JP5686468B2 - B型肝炎ウイルス(HBV)の疎水性修飾されたpreS由来ペプチド及び肝臓に化合物を特異的に送達するためのビヒクルとしてのそれらの使用 - Google Patents
B型肝炎ウイルス(HBV)の疎水性修飾されたpreS由来ペプチド及び肝臓に化合物を特異的に送達するためのビヒクルとしてのそれらの使用 Download PDFInfo
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Description
肝炎:主に様々なウイルスにより引き起こされるが、或る特定の毒、自己免疫又は遺伝性疾患によっても引き起こされる肝臓の炎症、
肝硬変:死滅肝臓細胞を置き換える、肝臓における線維組織の形成(肝臓細胞の死滅は、例えばウイルス性肝炎、アルコール依存症又は他の肝毒性の化学物質への接触により引き起こされ得る)、
ヘモクロマトーシス:身体において鉄の集積を引き起こし、最終的には肝臓損傷をもたらす遺伝性疾患、
肝臓の癌:通常胃腸管の他の部分に由来する、原発性の肝細胞癌腫(HCC)又は胆管癌腫及び転移性癌、
ウィルソン病:銅が身体に保持される遺伝性疾患、
原発性硬化性胆管炎:事実上自己免疫性である胆汁管の炎症性疾患、
原発性胆汁性肝硬変:細胆汁管の自己免疫疾患、
バッド・キアリ症候群:肝静脈の閉塞、
ジルベール症候群:集団の約5%に見られるビリルビン代謝の遺伝障害、
II型糖原病:全身の進行性の筋力低下(ミオパシー)を引き起こし、特に心臓、骨格筋、肝臓及び神経系で様々な身体組織に影響を与えるグリコーゲンの蓄積、
が存在する。
[Hm−P−Rn]AO
を有する。
上記で概説されたように、本発明はB型肝炎ウイルス(HBV)の疎水性修飾されたpreS由来ペプチドを提供する。
アミノ酸残基番号1は遺伝子型D(以前は亜型aywと記載される、配列番号5も参照されたい)のメチオニン(Met1)であるが、アミノ酸残基番号(−11)は遺伝子型C(配列番号4)のメチオニン(Met(−11))である。in vivoでMet1又はMet(−11)をそれぞれ、細胞メチオニルアミノペプチダーゼにより切断し、その後N−ミリストイルトランスフェラーゼによりミリストイル残基をそれぞれ、ミリストイル−CoAからアミノ酸残基番号2のグリシン(Gly2)又はアミノ酸残基番号(−10)のグリシン(Gly(−10))に移動させることにより修飾する。遺伝子型DのN末端アミノ酸残基が天然アミノ酸グリシン(Gly2)であり、Lの基となるオープンリーディングフレームのコドンからのそれぞれのナンバリングに従って2の番号が付けられる(又は例えば遺伝子型CではGly(−10))。
Met(−11)、残基番号(−11)は配列番号1ではアミノ酸残基1として挙げられている。
Gly(−10)、残基番号(−10)は配列番号1ではアミノ酸残基2として挙げられている。
Met1、残基番号1は配列番号1ではアミノ酸残基12として挙げられている。
Gly2、残基番号2は配列番号1ではアミノ酸残基13として挙げられている。
Gly48、残基番号48は配列番号1ではアミノ酸残基58として挙げられている。
(−11)−M GGWSS TPRKG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFRA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG−48
配列番号2 HBV遺伝子型A
(−11)−M GGWSS KPRKG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PVKDD WPAAN QVG−48
配列番号3 HBV遺伝子型B
(−11)−M GGWSS KPRKG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFKA NSENP DWDLN PHKDN WPDAN KVG−48
配列番号4 46位がGln(Q)の代わりにLys(K)であること以外はHBV遺伝子型Cに対応する、人工のアミノ酸配列(Q46K)
(−11)−M GGWSS KPRQG MGTNL SVPNP LGFFP DHQLD PAFGA NSNNP DWDFN PNKDH WPEAN KVG−48
配列番号5 HBV遺伝子型D
1−MGQNL STSNP LGFFP DHQLD PAFRA NTANP DWDFN PNKDT WPDAN KVG−48
配列番号6 HBV遺伝子型E
(−10)−MGLSW TVPLE WGKNI STTNP LGFFP DHQLD PAFRA NTRNP DWDHN PNKDH WTEAN KVG−48
配列番号7 HBV遺伝子型F
(−11)−M GAPLS TTRRG MGQNL SVPNP LGFFP DHQLD PLFRA NSSSP DWDFN TNKDS WPMAN KVG−48
配列番号8 HBV遺伝子型G
(−10)−MGLSW TVPLE WGKNL SASNP LGFLP DHQLD PAFRA NTNNP DWDFN PKKDP WPEAN KVG−48
配列番号9 HBV遺伝子型H
(−11)−M GAPLS TARRG MGQNL SVPNP LGFFP DHQLD PLFRA NSSSP DWDFN TNKDN WPMAN KVG−48
配列番号10 WMHBV
1−MGLNQ STFNP LGFFP SHQLD PLFKA NAGSA DWDKN PNKDP WPQAHDTA−48
HBV遺伝子型A Genbank AAT28684.1
HBV遺伝子型B Genbank AAU01950.1
HBV遺伝子型C Genbank ABV02850.1(46位はGln(Q)(ABV02850.1)ではなくLys(K)(配列番号4等)である)
HBV遺伝子型D Genbank AAR19337.1
HBV遺伝子型E Genbank ABS31101.1
HBV遺伝子型F Genbank ABK19774.1
HBV遺伝子型G Genbank AAF34735.1/AF160501_3
HBV遺伝子型H Genbank AAM09052.1
WMHBV Genbank AAC16905.1
[Hm−P−Rn]AO
(式中、
Pが上記preS由来ペプチドであり、
HがPの上記疎水性修飾であり、
RがPのC末端修飾であり、
Aがアンカー基であり、
mが少なくとも1であり、
nが0又は少なくとも1であり、
oが0又は少なくとも1である)を有する。
配列番号1に示されるHBV preSコンセンサス配列のアミノ酸配列、又は
その変異体、
を含む。
アミノ酸残基2〜48[配列番号11]
アミノ酸残基2〜20
アミノ酸残基2〜21[配列番号12]
アミノ酸残基9〜15[配列番号21]
から選択されるアミノ酸配列を有する配列番号1の変異体を含む。
コンセンサス配列のアミノ酸残基2〜48[配列番号11]、
コンセンサス配列のアミノ酸残基2〜21[配列番号12]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基2〜48[配列番号13]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基5〜48[配列番号14]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基9〜48[配列番号15]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基2〜21[配列番号16]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基5〜21[配列番号17]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基9〜21[配列番号18]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基2〜15[配列番号19]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基5〜15[配列番号20]、
遺伝子型Cのアミノ酸残基9〜15[配列番号21]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基2〜48[配列番号23]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基5〜48[配列番号24]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基9〜48[配列番号25]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基2〜21[配列番号26]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基5〜21[配列番号27]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基9〜21[配列番号28]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基2〜20[配列番号38]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基2〜15[配列番号29]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基5〜15[配列番号30]、
遺伝子型Dのアミノ酸残基9〜15[配列番号21]
から選択されるアミノ酸配列を有する配列番号1の変異体を含む。
非荷電の極性側鎖を有するアミノ酸、例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン及びチロシン、
塩基性側鎖を有するアミノ酸、例えばリシン、アルギニン及びヒスチジン、
酸性側鎖を有するアミノ酸、例えばアスパラギン酸及びグルタミン酸、並びに
非極性側鎖を有するアミノ酸、例えばグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン及びシステインが挙げられる。
配列番号11(コンセンサス配列の残基2〜48)、
配列番号12(コンセンサス配列の残基2〜21)、
配列番号13(遺伝子型Cの残基2〜48)、
配列番号16(遺伝子型Cの残基2〜21)、
配列番号23(遺伝子型Dの残基2〜48)、
配列番号26(遺伝子型Dの残基2〜21)、
配列番号38(遺伝子型Dの残基2〜20)、及び
配列番号31(遺伝子型Cの残基2〜48、並びに21位、23位、29位及び30位でのAla突然変異)、
から選択されるアミノ酸配列を含む。
アシル化、
疎水性部分の付加、
から選択される。
Pは、配列番号11、配列番号12、配列番号13、配列番号16、配列番号23、配列番号26、配列番号31及び配列番号38から選択されるアミノ酸配列を含み、
Hは、ステアロイル(C18)又はミリストイル(C14)によるアシル化での疎水性修飾である。
上記で概説されたように、本発明は、肝臓に化合物を特異的に送達するためのビヒクル又はシャトルとしてのHBVの疎水性修飾されたpreS由来ペプチドの使用を提供する。
本発明に従って肝臓に特異的に送達される「化合物」は任意の種の化合物であり得る。
本発明の好ましい実施形態において、上記の疎水性修飾されたpreS由来ペプチド、特に化合物とのそれらの共役体は、肝疾患又は肝障害の診断、予防及び/又は治療のために与えられる。
肝炎:主に様々なウイルスにより引き起こされるが、或る特定の毒、自己免疫又は遺伝性疾患によっても引き起こされる肝臓の炎症、
肝硬変:死滅肝臓細胞を置き換える、肝臓における線維組織の形成(肝臓細胞の死滅は、例えばウイルス性肝炎、アルコール依存症又は他の肝毒性の化学物質への接触により引き起こされ得る)、
ヘモクロマトーシス:身体において鉄の集積を引き起こし、最終的には肝臓損傷をもたらす遺伝性疾患、
肝臓の癌:通常胃腸管の他の部分に由来する、原発性の肝細胞癌腫(HCC)又は胆管癌腫及び転移性癌、
ウィルソン病:銅が身体に保持される遺伝性疾患、
原発性硬化性胆管炎:事実上自己免疫性である胆汁管の炎症性疾患、
原発性胆汁性肝硬変:細胆汁管の自己免疫疾患、
バッド・キアリ症候群:肝静脈の閉塞、
ジルベール症候群:集団の約5%に見られるビリルビン代謝の遺伝障害、
II型糖原病:全身の進行性の筋力低下(ミオパシー)を引き起こし、特に心臓、骨格筋、肝臓及び神経系で様々な身体組織に影響を与えるグリコーゲンの蓄積、
小児肝疾患、例えば胆道閉鎖症、α−1−抗トリプシン欠乏症、アラジール症候群及び進行性家族性肝内胆汁鬱滞症、
代謝性疾患、
である。
上記で概説されたように、本発明は、本明細書中に規定のようなHBVの疎水性修飾されたpreS由来ペプチドを少なくとも1つと、少なくとも、本明細書中に規定のような肝臓に特異的に送達される化合物と、任意で薬学的に許容可能な担体及び/又は賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
本明細書中の上記で規定のようなHBVの疎水性修飾されたpreS由来ペプチドを少なくとも1つ、
少なくとも、本明細書中の上記で規定のような肝臓、好ましくは肝細胞に特異的に送達される化合物、又は
本明細書中に規定のような共役体、並びに
任意で薬学的に許容可能な担体及び/又は賦形剤、
を含む。
さらに上記で概説されたように、本発明は、HBVの疎水性修飾されたpreS由来ペプチド又は本発明の医薬組成物を利用することにより、肝疾患又は肝障害を診断、予防及び/又は治療する方法を提供する。
(a)本明細書中の上記で規定のような疎水性修飾されたpreS由来ペプチドと、少なくとも本明細書中の上記で規定のような化合物とを含む共役体(該共役体は本明細書中の上記で規定のようなものである)、又は
(b)本明細書中の上記で規定のような医薬組成物、
を投与することを含む。
好ましくは、特に治療方法における本発明の共役体又は医薬組成物の投与経路を皮下、静脈内、経口、鼻腔、筋肉内、経皮、吸入、坐薬によるものから選択する。
本発明の共役体又は医薬組成物の「治療的に効果的な量」は、各肝疾患又は肝障害を診断、予防及び/又は治療するのに、及び/又はB型肝炎及び/又はD型肝炎の感染を予防するのに十分な量を表す。
本発明は、遺伝子治療アプローチにおいてpreS由来ペプチド、すなわちpreS由来ペプチドをコードする核酸も提供する。
本発明はさらに、HBVの結合及び/又は浸透に関与する肝細胞受容体をin vitro及び/又はin vivoで同定する、及び/又は上記受容体の発現を定量化する方法であって、上記のような疎水性修飾されたpreS由来ペプチドを使用することを含む、方法に関する。
上記ペプチドと肝細胞の表面で発現した受容体との特異的な結合を可能にする条件下で、及び可能にするのに十分な期間、肝生検又は肝細胞を本発明の疎水性修飾されたpreS由来ペプチドに接触させる工程と、
上記ペプチドと受容体との結合を検出する工程と、
上記受容体を同定する工程と、
を含む。
(a)本明細書中に規定のような疎水性修飾されたpreS由来ペプチドと、少なくとも、本明細書中に規定のような化合物とを含む共役体(該共役体は本明細書中に規定のようなものである)、又は
(b)本明細書中に規定のような医薬組成物、
の使用を含む。
本発明のHBV preS1由来リポペプチドがヒト初代肝細胞(PHH)と結合すること、並びにこの結合がミリストイル依存的及び配列特異的であること(図10も参照されたい)、
本発明のHBV preS1由来リポペプチドの結合がHBV感受性肝細胞に限定されないこと(図11も参照されたい)、
本発明のHBV preS1由来リポペプチドの結合が細胞の分化状態に依存すること、及び本発明のHBV preS1由来リポペプチドは分化した肝細胞とだけ結合すること(図12を参照されたい)、
本発明のHBV preS1由来リポペプチドが他の肝臓癌及び非肝臓癌細胞株とは結合しないこと(Hep G2細胞、Hep G2.215細胞、HuH7細胞およびCHO K1細胞との結合は見られなかった(データ図示せず))、
も示している。
合成を例えば(10)で記載のように行った。
疎水性修飾されたpreS由来ペプチドの生体内分布を雄のNMRIマウスで研究した。全ての実験をドイツの法律に準拠して行った。C末端にさらなるTyr残基を含有するペプチドをクロラミン−T法により131I(Amersham Biosciences, Freiburg, Germany)を用いて標識化し、HPLCによって精製した。標識化ペプチドを50% DMSOの溶液の注射により皮下投与した。選択された時間でマウスを屠殺し、血液、心臓、肺、脾臓、肝臓、腎臓、筋肉及び脳に含有される放射能をγ−カウンター(Canberra Packard, Ruesselsheim, Germany)で測定し、組織1g当たりの注射用量の百分率(%ID/g)で表した。
肝臓におけるペプチド安定性を求めるために、131I標識化HBV preS/2−48myr(D)を皮下注射の24時間後に1つの肝葉から抽出した。このために、凍結肝臓組織1g当たり1mlの水を試料に添加した。均質化の後、等量のアセトニトリルを添加し、均質化を繰り返した。遠心分離の後(4000×gで2×10分)、この溶液を逆相HPLCカラム上に分離し、それぞれの画分の放射能をγカウンターで定量化した。
HepaRG細胞を、10%ウシ胎児血清(FCS)、100単位/mlのペニシリン、100μg/mlのストレプトマイシン、5μg/mlのインスリン及び5×10−5Mのヒドロコルチゾンヘミスクシネート(10)が添加されたウィリアムE培地中で成長させた。細胞をトリプシン処理によって2週間ごとに5分の1継代させた。感染2〜3週間前に、2% DMSOを維持培地に添加することにより細胞の分化を誘導した。培地を2〜3日ごとに交換した。
供給に制限がなく、品質が一定になるため、感染性接種材料として、HepG2クローン2.2.15(11)細胞の50倍濃度の培養上清を使用した。この上清を、6%ポリエチレングリコール(PEG)8000の存在下でウイルス粒子を沈殿させることにより新たに回収した上清から調製した。この沈殿物を、25% FCSを含有するリン酸緩衝生理食塩水(PBS)中で再懸濁した。アリコートを−80℃で保存した。分化HepaRG細胞又はPHHを37℃で20時間、4% PEG8000(Sigma)が添加された培養培地中で10倍希釈した濃縮感染源と共にインキュベートした。インキュベート終了時に、細胞を培養培地で3回洗浄し、2% DMSO及び5×10−5Mのヒドロコルチゾンヘミスクシネートの存在下で維持し、指定時間で採取した。
カバーガラス上で成長させた初代肝細胞を、血清無含有細胞培養培地中で200nMのそれぞれのペプチドと共にインキュベートした。37℃での1時間のインキュベーション後、細胞を固定し、核をDAPIで染色した。蛍光顕微鏡検査をSpinning Disk Confocal Microscopeにおいて600倍の倍率で行った。
冷凍保存された初代肝細胞を解凍し、血清無含有培地で洗浄した。それぞれの反応で、4×105細胞/mlを血清無含有細胞培養培地中で200nMの濃度のそれぞれのペプチドと共にインキュベートした。頻繁に混合しながら、染色を室温で30分間行った。続いて、細胞を広範囲にわたって洗浄し、PBS中に再懸濁して、FACS解析を進めた。
HBV preS1−ペプチドとマウスインターフェロンαとの融合タンパク質(図14を参照されたい)を、バキュロウイルス発現系を使用してHi5昆虫細胞で発現させた。細胞上清中で分泌された融合タンパク質を感染の5日後に採取し、preS1−インターフェロンとC末端で融合したHis−タグに関して、アフィニティクロマトグラフィーにより第1の工程で精製した。溶出画分中のpreS1−インターフェロンタンパク質の活性を、それらのニューカッスル疾患のウイルス媒介性の細胞死を阻害する能力により測定した。機能的なpreS1−インターフェロンタンパク質を含有する溶出画分を、1Mの尿素−PBS緩衝液を有するS75−セファロースカラムでのゲル濾過クロマトグラフィーによりさらに精製した(図15を参照されたい)。
1. Seeger, C. & Mason, W.S. Hepatitis Bvirus biology. Microbiol Mol Biol Rev 64, 51- 68 (2000).
2. Nassal, M. Hepatitis B virusmorphogenesis. Curr Top Microbiol Immunol 214, 297- 337 (1996).
3. Gripon, P., Le Seyec, J., Rumin, S.& Guguen-Guillouzo, C. Myristylation of the hepatitis B virus large surfaceprotein is essential for viral infectivity. Virology 213, 292- 299 (1995).
4. Le Seyec, J., Chouteau, P., Cannie, I.,Guguen-Guillouzo, C. & Gripon, P. Infection process of the hepatitis Bvirus depends on the presence of a defined sequence in the preS1 domain. JVirol 73, 2052-2057 (1999).
5. Juliano RL (1988) Factors affecting the clearance kineticsand tissue distribution of liposomes, microspheres, and emulsions. Adv DrugDeliv Rev 2: 31 -54.
6. Hashida M and Takakura Y (1994) Pharmacokinetics in design of polymericdrug delivery systems. J Control Release 31: 163-171.
7. Lu, X. M., Fischman, A. J., Jyawook, S.L., Hendricks, K., Tompkins, R.G. and Yarmush, M. L. (1994) Antisense DNA delivery in vivo: liver targetingby receptor- mediated uptake. J. Nucl. Med. 35, 269-275.
8. Freireich, E.J., Gehan, E.A., Rall,D.P., Schmidt, L.H. & Skipper, H.E. Quantitative comparison of toxicity ofanticancer agents in mouse, rat, hamster, dog, monkey, and man. Cancer ChemotherRep 50, 219-244 (1966).
9. Erion, M.D. Prodrugs for liver-targeteddrug delivery. 541-572. Biotechnology: Pharmaceutical Aspects. Volume V, PartII, Prodrugs. Springer New York, 2007.
10. Gripon, P., Cannie, I. & Urban, S.Efficient inhibition of hepatitis B virus infection by acylated peptidesderived from the large viral surface protein. J Virol 79, 1613-1622 (2005).
11. Glebe D, Urban S, Knoop EV, Cag N,Krass P, Grun S, Bulavaite A, Sasnauskas K, Gerlich WH. Mapping of thehepatitis B virus attachment site by use of infection- inhibiting preSllipopeptides and tupaia hepatocytes. Gastroenterology 129, 234-245 (2005).
Claims (17)
- N末端がミリストイル又はステアロイルによるアシル化で疎水性修飾された配列番号12、16又は26に示されるアミノ酸配列からなるB型肝炎ウイルス(HBV)のpreS由来ペプチドを含む、化合物の肝臓特異的な送達に使用するための薬剤。
- ペプチドに、薬物;プロドラッグ;ラベル;組換えウイルス;薬物、プロドラッグ若しくはラベル用の担体又はデポー剤;免疫原性エピトープから選択される化合物が結合された、請求項1に記載の薬剤。
- 化合物が、以下の薬物:
IFNαを含むインターフェロン、
ウイルス逆転写酵素阻害剤、
ウイルスRNAポリメラーゼ阻害剤、
ウイルスコアアセンブリ阻害剤又はウイルスヌクレオカプシド阻害剤、
Rafキナーゼ阻害剤を含むキナーゼ阻害剤、
プロテアーゼ阻害剤、
プロテアソーム阻害剤、
抗HCV抗体、
HBV、HCV又はHDVに特異的なsiRNA、
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤(FTI)を含むファルネシル化阻害剤、
アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)又はその活性剤、
コレステロール生合成阻害剤、
ウイルス又は非ウイルス病原体の肝臓段階の阻害剤であるプリマキン(Primaquine)、
から選択される、
請求項2に記載の薬剤。 - 薬物がプロドラッグ形態である、請求項2又は3に記載の薬剤。
- 化合物が、IFNαを含むインターフェロンである、請求項2又は3に記載の薬剤。
- 化合物が、蛍光色素、放射性同位体又は造影剤から選択されるラベルであって、造影剤が、ガドリニウム(Gd)錯体、超磁性鉄(Fe)錯体粒子、ヨウ素を含有する化合物、コンピューター断層撮影法(CT)用のヨウ素、微小気泡、又はこれらの造影剤を含有するリポソームの担体から選択される、請求項2〜5のいずれか一項に記載の薬剤。
- 化合物とN末端がミリストイル又はステアロイルによるアシル化で疎水性修飾された配列番号12、16又は26に示されるアミノ酸配列からなるHBVのpreS由来ペプチドとが共役体を形成し、
該共役体が、共有結合若しくは複合体形成により形成されるか、又は、化合物と該ペプチドのC末端に存在する、エステル、エーテル、ジスルフィド、アミド、チオール、チオエステルから選択されるアンカー基と共有結合することにより形成される、
請求項2〜5のいずれか一項に記載の薬剤。 - アンカー基が、スペーサー又はリンカーをさらに含むものであって、該スペーサー又はリンカーが、肝タンパク質であるシトクロムP450により認識される認識部位を含む、請求項7に記載の薬剤。
- 化合物の肝臓特異的な送達が該化合物の肝細胞特異的な送達である、請求項1〜8のいずれか一項に記載の薬剤。
- 化合物が動物、ヒトを含む哺乳類、又は鳥類の肝臓に特異的に送達されるか、及び/又は
化合物が肝臓で濃縮されるか、及び/又は
化合物が、肝タンパク質、肝細胞タンパク質、肝細胞タンパク質分解酵素又はシトクロムによって、N末端がミリストイル又はステアロイルによるアシル化で疎水性修飾された配列番号12、16又は26に示されるアミノ酸配列からなるHBVのpreS由来ペプチドとの共有共役体から切断される、
請求項9に記載の薬剤。 - 請求項1〜10のいずれか一項に記載の薬剤を少なくとも1つ、及び/又は
薬学的に許容可能な担体及び/又は賦形剤、を含む、化合物の肝臓特異的な送達に使用するための医薬組成物。 - 肝疾患若しくは肝障害の診断、予防及び/又は治療のための、請求項1〜10のいずれか一項に記載の薬剤又は請求項11に記載の医薬組成物。
- 肝疾患又は肝障害が、肝炎、肝硬変、ヘモクロマトーシス、A型、B型、C型、D型、E型、F型、G型及びH型の肝炎ウイルスによって引き起こされる肝炎、又はウイルスによって引き起こされる肝炎から選択されるか、及び/又は
肝疾患又は肝障害が、肝臓段階のウイルス又は非ウイルス病原体を伴う疾患であるか、又は、熱帯病、マラリア、住血吸虫症、リーシュマニア症である、
請求項12に記載の医薬組成物。 - 肝疾患又は肝障害が、肝腫瘍又は肝細胞癌腫(HCC)であるか、又は、代謝性疾患、肥満、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)である、請求項12に記載の医薬組成物。
- 肝機能の調節のための、又は
肝細胞媒介性の抗原提示及び肝臓指向性の免疫反応の活性化のための、
請求項1〜10のいずれか一項に記載の薬剤又は請求項11に記載の医薬組成物。 - B型肝炎及び/又はD型肝炎の感染予防のための、又はワクチンとしての、及び/又は
肝疾患若しくは肝障害の診断、予防及び/又は治療とB型肝炎及び/又はD型肝炎の感染予防との組合せのための、
請求項1〜10のいずれか一項に記載の薬剤又は請求項11〜15のいずれか一項に記載の医薬組成物。 - 体重1kg当たり10μg〜1mgの範囲内の治療的に効果的な量で、被験体に、皮下、静脈内、経口、鼻腔、筋肉内、経皮、吸入、坐薬から選択される投与経路で投与されることを特徴とする、請求項16に記載の薬剤。
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Family Cites Families (4)
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---|---|---|---|---|
US5204096A (en) * | 1984-03-07 | 1993-04-20 | New York Blood Center, Inc. | Pre-S gene coded peptide hepatitis B immunogens, vaccines, diagnostics, and synthetic lipid vesicle carriers |
EP1281761A1 (en) * | 2001-07-27 | 2003-02-05 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Hepatitis B virus pre-S1 derived synthetic polypeptides and their use thereof. |
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