JP5900692B1 - Porous composite and bone regeneration material - Google Patents
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Abstract
【課題】OCPが大きな凝集を保持しつつ、均一分散している多孔質複合体及びそれを含む骨再生材料を提供することを目的とする。【解決手段】第8リン酸カルシウムとコラーゲンとを含む多孔質複合体であって、多孔質複合体の平面である5.0mm?5.0mmの範囲を走査型電子顕微鏡(SEM)で15倍に拡大して得られた画像において、第8リン酸カルシウムの凝集粒子のフラクタル次元(D)が0.60以上であり、かつ第8リン酸カルシウムの凝集粒子全体における300μm以上の長さを有する凝集粒子の面積割合が75%以上であることを特徴とする、多孔質複合体。【選択図】なしAn object of the present invention is to provide a porous composite in which OCP maintains a large aggregation and is uniformly dispersed, and a bone regeneration material including the same. SOLUTION: A porous composite containing eighth calcium phosphate and collagen, and the range of 5.0 mm to 5.0 mm, which is the plane of the porous composite, is enlarged 15 times with a scanning electron microscope (SEM). In the obtained image, the area ratio of the aggregated particles having a fractal dimension (D) of the aggregated particles of the eighth calcium phosphate of 0.60 or more and a length of 300 μm or more in the entire aggregated particles of the eighth calcium phosphate is A porous composite characterized by being 75% or more. [Selection figure] None
Description
本発明は、多孔質複合体および多孔質複合体を含む骨再生材料に関する。 The present invention relates to a porous composite and a bone regeneration material containing the porous composite.
従来使用されている骨再生材料としては、ヒドロキシアパタイト(HA)などのリン酸カルシウムが知られている(例えば、特許文献2、特許文献3、特許文献4、特許文献5参照)。 Known bone regeneration materials include calcium phosphates such as hydroxyapatite (HA) (see, for example, Patent Document 2, Patent Document 3, Patent Document 4, and Patent Document 5).
近年、HAの前駆物質である第8リン酸カルシウム(Octacalcium phosphate、以下、「OCP」という)は、HAやβ−第3リン酸カルシウム(β−TCP)等の他のリン酸カルシウムに比して、骨再生の促進作用が高く、生体内での吸収性も高いことが分かってきた(例えば、特許文献1参照)。このようにOCPは、リン酸カルシウムの中でも骨再生材料として特に優れた特性を有している。 In recent years, octacalcium phosphate (hereinafter referred to as “OCP”), which is a precursor of HA, promotes bone regeneration compared to other calcium phosphates such as HA and β-tricalcium phosphate (β-TCP). It has been found that the action is high and the absorbability in the living body is also high (for example, see Patent Document 1). Thus, OCP has particularly excellent characteristics as a bone regeneration material among calcium phosphates.
しかし、OCPは無機物であるために形状付与性に乏しい。このため、OCP単独では、広範囲の骨欠損部の再生等への適用は難しい。そこで、OCPとコラーゲンとの複合体を骨再生材料として用いることが提案されている(例えば、特許文献1参照)。 However, since OCP is an inorganic substance, its shape imparting property is poor. For this reason, OCP alone is difficult to apply to regeneration of a wide range of bone defects. Thus, it has been proposed to use a complex of OCP and collagen as a bone regeneration material (see, for example, Patent Document 1).
非特許文献1および非特許文献2には、それぞれ、イヌおよびヒトにおけるOCPとコラーゲンとの複合体の骨再生材料としての有用性が開示されており、骨再生材料としてのOCPとコラーゲンとの複合体の研究では粒子径が300〜500μmのOCP粒子が専ら用いられている。 Non-Patent Document 1 and Non-Patent Document 2 disclose the usefulness of a composite of OCP and collagen as a bone regeneration material in dogs and humans, respectively, and a composite of OCP and collagen as a bone regeneration material. In body research, OCP particles having a particle size of 300 to 500 μm are exclusively used.
また、非特許文献3には、生体内に埋入したOCPとコラーゲンとの複合体とコラーゲンのみの多孔質体との骨再生についての比較がなされており、コラーゲンのみの多孔質体では十分な骨再生が起こらないことが開示されている。 Non-Patent Document 3 compares bone regeneration between a complex of OCP and collagen embedded in a living body and a porous body made of only collagen, and a porous body made only of collagen is sufficient. It is disclosed that bone regeneration does not occur.
OCPは生体内に埋入されると生体類似アパタイトに変換し、優れた骨伝導能(Osteoconduction)、すなわち骨組織に存在する骨芽細胞を活性化し骨形成を促すことが知られている。実際に体内において、埋入されたOCP自身が生体内吸収性を示して骨再生を促進することが報告されており、さらにはOCPがHAと比較して前骨芽細胞から骨芽細胞への分化促進能を有することも報告されている。OCPとコラーゲンとの複合体からなる骨再生材料においても、OCPは前記同様、生体内吸収性を示した優れた骨再生促進及び骨芽細胞分化促進能を有する。しかしながら、骨欠損部の部位、大きさ、形状等により異なるが、骨再生には数週間から数か月の比較的長い期間を有する。そこで、長期にわたり骨伝導能を示すために、OCPに緩効性を付与することが重要であると考えられる。 It is known that OCP is converted into bio-like apatite when implanted in a living body, and has excellent osteoconduction, that is, activates osteoblasts existing in bone tissue to promote bone formation. In fact, it has been reported that the embedded OCP itself exhibits a bioresorbability and promotes bone regeneration in the body, and further, OCP is transferred from preosteoblasts to osteoblasts compared to HA. It has also been reported to have differentiation promoting ability. In the bone regeneration material comprising a composite of OCP and collagen, OCP has excellent bone regeneration promotion and osteoblast differentiation promotion ability exhibiting in vivo absorbability as described above. However, although it depends on the site, size, shape, etc. of the bone defect, bone regeneration has a relatively long period of several weeks to several months. Therefore, in order to show osteoconductivity over a long period of time, it is considered important to give a slow effect to OCP.
これまでOCPとコラーゲンとを含む多孔質複合体において、OCPの凝集粒子と均一分散との関係に着目した検討は行われていなかった。そこで本発明は、OCPとコラーゲンとを含む多孔質複合体において、OCPが大きな凝集を保持しつつ、均一分散している多孔質複合体及びそれを含む骨再生材料を提供することを目的とする。 So far, no study has been conducted focusing on the relationship between OCP aggregated particles and uniform dispersion in porous composites containing OCP and collagen. Therefore, an object of the present invention is to provide a porous composite containing OCP and collagen, in which OCP retains large aggregation and is uniformly dispersed, and a bone regeneration material containing the same. .
本発明者は、上記課題を鑑み鋭意検討したところ、OCPとコラーゲンとを含む多孔質複合体の製造工程におけるOCPとコラーゲンの混合工程において、撹拌を所定の範囲に制御することにより、優れたOCPの均一分散性とOCP凝集粒子の大きさの割合とを兼ねる多孔質複合体を見出した。更なる検討と改良を重ね、以下に代表される発明を提供する。 The present inventor has intensively studied in view of the above problems, and as a result, by controlling the stirring within a predetermined range in the OCP and collagen mixing step in the production process of the porous composite containing OCP and collagen, excellent OCP A porous composite having both uniform dispersibility and a ratio of the size of the OCP aggregated particles was found. Further studies and improvements are made and the inventions represented below are provided.
[1] 第8リン酸カルシウムとコラーゲンとを含む多孔質複合体であって、
多孔質複合体の平面である5.0mm×5.0mmの範囲を走査型電子顕微鏡(SEM)で15倍に拡大して得られた画像において、第8リン酸カルシウムの凝集粒子のフラクタル次元(D)が0.60以上であり、かつ第8リン酸カルシウムの凝集粒子全体における300μm以上の長さを有する凝集粒子の面積割合が75%以上であることを特徴とする、多孔質複合体。
[2] 多孔質複合体の平面である5.0mm×5.0mmの範囲を走査型電子顕微鏡(SEM)で15倍に拡大して得られた画像において、a)第8リン酸カルシウムの凝集粒子からなる部分、b)第8リン酸カルシウムの微粒子及びコラーゲンからなる部分、並びにc)コラーゲンからなる部分のうち、c)コラーゲンからなる部分の面積割合が5%以下である、[1]に記載の多孔質複合体。
[3] 圧縮弾性率が0.08MPa以上である、[1]又は[2]に記載の多孔質複合体。
[4] [1]〜[3]のいずれかに記載の多孔質複合体を含む骨再生材料。
[1] A porous composite containing eighth calcium phosphate and collagen,
In the image obtained by enlarging the range of 5.0 mm × 5.0 mm, which is the plane of the porous composite, with a scanning electron microscope (SEM) 15 times, the fractal dimension (D) of the aggregated particles of the eighth calcium phosphate The porous composite is characterized in that the area ratio of aggregated particles having a length of 300 μm or more in the entire aggregated particles of eighth calcium phosphate is 75% or more.
[2] In an image obtained by enlarging a range of 5.0 mm × 5.0 mm, which is a plane of the porous composite, by 15 times with a scanning electron microscope (SEM), a) From aggregated particles of eighth calcium phosphate The porous portion according to [1], wherein the area ratio of the portion consisting of b) the portion consisting of the eighth calcium phosphate fine particles and the collagen, and c) the portion consisting of collagen is 5% or less. Complex.
[3] The porous composite according to [1] or [2], wherein the compression elastic modulus is 0.08 MPa or more.
[4] A bone regeneration material comprising the porous composite according to any one of [1] to [3].
本発明によれば、大きな粒径のOCPの凝集粒子及びOCP微粒子が均一分散していることにより、多孔質複合体の不均一性に由来する骨伝導能のばらつきを抑制することができるとともに、長期にわたる優れたOCPの骨再生促進の効果の持続を期待することができる。さらに、OCPが均一分散していることにより、多孔質複合体により高い圧縮弾性率(ヤング率)を付与することができ、加工性に優れ、かつ破損しにくい特性を持つ多孔質複合体、及びそれを含む骨再生材料を提供することができる。 According to the present invention, since the OCP aggregate particles and OCP fine particles having a large particle diameter are uniformly dispersed, it is possible to suppress variation in bone conductivity derived from the heterogeneity of the porous composite, It can be expected that the effect of promoting the excellent bone regeneration of OCP over a long period will be sustained. Furthermore, since the OCP is uniformly dispersed, the porous composite can impart a high compressive elastic modulus (Young's modulus), has excellent workability and is resistant to breakage, and A bone regeneration material containing the same can be provided.
[多孔質複合体]
本発明の多孔質複合体は、第8リン酸カルシウムとコラーゲンとを含む多孔質の複合体(OCP/コラーゲン複合体)である。本発明の多孔質複合体の好ましい態様は、コラーゲンが3次元のスポンジ状構造を形成しており、OCPの微小粒子が該スポンジ状構造中に存在するとともに、少なくとも100μm以上の大きさのOCPの凝集粒子が存在している多孔質複合体である。本発明の多孔質複合体からなる骨再生材料は、多孔質体構造によって、多孔質内部に骨芽細胞が進入し、新生骨の形成を促進する内部骨形成を実現している。
[Porous composite]
The porous composite of the present invention is a porous composite (OCP / collagen composite) containing eighth calcium phosphate and collagen. In a preferred embodiment of the porous composite of the present invention, collagen forms a three-dimensional sponge-like structure, OCP microparticles are present in the sponge-like structure, and OCP having a size of at least 100 μm or more is present. It is a porous composite in which agglomerated particles are present. The bone regeneration material comprising the porous composite of the present invention realizes internal bone formation that promotes the formation of new bone by the introduction of osteoblasts into the porous body due to the porous body structure.
OCP(Ca8H2(PO4)6・5H2O)は、種々公知の方法によって調製することができ、例えば、LeGerosの滴下法(LeGeros RZ,Calcif Tissue Int 37:194-197,1985)や特許文献6に開示される合成装置(三流管)を使用した方法などによって調製することができる。また、混合法によって調製することができ、具体的には、例えば、リン酸二水素ナトリウム水溶液と、酢酸カルシウム水溶液を適切な条件下で混合し、生成した沈殿物を回収することにより、OCPを得ることができる。沈殿物から得られたOCPは、乾燥させ、電動ミル等を用い粉砕し、粒子状の粉体にして用いることが好ましい。粒径は10〜1000μmの範囲であることが好ましく、より好ましくは100〜500μmに調製することが好ましく、さらに好ましくは300〜500μmに調製することが好ましい。粒径は、ふるい分け法によりふるいの目開きのサイズによって分級することができる。 OCP (Ca 8 H 2 (PO 4) 6 · 5H 2 O) may be prepared by a variety known methods, for example, dropping method of LeGeros (LeGeros RZ, Calcif Tissue Int 37: 194-197,1985) And a method using a synthesizer (a three-flow tube) disclosed in Patent Document 6. Further, it can be prepared by a mixing method. Specifically, for example, an OCP can be obtained by mixing a sodium dihydrogen phosphate aqueous solution and a calcium acetate aqueous solution under appropriate conditions, and collecting the generated precipitate. Can be obtained. The OCP obtained from the precipitate is preferably dried, pulverized using an electric mill or the like, and used as a particulate powder. The particle size is preferably in the range of 10 to 1000 μm, more preferably 100 to 500 μm, and even more preferably 300 to 500 μm. The particle size can be classified according to the size of the sieve opening by a sieving method.
コラーゲンとしては、その由来、性状などは特に限定されず、種々のコラーゲンを使用することができる。好ましくは、蛋白分解酵素(例えばペプシン、プロナーゼ等)で可溶化することにより得られ、テロペプチドが除去されている酵素可溶化コラーゲンが使用される。コラーゲンのタイプとしては、繊維性コラーゲンであるI型、II型、III型及びIV型コラーゲンが好ましく、生体内に大量に含まれるI型コラーゲン、又はI型及びIII型コラーゲンの混合物が特に好ましい。原料としては、特に限定されないが、豚、牛などの皮膚、骨、腱等や魚のうろこなどに由来するコラーゲンを好ましく用いることができる。コラーゲンは生体由来成分であるので、安全性が高いという特長を有し、特に酵素可溶化コラーゲンはアレルゲン性も低く好ましい。上記のコラーゲンとしては、市販の製品を使用してもよい。 The origin and properties of collagen are not particularly limited, and various collagens can be used. Preferably, an enzyme-solubilized collagen obtained by solubilization with a proteolytic enzyme (for example, pepsin, pronase, etc.) from which telopeptide is removed is used. As the type of collagen, type I, type II, type III and type IV collagen which are fibrous collagens are preferable, and type I collagen contained in a large amount in the living body or a mixture of type I and type III collagen is particularly preferable. Although it does not specifically limit as a raw material, Collagen derived from skin, such as a pig and a cow, a bone, a tendon, a fish scale, etc. can be used preferably. Since collagen is a biological component, it has the feature of high safety. In particular, enzyme-solubilized collagen is preferable because it has low allergenicity. A commercial product may be used as the collagen.
本発明の多孔質複合体において、OCPとコラーゲンの配合比は、所望する形状付与性、操作性、生体親和性などに応じて適宜調整することができる。コラーゲン1重量部に対するOCPの配合比は、好ましくは0.5〜35重量部、より好ましくは1〜20重量部、更に好ましくは2〜10重量部である。コラーゲン1に対してOCPが0.5重量部未満であると、得られた複合体の骨再生機能が劣るおそれがあり、また35重量部を超えると形状付与性が低下するおそれがある。 In the porous composite of the present invention, the mixing ratio of OCP and collagen can be appropriately adjusted according to the desired shape imparting property, operability, biocompatibility, and the like. The compounding ratio of OCP to 1 part by weight of collagen is preferably 0.5 to 35 parts by weight, more preferably 1 to 20 parts by weight, still more preferably 2 to 10 parts by weight. If the OCP is less than 0.5 parts by weight with respect to the collagen 1, the resulting bone composite may have poor bone regeneration function, and if it exceeds 35 parts by weight, the shape impartability may be reduced.
本発明は、多孔質複合体の平面である5.0mm×5.0mmの範囲を走査型電子顕微鏡(SEM)で15倍に拡大して得られた画像において、OCPの凝集粒子のフラクタル次元(D)が0.60以上であることを特徴とする。フラクタル次元(D)は0.70以上であることがより好ましく、0.80以上であることがさらに好ましい。フラクタル次元(D)が大きいほどOCP凝集粒子の分散状態が良好であることを示す。具体的には以下のように算出する。 The present invention relates to a fractal dimension of aggregated particles of OCP in an image obtained by enlarging a range of 5.0 mm × 5.0 mm, which is a plane of a porous composite, with a scanning electron microscope (SEM) 15 times. D) is 0.60 or more. The fractal dimension (D) is more preferably 0.70 or more, and further preferably 0.80 or more. The larger the fractal dimension (D), the better the dispersion state of the OCP aggregated particles. Specifically, it is calculated as follows.
(多孔質複合体のSEM画像)
多孔質複合体の平面である少なくとも5.0mm×5.0mmの正方形の範囲が含まれるよう、多孔質複合体の断面写真を走査型電子顕微鏡(SEM)で撮影する。この際の撮影条件は、加速電圧15.0kV、低真空(30Pa)、後方散乱電子検出、Working Distance(WD)40mm、倍率15倍である。多孔質複合体が外表面に少なくとも5.0mm×5.0mmの平面を有する場合、その表面を撮影することができる。撮影する5.0mm×5.0mmの平面は多孔質複合体の断面であってもよく、その場合は多孔質複合体の平滑切断面の表面を撮影することができる。撮影面にはコーティング等が施されていないことが望ましく、例えば多孔質複合体の外表面にコーティングがある場合には、撮影面にコーティング層が含まれないよう切断した断面を撮影する。サンプルの厚みは一定であることが好ましく、サンプルの破れが生じたりしないよう、少なくとも0.5mm以上であることが好ましい。サンプルは、多孔質複合体を5.0mm×5.0mmにカットしてから撮影に供することもできるが、好ましくは、少なくとも5.0mm×5.0mmの正方形の範囲を含む大きさのサンプルを作製してSEMで撮影し、その後撮影画像において5.0mm×5.0mmの範囲を指定することができる。
(SEM image of porous composite)
A cross-sectional photograph of the porous composite is taken with a scanning electron microscope (SEM) so that a square range of at least 5.0 mm × 5.0 mm, which is the plane of the porous composite, is included. Imaging conditions at this time are an acceleration voltage of 15.0 kV, a low vacuum (30 Pa), backscattered electron detection, a working distance (WD) of 40 mm, and a magnification of 15 times. When the porous composite has a plane of at least 5.0 mm × 5.0 mm on the outer surface, the surface can be photographed. The plane of 5.0 mm × 5.0 mm to be imaged may be a cross section of the porous composite. In this case, the surface of the smooth cut surface of the porous composite can be imaged. It is desirable that the imaging surface is not coated or the like. For example, when there is a coating on the outer surface of the porous composite, an image of the cut cross section is captured so that the imaging surface does not include the coating layer. The thickness of the sample is preferably constant, and is preferably at least 0.5 mm or more so that the sample is not broken. The sample can be used for photography after the porous composite is cut to 5.0 mm × 5.0 mm, but preferably a sample having a size including a square area of at least 5.0 mm × 5.0 mm. It can be produced and photographed with an SEM, and then a 5.0 mm × 5.0 mm range can be specified in the photographed image.
(フラクタル次元(D))
フラクタル次元(D)は下記の方法により算出する。下に示すすべての画像処理は画像処理ソフトウェア ImageJ(Ver.1.48以降)を用いて行う。
(1)5.0mm×5.0mmの正方形の範囲を指定したSEM画像(以下、本段落において「解析画像」という。)をImageJに取り込む。
(2)解析画像を二値化(閾値:90pixel)する。
(3)色調を反転させる。
(4)解析画像をそれぞれn2分割(n=2、3、4、5)する。
(5)n2分割した解析画像の各区画について、各区画の面積に対するOCP凝集粒子の占める面積分率を算出する。
(6)n2分割した解析画像について、各区画すべての面積分率の平均値(μn)および標準偏差(σn)を算出する。
(7)D(n)を下式により算出する。
D(n)=σn/μn
(8)D(n)と1/nを両対数グラフにプロットし、近似直線(累乗近似)の傾きを求める。
(9)近似直線の傾きに−1を乗じ、フラクタル次元(D)を算出する。
(Fractal dimension (D))
The fractal dimension (D) is calculated by the following method. All image processing shown below is performed using image processing software ImageJ (Ver. 1.48 or later).
(1) An SEM image (hereinafter referred to as “analysis image” in this paragraph) in which a 5.0 mm × 5.0 mm square range is specified is taken into ImageJ.
(2) The analysis image is binarized (threshold value: 90 pixels).
(3) Invert the color tone.
(4) The analysis image is divided into n 2 (n = 2, 3, 4, 5).
(5) for each partition of n 2 divided analysis image, calculating the area fraction occupied by the OCP agglomerated particles to the area of each partition.
(6) Calculate the average value (μ n ) and standard deviation (σ n ) of the area fractions of all the sections for the analysis image divided into n 2 parts.
(7) D (n) is calculated by the following equation.
D (n) = σ n / μ n
(8) Plot D (n) and 1 / n on a log-log graph to determine the slope of the approximate line (power approximation).
(9) Multiply the inclination of the approximate straight line by −1 to calculate the fractal dimension (D).
なお、(4)の作業は(2)の前に行ってもよい。(4)の作業はWindows(登録商標)PaintなどImageJ以外の画像処理ソフトにより行うことができる。また、SEM画像の色調の具合により(2)の二値化ができない場合、もしくはOCP凝集粒子以外の部分がOCP凝集粒子の部分と混同されてしまう場合、まず、SEM画像においてOCP凝集粒子の部分のみを黒色で塗りつぶし、その他の部分を白色とするか、もしくはOCP凝集粒子の部分のみを白色と塗りつぶし、その他の部分を黒色とすることができる。その後ImageJに取り込み、(2)以降の作業を行う。予めOCP凝集粒子の部分のみを黒色で塗りつぶし、その他の部分を白色とした場合、(3)の色調を反転させる作業は不要である。 The operation (4) may be performed before (2). The operation (4) can be performed by image processing software other than ImageJ such as Windows (registered trademark) Paint. Further, when the binarization of (2) cannot be performed due to the color tone of the SEM image, or when a part other than the OCP aggregated particle is confused with the OCP aggregated particle part, first, the OCP aggregated particle part in the SEM image Or the other part is white, or only the OCP aggregated particle part is painted white and the other part is black. Thereafter, it is imported into ImageJ, and the operations after (2) are performed. When only the OCP aggregated particle portion is painted in black in advance and the other portion is white, the work of reversing the color tone of (3) is unnecessary.
(300μm以上の凝集粒子の割合)
本発明は、OCPの凝集粒子全体における300μm以上の長さを有する凝集粒子の面積割合が75%以上であることを特徴とする。好ましくは85%以上であり、より好ましくは95%以上である。ここで、OCPの凝集粒子全体とは、上述のSEM画像において、目視で確認できるすべての粒子状物が占める面積の合計をいう。300μm以上の長さを有するとは、前記SEM画像において、各凝集粒子の輪郭に接する最長間隔の平行線間の距離が300μm以上であることをいう。
(Proportion of aggregated particles of 300 μm or more)
The present invention is characterized in that the area ratio of aggregated particles having a length of 300 μm or more in the total aggregated OCP particles is 75% or more. Preferably it is 85% or more, More preferably, it is 95% or more. Here, the entire OCP aggregated particles refers to the total area occupied by all the particulate matters that can be visually confirmed in the SEM image. “Having a length of 300 μm or more” means that in the SEM image, the distance between the longest parallel lines in contact with the outline of each aggregated particle is 300 μm or more.
具体的には下記の方法により算出する。
(1)5.0mm×5.0mmの正方形の範囲を指定したSEM画像(以下、本段落において「解析画像」という。)をImageJに取り込む。
(2)解析画像を二値化(閾値:90pixel)する。
(3)色調を反転させる。
(4)OCP凝集粒子全体の面積を求める。
(5)300μm以上の長さを有するOCP凝集粒子を抽出する。
(6)OCP凝集粒子全体の面積(Sw)および300μm以上のOCP凝集粒子の面積(Sd)から、300μm以上のOCP凝集粒子の割合(Rd)を下式により算出する
Rd =Sd/Sw×100
Specifically, it is calculated by the following method.
(1) An SEM image (hereinafter referred to as “analysis image” in this paragraph) in which a 5.0 mm × 5.0 mm square range is specified is taken into ImageJ.
(2) The analysis image is binarized (threshold value: 90 pixels).
(3) Invert the color tone.
(4) The area of the entire OCP aggregated particles is obtained.
(5) OCP aggregated particles having a length of 300 μm or more are extracted.
(6) From the area (S w ) of the entire OCP aggregated particles and the area (S d ) of the OCP aggregated particles of 300 μm or more, the ratio (R d ) of the OCP aggregated particles of 300 μm or more is calculated by the following formula: R d = S d / S w × 100
なお、SEM画像の色調の具合により(2)の二値化ができない場合、もしくはOCP凝集粒子以外の部分がOCP凝集粒子の部分と混同されてしまう場合、まず、SEM画像においてOCP凝集粒子の部分のみを黒色で塗りつぶし、その他の部分を白色とするか、もしくはOCP凝集粒子の部分のみを白色と塗りつぶし、その他の部分を黒色とすることができる。その後ImageJに取り込み、(2)以降の作業を行う。予めOCP凝集粒子の部分のみを黒色で塗りつぶし、その他の部分を白色とした場合、(3)の色調を反転させる作業は不要である。 In addition, when the binarization of (2) cannot be performed due to the color tone of the SEM image, or when a part other than the OCP aggregated particle is confused with the OCP aggregated particle part, first, the OCP aggregated particle part in the SEM image Or the other part is white, or only the OCP aggregated particle part is painted white and the other part is black. Thereafter, it is imported into ImageJ, and the operations after (2) are performed. When only the OCP aggregated particle portion is painted in black in advance and the other portion is white, the work of reversing the color tone of (3) is unnecessary.
本発明において、フラクタル次元(D)が0.60以上であり、かつ300μm以上の凝集粒子の割合が75%以上であることが好ましく、フラクタル次元(D)が0.70以上であり、かつ300μm以上の凝集粒子の割合が85%以上であることがより好ましく、フラクタル次元(D)が0.80以上であり、かつ300μm以上の凝集粒子の割合が95%以上であることが更に好ましい。フラクタル次元(D)が0.60未満であり、OCP凝集粒子全体における300μm以上のOCP凝集粒子の割合が75%未満であると、多孔質複合体を適用した部位における均一な骨伝導能が成されない恐れがあり、さらにOCPの緩効性が期待できない可能性がある。特に数週間から数か月の骨再生に有する期間の間、骨伝導能を継続的に促すためにも、OCPがすぐに消失しない大きな凝集粒子が均一に存在することが重要であると考えられる。OCPはまた、多孔質複合体におけるコラーゲンの骨格構造において強度を補強する役目を担っており、後述するとおり、OCP凝集粒子のフラクタル次元が低くなると、圧縮弾性率が低下する。圧縮弾性率が低いと、骨欠損部への充填の際の操作容易性が劣る結果となり、さらに本発明の多孔質複合体を骨欠損部に充填する際に、前記複合体が崩壊してしまったり、気孔が潰れてしまったりすると、その後の骨再生に悪影響を与えることになる。 In the present invention, the fractal dimension (D) is preferably 0.60 or more and the ratio of aggregated particles of 300 μm or more is preferably 75% or more, the fractal dimension (D) is 0.70 or more and 300 μm. The ratio of the above aggregated particles is more preferably 85% or more, further preferably the fractal dimension (D) is 0.80 or more, and the ratio of the aggregated particles of 300 μm or more is 95% or more. When the fractal dimension (D) is less than 0.60 and the ratio of the 300 μm or more OCP aggregated particles in the entire OCP aggregated particles is less than 75%, uniform bone conduction ability is achieved at the site where the porous composite is applied. In addition, there is a possibility that the slow effect of OCP cannot be expected. In order to continuously promote osteoconductivity, especially during a period of several weeks to several months of bone regeneration, it is important that large aggregated particles that OCP does not disappear immediately are important. . OCP also plays a role of reinforcing strength in the skeletal structure of the collagen in the porous composite. As will be described later, when the fractal dimension of the OCP aggregated particles is lowered, the compressive elastic modulus is lowered. When the compressive elastic modulus is low, the result is poor maneuverability when filling the bone defect, and further, when the porous composite of the present invention is filled into the bone defect, the complex collapses. If the pores are collapsed or the pores are crushed, the subsequent bone regeneration will be adversely affected.
(コラーゲンからなる部分の面積割合)
本発明の多孔質複合体は、平面である5.0mm×5.0mmの範囲を走査型電子顕微鏡(SEM)で15倍に拡大して得られた画像において、a)OCPの凝集粒子からなる部分、b)OCPの微粒子及びコラーゲンからなる部分、並びにc)コラーゲンからなる部分のうち、c)コラーゲンからなる部分の面積割合が5%以下であることが好ましい。
(Area ratio of collagen part)
The porous composite of the present invention consists of a) OCP aggregated particles in an image obtained by enlarging a flat 5.0 mm × 5.0 mm range with a scanning electron microscope (SEM) 15 times. Of the part, b) the part composed of OCP fine particles and collagen, and c) the part composed of collagen, the area ratio of the part composed of c) collagen is preferably 5% or less.
本発明の多孔質複合体の好ましい態様は、a)OCPの凝集粒子からなる部分、b)OCP及びコラーゲンからなる部分、並びにc)コラーゲンからなる部分から構成される。このうち、a)OCPの凝集粒子からなる部分とは、リン酸カルシウムが凝集しており、15倍に拡大したSEM画像において目視で粒子状物が確認できる部分である。通常SEM画像においては、白色に近い色で表現される。元素分析を行った場合、カルシウムCaとリンPが多く検出される。b)OCPの微粒子及びコラーゲンからなる部分とは、コラーゲンのスポンジ状構造の中に、OCPの100μm未満のような微小粒子が混在している状態の部分であり、OCPの微粒子は15倍に拡大したSEM画像において目視で確認することが困難である。通常SEM画像においては、a)OCPの凝集粒子からなる部分よりは明度が下がり、灰色〜白色で表現される。元素分析を行った場合、炭素C、カルシウムCa及びリンPが検出される。c)コラーゲンからなる部分とは、コラーゲンのスポンジ状構造の中に、OCPの微粒子がわずかしか存在しないか、あるいは全く存在しない状態の部分をいう。通常SEM画像においては、黒色に近い暗色で表現される。元素分析を行った場合、炭素Cが検出されるが、カルシウムCaとリンPはほとんど検出されない。 A preferred embodiment of the porous composite of the present invention is composed of a) a part composed of OCP aggregated particles, b) a part composed of OCP and collagen, and c) a part composed of collagen. Among these, a) a portion composed of OCP aggregated particles is a portion where calcium phosphate is aggregated and a particulate matter can be visually confirmed in an SEM image magnified 15 times. In a normal SEM image, it is expressed in a color close to white. When elemental analysis is performed, a large amount of calcium Ca and phosphorus P are detected. b) The OCP fine particles and the portion composed of collagen are portions in which fine particles such as OCP less than 100 μm are mixed in the sponge-like structure of collagen, and the OCP fine particles are enlarged 15 times. It is difficult to visually confirm in the SEM image. In a normal SEM image, a) the brightness is lower than that of a portion composed of aggregated particles of OCP, and it is expressed in gray to white. When elemental analysis is performed, carbon C, calcium Ca, and phosphorus P are detected. c) A portion made of collagen refers to a portion in which few or no OCCP fine particles are present in the sponge-like structure of collagen. Usually, in the SEM image, it is expressed in a dark color close to black. When elemental analysis is performed, carbon C is detected, but calcium Ca and phosphorus P are hardly detected.
コラーゲンからなる部分の面積割合は下記の方法により求める。
(1)5.0mm×5.0mmの正方形の範囲を指定したSEM画像(以下、本段落において「解析画像」という。)をImageJに取り込む。
(2)解析画像を二値化(閾値:90pixel)する。
(3)コラーゲンからなる部分を抽出する。
(4)コラーゲン部分面積(Sc)を算出する。
(5)解析画像の面積(SA)を算出する。
(6)コラーゲンからなる部分の面積割合(Rc)を下式により算出する。
Rc =Sc/SA×100
The area ratio of the portion made of collagen is determined by the following method.
(1) An SEM image (hereinafter referred to as “analysis image” in this paragraph) in which a 5.0 mm × 5.0 mm square range is specified is taken into ImageJ.
(2) The analysis image is binarized (threshold value: 90 pixels).
(3) Extract a portion made of collagen.
(4) Calculate the collagen partial area (S c ).
(5) The area (S A ) of the analysis image is calculated.
(6) The area ratio (R c ) of the portion made of collagen is calculated by the following equation.
R c = S c / S A × 100
なお、SEM画像の色調の具合により(2)の二値化ができない場合、もしくはコラーゲンからなる部分がコラーゲンからなる部分以外と混同されてしまう場合、まず、SEM画像においてコラーゲンからなる部分のみを黒色で塗りつぶし、その他の部分を白色とするか、もしくはコラーゲンからなる部分のみを白色と塗りつぶし、その他の部分を黒色とすることができる。その後ImageJに取り込み、(2)以降の作業を行う。予めコラーゲンからなる部分のみを白色で塗りつぶし、その他の部分を黒色とした場合、(2)と(3)のプロセスの間に色調を反転させる作業が必要である。 If the SEM image cannot be binarized due to the color tone of the SEM image, or if the collagen portion is confused with other than the collagen portion, first, only the collagen portion in the SEM image is black. The other part can be white, or only the part made of collagen can be painted white and the other part can be black. Thereafter, it is imported into ImageJ, and the operations after (2) are performed. In the case where only the part made of collagen is painted in white in advance and the other part is made black, it is necessary to reverse the color tone between the processes (2) and (3).
解析画像全体において、コラーゲンからなる部分の面積は5%以下が好ましく、4%以下がより好ましく、3%以下がさらに好ましい。コラーゲンからなる部分が5%より大きくなると、多孔質複合体の構造が不均一となり、骨伝導能が低下する可能性がある。さらに、コラーゲンからなる部分が5%より大きくなると圧縮弾性率が大きく低下する。 In the entire analysis image, the area of the portion made of collagen is preferably 5% or less, more preferably 4% or less, and even more preferably 3% or less. If the portion made of collagen is larger than 5%, the structure of the porous composite becomes non-uniform, and the osteoconductivity may be reduced. Furthermore, when the part which consists of collagen becomes larger than 5%, a compression elastic modulus will fall large.
(圧縮弾性率)
多孔質複合体の圧縮弾性率は、好ましくは0.05MPa以上であり、より好ましくは0.08〜0.30MPa、更に好ましくは0.10〜0.20MPaである。圧縮強度が0.05MPa未満である場合、多孔質複合体の操作性が低下する傾向がある。すなわち、本発明の多孔質複合体を骨欠損部に充填する際に、前記複合体が崩壊してしまったり、気孔が潰れてしまったりすると、その後の骨再生に悪影響を与えることになる。上限は特に定められるものではないが、骨欠損部への充填の際の操作容易性の観点から、0.30MPa以下であることが好ましい。
(Compressive modulus)
The compression elastic modulus of the porous composite is preferably 0.05 MPa or more, more preferably 0.08 to 0.30 MPa, and still more preferably 0.10 to 0.20 MPa. When the compressive strength is less than 0.05 MPa, the operability of the porous composite tends to decrease. That is, when the bone composite part is filled with the porous composite of the present invention, if the composite is collapsed or the pores are crushed, the subsequent bone regeneration is adversely affected. Although an upper limit is not specifically defined, it is preferable that it is 0.30 MPa or less from a viewpoint of the ease of operation at the time of filling to a bone defect part.
本発明における圧縮弾性率は下記の方法により測定される。
温度:25℃、湿度:65%の環境下、直径8.5mm、長さ15mmの円柱状試料をリン酸緩衝生理食塩水(10mMリン酸ナトリウム、0.14M塩化ナトリウム、pH7.4)に30分間浸漬する。その後、試料表面の水気を軽く拭い、精密万能試験機(オートグラフAGS−J、株式会社島津製作所製、ロードセル容量:1kN)を用いて、単軸荷重を負荷する。具体的には、サンプルを長辺が下方圧盤(材質:ステンレス、内径:100mm、厚さ:25mm)に対し垂直となるようにセットした後、上方圧盤(材質:ステンレス、内径:100mm、厚さ:25mm)を10mm/minの速度で下げ、サンプルが80%歪んだところで試験機を止める。そして、得られた応力−ひずみ曲線の初期直線部分の傾きから圧縮弾性率を求める。
The compression elastic modulus in the present invention is measured by the following method.
A cylindrical sample having a diameter of 8.5 mm and a length of 15 mm was placed in phosphate buffered saline (10 mM sodium phosphate, 0.14 M sodium chloride, pH 7.4) in an environment of temperature: 25 ° C. and humidity: 65%. Immerse for a minute. Thereafter, the sample surface is lightly wiped, and a uniaxial load is applied using a precision universal testing machine (Autograph AGS-J, manufactured by Shimadzu Corporation, load cell capacity: 1 kN). Specifically, after setting the sample so that the long side is perpendicular to the lower platen (material: stainless steel, inner diameter: 100 mm, thickness: 25 mm), the upper platen (material: stainless steel, inner diameter: 100 mm, thickness) : 25 mm) at a speed of 10 mm / min, and the test machine is stopped when the sample is 80% distorted. Then, the compression elastic modulus is obtained from the slope of the initial straight line portion of the obtained stress-strain curve.
本発明の多孔質複合体は、多孔質複合体の気孔径が3〜40μmであることが好ましい。気孔径が40μmを超える場合、多孔質複合体の強度が低下する傾向がある。一方、気孔径が3μm未満である場合、骨芽細胞等の骨代謝系細胞の侵入が起こり難くなり、骨再生の促進作用が低下する恐れがある。本発明の多孔質複合体のより好ましい気孔径は5〜20μmである。 The porous composite of the present invention preferably has a pore size of 3 to 40 μm. When the pore diameter exceeds 40 μm, the strength of the porous composite tends to decrease. On the other hand, when the pore diameter is less than 3 μm, invasion of bone metabolic cells such as osteoblasts is difficult to occur, and the bone regeneration promoting action may be reduced. The more preferable pore diameter of the porous composite of the present invention is 5 to 20 μm.
気孔径は水銀ポロシメーター(Mercury porosimeter)による細孔分布測定を用いて測定し、具体的には以下の方法により測定される。
(気孔径測定)
前処理として、サンプルを120℃で4時間恒温乾燥する。前処理後の各サンプルについて、以下の測定装置を用いた水銀圧入法により、以下の条件で細孔径0.0018〜200μmの細孔分布を求める。
測定装置:オートポアIV9520(micromeritics社製)
測定条件:サンプルと水銀の接触角:140deg
水銀の表面張力0.48N/m(1dyne=10−5Nで換算)。
発明における気孔径とは、水銀圧入法による測定圧力から得られた細孔分布曲線において、最も大きな面積を有するピークの極大値を示す細孔径の値である。
The pore diameter is measured using a pore distribution measurement with a mercury porosimeter, and specifically, is measured by the following method.
(Pore diameter measurement)
As a pretreatment, the sample is dried at 120 ° C. for 4 hours. About each sample after a pre-processing, pore distribution with a pore diameter of 0.0018-200 micrometers is calculated | required on condition of the following by the mercury intrusion method using the following measuring apparatuses.
Measuring device: Autopore IV9520 (manufactured by micromeritics)
Measurement conditions: Contact angle between sample and mercury: 140 deg
Mercury surface tension of 0.48 N / m (converted to 1 dyne = 10 −5 N).
The pore diameter in the present invention is a value of the pore diameter showing the maximum value of the peak having the largest area in the pore distribution curve obtained from the measurement pressure by the mercury intrusion method.
多孔質複合体の気孔率(空隙率)は80〜99%であることが好ましく、より好ましくは85〜98%である。気孔率は水銀圧入法による全細孔容積と見かけ密度を用いて下記の式により求められる。
気孔率(%)= 全細孔容積/{(1/見かけ密度)+全細孔容積}×100
The porosity (porosity) of the porous composite is preferably 80 to 99%, more preferably 85 to 98%. The porosity is obtained by the following formula using the total pore volume and the apparent density by the mercury intrusion method.
Porosity (%) = total pore volume / {(1 / apparent density) + total pore volume} × 100
本発明の多孔質複合体の形状は、直方体(ブロック体)、円筒体もしくはタブレット状、又は顆粒であることが好ましい。直方体である場合の大きさは5mm×5mm×5mm以上の大きさが好ましく、一般に上限は100mm×100mm×100mm以内の範囲であることが好ましい。直方体は立方体に限られない。円筒状である場合の大きさは、直径が5〜50mmであることが好ましく、高さは1〜50mmの範囲であることが好ましい。顆粒状である場合、形状は球体に限られず不定形でもよいが、直径が0.1〜10mmであることが好ましい。 The shape of the porous composite of the present invention is preferably a rectangular parallelepiped (block body), a cylindrical body or a tablet, or a granule. The size of the rectangular parallelepiped is preferably 5 mm × 5 mm × 5 mm or more, and generally the upper limit is preferably within a range of 100 mm × 100 mm × 100 mm. A rectangular parallelepiped is not limited to a cube. In the case of a cylindrical shape, the diameter is preferably 5 to 50 mm, and the height is preferably in the range of 1 to 50 mm. When it is granular, the shape is not limited to a sphere and may be indefinite, but the diameter is preferably 0.1 to 10 mm.
本発明の多孔質複合体は骨欠損部に補填することにより使用されるが、骨欠損部に十分な血液もしくは体液が認められる場合には、多孔質複合体をそのまま、もしくは適当な形状に切断し補填することができる。骨欠損部に十分な血液等が認められない、又は多孔質複合体を元の形状で補填できない場合は、多孔質複合体を血液もしくは生理食塩水等に浸漬し、多孔質複合体がスポンジ状の弾力性を示すことを確認した上で骨欠損部に補填することができる。 The porous composite of the present invention is used by filling a bone defect part. When sufficient blood or body fluid is observed in the bone defect part, the porous composite is cut as it is or in an appropriate shape. Can be compensated. If sufficient blood or the like is not found in the bone defect part or the porous complex cannot be compensated for in its original shape, the porous complex is immersed in blood or physiological saline so that the porous complex is sponge-like. It is possible to make up for the bone defect after confirming that the elasticity is high.
[多孔質複合体の製造方法]
本発明の多孔質複合体の製造方法は、OCPとコラーゲンを混合する製造方法が好ましく、下記のような製造方法を用いることができる。
[Method for producing porous composite]
The manufacturing method of the porous composite of the present invention is preferably a manufacturing method in which OCP and collagen are mixed, and the following manufacturing method can be used.
(1)まず、濃度を0.1〜5重量%、pHを7〜8に調整し、ゲル化したコラーゲン溶液にOCPを添加し、混練してOCPとコラーゲンの混合物を作製する。(2)次いで、当該混合物を適当な型に加えて成型し、凍結し、凍結乾燥することにより複合体を得る。(3)得られた当該複合体は、必要に応じて、熱脱水架橋処理を施し、更に、慣用の滅菌法(例えば、γ線照射、電子線照射、エチレンオキサイドガス等)により滅菌する。 (1) First, the concentration is adjusted to 0.1 to 5% by weight, the pH is adjusted to 7 to 8, and OCP is added to the gelatinized collagen solution and kneaded to prepare a mixture of OCP and collagen. (2) Next, the mixture is added to an appropriate mold, molded, frozen, and lyophilized to obtain a composite. (3) The obtained complex is subjected to thermal dehydration crosslinking treatment as necessary, and further sterilized by a conventional sterilization method (for example, γ-ray irradiation, electron beam irradiation, ethylene oxide gas, etc.).
ここで、コラーゲンとOCPを混練する工程において、従来十分に混練することが必要であることが当業者の一致する認識であったところ、驚くべきことに本発明者は、混練を十分に行うことが、逆にフラクタル次元や300μm以上の粒子割合を低下させる原因になることを見出した。混練する工程は、2〜4枚のプロペラ型やパドル型等の撹拌翼(impeller)を有する攪拌機や自転・公転ミキサーを用いることができるが、撹拌翼を有する攪拌機の場合、100〜300rpmで15〜300秒間撹拌することが好ましく、100〜300rpmで30〜120秒間撹拌することがより好ましい。自転・公転ミキサーを用いる場合、500〜1500rpmで30〜300秒撹拌することが好ましく、500〜1500rpmで45〜120秒撹拌することがより好ましい。コラーゲンとOCPを混練する工程は薬さじ等をもちいて手作業で行うこともできるが、この場合も、一定速度で30〜120秒間撹拌することが好ましく、速度に応じて適宜撹拌時間を調整することが好ましい。 Here, in the process of kneading collagen and OCP, it was recognized by those skilled in the art that it has been necessary to knead sufficiently in the past. Surprisingly, the present inventor must perform kneading sufficiently. However, it has been found that this causes a decrease in the fractal dimension and the ratio of particles of 300 μm or more. For the kneading step, a stirrer having 2 to 4 propeller type or paddle type impellers or a rotation / revolution mixer can be used. In the case of a stirrer having a stirrer blade, the stirrer has 15 at 100 to 300 rpm. It is preferable to stir for -300 seconds, and it is more preferable to stir at 100-300 rpm for 30-120 seconds. When using a rotating / revolving mixer, stirring is preferably performed at 500 to 1500 rpm for 30 to 300 seconds, and more preferably stirring at 500 to 1500 rpm for 45 to 120 seconds. The step of kneading collagen and OCP can be performed manually using a spoon, etc. In this case as well, it is preferable to stir at a constant speed for 30 to 120 seconds, and the stirring time is appropriately adjusted according to the speed. It is preferable.
本発明の多孔質複合体の製造方法は、OCPとコラーゲンとを含むゲル、ゾルまたは液体を液体冷媒に浸漬し急速凍結した後、凍結乾燥する工程を含むことが好ましい。液体冷媒は、第8リン酸カルシウムとコラーゲンとを含むゲル、ゾルまたは液体の凍結温度より低い温度の液体であり、例えば、メタノール、エタノール、アセトン、アセトニトリル、液体窒素が挙げられる。該液体冷媒の温度は、好ましくは−20℃以下であり、より好ましくは−40℃以下であり、さらに好ましくは−80℃以下である。 Preferably, the method for producing a porous composite of the present invention includes a step of immersing a gel, sol or liquid containing OCP and collagen in a liquid refrigerant, rapidly freezing, and then freeze-drying. The liquid refrigerant is a liquid having a temperature lower than the freezing temperature of a gel, sol, or liquid containing eighth calcium phosphate and collagen, and examples thereof include methanol, ethanol, acetone, acetonitrile, and liquid nitrogen. The temperature of the liquid refrigerant is preferably −20 ° C. or lower, more preferably −40 ° C. or lower, and further preferably −80 ° C. or lower.
第8リン酸カルシウムとコラーゲンとを含むゲル、ゾルまたは液体を液体冷媒浸漬によって急速に凍結させることにより、得られる多孔質複合体の気孔径を小さくすることができると考えられる。 It is considered that the pore diameter of the resulting porous composite can be reduced by rapidly freezing the gel, sol or liquid containing the eighth calcium phosphate and collagen by immersion in a liquid refrigerant.
本発明の多孔質複合体は、熱処理もしくは熱脱水架橋処理が施されていることが好ましい。熱処理により、OCP分子構造の一部が崩れて骨形成系細胞の侵入が起こり易くなり、骨再生が促進されると共に、コラーゲンが架橋して形状保持力が向上する。 The porous composite of the present invention is preferably subjected to heat treatment or thermal dehydration crosslinking treatment. By heat treatment, a part of the OCP molecular structure is broken, and the invasion of bone-forming cells is likely to occur. Bone regeneration is promoted and collagen is cross-linked to improve shape retention.
熱処理の温度は、好ましくは50〜200℃、より好ましくは60〜180℃である。また、熱処理は、減圧条件下で行うことが好ましい。圧力は、好ましくは0〜3000Pa、より好ましくは0〜300Paである。熱処理の処理時間は、好ましくは2時間〜10日間、より好ましくは12時間〜5日間である。 The temperature of heat processing becomes like this. Preferably it is 50-200 degreeC, More preferably, it is 60-180 degreeC. The heat treatment is preferably performed under reduced pressure conditions. The pressure is preferably 0 to 3000 Pa, more preferably 0 to 300 Pa. The treatment time of the heat treatment is preferably 2 hours to 10 days, more preferably 12 hours to 5 days.
本発明の多孔質複合体は、OCPおよびコラーゲンの他に、例えば、骨形成能を有するサイトカイン(bone morphogenetic protein-2、transforming growth factor β1など)を含有していてもよく、係るサイトカインを含有させることにより、骨再生速度を速めることができる。 In addition to OCP and collagen, the porous complex of the present invention may contain, for example, bone-forming cytokines (bone morphogenetic protein-2, transforming growth factor β1, etc.), and contain such cytokines. As a result, the bone regeneration speed can be increased.
本発明の多孔質複合体は、それ以外にも、この分野で慣用の配合成分を含ませることができる。かかる配合成分としては、例えば、生体吸収性高分子(ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリ乳酸−ポリエチレングリコール共重合体等)、OCP以外の生体吸収性リン酸カルシウム(β−TCP等)や非吸収性リン酸カルシウム(ヒドロキシアパタイト等)を挙げることができる。 In addition to the above, the porous composite of the present invention can contain compounding ingredients commonly used in this field. Examples of such ingredients include bioabsorbable polymers (polyglycolic acid, polylactic acid, polylactic acid-polyethylene glycol copolymer, etc.), bioabsorbable calcium phosphates (such as β-TCP) other than OCP, and non-absorbable calcium phosphates. (Hydroxyapatite etc.) can be mentioned.
[骨再生材料]
本発明は、さらに上記の多孔質複合体を含む骨再生材料に関する。骨再生材料は歯科口腔外科領域、整形外科領域における骨欠損修復、開頭、開胸術後の骨欠損修復などに用いることができる。例えば、歯科口腔外科領域においては、歯周病、嚢胞腔、萎縮歯槽堤、顎裂部、抜歯窩等により生じた骨欠損に対し、多孔質複合体からなる骨再生材料を補填することにより、数週間から数ヶ月には優れた骨再生効果が確認できる。整形外科領域においては、例えば骨腫瘍切除後の骨欠損、骨折等外傷により生じた骨欠損に対し、本骨再生材料を骨欠損部に補填し、骨再生を促進することができる。
[Bone regeneration material]
The present invention further relates to a bone regeneration material containing the above porous composite. The bone regeneration material can be used for bone defect repair in the dental and oral surgery region and the orthopedic region, craniotomy, bone defect repair after thoracotomy, and the like. For example, in the field of dental and oral surgery, bone replacement caused by periodontal disease, cyst cavity, atrophied alveolar ridge, jaw cleft, extraction fossa, etc., is made up by replenishing bone regeneration material consisting of a porous composite, Excellent bone regeneration effect can be confirmed in weeks to months. In the orthopedic region, for example, bone regeneration caused by trauma such as bone defect after bone tumor resection and bone fracture can be compensated for in the bone defect part to promote bone regeneration.
以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated in detail, this invention is not limited to these.
(実施例1)
(1)OCPの調製
まず、OCP調製用の1液および2液を次の通り調製した。
[1液]リン酸二水素ナトリウム二水和物31.2gを蒸留水2500gに溶解し、1液を調製した。
[2液]酢酸カルシウム一水和物35.2gを蒸留水2500gに溶解し、2液を調製した。
(Example 1)
(1) Preparation of OCP First, 1 liquid and 2 liquids for OCP preparation were prepared as follows.
[Part 1] 31.2 g of sodium dihydrogen phosphate dihydrate was dissolved in 2500 g of distilled water to prepare Part 1.
[Second liquid] 35.2 g of calcium acetate monohydrate was dissolved in 2500 g of distilled water to prepare two liquids.
次に、1液をセパラブルフラスコに入れ、マントルヒーターにて70℃に昇温した。次に、撹拌機(東京理化器械社製、MAZELA Z)に撹拌翼(羽径12cm)を取り付け、250rpmの速度で撹拌しながら、1液に対して2液を約28mL/minの速度で滴下した。滴下終了後、1液と2液の混合液を70℃、250rpmでさらに2時間撹拌した。 Next, 1 liquid was put into the separable flask, and it heated up at 70 degreeC with the mantle heater. Next, an agitator (Mazela Z, manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd.) was equipped with a stirring blade (feather diameter 12 cm), and two liquids were dropped at a rate of about 28 mL / min while stirring at a speed of 250 rpm. did. After completion of the dropwise addition, the liquid mixture of the first liquid and the second liquid was further stirred at 70 ° C. and 250 rpm for 2 hours.
次に、上記混合液中に生成した沈殿物をメンブレンフィルター(孔径3μm、アドバンテック東洋社製、A300A293C)を用いてろ過し、回収した。回収した沈殿物を蒸留水1500mLに分散させ、15分間撹拌し洗浄した。同様のろ過、洗浄の工程をさらに3回繰り返した。 Next, the precipitate produced in the mixed solution was filtered and collected using a membrane filter (pore size: 3 μm, manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd., A300A293C). The collected precipitate was dispersed in 1500 mL of distilled water, stirred for 15 minutes and washed. The same filtration and washing steps were repeated three more times.
次に、洗浄後の沈殿物を、恒温乾燥機を用いて30℃で24時間乾燥した。乾燥後の沈殿物を電動ミルにて粉砕した後、ふるいを用いて粒径を300〜500μmに分級し、粉体を得た。最後に、得られた粉体に対して120℃で2時間の乾熱滅菌を行った。 Next, the washed precipitate was dried at 30 ° C. for 24 hours using a constant temperature dryer. After the dried precipitate was pulverized by an electric mill, the particle size was classified to 300 to 500 μm using a sieve to obtain a powder. Finally, the obtained powder was sterilized by dry heat at 120 ° C. for 2 hours.
(2)OCP/コラーゲン複合体(多孔質複合体)の調製
I型及びIII型コラーゲンを含むブタ真皮由来コラーゲン(日本ハム社製、NMPコラーゲンPS)1重量部を4℃に冷却した蒸留水200重量部に溶解し、約0.5重量%のコラーゲン溶液を得た。液温を4℃に保ちながらコラーゲン水溶液に水酸化ナトリウム水溶液を加え、pHを約7.4に調整しコラーゲン懸濁液を得た。次いで、得られたコラーゲン懸濁液を遠心瓶に入れ、遠心分離機(トミー精工社製、GRX−250)を用い7000×gの遠心力で20分間遠心した後、コラーゲン懸濁液中のコラーゲンが3重量%となるように上清を廃棄しコラーゲンゲルを得た。
(2) Preparation of OCP / collagen complex (porous complex) Distilled water 200 in which 1 part by weight of porcine dermis-derived collagen (NMP collagen PS, manufactured by Nippon Ham Co.) containing type I and type III collagen was cooled to 4 ° C. Dissolved in parts by weight, a collagen solution of about 0.5% by weight was obtained. While maintaining the liquid temperature at 4 ° C., an aqueous sodium hydroxide solution was added to the collagen aqueous solution to adjust the pH to about 7.4 to obtain a collagen suspension. Next, the obtained collagen suspension is put into a centrifuge bottle, and centrifuged for 20 minutes at a centrifugal force of 7000 × g using a centrifuge (Tomy Seiko Co., Ltd., GRX-250), and then the collagen in the collagen suspension. The supernatant was discarded to obtain 3% by weight of the collagen gel.
次に、コラーゲンゲルにOCP(粒径300〜500μm)をOCPとコラーゲンが重量比で77:23となるように加えた後、撹拌翼(相互理化学硝子製作所社製、4枚羽根、羽径 7cm)を取り付けた撹拌機(東京理化器械社製、MAZELA Z)を用いて、300rpmの回転速度で60秒混合し、OCP/コラーゲン複合ゲルを得た。これを円柱状の内部空間を有するプラスチック容器(内径8.5mm、容積約3.0cm3)に入れて、230×gの遠心力で1分間遠心して脱泡した。 Next, OCP (particle size: 300 to 500 μm) was added to the collagen gel so that the OCP and collagen were in a weight ratio of 77:23, and then a stirring blade (manufactured by Mutual Chemical Glass Co., Ltd., 4 blades, feather diameter 7 cm) ) Was used for mixing for 60 seconds at a rotation speed of 300 rpm using an agitator (manufactured by Tokyo Rika Kikai Co., Ltd., MAZELA Z) to obtain an OCP / collagen composite gel. This was put into a plastic container (inner diameter: 8.5 mm, volume: about 3.0 cm 3 ) having a cylindrical inner space, and defoamed by centrifugation at 230 × g for 1 minute.
容器を密閉し、被凍結体の容積に対して大過剰の−80℃に冷却したメタノールに浸漬して急速に凍結した。容器を開栓した後、凍結体を凍結乾燥機により乾燥(−10℃、48時間)させ成形した。次いで、これを減圧下、150℃で24時間加熱し熱脱水架橋を行った。得られた円柱体はメスで厚さ1.5mmまたは15mmにカットした。最後に、電子線を照射(15kGy)し、滅菌を行った。このようにして、実施例1の多孔質複合体を得た。 The container was sealed and rapidly frozen by immersion in methanol cooled to -80 ° C. in a large excess relative to the volume of the object to be frozen. After opening the container, the frozen body was dried (−10 ° C., 48 hours) with a freeze dryer to form. Next, this was heated at 150 ° C. under reduced pressure for 24 hours to carry out thermal dehydration crosslinking. The obtained cylindrical body was cut into a thickness of 1.5 mm or 15 mm with a knife. Finally, electron beam irradiation (15 kGy) was performed for sterilization. In this way, the porous composite of Example 1 was obtained.
(実施例2)
実施例2では、コラーゲンゲルとOCPの混合の際に、撹拌翼を取り付けた撹拌機を用い、300rpmの回転速度で300秒混合した。それ以外は実施例1と同じ方法により多孔質複合体を得た。
(Example 2)
In Example 2, when mixing the collagen gel and OCP, the mixing was performed for 300 seconds at a rotation speed of 300 rpm using a stirrer equipped with a stirring blade. Otherwise, a porous composite was obtained in the same manner as in Example 1.
(実施例3)
実施例3では、コラーゲンゲルとOCPの混合の際に、自転公転ミキサー(シンキー社製、あわとり練太郎 ARE−310)を用い、1000rpmの回転速度で60秒混合した。それ以外は実施例1と同じ方法により多孔質複合体を得た。
(Example 3)
In Example 3, the collagen gel and OCP were mixed for 60 seconds at a rotation speed of 1000 rpm using a rotation and revolution mixer (Shinky Corp., Awatori Nertaro ARE-310). Otherwise, a porous composite was obtained in the same manner as in Example 1.
(比較例1)
比較例1では、コラーゲンゲルとOCPの混合の際に、撹拌翼を取り付けた撹拌機を用い、100rpmの回転速度で15秒混合した。それ以外は実施例1と同じ方法により多孔質複合体を得た。
(Comparative Example 1)
In Comparative Example 1, when the collagen gel and OCP were mixed, they were mixed for 15 seconds at a rotation speed of 100 rpm using a stirrer equipped with a stirring blade. Otherwise, a porous composite was obtained in the same manner as in Example 1.
(比較例2)
比較例2では、コラーゲンゲルとOCPの混合の際に、撹拌翼を取り付けた撹拌機を用い、300rpmの回転速度で900秒混合した。それ以外は実施例1と同じ方法により多孔質複合体を得た。
(Comparative Example 2)
In Comparative Example 2, the collagen gel and OCP were mixed using a stirrer equipped with a stirring blade for 900 seconds at a rotation speed of 300 rpm. Otherwise, a porous composite was obtained in the same manner as in Example 1.
(比較例3)
コラーゲンゲルとOCPの混合の際に、自転公転ミキサーを用い、300rpmの回転速度で15秒混合した。それ以外は実施例1と同じ方法により多孔質複合体を得た。
(Comparative Example 3)
When the collagen gel and OCP were mixed, they were mixed for 15 seconds at a rotation speed of 300 rpm using a rotating and rotating mixer. Otherwise, a porous composite was obtained in the same manner as in Example 1.
(比較例4)
コラーゲンゲルとOCPの混合の際に、自転公転ミキサーを用い、2000rpmの回転速度で900秒混合した。それ以外は実施例1と同じ方法により多孔質複合体を得た。
(Comparative Example 4)
When the collagen gel and OCP were mixed, they were mixed for 900 seconds at a rotation speed of 2000 rpm using a rotation and revolution mixer. Otherwise, a porous composite was obtained in the same manner as in Example 1.
(画像解析)
画像解析は、1.5mm厚にカットした試料の断面を以下の条件にて観察したSEM画像について行った。解析範囲は試料の断面上任意の1辺 約5mmの正方形内(以下、解析画像)を解析に用いた。
測定装置:SU1510、日立製作所社製
測定条件:加速電圧 15kV
低真空(30Pa)
反射電子観察
WD 40mm
倍率 15倍
(Image analysis)
Image analysis was performed on an SEM image obtained by observing a cross section of a sample cut to a thickness of 1.5 mm under the following conditions. As the analysis range, an arbitrary inside of a square having a side of about 5 mm on the cross section of the sample (hereinafter referred to as an analysis image) was used for the analysis.
Measuring device: SU1510, manufactured by Hitachi, Ltd. Measurement conditions: Accelerating voltage 15 kV
Low vacuum (30 Pa)
Reflected electron observation WD 40mm
Magnification 15 times
(フラクタル次元)
OCP粒子のコラーゲンマトリックス上への分散度合を定量化するために、フラクタル次元(D)を用いた。フラクタル次元(D)の算出は、以下の手順で行った。なお、下に示すすべての画像処理は画像処理ソフトウェア ImageJを用いて行った。
1.解析画像の取得
2.解析画像を二値化(閾値:90pixel)
3.色調の反転
4.解析画像をn2分割(n=2、3、4、5)
5.各区画について、OCP粒子を示す画像の面積分率を算出
6.各分割水準毎の面積分率の平均値(μn)および標準偏差(σn)を算出
7.D(n)を下式により算出
D(n)=σn/μn
8.D(n)と1/nを両対数グラフにプロットし、近似直線の傾きを求める
9.近似直線の傾きに−1を乗じ、フラクタル次元(D)を算出
(Fractal dimension)
The fractal dimension (D) was used to quantify the degree of dispersion of OCP particles on the collagen matrix. The fractal dimension (D) was calculated according to the following procedure. Note that all image processing shown below was performed using image processing software ImageJ.
1. 1. Acquisition of analysis image Binary analysis image (threshold: 90 pixels)
3. Inversion of color 4. The analysis image is divided into n 2 (n = 2, 3, 4, 5)
5). 5. Calculate area fraction of image showing OCP particles for each compartment 6. Calculate the average area fraction (μ n ) and standard deviation (σ n ) for each division level Calculate D (n) by the following formula
D (n) = σ n / μ n
8). 8. D (n) and 1 / n are plotted on a log-log graph to determine the slope of the approximate line. Multiply the slope of the approximate line by -1 to calculate the fractal dimension (D)
(300μm以上のOCP粒子割合)
300μm以上のOCP粒子割合を以下の手順にて算出した。
1.解析画像の取得
2.解析画像を二値化(閾値:90pixel)
3.色調の反転
4.粒子径の計測
5.300μm以上のOCP粒子の抽出
6.全粒子面積(Sw)および300μm以上のOCP粒子面積(Sd)の算出
7.300μm以上のOCP粒子割合(Rd)を下式により算出
Rd =Sd/Sw×100
なお、本測定における粒子径とは、各凝集粒子の輪郭に接する最長間隔の平行線間の距離が300μm以上として定義した。
(OCP particle ratio of 300 μm or more)
The ratio of OCP particles of 300 μm or more was calculated by the following procedure.
1. 1. Acquisition of analysis image Binary analysis image (threshold: 90 pixels)
3. Inversion of color 4. Measurement of particle diameter 5. Extraction of OCP particles of 300 μm or more Calculation of total particle area (S w ) and OCP particle area (S d ) of 300 μm or more 7. Calculate ratio of OCP particles (R d ) of 300 μm or more by the following formula
R d = S d / S w × 100
In addition, the particle diameter in this measurement was defined as the distance between the parallel lines of the longest distance contacting the outline of each aggregated particle being 300 μm or more.
(コラーゲン部分割合)
OCPとコラーゲンゲルの混合が十分かを評価する指標として、コラーゲン部分割合を解析画像から算出した。コラーゲン部分割合の算出は、以下の手順で行った。
1.解析画像の取得
2.解析画像を二値化(閾値:90pixel)
3.コラーゲン部分の抽出
4.コラーゲン部分面積(Sc)の算出
5.解析画像面積(SA)の算出
6.コラーゲン部分面積割合(Rc)を下式により算出
Rc =Sc/SA×100
(Collagen fraction)
As an index for evaluating whether mixing of OCP and collagen gel is sufficient, the collagen portion ratio was calculated from the analysis image. The calculation of the collagen fraction was performed according to the following procedure.
1. 1. Acquisition of analysis image Binary analysis image (threshold: 90 pixels)
3. 3. Extraction of collagen part 4. Calculation of collagen partial area (S c ) 5. Calculation of analysis image area (S A ) Collagen partial area ratio (R c ) is calculated by the following formula: R c = S c / S A × 100
(圧縮弾性率測定)
温度:25℃、湿度:65%の環境下、直径8.5mm、長さ15mmの円柱状試料をリン酸緩衝生理食塩水(10mMリン酸ナトリウム、0.14M塩化ナトリウム、pH7.4)に30分間浸漬した。その後、試料表面の水気を軽く拭い、精密万能試験機(オートグラフAGS−J、株式会社島津製作所製、ロードセル容量:1kN)を用いて、単軸荷重を負荷した。具体的には、サンプルを長辺が下方圧盤(材質:ステンレス、内径:100mm、厚さ:25mm)に対し垂直となるようにセットした後、上方圧盤(材質:ステンレス、内径:100mm、厚さ:25mm)を10mm/minの速度で下げ、サンプルが80%歪んだところで試験機を止めた。そして、得られた応力−ひずみ曲線の初期直線部分の傾きから圧縮弾性率を求めた。
(Compressive modulus measurement)
A cylindrical sample having a diameter of 8.5 mm and a length of 15 mm was placed in phosphate buffered saline (10 mM sodium phosphate, 0.14 M sodium chloride, pH 7.4) in an environment of temperature: 25 ° C. and humidity: 65%. Immerse for a minute. Thereafter, water on the sample surface was wiped lightly, and a uniaxial load was applied using a precision universal testing machine (Autograph AGS-J, manufactured by Shimadzu Corporation, load cell capacity: 1 kN). Specifically, after setting the sample so that the long side is perpendicular to the lower platen (material: stainless steel, inner diameter: 100 mm, thickness: 25 mm), the upper platen (material: stainless steel, inner diameter: 100 mm, thickness) 25 mm) at a speed of 10 mm / min, and the test machine was stopped when the sample was distorted 80%. And the compression elastic modulus was calculated | required from the inclination of the initial linear part of the obtained stress-strain curve.
(気孔率測定)
上記実施例1〜3並びに比較例1〜4で得られた直径8.5mm、厚さ1.5mmの円柱状(タブレット状)のサンプルについて、気孔率を以下のようにして測定した。
(Porosity measurement)
The porosity of the columnar (tablet) samples having a diameter of 8.5 mm and a thickness of 1.5 mm obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 to 4 was measured as follows.
前処理として、サンプルを120℃で4時間恒温乾燥した。前処理後の各サンプルについて、以下の測定装置を用いた水銀圧入法により、以下の条件で細孔直径0.0036〜200μmの細孔分布を求めた。
測定装置:オートポアIV9520(micromeritics社製)
測定条件:サンプルと水銀の接触角:140deg
水銀の表面張力0.48N/m(1dyne=10−5Nで換算)。
As a pretreatment, the sample was dried at 120 ° C. for 4 hours. About each sample after a pre-processing, pore distribution with a pore diameter of 0.0036-200 micrometers was calculated | required on condition of the following by the mercury intrusion method using the following measuring apparatuses.
Measuring device: Autopore IV9520 (manufactured by micromeritics)
Measurement conditions: Contact angle between sample and mercury: 140 deg
Mercury surface tension 0.48 N / m (in terms of 1 dyne = 10 −5 N).
気孔率は水銀圧入法による全細孔容積と見かけ密度を用いて下記の式により求められる。
気孔率(%)= 全細孔容積/{(1/見かけ密度)+全細孔容積}×100
The porosity is obtained by the following formula using the total pore volume and the apparent density by the mercury intrusion method.
Porosity (%) = total pore volume / {(1 / apparent density) + total pore volume} × 100
上記実施例および比較例についてのフラクタル次元(D)、300μm以上のOCP粒子割合、コラーゲン部分割合、気孔率および圧縮弾性率の測定結果を表1に示す。 Table 1 shows the measurement results of the fractal dimension (D), the ratio of OCP particles of 300 μm or more, the ratio of collagen portion, the porosity, and the compression modulus for the above Examples and Comparative Examples.
表1に示される結果から、実施例1〜3のサンプル(多孔質複合体)は、フラクタル次元が0.6以上、300μm以上粒子割合が75%以上かつコラーゲン部分割合が3%以下であり、所定の粒子径が維持されたままOCP粒子が均一分散し、かつ十分な混合が達成されていた。
比較例1のサンプルは、フラクタル次元が0.78、300μm以上粒子割合が96%で所定の粒子径が維持されたままOCP粒子が均一分散していたが、やや撹拌が不足していたため、コラーゲン部分割合が11%と十分な混合が達成されていなかった。
比較例2のサンプルは、300μm以上粒子割合が88%で、コラーゲンのみの部分は存在しておらず、所定の粒子径が維持されたまま十分な混合が達成されていたが、意外なことに過度の撹拌によりOCP粒子はディスク外周部に偏在しており、フラクタル次元は0.56以下と低い値であった。
比較例3のサンプルは、300μm以上粒子割合が90%と所定の粒子径は維持されていたものの、フラクタル次元が0.53と低く、かつコラーゲン部分割合が45%と非常に高い結果となった。これらの結果から、この撹拌条件では明らかに撹拌不足であると考えられた。
比較例4のサンプルは、フラクタル次元が0.68で、コラーゲンのみの部分は存在しておらず、OCP粒子が均一分散し、かつ十分な混合が達成されていたが、300μm以上粒子割合が74%と所定の粒子径の維持は困難であった。これは、強い力で長時間撹拌したため、OCP粒子が解砕され、300μm以上粒子割合が減少したものと考えられた。
From the results shown in Table 1, in the samples of Examples 1 to 3 (porous composite), the fractal dimension is 0.6 or more, 300 μm or more, the particle ratio is 75% or more, and the collagen portion ratio is 3% or less, The OCP particles were uniformly dispersed while maintaining a predetermined particle size, and sufficient mixing was achieved.
In the sample of Comparative Example 1, the OCP particles were uniformly dispersed while maintaining the predetermined particle size with a fractal dimension of 0.78, a particle ratio of 96 μm or more and a predetermined particle size being maintained, but since the stirring was slightly insufficient, collagen Adequate mixing with a partial ratio of 11% was not achieved.
The sample of Comparative Example 2 had a particle ratio of 300 μm or more, 88%, no collagen-only part, and sufficient mixing was achieved while maintaining a predetermined particle diameter. OCP particles were unevenly distributed on the outer periphery of the disk due to excessive stirring, and the fractal dimension was a low value of 0.56 or less.
In the sample of Comparative Example 3, the particle ratio of 300 μm or more was maintained at 90% and the predetermined particle diameter was maintained, but the fractal dimension was as low as 0.53 and the collagen portion ratio was as high as 45%. . From these results, it was considered that the stirring condition was clearly insufficient.
The sample of Comparative Example 4 had a fractal dimension of 0.68, no collagen-only portion, OCP particles were uniformly dispersed, and sufficient mixing was achieved, but the particle ratio of 300 μm or more was 74. % And a predetermined particle diameter were difficult to maintain. This was thought to be because OCP particles were crushed due to strong stirring for a long time, and the particle ratio decreased by 300 μm or more.
また、実施例1〜3のサンプルの圧縮弾性率は約0.1MPaと比較例1〜4のサンプルの1.6〜3.1倍高い値となった。これは、実施例1〜3においてOCP粒子が複合体全体に均一分散し、かつOCPとコラーゲンが十分に混合されていない部分が少ないため、OCP粒子が複合体中で補強材として効率的に機能したためと考えられる。 Moreover, the compression elastic modulus of the samples of Examples 1 to 3 was about 0.1 MPa, 1.6 to 3.1 times higher than the samples of Comparative Examples 1 to 4. This is because the OCP particles are uniformly dispersed throughout the composite in Examples 1 to 3 and there are few portions where the OCP and collagen are not sufficiently mixed, so that the OCP particles function efficiently as a reinforcing material in the composite. It is thought that it was because.
今回開示された実施形態および実施例はすべての点で例示であって制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した説明ではなくて請求の範囲によって示され、請求の範囲と均等の意味および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。 It should be understood that the embodiments and examples disclosed herein are illustrative and non-restrictive in every respect. The scope of the present invention is defined by the terms of the claims, rather than the description above, and is intended to include any modifications within the scope and meaning equivalent to the terms of the claims.
本発明の多孔質複合体及びそれを含む骨再生材料は、高い骨再生能を有し、かつ適度な機械的強度を有することから、主に歯科口腔外科領域、整形外科領域における骨欠損修復に有用である。 Since the porous composite of the present invention and the bone regeneration material containing the same have high bone regeneration ability and appropriate mechanical strength, they are mainly used for bone defect repair in dental and oral surgery and orthopedics. Useful.
Claims (3)
多孔質複合体の平面である5.0mm×5.0mmの範囲を走査型電子顕微鏡(SEM)で15倍に拡大して得られた画像において、第8リン酸カルシウムの凝集粒子のフラクタル次元(D)が0.60以上であり、第8リン酸カルシウムの凝集粒子全体における300μm以上の長さを有する凝集粒子の面積割合が75%以上であり、かつa)第8リン酸カルシウムの凝集粒子からなる部分、b)第8リン酸カルシウムの微粒子及びコラーゲンからなる部分、並びにc)コラーゲンからなる部分のうち、c)コラーゲンからなる部分の面積割合が5%以下であることを特徴とする、多孔質複合体。 A porous composite containing eighth calcium phosphate and collagen,
In the image obtained by enlarging the range of 5.0 mm × 5.0 mm, which is the plane of the porous composite, with a scanning electron microscope (SEM) 15 times, the fractal dimension (D) of the aggregated particles of the eighth calcium phosphate There is 0.60 or more, a portion area ratio of the agglomerated particles having a 300μm or longer in total aggregated particles eighth calcium phosphate consists of agglomerated particles of Ri der least 75%, and a) 8 phosphate, b 8) A porous composite characterized in that an area ratio of c) a portion made of collagen among the portions made of fine particles of eighth calcium phosphate and collagen and c) a portion made of collagen is 5% or less .
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