーラスとして尾静脈経由で動物に注射した。注射後の様々な時点で動物を安楽死させ、解剖し、下記の器官及び組織を取り出した。

腫瘍取込みは２分後に２．３％ｉｄ／ｇであり、３０分後にピーク（３．８％ｉｄ／ｇ）に達し、次いで時間と共に減少して注射から１２０分後に１．９％ｉｄ／ｇになった。腫瘍内の総保持率は８３％であった。経時的な血液クリアランスはかなり速かった（最初の２分後の血液は９．２％ｉｄ／ｇであり、注射から１２０分後には０．８％ｉｄ／ｇに減少した）。主要バックグラウンド組織（例えば、肺及び肝臓）は経時的に血液クリアランスプロファイルに従い、注射から１２０分後の取込みは１．１％ｉｄ／ｇ（肝臓）及び１．５６％ｉｄ／ｇ（肺）であった。

実施例７：腫瘍担持ヌードマウスにおける化合物３Ｂのレセプター阻止試験
１００倍及び１０００倍過剰量の非放射性類似体（化合物３Ａ、動物当たり約１．５μｇ及び１５μｇ過剰量）を同時注射し、注射から１２０分後に動物を解剖することで、実施例６の試験を繰り返した。この試験における動物はすべて、同様な体重（２５〜３０ｇの範囲）を有していた。データは、１０００倍過剰量の非標識ペプチドを使用すると、化合物３Ｂの腫瘍取込みが統計的に有意に減少する（ｐ＜０．０１）を示した（ＨＴ−２９腫瘍の取込みは１．９％ｉｄ／ｇから１．１％ｉｄ／ｇに低下し、これは４０％の減少であった）。

実施例８：化合物３Ｂの霊長類ＰＥＴイメージング
３頭の雌カニクイザルにおける化合物３Ｂの体内分布をＰＥＴによって測定した。各々の場合に２回のトレーサー注射を行った。即ち、（ａ）トレーサー（化合物３Ｂ、３ＭＢｑ／ｋｇ）のみの注射（ベースライン試験）、及び（ｂ）ベースライン注射から４時間後におけるトレーサー（９ＭＢｑ／ｋｇ）と０．１５ｍｇ／ｋｇの化合物３Ａの同時注射（阻止試験）。トレーサーは１〜３ｍＬのボーラス用量として注射し、続いて１ｍＬの食塩水を注射した。

放射能測定用の血液試料（０．２ｍｌ）を投与から２１０分後まで一定の間隔で採取した。動的試験では、骨、心臓、腎臓、肺、肝臓及び筋肉内に検査対象領域を描画した。全身試験では、骨、脳、結腸、心臓、腎臓、肺、肝臓、筋肉、膵臓、小腸、脾臓及び膀胱内に検査対象領域を描画した。標準取込み値（ＳＵＶ）として表された時間−放射能データを生成した。

凍結切片オートラジオグラフィーを用いることで、アカゲザルの肝臓ではインビトロで特異的結合（約４０％）が認められた。アカゲザルの筋肉は、いかなる特異的結合も有するとは認められなかった。インビボ試験では、カニクイザルは肝臓への迅速な取込みを示したが、これは０．１５ｍｇ／ｋｇの化合物３Ａの同時注射後に４０％超だけ低下した。インビボでの筋肉に対する特異的結合は認められなかった。

実施例９：化合物３Ｂの体内分布に対するシクロデキストリンの効果
化合物３Ｂの体内分布及び可溶化剤ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰＣＤ）と配合した化合物３Ｂの体内分布を比較した。有意差は見出されなかった。

実施例１０：化合物３Ｂの完全自動化合成
緩衝液又はアニリン溶液に溶解し、直接使用のためＦａｓｔＬａｂカセット上に装填した化合物２を用いて、実施例４と同様な合成を実施した。

下記の表には、分析ＨＰＬＣの放射化学純度によって計算した各々の主要放射性標識成分の量が要約されている。

実施例１１：ＳＰＥ精製を用いた化合物３Ｂの自動化合成
ＦａｓｔＬａｂ（商標）（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ）自動化合成装置を用いて、実施例４の合成を実施した。

ＱＭＡ（第四級メチルアンモニウム水処理）、ＭＣＸ＋（混合陽イオン交換）及びＣ２（低疎水性）ＳＰＥカートリッジは、いずれもＷａｔｅｒｓ社から入手した。

ＦＡＳＴｌａｂシーケンス中、カートリッジには（直列で）エタノールによるコンディショニングを施した。使用直前に、カートリッジを希（０．２％）リン酸でプライムした。粗反応混合物を１％リン酸で希釈し、ＳＰＥ上に装填した。ＳＰＥを水で洗浄した後、生成物を６ｍＬの水（８０％エタノール）で溶出し、分布ＨＰＬＣによって放射化学純度（ＲＣＰ）を分析した。

使用した¹⁸Ｆ−フッ化物イオンの出発量に基づく結果は、下記の通りであった。

実施例１２：前駆体の配合及び凍結乾燥
ペプチド前駆体である化合物２（２．５又は５ｍｇ）を配合緩衝液（リン酸水素二ナトリウム二水和物及びクエン酸一水和物、ｐＨ２．８）と混合し、均質な懸濁液が得られるまで撹拌した。凍結乾燥栓を有する、ＦＡＳＴｌａｂ（商標）自動化合成装置（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｔｄ）からの１３ｍｍバイアルに、それぞれ１ｍＬの懸濁液を充填した。次いで、バイアルを凍結乾燥ユニット内で凍結し、４日間の凍結乾燥サイクルに付した。

ペプチドを含むすべてのバイアルが、満足な凍結乾燥ケーキを与えた。凍結乾燥された前駆体は、乾燥分配された化合物２よりはるかに急速に溶解することが判明した。

実施例１３：溶解性に対するｐＨの効果
化合物３ＢをＦＡＳＴｌａｂ（商標）合成装置上で製造し、２ｍＬの配合緩衝液（ｐＡＢＡ、クエン酸緩衝液、ｐＨ７）を含むバイアル中に生成物溶出液（約６ｍＬ）を収集した。濁った溶液が認められた。溶液（８ｍＬ）はプレフィルター（疎水性の撥水縞を含む０．２μｍ Ｓｕｐｏｒ膜を有するＰａｌｌ ２５ｍｍフィルター、部品番号６１２４２１１）で容易に濾過され、透明な溶液を与えた。

濾過した溶液を４×２ｍＬ試料に分割し、４種の試料のｐＨを下記のようにしてリン酸塩（体積を変化させないために固体）で調整した。
バイアル１ ｐＨ７．５（元の溶液、調整せず）
バイアル２ ｐＨ６．１
バイアル３ ｐＨ８．６
バイアル４ ｐＨ９．１
すべての試料を周囲温度で暗所に貯蔵した。凝集／沈殿の可能性を評価するため、４種の試料を静的光散乱によって２８日間追跡した。下記の結果が認められた。
−ｐＨ６．１は１０日目に可視的な沈殿を示した。
−ｐＨ＞７．５では、２８日後にも凝集の徴候は認められなかった。

実施例１４：ヒト試験
頭頸部の扁平上皮細胞癌を有すると予め診断された６名のヒト患者において、化合物３Ｂによるイメージングを試験した。薬剤の耐容性はよかった（副作用はなかった）。６名の患者のうち、５名はトレーサーの中程度／高度の取込みを示し、１名の患者は（反対側と同様な）低い取込みを有していた。これは、かかる患者の８０％がｃ−Ｍｅｔを過剰発現するという文献報告と一致している。

Claims (16)

1. ｐＨ７．５以上に維持されたイメージング剤組成物であって、
   （ｉ）¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドと、
   （ｉｉ）非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド
   とを含んでいて、前記ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドが（ｉ）及び（ｉｉ）で同じアミノ酸配列を有していて、前記ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドが次の式Ｉの１８〜３０量体環状ペプチドであり、非標識ｃＭＢＰペプチドが¹⁸Ｆ標識ｃＭＢＰペプチドのモル量の５０倍以下のモル量で当該組成物中に存在する、イメージング剤組成物。
   Ｚ¹−［ｃＭＢＰ］−Ｚ² （Ｉ）
   （式中、
   ｃＭＢＰは次の式ＩＩを有し、
   −（Ａ）_x−Ｑ−（Ａ'）_y− （ＩＩ）
   （式中、
   Ｑは次のアミノ酸配列（配列番号１）であり、
   −Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−
   （式中、Ｘ¹はＡｓｎ、Ｈｉｓ又はＴｙｒであり、Ｘ²はＧｌｙ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はＡｓｎであり、Ｘ³はＴｈｒ又はＡｒｇであり、Ｘ⁴はＡｌａ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ又はＳｅｒであり、Ｘ⁵はＳｅｒ又はＴｈｒであり、Ｘ⁶はＡｓｐ又はＧｌｕであり、Ｃｙｓ^a-dの各々はシステイン残基であって、残基ａ及びｂ並びに残基ｃ及びｄは環化して２つの独立したジスルフィド結合を形成している。）
   Ａ及びＡ’は独立にＣｙｓ以外の任意のアミノ酸であって、Ａ及びＡ’の少なくとも一方は存在しかつＬｙｓであることを条件とし、
   ｘ及びｙは独立に０〜１３の値を有する整数であって、［ｘ＋ｙ］＝１〜１３となるように選択される。）
   Ｚ¹はｃＭＢＰのＮ末端に結合していて、Ｈ又はＭ^IGであり、
   Ｚ²はｃＭＢＰのＣ末端に結合していて、ＯＨ、ＯＢ^c（式中、Ｂ^cは生体適合性陽イオンである。）又はＭ^IGであり、
   各Ｍ^IGは独立に、ｃＭＢＰペプチドのインビボ代謝を阻害又は抑制する生体適合性基である代謝阻害基であり、
   ｃＭＢＰはＡ又はＡ’基のＬｙｓ残基において¹⁸Ｆで標識されている。）
2. ｃＭＢＰが次の式ＩＩＡを有する、請求項１記載のイメージング剤組成物。
   −（Ａ）_x−Ｑ−（Ａ'）_z−Ｌｙｓ−
   （ＩＩＡ）
   （式中、
   ｚは０〜１２の値を有する整数であって、［ｘ＋ｚ］＝０〜１２であり、
   ｃＭＢＰはただ１つのＬｙｓ残基を含む。）
3. Ｑが次の配列番号２又は配列番号３のアミノ酸配列を含む、請求項１又は請求項２記載のイメージング剤組成物。
   Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶（配列番号２）、
   Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｘ¹−Ｃｙｓ^c−Ｘ²−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｘ³−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｘ⁴−Ｘ⁵−Ｘ⁶−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ（配列番号３）。
4. Ｘ³がＡｒｇである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載のイメージング剤組成物。
5. −（Ａ）_x−又は−（Ａ'）_y−基が、
   −Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（配列番号４）、
   −Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−（配列番号５）及び
   −Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−（配列番号６）
   から選択されるリンカーペプチドを含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項に記載のイメージング剤組成物。
6. ｃＭＢＰが次のアミノ酸配列（配列番号７）を有する、請求項５記載のイメージング剤組成物。
   Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ^a−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ^c−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−Ｃｙｓ^d−Ｔｒｐ−Ｃｙｓ^b−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ。
7. Ｚ¹及びＺ²の両方が独立にＭ^IGである、請求項１乃至請求項６のいずれか１項に記載のイメージング剤組成物。
8. Ｚ¹がアセチルであり、Ｚ²が第一アミドである、請求項７記載のイメージング剤組成物。
9. さらに可溶化剤及び／又は１種以上の放射線防護剤を含む、請求項１乃至請求項８のいずれか１項に記載のイメージング剤組成物。
10. 請求項１乃至請求項９のいずれか１項に記載のイメージング剤組成物を、哺乳動物への投与に適した無菌形態で生体適合性キャリヤーと共に含んでなる医薬組成物。
11. 請求項１乃至請求項８のいずれか１項に記載の¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドの製造方法であって、
    （ｉ）前駆体であって、
    （ａ）請求項１乃至請求項８のいずれか１項に記載された式Ｉ（式中、Ｚ ¹ ＝Ｚ ² ＝Ｍ ^IG ）の非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド、又は
    （ｂ）アミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチド
    からなる前駆体を用意する段階、
    （ｉｉ）前記前駆体が式Ｉ（式中、Ｚ¹＝Ｚ²＝Ｍ^IG）の非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドからなる場合、¹⁸Ｆ標識活性化エステルと反応させるか、又は活性化剤の存在下で¹⁸Ｆ標識カルボン酸と反応させることで、前記環状ペプチドのｃＭＢＰのＬｙｓ残基の位置でアミド結合を介してコンジュゲートされた¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを得る段階、及び
    （ｉｉｉ）前記前駆体がアミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドからなる場合、
    （ａ）¹⁸Ｆ標識活性化エステルと反応させるか、又は活性化剤の存在下で¹⁸Ｆ標識カルボン酸と反応させることで、前記官能化ペプチドのアミノオキシ位置でアミド結合を介してコンジュゲートされた¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを得る段階、或いは
    （ｂ）¹⁸Ｆ標識アルデヒドと反応させることで、前記官能化ペプチドのアミノオキシ位置でオキシムエーテル結合を介してコンジュゲートされた¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを得る段階
    を含んでなる方法。
12. アミノオキシ官能化ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを使用する、請求項１１記載の方法。
13. 請求項１乃至請求項９のいずれか１項に記載のイメージング剤組成物又は請求項１０記載の医薬組成物の製造方法であって、
    （ｉ）請求項１１又は請求項１２記載の方法を用いて¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドを製造する段階、及び
    （ｉｉ）¹⁸Ｆ放射性標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドから非標識ｃ−Ｍｅｔ結合環状ペプチドのクロマトグラフィー分離を行う段階
    を含んでなる方法。
14. 請求項１０記載の医薬組成物が得られ、当該方法が自動化合成装置を用いて実施される、請求項１３記載の方法。
15. ｃ−Ｍｅｔの過剰発現部位又は局在部位の画像を得るために哺乳動物体をインビボでイメージングする方法に使用される請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載のイメージング剤組成物であって、前記方法が、前記イメージング剤組成物が予め投与された前記哺乳動物体をイメージングすることを含んでいる、イメージング剤組成物。
16. ｃ−Ｍｅｔの過剰発現部位又は局在部位が癌性の腫瘍又は転移である、請求項１５記載のイメージング剤組成物。