JP5959235B2 - 自然発症皮膚炎の新規原因因子及び皮膚疾患モデル動物 - Google Patents
自然発症皮膚炎の新規原因因子及び皮膚疾患モデル動物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5959235B2 JP5959235B2 JP2012047521A JP2012047521A JP5959235B2 JP 5959235 B2 JP5959235 B2 JP 5959235B2 JP 2012047521 A JP2012047521 A JP 2012047521A JP 2012047521 A JP2012047521 A JP 2012047521A JP 5959235 B2 JP5959235 B2 JP 5959235B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- tmem79
- skin
- dermatitis
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims description 53
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 title claims description 40
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 title description 84
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 title description 3
- 101150063393 Tmem79 gene Proteins 0.000 claims description 114
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 93
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 68
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 39
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 28
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 24
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 23
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 22
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims description 21
- 101710106849 Transmembrane protein 79 Proteins 0.000 claims description 17
- 102100028839 Transmembrane protein 79 Human genes 0.000 claims description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 15
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 14
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 14
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 9
- 101710088660 Filaggrin Proteins 0.000 claims description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000010171 animal model Methods 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 55
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 36
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 36
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 35
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 27
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 23
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 23
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 21
- 230000006870 function Effects 0.000 description 18
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 18
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 13
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- 101150016624 fgfr1 gene Proteins 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 6
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 6
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 6
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 3
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 3
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101100046493 Mus musculus Tmem79 gene Proteins 0.000 description 3
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 3
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 208000019028 Epidermal thickening Diseases 0.000 description 2
- 102100028314 Filaggrin Human genes 0.000 description 2
- 108700041153 Filaggrin Proteins Proteins 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 2
- YHIPILPTUVMWQT-UHFFFAOYSA-N Oplophorus luciferin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CC(C(N1C=C(N2)C=3C=CC(O)=CC=3)=O)=NC1=C2CC1=CC=CC=C1 YHIPILPTUVMWQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 2
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000003209 gene knockout Methods 0.000 description 2
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000006748 scratching Methods 0.000 description 2
- 230000002393 scratching effect Effects 0.000 description 2
- 230000036620 skin dryness Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011816 wild-type C57Bl6 mouse Methods 0.000 description 2
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 238000011749 CBA mouse Methods 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150096193 GLRB gene Proteins 0.000 description 1
- 102100033958 Glycine receptor subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 101710195869 Glycine receptor subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101001091379 Homo sapiens Kallikrein-5 Proteins 0.000 description 1
- 101100046492 Homo sapiens TMEM79 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100034868 Kallikrein-5 Human genes 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100012881 Mus musculus Fgfr1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000001307 Myosotis scorpioides Species 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 231100000360 alopecia Toxicity 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N ammonium thiocyanate Chemical compound [NH4+].[S-]C#N SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000005549 barrier dysfunction Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000000736 corneocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 231100000221 frame shift mutation induction Toxicity 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012268 genome sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000003700 hair damage Effects 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000005722 itchiness Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000008591 skin barrier function Effects 0.000 description 1
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 1
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000001148 spastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
項1、Tmem79(Transmembrane protein 79)遺伝子の機能が低下し、かつ、フィラグリン(filaggrin)遺伝子が正常な非ヒト動物である、皮膚疾患又は皮膚障害の非ヒトモデル動物。
被験物質を、項1〜4のいずれか1項に記載の非ヒトモデル動物に投与する工程、並びに
被験物質の投与後に、該非ヒトモデル動物の皮膚の状態を評価する工程。
Tmem79(Transmembrane protein 79)遺伝子のプロモーター及び該プロモーターにより発現可能に連結されたレポーター遺伝子を含む遺伝子構築物を導入した細胞と、被験物質とを接触させる工程、並びに、
該Tmem79遺伝子のプロモーターの活性を評価する工程。
本発明の皮膚疾患の非ヒトモデル動物の一つの態様は、Tmem79遺伝子の機能が低下した非ヒト動物である。
マウス(Mus musculus):NM_024246(塩基配列)、NP_077208(アミノ酸配列);
ヒト(Homo sapiens):NM_032323(塩基配列)、NP_115699(アミノ酸配列);
チンパンジー(Pan troglodytes):XM_001165258(塩基配列)、XP_001165258(アミノ酸配列);
イヌ(Canis lupus familiaris):XM_849873(塩基配列)、XP_854966(アミノ酸配列);
ウシ(Bos taurus ):NM_001014920(塩基配列)、NP_001014920(アミノ酸配列);
ラット(Rattus norvegicus):NM_001033896(塩基配列)、NP_001029068(アミノ酸配列);
ニワトリ(Gallus gallus):XM_424371(塩基配列)、XP_424371(アミノ酸配列)。
ヒト(Homo sapiens):NM_002016(塩基配列)、NP_002007(アミノ酸配列);
マウス(Mus musculus):XM_485270(塩基配列)、XP_485270(アミノ酸配列);
チンパンジー(Pan troglodytes):XM_001134714(塩基配列)、XP_001134714(アミノ酸配列);
ウシ(Bos taurus ):XM_002686068(塩基配列)、XP_002686114(アミノ酸配列)。
組織学的観察による場合、上皮の肥厚、顆粒層の肥厚、白血球浸潤等の表現型;並びに、行動観察による場合、掻爬行動(scratching behavior)等の表現型が観察される。このような表現型は、ヒトのアトピー性皮膚炎の患者の症状と、類似する表現型である。
本発明は、皮膚疾患の治療薬若しくは予防薬、又は、化粧品の有効成分のスクリーニング方法を提供する。
(1-1)被験物質を、上記「1.非ヒトモデル動物」欄に記載の非ヒトモデル動物に投与する工程、並びに
(1-2)被験物質の投与後に、該非ヒトモデル動物の皮膚の状態を評価する工程。
(2-1)Tmem79(Transmembrane protein 79)遺伝子のプロモーター領域及び該プロモーター領域により発現可能に連結されたレポーター遺伝子を含む遺伝子構築物を導入した細胞と、被験物質とを接触させる工程、並びに、
(2-2)該Tmem79遺伝子のプロモーター領域の活性を評価する工程。
後述の実施例で実証するように、本発明者は、Tmem79(Transmembrane protein 79)遺伝子と、皮膚疾患及び皮膚障害との関連を見出した。従って、本発明は、皮膚疾患又は皮膚障害と関連するTmem79遺伝子の使用(例えば、研究ツールとしての使用)をも提供する。
被験体由来のTmem79遺伝子の塩基配列が、と、Tmem79遺伝子の機能低下に起因する皮膚疾患又は皮膚障害を有する比較検体由来のTmem79遺伝子の塩基配列と同一の変異を有する場合、被検体は現在皮膚疾患の症状等を発症している若しくは将来皮膚疾患等を発症するおそれがあると判定することができる。
該非ヒトモデル動物を用いた皮膚疾患の治療薬若しくは予防薬、又は、化粧品の有効成分のスクリーニング方法を実施するための、Tmem79遺伝子の使用(具体例は、上記「2.スクリーニング方法」欄に記載の通り。);
皮膚疾患の治療薬若しくは予防薬、又は、化粧品の有効成分をスクリーニングするための遺伝子構築物(例えば、上記「2.スクリーニング方法」に記載の、Tmem79遺伝子のプロモーター領域及び該プロモーター領域により発現可能に連結されたレポーター遺伝子を含む遺伝子構築物)を製造するための、Tmem79遺伝子の使用;
該遺伝子構築物を含む細胞を製造するための、Tmem79遺伝子の使用;
該遺伝子構築物を含む細胞を用いた皮膚疾患の治療薬若しくは予防薬、又は、化粧品の有効成分のスクリーニング方法を実施するための、Tmem79遺伝子の使用(具体例は、上記「2.スクリーニング方法」欄に記載の通り。)などが挙げられるが、これに限定されるものではない。
[実施例1]flakey tail(ft)変異及びmatted(ma)変異の分離
マウスのflakey tail(ft)変異及びmatted(ma)変異は、ともに3番染色体上に存在する。後述(実施例2)の通り、ft maマウスでは、野生型では観察されない、皮膚炎様の表現型を示す。
実施例1で得たma/maマウス、ft/ftマウス、ft maマウス及び野生型C56BL/6の表現型を観察した。
従前の遺伝学的解析の結果、ma変異は、マウス3番染色体のspa(spastic)変異(原因遺伝子:Glrb(Glycine receptor subunit beta))とft変異(原因遺伝子:Filaggerin)との間に存在することが明らかにされていいた。遺伝子物理地図(physical map)上の相当する領域には、予測遺伝子も含めて208個の遺伝子が存在した。概要を図4に示す。
(1)mRNA発現解析
Tmem79(matted1)遺伝子について、発現している組織を明らかにするために、ノザンブロッティング法によるmRNAの発現解析を行った。
ウサギに、Tmem79(matted1)タンパク質のアミノ酸番号99〜115のN末端側領域及び285〜391の領域のC末端側領域の配列を有するペプチド抗原として、常法に従い、ウサギを用いて2種の抗matted1タンパク質ウサギ抗体(No.3(抗原:N末端側)及びNo.7(抗原:C末端側))を作成した。
Tmem79(matted1)タンパク質の局在をより詳細に観察するために、上皮シートを作製し、Tmem79(matted1)タンパク質の局在を、共焦点顕微鏡を用いて観察した。
ma変異ホモ接合体マウスにおける皮膚炎様の表現型が、Tmem79遺伝子における変異に起因するものであることを検証するために、レスキュー実験を行った。
マウスTmem79遺伝子自体のプロモーターを含む、マウス3番染色体88,132,028- 88,141,251 ntの領域(Tmem79遺伝子及び隣接遺伝子の一部を含む領域)を、Red / ET Recombination System(Gene Bridges GmbH社)を用いて、pUC118ベクターに導入し、Tmem79遺伝子コンストラクトを得た。
制限酵素Hin dIII処理により直鎖化したコンストラクトを、C57BL/6マウスの受精卵にマイクロインジェクション法により導入した。インジェクション後、受精卵(胚)を仮親の卵管へ移植し、発生及び出産をさせた。
Claims (6)
- Tmem79(Transmembrane protein 79)遺伝子の機能が低下し、かつ、フィラグリン(filaggrin)遺伝子が正常な非ヒト動物である、皮膚炎の非ヒトモデル動物。
- 皮膚炎が、アトピー性皮膚炎である、請求項1に記載の非ヒトモデル動物。
- 非ヒト動物がマウスである、請求項1又は2に記載の非ヒトモデル動物。
- 下記工程を含む、皮膚炎の治療薬若しくは予防薬、又は、化粧品の有効成分のスクリーニング方法:
被験物質を、請求項1〜3のいずれか1項に記載の非ヒトモデル動物に投与する工程、並びに
被験物質の投与後に、該非ヒトモデル動物の皮膚の状態を評価する工程。 - 下記工程を含む、皮膚炎の治療薬若しくは予防薬、又は、化粧品の有効成分のスクリーニング方法:
Tmem79(Transmembrane protein 79)遺伝子のプロモーター及び該プロモーターにより発現可能に連結されたレポーター遺伝子を含む遺伝子構築物を導入した細胞と、被験物質とを接触させる工程、並びに、
該Tmem79遺伝子のプロモーターの活性を評価する工程。 - Tmem79(Transmembrane protein 79)遺伝子のプロモーター及び該プロモーターにより発現可能に連結されたレポーター遺伝子を含む遺伝子構築物を導入した細胞。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012047521A JP5959235B2 (ja) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | 自然発症皮膚炎の新規原因因子及び皮膚疾患モデル動物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012047521A JP5959235B2 (ja) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | 自然発症皮膚炎の新規原因因子及び皮膚疾患モデル動物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013179920A JP2013179920A (ja) | 2013-09-12 |
JP5959235B2 true JP5959235B2 (ja) | 2016-08-02 |
Family
ID=49271028
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012047521A Expired - Fee Related JP5959235B2 (ja) | 2012-03-05 | 2012-03-05 | 自然発症皮膚炎の新規原因因子及び皮膚疾患モデル動物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5959235B2 (ja) |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120034613A1 (en) * | 2010-08-03 | 2012-02-09 | Nse Products, Inc. | Apparatus and Method for Testing Relationships Between Gene Expression and Physical Appearance of Skin |
-
2012
- 2012-03-05 JP JP2012047521A patent/JP5959235B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2013179920A (ja) | 2013-09-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Wang et al. | A mouse model for Glut-1 haploinsufficiency | |
Chalhoub et al. | Grey-lethal mutation induces severe malignant autosomal recessive osteopetrosis in mouse and human | |
Kovalenko et al. | Caspase-8 deficiency in epidermal keratinocytes triggers an inflammatory skin disease | |
CN106282122B (zh) | 一种非人哺乳动物恐惧症或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途 | |
JP2002507898A (ja) | アポリポ蛋白質eトランスジェニック動物および解析方法 | |
JPWO2003041496A1 (ja) | トランスジェニック動物 | |
JP2007516987A (ja) | Il−15による、発毛を刺激および活性化する方法 | |
CN106139165B (zh) | 一种非人哺乳动物肥胖症或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途 | |
Tamim-Yecheskel et al. | A tecpr2 knockout mouse exhibits age-dependent neuroaxonal dystrophy associated with autophagosome accumulation | |
Padmakumar et al. | Detection of differential fetal and adult expression of chloride intracellular channel 4 (CLIC4) protein by analysis of a green fluorescent protein knock-in mouse line | |
JP5686335B2 (ja) | 筋萎縮性側索硬化症の診断マーカー、及び、方法、並びに、筋萎縮性側索硬化症を発症するモデル動物、及び、モデル細胞 | |
US5894078A (en) | Transgenic mouse expressing C-100 app | |
Emmert et al. | Characterization of a novel rat model of X-linked hydrocephalus by CRISPR-mediated mutation in L1cam | |
US20060230466A1 (en) | Gene-targeted animal model of apolipoprotein E4 domain interaction and uses thereof | |
JP5959235B2 (ja) | 自然発症皮膚炎の新規原因因子及び皮膚疾患モデル動物 | |
CN106344933B (zh) | 一种非人哺乳动物焦虑症或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途 | |
US11653636B2 (en) | Method of making a rat model of retinal degeneration and rat model made thereby | |
Meyer-Miner et al. | Resolving primary pathomechanisms driving idiopathic-like spinal curvature using a new katnb1 scoliosis model | |
CN107753957A (zh) | 一种非人哺乳动物中风或其相关疾病动物模型的建立方法及其用途 | |
Bolt et al. | A distant downstream enhancer directs essential expression of Tbx18 in urogenital tissues | |
US11825819B2 (en) | Crnn loss of function rodent model | |
JP2007505617A (ja) | 受容体 | |
Niewiadomska-Cimicka et al. | SCA7 mice recapitulate CNS, PNS and retina pathologies and show a transcriptional signature of Purkinje cell dysfunction prevailing in SCA1 and SCA2 mice | |
KR101499299B1 (ko) | Shank2 유전자가 결실된 자폐증 모델 형질전환마우스 및 그 용도 | |
CN114304068A (zh) | 癫痫动物模型的制备及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150303 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160209 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160406 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160531 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160621 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5959235 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |