JP5610347B2 - リボ核酸同定装置、リボ核酸同定方法、プログラムおよびリボ核酸同定システム - Google Patents
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Description
質量分析データをもちいてタンパク質・核酸を同定するための方法の位置づけについて図1にまとめた。RNAのMS/MSイオン検索法はマスフィンガープリンティング法と比べて同定の信頼性が高いと考えられること、計算量がde novo sequencing法に比べて少ないことから有用と考えられる。MS/MSイオン検索は、タンパク質の同定では一般的な手法である。しかし、この方法をRNAの同定に適用しようとする場合、主に3つの問題があったため、従来適用されていなかった。
(1) MS/MSイオン検索・・・残基特異的断片化産物をタンデム質量分析して得られたピークのプレカーサイオンの分子量と複数のプロダクトイオン質量から断片配列を同定する。
(2) マッピング・・・同定断片配列リストと核酸配列を比較することにより、全核酸エントリーにマッピングスコアを付け、当該スコアに基づいて、最も確からしい核酸エントリーを同定する。
図2は、本発明が適用されるリボ核酸同定装置の構成の一例を示すブロック図である。
次に、このように構成された本実施の形態におけるRNA同定装置100の処理の一例について、図2および図3を参照して説明する。図3は、本実施の形態におけるRNA同定装置100のRNA検索のデータフローを示すフロー図である。
プロダクトイオン1質量,プロダクトイオン1強度
プロダクトイオン2質量,プロダクトイオン2強度
プロダクトイオン3質量,プロダクトイオン3強度
・・・
プロダクトイオンM質量,プロダクトイオンM強度
プロダクトイオン1質量,プロダクトイオン1強度
プロダクトイオン2質量,プロダクトイオン2強度
プロダクトイオン3質量,プロダクトイオン3強度
・・・
プロダクトイオンN質量,プロダクトイオンN強度
RNA同定装置100は、以下の(1)〜(8)を含む検索条件に基づき検索を行う。RNA同定装置100は、検索条件をあらかじめ記憶しておいてもよいし、利用者に入力装置を介して指定させるよう制御してもよい。
(1)生物種:例えば、ヒト、酵母、哺乳類、全て等
(2)データベース種類:例えば、ゲノム配列、refseq等
(3)切断方法:例えば、RNase T1,U2,A等のヌクレアーゼ名、化学的切断方法等
(4)考慮する最大の切れ残り:例えば、0〜3程度
(5)考慮する最大修飾数:例えば、0〜3程度
(6)許容質量誤差:質量分析計の精度に応じて、例えば、10〜500ppm程度、タンデム質量分析計の種類によりプリカーサイオン、プロダクトイオンの質量精度が異なる場合がある。この場合にはそれぞれについて別の許容質量誤差を指定することが出来る。
(7)末端官能基:例えば、リン酸基、水酸基、キャップ(5’のみ)、2’,3’−環状リン酸(3’のみ)など
(8)質量テーブル(質量定義表106cに格納される。):残基毎に単同位体質量を算出したテーブル
核酸断片DB106aに記憶された核酸配列はDNA配列またはRNA配列である。DNA配列またはRNA配列を含むFasta形式ファイルを断片化の対象データベース(DB)としてもよい。
図5に示すように、まず、断片化部102bは、カウンタiと断片jを0にセットする(ステップSA−61)。
断片化されたRNA配列について、RNA同定装置100は、以下のMS/MSイオン検索処理を実行する。MS/MSイオン検索処理の前半工程(ステップSB−1〜4)は、実測断片分子量抽出部102a、計算断片分子量算出部102c、候補計算断片分子量抽出部102e、および、候補断片配列抽出部102fによって実行される、プリカーサイオンについての質量検索である。一方、MS/MSイオン検索処理の後半工程(ステップSB−5〜11)は、プロダクトイオンについての質量検索である。ここで、図6は、本実施の形態におけるMS/MSイオン検索処理の一例を示すフローチャートである。
Passign=nCm*px*(1−p)(n−x)
となる。
ここで、「nCm」は、nからmを選ぶ組み合わせの場合の数である。これは、n回サイコロを投げてx回同じ目(例えば一の目)が出る確率と同様に考えることができる。
p=Mtol*Mcenter/(Mmax−Mmin)
である。
ここで、「Mtol」は、相対値(例えば、%,ppmなど)で表した許容質量誤差であり、「Mcenter」は、測定質量範囲の中心値であり、「Mmax」および「Mmin」は、測定質量範囲のそれぞれ上下限値である。
p=1−(1−P)N
となる。
P=1−(1−p)1/N
となる。
ここで、危険率pとしては、通常0.05をもちいるが、解析目的やもちいる質量分析計の質量精度に応じて、0.01など異なる値をもちいてもよい。
Z=(s−Smean)/σ
ここで、sはある断片配列のスコア、Smeanは全ての断片配列に対するスコアの平均値、σはスコアの標準偏差である。
次に、マッピング処理について、以下に図7および図8を参照して詳細に説明する。
Pentry=N!/(a!*b!*c!*・・nnot!)*pA^a*pB^b*pC^c*・・・・pnot^nnot
となる。
Pentry=M!/(nnot!)*pA*pB*pC*・・・・(pnot)^nnot
この選択確率Pentryの−logを取ってスコア化したものをマッピングスコアとしてもよい。
(実施例1)
ここで、配列と分子量の情報量の差について図9を参照して説明する。従来の断片分子量の組をもちいてゲノム上の位置を同定する方法と本発明の断片配列の組をもちいてゲノム上の位置を同定する方法との識別能力の差を簡単な計算に見積る。
上記実施例と同じ場合について考える。まず、分子量の意味について確認すると、誤差無しで分子量を決めた場合に得られる最も意味のある構造上の情報は、断片の残基組成である。そこで、簡単のため本比較例では断片分子量数の代わりに断片残基組成数をもちいて、断片配列数と比較することにする。
以下に、本RNA同定装置100にかかる実施例2−1〜3を、図10〜図22を参照して説明する。ここで、図10は、無細胞合成アフリカツメガエルサイクロフィリンA(xCyPA) mRNA RNase T1消化物のLC−MS/MS結果を本発明により検索したスコアヒストグラムである。図11は、正解データベースに対して検索した結果の比較の一例を示す図である。また、図12は、tRNA−Phe RNase T1消化物のLC−MS/MSクロマトグラムである。また、図13は、tRNA−PheをDNA配列に対して検索した結果を示す図である。また、図14は、MS/MSスペクトルとプロダクトイオンのアサインの一例を示す図である。また、図15は、酵母 tRNA混合物をイオン交換クロマトグラフィーで分取する際のクロマトグラムを示す図である。また、図16は、酵母 tRNA, 陰イオン交換の画分No.10の逆相LCによる脱塩・精製を示す図である。また、図17は、酵母 tRNA混合物フラクション10−2 RNase T1消化物のLC−MS/MSクロマトグラムである。また、図18は、酵母 tRNA混合物フラクション10−2 RNase T1消化物検索結果のスコアヒストグラムである。また、図19〜図22は、マッピングにより同定した配列領域の一例を示す図である。
ここで、本実施例2−1〜3において用いた材料および方法を以下(1)〜(9)に示す。
実施例2−1において、Ambion(会社名)社のin vitro transcriptionキットを用いて、Xenopus laevis Cyclophilin A(CypA) cDNA(ref|NM_001089190.1|)、および、Xenopus laevis FK506結合タンパク質(xFKBP)遺伝子を、それぞれグロビン遺伝子の3´UTR領域に挿入したpBluescript RN3 vector(浅島誠博士からの提供)を作成した。そして、作成したpBluescript RN3−xCypA vector、および、pBluescript RN3−XFKBP vectorを鋳型として、無細胞転写系で、グロビン由来の配列にxCyPA配列またはxFKBP配列を含むmRNAを合成した。合成したmRNAはQIAGEN RNeasy kit(商品名)により精製し、純度をポリアクリルアミドゲル電気泳動法により確認した。
実施例2−2,3において、S. cerevisiae tRNA−Phe、および、酵母 tRNA混合物(tRNA typeX, from baker’s yeast)は、Sigma(会社名)から購入した。ribonuclease T1(RNase T1)はWorthington(会社名)から購入した。
実施例2−3において、tRNA混合物100ugをイオン交換クロマトグラフィーで分離し、各ピークを分取した(図15)。そして、48分付近のフラクション(図15のフラクション10)全量をさらに逆相HPLCで精製した。分取したフラクション(図16のフラクション10−2)は、凍結乾燥またはエタノール沈殿で溶媒を除去し、−20℃で保存した。
RNase T1は使用前に硫安を除去するために、逆相カラムで精製・凍結乾燥した。その後、DNase/RNaseが混入していない(「free」の)滅菌水(invitrogen(会社名))で再溶解した。試料RNAを消化緩衝液(10mM 酢酸アンモニウムバッファー(pH5.3))に0.25ug/uLになるように溶解した後、1/500量(重量比)のRNase T1を添加して37℃で30分間、断片化した。酵素消化物は、液体クロマトグラフィー−タンデム質量分析(LC−MS/MS)で直ぐに分析した。
LC−MS/MSには、プロテオミクス用のナノLC−MS/MSシステム(T. Natsume et al. Anal. Chem. 2002, 74, 4725−4733)を用いた。ただし、以下に示す各項目(a)〜(d)はRNA用に変更した。
(a)カラム充填剤:Develosil C30−UG−3(野村化学(会社名))、カラムサイズ:100μmIDx50mmL
(b)溶媒A:10mM トリエチルアミン−酢酸水溶液(TEA−AA) pH7.0、B:メタノール(MeOH)
(c)溶離条件:流速100nL/minでB10−40%まで60分で直線的に上昇させた。
(d)質量分析装置:Q−Tof Ultima(ウォーターズ(会社名))、イオン化電圧:−1200V(ネガティブモード)、測定質量範囲(m/z):400−1600
LC−MS/MS分析の結果から、MassLynx(ウォーターズ(会社名))およびSpiceCmd(三井情報システム(会社名))を用いてピークリストを作成した。
実施例2−1において、xCypAおよびxFKBP合成mRNAのLC−MS/MS分析結果を、xCypAおよびxFKBP配列のみを含む核酸配列DB、または、ヒト参照配列(refseq_human(Reference sequence release 27, 2008−02−18 download, H. sapiens 38,864 entries))にxCypAおよびxFKBP配列を加えた核酸配列DB(マージDB)に対して検索した。なお、ヒト参照配列に対して、xCypAおよびxFKBP配列をクエリーとしてblast検索して有意な相同性を持つmRNAは検出されなかったので、ヒト参照配列にxCypAおよびxFKBP同定の際に偽陽性がでないことを確かめるために使用できることを確認した。すなわち、全てのMS/MSはxCypAあるいはxFKBPを一位として同定することが期待出来る。本実施例では、xCypAおよびxFKBPのみの核酸配列DBで同定されたヌクレオチドの結果を複数の研究者により目視で確認し、同定に問題が無いことを確認した。次にこのデータセットをマージDBに対してMS/MSイオン検索後、マッピングした。マッピングによりヒト参照配列由来のエントリーを同定した場合には、そのエントリーは不正解と判定した。
実施例2−2において、tRNA用の核酸配列DBは、G tRNA db(http://lowelab.ucsc.edu/GtRNAdb/)から、S. cerevisiae tDNA配列をダウンロードして用いた。修飾条件は、ACGU4種類の塩基、または、糖2’OHへのメチル化およびUに対するジヒドロ化を考慮した。また、一つの断片に同時に生じる最大修飾数は「2」とした。また、最大切れ残りは「2」とした。そして、MS/MSイオン検索で修飾を含む断片配列を同定した場合には、これらの断片から修飾を除去した元の配列に戻して核酸配列DBへのマッピングを行った。修飾を除去した結果、切れ残り断片になってしまう場合には、さらに完全消化断片の組に変換してからマッピングした。
実施例2−3において、混合物について用いる核酸配列DBは、mNCBI(ftp://ftp.ncbi.nih.gov/genomes/Fungi/Saccharomyces_cerevisiae/)から、S. cerevisiaeゲノム配列をダウンロードして用いた。3残基以下の断片は無視し、サブエントリー長は100断片、切れ残りおよび修飾は考慮せず検索した。
上記材料および方法を用いて、以下の実施例2−1〜3に示す結果を得た。
(実施例2−1)無細胞合成mRNAを用いたMS/MSイオン検索の有効性の確認と混合物への適用
xCypA mRNAのRNase T1消化物のLC−MS/MSデータから抽出したピークリストについて、xCypAのみの核酸配列DBに対して検索を行った。検索条件の消化時の許容最大切れ残りは「0」または「2」とした。
以下に、実施例2−2として、転写後修飾された試料において検討した結果の詳細を示す。機能性RNAは、しばしば転写後にメチル化などの修飾を受ける。これらの修飾は、RNAの機能発現に重要な役割を担っている場合もあり、RNA解析方法では、修飾を含む配列も同定出来ることが望ましい。本実施例では、修飾テーブル(修飾種およびその質量の対応表)、および、最大許容修飾数を設定することで、DNA配列データベースのような修飾情報を含まない核酸配列DBに対して検索する場合でも、検索時に動的に修飾配列を生成して実測データとの照合を行うことが可能となることを示す。以下では、この修飾を伴う条件でS. cerevisiaeのtRNA−Pheを解析した例を示す。
(a)未修飾または質量変化無
質量分析で検出しうる修飾は質量変化を伴うものだけなので、最も多い修飾種である偽ウリジンは修飾無しの通常塩基と同じ分類とした。
(b)メチル化またはジヒドロ化
次に多い修飾種はメチル化、ジヒドロ化の順であった。検索条件として設定するためには個々の修飾毎に上限値を定めるのではなく全部の修飾数として設定出来ることが望ましい。このため、これらの修飾はまとめて扱い、それらの合計数で分類した。
(c)その他
偽ウリジン化、メチル化、ジヒドロ化以外の修飾はまとめて扱い、合計数をその他とした。
つづいて、tRNA混合物中の未知試料を同定した実施例2−3を示す。このRNAは市販のRNA混合物中に混在していたRNAであり、tRNAとは明らかに大きさが異なっていた。このRNAを同定するために、ゲノム配列データベースに対して検索を行った。
次に、RNA同定装置100をサーバ装置400とし、同定結果をサーバ装置400からクライアント装置200へ返すように構成したRNA同定システムの実施例を、図23を参照して説明する。RNA同定装置100は、ルータ等の通信装置および専用線等の有線または無線の通信回線を介して、ネットワークに通信可能に接続されてもよい。
本発明は、上述した実施の形態以外にも、特許請求の範囲に記載した技術的思想の範囲内において種々の異なる実施の形態にて実施されてよいものである。例えば、実施の形態において説明した各処理のうち、自動的に行われるものとして説明した処理の全部または一部を手動的に行うこともでき、あるいは、手動的に行われるものとして説明した処理の全部または一部を公知の方法で自動的に行うこともできる。この他、上記文献中や図面中で示した処理手順、制御手順、具体的名称、各処理の登録データや検索条件等のパラメータを含む情報、画面例、データベース構成については、特記する場合を除いて任意に変更することができる。
102 制御部
102a 実測断片分子量抽出部
102b 断片化部
102c 計算断片分子量算出部
102e 候補計算断片分子量抽出部
102f 候補断片配列抽出部
102g 計算プロダクトイオン質量算出部
102h 実測プロダクトイオン質量抽出部
102i アサインスコア算出部
102j 候補配列同定部
102k 出現確率算出部
102p エントリースコア付け部
102q エントリー同定部
102n 修飾変換部
106 記憶部
106a 核酸配列DB
106b 断片化規則表
106c 質量定義表
106d 修飾規則表
106g ピークリスト
106e 断片配列表
106i 候補断片配列リスト
106j 計算プロダクトイオン表
106k 同定断片表
106m 同定核酸エントリー表
10 タンデム型質量分析器
200 クライアント装置
202a ピーク取得部
202p 検索条件入力部
202q 結果出力部
212 入力部
214 出力部
300 ネットワーク
400 サーバ装置
402r 結果送信部
406 内部DB
500 外部データベース
600 ネットワーク
Claims (8)
- 記憶部と制御部とを備えたリボ核酸同定装置であって、
上記記憶部は、
残基配列特異的な切断方法で切断されたリボ核酸に対するタンデム質量分析データから抽出されたスペクトルのピークを記憶するピーク記憶手段と、
核酸エントリー毎に核酸配列を記憶する核酸配列記憶手段と、
上記残基配列特異的な切断方法に対応する断片化規則を記憶する断片化規則記憶手段と、
を備え、
上記制御部は、
上記ピークから実測断片分子量を抽出する実測断片分子量抽出手段と、
上記断片化規則を参照して、上記核酸配列を断片化する断片化手段と、
上記断片化手段で断片化した結果得られた上記核酸配列の断片配列について計算断片分子量を算出する計算断片分子量算出手段と、
上記計算断片分子量と上記実測断片分子量とを比較することにより、上記実測断片分子量に対応する候補計算断片分子量を抽出する候補計算断片分子量抽出手段と、
上記候補計算断片分子量に対応する上記断片配列である候補断片配列を、上記断片配列から抽出する候補断片配列抽出手段と、
上記断片配列について、リボース−3’O結合間とP−5’O結合間に開裂部位を有するとする開裂規則に従って計算プロダクトイオン質量を算出する計算プロダクトイオン質量算出手段と、
上記ピークから実測プロダクトイオン質量を抽出する実測プロダクトイオン質量抽出手段と、
上記計算プロダクトイオン質量と上記実測プロダクトイオン質量とを比較することにより、上記候補断片配列にスコアを付けるスコア付け手段と、
上記スコアに基づいて、上記候補断片配列から、上記リボ核酸の上記断片配列を同定する候補配列同定手段と、
検索対象として予め指定した部分集合内での上記核酸配列の上記断片配列の出現確率を算出する出現確率算出手段と、
上記出現確率に基づいて、上記候補配列同定手段で同定した上記断片配列と上記核酸配列とを比較することにより、上記核酸エントリーにマッピングスコアを付けるエントリースコア付け手段と、
上記マッピングスコアに基づいて、最も確からしい上記核酸エントリーを同定するエントリー同定手段と、
を備えたことを特徴とするリボ核酸同定装置。 - 上記記憶部は、
上記リボ核酸の修飾規則を記憶する修飾規則記憶手段
を更に備え、
上記制御部は、
上記修飾規則を参照して、上記断片配列において修飾配列と未修飾配列との変換を行う修飾変換手段
を更に備えたことを特徴とする請求項1に記載のリボ核酸同定装置。 - 制御部と記憶部とを備えたリボ核酸同定装置において実行されるリボ核酸同定方法であって、
上記記憶部は、
残基配列特異的な切断方法で切断されたリボ核酸に対するタンデム質量分析データから抽出されたスペクトルのピークを記憶するピーク記憶手段と、
核酸エントリー毎に核酸配列を記憶する核酸配列記憶手段と、
上記残基配列特異的な切断方法に対応する断片化規則を記憶する断片化規則記憶手段と、
を備え、
上記制御部において実行される、
上記ピークから実測断片分子量を抽出する実測断片分子量抽出ステップと、
上記断片化規則を参照して、上記核酸配列を断片化する断片化ステップと、
上記断片化ステップで断片化した結果得られた上記核酸配列の断片配列について計算断片分子量を算出する計算断片分子量算出ステップと、
上記計算断片分子量と上記実測断片分子量とを比較することにより、上記実測断片分子量に対応する候補計算断片分子量を抽出する候補計算断片分子量抽出ステップと、
上記候補計算断片分子量に対応する上記断片配列である候補断片配列を、上記断片配列から抽出する候補断片配列抽出ステップと、
上記断片配列について、リボース−3’O結合間とP−5’O結合間に開裂部位を有するとする開裂規則に従って計算プロダクトイオン質量を算出する計算プロダクトイオン質量算出ステップと、
上記ピークから実測プロダクトイオン質量を抽出する実測プロダクトイオン質量抽出ステップと、
上記計算プロダクトイオン質量と上記実測プロダクトイオン質量とを比較することにより、上記候補断片配列にスコアを付けるスコア付けステップと、
上記スコアに基づいて、上記候補断片配列から、上記リボ核酸の上記断片配列を同定する候補配列同定ステップと、
検索対象として予め指定した部分集合内での上記核酸配列の上記断片配列の出現確率を算出する出現確率算出ステップと、
上記出現確率に基づいて、上記候補配列同定ステップで同定した上記断片配列と上記核酸配列とを比較することにより、上記核酸エントリーにマッピングスコアを付けるエントリースコア付けステップと、
上記マッピングスコアに基づいて、最も確からしい上記核酸エントリーを同定するエントリー同定ステップと、
を含むことを特徴とするリボ核酸同定方法。 - 上記記憶部は、
上記リボ核酸の修飾規則を記憶する修飾規則記憶手段
を更に備え、
上記制御部において実行される、
上記修飾規則を参照して、上記断片配列において修飾配列と未修飾配列との変換を行う
修飾変換ステップ
を更に含むことを特徴とする請求項3に記載のリボ核酸同定方法。 - 制御部と記憶部とを備えたリボ核酸同定装置において実行させるためのプログラムであって、
上記記憶部は、
残基配列特異的な切断方法で切断されたリボ核酸に対するタンデム質量分析データから抽出されたスペクトルのピークを記憶するピーク記憶手段と、
核酸エントリー毎に核酸配列を記憶する核酸配列記憶手段と、
上記残基配列特異的な切断方法に対応する断片化規則を記憶する断片化規則記憶手段と、
を備え、
上記制御部において実行させるための、
上記ピークから実測断片分子量を抽出する実測断片分子量抽出ステップと、
上記断片化規則を参照して、上記核酸配列を断片化する断片化ステップと、
上記断片化ステップで断片化した結果得られた上記核酸配列の断片配列について計算断片分子量を算出する計算断片分子量算出ステップと、
上記計算断片分子量と上記実測断片分子量とを比較することにより、上記実測断片分子量に対応する候補計算断片分子量を抽出する候補計算断片分子量抽出ステップと、
上記候補計算断片分子量に対応する上記断片配列である候補断片配列を、上記断片配列から抽出する候補断片配列抽出ステップと、
上記断片配列について、リボース−3’O結合間とP−5’O結合間に開裂部位を有するとする開裂規則に従って計算プロダクトイオン質量を算出する計算プロダクトイオン質量算出ステップと、
上記ピークから実測プロダクトイオン質量を抽出する実測プロダクトイオン質量抽出ステップと、
上記計算プロダクトイオン質量と上記実測プロダクトイオン質量とを比較することにより、上記候補断片配列にスコアを付けるスコア付けステップと、
上記スコアに基づいて、上記候補断片配列から、上記リボ核酸の上記断片配列を同定する候補配列同定ステップと、
検索対象として予め指定した部分集合内での上記核酸配列の上記断片配列の出現確率を算出する出現確率算出ステップと、
上記出現確率に基づいて、上記候補配列同定ステップで同定した上記断片配列と上記核酸配列とを比較することにより、上記核酸エントリーにマッピングスコアを付けるエントリースコア付けステップと、
上記マッピングスコアに基づいて、最も確からしい上記核酸エントリーを同定するエントリー同定ステップと、
を含むことを特徴とするプログラム。 - 上記記憶部は、
上記リボ核酸の修飾規則を記憶する修飾規則記憶手段
を更に備え、
上記制御部において実行させるための、
上記修飾規則を参照して、上記断片配列において修飾配列と未修飾配列との変換を行う修飾変換ステップ
を更に含むことを特徴とする請求項5に記載のプログラム。 - 制御部と記憶部と入力部と出力部とを備えたクライアント装置と、制御部と記憶部とを備えたサーバ装置と、から構成されるリボ核酸同定システムであって、
上記クライアント装置の上記制御部は、
残基配列特異的な切断方法で切断されたリボ核酸に対するタンデム質量分析データから抽出されたスペクトルのピークを取得し、取得した上記ピークを上記クライアント装置の上記記憶部に格納すると共に上記サーバ装置へ送信するピーク取得手段と、
上記入力部を介して入力された、上記残基配列特異的な切断方法を少なくとも指定する検索条件を、上記クライアント装置の上記記憶部に格納すると共に上記サーバ装置へ送信する検索条件入力手段と、
上記サーバ装置で同定され上記サーバ装置から送信された上記リボ核酸の断片配列を、上記出力部を介して出力する結果出力手段と、
を備え、
上記サーバ装置の上記記憶部は、
核酸エントリー毎に核酸配列を記憶する核酸配列記憶手段と、
上記残基配列特異的な切断方法に対応する断片化規則を記憶する断片化規則記憶手段と、
を備え、
上記サーバ装置の上記制御部は、
上記ピークから実測断片分子量を抽出する実測断片分子量抽出手段と、
上記断片化規則を参照して、上記検索条件に基づいて、上記核酸配列を断片化する断片化手段と、
上記断片化手段で断片化した結果得られた上記核酸配列の上記断片配列について計算断片分子量を算出する計算断片分子量算出手段と、
上記計算断片分子量と上記実測断片分子量とを比較することにより、上記実測断片分子量に対応する候補計算断片分子量を抽出する候補計算断片分子量抽出手段と、
上記候補計算断片分子量に対応する上記断片配列である候補断片配列を、上記断片配列から抽出する候補断片配列抽出手段と、
上記断片配列について、リボース−3’O結合間とP−5’O結合間に開裂部位を有するとする開裂規則に従って計算プロダクトイオン質量を算出する計算プロダクトイオン質量算出手段と、
上記ピークから実測プロダクトイオン質量を抽出する実測プロダクトイオン質量抽出手段と、
上記計算プロダクトイオン質量と上記実測プロダクトイオン質量とを比較することにより、上記候補断片配列にスコアを付けるスコア付け手段と、
上記スコアに基づいて、上記候補断片配列から、上記リボ核酸の上記断片配列を同定する候補配列同定手段と、
上記候補配列同定手段で同定した上記断片配列を上記クライアント装置へ送信する結果送信手段と、
検索対象として予め指定した部分集合内での上記核酸配列の上記断片配列の出現確率を算出する出現確率算出手段と、
上記出現確率に基づいて、上記候補配列同定手段で同定した上記断片配列と上記核酸配列とを比較することにより、上記核酸エントリーにマッピングスコアを付けるエントリースコア付け手段と、
上記マッピングスコアに基づいて、最も確からしい上記核酸エントリーを同定するエントリー同定手段と、
を備えたことを特徴とするリボ核酸同定システム。 - 上記サーバ装置の上記記憶部は、
上記リボ核酸の修飾規則を記憶する修飾規則記憶手段
を更に備え、
上記サーバ装置の上記制御部は、
上記修飾規則を参照して、上記断片配列において修飾配列と未修飾配列との変換を行う修飾変換手段
を更に備えたことを特徴とする請求項7に記載のリボ核酸同定システム。
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