JP5269136B2

JP5269136B2 - How to identify jellyfish planula larvae

Info

Publication number: JP5269136B2
Application number: JP2011076468A
Authority: JP
Inventors: 敏治柳川; 豊喜川端; 真紀太田; 舞中木; 享子神谷; 桂司山下
Original assignee: Chugoku Electric Power Co Inc
Current assignee: Chugoku Electric Power Co Inc
Priority date: 2011-03-30
Filing date: 2011-03-30
Publication date: 2013-08-21
Anticipated expiration: 2031-03-30
Also published as: JP2012211777A

Description

本発明は、ミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法に関する。 The present invention relates to a method for identifying moon jellyfish planula larvae.

一般に、火力発電所や原子力発電所には、タービンを駆動するのに使用した蒸気を冷やすため、蒸気と海水との間で熱交換を行わせる復水器が備えられている。この熱交換に使用する海水の取水の際に、海水に生息するヒドロ虫やミズクラゲ等の付着生物が流入し、取水路や配管に付着し、プラントの正常稼働を妨げるという問題が知られる。 In general, thermal power plants and nuclear power plants are provided with condensers that exchange heat between the steam and seawater in order to cool the steam used to drive the turbine. During the intake of seawater used for this heat exchange, there is a problem that adhering organisms such as hydroworms and moon jellyfish that inhabit the seawater flow in and adhere to intake channels and piping, preventing normal operation of the plant.

取水のための海域における付着生物の来襲、発生状況、プラントへの流入状況、発電所プラント内での付着状況を確認したり、これらの付着生物の種類を特定したりできれば、効率的な防除のタイミングや、付着生物種にあった防除方法を設定することができる。 If it is possible to confirm the invasion of adhering organisms in the sea area for water intake, the occurrence status, the inflow status to the plant, the adhering status in the power plant, and the type of these adhering organisms, efficient control will be possible. The timing and the control method suitable for the attached species can be set.

ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生等のヒドロ虫綱生物やミズクラゲプラヌラ幼生は、特に頻繁に発電所に流入して被害をもたらしている生物である。しかしながら、ヒドロ虫綱生物やミズクラゲプラヌラ幼生に対する特異的抗体としては、ヒドロ虫綱生物の蛍光タンパク質に特異的に結合する抗体が知られているのみであり（特許文献１参照）、様々な種の生物を含む試料中で、ヒドロ虫綱生物とミズクラゲプラヌラ幼生とを分離することのできる方法は開発されていなかった。 Hydropyniform organisms such as Benicumida hydraactinula larvae and Tamamihydraplanula larvae, and jellyfish plasma larvae are organisms that frequently cause damage by flowing into power plants. However, only antibodies that specifically bind to the fluorescent protein of hydrozoa organisms are known as specific antibodies against hydrozoa organisms and jellyfish planula larvae (see Patent Document 1). No method has been developed that can separate hydrozoa organisms and moon jellyfish planula larvae in samples containing organisms.

特表２００６−５０６１００号公報JP 2006-506100 A

本発明は、ミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法を提供することを目的とする。 It is an object of the present invention to provide a method for identifying the moon jellyfish planula larvae.

本発明者らは、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生で免疫したマウスの脾臓細胞とマウスミエローマ細胞とを融合することにより得られたハイブリドーマをスクリーニングしたところ、多くの場合、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生で免疫していることから予想されるように、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生のみに反応するモノクローナル抗体か、または、幼生の構造が似ているように、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、ミズクラゲプラヌラ幼生、ムラサキイガイペディベリジャー幼生にも反応するモノクローナル抗体しか得られなかった。しかしながら、本発明者らは、頻度は少ないながらも、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すが、同じ刺胞動物門のミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体を得ることができることを見出し、本発明を完成するに至った。 The present inventors screened a hybridoma obtained by fusing a spleen cell of a mouse immunized with Benicida hydra actinula larvae and a mouse myeloma cell. In many cases, the hydrangea hydra actinula larvae were screened. As expected from the immunization, either a monoclonal antibody that reacts only with the larvae of Benicaria hydraactinula, or the larvae of the Only monoclonal antibodies that react with hydraplanula larvae, jellyfish prawn larvae, and mussel pediberger larvae were obtained. However, the present inventors, although less frequently, are reactive to Benicum hydra actinula larvae and Tamami hydraplanula larvae, but not to the cnidella larvae of the same cnidaria. The inventors have found that monoclonal antibodies can be obtained that react with antibodies, Benicida hydra actinula larvae, Tamami hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae, and have completed the present invention.

すなわち、本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法は、試料に、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体またはそのフラグメントと、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体またはそのフラグメントとを反応させることを特徴とする。ここで、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９０４で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であり、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９１９で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であることが好ましい。 That is, the method for identifying the moon jellyfish planula larvae according to the present invention comprises, in a sample, a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with fenicida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with jellyfish planula larvae, It is characterized by reacting with a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with Kudaumihydra actinula larvae, Tamaumihydraplanula larvae, and Moon jellyfish planula larvae. Here, the monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamaumihydraplanula and does not react with the jellyfish larvae larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904, It is preferable that the monoclonal antibody that reacts with Benicumumi hydraactinula larvae, Tamaumihydraplanula larvae, and moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21919.

本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生の検出用試薬は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含有することを特徴とする。ここで、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９０４で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であり、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９１９で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であることが好ましい。 The reagent for detection of moon jellyfish planula larvae according to the present invention comprises a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae, but does not react with jellyfish planula larvae, and It contains a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with Nura larvae, Tamami hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae. Here, the monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamaumihydraplanula and does not react with the jellyfish larvae larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904, It is preferable that the monoclonal antibody that reacts with Benicumumi hydraactinula larvae, Tamaumihydraplanula larvae, and moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21919.

本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生の検出器は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体またはそのフラグメントが固定化されていることを特徴とする。ここで、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９０４で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であり、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９１９で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であることが好ましい。 According to the present invention, there is provided a detector of a jellyfish plasma larva, a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with fenestria larvae and larvae of terrestrial plasma and does not react with larvae of jellyfish prura. A monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with larvae, Tamami hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae is immobilized. Here, the monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamaumihydraplanula and does not react with the jellyfish larvae larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904, It is preferable that the monoclonal antibody that reacts with Benicumumi hydraactinula larvae, Tamaumihydraplanula larvae, and moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21919.

本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生の検出キットは、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含有することを特徴とする。ここで、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９０４で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であり、前記ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体が、ＦＥＲＭＰ−２１９１９で寄託されているハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体であることが好ましい。 The detection kit for jellyfish plasma larvae according to the present invention comprises a monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with the larvae of Benicida hydraactinula larvae and the scorpiona nudraplana larvae, but does not react with the jellyfish plasma larvae. It contains a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with larvae, Tamami hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae. Here, the monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamaumihydraplanula and does not react with the jellyfish larvae larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904, It is preferable that the monoclonal antibody that reacts with Benicida hydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by a hybridoma deposited with FERM P-21919.

本発明によれば、ミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法を提供することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the method of specifying a moon jellyfish planula larva can be provided.

以下、上記知見に基づき完成した本発明の実施の形態を、実施例を挙げながら詳細に説明する。 Hereinafter, embodiments of the present invention completed based on the above knowledge will be described in detail with reference to examples.

実施の形態及び実施例に特に説明がない場合には、J. Sambrook, E. F. Fritsch & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); F. M. Ausubel, R. Brent, R. E. Kingston, D. D. Moore, J.G. Seidman, J. A. Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd.等の標準的なプロトコール集に記載の方法、あるいはそれを修飾したり、改変した方法を用いる。また、市販の試薬キットや測定装置を用いる場合には、特に説明が無い場合、それらに添付のプロトコールを用いる。 Unless otherwise stated in the embodiments and examples, J. Sambrook, EF Fritsch & T. Maniatis (Ed.), Molecular cloning, a laboratory manual (3rd edition), Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York (2001); FM Ausubel, R. Brent, RE Kingston, DD Moore, JG Seidman, JA Smith, K. Struhl (Ed.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Ltd. The method described in the protocol collection, or a modified or modified method thereof is used. In addition, when using commercially available reagent kits and measuring devices, unless otherwise explained, protocols attached to them are used.

なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例等は、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示または説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図ならびに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々に修飾ができることは、当業者にとって明らかである。 The objects, features, advantages, and ideas of the present invention will be apparent to those skilled in the art from the description of the present specification, and those skilled in the art can easily reproduce the present invention from the description of the present specification. it can. The embodiments and specific examples of the invention described below show preferred embodiments of the present invention, and are shown for illustration or explanation. It is not limited. It will be apparent to those skilled in the art that various modifications can be made based on the description of the present specification within the spirit and scope of the present invention disclosed herein.

＝＝ミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法＝＝
本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すが、同じ刺胞動物門のミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントを試料（例えば、海水若しくは川水またはそれを超音波装置、ホモジナイザー等で処理した溶解物等）に加え、試料中のミズクラゲプラヌラ幼生由来の抗原と反応させ、その抗原を同定することにより行うことができる。 == How to identify the jellyfish planula larvae ==
The method for identifying the moon jellyfish planula larvae according to the present invention is a monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamamihydraplanula, but does not react with the larvae of the same cnidaria. Or a fragment thereof, and a monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula larvae, Tamamihydraplanula larvae, and moon jellyfish pranulas larvae (for example, seawater or river water or an ultrasonic apparatus, homogenizer thereof) In addition to the lysate treated with the above-mentioned lysates, the antigen can be reacted with an antigen derived from a jellyfish larva in the sample, and the antigen can be identified.

本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法により、様々な種類の生物が含まれる試料中で、ミズクラゲプラヌラ幼生の有無の確認、ミズクラゲプラヌラ幼生の同定、ミズクラゲプラヌラ幼生の分離、ミズクラゲプラヌラ幼生の個体数や量の測定を行うことができるようになる。また、火力発電所や原子力発電所等の臨海プラント及び沿岸水産設備の周辺海域や取水口付近におけるミズクラゲプラヌラ幼生の襲来、発生、残存状況を容易に把握・推定することが可能となるため、ミズクラゲプラヌラ幼生及びミズクラゲ成体による被害の抑制化が可能となる。 According to the method for identifying the moon jellyfish planula larvae according to the present invention, in the sample containing various kinds of organisms, confirmation of the presence of the moon jellyfish planula larvae, identification of the moon jellyfish planula larvae, isolation of the moon jellyfish planula larvae, individuals of the moon jellyfish planula larvae Numbers and quantities can be measured. In addition, it is possible to easily grasp and estimate the state of occurrence, occurrence, and survival of larvae in the vicinity of waterfront plants and coastal fisheries facilities such as thermal power plants and nuclear power plants and in the vicinity of water intakes. It is possible to suppress the damage caused by the planula larvae and adult jellyfish.

具体的には、例えば、前述の２種類のモノクローナル抗体またはそのフラグメントをそれぞれ異なる蛍光波長を有する蛍光色素で標識し、ミズクラゲプラヌラ幼生を含む試料に作用させる。この際、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応するがミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体またはそのフラグメントには反応を示さないが、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体またはそのフラグメントには反応を示す生物を、ミズクラゲプラヌラ幼生と特定することができる。 Specifically, for example, the above-mentioned two types of monoclonal antibodies or fragments thereof are labeled with fluorescent dyes having different fluorescence wavelengths, and allowed to act on a sample containing moon jellyfish planula larvae. At this time, although it does not react with a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamamihydrauranu but does not react with the jellyfish larva larvae, The organism that reacts with the hydraplanula larvae and the monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with the jellyfish larvae can be identified as the jellyfish larvae larvae.

あるいは、前述の２種類のモノクローナル抗体またはそのフラグメントを磁性体などの担体に結合させる。まず、ミズクラゲプラヌラ幼生を含む試料に磁性体などの担体が結合したベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントを作用させ、その後、磁石などを用いて担体を回収する。ここで回収された試料には、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生が含まれている。この回収試料に対し、続いて磁性体などの担体に結合したベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメントを作用させる。そして、磁石などを用いて担体に結合したモノクローナル抗体またはそのフラグメントを除去する。この際、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメントに結合したベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生のみが取り除かれ、ミズクラゲプラヌラ幼生が残留する。従って、この方法によりミズクラゲプラヌラ幼生のみを回収することができる。なお、磁性体としては、例えば、鉄、酸化鉄等を用いることができる。また、磁性体の代わりにＦＡＣＳ（Fluorescence Activated Cell Sorting）、ｐａｎｎｉｎｇ等の方法を用いても同様にタマウミヒドラプラヌラ幼生を回収できる。 Alternatively, the above-described two types of monoclonal antibodies or fragments thereof are bound to a carrier such as a magnetic substance. First, the sample containing the jellyfish prawn larvae is allowed to act with a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with the jellyfish hydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and the jellyfish prawn larvae, to which a carrier such as a magnetic substance is bound. The carrier is recovered using a magnet or the like. Samples collected here include Benicida hydra actinula larvae, Tamami hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae. Next, a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with fenicum hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with jellyfish pranula larvae bound to a carrier such as a magnetic substance. Make it work. Then, the monoclonal antibody or fragment thereof bound to the carrier is removed using a magnet or the like. In this case, the venicida hydra actinula larvae and tamaumi hydra conjugated to a monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with the larvae of Benicida hydraactinula and larvae of the humus hydraplanula but does not react with the jellyfish pranula larvae. Only the planula larvae are removed, and the jellyfish planula larvae remain. Therefore, only the moon jellyfish planula larvae can be recovered by this method. In addition, as a magnetic body, iron, iron oxide, etc. can be used, for example. In addition, the larva of Tamami hydra planula can be similarly recovered by using a method such as FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting) or panning instead of the magnetic substance.

なお、モノクローナル抗体またはそのフラグメントが幼生に反応するというとき、その幼生の形状は、ｗｈｏｌｅ-ｍｏｕｎｔであっても、組織切片であっても、粗抽出液（超音波装置、ホモジナイザー等で処理した溶解物）であっても、当業者が抗体反応に用いる形状であれば、特に限定されない。また、その幼生に対して行う処理（固定、溶解、抽出等）も、当業者が抗体反応に用いるために通常行う処理であれば、特に限定されない。 When the monoclonal antibody or a fragment thereof reacts with the larvae, the shape of the larvae may be a whole-mount or a tissue section, a crude extract (dissolved with an ultrasonic device, a homogenizer, etc.). Even if it is the shape which those skilled in the art use for an antibody reaction, it will not specifically limit. Also, treatments (fixation, dissolution, extraction, etc.) performed on the larvae are not particularly limited as long as they are treatments that are usually performed by those skilled in the art for use in antibody reactions.

＝＝モノクローナル抗体またはそのフラグメント＝＝
本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生を特定する方法に使用する２種類のモノクローナル抗体のそれぞれは、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体であれば特に制限されるものではない。このような２種類のモノクローナル抗体またはそのフラグメントを使用することによって、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応するがミズクラゲプラヌラ幼生には反応しないモノクローナル抗体には反応を示さないが、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体には特異的に反応を示す生物がミズクラゲプラヌラ幼生であると特定することができる。 == Monoclonal antibody or fragment thereof ==
Each of the two types of monoclonal antibodies used in the method for identifying the moon jellyfish planula larvae according to the present invention shows a response to the beech hydra actinula larvae and the Tamami hydraplanula larvae but not to the moon jellyfish planula larvae. The monoclonal antibody is not particularly limited as long as it is not a monoclonal antibody and is a monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and jellyfish larvae. By using these two kinds of monoclonal antibodies or fragments thereof, the antibody reacts with the larvae of Benicumumi hydraactinula and the larvae of Tamamihydraura but does not react with the monoclonal antibody which does not react with the jellyfish larvae larvae. However, it is possible to specify that the organism that specifically reacts with the monoclonal antibody that reacts with the larva of Benicumida hydraactinula, the larvae of Tamaumihydraplanula, and the jellyfish larvae is the jellyfish larvae.

ここで、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントは、それぞれベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、ミズクラゲプラヌラ幼生以外の生物種に対して反応性を有していても、有していなくても制限されない。ただし、ミズクラゲプラヌラ幼生を特異的に検出するためには、ミズクラゲプラヌラ幼生以外の個々の生物種に対する反応性が、前述の２種類の抗体またはフラグメントにおいて同じであることが好ましい。特に、ミズクラゲプラヌラ幼生と生息域が重複するためミズクラゲプラヌラ幼生と一緒に試料中に含まれる可能性の高い生物、例えば、フジツボ類幼生、イガイ類幼生、及び、コペポーダ等に対する反応性が前述の２種類の抗体において同じであれば、より正確にミズクラゲプラヌラ幼生を特定することが可能である。 Here, a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamamihydraplana but does not react with the larvae of the moon jellyfish, and the larvae of Benicumida hydraactinula, Tamamihydra Monoclonal antibodies or fragments thereof that react with planula larvae and moon jellyfish planula larvae have reactivity with species other than Benicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae, respectively. Even if it does not have, it is not limited. However, in order to specifically detect moon jellyfish planula larvae, it is preferable that the reactivity with respect to individual species other than moon jellyfish planula larvae is the same in the above-described two types of antibodies or fragments. In particular, since the habitat overlaps with the moon jellyfish planula larvae, the reactivity to organisms that are likely to be included in the sample together with the moon jellyfish planula larvae, such as barnacle larvae, mussel larvae, and copepods, is 2 If they are the same among the types of antibodies, it is possible to more accurately identify the moon jellyfish planula larvae.

なお、モノクローナル抗体のフラグメントとしては、前述のモノクローナル抗体の一部からなり、可変領域を含む抗原結合部位であれば特に制限されるものではないが、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント等を用いることができる。これらのフラグメントは、例えば、前述のモノクローナル抗体をタンパク質分解酵素によって部分消化することにより得ることができる。なお、タンパク質分解酵素としては、ＦａｂフラグメントやＦ（ａｂ’）_２フラグメントを得ることができるものであればどのようなものであってもよいが、例えば、ペプシン、フィシン等の分解酵素を用いることができる。 The fragment of the monoclonal antibody is not particularly limited as long as it is a part of the above-mentioned monoclonal antibody and includes an antigen binding site containing a variable region. For example, Fab fragment, F (ab ′) ₂ fragment Etc. can be used. These fragments can be obtained, for example, by partially digesting the aforementioned monoclonal antibody with a proteolytic enzyme. Any proteolytic enzyme may be used as long as it can obtain a Fab fragment or F (ab ′) ₂ fragment. For example, a protease such as pepsin or ficin may be used. Can do.

＝＝モノクローナル抗体製造方法＝＝
前述の２種類のモノクローナル抗体は、それぞれ、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマから得ることができる。 == Method for producing monoclonal antibody ==
The above-mentioned two types of monoclonal antibodies are respectively a hybridoma that produces a monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and the larvae of Tamamihydraplana but does not react with the jellyfish larvae larvae, and Benicuda It can be obtained from hybridomas that produce monoclonal antibodies that react to Umihydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae.

ハイブリドーマを用いたモノクローナル抗体の製造は、常法に従って行うことができる。例えば、該ハイブリドーマを適当な培養培地で培養し、培養上清を回収することにより行ってもよいが、前述のハイブリドーマを哺乳類動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ブタ、ウシ、ウマ、イヌ、サル等）の腹腔内に投与し、腹水を回収することにより行ってもよい。なお、モノクローナル抗体の精製は、前述のハイブリドーマの培養上清または培養したハイブリドーマを超音波装置、ホモジナイザー等で処理した溶解物、または前述のハイブリドーマを腹腔内に投与した哺乳類動物から採取した腹水を、常法、例えば、硫安塩析、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィーやアフィニティークロマトグラフィー等）、ゲル濾過等の方法、またはこれらの方法を適宜組み合わせた方法により行うことができる。 Production of a monoclonal antibody using a hybridoma can be performed according to a conventional method. For example, the hybridoma may be cultured in an appropriate culture medium, and the culture supernatant may be collected. The hybridoma described above may be used in mammals (eg, mouse, rat, hamster, rabbit, pig, cow, horse, It may be carried out by intraperitoneal administration of dogs, monkeys, etc.) and collecting ascites. In addition, the purification of the monoclonal antibody is performed by using the culture supernatant of the hybridoma or the lysate obtained by treating the cultured hybridoma with an ultrasonic device, a homogenizer, or the ascites collected from a mammal administered intraperitoneally with the hybridoma. It can be performed by a conventional method, for example, ammonium sulfate salting out, chromatography (for example, ion exchange chromatography, affinity chromatography, etc.), gel filtration, or a combination of these methods.

ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマとして、例えば、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにおいて受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９０４で寄託されている細胞株ＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）を用いることができる。また、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマとして、例えば、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにおいて受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９１９で寄託されている細胞株ＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）、受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９２０で寄託されている細胞株ＴＣＡ−Ｈ２Ｅ１０（１）、受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９５０で寄託されている細胞株ＴＣＡ−Ｈ３Ｈ１０（１）、受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９３６で寄託されている細胞株ＴＣＡ−Ｈ３Ｂ５（５）、受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９３７で寄託されている細胞株ＴＣＡ−Ｈ３Ｂ１０（３）のいずれかを用いることができるが、アカフジツボキプリス幼生、コペポーダ、ムラサキイガイペディベリジャー幼生に対する反応性を考慮すると、受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９０４で寄託されている細胞株ＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）と共に用いる場合には、受託番号ＦＥＲＭＰ−２１９１９で寄託されている細胞株ＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）を用いることが好ましい。 As a hybridoma producing a monoclonal antibody that reacts with Benicida hydra actinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but not with jellyfish pranula larvae, for example, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology The cell line TC-H2D7 (3) deposited under accession number FERM P-21904 can be used. Moreover, as a hybridoma producing a monoclonal antibody that reacts with Benicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae, for example, the accession number FERM at the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST) Cell line TCA-H1A11 (3) deposited under P-21919, cell line TCA-H2E10 (1) deposited under accession number FERM P-21920, cell line deposited under accession number FERM P-21950 Either TCA-H3H10 (1), cell line TCA-H3B5 (5) deposited under accession number FERM P-21936, or cell line TCA-H3B10 (3) deposited under accession number FERM P-21937 Can be used, but In consideration of reactivity to larvae, coppoda and mussel pediberger larvae, when used with cell line TC-H2D7 (3) deposited under accession number FERM P-21904, it is deposited under accession number FERM P-21919. It is preferable to use the cell line TCA-H1A11 (3).

＝＝ハイブリドーマの作製＝＝
本発明に係る方法に用いられる抗体を産生するハイブリドーマは、常法により作製することができる。以下に一例を示す。 == Production of hybridoma ==
The hybridoma producing the antibody used in the method according to the present invention can be prepared by a conventional method. An example is shown below.

まず、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、または、ミズクラゲプラヌラ幼生、あるいはその粗抽出液を抗原として用い、適当な量の抗原をマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ブタ、ウシ、ウマ、イヌ、サル等の哺乳動物の静脈内、皮下、腹腔内等に１〜複数回投与して免疫する。この際、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、または、ミズクラゲプラヌラ幼生のいずれかのみを抗原として用いても、２種類以上を抗原として用いてもよい。また、免疫にアジュバントを使用してもよい。 First, Benicida hydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, or jellyfish planula larvae, or crude extracts thereof, are used as antigens, and an appropriate amount of antigen is used in mice, rats, hamsters, rabbits, pigs, cows, Immunization is performed one or more times in the vein, subcutaneous, intraperitoneal, etc. of mammals such as horses, dogs, monkeys and the like. At this time, either Benikudaumihydra actinula larvae, Tamamihydraplanula larvae, or moon jellyfish planula larvae may be used as antigens, or two or more kinds may be used as antigens. An adjuvant may be used for immunization.

その後、免疫した動物から抗体産生細胞を採取し、採取した抗体産生細胞と骨髄腫細胞（ミエローマ細胞）とを融合させてハイブリドーマを作製する。得られたハイブリドーマの中で、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを選定することにより、本発明に係る方法に用いられる２種類のモノクローナル抗体をそれぞれ産生するハイブリドーマを得ることができる。 Thereafter, antibody-producing cells are collected from the immunized animal, and the collected antibody-producing cells and myeloma cells (myeloma cells) are fused to produce a hybridoma. Among the obtained hybridomas, a hybridoma producing a monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicida hydra actinula and the larvae of Tamida hydraplana but does not react with the jellyfish planula larvae, and By selecting a hybridoma that produces a monoclonal antibody that reacts with Nura larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planan larvae, a hybridoma that produces each of the two monoclonal antibodies used in the method according to the present invention is obtained. Can do.

前記抗体産生細胞とミエローマ細胞は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、センダイウイルス（ＨＶＪ）等の細胞融合促進剤を用いて細胞融合することができるが、エレクトロポレーション等の電気刺激を利用して細胞融合することもできる。なお、細胞融合の効率を高めるために、ジメチルスルホキシドやレシチン等の補助剤を培養培地に含ませてもよい。 The antibody-producing cells and myeloma cells can be fused with a cell fusion promoter such as polyethylene glycol (PEG) or Sendai virus (HVJ), for example, using electrical stimulation such as electroporation. Cell fusion is also possible. In order to increase the efficiency of cell fusion, adjuvants such as dimethyl sulfoxide and lecithin may be included in the culture medium.

前記抗体産生細胞としては、例えば、脾臓細胞、リンパ節細胞、胸腺細胞、末梢血細胞等を用いることができる。これらの細胞は、動物から脾臓、リンパ節、胸腺、または末梢血を摘出し、摘出した組織を破砕、濾過、遠心分離等することにより得ることができる。また、前記ミエローマ細胞としては、各種動物由来の細胞株を用いてもよいが、それ自身薬剤に対して抵抗性を示さないが、融合すると薬剤に対して抵抗性を示す細胞株を用いることが好ましい。これにより、細胞融合した後、薬剤を添加した培養培地（例えば、ＨＡＴ培地等）で培養することにより、細胞融合によって得られたハイブリドーマの選択が容易となる。なお、融合させる抗体産生細胞とミエローマ細胞は、同種の動物由来の細胞を用いることが望ましいが、異なる種の動物由来の細胞を用いてもよい。 Examples of the antibody-producing cells that can be used include spleen cells, lymph node cells, thymocytes, and peripheral blood cells. These cells can be obtained by removing spleen, lymph nodes, thymus, or peripheral blood from an animal, and crushing, filtering, centrifuging, etc. the removed tissue. In addition, as the myeloma cells, cell lines derived from various animals may be used. However, cell lines that do not themselves show resistance to drugs but that are resistant to drugs when fused may be used. preferable. Thereby, after cell fusion, selection of a hybridoma obtained by cell fusion is facilitated by culturing in a culture medium (for example, HAT medium) to which a drug is added. The antibody-producing cells and myeloma cells to be fused are preferably cells derived from the same species, but cells derived from animals of different species may be used.

前述のハイブリドーマの選定は、常法のスクリーニングやクローニングにより行うことができる。ハイブリドーマのスクリーニングには、例えば、酵素免疫測定法（ＥＩＡ：Enzyme ImmunoAssay、ＥＬＩＳＡ：Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）、放射線免疫測定法（ＲＩＡ：Radio Immuno Assay）、ウエスタンブロッティング等を用いることができ、ハイブリドーマのクローニングには、例えば、限界希釈法、軟寒天法、フィブリンゲル法、蛍光励起セルソーター法等を用いることができる。本発明に係るハイブリドーマの選定において、上記スクリーニング及びクローニングを繰り返し行うことにより、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生またはその粗抽出液には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生またはその粗抽出液には反応を示さないモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生またはその粗抽出液に反応を示すモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを選択することが可能となる。 The aforementioned hybridoma can be selected by routine screening or cloning. For screening of hybridomas, for example, enzyme immunoassay (EIA: Enzyme ImmunoAssay, ELISA: Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), radioimmunoassay (RIA: Radio Immuno Assay), Western blotting, etc. can be used. For cloning, for example, a limiting dilution method, a soft agar method, a fibrin gel method, a fluorescence excitation cell sorter method, or the like can be used. In the selection of the hybridoma according to the present invention, by repeating the above screening and cloning, a reaction is observed in the larvae of Benicumumi hydra actinula larvae and Tamaumi hydraplana larvae or crude extract thereof, but Hybridomas that produce monoclonal antibodies that do not react with the liquid, and hybridomas that produce monoclonal antibodies that react with the crude extract of Benicumida hydraactinula larvae, Tamamihydraplanula larvae, It becomes possible to select.

なお、ハイブリドーマのスクリーニングでは、最低限ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生またはその粗抽出液、タマウミヒドラプラヌラ幼生またはその粗抽出液、ミズクラゲプラヌラ幼生またはその粗抽出液に対する反応性を調べればよいが、さらに、これら以外の生物、例えば、アカフジツボをはじめとするフジツボ類のキプリス幼生、コペポーダ、ムラサキイガイをはじめとするイガイ類のペディベリジャー幼生等の他の幼生やプランクトンまたはその粗抽出液との反応性を調べ、ミズクラゲプラヌラ幼生以外の個々の生物種に対する反応性が、前述の２種類のモノクローナル抗体またはフラグメントにおいて同じであることを確認することが好ましい。 In the hybridoma screening, it is sufficient to examine the reactivity of at least fenicillium hydra actinula larvae or crude extract thereof, dansula hydraplanula larvae or crude extract thereof, or jellyfish pranula larvae or crude extract thereof, Furthermore, other larvae such as cypris larvae of barnacles such as red barnacles, copepoda, mussel pediberger larvae such as mussels and plankton or a crude extract thereof can be used. It is preferable to check and confirm that the reactivity with respect to individual species other than the moon jellyfish planula larvae is the same in the above-mentioned two types of monoclonal antibodies or fragments.

＝＝ミズクラゲプラヌラ幼生の検出用試薬＝＝
上記「モノクローナル抗体またはそのフラグメント」に記載される２種類のモノクローナル抗体またはそのフラグメント、すなわち、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントを使用することによってミズクラゲプラヌラ幼生を特定することができるので、それらの２種類のモノクローナル抗体またはそのフラグメントは、それらの２種類のモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含むことを特徴とするミズクラゲプラヌラ幼生の検出用試薬、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出器、及び、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出キットとして利用可能である。 == Reagent for detection of moon jellyfish planula larva ==
The two monoclonal antibodies or fragments thereof described above in “Monoclonal antibodies or fragments thereof”, that is, they show a reaction with Benicida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but not with jellyfish planula larvae. Can be identified by using any monoclonal antibody or fragment thereof, and a monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with Benicida hydra actinula larvae, Tama hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae Therefore, the two kinds of monoclonal antibodies or fragments thereof include the two kinds of monoclonal antibodies or fragments thereof. The detector of Aurelia plug Nura larvae, and is available as a kit for detecting Aurelia plug Marne-la-larvae.

なお、本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生の検出用試薬は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含むものであればどのようなものでもよく、例えば、緩衝液（例えば、リン酸塩、炭酸塩、塩酸塩等の塩の溶液）、防腐剤（例えば、アジ化ナトリウム等）、非特異的な反応を抑制するための物質（例えば、ブロックエース、ゼラチン、スキムミルク等）、免疫学的手法によりベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、またはミズクラゲプラヌラ幼生を検出するのに必要な物質（例えば、標識物質等）、安定剤（例えば、ＢＳＡ、ヤギ血清等）等の、抗体またはそのフラグメント以外に抗原の検出用試薬に含ませる一般的な物質が１または２以上、さらに含まれていてもよい。 The reagent for detecting jellyfish planula larvae according to the present invention is a monoclonal antibody or a fragment thereof that shows a reaction with Benicida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with jellyfish planula larvae, and Any of those containing a monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula larvae, Tamamihydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae, such as a buffer (eg, phosphate Salt, carbonate, salt solution such as hydrochloride), preservatives (eg, sodium azide, etc.), substances for inhibiting non-specific reactions (eg, block ace, gelatin, skim milk, etc.), immunology Benmicidal hydra actinula larvae, Tamami hydraplanula In addition to antibodies or fragments thereof such as substances necessary for detecting live or moon jellyfish planula larvae (eg, labeling substances), stabilizers (eg, BSA, goat serum), etc. One or more general substances may be further included.

本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生の検出器は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントが媒体（例えば、濾紙等の紙、ガラス、繊維、ニトロセルロース等の変性セルロース、ナイロン、プラスチック等から成るフィルター、メンブレン、プレート、ディッシュ等）に固定化されているものを含めばどのようなものでもよく、例えば、緩衝液（例えば、リン酸塩、炭酸塩、塩酸塩等の塩の溶液）、防腐剤（例えば、アジ化ナトリウム等）、非特異的な反応を抑制するための物質（例えば、ブロックエース、ゼラチン、スキムミルク等）、免疫学的手法によりベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、またはミズクラゲプラヌラ幼生を検出するのに必要な物質（例えば、標識物質、発色基質、二次抗体、発色増強剤等）、安定剤（例えば、ＢＳＡ、ヤギ血清等）等の、抗体またはそのフラグメント以外に抗原の検出器に含ませる一般的な物質が１または２以上、さらに含まれていてもよい。 According to the present invention, there is provided a detector of a jellyfish planula larvae, a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with venicida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with jellyfish planula larvae, A monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with Umihydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish pranula larvae is a medium (for example, paper such as filter paper, glass, fiber, modified cellulose such as nitrocellulose, nylon, plastic, etc. Filter, membrane, plate, dish, etc.), for example, buffers (eg, solutions of salts such as phosphates, carbonates, hydrochlorides, etc.) , Preservatives (eg sodium azide, etc.), non Substances to suppress the abnormal reactions (eg, block ace, gelatin, skim milk, etc.), to detect Benicida hydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, or moon jellyfish planula larvae by immunological techniques In addition to antibodies or fragments thereof such as necessary substances (eg, labeling substances, chromogenic substrates, secondary antibodies, chromogenic enhancers, etc.), stabilizers (eg, BSA, goat serum, etc.), etc. One or two or more typical substances may be further included.

本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生の検出器の一例としては、試料を滴下する部分または試料を浸す第一の部分と、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、あるいは、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントが固定化された第二の部分と、第二の部分に固定化されたモノクローナル抗体が産生されたホストの動物種の免疫グロブリンに特異的に反応する抗免疫グロブリン抗体等が固定化された第三の部分を有し、第二の部分が第一の部分と第三の部分との間に備えられ、第一の部分には、金属コロイド粒子（例えば、金コロイド粒子等）、重金属（例えば、金、白金等）、蛍光物質（例えば、ＦＩＴＣ（フルオレセインイソチオシアネート）、ローダミン、ファロイジン等）、着色ラテックス粒子等の標識物質で標識されたクロマトグラフ媒体を挙げることができる。前記クロマトグラフ媒体としては、例えば、ガラスやシリカ等の無機繊維からなる濾紙、ニトロセルロース等の変性セルロース等を用いることができる。 Examples of the detector of the moon jellyfish planula larvae according to the present invention include a part where the sample is dripped or a first part where the sample is immersed, and a jellyfish jellyfish that responds to the larvae of vicinal hydra actinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae. Monoclonal antibody or fragment thereof that does not react to planula larvae, or a second monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with Benicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae. An anti-immunoglobulin antibody that specifically reacts with the immunoglobulin of the host animal species from which the monoclonal antibody immobilized on the second portion was produced, and a third portion, A second part is provided between the first part and the third part, Labeled with a labeling substance such as colloidal metal particles (for example, gold colloidal particles), heavy metals (for example, gold, platinum, etc.), fluorescent materials (for example, FITC (fluorescein isothiocyanate), rhodamine, phalloidin, etc.), colored latex particles, etc. And chromatographic media. Examples of the chromatographic medium include filter paper made of inorganic fibers such as glass and silica, and modified cellulose such as nitrocellulose.

例えば、本検出器の第二の部分にベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメントが固定化されたクロマトグラフ媒体（以下、クロマトグラフ媒体Ａと称する）と、本検出器の第二の部分にベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントが固定化されたクロマトグラフ媒体（以下、クロマトグラフ媒体Ｂと称する）とが含まれる検出器を用いて同一の試料を解析し、クロマトグラフ媒体Ａでは陰性を示し、クロマトグラフ媒体Ｂでは陽性を示す場合には、試料にタマウミヒドラプラヌラ幼生が特異的に含まれていると判断できる。逆に、クロマトグラフ媒体Ａ、Ｂで共に陰性の場合には、試料にミズクラゲプラヌラ幼生が含まれていないと判断でき、クロマトグラフ媒体Ａ、Ｂで共に陽性の場合には、試料に少なくともベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生またはタマウミヒドラプラヌラ幼生が含まれていると判断できるが、ミズクラゲプラヌラ幼生が含まれているか否かは不明である。 For example, in the second part of the detector, a chromatograph in which a monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and larvae of Tamidahydra but does not react with the larvae of moon jellyfish is immobilized. A monoclonal antibody or a fragment thereof that reacts with a graph medium (hereinafter referred to as chromatographic medium A) and a second part of this detector; The same sample is analyzed using a detector including a chromatographic medium (hereinafter referred to as chromatographic medium B) in which is immobilized, and the chromatographic medium A is negative and the chromatographic medium B is positive. If indicated, the sample specifically contains T. hydraplanula larvae. It can be determined that there. Conversely, if both chromatographic media A and B are negative, it can be determined that the sample does not contain jellyfish planula larvae, and if both chromatographic media A and B are positive, the sample contains at least Benicuda. Although it can be judged that the sea urchin actinula larvae or the sea urchin hydraplanula larvae are included, it is unclear whether or not the moon jellyfish planula larvae are included.

このような検出器の原理として、クロマトグラフ媒体Ａに関し、例えばミズクラゲプラヌラ幼生またはその溶解物のみを含む試料を、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメントが第二の部分に固定化されたクロマトグラフ媒体Ａの第一の部分に滴下したり、試料に第一の部分を浸したりすると、試料中のミズクラゲプラヌラ幼生またはその溶解物は、クロマトグラフ媒体Ａの第一の部分から第二の部分を経て第三の部分を超えて移動する。この時、第一の部分に含まれる標識されたモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び第二の部分に固定化されたモノクローナル抗体またはそのフラグメントは、ミズクラゲプラヌラ幼生に反応性を持たないため、前述の試料中のミズクラゲプラヌラ幼生またはその溶解物はクロマトグラフ媒体Ａ上でいずれのモノクローナル抗体またはそのフラグメントとも結合せずに第一の部分と第二の部分を素通りする。同時に、第一の部分に含まれる標識されたモノクローナル抗体またはそのフラグメントはフリーの状態で第二の部分を素通りして第三の部分へと移動し、第三の部分において固定化された抗免疫グロブリン抗体に捕捉され、第三の部分でのみ発色が生じる。この第三の部分での発色は、検出の陽性対照となる。一方、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生またはタマウミヒドラプラヌラ幼生、あるいはその溶解物を含む液体試料を、クロマトグラフ媒体Ａの第一の部分に滴下したり、試料に第一の部分を浸したりすると、液体試料中のベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生またはタマウミヒドラプラヌラ幼生由来の抗原は、第一の部分に含まれる標識されたモノクローナル抗体またはそのフラグメントと反応して複合体を形成し、液が媒体中を広がるのを利用して、その複合体は第二の部分へと移動し、第二の部分において固定化された前述のモノクローナル抗体またはそのフラグメントに捕捉されてその位置で標識物質によりベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生またはタマウミヒドラプラヌラ幼生の検出が可能となる。このように、クロマトグラフ媒体Ａの第二の部分にシグナルが現れたか否かによって、試料中にベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生またはタマウミヒドラプラヌラ幼生が存在するかどうかを判定することが可能となる。 As a principle of such a detector, with respect to the chromatographic medium A, for example, a sample containing only the moon jellyfish planula larvae or a lysate thereof shows a reaction with the beech hydraactinula larvae and the Tamaumi hydraplanula larvae. When a monoclonal antibody that does not react to larvae or a fragment thereof is dropped on the first part of the chromatographic medium A immobilized on the second part or the first part is immersed in the sample, The moon jellyfish planula larvae or lysates thereof travel from the first part of chromatographic medium A through the second part and beyond the third part. At this time, the labeled monoclonal antibody or fragment thereof contained in the first part, and the monoclonal antibody or fragment thereof immobilized on the second part are not reactive with the moon jellyfish planula larvae. The jellyfish planula larvae or lysates therein pass through the first part and the second part on the chromatographic medium A without binding to any monoclonal antibody or fragment thereof. At the same time, the labeled monoclonal antibody or fragment thereof contained in the first part passes through the second part in a free state and moves to the third part, and the anti-immunity immobilized in the third part It is captured by the globulin antibody and color develops only in the third part. This color development in the third part serves as a positive control for detection. On the other hand, when a liquid sample containing Benicida hydraactinula larvae or Tamami hydraplanula larvae or a lysate thereof is dropped on the first part of the chromatographic medium A or the first part is immersed in the sample. In the liquid sample, the antigen derived from the larvae of Benicum hydra actinula larvae or Tamami hydraplanula larvae reacts with the labeled monoclonal antibody or fragment thereof contained in the first part to form a complex. Using the spread in the medium, the complex moves to the second part, and is captured by the aforementioned monoclonal antibody or fragment immobilized on the second part, and is then bent by the labeling substance at that position. Detection of Kudaumihydra actinula larvae or Tamamihydraplanula larvae becomes possible. In this way, it is possible to determine whether or not Benicida hydra actinula larvae or Tamami hydraplanula larvae are present in the sample depending on whether or not a signal appears in the second portion of the chromatographic medium A. Become.

また、クロマトグラフ媒体Ｂに関し、例えばミズクラゲプラヌラ幼生またはその溶解物を含む試料を、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントが第二の部分に固定化されたクロマトグラフ媒体Ｂの第一の部分に、滴下したり、試料に第一の部分を浸したりすると、試料中のミズクラゲプラヌラ幼生またはその溶解物は、クロマトグラフ媒体Ｂの第一の部分から第二の部分を経て第三の部分を超えて移動する。この時、前述の試料中に含まれるミズクラゲプラヌラ幼生由来の抗原は第一の部分に含まれる標識されたモノクローナル抗体またはそのフラグメントと反応して複合体を形成し、液が媒体中を広がるのを利用して、その複合体は第二の部分へと移動し、第二の部分において固定化された前述のモノクローナル抗体またはそのフラグメントに捕捉されてその位置で標識物質により、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、またはミズクラゲプラヌラ幼生の検出が可能となる。なお、このクロマトグラフ媒体Ａ第一の部分からくるフリーの抗体は、第三の部分へと移動し、第三の部分において固定化された抗免疫グロブリン抗体に捕捉され、第三の部分で発色が生じる。この第三の部分での発色は、検出の陽性対照となる。この様に、クロマトグラフ媒体Ｂの第二の部分にシグナルが現れたか否かによって、試料中にベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、あるいはミズクラゲプラヌラ幼生が存在するかどうかを判定することが可能となる。 In addition, for chromatographic medium B, for example, a sample containing a moon jellyfish planula larvae or a lysate thereof is prepared by using a monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with Benicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae. When the first part of the chromatographic medium B immobilized on the second part is dropped or the first part is immersed in the sample, the jellyfish planula larvae or the lysate thereof in the sample are separated from the chromatographic medium B. Move from the first part to the second part and beyond the third part. At this time, the antigen derived from the jellyfish larvae larvae contained in the sample reacts with the labeled monoclonal antibody or fragment thereof contained in the first part to form a complex, and the liquid spreads in the medium. Utilizing this, the complex migrates to the second part, and is captured by the aforementioned monoclonal antibody or fragment thereof immobilized in the second part and is labeled with the labeling substance at that position. Detection of larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, or moon jellyfish planula larvae becomes possible. The free antibody coming from the first part of the chromatographic medium A moves to the third part, is captured by the anti-immunoglobulin antibody immobilized in the third part, and develops color in the third part. Occurs. This color development in the third part serves as a positive control for detection. Thus, it is determined whether or not there is a Benicida hydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, or moon jellyfish planula larvae depending on whether or not a signal appears in the second part of the chromatographic medium B. It becomes possible to do.

従って、クロマトグラフ媒体Ａでは陰性を示し、クロマトグラフ媒体Ｂでは陽性を示す場合には、その試料にタマウミヒドラプラヌラ幼生が特異的に含まれていると判断できる。 Therefore, when the chromatographic medium A is negative and the chromatographic medium B is positive, it can be determined that the sample contains specifically the larva of Tamami Hydraplanula.

また、本発明に係るタマウミヒドラプラヌラ幼生の検出キットは、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生には反応を示すがミズクラゲプラヌラ幼生には反応を示さないモノクローナル抗体またはそのフラグメント、及び、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に反応を示すモノクローナル抗体またはそのフラグメントを含むものであればどのようなものでもよく、これらの２種類のモノクローナル抗体またはそのフラグメント以外に、例えば、緩衝液（例えば、リン酸塩、炭酸塩、塩酸塩等の塩の溶液）、防腐剤（例えば、アジ化ナトリウム等）、非特異的な反応を抑制するための物質（例えば、ブロックエース、ゼラチン、スキムミルク等）、免疫学的手法によりベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生を検出するのに必要な物質（例えば、標識物質、発色基質、二次抗体、発色増強剤等）、安定剤（例えば、ＢＳＡ、ヤギ血清等）等の抗原の検出キットに含ませる一般的な物質、若しくは前述のミズクラゲプラヌラ幼生の検出器、またはこれらのうち２以上を組み合わせたものが含まれていてもよい。 Further, the detection kit for tamaumi hydraplanula larvae according to the present invention is a monoclonal antibody or a fragment thereof that shows a reaction to venicida hydraactinula larvae and tamaumihydraplanula larvae but does not react to jellyfish planula larvae, And any one of those containing a monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with Benicida hydraactinula larvae, Tamaumihydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae. In addition to the fragments, for example, buffer solutions (for example, solutions of salts such as phosphates, carbonates, hydrochlorides, etc.), preservatives (for example, sodium azide, etc.), substances for suppressing non-specific reactions (Eg, block ace, gelatin, skim milk, etc.), immunology Substances (eg, labeling substances, chromogenic substrates, secondary antibodies, chromogenic enhancers, etc.), stabilizers (eg, labeling substances, chromogenic substrates, secondary colourants, etc.) required to detect fenic hydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae For example, a general substance to be included in an antigen detection kit such as BSA, goat serum, or the like, a detector of the aforementioned jellyfish planula larvae, or a combination of two or more thereof may be included.

なお、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出用試薬、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出器、及び、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出キットにおける標識物質としては、例えば、蛍光物質（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ファロイジン等）、金等のコロイド粒子、重金属（例えば、金、白金等）、色素タンパク質（例えば、フィコエリトリン（ＰＥ）、フィコシアニン（ＰＣ）等）、放射性同位元素（例えば、^３Ｈ、^３２Ｐ、^３５Ｓ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ等）、酵素（例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ等）、ビオチン、ストレプトアビジン等の物質を用いることができるがこれらに制限されるものではなく、公知の標識物質を用いてもよい。また、発色基質としては、前述の酵素に対する発色基質であれば特に制限されるものではなく、例えば、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）、ｏ-フェニレンジアミン(o-Phenylenediamine)、過酸化水素水、ＢＣＩＰ/Ｎｉｔｒｏ-ＴＢ（5-Bromo-4-chloro-3-indolylphosphate/Nitrotetrazolium blue）、ｐＮＰＰ（para-nitorophenylphosphate）等を用いることができる。発色増強剤としては、前述の基質の発色を増強させることができるものであればどのようなものでもよく、例えば、硫酸等を用いることができ、二次抗体としては、例えば、本発明に係るモノクローナル抗体が産生されたホストの動物種の免疫グロブリンに特異的に反応する抗免疫グロブリン抗体、抗ＩｇＧ（Ｈ+Ｌ）、抗ＩｇＧ（Ｆｃ）等を用いることができる。 Examples of labeling substances in the detection reagent for moon jellyfish planula larvae, the detector for moon jellyfish planula larvae, and the detection kit for moon jellyfish planula larvae include, for example, fluorescent substances (eg, FITC, rhodamine, phalloidin, etc.), colloids such as gold Particles, heavy metals (eg, gold, platinum, etc.), chromoproteins (eg, phycoerythrin (PE), phycocyanin (PC), etc.), radioisotopes (eg, ³ H, ³² P, ³⁵ S, ¹²⁵ I, ¹³¹ I, etc.) ), Enzymes (for example, peroxidase, alkaline phosphatase, etc.), biotin, streptavidin, and the like can be used, but are not limited thereto, and known labeling substances may be used. The chromogenic substrate is not particularly limited as long as it is a chromogenic substrate for the above-mentioned enzyme. For example, diaminobenzidine (DAB), o-phenylenediamine (o-Phenylenediamine), hydrogen peroxide solution, BCIP / Nitro -TB (5-Bromo-4-chloro-3-indolylphosphate / Nitrotetrazolium blue), pNPP (para-nitorophenylphosphate), etc. can be used. As the color development enhancer, any one can be used as long as it can enhance the color development of the aforementioned substrate. For example, sulfuric acid or the like can be used, and the secondary antibody is, for example, according to the present invention. Anti-immunoglobulin antibodies, anti-IgG (H + L), anti-IgG (Fc) and the like that specifically react with immunoglobulins of the host animal species from which the monoclonal antibody was produced can be used.

また、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出用試薬、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出器、及び、ミズクラゲプラヌラ幼生の検出キットに関する前述の免疫学的手法としては、ＥＩＡ（Enzyme Immunoassay）、蛍光免疫測定法、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）、ＲＩＡ（Radioimmuno assay）、ウエスタンブロッティング、ラテックス凝集法、イムノクロマト法、サンドイッチ法等の公知の方法を用いることができる。 Examples of the immunological techniques relating to the detection reagent for moon jellyfish planula larvae, the detector for moon jellyfish planula larvae, and the detection kit for moon jellyfish planula larva include EIA (Enzyme Immunoassay), fluorescence immunoassay, ELISA (Enzyme- Known methods such as Linked Immunosorbent Assay), RIA (Radioimmuno assay), Western blotting, latex agglutination method, immunochromatography method, and sandwich method can be used.

以上のように、本発明に係るミズクラゲプラヌラ幼生の検出方法を用いることにより、様々な種類の生物が含まれる試料中で、ミズクラゲプラヌラ幼生の有無の確認、ミズクラゲプラヌラ幼生の同定、ミズクラゲプラヌラ幼生の分離、ミズクラゲプラヌラ幼生の個体数や量の測定を行うことができるようになるが、検出器や検出キットを用いることにより、より容易にこれらを行うことができるようになる。 As described above, by using the method for detecting moon jellyfish planula larvae according to the present invention, in a sample containing various kinds of organisms, confirmation of the presence of moon jellyfish planula larvae, identification of moon jellyfish planula larvae, Separation and measurement of the number and amount of jellyfish larvae larvae can be performed, but these can be performed more easily by using a detector or a detection kit.

以下に、本発明を実施例によって具体的に説明する。なお、これらの実施例は本発明を説明するためのものであって、本発明の範囲を限定するものではない。 Hereinafter, the present invention will be specifically described by way of examples. These examples are for explaining the present invention, and do not limit the scope of the present invention.

[実施例１]
本実施例では、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生に反応性を有するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを樹立した。 [Example 1]
In this example, a hybridoma that produces a monoclonal antibody reactive to Benicida hydra actinula larvae was established.

＝＝ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生の飼育方法＝＝
鹿児島県湾竜ヶ水沿岸に設置された養殖生簀、あるいは、播磨新島ヨットハーバーの浮き桟橋裏面からベニクダウミヒドラ群体を採取した。この群体を海水で洗浄した後、雌雄に選別し、オスとメスを約１：９の割合で水温６〜７℃の海水を有する循環式水槽に収容して孵化直後のアルテミアを与えながら飼育した。適宜、幼生遊出直前のメスポリプを選別し、遊出したアクチヌラ幼生を採取した。回収したアクチヌラ幼生をろ過海水で洗浄した後、１００個体ずつ冷凍保存した。この冷凍幼生を、以下に記載の免疫、ＥＬＩＳＡ用抗原試料として使用した。 == How to raise larvae of Benicida mihydra actinula ==
Benikudaumihydra colony was collected from aquaculture ginger installed on the coast of Ryugamizu Bay, Kagoshima Prefecture, or from the back of the floating pier of Harima Niijima Yacht Harbor. This colony was washed with seawater and then sorted into males and females, and males and females were housed in a circulating water tank having seawater at a water temperature of 6-7 ° C. at a ratio of about 1: 9 and fed with Artemia immediately after hatching. . The female polyps immediately before the larval migration were selected as appropriate, and the activated actinula larvae were collected. The collected actinula larvae were washed with filtered seawater and then stored frozen for 100 individuals. This frozen larva was used as an antigen sample for immunity and ELISA described below.

＝＝ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生によるマウスの免疫＝＝
１０週齢のＢＡＬＢ／ｃマウス（メス）の腹腔内に抗原（ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生１００〜２００個／３００〜４００μＬのＰＢＳ）を５回注射し、マウスを免疫した。具体的には、１回目の投与から１６８日目に２回目の投与を、２回目の投与から２４日目に３回目の投与を、３回目の投与から２１日目に４回目の投与を、４回目の投与から３９日目に５回目の投与を行った。 == Immunoimmunization of mice by Benicida hydra actinula larvae ==
Ten weeks old BALB / c mice (female) were intraperitoneally injected with antigen (100-200 Benicumumi hydra actinula larvae / 300-400 μL PBS) five times to immunize the mice. Specifically, the second administration on day 168 from the first administration, the third administration on day 24 from the second administration, the fourth administration on day 21 from the third administration, The fifth administration was performed on the 39th day from the fourth administration.

＝＝ハイブリドーマの作製＝＝
（脾臓組織の単離）
最終免疫から４日後に、マウスから脾臓を摘出し、１０％のＦＢＳ（Fetal Bovine Serum；GIBCO社製）及び１％の抗生物質（Antibiotic-Antimycotic；GIBCO社製）を含むＲＰＭＩ１６４０（GIBCO社製）培地中で滅菌ステンレスメッシュを用いて裏漉しし、細胞を分散・懸濁させて脾臓細胞を得た。この脾臓細胞を１０％のＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＢＳ^＋培地）で洗浄・遠心した後、ＲＰＭＩ１６４０培地（ＦＢＳ⁻培地）で３回遠心・洗浄し、脾臓細胞を回収した。 == Production of hybridoma ==
(Isolation of spleen tissue)
Four days after the final immunization, the spleen was removed from the mouse and RPMI 1640 (GIBCO) containing 10% FBS (Fetal Bovine Serum; GIBCO) and 1% antibiotic (Antibiotic-Antimycotic; GIBCO). Spleen cells were obtained by dispersing and suspending the cells using a sterile stainless mesh in the medium. The spleen cells were washed and centrifuged with RPMI1640 medium (FBS ⁺ medium) containing 10% FBS, and then centrifuged and washed three times with RPMI1640 medium (FBS ^- medium) to collect spleen cells.

（細胞融合とＨＡＴ選択：不活化ウィルス法）
まず、凍結ミエローマ細胞（マウス骨髄癌細胞、Ｐ３Ｕ１）を融解した後、１０％ＦＢＳ、１％抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０で培養し、生存率、増殖性の高い株を選別し、１回移植して融合に備えた。GenomOne-CF（不活化センダイウィルス外膜：HVJ-E、石原産業(株)製）を用いて細胞融合を行った。前述のミエローマ細胞と脾臓細胞を１：２の割合で混合した後、遠心して上清を除去し、細胞ペレット（沈殿）を作製した。これに、氷冷した融合用緩衝液（１倍濃度液）を添加（脾臓細胞１０^８細胞あたり１ｍＬ添加）し、細胞群を懸濁させた。氷冷したHVJ-E懸濁液を添加（細胞懸濁液１ｍＬあたり２５μＬを添加）し、氷上で５分間静置した。その後、遠心（４℃、１０００ｒｐｍ×５分間）を行い、３７℃で１５分間インキュベーションした。続いて、ＦＢＳ^＋培地（３７℃）１０ｍＬを添加して細胞群を懸濁させた（脾臓細胞１０^８細胞／５０ｍＬ）。これを、ＦＢＳ^＋培地１０ｍＬが入った分室シャーレ３枚にそれぞれ２ｍＬずつ播種し、ＣＯ_２インキュベータ内で静置培養を行った。培養開始から１日後、各シャーレから培地を４ｍＬずつ取り、２×ＨＡＴ培地６ｍＬとconditioned medium ０．３〜０．４ｍＬを各シャーレに添加し（終濃度０．８×ＨＡＴ培地）、ＣＯ_２インキュベータ内で静置培養することにより、ＨＡＴ選択培養を行った。 (Cell fusion and HAT selection: inactivated virus method)
First, frozen myeloma cells (mouse bone marrow cancer cells, P3U1) were thawed, cultured in RPMI 1640 containing 10% FBS and 1% antibiotics, and a strain with high survival rate and proliferative properties was selected and transplanted once. Prepared for fusion. Cell fusion was performed using GenomOne-CF (inactivated Sendai virus outer membrane: HVJ-E, manufactured by Ishihara Sangyo Co., Ltd.). The above myeloma cells and spleen cells were mixed at a ratio of 1: 2, and then centrifuged to remove the supernatant to prepare a cell pellet (precipitate). To this was added ice-cold fusion buffer (1 × concentration solution) (added 1 mL per 10 ⁸ spleen cells) to suspend the cell group. Ice-cooled HVJ-E suspension was added (25 μL was added per 1 mL of cell suspension) and allowed to stand on ice for 5 minutes. Thereafter, centrifugation (4 ° C., 1000 rpm × 5 minutes) was performed, and the mixture was incubated at 37 ° C. for 15 minutes. Subsequently, 10 mL of FBS ⁺ medium (37 ° C.) was added to suspend the cell group (spleen cells 10 ⁸ cells / 50 mL). 2 mL each of this was inoculated into 3 laboratory petri dishes containing 10 mL of FBS ⁺ medium and static culture was performed in a CO ₂ incubator. One day after the start of the culture, 4 mL of the medium is taken from each petri dish, 6 mL of 2 × HAT medium and 0.3 to 0.4 mL of conditioned medium are added to each dish (final concentration 0.8 × HAT medium), and a CO ₂ incubator. The HAT selective culture was performed by static culture in the cell.

（ハイブリドーマ細胞のスクリーニング）
ＨＡＴ選択培養開始から４日（融合処理から５日）〜１０日後、各シャーレの各セル内で明瞭な増殖が確認されたハイブリドーマ細胞のコロニーのうち、シングルコロニーを形成しているコロニーをピックアップし、選択増殖培地［１×ＨＴ培地と１０％の細胞増殖因子（conditioned medium from J774A.1 cells、Sigma-aldrich社）を含む］の入った９６穴ウェルプレートに移し、ハイブリドーマの培養を行った。その後、明瞭なハイブリドーマの増殖が確認されたウェルについて、その培養上清を採取し、以下のＥＬＩＳＡ法により抗体の産生を確認した。 (Screening of hybridoma cells)
Four to ten days after the start of HAT selective culture (5 days after the fusion treatment), among colonies of hybridoma cells in which distinct growth was confirmed in each cell of each petri dish, a colony forming a single colony was picked up. Then, the cells were transferred to a 96-well plate containing a selective growth medium [containing 1 × HT medium and 10% cell growth factor (conditioned medium from J774A.1 cells, Sigma-aldrich)], and hybridomas were cultured. Thereafter, the culture supernatant was collected from wells in which the growth of clear hybridomas was confirmed, and antibody production was confirmed by the following ELISA method.

（ＥＬＩＳＡ法）
以下の各工程において、特に記載がない場合は室温にて処理、反応を行った。
（１）ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生に５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）を加え、氷中でホモジナイズを行い、５０００ｒｐｍで２０分間遠心することにより得たベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生粗抽出液をタンパク質濃度２０μｇ／ｍＬになるように調製した。
（２）（１）で得られたベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生の粗抽出液５０μＬを、９６穴イワキＥＬＩＳＡプレートの各ウェルに加え、４℃で一晩インキュベートして抗原をウェル底面に吸着させた。
（３）（２）で吸着処理した各ウェルをＴＢＳ（０．５ＭＮａＣｌ及び２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ；ｐＨ７．５）２００μＬで洗浄した。
（４）各ウェルを１％ＢＳＡを含むＴＢＳ１００μlで１時間ブロッキングした。
（５）各ウェルをＴＴＢＳ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＴＢＳ）２００μｌで３回洗浄した。
（６）ハイブリドーマを培養することにより得られた培養上清（一次抗体）５０μＬを各ウェルに加え、２時間反応させた。
（７）各ウェルをＴＴＢＳ２００μｌで４回洗浄した。
（８）各ウェルに２次抗体（アルカリフォスファターゼ標識抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）ヤギ抗体、BETHYL社）溶液（ＴＢＳで５００倍に希釈した溶液）５０μｌを加えて１時間反応させた。
（９）各ウェルをＴＴＢＳ２００μｌで５回洗浄した。
（１０）各ウェルに基質（アルカリフォスファターゼ基質キット、BIO-RAD 社）溶液１００μｌを加え、１時間振盪することにより発色させた。
（11）マイクロプレートリーダー（BIO-RAD Model550）を用いて、各ウェルの溶液の吸光度（４０５ｎｍ）を測定した。 (ELISA method)
In the following steps, treatment and reaction were performed at room temperature unless otherwise specified.
(1) Benikudaumihydraactinula larvae crude extraction obtained by adding 50 mM Tris-HCl (pH 7.5) to Benicidaumihydraactinula larvae, homogenizing in ice, and centrifuging at 5000 rpm for 20 minutes The solution was prepared to a protein concentration of 20 μg / mL.
(2) Add 50 µL of the crude extract of Benicida hydra actinula larvae obtained in (1) to each well of a 96-well Iwaki ELISA plate and incubate overnight at 4 ° C to adsorb the antigen to the bottom of the well. It was.
(3) Each well adsorbed in (2) was washed with 200 μL of TBS (0.5 M NaCl and 20 mM Tris-HCl; pH 7.5).
(4) Each well was blocked with 100 μl of TBS containing 1% BSA for 1 hour.
(5) Each well was washed 3 times with 200 μl of TTBS (TBS containing 0.05% Tween 20).
(6) 50 μL of culture supernatant (primary antibody) obtained by culturing the hybridoma was added to each well and allowed to react for 2 hours.
(7) Each well was washed 4 times with 200 μl of TTBS.
(8) A secondary antibody (alkaline phosphatase-labeled anti-mouse IgG (Fc) goat antibody, BETHYL) solution (50 μl) was added to each well and reacted for 1 hour.
(9) Each well was washed 5 times with 200 μl of TTBS.
(10) 100 μl of substrate (alkaline phosphatase substrate kit, BIO-RAD) solution was added to each well, and color was developed by shaking for 1 hour.
(11) The absorbance (405 nm) of the solution in each well was measured using a microplate reader (BIO-RAD Model 550).

上記ＥＬＩＳＡ法により高い抗体産生能が確認されたハイブリドーマについて、２４穴ウェルで２〜５日間培養し、ＥＬＩＳＡ法によりベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生粗抽出液に対して結合性の高い抗体を産生するハイブリドーマ（Ｔ−Ｈ３Ｈ７（１）、Ｔ−Ｈ３Ａ１（６）、Ｔ−Ｈ３Ｇ１０（４）、ＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）、Ｔ−Ｐ２Ｆ１２（７）、ＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）、ＴＣＡ−Ｈ２Ｅ１０（１）、ＴＣＡ−Ｈ３Ｈ１０（１）、ＴＣＡ−Ｈ３Ｂ５（５）、ＴＣＡ−Ｈ３Ｂ１０（３））を得た。 The hybridoma whose high antibody-producing ability has been confirmed by the above-mentioned ELISA method is cultured in a 24-well well for 2 to 5 days, and an antibody having a high binding property to the crude extract of Benicida hydra actinula larvae is produced by the ELISA method. Hybridoma (T-H3H7 (1), T-H3A1 (6), T-H3G10 (4), TC-H2D7 (3), T-P2F12 (7), TCA-H1A11 (3), TCA-H2E10 (1) , TCA-H3H10 (1), TCA-H3B5 (5), TCA-H3B10 (3)) were obtained.

[実施例２]
本実施例では、実施例１で得られた１０種のハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体について、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、ミズクラゲプラヌラ幼生、アカフジツボキプリス幼生、コペポーダ、ムラサキイガイペディベリジャー幼生に対する反応性を調べた。 [Example 2]
In this example, for the monoclonal antibodies produced by the 10 hybridomas obtained in Example 1, Benicida Hydra actinula larvae, Tamami hydraplanula larvae, Brown jellyfish planula larvae, Akafuji Tsubaki pris larvae, Kopepoda, Murasaki mussel pediberger The reactivity to larvae was examined.

＝＝アカフジツボキプリス幼生の飼育方法＝＝
循環式水槽を用い、アルテミアを給餌してアカフジツボ成体の維持・飼育を行い、定期的に幼生を孵出させた。幼生には培養した浮遊珪藻 Chaetoceros 等を給餌し、キプリス幼生を生産した。 == Raising method of red pheasant cricket larvae ==
Using a circulating water tank, Artemia was fed to maintain and breed adult red barnacles, and the larvae were spawned regularly. The larvae were fed with cultured floating diatom Chaetoceros and produced cypris larvae.

＝＝ムラサキイガイペディベリジャー幼生の飼育方法＝＝
兵庫県姫路市周辺沿岸からムラサキイガイ成体を採取し、やや低温に制御した水槽を用いて維持・飼育し、定期的に放卵・放精させた。媒精後、発生が進行した初期幼生に、培養したハプト藻 Isochrysis 等を給餌することによって人工飼育し、ペディベリジャー幼生を生産した。 == How to raise mussel pediberger larvae ==
Adult mussels were collected from the coastal area around Himeji City, Hyogo Prefecture, maintained and bred using a slightly cool water tank, and regularly ovulated and fertilized. By feeding the cultured haptophyte Isochrysis and the like to the early larvae that developed after the maturation, they were artificially raised to produce pediberger larvae.

＝＝コペポーダの採取方法＝
兵庫県姫路市周辺沿岸から、プランクトンネットを用いてプランクトンを採取した。採取したプランクトンをシャーレ内の海水中に移し、ピペットでコペポーダ類のみ選別採取した。 == How to collect a copyoda =
Plankton was collected from the coast around Himeji City, Hyogo Prefecture using a plankton net. The collected plankton was moved into the sea water in the petri dish, and only the copypods were selected and collected with a pipette.

＝＝タマウミヒドラプラヌラ幼生の飼育方法＝＝
兵庫県東播磨沿岸からタマウミヒドラポリプ群体を採取した後、低温水槽内で維持・飼育し、成熟させた。受精後、胚発生中の雌ポリプ群体を深型シャーレ内の海水中に移し、照明下で静置した。その後、生殖体外へ遊離してきたプラヌラ幼生を口太ピペットで採取し、凍結保存した。 == How to breed Tamami Hydra Planula larva ==
After collecting Tamami Hydra polyp colonies from the Higashi-Harima coast of Hyogo Prefecture, they were maintained and reared in a low-temperature water tank and matured. After fertilization, embryonic female polyps were transferred into seawater in a deep petri dish and allowed to stand under illumination. Thereafter, the planula larvae released to the outside of the reproductive body were collected with a mouth pipette and stored frozen.

＝＝ミズクラゲプラヌラ幼生の飼育方法＝＝
兵庫県姫路市近辺沿岸から成熟雌クラゲ体を採取した。海水を満たした小型プラスチック容器内でクラゲ体を裏返し、保育嚢の縁辺に存在しているプラヌラ幼生を口太ピペットで採取し、凍結保存した。 == How to breed larvae of the moon jellyfish
Mature female jellyfish bodies were collected from the coast near Himeji City, Hyogo Prefecture. The jellyfish body was turned inside out in a small plastic container filled with seawater, and the planula larvae present on the edge of the nursery sac were collected with a mouth pipette and stored frozen.

実施例１のＥＬＩＳＡ法の記載に従い、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、ミズクラゲプラヌラ幼生、アカフジツボキプリス幼生、コペポーダ、ムラサキイガイペディベリジャー幼生の粗抽出液（タンパク質の濃度：２０μｇ/ｍＬ）を調製し、各ハイブリドーマが産生する抗体の、これらの粗抽出液に対する反応性を確認した。なお、小数第一位以上の数値が得られた場合に、反応性があるとした。 According to the description of the ELISA method of Example 1, a crude extract of Benicida hydra actinula larvae, Tamami hydraplanula larvae, moon jellyfish planula larvae, red pheasant larvae larvae, copepoda, mussels pea divergence larvae (protein concentration: 20 μg / mL) And the reactivity of the antibody produced by each hybridoma to these crude extracts was confirmed. In addition, when the numerical value more than the decimal place was obtained, it was considered that there was reactivity.

また、各ハイブリドーマが産生する抗体のアイソタイプを、マウスモノクローナル抗体アイソタイピングキット（Roche Applied Science 社）を用いて調べた。 In addition, the isotype of the antibody produced by each hybridoma was examined using a mouse monoclonal antibody isotyping kit (Roche Applied Science).

表１に示すように、Ｔ−Ｈ３Ｈ７（１）、Ｔ−Ｈ３Ａ１（６）、Ｔ−Ｈ３Ｇ１０（４）、及びＴ−Ｐ２Ｆ１２（７）のハイブリドーマの培養上清は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生の粗抽出液に対して反応性を示し、タマウミヒドラプラヌラ幼生、ミズクラゲプラヌラ幼生、アカフジツボキプリス幼生、コペポーダ、ムラサキイガイペディベリジャー幼生の粗抽出液には反応性を示さなかった。また、ＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）のハイブリドーマの培養上清は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生及びタマウミヒドラプラヌラ幼生の粗抽出液に対して反応性を示し、ミズクラゲプラヌラ幼生、アカフジツボキプリス幼生、コペポーダ、ムラサキイガイペディベリジャー幼生の粗抽出液には反応性を示さなかった。ＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）のハイブリドーマの培養上清は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生の粗抽出液に対して反応を示し、アカフジツボキプリス幼生、コペポーダ、及びムラサキイガイペディベリジャー幼生の粗抽出液に対して反応を示さなかった。ＴＣＡ−Ｈ２Ｅ１０（１）、ＴＣＡ−Ｈ３Ｈ１０（１）、ＴＣＡ−Ｈ３Ｂ５（５）、及びＴＣＡ−Ｈ３Ｂ１０（３）のハイブリドーマの培養上清は、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生の粗抽出液、ムラサキイガイペディベリジャー幼生の粗抽出液に対して反応を示し、アカフジツボキプリス幼生、及びコペポーダの粗抽出液には反応性を示さなかった。 As shown in Table 1, the culture supernatants of hybridomas of T-H3H7 (1), T-H3A1 (6), T-H3G10 (4), and T-P2F12 (7) It was reactive to the crude extract of the larvae, but was not reactive to the crude extracts of Tamamihydraplanula larvae, Moon jellyfish planula larvae, Akafujitsubo Cyprus larvae, Copepoda, and Mussel mussel pediberger larvae. Moreover, the culture supernatant of the hybridoma of TC-H2D7 (3) showed reactivity to the crude extract of Benicida mihydra actinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae, and the jellyfish pranula larvae, red clover crisp larvae, The crude extract of mussel pediberger larvae showed no reactivity. The culture supernatant of the hybridoma of TCA-H1A11 (3) showed a response to the crude extract of Benicumida hydraactinula larvae, Tamaumihydraplanula larvae, and jellyfish prawn larvae. There was no response to the crude extract of mussel pediberger larvae. The culture supernatants of hybridomas of TCA-H2E10 (1), TCA-H3H10 (1), TCA-H3B5 (5), and TCA-H3B10 (3) were benikuda hydra actinula larvae, tamaumihydraplanula larvae, In addition, there was a reaction with the crude extract of the larvae of the jellyfish and the larvae of the jellyfish and the crude extract of the mussel pepedier larvae, but there was no reactivity with the crude extract of the red scallop larvae and the copepod.

つまり、実施例１で得られた、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生に反応するモノクローナル抗体を産生する１０種のハイブリドーマのうち、ヒドロ虫綱に属するベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生の両方に反応し、ミズクラゲプラヌラ幼生、アカフジツボキプリス幼生、コペポーダ、ムラサキイガイペディベリジャー幼生には反応しないモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマはＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）のみであった。 That is, among the 10 hybridomas that produce monoclonal antibodies that react with the larvae of Benicaria hydraactinula obtained in Example 1, the larvae of Benicida hydraactinula and the antrum hydraplanula larvae belonging to the class of hydrozoa TC-H2D7 (3) was the only hybridoma that produced monoclonal antibodies that reacted with both of these, but did not react with the jellyfish larvae larvae, red pheasant larvae larvae, coppoda, and mussel pepedier larvae.

また、実施例１で得られた１０種のハイブリドーマのうち、刺胞動物門に属する動物の幼生である、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に特異的に反応するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマはＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）のみであった。

In addition, among the 10 hybridomas obtained in Example 1, specific to the larvae of the animals belonging to the cnidaria, Benicida hydra actinula larvae, Tamami hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae The only hybridoma producing a reactive monoclonal antibody was TCA-H1A11 (3).

以上のように、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生に反応性のあるモノクローナル抗体は、通常ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生のみに反応する（１０種中４種）か、あるいは、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生以外にも、タマウミヒドラプラヌラ幼生、ミズクラゲプラヌラ幼生、ムラサキイガイペディベリジャー幼生にも反応する（１０種中４種）かのいずれかである。つまり、刺胞動物門に属する動物の幼生の間で、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生というヒドロ虫綱の動物幼生に特異的に反応するモノクローナル抗体を産生するＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）のハイブリドーマが得られたこと、及び、刺胞動物門に属する動物の幼生である、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に特異的に反応するモノクローナル抗体を産生するＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）のハイブリドーマが得られたことは、当業者であっても容易に予測できるものではない。そして、ＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）のハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体によって、他種の動物を含む試料の中で、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生を特定することができ、また、ＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）のハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体によって、他種の動物を含む試料の中で、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生を特定することができるという有利な効果を奏する。 As described above, the monoclonal antibody reactive with venicida hydra actinula larvae usually reacts only with venicida hydra actinula larvae (4 species out of 10), or venicida hydra actinula larvae. In addition to the larvae, it reacts with any one of the larvae, such as Tamami Hydraplanura larvae, Moon jellyfish Planula larvae, and Blue mussel pediberger larvae (4 of 10 species). In other words, among the larvae of the animals belonging to the cnidaria, TC-H2D7, which produces monoclonal antibodies that specifically react with hydrolarvae larvae such as Benicida hydraactinula larvae and Tamaumihydraplanula larvae ( 3) A monoclonal antibody that specifically reacts with the hybridomas obtained and the larvae of the animals belonging to the genus Cnidaria, which are the larvae of Benicumida hydraactinula larvae, Tamaumihydraplanula larvae, and the moon jellyfish larvae larvae It has not been easily predicted by those skilled in the art that a TCA-H1A11 (3) hybridoma that produces NO is obtained. And, by the monoclonal antibody produced by the hybridoma of TC-H2D7 (3), it is possible to identify Benicida hydraactinula larvae and Tamaumihydraplanula larvae in samples containing other species of animals, Monoclonal antibodies produced by TCA-H1A11 (3) hybridomas can identify Benicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae among samples containing other species of animals. There is an advantageous effect.

加えて、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生、タマウミヒドラプラヌラ幼生、及びミズクラゲプラヌラ幼生に特異的に反応する、ＴＣＡ−Ｈ１Ａ１１（３）のハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体に対して反応性を示し、ベニクダウミヒドラアクチヌラ幼生とタマウミヒドラプラヌラ幼生に反応するがミズクラゲプラヌラ幼生には反応しない、ＴＣ−Ｈ２Ｄ７（３）のハイブリドーマが産生するモノクローナル抗体に対して反応性を示さない生物を特定することにより、ミズクラゲプラヌラ幼生を特異的に検出することが可能である。 In addition, it exhibits reactivity to a monoclonal antibody produced by a hybridoma of TCA-H1A11 (3), which specifically reacts with Benicida hydra actinula larvae, Tamami hydraplanula larvae, and moon jellyfish planula larvae. To identify an organism that reacts with larvae of Kudaumihydra actinula and Tamaumihydraplanula larvae but does not react with jellyfish prawn larvae and does not react with the monoclonal antibody produced by the hybridoma of TC-H2D7 (3) Thus, it is possible to specifically detect the moon jellyfish planula larvae.

Claims

A method for identifying moon jellyfish planula larvae,
A monoclonal antibody or fragment thereof that specifically reacts with the larvae of Benicumida hydraactinula and Tamaumihydraplanula larvae, but does not react with the jellyfish planula larvae; And reacting with a monoclonal antibody or fragment thereof that specifically reacts with moon jellyfish planula larvae ,
The method wherein the fragment comprises an antigen binding site .

A method for identifying the moon jellyfish planula larvae according to claim 1,
The monoclonal antibody that reacts with the larvae of Benicumumi hydraactinula and the larvae of Tamamihydraplanara but does not react with the larvae of the jellyfish prawn is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904 And how to.

A method for identifying the moon jellyfish planula larvae according to claim 2,
The method according to claim 1, wherein the monoclonal antibody that reacts with Benicida hydra actinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by a hybridoma deposited with FERM P-21919. .

A reagent for detection of moon jellyfish planula larvae,
Monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with venicida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with jellyfish pranula larvae; containing a monoclonal antibody or fragment thereof reactive to,
The detection reagent , wherein the fragment contains an antigen-binding site .

A reagent for detecting moon jellyfish planula larvae according to claim 4,
The monoclonal antibody that reacts with the venicida hydraactinula larvae and the Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with the moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904,
Detection characterized in that the monoclonal antibody that reacts with the venicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and the moon jellyfish planula larvae is a monoclonal antibody produced by a hybridoma deposited with FERM P-21919 Reagent.

A detector of moon jellyfish planula larvae,
Monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with venicida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with jellyfish pranula larvae; monoclonal antibody or fragment thereof reactive to have been immobilized,
The detector, wherein the fragment contains an antigen-binding site .

A detector of moon jellyfish planula larvae according to claim 6,
The monoclonal antibody that reacts with the venicida hydraactinula larvae and the Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with the moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904,
Detection characterized in that the monoclonal antibody that reacts with the venicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and the moon jellyfish planula larvae is a monoclonal antibody produced by a hybridoma deposited with FERM P-21919 vessel.

A detection kit for moon jellyfish planula larvae,
Monoclonal antibody or fragment thereof that reacts with venicida hydraactinula larvae and Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with jellyfish pranula larvae; containing a monoclonal antibody or fragment thereof reactive to,
The detection kit , wherein the fragment contains an antigen-binding site .

A detection kit for moon jellyfish planula larvae according to claim 8,
The monoclonal antibody that reacts with the venicida hydraactinula larvae and the Tamaumi hydraplanula larvae but does not react with the moon jellyfish planan larvae is a monoclonal antibody produced by the hybridoma deposited with FERM P-21904,
Detection characterized in that the monoclonal antibody that reacts with the venicida hydraactinula larvae, Tamaumi hydraplanula larvae, and the moon jellyfish planula larvae is a monoclonal antibody produced by a hybridoma deposited with FERM P-21919 kit.