JP5922987B2 - 高濃度精子含有液採取用誘導具および高濃度精子含有液採取用具 - Google Patents
高濃度精子含有液採取用誘導具および高濃度精子含有液採取用具 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5922987B2 JP5922987B2 JP2012108650A JP2012108650A JP5922987B2 JP 5922987 B2 JP5922987 B2 JP 5922987B2 JP 2012108650 A JP2012108650 A JP 2012108650A JP 2012108650 A JP2012108650 A JP 2012108650A JP 5922987 B2 JP5922987 B2 JP 5922987B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sperm
- containing liquid
- concentration
- concentration sperm
- bottomed tube
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000012530 fluid Substances 0.000 title claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 261
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 22
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 claims description 14
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 claims description 14
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 claims description 5
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 42
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 28
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 28
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 23
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 21
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 19
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 16
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 14
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 13
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 229920001707 polybutylene terephthalate Polymers 0.000 description 4
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 4
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 4
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 description 4
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical class O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 3
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 3
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 3
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 3
- 229920001225 polyester resin Polymers 0.000 description 3
- 239000004645 polyester resin Substances 0.000 description 3
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 229920000468 styrene butadiene styrene block copolymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 2
- 239000000806 elastomer Substances 0.000 description 2
- 210000005002 female reproductive tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- 229920006124 polyolefin elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 208000029483 Acquired immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229920002292 Nylon 6 Polymers 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000287116 Paridae Species 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589886 Treponema Species 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009165 androgen replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011950 automated reagin test Methods 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000006543 gametophyte development Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- External Artificial Organs (AREA)
Description
本発明は、人工授精に用いるための哺乳動物の精子の採取、特に、雑菌等の混入の極めて少ない精子を採取可能な高濃度精子含有液採取用誘導具、高濃度精子含有液採取用具および除菌された人工授精用精子含有液調整方法に関する。
医学的生殖介助（assisted reproduction technology：ＡＲＴ）に用いるために、ヒトから採取された精子の洗浄、濃縮が行われている。
男性不妊に対して、ＡＲＴが有効である。ＡＲＴは広義には配偶子の形成、受精、着床、妊娠維持を医学的に補助して不妊治療を行うことである。実際に行われているＡＲＴとしては、子宮腔内人工授精（intrauterin insemination:ＩＵＩ）、体外受精、胚移植（in vitro fertlization embryo transfer : ＩＶＦ−ＥＴ）、顕微受精（micro-insemination）などの人工的な授精である。
膣に射精された精液は子宮頚管、子宮腔内、卵管と雌性生殖路を遡上する。そして、遡上過程において、精子数は減少し、卵管膨大部に到達するのは、１０匹程度と考えられている。このため、ＡＲＴとしては、できるだけ少ない精子数で受精を可能とするため、雌性生殖路における精子遡上過程をバイパスして精子を卵子のより近くに送り届けるための手法が行われる。手法の一つであるＩＵＩでは、子宮頚管をバイパスして、精子を注入する。また、ＩＶＦ−ＥＴでは、卵を体外に取り出してインビトロで受精させる。また、卵細胞質精子注入（intra-cytoplasma sperm injection：ＩＣＳＩ）では、卵子の細胞質に一匹の精子を穿刺することにより受精をもバイパスさせる。
男性不妊に対して、ＡＲＴが有効である。ＡＲＴは広義には配偶子の形成、受精、着床、妊娠維持を医学的に補助して不妊治療を行うことである。実際に行われているＡＲＴとしては、子宮腔内人工授精（intrauterin insemination:ＩＵＩ）、体外受精、胚移植（in vitro fertlization embryo transfer : ＩＶＦ−ＥＴ）、顕微受精（micro-insemination）などの人工的な授精である。
膣に射精された精液は子宮頚管、子宮腔内、卵管と雌性生殖路を遡上する。そして、遡上過程において、精子数は減少し、卵管膨大部に到達するのは、１０匹程度と考えられている。このため、ＡＲＴとしては、できるだけ少ない精子数で受精を可能とするため、雌性生殖路における精子遡上過程をバイパスして精子を卵子のより近くに送り届けるための手法が行われる。手法の一つであるＩＵＩでは、子宮頚管をバイパスして、精子を注入する。また、ＩＶＦ−ＥＴでは、卵を体外に取り出してインビトロで受精させる。また、卵細胞質精子注入（intra-cytoplasma sperm injection：ＩＣＳＩ）では、卵子の細胞質に一匹の精子を穿刺することにより受精をもバイパスさせる。
そして、ＡＲＴに用いられる精子は、授精法により調製条件が異なるものの、ＩＵＩでは、精子濃縮および細菌の除去が求められる。ＩＶＦ−ＥＴでは、必要とする精子濃度は減少するが、運動精子の選別、精漿、細菌の除去などが要求される（精子洗浄濃縮法）。精子の調製は、修飾コロイドシリカゲルまたはパーコール（Percoll）を用いた密度勾配遠心法を用いるのが一般的である。密度勾配遠心法により、運動精子は沈澱中に濃縮される。精子はその形成、成熟の過程で細胞質を失い、運動性を有する成熟精子は細胞質を有する細菌、未成熟精子等に比して密度が高い。密度勾配遠心分離法はこの原理に基づき、成熟運動精子を精漿または細菌から分離するものである。
しかし、従来の密度勾配遠心分離法では、遠心分離後に上清をピペット等で除去しているため、遠心管内壁に付着した精漿、細菌が沈澱中に濃縮された精子に流下して再汚染するという欠点を有している。
そこで、特開２０００−２８８０８２号公報（特許文献１）の精子洗浄濃縮用チューブが提案されている。この精子洗浄濃縮用チューブは、開放端１１と細経化された底部１２を有するガラス製チューブ１と、このチューブ１の開放端１１に装着されるゴム袋２を含んでないる。また。細経底部１２には折切を容易にするための脆弱部１３が設けられている。
しかし、従来の密度勾配遠心分離法では、遠心分離後に上清をピペット等で除去しているため、遠心管内壁に付着した精漿、細菌が沈澱中に濃縮された精子に流下して再汚染するという欠点を有している。
そこで、特開２０００−２８８０８２号公報（特許文献１）の精子洗浄濃縮用チューブが提案されている。この精子洗浄濃縮用チューブは、開放端１１と細経化された底部１２を有するガラス製チューブ１と、このチューブ１の開放端１１に装着されるゴム袋２を含んでないる。また。細経底部１２には折切を容易にするための脆弱部１３が設けられている。
特許文献１の精子洗浄濃縮用チューブは、細菌による汚染や密度勾配担体の残留の無い精子洗浄濃縮が可能であるという点において有効である。しかし、ガラス製チューブ１を用いているため、作業中、さらには、遠心分離中における破損の危険性がある。さらに、ガラス製チューブ１の細経底部１２の破断操作が必須であるため、作業性が悪く、また、破断操作時におけるガラス片が、採取した精子洗浄濃縮液に混入する危険性もある。
そこで、本発明の目的は、細菌の混入が極めて少なく、かつ、作業性も良好であり、採取される高濃度精子含有液へのガラス片等の異物が混入することもないも高濃度精子含有液を採取するために有効な高濃度精子含有液採取用誘導具、高濃度精子含有液採取用具および除菌された人工授精用精子含有液調整方法を提供するものである。
そこで、本発明の目的は、細菌の混入が極めて少なく、かつ、作業性も良好であり、採取される高濃度精子含有液へのガラス片等の異物が混入することもないも高濃度精子含有液を採取するために有効な高濃度精子含有液採取用誘導具、高濃度精子含有液採取用具および除菌された人工授精用精子含有液調整方法を提供するものである。
上記目的を達成するものは、以下のものである。
（１） 高濃度精子含有液採取用誘導具であって、前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端から後端まで貫通したルーメンを有する合成樹脂製チューブ体であり、前記チューブ体は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有する精子吸引用先端部と、吸引機能付きもしくは吸引手段が接続可能な高濃度精子含有液採取器具が接続可能な採取器具接続用後端部とを備え、さらに、前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端が閉塞し後端が開口した遠心分離用有底管内に収納可能であり、かつ前記遠心分離用有底管内に収納された状態にて、前記精子吸引用先端部が前記遠心分離用有底管の底部に位置し、かつ、前記遠心分離用有底管とともに遠心可能であり、さらに、遠心分離後、前記遠心分離用有底管の底部層に位置する高濃度精子含有液を前記採取器具接続用後端部側より吸引することにより、前記精子吸引用先端部から高濃度精子含有液を吸引し、前記高濃度精子含有液採取用誘導具内を通過させて、前記採取器具接続用後端部に接続される前記高濃度精子含有液採取器具に採取可能である高濃度精子含有液採取用誘導具。
（２） 前記採取器具接続用後端部は、採取器具接続用テーパー状拡径部となっている上記（１）に記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（３） 前記採取器具接続用後端部は、採取器具接続用ポートを有するコネクターを備えている上記（１）に記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（４） 前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、可撓性合成樹脂製チューブ体であり、かつ、前記遠心分離用有底管内に収納され、かつ、前記遠心分離用有底管の開口部にキャップが装着された状態にて、前記キャップと前記遠心分離用有底管の底部間により押圧保持されるものである上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（５） 前記精子吸引用先端部は、複数の短く斜め外方に延びる突出辺を有している上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（６） 前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、前記有底管内に収納された状態にて、後端が前記有底管より突出しないものである上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（１） 高濃度精子含有液採取用誘導具であって、前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端から後端まで貫通したルーメンを有する合成樹脂製チューブ体であり、前記チューブ体は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有する精子吸引用先端部と、吸引機能付きもしくは吸引手段が接続可能な高濃度精子含有液採取器具が接続可能な採取器具接続用後端部とを備え、さらに、前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端が閉塞し後端が開口した遠心分離用有底管内に収納可能であり、かつ前記遠心分離用有底管内に収納された状態にて、前記精子吸引用先端部が前記遠心分離用有底管の底部に位置し、かつ、前記遠心分離用有底管とともに遠心可能であり、さらに、遠心分離後、前記遠心分離用有底管の底部層に位置する高濃度精子含有液を前記採取器具接続用後端部側より吸引することにより、前記精子吸引用先端部から高濃度精子含有液を吸引し、前記高濃度精子含有液採取用誘導具内を通過させて、前記採取器具接続用後端部に接続される前記高濃度精子含有液採取器具に採取可能である高濃度精子含有液採取用誘導具。
（２） 前記採取器具接続用後端部は、採取器具接続用テーパー状拡径部となっている上記（１）に記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（３） 前記採取器具接続用後端部は、採取器具接続用ポートを有するコネクターを備えている上記（１）に記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（４） 前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、可撓性合成樹脂製チューブ体であり、かつ、前記遠心分離用有底管内に収納され、かつ、前記遠心分離用有底管の開口部にキャップが装着された状態にて、前記キャップと前記遠心分離用有底管の底部間により押圧保持されるものである上記（１）ないし（３）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（５） 前記精子吸引用先端部は、複数の短く斜め外方に延びる突出辺を有している上記（１）ないし（４）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
（６） 前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、前記有底管内に収納された状態にて、後端が前記有底管より突出しないものである上記（１）ないし（５）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
また、上記目的を達成するものは、以下のものである。
（７） 高濃度精子含有液採取用具であって、前記高濃度精子含有液採取用具は、上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具と、前記遠心分離用有底管と、前記遠心分離用有底管の開口部に装着可能なキャップとを備える高濃度精子含有液採取用具。
（７） 高濃度精子含有液採取用具であって、前記高濃度精子含有液採取用具は、上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具と、前記遠心分離用有底管と、前記遠心分離用有底管の開口部に装着可能なキャップとを備える高濃度精子含有液採取用具。
また、上記目的を達成するものは、以下のものである。
（８） 除菌された人工授精用精子含有液調整方法であって、
精液を希釈液により希釈する希釈精液調整ステップと、
有底管に上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具を投入する高濃度精子含有液採取用誘導具投入ステップと、
前記高濃度精子含有液採取用誘導具が投入された前記有底管に、精子の比重より小さく、かつ細菌の比重より大きい比重を有する密度勾配液を注入する密度勾配液注入ステップと、
前記密度勾配液注入ステップにより形成された密度勾配液層上に、前記希釈精液を注入する希釈精液注入ステップと、
前記希釈精液注入ステップ後の前記有底管を遠心し、前記高濃度精子含有液採取用誘導具の先端部が位置する有底管の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層を形成させる高濃度精子含有層形成ステップと、
高濃度精子含有液採取器具を前記高濃度精子含有液採取用誘導具の後端部に接続して吸引し、前記有底管の底部より高濃度精子含有液を採取する高濃度精子含有液採取ステップと、
高濃度精子含有液を採取した前記高濃度精子含有液採取器具を前記高濃度精子含有液採取用誘導具より離脱させた後、精子希釈液が投入された第２の有底管に、前記高濃度精子含有液採取器具内の高濃度精子含有液を注入する高濃度精子含有液注入ステップとを行う除菌された人工授精用精子含有液調整方法。
（９） 前記密度勾配液は、修飾コロイドシリカ、パーコール、ショ糖重合体、フィコール、ハイパック、ペルコールおよび塩化セシウムのうちいずれかを含むものである上記（８）に記載の人工授精用精子含有液調整方法。
（１０） 前記密度勾配液注入ステップは、高濃度密度勾配液を注入する下層密度勾配液層形成ステップと、前記下層密度勾配液層上に、上記高濃度密度勾配液よりも低濃度の密度勾配液を注入する上層密度勾配液層形成ステップとを行うものである上記（８）または（９）に記載の人工授精用精子含有液調整方法。
（１１） 前記低濃度の密度勾配液は、前記高濃度密度勾配液および前記希釈精液と識別可能な色に着色されている上記（１０）に記載の人工授精用精子含有液調整方法。
（８） 除菌された人工授精用精子含有液調整方法であって、
精液を希釈液により希釈する希釈精液調整ステップと、
有底管に上記（１）ないし（６）のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具を投入する高濃度精子含有液採取用誘導具投入ステップと、
前記高濃度精子含有液採取用誘導具が投入された前記有底管に、精子の比重より小さく、かつ細菌の比重より大きい比重を有する密度勾配液を注入する密度勾配液注入ステップと、
前記密度勾配液注入ステップにより形成された密度勾配液層上に、前記希釈精液を注入する希釈精液注入ステップと、
前記希釈精液注入ステップ後の前記有底管を遠心し、前記高濃度精子含有液採取用誘導具の先端部が位置する有底管の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層を形成させる高濃度精子含有層形成ステップと、
高濃度精子含有液採取器具を前記高濃度精子含有液採取用誘導具の後端部に接続して吸引し、前記有底管の底部より高濃度精子含有液を採取する高濃度精子含有液採取ステップと、
高濃度精子含有液を採取した前記高濃度精子含有液採取器具を前記高濃度精子含有液採取用誘導具より離脱させた後、精子希釈液が投入された第２の有底管に、前記高濃度精子含有液採取器具内の高濃度精子含有液を注入する高濃度精子含有液注入ステップとを行う除菌された人工授精用精子含有液調整方法。
（９） 前記密度勾配液は、修飾コロイドシリカ、パーコール、ショ糖重合体、フィコール、ハイパック、ペルコールおよび塩化セシウムのうちいずれかを含むものである上記（８）に記載の人工授精用精子含有液調整方法。
（１０） 前記密度勾配液注入ステップは、高濃度密度勾配液を注入する下層密度勾配液層形成ステップと、前記下層密度勾配液層上に、上記高濃度密度勾配液よりも低濃度の密度勾配液を注入する上層密度勾配液層形成ステップとを行うものである上記（８）または（９）に記載の人工授精用精子含有液調整方法。
（１１） 前記低濃度の密度勾配液は、前記高濃度密度勾配液および前記希釈精液と識別可能な色に着色されている上記（１０）に記載の人工授精用精子含有液調整方法。
本発明の高濃度精子含有液採取用誘導具は、高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端から後端まで貫通したルーメンを有する合成樹脂製チューブ体であり、チューブ体は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有する精子吸引用先端部と、吸引機能付きもしくは吸引手段が接続可能な高濃度精子含有液採取器具が接続可能な採取器具接続用後端部とを備え、さらに、高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端が閉塞し後端が開口した遠心分離用有底管内に収納可能であり、かつ遠心分離用有底管内に収納された状態にて、精子吸引用先端部が遠心分離用有底管の底部に位置し、かつ、遠心分離用有底管とともに遠心可能であり、さらに、遠心分離後、遠心分離用有底管の底部層に位置する高濃度精子含有液を採取器具接続用後端部側より吸引することにより、精子吸引用先端部から高濃度精子含有液を吸引し、高濃度精子含有液採取用誘導具内を通過させて、採取器具接続用後端部に接続される高濃度精子含有液採取器具に採取可能となっている。
このため、遠心分離により、遠心分離用有底管の底部に形成され、除菌された高濃度精子含有液層部分をその上層の液体に接触することなく、言い換えれば、上層が含有している細菌を混入させることなく、かつ、容易に、高濃度精子含有液採取器具に採取することができる。
また、本発明の高濃度精子含有液採取用具は、上記の高濃度精子含有液採取用誘導具と、遠心分離用有底管と、遠心分離用有底管の開口部に装着可能なキャップとを備えるものであるので、遠心分離により、遠心分離用有底管の底部に形成され、除菌された高濃度精子含有液層部分をその上層の液体に接触することなく、高濃度精子含有液採取用誘導具を介して、高濃度精子含有液採取器具に採取することができる。
このため、遠心分離により、遠心分離用有底管の底部に形成され、除菌された高濃度精子含有液層部分をその上層の液体に接触することなく、言い換えれば、上層が含有している細菌を混入させることなく、かつ、容易に、高濃度精子含有液採取器具に採取することができる。
また、本発明の高濃度精子含有液採取用具は、上記の高濃度精子含有液採取用誘導具と、遠心分離用有底管と、遠心分離用有底管の開口部に装着可能なキャップとを備えるものであるので、遠心分離により、遠心分離用有底管の底部に形成され、除菌された高濃度精子含有液層部分をその上層の液体に接触することなく、高濃度精子含有液採取用誘導具を介して、高濃度精子含有液採取器具に採取することができる。
本発明の除菌された人工授精用精子含有液調整方法は、精液を希釈液により希釈する希釈精液調整ステップと、有底管に上記の高濃度精子含有液採取用誘導具を投入する高濃度精子含有液採取用誘導具投入ステップと、高濃度精子含有液採取用誘導具が投入された有底管に、精子の比重より小さく、かつ細菌の比重より大きい比重を有する密度勾配液を注入する密度勾配液注入ステップと、密度勾配液注入ステップにより形成された密度勾配液層上に、希釈精液を注入する希釈精液注入ステップと、希釈精液注入ステップ後の有底管を遠心し、高濃度精子含有液採取用誘導具の先端部が位置する有底管の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層を形成させる高濃度精子含有層形成ステップと、高濃度精子含有液採取器具を高濃度精子含有液採取用誘導具の後端部に接続して吸引し、有底管の底部より高濃度精子含有液を採取する高濃度精子含有液採取ステップと、高濃度精子含有液を採取した高濃度精子含有液採取器具を高濃度精子含有液採取用誘導具より離脱させた後、精子希釈液が投入された第２の有底管に、高濃度精子含有液採取器具内の高濃度精子含有液を注入する高濃度精子含有液注入ステップとを行うものである。
このため、遠心分離により、遠心分離用有底管の底部に形成され、除菌された高濃度精子含有液層部分をその上層の液体に接触することなく、言い換えれば、上層が含有している細菌を混入させることなく、かつ、容易に、高濃度精子含有液採取用誘導具を介して高濃度精子含有液採取器具への採取、さらには、人工授精用精子含有液を容易に準備することができる。
このため、遠心分離により、遠心分離用有底管の底部に形成され、除菌された高濃度精子含有液層部分をその上層の液体に接触することなく、言い換えれば、上層が含有している細菌を混入させることなく、かつ、容易に、高濃度精子含有液採取用誘導具を介して高濃度精子含有液採取器具への採取、さらには、人工授精用精子含有液を容易に準備することができる。
本発明の高濃度精子含有液採取用誘導具を図面に示す実施例を用いて説明する。
本発明の高濃度精子含有液採取用誘導具１は、先端から後端まで貫通したルーメンを有する合成樹脂製チューブ体２であり、チューブ体２は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有する精子吸引用先端部３と、吸引機能付きもしくは吸引手段が接続可能な高濃度精子含有液採取器具９が接続可能な採取器具接続用後端部４とを備える。そして、高濃度精子含有液採取用誘導具１は、先端が閉塞し後端が開口した遠心分離用有底管７内に収納可能であり、かつ遠心分離用有底管７内に収納された状態にて、精子吸引用先端部３が遠心分離用有底管７の底部に位置し、かつ、遠心分離用有底管７とともに遠心可能である。さらに、遠心分離後、遠心分離用有底管７の底部層に位置する高濃度精子含有液１５を採取器具接続用後端部４側より吸引することにより、精子吸引用先端部３から高濃度精子含有液１５を吸引し、高濃度精子含有液採取用誘導具１内を通過させて、採取器具接続用後端部４に接続される高濃度精子含有液採取器具９に採取可能となっている。
また、本発明の高濃度精子含有液採取用具は、上記の高濃度精子含有液採取用誘導具１と、遠心分離用有底管７と、遠心分離用有底管７の開口部に装着可能なキャップ８とを備える。
本発明の高濃度精子含有液採取用誘導具１は、先端から後端まで貫通したルーメンを有する合成樹脂製チューブ体２であり、チューブ体２は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有する精子吸引用先端部３と、吸引機能付きもしくは吸引手段が接続可能な高濃度精子含有液採取器具９が接続可能な採取器具接続用後端部４とを備える。そして、高濃度精子含有液採取用誘導具１は、先端が閉塞し後端が開口した遠心分離用有底管７内に収納可能であり、かつ遠心分離用有底管７内に収納された状態にて、精子吸引用先端部３が遠心分離用有底管７の底部に位置し、かつ、遠心分離用有底管７とともに遠心可能である。さらに、遠心分離後、遠心分離用有底管７の底部層に位置する高濃度精子含有液１５を採取器具接続用後端部４側より吸引することにより、精子吸引用先端部３から高濃度精子含有液１５を吸引し、高濃度精子含有液採取用誘導具１内を通過させて、採取器具接続用後端部４に接続される高濃度精子含有液採取器具９に採取可能となっている。
また、本発明の高濃度精子含有液採取用具は、上記の高濃度精子含有液採取用誘導具１と、遠心分離用有底管７と、遠心分離用有底管７の開口部に装着可能なキャップ８とを備える。
高濃度精子含有液採取用誘導具１は、図１および図２に示すように、先端から後端まで貫通したルーメン５を有する合成樹脂製チューブ体２である。高濃度精子含有液採取用誘導具の形成材料としては、可撓性合成樹脂が好ましいが、若干の撓みが可能な半硬質合成樹脂であってもよい。具体的には、ポリオレフィン（ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−プロピレンコポリマー）、ポリエステル（ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート）、スチレン系樹脂（ポリスチレン、ＭＳ樹脂（メタクリレート−スチレン共重合体）、ＭＢＳ樹脂（メタクリレート−ブチレン−スチレン共重合体）、ポリ塩化ビニル（硬質塩化ビニル）、ポリアミド（６ナイロン，６６ナイロン）などが好適に使用できる。
そして、高濃度精子含有液採取用誘導具１は、先端部（下端部）に、形成された精子吸引用先端部３を有している。図１ないし図４に示す実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１では、精子吸引用先端部３は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有するものとなっている。具体的には、精子吸引用先端部３は、図３および図４に示すように、合成樹脂製チューブ体２の先端を十字状に切開し、切開部を押し広げることにより形成されている。このため、先端部３には、複数（具体的には、４つ）の短く斜め外方に延びる突出辺３１，３２，３３，３４を有し、各突出辺間には、略三角形状かつ先端まで延びる複数（具体的には、４つ）のスリット３５を有するものとなっている。また、この実施例のものでは、突出辺３１，３２，３３，３４は、全体がほぼ同じ肉厚を有するものとなっており、先端に向かって肉薄となっていない。このため、先端部３は、スリット３５を有するものの十分な保形性を維持し、遠心分離後においても、スリット３５の閉塞がなく、高濃度精子含有液の確実な吸引を可能なものとしている。
そして、高濃度精子含有液採取用誘導具１は、先端部（下端部）に、形成された精子吸引用先端部３を有している。図１ないし図４に示す実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１では、精子吸引用先端部３は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有するものとなっている。具体的には、精子吸引用先端部３は、図３および図４に示すように、合成樹脂製チューブ体２の先端を十字状に切開し、切開部を押し広げることにより形成されている。このため、先端部３には、複数（具体的には、４つ）の短く斜め外方に延びる突出辺３１，３２，３３，３４を有し、各突出辺間には、略三角形状かつ先端まで延びる複数（具体的には、４つ）のスリット３５を有するものとなっている。また、この実施例のものでは、突出辺３１，３２，３３，３４は、全体がほぼ同じ肉厚を有するものとなっており、先端に向かって肉薄となっていない。このため、先端部３は、スリット３５を有するものの十分な保形性を維持し、遠心分離後においても、スリット３５の閉塞がなく、高濃度精子含有液の確実な吸引を可能なものとしている。
高濃度精子含有液採取用誘導具１は、後端部（上端部）に、形成された吸引機能付きもしくは吸引手段が接続可能な高濃度精子含有液採取器具９が接続可能な採取器具接続用後端部４を備えている。図１および図２に示す実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１では、採取器具接続用後端部４は、後端（上端）に向かって、内径および外径が拡径する採取器具接続用テーパー状拡径部となっている。そして、この採取器具接続用後端部４には、図１０および図１１に示すように、高濃度精子含有液採取器具９の先端部が、気密に接続可能なものとなっている。また、高濃度精子含有液採取器具９は、後端部に吸引手段３０の先端部が気密に接続可能なものとなっている。
また、高濃度精子含有液採取用誘導具１では、上記の精子吸引用先端部３および採取器具接続用後端部４を除く合成樹脂製チューブ体２部分は、ほぼ同じ外径および内径にて延びるチューブ部となっている。
そして、高濃度精子含有液採取用誘導具１の長さは、使用する有底管７の内部長より若干短い長さから若干長い長さの範囲内であることが好ましい。特に、この実施例のものでは、図６ないし図８に示すように、使用する有底管７の内部長より若干短いものとなっており、図６ないし図８に示すように、有底管７内に収納した状態にて、後端が有底管７より突出しないものとなっている。このため、操作中における高濃度精子含有液採取用誘導具１の予定外の接触を防止し、高濃度精子含有液採取用誘導具１の動きに起因する内部に注入した液体の不用意な攪拌が生じることがない。さらに、この実施例のものでは、有底管７の開口部に装着されるキャップ８を備えている。図６および図７に示すように、遠心分離用有底管７の開口部にキャップ８が装着された状態にて、キャップ８と遠心分離用有底管の底部間により、高濃度精子含有液採取用誘導具１は、押圧保持されるものとなっている。このため、遠心分離時における高濃度精子含有液採取用誘導具１の動きを規制する。
また、高濃度精子含有液採取用誘導具１では、上記の精子吸引用先端部３および採取器具接続用後端部４を除く合成樹脂製チューブ体２部分は、ほぼ同じ外径および内径にて延びるチューブ部となっている。
そして、高濃度精子含有液採取用誘導具１の長さは、使用する有底管７の内部長より若干短い長さから若干長い長さの範囲内であることが好ましい。特に、この実施例のものでは、図６ないし図８に示すように、使用する有底管７の内部長より若干短いものとなっており、図６ないし図８に示すように、有底管７内に収納した状態にて、後端が有底管７より突出しないものとなっている。このため、操作中における高濃度精子含有液採取用誘導具１の予定外の接触を防止し、高濃度精子含有液採取用誘導具１の動きに起因する内部に注入した液体の不用意な攪拌が生じることがない。さらに、この実施例のものでは、有底管７の開口部に装着されるキャップ８を備えている。図６および図７に示すように、遠心分離用有底管７の開口部にキャップ８が装着された状態にて、キャップ８と遠心分離用有底管の底部間により、高濃度精子含有液採取用誘導具１は、押圧保持されるものとなっている。このため、遠心分離時における高濃度精子含有液採取用誘導具１の動きを規制する。
遠心分離用有底管７は、図５ないし図８に示すように、閉塞先端７２を有し、後端が開口した筒状体であり、先端部７３は、先端７２に向かって縮径している。特に、図示するように、テーパー状に縮径することが好ましい。有底管７の材質としては、硬質樹脂もしくは半硬質樹脂が好適であり、特に、内部を視認可能な透明性を備えることが望ましい。具体的には、有底管７の材質としては、ポリプロピレン、ポリエチレンなどのポリオレフィン、ポリスチレン，ＳＢＳなどのスチレン系樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル樹脂、アクリロニトリル系樹脂、ポリ塩化ビニル、ＰＭＭＡ（ポリメチルメタアクリレート）等を用いることが好ましい。
キャップ８は、図５ないし図７に示すような、有底管７の後端部に装着可能な短い筒状部８１と、筒状部８１の後端を閉塞する閉塞部８２とを有している。この実施例のものでは、閉塞部８２は、内方に向かって突出するものとなっており、このため、図７に示すように、遠心分離用有底管７の開口部にキャップ８を装着することにより、高濃度精子含有液採取用誘導具１をキャップ８の閉塞部８２の突出内面と遠心分離用有底管７の閉塞先端の内面間により挟持可能なものとなっている。
キャップ８は、図５ないし図７に示すような、有底管７の後端部に装着可能な短い筒状部８１と、筒状部８１の後端を閉塞する閉塞部８２とを有している。この実施例のものでは、閉塞部８２は、内方に向かって突出するものとなっており、このため、図７に示すように、遠心分離用有底管７の開口部にキャップ８を装着することにより、高濃度精子含有液採取用誘導具１をキャップ８の閉塞部８２の突出内面と遠心分離用有底管７の閉塞先端の内面間により挟持可能なものとなっている。
また、有底管７およびキャップ８は、離脱可能な係合部を備えていることが好ましい。図５ないし図７に示すものでは、有底管７の開口端の外面には、キャップ８との係合部を備えている。特に、図５ないし図７に示すものでは、有底管７の後端部の外面には、第１の螺合部７４が形成されており、キャップ８の筒状部８１の内面には、第１の螺合部７４と螺合可能な第２の螺合部８３が形成されている。キャップ８の材質としては、半硬質樹脂もしくは軟質樹脂が好適である。具体的には、ポリプロピレン、ポリエチレンなどのポリオレフィンもしくはポリオレフィンエラストマー、ポリスチレン，ＳＢＳなどのスチレン系樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル樹脂もしくはポリエステルエラストマー等を用いることができる。
次に、本発明の他の実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１０について説明する。
図１２は、本発明の他の実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具の正面図である。図１３は、図１２に示した高濃度精子含有液採取用誘導具の縦断面図である。図１４は、図１１に示した高濃度精子含有液採取用誘導具の基端部拡大図である。図１５は、図１２に示した実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具が、図５に示す有底管に収納された状態の正面図である。
この実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１０と上述した高濃度精子含有液採取用誘導具１との相違は、後端部の形態のみであり、その他については、上述したものと同じである。
この実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１０では、図１２および図１３に示すように、採取器具接続用後端部は、採取器具接続用ポートを有するコネクター２０を備えるものとなっている。
コネクター２０は、図１４に示すように、テーパー状内腔を有する採取器具接続用ポート２１と、合成樹脂製チューブ体２の後端部４ａ内に挿入可能な細径の接続部２２と、把持用フランジ部２３と、接続部２２内に形成され、ポート２１内とチューブ体２内のルーメン５とを連通する通路２４を備えている。
このコネクター２０のポート２１には、ルアーチップを有するシリンジ等の吸引機能を有する採取器具が接続可能となっている。また、上述した高濃度精子含有液採取器具９を接続することも可能である。そして、コネクター２０は、接続部２２が、チューブ体２の後端部４ａ内に押し込まれ、接着されることにより、チューブ体２に固定されている。また、接続部２２は、先端に向かってテーパー状に縮径するとともに、中央部に抜け止め用の環状リブ２５を備えている。
図１２は、本発明の他の実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具の正面図である。図１３は、図１２に示した高濃度精子含有液採取用誘導具の縦断面図である。図１４は、図１１に示した高濃度精子含有液採取用誘導具の基端部拡大図である。図１５は、図１２に示した実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具が、図５に示す有底管に収納された状態の正面図である。
この実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１０と上述した高濃度精子含有液採取用誘導具１との相違は、後端部の形態のみであり、その他については、上述したものと同じである。
この実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１０では、図１２および図１３に示すように、採取器具接続用後端部は、採取器具接続用ポートを有するコネクター２０を備えるものとなっている。
コネクター２０は、図１４に示すように、テーパー状内腔を有する採取器具接続用ポート２１と、合成樹脂製チューブ体２の後端部４ａ内に挿入可能な細径の接続部２２と、把持用フランジ部２３と、接続部２２内に形成され、ポート２１内とチューブ体２内のルーメン５とを連通する通路２４を備えている。
このコネクター２０のポート２１には、ルアーチップを有するシリンジ等の吸引機能を有する採取器具が接続可能となっている。また、上述した高濃度精子含有液採取器具９を接続することも可能である。そして、コネクター２０は、接続部２２が、チューブ体２の後端部４ａ内に押し込まれ、接着されることにより、チューブ体２に固定されている。また、接続部２２は、先端に向かってテーパー状に縮径するとともに、中央部に抜け止め用の環状リブ２５を備えている。
コネクター２０の材質としては、半硬質樹脂もしくは軟質樹脂が好適である。具体的には、ポリプロピレン、ポリエチレンなどのポリオレフィンもしくはポリオレフィンエラストマー、ポリスチレン，ＳＢＳなどのスチレン系樹脂、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレートなどのポリエステル樹脂もしくはポリエステルエラストマー等を用いることができる。
そして、この実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１０においても、その全長（先端部３の先端からコネクター２０の後端までの長さ）は、使用する有底管７の内部長より若干短い長さから若干長い長さの範囲内であることが好ましい。特に、この実施例のものでは、図１５および図１６に示すように、使用する有底管７の内部長より若干短いものとなっており、図１５および図１６に示すように、有底管７内に収納した状態にて、コネクター２０の後端が有底管７より突出しないものとなっている。このため、操作中における高濃度精子含有液採取用誘導具１０の予定外の接触を防止し、高濃度精子含有液採取用誘導具１０の動きに起因する内部に注入した液体の不用意な攪拌が生じることがない。さらに、この実施例のものでは、有底管７の開口部に装着されるキャップ８を備えている。図１５および図１６に示すように、遠心分離用有底管７の開口部にキャップ８が装着された状態にて、キャップ８と遠心分離用有底管の底部間により、高濃度精子含有液採取用誘導具１０は、押圧保持されるものとなっている。このため、遠心分離時における高濃度精子含有液採取用誘導具１０の動きを規制する。
そして、この実施例の高濃度精子含有液採取用誘導具１０においても、その全長（先端部３の先端からコネクター２０の後端までの長さ）は、使用する有底管７の内部長より若干短い長さから若干長い長さの範囲内であることが好ましい。特に、この実施例のものでは、図１５および図１６に示すように、使用する有底管７の内部長より若干短いものとなっており、図１５および図１６に示すように、有底管７内に収納した状態にて、コネクター２０の後端が有底管７より突出しないものとなっている。このため、操作中における高濃度精子含有液採取用誘導具１０の予定外の接触を防止し、高濃度精子含有液採取用誘導具１０の動きに起因する内部に注入した液体の不用意な攪拌が生じることがない。さらに、この実施例のものでは、有底管７の開口部に装着されるキャップ８を備えている。図１５および図１６に示すように、遠心分離用有底管７の開口部にキャップ８が装着された状態にて、キャップ８と遠心分離用有底管の底部間により、高濃度精子含有液採取用誘導具１０は、押圧保持されるものとなっている。このため、遠心分離時における高濃度精子含有液採取用誘導具１０の動きを規制する。
次に、本発明の除菌された人工授精用精子含有液調整方法について、図８ないし図１１を用いて説明する。
本発明の除菌された人工授精用精子含有液調整方法は、精液を希釈液により希釈する希釈精液調整ステップと、有底管７に上記の高濃度精子含有液採取用誘導具１を投入する高濃度精子含有液採取用誘導具投入ステップと、高濃度精子含有液採取用誘導具１が投入された有底管７に、精子の比重より小さく、かつ細菌の比重より大きい比重を有する密度勾配液を注入する密度勾配液注入ステップと、密度勾配液注入ステップにより形成された密度勾配液層１１，１２上に、希釈精液を注入する希釈精液注入ステップと、希釈精液注入ステップ後の有底管７を遠心し、高濃度精子含有液採取用誘導具１の先端部３が位置する有底管７の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層１５を形成させる高濃度精子含有層形成ステップと、高濃度精子含有液採取器具９を高濃度精子含有液採取用誘導具１の後端部に接続して吸引し、有底管７の底部より高濃度精子含有液１５を採取する高濃度精子含有液採取ステップと、高濃度精子含有液１５を採取した高濃度精子含有液採取器具９を高濃度精子含有液採取用誘導具１より離脱させた後、精子希釈液が投入された第２の有底管に、高濃度精子含有液採取器具内の高濃度精子含有液１５を注入する高濃度精子含有液注入ステップとを行うものである。
本発明の除菌された人工授精用精子含有液調整方法は、精液を希釈液により希釈する希釈精液調整ステップと、有底管７に上記の高濃度精子含有液採取用誘導具１を投入する高濃度精子含有液採取用誘導具投入ステップと、高濃度精子含有液採取用誘導具１が投入された有底管７に、精子の比重より小さく、かつ細菌の比重より大きい比重を有する密度勾配液を注入する密度勾配液注入ステップと、密度勾配液注入ステップにより形成された密度勾配液層１１，１２上に、希釈精液を注入する希釈精液注入ステップと、希釈精液注入ステップ後の有底管７を遠心し、高濃度精子含有液採取用誘導具１の先端部３が位置する有底管７の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層１５を形成させる高濃度精子含有層形成ステップと、高濃度精子含有液採取器具９を高濃度精子含有液採取用誘導具１の後端部に接続して吸引し、有底管７の底部より高濃度精子含有液１５を採取する高濃度精子含有液採取ステップと、高濃度精子含有液１５を採取した高濃度精子含有液採取器具９を高濃度精子含有液採取用誘導具１より離脱させた後、精子希釈液が投入された第２の有底管に、高濃度精子含有液採取器具内の高濃度精子含有液１５を注入する高濃度精子含有液注入ステップとを行うものである。
発明の人工授精用精子含有液調整方法では、精液を希釈液により希釈する希釈精液調整ステップが行われる。希釈精液調整ステップでは、例えば、希釈液に採取した精液を混合することにより行われる。希釈液としては、テトロヒドロフラン（ＨＴＦ）液体培地、１０％ＳＳＳ（Ｓｅｒｕｍ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）含有ＨＴＦ液体培地、ハンクス液（緩衝塩類溶液）、生食などが使用される。
また、有底管７に上述した高濃度精子含有液採取用誘導具１を投入する高濃度精子含有液採取用誘導具投入ステップが行われる。有底管７としては上述したものが使用される。高濃度精子含有液採取用誘導としては、上述した高濃度精子含有液採取用誘導具１，１０のいずれを用いてもよい。
続いて、高濃度精子含有液採取用誘導具１が投入された有底管７に、精子の比重より小さく、かつ細菌の比重より大きい比重を有する密度勾配液を注入する密度勾配液注入ステップを行う。
密度勾配液としては、修飾コロイドシリカ含有液、パーコール液、ショ糖重合体含有液、フィコール液、ハイパック液、ペルコール液および塩化セシウム含有液などが使用される。
また、有底管７に上述した高濃度精子含有液採取用誘導具１を投入する高濃度精子含有液採取用誘導具投入ステップが行われる。有底管７としては上述したものが使用される。高濃度精子含有液採取用誘導としては、上述した高濃度精子含有液採取用誘導具１，１０のいずれを用いてもよい。
続いて、高濃度精子含有液採取用誘導具１が投入された有底管７に、精子の比重より小さく、かつ細菌の比重より大きい比重を有する密度勾配液を注入する密度勾配液注入ステップを行う。
密度勾配液としては、修飾コロイドシリカ含有液、パーコール液、ショ糖重合体含有液、フィコール液、ハイパック液、ペルコール液および塩化セシウム含有液などが使用される。
特に、図８に示す実施例では、不連続密度勾配法を用いている。このため、密度勾配液注入ステップでは、高濃度密度勾配液（例えば、濃度９０％パーコール液）を注入する下層密度勾配液層１１の形成ステップと、下層密度勾配液層１１上に、高濃度密度勾配液よりも低濃度の密度勾配液（例えば、濃度７０％パーコール液）を注入する上層密度勾配液層１２の形成ステップとを行う。なお、上層密度勾配液層１２の識別のため、低濃度の密度勾配液は、高濃度密度勾配液および希釈精液と識別可能な色に着色されたものを用いることが好ましい。また、上層密度勾配液層１２の形成ステップは、下層密度勾配液層１１の上に、上層密度勾配液層１２を、両者間の境界面の乱れがなるべく少ない状態に形成されるように行うことが好ましい。また、高濃度密度勾配液としては、例えば、密度勾配媒体濃度８０〜９５％のものが好ましく、低濃度の密度勾配液としては、密度勾配媒体濃度６０〜８０％のものが好ましく、両者の濃度差は、１０〜３０％であることが好ましい。なお、密度勾配液注入ステップとしては、一種類の密度勾配液を用いる連続密度勾配法を用いるものであってもよい。
次に、密度勾配液注入ステップにより形成された密度勾配液層１２上に、希釈精液調整ステップにて調整された希釈精液を注入する希釈精液注入ステップを行う。密度勾配液注入ステップが、上述したような下層密度勾配液層形成ステップと上層密度勾配液層形成ステップとを行うものである場合、希釈精液注入ステップは、形成されている２つの層を乱すことなく、図８に示すように、上層の上に希釈精液注入し、希釈精液層１３が形成されるように行うことが好ましい。
そして、図８に示すように、希釈精液注入ステップが完了した有底管７を、遠心し、高濃度精子含有液採取用誘導具１の先端部３が位置する有底管７の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層１５を形成させる高濃度精子含有層形成ステップを行う。
具体的には、図８に示すような上層に希釈精液層１３を下層に密度勾配液層１１，１２を有する有底管７の開口部に、図９に示すように、キャップ８を装着し、有底管８を封止するとともに、収納されている高濃度精子含有液採取用誘導具１を挟持し、移動を不能な状態とする。そして、図９の状態にて、遠心分離器に入れ、遠心分離を行う。 遠心分離は、例えば、３０００ｒｐｍ程度、２５分程度行うことが好ましい。そして、遠心分離することにより、図９に示すように、高濃度精子含有液採取用誘導具１の先端部３が位置する有底管７の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層が形成される。遠心分離により、希釈精液層中の精子は、比重が密度勾配液中の媒体より高いため、有底管７の底部に移行し、希釈精液層中の細菌およびウイルスは、比重が密度勾配液中の媒体より低いため、密度勾配液層を通過することができず、希釈精液中にとどまる。このため、有底管７の底部には、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層が形成される。またこの状態では、希釈精液層は、乏精子精液層１３ａとなっている。
希釈精液中に含有される可能性のある細菌またはウイルスとしては、クラミジア、クラミジア・トラコマチィス、リン菌、トレポネーマ・パリーダ、軟性下疳菌、カンジタ、ヘルペスウイルス、乳頭腫ウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、肝炎ウイルス、ヒト後天性免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、ＥＢウイルスなどがある。これらの細菌、ウイルスは、密度勾配液層によりトラップされる。
そして、図８に示すように、希釈精液注入ステップが完了した有底管７を、遠心し、高濃度精子含有液採取用誘導具１の先端部３が位置する有底管７の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層１５を形成させる高濃度精子含有層形成ステップを行う。
具体的には、図８に示すような上層に希釈精液層１３を下層に密度勾配液層１１，１２を有する有底管７の開口部に、図９に示すように、キャップ８を装着し、有底管８を封止するとともに、収納されている高濃度精子含有液採取用誘導具１を挟持し、移動を不能な状態とする。そして、図９の状態にて、遠心分離器に入れ、遠心分離を行う。 遠心分離は、例えば、３０００ｒｐｍ程度、２５分程度行うことが好ましい。そして、遠心分離することにより、図９に示すように、高濃度精子含有液採取用誘導具１の先端部３が位置する有底管７の底部に、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層が形成される。遠心分離により、希釈精液層中の精子は、比重が密度勾配液中の媒体より高いため、有底管７の底部に移行し、希釈精液層中の細菌およびウイルスは、比重が密度勾配液中の媒体より低いため、密度勾配液層を通過することができず、希釈精液中にとどまる。このため、有底管７の底部には、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有層が形成される。またこの状態では、希釈精液層は、乏精子精液層１３ａとなっている。
希釈精液中に含有される可能性のある細菌またはウイルスとしては、クラミジア、クラミジア・トラコマチィス、リン菌、トレポネーマ・パリーダ、軟性下疳菌、カンジタ、ヘルペスウイルス、乳頭腫ウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、肝炎ウイルス、ヒト後天性免疫不全ウイルス、サイトメガロウイルス、ＥＢウイルスなどがある。これらの細菌、ウイルスは、密度勾配液層によりトラップされる。
次に、高濃度精子含有液採取ステップを行う。高濃度精子含有液採取ステップは、有底管７に装着されているキャップ８を離脱し、図１０に示すように、吸引手段３０に装着された高濃度精子含有液採取器具９の先端部を高濃度精子含有液採取用誘導具１の後端部４に接続する。高濃度精子含有液採取器具９としては、合成樹脂製のものを用いることが好ましい。そして、吸引手段３０を作動させて、有底管７の底部の高濃度精子含有層１５を形成している高濃度精子含有液を高濃度精子含有液採取用誘導具１のルーメン５を通過させて、高濃度精子含有液採取器具９に採取する。
この操作中、高濃度精子含有液採取器具９は、希釈精液層に接触することがなく、また、有底管７の底部の高濃度精子含有液は、高濃度精子含有液採取用誘導具１のルーメン５内を通過するため、移動中に、希釈精液層と接触することもない。
この操作中、高濃度精子含有液採取器具９は、希釈精液層に接触することがなく、また、有底管７の底部の高濃度精子含有液は、高濃度精子含有液採取用誘導具１のルーメン５内を通過するため、移動中に、希釈精液層と接触することもない。
次に、高濃度精子含有液注入ステップを行う。高濃度精子含有液注入ステップでは、図９に示すように、高濃度精子含有液が、高濃度精子含有液採取器具９に採取された後、高濃度精子含有液採取器具９を高濃度精子含有液採取用誘導具１より離脱させる。これにより、高濃度精子含有液採取器具９には、細菌を実質的に含有しない高濃度精子含有液が採取される。続いて、精子希釈液が投入された第２の有底管７ａに、高濃度精子含有液採取器具９内の高濃度精子含有液１５を注入する。これにより、第２の有底管７ａ内にて、人工授精用精子含有液１５ａが調整される。希釈液としては、テトロヒドロフラン（ＨＴＦ）液体培地、１０％ＳＳＳ（Ｓｅｒｕｍ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）含有ＨＴＦ液体培地、ハンクス液（緩衝塩類溶液）、生食などが使用される。
１、１０ 高濃度精子含有液採取用誘導具
２ 合成樹脂製チューブ体
３ 精子吸引用先端部
４ 採取器具接続用後端部
５ ルーメン
７ 遠心分離用有底管
８ キャップ
９ 高濃度精子含有液採取器具
１１ 下層密度勾配層
１２ 上層密度勾配層
１３ 希釈精液層
１５ 高濃度精子含有層
２ 合成樹脂製チューブ体
３ 精子吸引用先端部
４ 採取器具接続用後端部
５ ルーメン
７ 遠心分離用有底管
８ キャップ
９ 高濃度精子含有液採取器具
１１ 下層密度勾配層
１２ 上層密度勾配層
１３ 希釈精液層
１５ 高濃度精子含有層
Claims (7)
- 高濃度精子含有液採取用誘導具であって、
前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端から後端まで貫通したルーメンを有する合成樹脂製チューブ体であり、前記チューブ体は、拡径し、かつ側面に形成されたスリットを有する精子吸引用先端部と、吸引機能付きもしくは吸引手段が接続可能な高濃度精子含有液採取器具が接続可能な採取器具接続用後端部とを備え、さらに、
前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、先端が閉塞し後端が開口した遠心分離用有底管内に収納可能であり、かつ前記遠心分離用有底管内に収納された状態にて、前記精子吸引用先端部が前記遠心分離用有底管の底部に位置し、かつ、前記遠心分離用有底管とともに遠心可能であり、さらに、遠心分離後、前記遠心分離用有底管の底部層に位置する高濃度精子含有液を前記採取器具接続用後端部側より吸引することにより、前記精子吸引用先端部から高濃度精子含有液を吸引し、前記高濃度精子含有液採取用誘導具内を通過させて、前記採取器具接続用後端部に接続される前記高濃度精子含有液採取器具に採取可能であることを特徴とする高濃度精子含有液採取用誘導具。 - 前記採取器具接続用後端部は、採取器具接続用テーパー状拡径部となっている請求項１に記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
- 前記採取器具接続用後端部は、採取器具接続用ポートを有するコネクターを備えている請求項１に記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
- 前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、可撓性合成樹脂製チューブ体であり、かつ、前記遠心分離用有底管内に収納され、かつ、前記遠心分離用有底管の開口部にキャップが装着された状態にて、前記キャップと前記遠心分離用有底管の底部間により押圧保持されるものである請求項１ないし３のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
- 前記精子吸引用先端部は、複数の短く斜め外方に延びる突出辺を有している請求項１ないし４のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
- 前記高濃度精子含有液採取用誘導具は、前記有底管内に収納された状態にて、後端が前記有底管より突出しないものである請求項１ないし５のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具。
- 高濃度精子含有液採取用具であって、前記高濃度精子含有液採取用具は、請求項１ないし６のいずれかに記載の高濃度精子含有液採取用誘導具と、前記遠心分離用有底管と、前記遠心分離用有底管の開口部に装着可能なキャップとを備えることを特徴とする高濃度精子含有液採取用具。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012108650A JP5922987B2 (ja) | 2012-05-10 | 2012-05-10 | 高濃度精子含有液採取用誘導具および高濃度精子含有液採取用具 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012108650A JP5922987B2 (ja) | 2012-05-10 | 2012-05-10 | 高濃度精子含有液採取用誘導具および高濃度精子含有液採取用具 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2013233348A JP2013233348A (ja) | 2013-11-21 |
| JP5922987B2 true JP5922987B2 (ja) | 2016-05-24 |
Family
ID=49759953
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012108650A Active JP5922987B2 (ja) | 2012-05-10 | 2012-05-10 | 高濃度精子含有液採取用誘導具および高濃度精子含有液採取用具 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5922987B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3203186U (ja) * | 2015-12-28 | 2016-03-17 | 株式会社北里バイオファルマ | 密度勾配遠心分離法用精子洗浄濃縮キット |
| CN108485935B (zh) * | 2018-04-04 | 2023-07-04 | 柳州市妇幼保健院 | 一种精子优选装置及方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5230797Y2 (ja) * | 1972-09-18 | 1977-07-13 | ||
| WO2002028164A2 (en) * | 2000-10-06 | 2002-04-11 | Advanced Cell Technology, Inc. | Cloning endangered and extinct species |
| JP4269756B2 (ja) * | 2003-04-17 | 2009-05-27 | ニプロ株式会社 | 体液濃縮採取具 |
-
2012
- 2012-05-10 JP JP2012108650A patent/JP5922987B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2013233348A (ja) | 2013-11-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2208540A1 (en) | Separation container, attachment and separation method | |
| DK2361301T3 (en) | DEVELOPMENT AND METHODS OF TREATING BIOLOGICAL MATERIAL | |
| JPWO2005030399A1 (ja) | 遠心分離用沈殿管および生体細胞採取用チューブ | |
| JP5051557B2 (ja) | 分離容器および分離方法 | |
| US20120251411A1 (en) | Centrifuge tube | |
| US8241592B2 (en) | Cell separation method and apparatus | |
| JPS61176330A (ja) | 血液採取装置 | |
| WO2011116481A1 (en) | Sample collection tool | |
| JP5922987B2 (ja) | 高濃度精子含有液採取用誘導具および高濃度精子含有液採取用具 | |
| JP6256352B2 (ja) | 血液成分分離収容装置及び多血小板血漿の調製方法 | |
| AU764294B2 (en) | Tube for sperm washing and concentration and method for sperm washing and concentration | |
| JP2001017539A (ja) | 採血用器具 | |
| JPH039737B2 (ja) | ||
| CN107142202B (zh) | 一种多功能自动化生物细胞提取分离控制装置及采用该装置实现的细胞提取分离方法 | |
| US20180333530A1 (en) | Centrifugal Syringe And Method For Blood Fractionation | |
| JP3203186U (ja) | 密度勾配遠心分離法用精子洗浄濃縮キット | |
| JP3744298B2 (ja) | 精子洗浄濃縮用チューブおよび精子洗浄濃縮方法 | |
| JP2009045394A (ja) | 連通ｙ字管付採血器具 | |
| EP3777731B1 (en) | Oocyte-holding pipette for sperm injection methods without cytoplasmic aspiration | |
| US20160243165A1 (en) | Processing cell therapy products | |
| JP2004313500A (ja) | 体液濃縮採取具 | |
| CN208710603U (zh) | 一种吸痰盘 | |
| JP4305042B2 (ja) | 人工授精用カテーテル装置 | |
| CN201977844U (zh) | 一种肿瘤病理标本收集器 | |
| JP2005279289A (ja) | 採血用器具を用いた血液処理方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150401 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20160115 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160126 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160318 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160412 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160415 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5922987 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |