JP5757647B2 - SNP marker for hypertension, method for determining risk of developing hypertension, and method for using small animals susceptible to hypertension susceptibility genes - Google Patents
SNP marker for hypertension, method for determining risk of developing hypertension, and method for using small animals susceptible to hypertension susceptibility genes Download PDFInfo
- Publication number
- JP5757647B2 JP5757647B2 JP2010034415A JP2010034415A JP5757647B2 JP 5757647 B2 JP5757647 B2 JP 5757647B2 JP 2010034415 A JP2010034415 A JP 2010034415A JP 2010034415 A JP2010034415 A JP 2010034415A JP 5757647 B2 JP5757647 B2 JP 5757647B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- snp
- base sequence
- hypertension
- risk
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 title claims description 162
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 52
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 71
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title description 12
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 73
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 73
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 73
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 38
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 38
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 31
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 26
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 22
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 18
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 7
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 claims description 7
- 101710174669 Trimeric intracellular cation channel type A Proteins 0.000 claims 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 56
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 51
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 25
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 25
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 22
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 21
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 19
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- 101710174668 Trimeric intracellular cation channel type B Proteins 0.000 description 11
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 10
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 10
- 102100022234 Trimeric intracellular cation channel type B Human genes 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 9
- 210000003975 mesenteric artery Anatomy 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000007530 Essential hypertension Diseases 0.000 description 7
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 7
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 6
- SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N phenylephrine Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=CC(O)=C1 SONNWYBIRXJNDC-VIFPVBQESA-N 0.000 description 6
- 229960001802 phenylephrine Drugs 0.000 description 6
- 229930003347 Atropine Natural products 0.000 description 5
- RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N Hyosciamin-hydrochlorid Natural products CN1C(C2)CCC1CC2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- RKUNBYITZUJHSG-SPUOUPEWSA-N atropine Chemical compound O([C@H]1C[C@H]2CC[C@@H](C1)N2C)C(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 RKUNBYITZUJHSG-SPUOUPEWSA-N 0.000 description 5
- 229960000396 atropine Drugs 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 5
- 102000004136 Vasopressin Receptors Human genes 0.000 description 4
- 108090000643 Vasopressin Receptors Proteins 0.000 description 4
- 208000006218 bradycardia Diseases 0.000 description 4
- 230000036471 bradycardia Effects 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 102000010180 Endothelin receptor Human genes 0.000 description 3
- 108050001739 Endothelin receptor Proteins 0.000 description 3
- 101150023186 GRK1 gene Proteins 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 3
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102000008873 Angiotensin II receptor Human genes 0.000 description 2
- 108050000824 Angiotensin II receptor Proteins 0.000 description 2
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 2
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 2
- 108010034219 Insulin Receptor Substrate Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100025087 Insulin receptor substrate 1 Human genes 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 102000014415 Muscarinic acetylcholine receptor Human genes 0.000 description 2
- 108050003473 Muscarinic acetylcholine receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000001424 Ryanodine receptors Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 2
- 229940127088 antihypertensive drug Drugs 0.000 description 2
- 229940124572 antihypotensive agent Drugs 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000000467 autonomic pathway Anatomy 0.000 description 2
- 108091008698 baroreceptors Proteins 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- AIXAANGOTKPUOY-UHFFFAOYSA-N carbachol Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCOC(N)=O AIXAANGOTKPUOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004484 carbachol Drugs 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 208000032873 genetic essential hypertension Diseases 0.000 description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 230000008035 nerve activity Effects 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 210000001774 pressoreceptor Anatomy 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 2
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 2
- 108091052345 ryanodine receptor (TC 1.A.3.1) family Proteins 0.000 description 2
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 2
- 101150007969 ADORA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150010675 ATP10D gene Proteins 0.000 description 1
- 102100037242 Amiloride-sensitive sodium channel subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 102000004881 Angiotensinogen Human genes 0.000 description 1
- 108090001067 Angiotensinogen Proteins 0.000 description 1
- 102000030169 Apolipoprotein C-III Human genes 0.000 description 1
- 108010056301 Apolipoprotein C-III Proteins 0.000 description 1
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101150069541 Atp2a3 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150091904 Atp2b1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100039705 Beta-2 adrenergic receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000002053 C09CA06 - Candesartan Substances 0.000 description 1
- 101150045455 CACNA1E gene Proteins 0.000 description 1
- 101150020912 CACNA2D2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150006300 CALCR gene Proteins 0.000 description 1
- 101150075558 CHGA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150066399 COL4A1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229940127291 Calcium channel antagonist Drugs 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 101150050700 ERCC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150113631 EXOSC3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150019331 FGF2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010038179 G-protein beta3 subunit Proteins 0.000 description 1
- 101150009511 GNA14 gene Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101150007061 Gnai2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150091927 HLA-DMB gene Proteins 0.000 description 1
- 101000901079 Homo sapiens Acid-sensing ion channel 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000740448 Homo sapiens Amiloride-sensitive sodium channel subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000650564 Homo sapiens DNA-directed RNA polymerase I subunit RPA34 Proteins 0.000 description 1
- 101000844782 Homo sapiens Disks large-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000614690 Homo sapiens Kv channel-interacting protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000589873 Homo sapiens Parathyroid hormone/parathyroid hormone-related peptide receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000905839 Homo sapiens Phospholipid-transporting ATPase VA Proteins 0.000 description 1
- 101001032038 Homo sapiens Potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000770770 Homo sapiens Serine/threonine-protein kinase WNK1 Proteins 0.000 description 1
- 101000974731 Homo sapiens Small conductance calcium-activated potassium channel protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101150044866 KCNMB4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940121743 Muscarinic receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004020 Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108090000417 Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 101150077220 PTPRT gene Proteins 0.000 description 1
- 102000023159 Platelet Glycoprotein GPIb-IX Complex Human genes 0.000 description 1
- 108010045766 Platelet Glycoprotein GPIb-IX Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000004257 Potassium Channel Human genes 0.000 description 1
- 102100038718 Potassium/sodium hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4 Human genes 0.000 description 1
- 101150062777 Ppp1r1b gene Proteins 0.000 description 1
- 101150082076 RGS20 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101150115387 Rac2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108091006630 SLC13A1 Proteins 0.000 description 1
- 101150068288 SLC22A7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150049674 SLC26A8 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000004239 Secondary hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 108010015330 Steroid 17-alpha-Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007488 abnormal function Effects 0.000 description 1
- 108010076723 adducin Proteins 0.000 description 1
- 102000011759 adducin Human genes 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 229940125364 angiotensin receptor blocker Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229940030600 antihypertensive agent Drugs 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000002565 arteriole Anatomy 0.000 description 1
- 230000002567 autonomic effect Effects 0.000 description 1
- 108010014499 beta-2 Adrenergic Receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N candesartan Chemical compound CCOC1=NC2=CC=CC(C(O)=O)=C2N1CC(C=C1)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NN=N[N]1 SGZAIDDFHDDFJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000932 candesartan Drugs 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009850 completed effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002458 fetal heart Anatomy 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000000713 mesentery Anatomy 0.000 description 1
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004089 microcirculation Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000472 muscarinic agonist Substances 0.000 description 1
- 210000002464 muscle smooth vascular Anatomy 0.000 description 1
- KSNUCNRMDYJBKT-UHFFFAOYSA-N n-[3-[4-[4-(2-oxo-3,4-dihydroquinolin-1-yl)piperidine-1-carbonyl]phenoxy]propyl]acetamide Chemical compound C1=CC(OCCCNC(=O)C)=CC=C1C(=O)N1CCC(N2C3=CC=CC=C3CCC2=O)CC1 KSNUCNRMDYJBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001452 natriuretic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000036581 peripheral resistance Effects 0.000 description 1
- 108020001213 potassium channel Proteins 0.000 description 1
- IENZQIKPVFGBNW-UHFFFAOYSA-N prazosin Chemical compound N=1C(N)=C2C=C(OC)C(OC)=CC2=NC=1N(CC1)CCN1C(=O)C1=CC=CO1 IENZQIKPVFGBNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001289 prazosin Drugs 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 208000023516 stroke disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 230000004218 vascular function Effects 0.000 description 1
- 230000006442 vascular tone Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、高血圧発症のリスク判定に用いることができるＳＮＰからなる遺伝子マーカー、該ＳＮＰを用いた高血圧発症リスク判定方法、及び高血圧感受性遺伝子を欠損させた小動物の使用方法に関する。 The present invention relates to a genetic marker composed of SNPs that can be used to determine the risk of developing hypertension, a method for determining the risk of developing hypertension using the SNP, and a method for using a small animal deficient in a hypertension susceptibility gene.
高血圧は、例えば、冠動脈疾患、脳卒中、慢性腎疾患等の主要な発症要因であり、高血圧の予防は、社会的・公衆衛生的に重要である。高血圧は、多くの要因によって発症が誘引される多因子疾患であり、これらの高血圧を誘引する要因を危険因子（リスクファクター）という。高血圧の危険因子は、主に環境要因と遺伝要因に大別されるが、これらの相互作用が重要な役割を果たすと考えられている。 High blood pressure is a major onset factor such as coronary artery disease, stroke, and chronic kidney disease, and prevention of hypertension is important in terms of social and public health. Hypertension is a multifactorial disease whose onset is induced by many factors, and these factors that induce hypertension are called risk factors. The risk factors for hypertension are mainly classified into environmental factors and genetic factors, and these interactions are considered to play an important role.
危険因子のうち、環境要因としては、例えば、加齢、肥満、ストレス、塩分過剰摂取等が挙げられる。一方、遺伝要因としては、様々な高血圧感受性遺伝子が知られている。ここで、高血圧感受性遺伝子とは、前記遺伝子を保有することで高血圧を発症する危険率が上昇する遺伝子を意味する。つまり、高血圧感受性遺伝子を有するヒトは、高血圧感受性遺伝子を有さないヒトよりも高血圧に罹患し易いと判断される。そして、高血圧のような多因子疾患においては、その感受性遺伝子の多くは、一塩基多型（ＳＮＰ）等の多型の対立遺伝子（アレル）であると考えられている。 Among risk factors, examples of environmental factors include aging, obesity, stress, excessive intake of salt, and the like. On the other hand, various hypertension susceptibility genes are known as genetic factors. Here, the hypertension susceptibility gene means a gene whose risk of developing hypertension increases by possessing the gene. That is, it is judged that a human having a hypertension susceptibility gene is more susceptible to hypertension than a human having no hypertension susceptibility gene. In multifactorial diseases such as hypertension, most of the susceptibility genes are considered to be polymorphic alleles (alleles) such as single nucleotide polymorphisms (SNPs).
これまで、遺伝子多型を含む高血圧感受性遺伝子としては、アンギオテンシノーゲン、α−アデューシン、β２アドレナリン受容体、グリコプロテインＩａ（ＧＰＩａ）、ケモカイン受容体２（ＣＣＲ２）、アポリポプロテインＣ（ＡｐｏＣ−III）、Ｇ−タンパク質β３サブユニット（ＧＰβ３）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）、インスリン受容体サブストレート１（ＩＲＳ−１）、グリコプロテインＩｂα（ＧＰＩｂα）、Ｃ−タイプ・ナトリウム利尿ホルモン（ＣＮＰ）、ヘム・オキシゲナーゼ１（ＨＭＯＸ−１）、ＳＣＮＮ１Ａ等の各遺伝子が報告されている（例えば、特許文献１〜４参照。）。さらに近年、ＣＹＰ１７遺伝子（ｒｓ６１６２）多型、ＥＸＯＳＣ３遺伝子（ｒｓ７１５８）多型、ＡＣＣＮ１遺伝子（ｒｓ２８９３３）多型、ＫＣＮＭＢ４遺伝子（ｒｓ７１０６５２）多型、ＫＣＮＩＰ２遺伝子（ｒｓ７５５３８１）多型、ＡＴＰ２Ａ３遺伝子（ｒｓ８８７３８７）多型、ＲＡＣ２遺伝子（ｒｓ９２９０２３）多型、ＣＤ３ＥＡＰ遺伝子（ｒｓ９６７５９１）多型、ＣＡＬＣＲ遺伝子（ｒｓ１０４２１３８）多型、ＡＴＰ１０Ｄ遺伝子（ｒｓ１０５８７９３）多型、ＧＮＡ１４遺伝子（ｒｓ１８０１２５８）多型、ＰＴＨＲ１遺伝子（ｒｓ１８６９８７２）多型、ＡＴＰ２Ｂ１遺伝子（ｒｓ２０７０７５９）多型、ＨＬＡ−ＤＭＢ遺伝子（ｒｓ２０７１５５６）多型、ＳＬＣ１３Ａ１遺伝子（ｒｓ２１４０５１６）多型、ＳＬＣ２Ａ１１遺伝子（ｒｓ２２３６６２０）多型、ＧＮＡＩ２遺伝子（ｒｓ２２３６９４３）多型、ＣＡＣＮＡ２Ｄ２遺伝子（ｒｓ２２３６９５７）多型、ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子（ｒｓ２２５５３９０）多型、ＳＬＣ２２Ａ７遺伝子（ｒｓ２２７０８６０）多型、ＫＣＮＮ１遺伝子（ｒｓ２２７８９９３）多型、ＳＬＣ２１Ａ６遺伝子（ｒｓ２２９１０７５）多型、ＣＡＣＮＡ１Ｅ遺伝子（ｒｓ２２９３９９０）多型、ＳＬＣ２６Ａ８遺伝子（ｒｓ２２９５８５２）多型、ＥＲＣＣ１遺伝子（ｒｓ２２９８８８１）多型、ＤＬＧＡＰ２遺伝子（ｒｓ２３０１９６３）多型、ＣＯＬ４Ａ１遺伝子（ｒｓ２３０５０８０）多型、ＧＵＣＡ１Ｃ遺伝子（ｒｓ２７１５７０９）多型、ＡＴＰ１０Ｃ遺伝子（ｒｓ３７３６１８６）多型、ＨＣＮ４遺伝子（ｒｓ３７４３４９６）多型、ＰＴＰＲＴ遺伝子（ｒｓ３７４６５３９）多型、ＦＧＦ２遺伝子（ｒｓ３７４７６７６）多型、ＣＨＧＡ遺伝子（ｒｓ３７５９７１７）多型、ＰＰＰ１Ｒ１Ｂ遺伝子（ｒｓ３７６４３５２）多型、ＡＤＯＲＡ１遺伝子（ｒｓ３７６６５５４）多型、ＲＧＳ１９ＩＰ１遺伝子（ｒｓ３８１５７１５）多型、ＲＧＳ２０遺伝子（ｒｓ３８１６７７２）多型が高血圧感受性遺伝子多型として有望であると報告されている（例えば、特許文献５参照。）。 Until now, hypertension susceptibility genes including gene polymorphisms include angiotensinogen, α-adducin, β2 adrenergic receptor, glycoprotein Ia (GPIA), chemokine receptor 2 (CCR2), and apolipoprotein C (ApoC-III). , G-protein β3 subunit (GPβ3), tumor necrosis factor α (TNFα), insulin receptor substrate 1 (IRS-1), glycoprotein Ibα (GPIbα), C-type natriuretic hormone (CNP), heme -Each gene, such as oxygenase 1 (HMOX-1) and SCNN1A, is reported (for example, refer patent documents 1-4). More recently, CYP17 gene (rs6162) polymorphism, EXOSC3 gene (rs7158) polymorphism, ACCN1 gene (rs28933) polymorphism, KCNMB4 gene (rs710552) polymorphism, KCNIP2 gene (rs7555381) polymorphism, ATP2A3 gene (rs8838787) polymorphism , RAC2 gene (rs929023) polymorphism, CD3EAP gene (rs9677591) polymorphism, CALCR gene (rs1042138) polymorphism, ATP10D gene (rs1058793) polymorphism, GNA14 gene (rs1801258) polymorphism, PTHR1 gene (rs1869872) polymorphism, ATP2B1 Gene (rs20707059) polymorphism, HLA-DMB gene (rs2071556) polymorphism, SLC13A1 gene (rs2140516) polymorphism, LC2A11 gene (rs2236620) polymorphism, GNAI2 gene (rs2236693) polymorphism, CACNA2D2 gene (rs2236957) polymorphism, PRKWNK1 gene (rs2255390) polymorphism, SLC22A7 gene (rs2270860) polymorphism, KCNN1 gene (rsA2299 gene polymorphism) (Rs2291075) polymorphism, CACNA1E gene (rs2293990) polymorphism, SLC26A8 gene (rs2299852) polymorphism, ERCC1 gene (rs2298881) polymorphism, DLGAP2 gene (rs2301963) polymorphism, COL4A1 gene (rs2305080) polymorphism, GUCA27C70 gene GUCA1C70 ) Polymorphism, ATP10C gene (rs3736186) polymorphism, HCN4 inheritance (Rs37443496) polymorphism, PTPRT gene (rs3746539) polymorphism, FGF2 gene (rs3744766) polymorphism, CHGA gene (rs3759717) polymorphism, PPP1R1B gene (rs37664352) polymorphism, ADORA1 gene (rs37666554) polymorphism, RGS1938 gene 15 ) Polymorphism, RGS20 gene (rs3816777) polymorphism has been reported to be promising as a hypertension susceptibility gene polymorphism (see, for example, Patent Document 5).
高血圧の治療は、高血圧により誘発される冠動脈疾患等の発症を防止するために、血圧を下げることを目的とする。治療方法は、主に、食生活等の生活習慣の改善による高血圧の危険因子の軽減と、降圧治療剤の投薬療法に大別される。通常は、各患者のリスクを判定し、その判定結果と実際の血圧とに基づいて、降圧目標や治療方法が決定される。例えば、まず、収縮期血圧／拡張期血圧が、１４０〜１５９／９０〜９９ｍｍＨｇを軽症高血圧、１６０〜１７９／１００〜１０９ｍｍＨｇを中等症高血圧、≧１８０／≧１１０ｍｍＨｇを重症高血圧と分類した後、血圧以外の危険因子を考慮してリスクが判定される。例えば、軽症高血圧であり、他に危険因子を有さない患者は低リスク群、軽症高血圧であり、幾つかの危険因子を有する患者は中等リスク群、軽症高血圧であっても、糖尿病等の危険性の高い危険因子を有する患者は高リスク群と判断される。通常、低リスク群や中等リスク群の場合には、まず、一定期間の生活習慣の修正を行い、その後血圧が十分に低下しない場合に投薬療法がなされるが、高リスク群の患者に対しては、一定期間の生活習慣の修正と平行して投薬療法がなされる。つまり、血圧が同程度であったとしても、必ずしも同じ治療方法ではなく、各患者のリスクに応じて治療方法が適宜選択されている。このため、高血圧発症のリスクを適正に評価することが極めて重要である。 The purpose of hypertension treatment is to lower blood pressure in order to prevent the onset of coronary artery disease and the like induced by high blood pressure. Treatment methods are mainly divided into reduction of risk factors for hypertension by improving lifestyle habits such as eating habits, and medication of antihypertensive agents. Usually, the risk of each patient is determined, and the blood pressure reduction target and treatment method are determined based on the determination result and the actual blood pressure. For example, first, systolic blood pressure / diastolic blood pressure is classified into 140 to 159/90 to 99 mmHg as mild hypertension, 160 to 179/100 to 109 mmHg as moderate hypertension, and ≧ 180 / ≧ 110 mmHg as severe hypertension. Risk is determined taking into account other risk factors. For example, patients with mild hypertension who do not have other risk factors are low-risk groups, those with mild hypertension, those who have some risk factors are moderate-risk groups, even those with mild hypertension, risk of diabetes, etc. Patients with high risk factors are considered high risk groups. Usually, in the low-risk group and the moderate-risk group, the lifestyle is first corrected for a certain period, and then medication is given if the blood pressure does not decrease sufficiently. Is administered in parallel with lifestyle modifications over a period of time. That is, even if the blood pressure is comparable, the treatment method is not necessarily the same, and a treatment method is appropriately selected according to the risk of each patient. For this reason, it is extremely important to properly evaluate the risk of developing hypertension.
大部分の危険因子は、それぞれ単独では必ずしも高血圧発症の引き金となるわけではない。特に、遺伝要因である高血圧感受性遺伝子の場合には、保有する複数の高血圧感受性遺伝子が互いに影響しあう結果、高血圧を発症すると考えられている。したがって、高血圧発症のリスク評価においては、保有する高血圧感受性遺伝子の数が多いほど、高リスク群と判断される。このため、できるだけ多くの高血圧感受性遺伝子の有無を調べることにより、より適正に高血圧発症のリスクを評価することができると考えられるが、高血圧感受性遺伝子は数多く報告されており、これらを全て検査することは、評価の迅速性及び経済性の観点から好ましくない。また、保有の有無と高血圧発症との相関性は高血圧感受性遺伝子ごとに異なるため、相関性が比較的低い高血圧感受性遺伝子をリスク評価の判断資料とした場合には、信頼性の高い評価を得ることはできない。 Most risk factors, alone, do not necessarily trigger hypertension. In particular, in the case of a hypertension susceptibility gene which is a genetic factor, it is considered that a plurality of hypertension susceptibility genes possessed by each other influence each other, thereby causing hypertension. Therefore, in the risk assessment of the development of hypertension, the higher the number of hypertension susceptibility genes held, the higher the risk group. Therefore, by examining the presence or absence of as many hypertension susceptibility genes as possible, it is thought that the risk of developing hypertension can be assessed more appropriately. However, many hypertension susceptibility genes have been reported, and all these should be examined. Is not preferable from the viewpoint of rapid evaluation and economical efficiency. In addition, since the correlation between the presence or absence of hypertension and the onset of hypertension differs for each hypertension susceptibility gene, if a hypertension susceptibility gene with a relatively low correlation is used as a judgment material for risk assessment, obtain a highly reliable evaluation. I can't.
一方で、本発明者により、細胞内のカルシウムイオンの制御に関与するカチオン選択的イオンチャネルＴＲＩＣ（ｔｒｉｍｅｒｉｃ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｔｉｏｎ）が報告されている（例えば、非特許文献１参照。）。ＴＲＩＣは、３つの膜貫通領域を持ち、ホモ三量体を形成する膜タンパク質である。主に興奮細胞に局在しているＴＲＩＣ−Ａと、ユビキタスに発現しているＴＲＩＣ−Ｂとの２つのサブタイプがあり、ＴＲＩＣ−Ａ欠損（ノックアウト）マウスは生存及び繁殖が可能であるのに対して、ＴＲＩＣ−Ｂ欠損マウスは新生児期致死であり、ＴＲＩＣ−ＡとＴＲＩＣ−Ｂの同時欠損（ダブルノックアウト）マウスは、心不全による胎生期致死であることが報告されている。閉鎖微小空間である小胞体からのカルシウムイオンを放出すると、内腔側にマイナス荷電が蓄積されて、カルシウムイオン放出が抑制されると推察される。このため、数十ミリ秒間持続する生理的なカルシウムイオン放出が成立するためには、内腔側の荷電を中和するカウンターイオンが必須であると考えられている。胎生心不全となるＴＲＩＣ−ＡとＴＲＩＣ−Ｂチャネル同時欠損マウスの心筋細胞の異常から、ＴＲＩＣチャネルはカルシウムイオン放出と連動するカウンターイオンチャネルであると推論される。 On the other hand, the present inventor has reported a cation-selective ion channel TRIC (trimeric intracellular cation) that is involved in the control of intracellular calcium ions (see, for example, Non-Patent Document 1). TRIC is a membrane protein that has three transmembrane domains and forms a homotrimer. There are two subtypes, TRIC-A, which is mainly localized in excitable cells, and TRIC-B, which is ubiquitously expressed, and TRIC-A-deficient (knockout) mice can survive and reproduce In contrast, it has been reported that TRIC-B-deficient mice are lethal in neonatal period, and TRIC-A and TRIC-B-deficient mice (double knockout) are lethal in embryonic period due to heart failure. When calcium ions are released from the endoplasmic reticulum, which is a closed microspace, it is presumed that negative charges are accumulated on the lumen side and calcium ion release is suppressed. For this reason, in order to establish physiological calcium ion release that lasts for several tens of milliseconds, counter ions that neutralize the charge on the lumen side are considered essential. It is inferred that TRIC channel is a counter ion channel that is linked to calcium ion release, based on abnormalities of cardiomyocytes in mice with TRIC-A and TRIC-B channel co-deficiency that cause fetal heart failure.
すなわち、適正に高血圧発症のリスクを評価するためには、高血圧感受性遺伝子高血圧発症との相関性の高い有用な高血圧感受性遺伝子を、遺伝子マーカーとして用いることが好ましい。しかしながら、これまでに報告されている高血圧感受性遺伝子は、保有の有無と高血圧発症との相関性は観察されているものの、相関の程度は不十分であり、より信頼性の高い遺伝子マーカーの開発が望まれている。 That is, in order to properly evaluate the risk of developing hypertension, it is preferable to use a useful hypertension susceptibility gene highly correlated with the onset of hypertension susceptibility gene as a genetic marker. However, the correlation between the presence or absence of hypertension and the occurrence of hypertension has been observed, but the degree of correlation is insufficient, and the development of more reliable genetic markers has not been reported so far. It is desired.
本発明は、保有の有無と高血圧発症との相関性が十分に高く、高血圧発症のリスク判定に用いることができるＳＮＰからなる遺伝子マーカー、及び該ＳＮＰを用いた高血圧発症リスク判定方法を提供することを目的とする。 The present invention provides a gene marker composed of SNP that has a sufficiently high correlation between the presence or absence of possession and the onset of hypertension, and can be used for risk determination of the development of hypertension, and a method for determining the risk of developing hypertension using the SNP. With the goal.
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損マウスが、高血圧症状を呈することを見出した。さらに研究を進めた結果、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子及びその近傍に存在する６種のＳＮＰのうち、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）が、高血圧の遺伝子マーカーとして非常に有用であることを見出し、本発明を完成させた。 As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that TRIC-A gene-deficient mice exhibit hypertension. As a result of further research, SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs9017992) among TRIC-A gene and six kinds of SNPs present in the vicinity thereof are hypertension gene markers. As a result, the present invention was completed.
すなわち、本発明の第一の発明は、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子のＳＮＰ（一塩基多型）を含むＴＲＩＣ−Ａ遺伝子のＳＮＰからなり、前記ＳＮＰが、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択されることを特徴とする高血圧の遺伝子マーカーを提供するものである。
また、本発明の第二の発明は、遺伝子マーカーを用いて、高血圧発症リスクを判定する方法であって、（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、を有し、前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）がＡＡ型、ＣＡ型、ＣＣ型の順にリスクが高いと判定する、前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）がＧＧ型、ＧＡ型、ＡＡ型の順にリスクが高いと判定する、前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）がＴＴ型、ＴＣ型、ＣＣ型の順にリスクが高いと判定する、又は前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）がＣＣ型、ＴＣ型、ＴＴ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、高血圧発症リスク判定方法を提供するものである。
また、本発明の第三の発明は、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、又は（ｅ）の塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを提供するものである；（ａ）配列番号１で表される塩基配列、又は配列番号１で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列、（ｄ）配列番号２で表される塩基配列、又は配列番号２で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
また、本発明の第四の発明は、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、又は（ｅ）の塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを提供するものである；（ａ）配列番号３で表される塩基配列、又は配列番号３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列、（ｄ）配列番号４で表される塩基配列、又は配列番号４で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
また、本発明の第五の発明は、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、又は（ｅ）の塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを提供するものである；（ａ）配列番号５で表される塩基配列、又は配列番号５で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列、（ｄ）配列番号６で表される塩基配列、又は配列番号６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
また、本発明の第六の発明は、下記の（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、又は（ｅ）の塩基配列を有し、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができることを特徴とする高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドを提供するものである；（ａ）配列番号７で表される塩基配列、又は配列番号７で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列、（ｄ）配列番号８で表される塩基配列、又は配列番号８で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列、（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
That is, the first invention of the present invention consists of SNP of TRIC-A gene including SNP (single nucleotide polymorphism) of TRIC-A gene, and said SNP is SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP ( rs17796739), and SNP (rs901792), which provides a genetic marker for hypertension.
The second invention of the present invention is a method for determining the risk of developing hypertension using a genetic marker, comprising: (a) a nucleic acid collected from a human individual, SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), A step of typing one or more selected from the group consisting of SNP (rs17796739) and SNP (rs901792), and (b) based on the typing result obtained in step (a), the risk of developing hypertension in the human individual. and determining step, have a, in the step (b), SNP (rs8101030) are type AA, CA type, determines that the CC-type risk in the order of higher, wherein in the step (b), the SNP (rs4808521) In the step (b) in which it is determined that the risk is higher in the order of GG type, GA type, and AA type, SNP (rs 7796739) is TT type, determines that TC type, the CC-type risks in the order of high, or the In the step (b), the determining SNP (rs901792) is type CC, TC type, and a high risk in the order of TT-type The present invention provides a method for determining the risk of developing hypertension.
The third invention of the present invention has the following base sequence (a), (b), (d), or (e), and is used as a primer or probe for detecting SNP (rs8101030). A polynucleotide for determining the risk of developing hypertension, characterized in that: (a) the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1 or the SNP (rs8101030) of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1; A base sequence which is a partial sequence of 15 to 60 bases in length, (b) a base sequence complementary to the base sequence of (a), (d) a base sequence represented by SEQ ID NO: 2, or SEQ ID NO: 2 A base sequence that is a partial sequence of 15 to 60 bases in length including SNP (rs8101030) of the base sequence to be prepared, (e) a base sequence that is complementary to the base sequence of (d) above.
The fourth invention of the present invention has the following base sequence (a), (b), (d), or (e), and is used as a primer or probe for detecting SNP (rs4808521). A polynucleotide for determining the risk of developing hypertension, characterized in that: (a) a nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 3 or a SNP (rs4808521) of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 3; Table with 15-60 base long nucleotide sequence that is a partial sequence of, (b) the nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of (a), nucleotide sequence represented by (d) SEQ ID NO: 4, or SEQ ID NO: 4 comprising A base sequence that is a partial sequence of 15 to 60 bases in length containing SNP (rs48085521) of the base sequence to be prepared; (e) a base sequence that is complementary to the base sequence of (d) above.
The fifth invention of the present invention has the following base sequence (a), (b), (d), or (e) and is used as a primer or probe for detecting SNP (rs17796739). A polynucleotide for determining the risk of developing hypertension, characterized in that: (a) the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 5 or the SNP (rs17796739) of the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 5; Table with 15-60 base long nucleotide sequence that is a partial sequence of, (b) the nucleotide sequence complementary to the nucleotide sequence of (a), nucleotide sequence represented by (d) SEQ ID NO: 6, or SEQ ID NO: 6 comprising A base sequence which is a partial sequence having a length of 15 to 60 bases, including SNP (rs17796739) of the base sequence to be prepared, (e) a base sequence complementary to the base sequence of (d) above.
The sixth invention of the present invention has the following base sequence (a), (b), (d), or (e), and is used as a primer or probe for detecting SNP (rs901792). A polynucleotide for determining the risk of developing hypertension, characterized in that: (a) a base sequence represented by SEQ ID NO: 7 or a SNP (rs901789) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 7; A base sequence that is a partial sequence of 15 to 60 bases in length, (b) a base sequence that is complementary to the base sequence of (a), (d) a base sequence represented by SEQ ID NO: 8, or SEQ ID NO: 8 A base sequence that is a partial sequence of 15 to 60 bases in length containing SNP (rs901792), (e) a base sequence that is complementary to the base sequence of (d).
本発明の第一の発明である高血圧の遺伝子マーカーは、保有の有無と高血圧発症との相関性が十分に高いＳＮＰからなる遺伝子マーカーである。このため、本発明の高血圧の遺伝子マーカーを用いた本発明の第二の発明である高血圧発症リスク判定方法を用いることにより、より信頼性の高い判定結果を得ることができる。 The hypertension gene marker according to the first aspect of the present invention is a gene marker composed of SNPs having a sufficiently high correlation between the presence or absence and the onset of hypertension. For this reason, a more reliable determination result can be obtained by using the hypertension onset risk determination method according to the second invention of the present invention using the hypertension gene marker of the present invention.
本発明において、高血圧とは、循環系障害等の障害を誘発するおそれのあるレベルにまで全身の動脈圧が一過性又は持続的に高くなる状態を意味する。高血圧の具体的な定義は特に限定されないが、例えば、日本高血圧学会が定めた、「高血圧治療ガイドライン２００４」（ＪＳＨ２００４）に準拠し、収縮期血圧／拡張期血圧が１４０／９０ｍｍＨｇ以上である状態を意味する。降圧薬等を服用していない状態で、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上であり、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上である場合に加えて、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ未満であるが、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上である場合や、拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ未満であるが、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上である場合も含まれる。また、高血圧には主に、本態性高血圧と二次性高血圧に大別され、９０％以上は本態性高血圧に分類されるが、本発明においては、本態性高血圧であることが好ましい。 In the present invention, hypertension means a state in which arterial pressure throughout the body is transiently or continuously increased to a level that may induce a disorder such as a circulatory system disorder. Although the specific definition of hypertension is not specifically limited, For example, it is based on the "hypertension treatment guideline 2004" (JSH2004) which the Japanese hypertension society established, and the state whose systolic blood pressure / diastolic blood pressure is 140/90 mmHg or more. means. When not taking antihypertensive drugs, systolic blood pressure is 140 mmHg or more, and diastolic blood pressure is 90 mmHg or more. In addition, systolic blood pressure is less than 140 mmHg, but diastolic blood pressure is 90 mmHg or more. In some cases, the diastolic blood pressure is less than 90 mmHg, but the systolic blood pressure is 140 mmHg or more. Hypertension is mainly classified into essential hypertension and secondary hypertension, and 90% or more is classified as essential hypertension. In the present invention, essential hypertension is preferable.
本発明において、高血圧の遺伝子マーカーとは、高血圧の遺伝要因のマーカーとなる遺伝子を意味する。本発明の高血圧の遺伝子マーカーは、ＳＮＰを含み、その対立遺伝子（アレル）として、高血圧感受性遺伝子を含む。 In the present invention, the gene marker for hypertension means a gene that serves as a marker for genetic factors for hypertension. The genetic marker for hypertension of the present invention includes SNP, and includes a hypertension susceptibility gene as an allele thereof.
本発明において、高血圧発症リスクとは、高血圧の易罹患性（高血圧への罹りやすさ）をいう。すなわち、本発明において、あるヒト個体が高リスク群であるとは、該ヒト個体が高血圧を発症する危険率が高いと予想されることを意味し、低リスク群であるとは、該ヒト個体が高血圧を発症する危険率が低いと予想されることを意味する。 In the present invention, the risk of developing hypertension refers to susceptibility to hypertension (susceptibility to hypertension). That is, in the present invention, a certain human individual is a high-risk group means that the human individual is expected to have a high risk of developing hypertension, and a low-risk group means that the human individual Means that the risk of developing hypertension is expected to be low.
本発明において、ＳＮＰは、好ましくは公共データベースに登録されたＳＮＰであって、そのリファレンス番号から特定可能なＳＮＰである。例えば、ＮＣＢＩ（Ｎａｔｉｏｎａｌ ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）のＳＮＰデータベース（ｄｂＳＮＰ ＢＵＩＬＤ１２４）のリファレンス番号であるｒｓ番号により特定されるＳＮＰや、東京大学医科学研究所が整備した日本人のＳＮＰのデータベースＪＳＮＰ（登録商標）（ｈｔｔｐ：//ｓｎｐ．ｉｍｓ．ｕ−ｔｏｋｙｏ．ａｃ．ｊｐ/ｉｎｄｅｘ＿ｊａ.ｈｔｍｌ）のリファレンス番号であるＩＭＳ−ＪＳＴ番号により特定されるＳＮＰ等がある。 In the present invention, the SNP is preferably an SNP registered in a public database and can be identified from its reference number. For example, the SNP identified by the rs number, which is the reference number of the SNP database (dbSNP BUILD124) of NCBI (National Center for Biotechnology Information), and the Japanese SNP database JSNP (registered trademark) prepared by the Institute of Medical Science, the University of Tokyo ) (Http://snp.ims.u-tokyo.ac.jp/index_ja.html) and the SNP specified by the IMS-JST number which is the reference number.
後記実施例１に示すように、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子及びＴＲＩＣ−Ｂ遺伝子の遺伝子型が、それぞれ、野生型、ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損体、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損体、及び、ＴＲＩＣ−Ａがホモ欠損であり、かつＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損である変異体（ＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損体）である各マウスの血圧を、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法により測定したところ、ＴＲＩＣ−Ａがホモ欠損であるＴＲＩＣ−Ａホモ欠損体及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損体において、徐脈及び高血圧が観察された。 As shown in Example 1 below, the genotypes of TRIC-A gene and TRIC-B gene are wild type, TRIC-B hetero deficient, TRIC-A homo deficient, and TRIC-A homozygous, respectively. When the blood pressure of each mouse, which is a mutant and TRIC-B hetero-deficient mutant (TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient), was measured by the Tail-cuff method, TRIC-A was found to be Bradycardia and hypertension were observed in homozygous TRIC-A homodeficient and TRIC-A homo-TRIC-B heterodeficient.
また、野生型マウスとＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスに対して、アンジオテンシン受容体、ＲｈｏＫ、ａ１受容体、エンドセリン受容体、及びバソプレシン受容体に対する阻害薬を適用した場合でも、両マウス群において顕著な差は観察されなかった。この結果から、これらの昇圧液性因子は、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損体において発症している高血圧とは無関係であることが示唆された。一方で、ムスカリン受容体作動薬を適用した場合には、ＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスでは、野生型マウスよりも大きな収縮期血圧の低下が観察された。すなわち、ＴＲＩＣ−Ａ欠損により引き起こされる高血圧は、昇圧ペプチド等の分泌亢進ではなく、血管機能の異常に起因するものと推測された。 In addition, even when an inhibitor against angiotensin receptor, RhoK, a1 receptor, endothelin receptor, and vasopressin receptor is applied to wild-type mice and TRIC-A homo-TRIC-B heterodeficient mice, No significant difference was observed in the mouse group. From these results, it was suggested that these vasopressor factors are unrelated to hypertension that develops in the TRIC-A gene deficient body. On the other hand, when a muscarinic receptor agonist was applied, a greater decrease in systolic blood pressure was observed in TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mice than in wild-type mice. That is, it was speculated that hypertension caused by TRIC-A deficiency was not due to increased secretion of pressor peptides or the like, but due to abnormal vascular function.
さらに、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスに対して自律神経拮抗薬を適用した場合でも、両マウス群における高血圧症状は保持されたことから、ＴＲＩＣ−Ａ欠損により引き起こされる高血圧は、交感神経活動の亢進によるものではないことも示唆された。一方で、自律神経拮抗薬の適用により、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスは、野生型マウスと同様の内因性心拍数を示した。したがって、ＴＲＩＣ−Ａ欠損マウスの徐脈症状は、高血圧による圧受容器反射の亢進による二次的な異常であると考えられる。 Furthermore, even when the autonomic nerve antagonist was applied to TRIC-A homo-deficient mice and TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mice, the hypertensive symptoms were maintained in both mouse groups. It was also suggested that hypertension caused by the defect is not due to increased sympathetic nerve activity. On the other hand, by application of an autonomic nerve antagonist, TRIC-A homo-deficient mice and TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mice showed the same intrinsic heart rate as wild-type mice. Therefore, the bradycardia symptom of TRIC-A deficient mice is considered to be a secondary abnormality due to an increase in baroreceptor reflex due to hypertension.
心臓、脳、腎臓、骨格筋、腸間膜等の細動脈において、血管内腔圧上昇により発生する血管緊張を筋原性収縮（ｍｙｏｇｅｎｉｃ ｔｏｎｅ）と呼ぶ。この筋原性収縮は、微小循環調節に関わる重要な機能であり、高血圧や微小血管スパスムとの関連が注目されている。そこで、後記実施例２に示すように、野生型マウス、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス、及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスから、代表的な末梢抵抗血管である腸間膜動脈（ｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃ ａｒｔｅｒｙ）を摘出し、大動脈（リング）に対してはマグヌス管を用いて張力測定を行い、腸間膜動脈に対しては筋原性収縮の測定を行った。この結果、ＴＲＩＣ−Ａ欠損マウス由来の血管では、定常時筋原性収縮が各内圧で顕著に上昇している（血管内径が収縮している）ことが観察された。これらの結果から、ＴＲＩＣ−Ａ欠損は、内皮又は平滑筋細胞の機能異常を誘導し、血圧を上昇させることが示唆された。 A vascular tone generated by an increase in vascular lumen pressure in arterioles such as the heart, brain, kidney, skeletal muscle, and mesentery is called myogenic tone. This myogenic contraction is an important function related to microcirculation regulation, and its relation to hypertension and microvascular spasm has attracted attention. Therefore, as shown in Example 2 below, from a wild type mouse, a TRIC-A homo-deficient mouse, and a TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mouse, a mesenteric artery (a peripheral peripheral resistance blood vessel) ( mesenteric arteries) were removed, tension was measured using a Magnus tube for the aorta (ring), and myogenic contraction was measured for the mesenteric artery. As a result, in the blood vessels derived from TRIC-A-deficient mice, it was observed that steady-state myogenic contraction was significantly increased at each internal pressure (the vascular inner diameter was contracted). These results suggest that TRIC-A deficiency induces endothelial or smooth muscle cell dysfunction and increases blood pressure.
このように、ＴＲＩＣ−Ａ欠損により高血圧が引き起こされるため、本発明者らは、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子の遺伝子型が高血圧マーカーとして機能し得る可能性があると考えた。そこで、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子及びその近傍にある６つのＳＮＰについて、本態性高血圧を発症しているヒトの集団（本態性高血圧群）と、正常血圧であるヒトの集団（正常血圧群）のサンプルに対してタイピングを行った。この結果、後記実施例３に示すように、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）という、連鎖不平衡にある４つのＳＮＰが、高血圧と有意な関連を示した。本発明は、これらの知見に基づいてなされたものである。 Thus, since hypertension is caused by TRIC-A deficiency, the present inventors thought that the genotype of TRIC-A gene may function as a hypertension marker. Therefore, for the TRIC-A gene and the 6 SNPs in the vicinity thereof, samples of a human population developing essential hypertension (essential hypertension group) and a human population having normal blood pressure (normal blood pressure group) were used. Typing was performed. As a result, as shown in Example 3 below, four SNPs in linkage disequilibrium, SNP (rs8101030), SNP (rs48085521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792), have a significant association with hypertension. Indicated. The present invention has been made based on these findings.
＜高血圧の遺伝子マーカー＞
本発明の第一の発明である高血圧の遺伝子マーカーは、ＴＲＩＣ−Ａ（ｔｒｉｍｅｒｉｃ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｔｉｏｎ−Ａ）遺伝子及びその近傍にあるＳＮＰを含むものである。具体的には、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択されるＳＮＰであることを特徴とする。該遺伝子マーカーが含むこれらのＳＮＰは、１種であってもよく、２種以上であってもよい。例えば、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）のみであってもよく、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）とＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）と
<Gene marker for hypertension>
The hypertensive genetic marker according to the first aspect of the present invention includes a TRIC-A (trimeric intracellular-A) gene and an SNP in the vicinity thereof. Specifically, the SNP is selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs48085521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792). These SNPs contained in the genetic marker may be one type or two or more types. For example, only SNP (rs17796739) may be used, and SNP (rs17796739) and SNP (rs901792)
ここで、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）は、Ｃ／Ａ多型であり、後記実施例３の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＣアレルよりもＡアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。 Here, SNP (rs8101030) is a C / A polymorphism, and as is clear from the results of Example 3 described later, the frequency of A allele in the hypertensive group is higher than that in the normal blood pressure group when compared with the normal blood pressure group. Is significantly higher and is useful as a genetic marker for hypertension.
また、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）は、Ａ／Ｇ多型であり、後記実施例９の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＡアレルよりもＧアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。 SNP (rs48085521) is an A / G polymorphism, and as is clear from the results of Example 9 described later, the frequency of the G allele is higher in the hypertension group than in the A allele when compared with the normal blood pressure group. Significantly higher and useful as a genetic marker for hypertension.
また、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）は、Ｃ／Ｔ多型であり、後記実施例３の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＣアレルよりもＴアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。 Further, SNP (rs17796739) is a C / T polymorphism, and as is clear from the results of Example 3 described later, the frequency of T allele is higher than that of C allele in the hypertensive group when compared with the normal blood pressure group. Significantly higher and useful as a genetic marker for hypertension.
さらに、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）は、Ｔ／Ｃ多型であり、後記実施例３の結果から明らかであるように、正常血圧群と比較した場合に高血圧群において、ＴアレルよりもＣアレルの頻度が有意に高く、高血圧の遺伝子マーカーとして有用である。 Furthermore, SNP (rs901792) is a T / C polymorphism, and as is clear from the results of Example 3 described later, the frequency of C allele is higher than that of T allele in the hypertensive group when compared with the normal blood pressure group. Significantly higher and useful as a genetic marker for hypertension.
＜高血圧発症リスク判定方法及び高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド＞
本発明の第二の発明である高血圧発症リスク判定方法は、本発明の第一の発明の遺伝子マーカー（以下、本発明の高血圧の遺伝子マーカーということがある。）を用いて高血圧発症のリスクを判定する方法である。具体的には、（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、を有することを特徴とする。ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）は、いずれも多型ごとに高血圧の発症し易さが統計学上有意に異なるため、同定されたＳＮＰの遺伝子型から、高血圧発症リスクを判定することができる。
<Polyhypertension risk determination method and hypertension risk determination polynucleotide>
The method for determining the risk of developing hypertension according to the second invention of the present invention uses the genetic marker of the first invention of the present invention (hereinafter sometimes referred to as the gene marker of hypertension of the present invention) to determine the risk of developing hypertension. It is a method of determination. Specifically, (a) a step of typing one or more selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs48080821), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) of nucleic acids collected from a human individual. And (b) determining a hypertension risk of the human individual based on the typing result obtained in the step (a). SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) are all statistically significantly different from each other in terms of the likelihood of developing hypertension, and thus the identified SNP genotype From this, the risk of developing hypertension can be determined.
まず、工程（ａ）として、ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上をタイピングする。
本発明において、ＳＮＰをタイピングするとは、核酸の塩基配列を解析し、ＳＮＰを検出し、多型を同定することを意味する。例えば、判定対象である核酸のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）が、ＣＣ型、ＣＡ型、ＡＡ型のいずれであるのかを同定する。
First, as step (a), one or more selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) of nucleic acids collected from human individuals is typed.
In the present invention, typing SNP means analyzing a nucleic acid base sequence, detecting SNP, and identifying a polymorphism. For example, it is identified whether the SNP (rs8101030) of the nucleic acid to be determined is CC type, CA type, or AA type.
ＳＮＰタイピングに供される核酸は、ヒト個体から採取されたものであれば、特に限定されるものではなく、血液や体液等の生体試料（検体）中に含有される核酸や、これらの生体試料等から抽出された核酸であってもよく、これらの核酸を鋳型として増幅された核酸であってもよい。また、生体試料中に含有されるＲＮＡから逆転写酵素を用いて合成されたｃＤＮＡであってもよい。 The nucleic acid used for SNP typing is not particularly limited as long as it is collected from a human individual. Nucleic acids contained in biological samples (specimens) such as blood and body fluids, and these biological samples It may be a nucleic acid extracted from the above, or a nucleic acid amplified using these nucleic acids as templates. Alternatively, it may be a cDNA synthesized from RNA contained in a biological sample using reverse transcriptase.
ＳＮＰのタイピング方法は、通常ＳＮＰの検出に用いられている方法であれば、特に限定されるものではない。例えば、Ｉｎｖａｄｅｒ（商標、Ｔｈｉｒｄ Ｗａｖｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）法、ＴａｑＭａｎ（商標、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）法、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法、マイクロアレイ法、シークエンス法、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）等の塩基配列増幅法を利用した検出法等が挙げられる。特に、ＴａｑＭａｎ法、ＰＣＲ法、マイクロアレイ法等のように、各多型に特異的にハイブリダイズするプライマーやプローブを用いてＳＮＰを検出する方法であることが好ましい。例えば、ＰＣＲ法では、野生型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを野生型プライマーとし、変異型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを変異型プライマーとした場合に、ＳＮＰを含む核酸を鋳型として各プライマーを用いてＰＣＲを行い、ＰＣＲ産物が得られるか否かによりＳＮＰの遺伝子型を同定することができる。同様に、野生型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを野生型プローブとし、変異型アレルにのみ完全に相補的なポリヌクレオチドを変異型プローブとした場合に、ＳＮＰを含む核酸が固定されたマイクロアレイを用いて各プローブを用いた場合にハイブリダイズするか否かによりＳＮＰの遺伝子型を同定することができる。これらの各ＳＮＰに特異的なプローブやプライマーを用いる方法は、シークエンス法等と異なり、ＳＮＰを直接識別するため、より信頼性が高く、また、ＳＮＰタイピングに要する時間が短く済み、簡便である。 The SNP typing method is not particularly limited as long as it is a method usually used for detecting SNPs. For example, base sequence methods such as Invader (trademark, Third Wave Technologies) method, TaqMan (trademark, Applied Biosystems) method, MALDI-TOF mass spectrometry, microarray method, sequence method, PCR (Polymerase Chain Reaction), etc. Detection methods and the like. In particular, a method of detecting SNP using a primer or probe that specifically hybridizes to each polymorphism, such as TaqMan method, PCR method, microarray method and the like is preferable. For example, in the PCR method, when a polynucleotide that is completely complementary only to a wild type allele is used as a wild type primer, and a polynucleotide that is completely complementary only to a mutant type allele is used as a mutant primer, a nucleic acid containing a SNP is used. PCR is performed using each primer as a template, and the SNP genotype can be identified by whether or not a PCR product is obtained. Similarly, when a polynucleotide that is completely complementary only to the wild-type allele is used as a wild-type probe, and a polynucleotide that is completely complementary only to the mutant-type allele is used as a mutant-type probe, the nucleic acid containing the SNP is fixed. The SNP genotype can be identified based on whether or not each probe is hybridized using a microarray. Unlike the sequencing method or the like, the method using a probe or primer specific to each of these SNPs is more reliable because it directly identifies the SNP, and the time required for SNP typing is short and simple.
なお、各ＳＮＰに特異的なプライマーを用いてＰＣＲを行った場合に得られるＰＣＲ産物の検出は、ＰＣＲ産物を検出・定量する場合に通常用いられるいずれの方法によって行っても良い。例えば、電気泳動法により検出してもよく、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ等の蛍光インターカレーターを用いたリアルタイムＰＣＲにより検出してもよく、一分子蛍光分析法により検出してもよい。 In addition, you may perform the detection of the PCR product obtained when PCR is performed using a primer specific for each SNP by any method usually used when detecting and quantifying the PCR product. For example, it may be detected by electrophoresis, may be detected by real-time PCR using a fluorescent intercalator such as SYBR Green, or may be detected by single molecule fluorescence analysis.
本発明及び本願明細書において、本発明の第一の発明である遺伝子マーカーに係る４種のＳＮＰを検出するためのプライマー又はプローブとして用いることができるポリヌクレオチドを、高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドという。高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、該ＳＮＰを含むゲノムＤＮＡの該ＳＮＰを含む部分領域又はその相補鎖にハイブリダイズし得るポリヌクレオチドであれば、特に限定されるものではない。より判定の信頼性を高められるため、遺伝子マーカーであるＳＮＰを含むゲノムＤＮＡの部分領域又はその相補鎖と、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができるポリヌクレオチドであることが好ましい。高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドの塩基長やＴｍ値等は、タイピング方法や反応条件等を考慮して、適宜決定することができるが、高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドの塩基長としては、１０〜６０塩基長であることが好ましく、１５〜５０塩基長であることがより好ましい。 In the present invention and the present specification, a polynucleotide that can be used as a primer or a probe for detecting four types of SNPs related to the genetic marker that is the first invention of the present invention is referred to as a hypertension risk determination polynucleotide. . The polynucleotide for determining the risk of developing hypertension is not particularly limited as long as it is a polynucleotide capable of hybridizing to the partial region containing the SNP of the genomic DNA containing the SNP or its complementary strand. In order to further improve the reliability of determination, the polynucleotide is preferably a polynucleotide that can hybridize under stringent conditions with a partial region of genomic DNA containing SNP, which is a genetic marker, or its complementary strand. The base length, Tm value, and the like of the polynucleotide for determining the risk of developing hypertension can be appropriately determined in consideration of the typing method, reaction conditions, and the like. The length is preferably 60 bases, more preferably 15 to 50 bases.
なお、本発明において、「ストリンジェントな条件下」とは、例えば、５×ＳＳＣ（１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ７．４）＋０．３％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）中で熱変性した後、６５℃で４〜１６時間のハイブリダイゼーションし、常温の２×ＳＳＣ＋０．１％ＳＤＳ、及び、２×ＳＳＣでそれぞれ５分間洗浄し、０．０５×ＳＳＣでリンスすること等が挙げられる。 In the present invention, “stringent conditions” means, for example, heat denaturation in 5 × SSC (150 mM sodium chloride, 15 mM sodium citrate, pH 7.4) + 0.3% SDS (sodium dodecyl sulfate). Thereafter, hybridization may be performed at 65 ° C. for 4 to 16 hours, washed with 2 × SSC + 0.1% SDS at normal temperature and 2 × SSC for 5 minutes, and rinsed with 0.05 × SSC.
このような高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドの設計は、当該技術分野においてよく知られている方法のいずれを用いても行うことができる。例えば、公知のゲノム配列データと汎用されているプライマー設計ツールを用いて、簡便に設計することができる。該プライマー設計ツールとして、例えば、Ｗｅｂ上で利用可能なＰｒｉｍｅｒ３等がある。また、公知のゲノム配列データは、通常、国際的な塩基配列データベースである、ＮＣＢＩや、ＤＤＢＪ（ＤＮＡ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ ｏｆ Ｊａｐａｎ）等において入手することができる。
Such a polynucleotide for determining the risk of developing hypertension can be designed using any method well known in the art. For example, it can be designed easily by using known genome sequence data and a widely used primer design tool. Examples of the primer design tool include
このようにして設計した高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、当該技術分野においてよく知られている方法のいずれを用いても合成することができる。例えば、ポリ合成メーカーに合成をされ依頼してもよく、市販の合成機を用いて独自に合成してもよい。 The thus designed polynucleotide for determining the risk of developing hypertension can be synthesized using any method well known in the art. For example, synthesis may be requested from a polysynthetic maker, or may be synthesized independently using a commercially available synthesizer.
ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第三の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）検出用ポリヌクレオチドという。）を用いることが好ましい。
（ａ）配列番号１で表される塩基配列、又は配列番号１で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号２で表される塩基配列、又は配列番号２で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
As a primer or probe for detecting SNP (rs8101030), in particular, the risk determination of hypertension according to the third invention of the present invention having any one of the following base sequences (a) to (f): It is preferable to use a polynucleotide for use (hereinafter referred to as a polynucleotide for detecting SNP (rs8101030)).
(A) A base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial sequence containing a SNP (rs8101030) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1.
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(C) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs8101030) are deleted, substituted or added in the base sequence of (a) or (b), A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (a) or (b).
(D) A base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or a partial sequence containing a SNP (rs8101030) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 2.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
(F) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs8101030) are deleted, substituted or added in the base sequence of (d) or (e), A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (d) or (e) above.
なお、配列番号１で表される塩基配列及び配列番号２で表される塩基配列の第１３６番目の塩基がＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）である。また、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）のＡアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）のＣアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。 The 136th base of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1 and the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 is SNP (rs8101030). Moreover, the polynucleotide having any one of the base sequences (a) to (c) is a polynucleotide capable of detecting the A allele of SNP (rs8101030), and the polynucleotides of (d) to (f) above The polynucleotide having any base sequence is a polynucleotide capable of detecting the C allele of SNP (rs8101030).
ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第四の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）検出用ポリヌクレオチドという。）を用いることが好ましい。
（ａ）配列番号３で表される塩基配列、又は配列番号３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号４で表される塩基配列、又は配列番号４で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
As a primer or probe for detecting SNP (rs 4808521), in particular, determination of risk of developing hypertension according to the fourth invention of the present invention having any one of the following base sequences (a) to (f): It is preferable to use a polynucleotide for use (hereinafter referred to as a polynucleotide for detection of SNP (rs4808521)).
(A) A base sequence represented by SEQ ID NO: 3 or a partial sequence containing a SNP (rs4808521) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 3.
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(C) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs4808521) are deleted, substituted or added in the base sequence of (a) or (b), and a poly sequence comprising the base sequence A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (a) or (b).
(D) A base sequence represented by SEQ ID NO: 4, or a partial sequence comprising a SNP (rs4808521) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 4.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
(F) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs4808521) are deleted, substituted or added in the base sequence of (d) or (e), A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (d) or (e) above.
なお、配列番号３で表される塩基配列及び配列番号４で表される塩基配列の第１４２番目の塩基がＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）である。また、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）のＡアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）のＧアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。 In addition, the 142nd base of the base sequence represented by SEQ ID NO: 3 and the base sequence represented by SEQ ID NO: 4 is SNP (rs48085521). Moreover, the polynucleotide having any one of the base sequences (a) to (c) is a polynucleotide capable of detecting the A allele of SNP (rs48085521), and the polynucleotides of (d) to (f) above. The polynucleotide having any base sequence is a polynucleotide that can detect the G allele of SNP (rs48085521).
ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第五の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）検出用ポリヌクレオチドという。）を用いることが好ましい。
（ａ）配列番号５で表される塩基配列、又は配列番号５で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号６で表される塩基配列、又は配列番号６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
As a primer or probe for detecting SNP (rs17796739), in particular, determination of the risk of developing hypertension according to the fifth invention of the present invention having any one of the following base sequences (a) to (f) It is preferable to use a polynucleotide for use (hereinafter referred to as a polynucleotide for detecting SNP (rs17796739)).
(A) A base sequence represented by SEQ ID NO: 5 or a partial sequence containing a SNP (rs17796739) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 5.
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(C) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs17796739) are deleted, substituted or added in the base sequence of (a) or (b), A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (a) or (b).
(D) A base sequence represented by SEQ ID NO: 6, or a partial sequence comprising SNP (rs17796739) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 6.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
(F) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs17796739) are deleted, substituted or added in the base sequence of (d) or (e), A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (d) or (e) above.
なお、配列番号５で表される塩基配列及び配列番号６で表される塩基配列の第１３１番目の塩基がＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）である。また、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）のＣアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）のＴアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。
In addition, the 131st base of the base sequence represented by sequence number 5 and the base sequence represented by
ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を検出するためのプライマー又はプローブとしては、特に、下記の（ａ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有している本発明の第六の発明である高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド（以下、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）検出用ポリヌクレオチドという。）を用いることが好ましい。
（ａ）配列番号７で表される塩基配列、又は配列番号７で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を含む部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｃ）前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ａ）又は（ｂ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
（ｄ）配列番号８で表される塩基配列、又は配列番号８で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を含む部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｆ）前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列において、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）以外の1〜数個の塩基が欠失、置換又は付加されている塩基配列であって、当該塩基配列からなるポリヌクレオチドが、前記（ｄ）又は（ｅ）の塩基配列からなるポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズすることができる塩基配列。
As a primer or probe for detecting SNP (rs901792), in particular, the determination of the risk of developing hypertension according to the sixth invention of the present invention having any one of the following base sequences (a) to (f): It is preferable to use a polynucleotide for use (hereinafter referred to as a polynucleotide for detection of SNP (rs901792)).
(A) a base sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a base sequence that is a partial sequence including SNP (rs901792) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 7.
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(C) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs901792) are deleted, substituted or added in the base sequence of (a) or (b), and a poly sequence comprising the base sequence A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (a) or (b).
(D) A base sequence represented by SEQ ID NO: 8, or a base sequence that is a partial sequence including SNP (rs901792) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 8.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
(F) A base sequence in which one to several bases other than SNP (rs901792) are deleted, substituted or added in the base sequence of (d) or (e), and a poly sequence comprising the base sequence A nucleotide sequence capable of hybridizing under stringent conditions with a polynucleotide comprising the nucleotide sequence (d) or (e) above.
なお、配列番号７で表される塩基配列及び配列番号８で表される塩基配列の第１４１番目の塩基がＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）である。また、上記（ａ）〜（ｃ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）のＣアレルを検出し得るポリヌクレオチドであり、上記（ｄ）〜（ｆ）の何れかの塩基配列を有しているポリヌクレオチドは、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）のＴアレルを検出し得るポリヌクレオチドである。 In addition, the 141st base of the base sequence represented by SEQ ID NO: 7 and the base sequence represented by SEQ ID NO: 8 is SNP (rs901792). In addition, the polynucleotide having any one of the base sequences (a) to (c) is a polynucleotide capable of detecting the C allele of SNP (rs901792), and the polynucleotides of (d) to (f) above The polynucleotide having any base sequence is a polynucleotide capable of detecting the T allele of SNP (rs901792).
その他、工程（ａ）において用いられる各高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、検出対象の遺伝子の塩基配列と相補的又は相同的な配列以外にも、ＳＮＰタイピングを阻害しない程度において、付加的な配列を有することができる。該付加的な配列として、例えば、制限酵素認識配列や、核酸の標識に供される配列等がある。また、各高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドは、ＳＮＰタイピング結果の検出や解析を容易にするために、ＳＮＰタイピングを阻害しない程度において、標識物質を付加することができる。該標識物質は、通常ポリヌクレオチドの標識に用いられる化合物であれば特に限定されるものではない。該標識物質として、例えば、放射性同位体、蛍光物質、化学発光物質、ビオチン等の低分子化合物等がある。 In addition, each of the polynucleotides for determining the risk of developing hypertension used in the step (a) is an additional sequence as long as it does not inhibit SNP typing other than a sequence complementary or homologous to the base sequence of the gene to be detected. Can have. Examples of such additional sequences include restriction enzyme recognition sequences and sequences used for labeling nucleic acids. Moreover, in order to facilitate the detection and analysis of the SNP typing result, a labeling substance can be added to each polynucleotide for determining the risk of developing hypertension to the extent that SNP typing is not inhibited. The labeling substance is not particularly limited as long as it is a compound usually used for labeling polynucleotides. Examples of the labeling substance include radioisotopes, fluorescent substances, chemiluminescent substances, and low molecular weight compounds such as biotin.
また、ヒト個体から採取された核酸、高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド等の、ＳＮＰタイピングにおいて用いられる量は、特に限定されるものではなく、通常用いられる量で用いることができる。また、ポリメラーゼ等の酵素や、ヌクレオチド、反応用バッファー等は、特に限定されるものではなく、通常ＳＮＰタイピングを行う場合に用いられるものを、通常用いられる量で用いることができる。 Moreover, the amount used in SNP typing, such as a nucleic acid collected from a human individual and a polynucleotide for determining the risk of developing hypertension, is not particularly limited, and can be used in a commonly used amount. In addition, enzymes such as polymerase, nucleotides, reaction buffers, and the like are not particularly limited, and those usually used when performing SNP typing can be used in the amounts usually used.
次に、工程（ｂ）として、工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する。例えば、高血圧発症リスクは、下記表４〜９等のオッズ比を利用して判定してもよい。その他、本発明の高血圧の遺伝子マーカーについてメタアナリシスを行って得られるオッズ比を利用して判定してもよく、本発明の高血圧の遺伝子マーカーについてコホート研究を行って得られる相対危険度（リスク比）を利用して判定してもよく、他の従来公知の統計手法を用いて統計学的に処理した値を利用して判定してもよい。 Next, as step (b), the risk of developing hypertension of the human individual is determined based on the typing result obtained in step (a). For example, the risk of developing hypertension may be determined using the odds ratios shown in Tables 4 to 9 below. In addition, the relative risk (risk ratio) obtained by performing a cohort study on the hypertension gene marker of the present invention may be determined using an odds ratio obtained by performing a meta-analysis on the hypertension gene marker of the present invention. ) May be used, or may be determined using a value statistically processed using another conventionally known statistical method.
具体的には、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）のタイピング結果を用いる場合には、ＡＡ型、ＣＡ型、ＣＣ型の順にリスクが高いと判定することができる。
また、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）のタイピング結果を用いる場合には、ＧＧ型、ＧＡ型、ＡＡ型の順にリスクが高いと判定することができる。
また、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）のタイピング結果を用いる場合には、ＴＴ型、ＣＴ型、ＣＣ型の順にリスクが高いと判定することができる。
さらに、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）のタイピング結果を用いる場合には、ＣＣ型、ＴＣ型、ＴＴ型の順にリスクが高いと判定することができる。
Specifically, when the typing result of SNP (rs8101030) is used, it can be determined that the risk is higher in the order of AA type, CA type, and CC type.
Moreover, when using the typing result of SNP (rs4808521), it can be determined that the risk is higher in the order of GG type, GA type, and AA type.
Moreover, when using the typing result of SNP (rs17796739), it can be determined that the risk is higher in the order of TT type, CT type, and CC type.
Furthermore, when using the typing result of SNP (rs901792), it can be determined that the risk is higher in the order of CC type, TC type, and TT type.
また、本発明の遺伝子マーカーは、単独よりも組み合わせることにより、より適確に高血圧発症リスクを判定することができる。この際、その他の高血圧の遺伝子マーカーと組み合わせて使用することもできる。組み合わせる遺伝子マーカーは、特に限定されるものではなく、公知の高血圧の遺伝子マーカーを組み合わせてもよい。 In addition, the risk of developing hypertension can be determined more accurately by combining the gene markers of the present invention rather than alone. In this case, it can be used in combination with other hypertension gene markers. The gene marker to be combined is not particularly limited, and a known hypertension gene marker may be combined.
その他、工程（ｂ）における高血圧発症リスクの判定は、工程（ａ）により得られたタイピング結果と、遺伝子マーカー以外の１以上の高血圧の危険因子を組み合わせて行ってもよい。遺伝子マーカー以外の危険因子として、例えば、ヒト個体の性別、年齢、ＢＭＩ値、脳血管疾患の有無、心疾患の有無、喫煙の有無、飲酒量、総コレステロール値、ＨＤＬコレステロール値、中性脂肪値、空腹時血糖値等がある。 In addition, the determination of the risk of developing hypertension in the step (b) may be performed by combining the typing result obtained in the step (a) and one or more risk factors for hypertension other than the genetic marker. As risk factors other than genetic markers, for example, sex, age, BMI value, presence or absence of cerebrovascular disease, presence or absence of heart disease, presence or absence of smoking, alcohol consumption, total cholesterol level, HDL cholesterol level, or neutral fat level There are fasting blood glucose levels, etc.
工程（ａ）におけるＳＮＰタイピングを、マイクロアレイ法を用いて行う場合には、固相担体上に、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）検出用ポリヌクレオチドとの少なくとも１が固定されているマイクロアレイを用いることが好ましい。 When the SNP typing in the step (a) is performed using the microarray method, the polynucleotide for detecting SNP (rs8101030), the polynucleotide for detecting SNP (rs4808521), and the detection of SNP (rs17796739) are detected on the solid support. It is preferable to use a microarray in which at least one of the polynucleotide for detection and the polynucleotide for detection of SNP (rs901792) is fixed.
なお、本発明においてマイクロアレイとは、固相担体上にプローブとなるポリヌクレオチドが、位置を特定できるように固定された検出デバイスのことを言い、プローブ（ポリヌクレオチ）が固相化された担体自体は分散性であってもよく、検出時に位置が特定できるように２次元的な固相担体上に固定化できる状態であればよい。 In the present invention, the microarray refers to a detection device in which a polynucleotide serving as a probe is immobilized on a solid phase carrier so that the position can be specified, and the carrier itself on which a probe (polynucleotide) is immobilized. May be dispersible, as long as it can be immobilized on a two-dimensional solid phase carrier so that the position can be specified during detection.
また、工程（ａ）におけるＳＮＰタイピングに用いる高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチド等をキット化することにより、より簡便に工程（ａ）のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上のＳＮＰのタイピングに用いられるＳＮＰタイピングキットとして、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）検出用ポリヌクレオチドと、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）検出用ポリヌクレオチドと、固相担体上にこれらの高血圧発症リスク判定用ポリヌクレオチドの少なくとも１が固定されているマイクロアレイと、からなる群より選ばれる１以上を含むものであることが好ましい。 Further, by preparing a polynucleotide for determining the risk of developing hypertension used for SNP typing in the step (a), the SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and As a SNP typing kit used for typing one or more SNPs selected from the group consisting of SNP (rs901792), a polynucleotide for detecting SNP (rs8101030), a polynucleotide for detecting SNP (rs4808521), and a SNP (rs17796739) detection A polynucleotide for detecting SNP (rs901792), and a microarray in which at least one of these polynucleotides for determining the risk of developing hypertension is immobilized on a solid phase carrier. When, it preferably contains one or more selected from the group consisting of.
＜ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損小動物＞
前述のように、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子を欠損させた小動物は、高血圧症状を呈する。このため、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損小動物は、高血圧病態モデルとして使用することができる。なお、本発明及び本願明細書において、「高血圧病態」には、高血圧のみならず、高血圧に起因して発症する疾患、若しくは発症が高血圧と何らかの因果関係があると推察される疾患も含まれる。このような疾患としては、例えば、心臓、血管系、脳、腎臓等の疾患・障害が挙げられる。また、例えば、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損小動物は、カルシウム拮抗薬や高血圧薬のスクリーニングのための試験動物として使用することができる。
<TRIC-A gene deficient small animal>
As described above, small animals deficient in the TRIC-A gene exhibit hypertension. For this reason, the TRIC-A gene-deficient small animal can be used as a hypertension disease state model. In the present invention and the specification of the present application, “hypertension pathology” includes not only hypertension but also diseases that develop due to hypertension or diseases whose onset is presumed to have some causal relationship with hypertension. Examples of such diseases include diseases / disorders such as heart, vascular system, brain and kidney . In addition, for example, TRIC-A gene-deficient small animals can be used as test animals for screening for calcium antagonists and hypertension drugs.
本発明において用いられるＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損小動物は、コンベンショナルな欠損小動物であってもよく、組織特異的や時期特異的にＴＲＩＣ−Ａ遺伝子を欠損させるコンディショナルな欠損小動物であってもよい。なお、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損小動物は、相同組み換えを利用した方法等、遺伝子欠損動物を作製する際に用いられる公知の手法の中から適宜選択して用いることができる。また、本発明及び本願明細書において、実験小動物としては、例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ、ネコ等が挙げられる。 The TRIC-A gene-deficient small animal used in the present invention may be a conventional deficient small animal or a conditional deficient small animal that lacks the TRIC-A gene in a tissue-specific or time-specific manner. The TRIC-A gene-deficient small animal can be used by appropriately selecting from known techniques used for preparing gene-deficient animals such as a method using homologous recombination. In the present invention and the present specification, examples of small experimental animals include mice, rats, rabbits, guinea pigs, dogs and cats.
次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。 EXAMPLES Next, although an Example is shown and this invention is demonstrated further in detail, this invention is not limited to a following example.
[実施例１] ＴＲＩＣ遺伝子欠損マウスの血圧測定
野生型マウス、ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウス、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス、及び、ＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスの血圧を測定した。
なお、各欠損マウスは、非特許文献１に記載の方法で作製した。具体的には、まず、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子又はＴＲＩＣ−Ｂ遺伝子の第１番目のエキソンの末端にネオマイシン耐性遺伝子を組み込んだターゲッティングベクターを作製し、当該ターゲッティングベクターをエレクトロポレーション法によりＥＳ細胞に導入して遺伝子相同組み換えによりＥＳ細胞に導入し、相同的遺伝子組換えが起こったＥＳ細胞を選別した。インジェクション法により、この遺伝子組換えＥＳ細胞を胚盤胞期のマウス胚中に注入して作製したキメラ胚を偽妊娠マウスの子宮に移植し、生殖細胞が組換えＥＳ細胞由来の細胞により形成されているキメラマウスを得た。このキメラマウス同士を交配することにより、各欠損マウスを得た。
[Example 1] Measurement of blood pressure of TRIC gene-deficient mice The blood pressure of wild-type mice, TRIC-B hetero-deficient mice, TRIC-A homo-deficient mice, and TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mice was measured. .
Each deficient mouse was prepared by the method described in
血圧測定は、８〜１２週齢の雌雄のマウスを用いて、Ｔａｉｌ−ｃｕｆｆ法により行った。各マウスにつき１日５回を３日間測定し、得られた測定値の中から最大値及び最小値を除いた３回分を、１匹分のデータとした。測定結果を表１に示す。表１中、「ＢＷ」は体重（ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）を、「ＨＲ」は心拍数（ｈｅａｒｔ ｒａｔｅ）を、「ＳＢＰ」は収縮期血圧（ｓｙｓｔｏｌｉｃ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を、「ＤＢＰ」は拡張期血圧（ｄｉａｓｔｏｌｉｃ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を、「ＭＢＰ」は平均血圧（ｍｅａｎ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を、それぞれ意味する。また、「ＷＴ」は野生型マウスを、「Ｂ＋／−」はＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスを、「Ａ−／−」はＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウスを、「Ａ−／−Ｂ＋／−」はＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスを、それぞれ意味し、「ｎ」は、測定に用いたマウスの数を意味する。さらに、ｐ値は、全て野生型マウスに対するものである。この結果、ＴＲＩＣ−Ａがホモ欠損であるＴＲＩＣ−Ａホモ欠損体及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損体において、徐脈及び高血圧が観察された。 Blood pressure was measured by the tail-cuff method using male and female mice aged 8 to 12 weeks. Each mouse was measured 5 times a day for 3 days, and 3 times from the obtained measured values excluding the maximum value and the minimum value were used as data for 1 mouse. The measurement results are shown in Table 1. In Table 1, “BW” indicates body weight, “HR” indicates heart rate, “SBP” indicates systolic blood pressure, and “DBP” indicates diastolic blood pressure. “blood pressure” and “MBP” mean mean blood pressure, respectively. “WT” is a wild type mouse, “B +/−” is a TRIC-B hetero-deficient mouse, “A − / −” is a TRIC-A homo-deficient mouse, “A − / − B +/−”. Means TRIC-A homozygous and TRIC-B hetero-deficient mice, respectively, and “n” means the number of mice used for measurement. Furthermore, all p values are for wild type mice. As a result, bradycardia and hypertension were observed in the TRIC-A homo-deficient and TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient in which TRIC-A was homo-deficient.
さらに、野生型マウスとＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウス（各６匹）に対して、アンジオテンシン受容体、ＲｈｏＫ、ａ１受容体、エンドセリン受容体、及びバソプレシン受容体に対する阻害薬、並びにムスカリン受容体に対する作動薬を適用し、血圧の変化を観察した。アンジオテンシン受容体ｂｌｏｃｋｅｒとしてＣａｎｄｅｓａｒｔａｎ（図１中、「Ｃａｎｄｅ」）を、ＲｈｏＫ阻害薬としてＹ−２７６３２を、ａ１ ｂｌｏｃｋｅｒとしてＰｒａｚｏｓｉｎを、エンドセリン受容体阻害薬としてＢＱ１２３を、バソプレシン受容体阻害薬としてＯＰＣ−２１２６８を、ムスカリン受容体作動薬としてカルバコール（ＣＣｈ)を、それぞれ用いた。
具体的には、各マウスについて、薬剤適用前の収縮期血圧と、薬剤の腹腔内投与後１５〜３０分の収縮期血圧とをＴａｉｌ−ｃｕｆｆ法により測定し、薬剤適用前の収縮期血圧に対する薬剤投与後の収縮期血圧の変化率（ΔＳＢＰ）を算出した。算出結果を図１に示す。なお、バソプレシン受容体阻害薬は血圧を変化させなかったため、図示を省略した。この結果、各薬物の血圧に対する効果には、両マウス群において顕著な差は観察されなかった。したがって、これらの昇圧液性因子は、ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子欠損体において発症している高血圧とは無関係であることが示唆された。
Furthermore, against wild-type mice and TRIC-A homo-TRIC-B heterodeficient mice (6 mice each), an inhibitor of angiotensin receptor, RhoK, a1 receptor, endothelin receptor, and vasopressin receptor, and An agonist for muscarinic receptors was applied and changes in blood pressure were observed. Candesartan (“Cande” in FIG. 1) as an angiotensin receptor blocker, Y-27632 as a RhoK inhibitor, Prazosin as an a1 blocker, BQ123 as an endothelin receptor inhibitor, and OPC-21268 as a vasopressin receptor inhibitor And carbachol (CCh) as muscarinic receptor agonists, respectively.
Specifically, for each mouse, the systolic blood pressure before drug application and the
次に、野生型マウス、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス、及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウス（各７匹）に対して、自立神経拮抗薬であるａｔｒｏｐｉｎｅとｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌを適用し、血圧の変化を観察した。具体的には、各マウスについて、４ｍｇ／ｋｇのａｔｒｏｐｉｎｅ、４ｍｇ／ｋｇのｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌ、又は４ｍｇ／ｋｇのａｔｒｏｐｉｎｅと４ｍｇ／ｋｇのｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌとの両方を、それぞれ投与し、投与前（表中、「Ｂｅｆｏｒｅ」）と投与後（表中、「Ａｆｔｅｒ」）の収縮期血圧及び心拍数を測定し、その変化を調べた。表２に収縮期血圧（ＳＢＰ）の測定結果を、表３に心拍数（ＨＲ）の測定結果を、それぞれ示す。この結果、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスに対しては、ａｔｒｏｐｉｎｅ又はｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌを適用した場合でも、高血圧症状は保持された。一方で、心拍数は、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスは、ａｔｒｏｐｉｎｅ又はｍｅｔｏｐｒｏｌｏｌの適用により、野生型マウスと同様の内因性心拍数を示した。
これらの結果から、ＴＲＩＣ−Ａ欠損により引き起こされる高血圧は、交感神経活動の亢進によるものではないこと、及び、徐脈症状は、高血圧による圧受容器反射の亢進による二次的な異常であることが示唆された。
Next, to the wild-type mouse, the TRIC-A homo-deficient mouse, and the TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mouse (7 mice each), the autonomic antagonists atropine and mettorol were applied, The change of was observed. Specifically, for each mouse, 4 mg / kg atropine, 4 mg / kg methoprol, or both 4 mg / kg atropine and 4 mg / kg methoprol were respectively administered before administration (in the table, “Before” )) And post-administration (“After” in the table) were measured for systolic blood pressure and heart rate, and the changes were examined. Table 2 shows the results of measuring systolic blood pressure (SBP), and Table 3 shows the results of measuring heart rate (HR). As a result, hypertension symptoms were maintained even when atropine or methoprol was applied to TRIC-A homo-deficient mice and TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mice. On the other hand, TRIC-A homo-deficient mice and TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mice showed the same intrinsic heart rate as wild-type mice by applying atropine or methoprol.
From these results, hypertension caused by TRIC-A deficiency is not due to increased sympathetic nerve activity, and bradycardia may be a secondary abnormality due to increased baroreceptor reflex due to hypertension. It was suggested.
[実施例２] ＴＲＩＣ遺伝子欠損マウスの腸間膜動脈の筋原性収縮測定
野生型マウス（１匹）、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウス（３匹）、及びＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウス（３匹）から腸間膜動脈を摘出し、両端にガラス毛細管を挿入した灌流血管標本を作製し、ビデオカメラを搭載した顕微鏡にセットすることで、血管径の変化を観察することで、筋原性収縮の測定を行った。
図２は、各マウス群の腸間膜動脈の血管径の変化を示している。図２（Ａ）は、血管内圧を１０〜９０ｍｍＨｇまで増大させた時の血管径の変化を示し、図２（Ｂ）は、７０ｍｍＨｇ負荷時の筋原性収縮（灌流液をカルシウムイオンフリーにしたときの血管径との差）を示している。図２（Ａ）に示すように、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウスは、野生型マウスに比べて各内圧での血管径は小さかった。また、図２（Ｂ）の７０ｍｍＨｇ負荷時の例を示すように、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウスは、野生型マウスよりも筋原性収縮が大きく、血管が常に収縮していると考えられた。
さらに、１０−７Ｍのｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ又は１０−７Ｍのａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（ＡＣｈ）で処理した場合の血管径を、処理前と比較して、その変化を調べた。ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ処理により血管は収縮し、ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ処理により血管は弛緩する。具体的には、灌流液にｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ又はａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅを添加する前の血管径と、添加後の血管径とを測定し、添加前の血管径に対する添加後の血管径の変化量を算出した。図３は、ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ（Ａ）及びａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（Ｂ）を処理した場合の血管径の変化の測定結果を示した図である。この結果、腸管膜動脈では、両欠損マウスと野生型マウスでは、ｐｈｅｎｙｌｅｐｈｒｉｎｅ収縮に大きな差異はみられなかった。一方、ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ単独処理の場合には、野生型マウスでは血管径にほとんど変化がみられなかったが、ＴＲＩＣ−Ａホモ欠損マウスとＴＲＩＣ−Ａホモ・ＴＲＩＣ−Ｂへテロ欠損マウスでは、ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ処理により血管が顕著に弛緩した。この結果は、両欠損マウスにおいて、定常状態の筋原性収縮が大きくなっていることとも一致した。
このように、抵抗血管である腸管膜動脈において、ＴＲＩＣ−Ａ欠損マウス由来の血管では、定常時筋原性収縮が各内圧で顕著に上昇している（血管内径が収縮している）ことが観察された。これらの結果から、ＴＲＩＣ−Ａ欠損は、内皮又は平滑筋細胞の機能異常を誘導し、血圧を上昇させることが示唆される。
[Example 2] Measurement of myogenic contraction of mesenteric artery in TRIC gene-deficient mice Wild-type mice (1), TRIC-A homo-deficient mice (3), and TRIC-A homo-TRIC-B hetero By removing the mesenteric artery from 3 mice and preparing a perfused blood vessel sample with glass capillaries at both ends, and setting it on a microscope equipped with a video camera, The myogenic contraction was measured.
FIG. 2 shows changes in the vascular diameter of the mesenteric artery in each mouse group. FIG. 2A shows changes in blood vessel diameter when the intravascular pressure was increased to 10 to 90 mmHg, and FIG. 2B shows myogenic contraction when the 70 mmHg load was applied (the perfusate was made free of calcium ions). (Difference with blood vessel diameter). As shown in FIG. 2 (A), TRIC-A homo-deficient mice had smaller blood vessel diameters at each internal pressure than wild-type mice. Moreover, as shown in the example at the time of 70 mmHg load of FIG. 2 (B), it was thought that the TRIC-A homo-deficient mouse had larger myogenic contraction than the wild type mouse, and the blood vessels were always contracted.
Further, the diameter of the blood vessel when treated with 10 -7 M of phenylephrine or 10 -7 M of acetylcholine (ACh), as compared to pre-treatment was investigated the change. A blood vessel contracts by phenylephrine treatment, and a blood vessel relaxes by an acylcholine treatment. Specifically, the blood vessel diameter before adding phenylephrine or acylcholine to the perfusate and the blood vessel diameter after the addition were measured, and the amount of change in the blood vessel diameter after the addition relative to the blood vessel diameter before the addition was calculated. FIG. 3 is a diagram showing measurement results of changes in blood vessel diameter when phenylephrine (A) and acylcholine (B) are treated. As a result, in the mesenteric artery, no significant difference was observed in phenylephrine contraction between both deficient mice and wild type mice. On the other hand, in the case of acetylcholine treatment alone, there was almost no change in blood vessel diameter in wild type mice, but in TRIC-A homo-deficient mice and TRIC-A homo-TRIC-B hetero-deficient mice, The blood vessels were significantly relaxed. This result was consistent with the increased steady state myogenic contraction in both deficient mice.
Thus, in the mesenteric artery, which is a resistant blood vessel, in the blood vessels derived from TRIC-A-deficient mice, the steady-state myogenic contraction is significantly increased at each internal pressure (the inner diameter of the blood vessels is contracted). Observed. These results suggest that TRIC-A deficiency induces abnormal function of endothelial or smooth muscle cells and increases blood pressure.
なお、実施例１及び２の結果から、リアノジン受容体（ＲｙＲ２)とカルシウムイオン依存性カリウムイオンチャネル（ＢＫ）が中核となる血管平滑筋内の弛緩性膜電位調節機構の破綻が、ＴＲＩＣ−Ａ欠損マウスで想定される。 In addition, from the results of Examples 1 and 2, it was found that the disruption of the relaxing membrane potential regulating mechanism in vascular smooth muscles in which ryanodine receptor (RyR2) and calcium ion-dependent potassium ion channel (BK) are the core is TRIC-A. Assumed in deficient mice.
[実施例３] ＴＲＩＣ−Ａ遺伝子及びその近傍のＳＮＰと高血圧との相関
一般地域住民及び高血圧患者を対象とし、ＳＮＰの遺伝子型と高血圧との関連を調べた。
まず、対象者から採取した末梢血中の白血球からＤＮＡ抽出キットであるＱＩＡａｍｐ ＤＮＡ Ｂｌｏｏｄ Ｋｉｔ（キアゲン社製）を用いて、それぞれのゲノムＤＮＡを抽出した。得られたゲノムＤＮＡを、ＧｅｎｏｍｉＰｈｉ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）を用いて増幅した。増幅したＤＮＡをｂｕｆｆｅｒ ＡＥ（キアゲン社製）を用いて５０倍に希釈したものを、ＳＮＰタイピングに供した。
各対象者の増幅済みゲノムＤＮＡを鋳型として、ＳＮＰ（ｒｓ２２７９４４８）、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ２２７９４４９）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）をＴａｑＭａｎプローブ法で解析した。各ＳＮＰの検出には、特異的なＴａｑＭａｎ Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ Ａｓｓａｙ（アプライドバイオシステムズ社製）を用いた。具体的には、増幅済みゲノムＤＮＡ溶液２．０μＬに、２．５μＬのＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社製）、０．０５μＬの各多型に特異的なＴａｑＭａｎ Ｐｒｅ−Ｄｅｓｉｇｎｅｄ ＳＮＰ Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ Ａｓｓａｙ、０．４５μＬの蒸留水を加えて反応溶液を調整した後、ＰＣＲ法による伸長反応に供した。伸長反応は、５２℃で２分間、ついで９５℃で１０分間の加温の後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間の加温を６０回繰り返した。伸長反応後に、７９００ＨＴ Ｆａｓｔ リアルタイムＰＣＲシステム（アプライドバイオシステムズ社製）を用いて蛍光強度を測定することにより、遺伝子多型をタイピングした。使用したＴａｑＭａｎプライマーの型番は、ｒｓ２２７９４４８がＣ＿＿１５９６７８３８＿１０、ｒｓ８１０１０３０がＣ＿＿２９９９７１７７＿１０、ｒｓ４８０８５２１がＣ＿＿３１７６５８８５＿１０、ｒｓ２２７９４４９がＣ＿＿１５９６７８３７＿１０、ｒｓ１７７９６７３９がＣ＿＿３４０４４００４＿１０、ｒｓ９０１７９２がＣ＿＿１９７５５５７＿１０である。遺伝子解析は、本態性高血圧患者１１１９例、正常血圧者１１４０例を対象に行った。
[Example 3] Correlation between TRIC-A gene and SNP in the vicinity thereof and hypertension The relationship between SNP genotype and hypertension was examined in general residents and hypertensive patients.
First, each genomic DNA was extracted from leukocytes in peripheral blood collected from a subject using a DNA extraction kit QIAamp DNA Blood Kit (Qiagen). The obtained genomic DNA was amplified using GenomiPhi DNA Amplification Kit (GE Healthcare Bioscience). Amplified DNA diluted 50 times with buffer AE (Qiagen) was subjected to SNP typing.
Using the amplified genomic DNA of each subject as a template, SNP (rs2279448), SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs2279449), SNP (rs17796739), and SNP (rs9017992) were analyzed by the TaqMan probe method. For detection of each SNP, specific TaqMan Pre-Designed SNP Genotyping Assay (Applied Biosystems) was used. Specifically, 2.5 μL of TaqMan Universal Master Mix (Applied Biosystems), 0.05 μL of TaqMan Pre-Designed SNP Genotyping Assay, 0.45 μL of distilled water was added to prepare a reaction solution, which was then subjected to an extension reaction by the PCR method. In the extension reaction, after heating at 52 ° C. for 2 minutes and then at 95 ° C. for 10 minutes, heating at 95 ° C. for 15 seconds and 60 ° C. for 1 minute was repeated 60 times. After the extension reaction, the gene polymorphism was typed by measuring the fluorescence intensity using a 7900HT Fast real-time PCR system (Applied Biosystems). The model numbers of the TaqMan primers used were C__15996738_10 for rs2279448, C__29999777_10 for rs8101030, C__317685885_10 for rs4808521, C__15967837_10 for rs22779449, and _74041904_92 for C__4404904_92_92 Genetic analysis was performed on 1119 patients with essential hypertension and 1140 patients with normal blood pressure.
同定されたＳＮＰの遺伝子型と高血圧との相関を、相関解析（アソシエーション法）により解析した。具体的には、対象者を、ヒト本態性高血圧群（収縮期血圧１４０ｍｍＨｇ以上、及び/又は拡張期血圧９０ｍｍＨｇ以上、及び/又は降圧薬服用）と正常血圧群（高血圧群以外）とに分類し、上記で同定された多型の頻度を解析した。統計学的な解析手法としてはχ二乗検定を用いた。解析結果を表４〜９に示す。
The correlation between the identified SNP genotype and hypertension was analyzed by correlation analysis (association method). Specifically, the subjects are classified into human essential hypertension groups (
この結果、表中のｐ値から明らかであるように、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）の４種のＳＮＰが、高血圧と有意な関連を示した。
これらの結果から、この４種のＳＮＰの遺伝子型を調べることにより、高血圧を発症する相対危険度を判定出来ることが明らかである。
As a result, as is apparent from the p-value in the table, four types of SNPs, SNP (rs8101030), SNP (rs48085521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) showed a significant association with hypertension. .
From these results, it is clear that the relative risk of developing hypertension can be determined by examining the genotypes of these four SNPs.
本発明の高血圧の遺伝子マーカーを用いることにより、高血圧発症のリスクをより適確に判定し得るため、本発明は主に、医療機関等における検体の遺伝子解析等の分野において利用が可能である。 Since the hypertension gene marker of the present invention can be used to more accurately determine the risk of developing hypertension, the present invention can be used mainly in the field of gene analysis of specimens in medical institutions and the like.
Claims (9)
前記ＳＮＰが、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択されることを特徴とする高血圧の遺伝子マーカー。 It consists of SNP of TRIC-A gene including SNP (single nucleotide polymorphism) of TRIC-A gene,
The hypertensive genetic marker, wherein the SNP is selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792).
（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、
を有し、
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）がＡＡ型、ＣＡ型、ＣＣ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、高血圧発症リスク判定方法。 A method for determining the risk of developing hypertension using genetic markers,
(A) typing one or more selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) of nucleic acid collected from a human individual;
(B) determining the risk of developing hypertension of the human individual based on the typing result obtained by the step (a);
Have
Wherein in step (b), SNP (rs8101030) are type AA, CA type, and judging that there is a high risk in the order of CC-type, hypertension risk judging method.
（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、
を有し、
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）がＧＧ型、ＧＡ型、ＡＡ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、高血圧発症リスク判定方法。 A method for determining the risk of developing hypertension using genetic markers,
(A) typing one or more selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) of nucleic acid collected from a human individual;
(B) determining the risk of developing hypertension of the human individual based on the typing result obtained by the step (a);
Have
In the step (b), it is determined that the risk is high in the order of GG type, GA type, and AA type in SNP (rs4808521) , and a method for determining the risk of developing hypertension.
（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、
を有し、
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）がＴＴ型、ＴＣ型、ＣＣ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、高血圧発症リスク判定方法。 A method for determining the risk of developing hypertension using genetic markers,
(A) typing one or more selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) of nucleic acid collected from a human individual;
(B) determining the risk of developing hypertension of the human individual based on the typing result obtained by the step (a);
Have
Wherein in step (b), SNP (rs17796739) is TT type, TC type, and judging that there is a high risk in the order of CC-type, hypertension risk judging method.
（ａ）ヒト個体から採取された核酸の、ＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）、ＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）、ＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）、及びＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）からなる群より選択される１以上をタイピングする工程と、
（ｂ）前記工程（ａ）により得られたタイピング結果に基づき、前記ヒト個体の高血圧発症リスクを判定する工程と、
を有し、
前記工程（ｂ）において、ＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）がＣＣ型、ＴＣ型、ＴＴ型の順にリスクが高いと判定することを特徴とする、高血圧発症リスク判定方法。 A method for determining the risk of developing hypertension using genetic markers,
(A) typing one or more selected from the group consisting of SNP (rs8101030), SNP (rs4808521), SNP (rs17796739), and SNP (rs901792) of nucleic acid collected from a human individual;
(B) determining the risk of developing hypertension of the human individual based on the typing result obtained by the step (a);
Have
Wherein in step (b), SNP (rs901792) is type CC, TC type, and judging that there is a high risk in the order of TT type, hypertension risk judging method.
（ａ）配列番号１で表される塩基配列、又は配列番号１で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｄ）配列番号２で表される塩基配列、又は配列番号２で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ８１０１０３０）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。 The following (a), (b), (d), or (e) nucleotide sequence, which can be used as a primer or probe for detecting SNP (rs8101030) Polynucleotide for use.
(A) A base sequence represented by SEQ ID NO: 1 or a partial sequence of 15 to 60 bases in length containing SNP (rs8101030) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 1.
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(D) A base sequence that is a partial sequence of 15 to 60 bases in length including the base sequence represented by SEQ ID NO: 2 or the SNP (rs8101030) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 2.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
（ａ）配列番号３で表される塩基配列、又は配列番号３で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｄ）配列番号４で表される塩基配列、又は配列番号４で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ４８０８５２１）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。 The following (a), (b), (d), or (e) nucleotide sequence, which can be used as a primer or probe for detecting SNP (rs48085521) Polynucleotide for use.
(A) A base sequence that is a partial sequence of 15 to 60 bases in length including the base sequence represented by SEQ ID NO: 3 or the SNP (rs 4808521) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 3.
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(D) A base sequence represented by SEQ ID NO: 4 or a partial sequence having a length of 15 to 60 bases including SNP (rs48085521) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 4.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
（ａ）配列番号５で表される塩基配列、又は配列番号５で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｄ）配列番号６で表される塩基配列、又は配列番号６で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ１７７９６７３９）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。 The following (a), (b), (d), or (e) nucleotide sequence, which can be used as a primer or probe for detecting SNP (rs17796739) Polynucleotide for use.
(A) a base sequence represented by SEQ ID NO: 5, or a base sequence that is a partial sequence having a length of 15 to 60 bases including SNP (rs17796739) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 5;
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(D) A base sequence represented by SEQ ID NO: 6 or a partial sequence having a length of 15 to 60 bases including SNP (rs17796739) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 6.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
（ａ）配列番号７で表される塩基配列、又は配列番号７で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｂ）前記（ａ）の塩基配列と相補的な塩基配列。
（ｄ）配列番号８で表される塩基配列、又は配列番号８で表される塩基配列のＳＮＰ（ｒｓ９０１７９２）を含む１５〜６０塩基長の部分配列である塩基配列。
（ｅ）前記（ｄ）の塩基配列と相補的な塩基配列。 The following (a), (b), (d), or (e) nucleotide sequence, and can be used as a primer or a probe for detecting SNP (rs901792), which is used to determine the risk of developing hypertension Polynucleotide for use.
(A) a base sequence represented by SEQ ID NO: 7, or a base sequence that is a partial sequence having a length of 15 to 60 bases including SNP (rs901792) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 7.
(B) A base sequence complementary to the base sequence of (a).
(D) A base sequence that is a partial sequence of 15 to 60 bases in length including the base sequence represented by SEQ ID NO: 8 or the SNP (rs901792) of the base sequence represented by SEQ ID NO: 8.
(E) A base sequence complementary to the base sequence of (d).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010034415A JP5757647B2 (en) | 2010-02-19 | 2010-02-19 | SNP marker for hypertension, method for determining risk of developing hypertension, and method for using small animals susceptible to hypertension susceptibility genes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2010034415A JP5757647B2 (en) | 2010-02-19 | 2010-02-19 | SNP marker for hypertension, method for determining risk of developing hypertension, and method for using small animals susceptible to hypertension susceptibility genes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2011167126A JP2011167126A (en) | 2011-09-01 |
| JP5757647B2 true JP5757647B2 (en) | 2015-07-29 |
Family
ID=44681913
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2010034415A Expired - Fee Related JP5757647B2 (en) | 2010-02-19 | 2010-02-19 | SNP marker for hypertension, method for determining risk of developing hypertension, and method for using small animals susceptible to hypertension susceptibility genes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP5757647B2 (en) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1383798A4 (en) * | 2001-04-12 | 2005-01-12 | Incyte Genomics Inc | Transporters and ion channels |
-
2010
- 2010-02-19 JP JP2010034415A patent/JP5757647B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2011167126A (en) | 2011-09-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5608944B2 (en) | Identification of hypertension susceptibility genes | |
| JP2012511895A (en) | Genetic variants responsible for human cognition and methods of using them as diagnostic and therapeutic targets | |
| US9040238B2 (en) | Polynucleotides for use in medicine | |
| CA3111819A1 (en) | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of lymphatic system disorders | |
| JP5757647B2 (en) | SNP marker for hypertension, method for determining risk of developing hypertension, and method for using small animals susceptible to hypertension susceptibility genes | |
| WO2013035861A1 (en) | Method for determining susceptibility to age-related macular degeneration, primer pair, probe, age-related macular degeneration diagnostic kit, therapeutic agent for age-related macular degeneration, and screening method for therapeutic agent for age-related macular degeneration | |
| WO2007073160A2 (en) | Methods for improving turkey meat production | |
| CA2596569A1 (en) | Pharmacogenomics of blood pressure lowering agents | |
| US20100138943A1 (en) | Identification of group of hypertension-susceptibility genes | |
| Asirvatham | Investigating the role of Osteopontin in cardiac hypertrophy | |
| KR101501083B1 (en) | Marker composition for diagnosing diabetes and method for diagnosing or determining the risk of developing diabetes using the same | |
| JP2010088342A (en) | Single nucleotide polymorphism (snp) marker associated with onset of hypertension, and use of the same | |
| Cunnington | Investigation of the mechanisms mediating genetic susceptibility to cardiovascular disease on chromosomes 9p21 and 2q24 | |
| WO2010054806A1 (en) | X-chromosomal variation as a diagnostic and therapeutic marker for the progression to aids | |
| Carstens | Renin-angiotensin-aldosterone system genes and the complex hypertrophic phenotype of hypertrophic cardiomyopathy | |
| CN1858241A (en) | Method for predicting angiotonin II receptor agonist hypotensor function and use | |
| Sepahvand et al. | Investigaition of Myostatin gene polymorphism in Lory sheep breed | |
| JP2014158439A (en) | Risk marker for medicament-induced gastrointestinal bleeding and use thereof | |
| JP2004041055A (en) | Method for predict presence or absence of predisposition of polydipsia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20130215 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140708 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140905 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150203 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150318 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20150409 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150519 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150601 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5757647 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |