JP5246685B2 - アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体および当該誘導体を含む香辛料 - Google Patents

Description

本発明は、新規なアロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体、当該誘導体を包含する香辛料および当該誘導体の製造方法に関する。

（＋）−アロマデンドレン（１）、（−）−アロアロマデンドレン（２）および（＋）−レデン（３）は、アロマデンドラン骨格を有するセスキテルペン炭化水素である。アロマデンドランのBacillus megaterium(バシルス メガテリウム)、Mycobacterium smegmatis(マイコバクテリウム スメグマティス)およびMucor plumbeus(ムコール プランベウス)による微生物変換（生物変換）が、以前に報告されている（Abraham WR, Kieslich K, Stumpf B and Ernst L, Phytochemistry 31:3749-3755 (1992)、および、Guillermo R, Hanson JR and Truneh A, J Chem Research, （Ｓ） 1:28-29 (1997))。

微生物変換とは、目的の化合物を得るために、生物触媒として生体中の酵素類を使用した生物学的な合成プロセスであり、穏和な条件下で位置特異的に化合物を産生することを特徴とする。ゆえに微生物変換は、生物活性化合物の選択的製造のための有利な方法である。

アガーウッド（和名：沈香）は、古くから日本の伝統的な香料として、またアジア地域における漢方薬として広く用いられてきた。沈香由来のジンコウ−エレモールおよびアガロスピロールは、中枢神経系に対して鎮静作用や鎮痛作用を有することが知られている（H.Okukawa, K.Kawanishi and A.Kato, (2000), Aroma research, 1, 34-38、および、H.Okukawa, R.Ueda, K.Matsumoto, K.Kawanishi and A.Kato, (2000), Phytomedicine, 7, 417-422）。

中でもヴェトナムやカンボジアの山地でのみ産出する伽楠香（和名：伽羅）は、最高級の沈香とされており、神秘的かつ東洋的な香りが高く評価されている（E.Yamagata and K.Yoneda, (1987), Shoyakugaku Zassi, 41, 142-146、M.Ishihara, T.Tsuneya and K.Uneyama, (1993), Phytochemistry, 33, 1147-1155）。

一般に伽羅は、多種の酸化されたセスキテルペン類（T.Nagashima, I.Kawasaki,T.Yoshida, T.Nakanishi, K.Yoneda and I.Miura, (1983), 9th International Congress of Essential Oil, Singapore, 3, 12-16）やクロモン誘導体（K.Hashimoto, S.Nakahara, T.Inoue, Y.Sumida, M.Takahashi and Y.Masada, (1985), Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 33, 5088-5091、T.Nakanishi, A.Inada, M.Nishi, E.Yamagata and K.Yoneda, (1986), Journal of Natural Products, 49, 1106-1108、E.Yamagata and K.Yoneda, (1986), Shoyakugaku Zassi, 40, 271-274）からなる多量の樹脂を含有している。

沈香は、Aquilaria agallocha Roxb.（ジンコウ）、A. sinensis (Lour.) Gilg.（土沈香）、A. malaccensis Lam.（マラッカ沈香）のような多種類のAquilaria（アキラリア）属（ジンチョウゲ科）の古木が菌類に感染して精油成分が変質して、生じると考えられている（K.Yoneda, E.Yamagata and M.Mizuno, (1986), Shoyakugaku Zassi, 40, 259-265、R.Nakashima, S.Nishi, T.Ishida and J.Yamamoto, (1990), Yukagaku, 39, 191-195）。例えば、沈香が生ずる要因の一つとして、アスペルギルス属に属する真菌の一種であるAspergillus wentii（アスペルギルス ウェンティー）菌による精油成分の変性が考えられている。

以前に本発明者らは、植物病原性菌であるGlomerella cingulata（グロメレーラ シングラータ）菌による（＋）−アロマデンドレンおよび（−）−アロアロマデンドレンの生物変換で、それぞれ（−）−１０α，１３，１４−トリヒドロキシアロマデンドランおよび（−）−１０β，１３，１４−トリヒドロキシアロアロマデンドランを生成することを見出した（Miyazawa M, Uemura T and Kameoka H, Phytochemistry 40:793-796 (1995)）。しかしながら、アスペルギルス属に属する微生物による（＋）−アロマデンドレン、（−）−アロアロマデンドレンおよび（＋）−レデンの生物変換は知られていない。

本発明は、アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体および当該誘導体を含む香辛料を提供することを目的とする。また、本発明は、アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体の位置特異的かつ立体選択的な製造方法を提供することを目的とする。

本発明者らは、新規な生理活性物質および香辛料の創製を目的として、種々の天然物化合物を様々な微生物により微生物変換し、その代謝産物を探索してきた。そして、沈香を産生すると考えられている真菌類によるセスキテルペノイド類の微生物変換について検討したところ、アロマデンドラン骨格を有する化合物を基質としたアスペルギルス属に属する微生物の培養物中に、基質とは異なる味を有する物質が産生されていることを見出した。この特有の味を有する物質に関して詳細に検討した結果、アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物であることを確認すると共に、その単離、精製に成功した。

したがって、第１の態様において本発明は、式（ＩＩ）：

［式中、（ａ’）Ｒ_１’はβ−ヒドロキシ基であり、Ｒ_２’はα−ヒドロキシメチル基であり、波線で結ばれたＲ_３’はシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をトランス配位とする水素原子を表し、点線の箇所は１重結合である；（ｂ’）Ｒ_１’とＲ_２’は両者合してメチレン基を表し、波線で結ばれたＲ_３’はシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をトランス配位とするヒドロキシ基を表し、点線の箇所は１重結合である；（ｃ’）Ｒ_１’はα−ヒドロキシ基であり、Ｒ_２’はβ−メチル基であり、波線で結ばれたＲ_３’は存在せず、点線の箇所は２重結合である；または（ｄ’）Ｒ_１’はβ−ヒドロキシ基であり、Ｒ_２’はα−メチル基であり、波線で結ばれたＲ_３’は存在せず、点線の箇所は２重結合である。］
で表されるセスキテルペン炭化水素誘導体を製造するにあたり、
基質としての式（Ｉ）：

［式中、（ａ）Ｒ_１とＲ_２は両者合してメチレン基を表し、波線で結ばれたＨはシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をトランス配位とする水素原子を表し、点線の箇所は１重結合である；（ｂ）Ｒ_１とＲ_２は両者合してメチレン基を表し、波線で結ばれたＨはシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をシス配位とする水素原子を表し、点線の箇所は１重結合である；または（ｃ）Ｒ_１はメチル基を表し、Ｒ_２および波線で結ばれたＨは存在せず、点線の箇所は２重結合である。］
で表される化合物を、上記誘導体を産生する能力を有するアスペルギルス属に属する微生物または当該微生物の生体内酵素と接触させることを特徴とする方法を提供する。

また、別の態様において本発明は、式：

で表されるエポキシカジネン誘導体を製造するにあたり、
基質としての式（Ｉ）：

で表される化合物を、上記誘導体を産生する能力を有するアスペルギルス属に属する微生物または当該微生物の生体内酵素と接触させることを特徴とする方法を提供する。

他の態様において本発明は、式：

で表されるアロマデンドラン骨格を有する化合物の誘導体の製造方法であって、式：

で表される当該化合物を基質として、当該誘導体を生産する能力を有するアスペルギルス属に属する微生物と接触、処理することを特徴とする方法を提供する。

また、他の態様において本発明は、式：

または、式：

で表されるアロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体の製造方法であって、式：

で表される当該化合物を基質として、当該誘導体を生産する能力を有するアスペルギルス属に属する微生物と接触、処理することを特徴とする方法を提供する。

さらに、他の態様において本発明は、式：

、式：

または、式：

で表されるアロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体の製造方法であって、式：

で表される当該化合物を基質として、当該誘導体を生産する能力を有するアスペルギルス属に属する微生物と接触、処理することを特徴とする方法を提供する。

別の態様において本発明は、式：

〔一般名：
化合物４：（−）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３，１４−トリヒドロキシアロマデンドラン〕
により表される（＋）−アロマデンドレン誘導体を提供する。

また、別の態様において本発明は、式：

〔一般名：
化合物５：（＋）−（１Ｓ，１１Ｓ）−１，１３−ジヒドロキシアロマデンドレン〕
または、式：

〔一般名：
化合物６：（−）−５，１１−エポキシカジン−１（１０）−エン−１４−オール〕
により表される（−）−エポキシカジネン誘導体を提供する。

さらに、別の態様において本発明は、式：

〔一般名：
化合物６：（−）−５，１１−エポキシカジン−１（１０）−エン−１４−オール〕、
式：

〔一般名：
化合物７：（＋）−（１０Ｒ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エン〕
または、式：

〔一般名：
化合物８：（＋）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エン〕
により表される（＋）−レデン誘導体を提供する。

さらなる態様において本発明は、アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体、好ましくは、化合物４〜８のいずれかの誘導体を含有する、新規香辛料を提供する。

また別の態様において本発明は、アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体、好ましくは、化合物４〜８のいずれかの誘導体を含有する、精神安定剤を提供する。

おどろくべきことに、本発明で得られるアロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体は、基質として用いた当該化合物（化合物１、２および３）とは異なる味を有する。したがって、本発明のアロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体は新規香辛料として有用である。

用語の定義
本明細書中において使用される用語は、指示がない限り、当業者によって通常理解される通りの意味で用いられている。

アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体の製造方法
本発明の目的物質であるアロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体を製造するには、基質としてのアロマデンドラン骨格を有する化合物(以下、基質１〜３と記す)を真菌の一種であるアスペルギルス属に属する当該誘導体産生菌またはその生体内酵素で処理し、産生された当該誘導体を採取すればよい。ここで言う「処理」とは、基質１〜３と菌体との接触、基質１〜３を菌体の培養培地に含有させて行う培養、発酵等の常套の微生物変換手段を含む意味で用いられており、「採取」とは、常套の分離、抽出および精製手段を含む工程を意味している。

アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体の製造に使用されるアスペルギルス属微生物の一例としては、アスペルギルス ウェンティー（Aspergillus wentii）があり、これは独立行政法人製品評価技術基盤機構にＮＢＲＣ８８６４として寄託されている。その他のアスペルギルス属微生物の例としては、アスペルギルス ルーバー、アスペルギルス ニガーなどを挙げることができる。

生体内酵素とは、菌が当該反応工程に利用している酵素として同定されるあらゆる酵素を意味し、適当な条件下、例えば菌体内の条件下におくことにより、菌そのものを利用している場合と同様に反応を進行させることが可能である。

アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体産生菌の培養に用いられる培地としては、使用する菌の育成あるいは所望の微生物変換に適した常套の培地を適宜選択することができ、当該菌が利用し得る栄養源を含むものであれば液状でも固状でもよいが、大量の当該誘導体を得るためには液体培地を用いるのが好ましい。

この培地には、当該菌を培養するために必要な物質、例えば当該菌が同化し得る炭素源、消化し得る窒素源および無機物等が適宜配合される。炭素源としては、ブドウ糖、ショ糖、麦芽糖、乳糖、デンプンなどが、窒素源としては、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、ポリペプトン、マルトエキストラクト、硝酸ナトリウムなどが用いられる。また培地にはナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどの塩類が含まれ得る。

培地のｐＨおよび温度条件は使用する菌の育成に好適な範囲であればどのような条件でも使用することができ、このような条件は公知であるか、当業者であれば常套の手段により適宜設定することができる。例えば菌がアスペルギルス ウェンティーである場合、初発ｐＨは約６〜約８、好ましくは７．２の条件が、また、培養温度は約１５℃〜約３５℃、好ましくは２５℃〜３０℃の範囲が適当である。

アロマデンドラン骨格またはエポキシカジネン骨格を有する化合物の誘導体生産菌は静止した物体に付着して増殖する性質があるので静置培養が望ましく、また、当該菌が付着するような物体、例えばアルミ箔を液体培地中に入れておくと増殖が促進される。培養期間は一定しないが、生産されるべき当該誘導体の濃度が最大となるまで培養するのが望ましい。これに要する日数は、液体培地を用いる静置培養の場合、通常１０日間前後が適当である。

得られた培養液は遠心分離または濾過などの手段により、菌体と培養液とに分離する。この両者は共に基質とは異なる味を示すが、当該誘導体は培養液により多く含まれている。集められた培養液から当該誘導体を抽出するには、塩化ナトリウム等の飽和溶液とした後、水と混和する有機溶媒、例えばメタノール、エタノールなどの低級アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどを使用すればよい。また、水と混和しない有機溶媒、例えばクロロホルム、塩化メチレン、酢酸エチルなどを使用してもよい。

このようにして得られた抽出液から減圧下に溶媒を留去すれば、当該誘導体を含む粗抽出物を得ることができる。

この粗抽出物から当該誘導体を単離、精製するには、通常の脂溶性低分子物質の単離、精製手段を適用することができる。すなわち、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア製、登録商標）などを用いるゲル濾過型クロマトグラフィー、シリカゲルなどの吸着剤を用いる吸着クロマトグラフィー、シリカゲルなどの順相系担体を用いる高速液体クロマトグラフィーなどを単独または組み合わせて実施すればよい。

セファデックスＬＨ−２０を用いる場合は、一般に極性有機溶媒と非極性有機溶媒との組み合わせ、例えばメタノールとクロロホルムまたは塩化メチレンなどの混合溶媒により溶出される。

シリカゲルを用いる吸着クロマトグラフィーを使用する場合は、ヘキサンとクロロホルム、酢酸エチルまたは塩化メチレンなどの混合溶媒を溶出溶媒とするのが適している。

シリカゲルを担体とする高速液体クロマトグラフィーの場合には、塩化メチレンとベンゼンまたはメタノールの混合溶媒あるいは塩化メチレン単独を溶出溶媒として用いる。このような精製手段を適用することにより、前記に示される当該誘導体が単離される。

官能評価
官能評価は官能検査、官能試験とも呼ばれ、ヒトの感覚（視覚、聴覚、味覚、臭覚、触覚）を使って対象物を評価することである。特に香料の分野においては匂いや味・香りを評価する事が最も重要な課題である。官能評価はその目的により分析型官能評価と嗜好型官能評価に大別される。分析型官能評価は品質の差の検出、特性の分析など品質評価に、嗜好型官能評価は香料や食品などの嗜好調査に用いられる。官能評価に関する規格としては、官能評価分析―用語（規格番号JIS Z 8144:2004）、官能評価分析―方法（規格番号JIS Z 9080:2004）があり、海外では国際規格ISO やASTM(American Society for Testing and Materials)がある（特許庁平成１８年度標準技術集「香料」）。

実験手法
（＋）−アロマデンドレン（１）、（−）−アロアロマデンドレン（２）および（＋）−レデン（３）は、Ｆｌｕｋａから購入した。簿層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲル６０ＧＦ２５４を塗布したＴＬＣプレート（メルク製：層厚０．２５ｍｍ）を用いた。シリカゲルカラムクロマトの展開溶媒は、ヘキサン−酢酸エチル（１：４）を用いた。

ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）は水素炎イオン化型検出器、キャピラリーカラム（ＤＢ−５、島津製作所製：長さ３０ｍ×内径０．２５ｍｍ）、および２０：１のスプリット注入ユニットを備えたＨＰ ５８９０Ａガスクロマトグラフ（ヒューレット・パッカード製）を使用した。移動相はヘリウムガスを０．６ｃｍ^３／分の流量で用いた。オーブン温度は４℃／分の昇温速度で９０℃〜２３０℃にプログラムされた。注入口温度は２７０℃、検出器温度は２８０℃に設定した。ピーク面積はＨＰ ３３９６ ＳｅｒｉｅｓII検出器（ヒューレット・パッカード製）により計算した。

ガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ／ＭＳ）は、スプリット注入ユニット、キャピラリーカラム（ＨＰ−５ＭＳ、ヒューレット・パッカード製：長さ３０ｍ×内径０．２５ｍｍ）を備えたガスクロマトグラフ（ＨＰ ５８９０Ａ、ヒューレット・パッカード製）を質量分析計（ＨＰ ５９７２Ａ、ヒューレット・パッカード製）に直結した。昇温プログラムはＧＣと同一である。移動相はヘリウムガスを０．６ｃｍ^３／分の流量で用いた。イオン源部温度は２８０℃、電子エネルギーは７０電子ボルト（ｅＶ）であった。イオン化法は電子衝撃法（ＥＩ）を使用した。

高分解能質量分析（ＨＲ−ＭＳ）は、二重収束タンデム質量分析計（ＪＥＯＬ−ＨＸ１００、日本電子製）を用い、データ処理には日本電子製ＪＡＭ−ＤＡ５０００を使用した。
赤外吸収スペクトル（ＩＲ）はパーキン・エルマー製１７６０Ｘ型分光器により得た。
核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）は、日本電子製ＦＸ−５００（５００ＭＨｚ（^１Ｈ）、１２５．６５ＭＨｚ（^１３Ｃ）を用い、ＴＭＳ（^１Ｈ）またはクロロホルム（^１３Ｃ）を内部標準とし、ＣＤＣｌ_３で測定した。

アスペルギルス ウェンティーの前培養
４℃で保存されたアスペルギルス ウェンティー（ＮＢＲＣ８８６４）の胞子を、滅菌した培養培地（ショ糖１．５％、グルコース０．５％、ポリペプトン０．０５％、硫酸マグネシウム（七水和物）０．０５％、塩化カリウム０．０５％、リン酸二カリウム０．１％、硫酸第一鉄（七水和物）０．００１％、および蒸留水、ｐＨ７．２）を入れた振盪フラスコ中に植え付け、２７℃で３日間培養した。

経時変化
前培養したアスペルギルス ウェンティーの菌糸体を培養培地（５０ｍＬのペトリ皿中１５ｍＬ）に移植し、２日間（菌糸体が培養培地の表面積の６０〜８０％を占めるまで）同じ条件下で培養した。アスペルギルス ウェンティーが成長した後、基質３００ｍｇを培地に加えて１０日間培養を続けた。また、アスペルギルス ウェンティーが存在しない培地を、空試験のために調製した。代謝産物は、空試験で検出されなかった。

培養液は、種々の間隔で数回酢酸エチルにより抽出した。粗抽出物をＴＬＣおよびＧＣで分析した。

結果
結果を、図１〜図３に示す。
（＋）−アロマデンドレン（１）は、10日間の培養で一部が代謝され、（−）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３，１４−トリヒドロキシアロマデンドラン(化合物４)を生じた(図１を参照のこと)。また、（−）−アロアロマデンドレンは、10日間の培養で一部が代謝され、（＋）−（１Ｓ，１１Ｓ）−１，１３−ジヒドロキシアロマデンドレン(化合物５)および（−）−５，１１−エポキシカジン−１（１０）−エン−１４−オール(化合物６)を生じた(図２を参照のこと)。（−）−アロアロマデンドレンは、10日間の培養で一部が代謝され、（−）−５，１１−エポキシカジン−１（１０）−エン−１４−オール(化合物６)、（＋）−（１０Ｒ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エン(化合物７)および（＋）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エン(化合物８)を生じた(図３を参照のこと)。いずれの場合においても、他の代謝産物は、ＴＬＣおよびＧＣで検出されなかった。

基質の微生物変換および代謝産物の単離
上記のように、基質３００ｍｇを培地に加えて１０日間培養を続けた後、濾過により培養液と菌糸体を分離した。培養液を塩化ナトリウムで飽和し、酢酸エチルで抽出した。さらに菌糸体を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を混ぜ、硫酸ナトリウムで脱水後、減圧下に溶媒を留去し、粗抽出物を得た。抽出物をヘキサン−酢酸エチル混液とシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーに供した。未反応の基質が回収され、各々、代謝産物が単離された。

化合物４
化合物４、（＋）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エンの構造は以下のＭＳ、ＩＲ、およびＮＭＲデータから決定した。
化合物４([α]_D ^26.0 −11.1°(c 0.42 CHCl₃))は、無色油状物として得られた。化合物４のＨＲ−ＦＡＢＭＳでは、ｍ／ｚ値253.1815、分子式C₁₅H₂₆O₃であった。
化合物４のＩＲスペクトルでは、水酸基(3398 cm^-1)の存在が示された。
^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲでは、２個の１級アルコール[δ_H 3.58 (1H, d, J=10.6 Hz), 3.38 (1H, d, J=10.6 Hz); δ_C 70.6 (CH₂), δ_H 3.36 (1H, d, J=10.8 Hz), 3.28 (1H, d, J=10.8 Hz); δ_C 73.5 (CH₂)]および３級アルコール[δ_C 74.2 (C)]の存在が示された。
化合物４は、二次元ＮＭＲ（HMBC：heteronuclear multiple bond correlation）スペクトルの帰属において、(i) H-13/C-6と C-7、(ii) H-14/C-1とC-9の間に相関シグナルが観察された。化合物４は、ＮＯＥｓスペクトルの解析より(i) H-12/H-5、(ii) H-13/H-6とH-7の間で相関が見られた。（Ｓ体）としての化合物４のC-10の配置を、H-14/H-1間のＮＯＥｓから推定した。これらのデータから、化合物４を、新規化合物（−）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３，１４−トリヒドロキシアロマデンドランとして決定した。

化合物４: 無色油状物、[α]_D ^26.0−11.1°(c 0.42 CHCl₃); ＨＲ−ＦＡＢＭＳ(NEG.) m/z 253.1815 ([M-H]⁺, 分子式 C₁₅H₂₅O₃ 253.1804); EIMS m/z 254 [M]⁺ （1）, 236 (19), 223 (67), 205 (44), 187 (58), 147 (81), 105 (74), 95 (base), 81 (95); IR ν_max (film) cm^-1 3398, 2928, 2869, 1455, 1017; ¹H-NMR (CDCl₃), δ 3.58 (1H, d, J=10.6 Hz, H-14), 3.38 (1H, d, J=10.6 Hz, H-14), 3.36 (1H, d, J=10.8 Hz, H-13), 3.28 (1H, d, J=10.8 Hz, H-13), 2.03 (1H, dddq, J=7.0, 7.0, 7.4, 9.6 Hz, H-4), 1.97 (1H, ddd, J=9.6, 9.8, 10.9 Hz, H-5), 1.94 (1H, ddd, J=6.5, 6.7, 13.0 Hz, H-9), 1.81 (1H, ddd, J=7.8, 9.8, 9.8 Hz, H-1), 1.77 (1H, m, H-3), 1.74 (1H, m, H-8), 1.62 (1H, m, H-2), 1.47 (1H, m, H-8), 1.45 (1H, m, H-9), 1.43 (1H, m, H-2), 1.19 (1H, m, H-3), 1.17 (3H, m, H-12), 0.93 (1H, d, J=7.0 Hz, H-15), 0.76 (1H, ddd, J=6.1, 9.8, 10.7 Hz, H-7), 0.65 (1H, dd, J=9.8, 10.9 Hz, H-6);¹³Ｃ−ＮＭＲを表１に示す。

化合物５
化合物５、（＋）−（１Ｓ，１１Ｓ）−１，１３−ジヒドロキシアロマデンドレンの構造は以下のＭＳ、ＩＲ、およびＮＭＲデータから決定した。
化合物５([α]_D ^25.4 ＋26.2°(c 0.42 CHCl₃))は、無色油状物として得られた。化合物８のＨＲ−ＥＩＭＳ（高分解能電子衝撃型四重極質量分析法）では、ｍ／ｚ値236.1763、分子式C₁₅H₂₄O₂であった。
化合物５のＩＲスペクトルでは、水酸基(3336 cm^-1)の存在が示された。
^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲでは、１級アルコールの存在が示された[δ_H 3.45 (1H, d, J=10.9 Hz), 3.34 (1H, d, J=10.9 Hz); δ_C 73.4 (CH₂)]および３級アルコール[δ_C 85.4 (C)]。
化合物５は、二次元ＮＭＲ（HMBC：heteronuclear multiple bond correlation）スペクトルの帰属において、(i) H-2/C-1、(ii) H-13/C-6とC-7、(iii) H-14/C-1とC-9の間に相関シグナルが観察された。化合物５は、ＮＯＥｓスペクトルの解析より(i) H-12/H-5、(ii) H-13/H-6とH-7の間で相関が見られた。シクロプロパン水素(H-6およびH-7)の¹H-化学シフトは、アロマデンドレンのそれらに類似しており(H-6; 0.60 ppm, H-7; 0.67 ppm)、アロアロマデンドレンのそれに類似していなかった(H-6; 0.24 ppm, H-7; 0.55 ppm)。スピン脱カップリングは、１α−ヒドロキシ基を有するアロマデンドレン骨格の存在を指示した。これらのデータから、化合物５を、新規化合物（＋）−（１Ｓ，１１Ｓ）−１，１３−ジヒドロキシアロマデンドレンとして決定した。

化合物５: 無色油状物、[α]_D ^25.4 ＋26.2°(c 0.42 CHCl₃); HR-EIMS m/z 236.1763 ([M]⁺, 分子式 C₁₅H₂₄O₂ 236.1776); EIMS m/z 236 [M]⁺ （2）, 218 (18), 203 (19), 189 (38), 161 (43), 121 (72), 107 (91), 91 (base), 79 (90), 55 (79); IR ν_max (film) cm^-1 3336, 2945, 1024; ¹H-NMR (CDCl₃), δ 4.83 (1H, d, J=1.5 Hz, H-14), 4.69 (1H, t, J=1.5 Hz, H-14), 3.45 (1H, d, J=10.9 Hz, H-13), 3.34 (1H, d, J=10.9 Hz, H-13), 2.52 (1H, brdd, J=6.3, 13.5 Hz, H-9), 2.28 (1H, brdd, J=13.0, 13.5 Hz, H-9), 2.24 (1H, m, H-4), 2.04 (1H, dddd, J=1.7, 5.9, 6.3, 14.2 Hz, H-8), 1.98 (1H, ddd, J=5.5, 5.5, 12.6 Hz, H-2), 1.95 (1H, m, H-3), 1.75 (1H, m, H-2), 1.64 (1H, d, J=11.2, 11.5 Hz, H-5), 1.59 (1H, m, H-3), 1.11 (3H, s, H-12), 1.07 (1H, m, H-8), 1.03 (3H, s, H-15), 0.94 (1H, m, H-7), 0.81 (1H, dd, J=10.0, 11.2 Hz, H-6);¹³Ｃ−ＮＭＲを表１に示す。

化合物６
化合物６、（−）−５，１１−エポキシカジン−１（１０）−エン−１４−オールの構造は以下のＭＳ、ＩＲ、およびＮＭＲデータから決定した。
化合物６([α]_D ^26.7 −9.2°(c 0.42 CHCl₃))は、無色油状物として得られた。化合物６のＨＲ−ＥＩＭＳでは、ｍ／ｚ値236.1802、分子式C₁₅H₂₄O₂であった。
化合物６のＩＲスペクトルでは、水酸基(3396 cm^-1)の存在が示された。
^１Ｈ−ＮＭＲおよび¹³C−ＮＭＲでは、1級アルコールの存在が示された[δ_H 4.13 (1H, d, J=11.4 Hz), δ_H 4.08 (1H, d, J=11.4 Hz); δ_C 61.8 (CH₂)]。
^１３Ｃ-ＮＭＲは、１個の四置換二重結合[δ_C 135.3 (C), δ_C 127.6 (C)]およびエーテル架橋[δ_C 82.7 (CH), δ_C 82.6 (C)]を示した。¹H-ＮＭＲは、３個のメチル基[１個の二重項 (δ_H 1.03 (3H, d, J=7.0 Hz))、２個の一重項(δ_H 1.28 (3H, s), δ_H 1.23 (3H, s))]に対するシグナルを示した。１個の二重項−二重項シグナルに加えて、CH-O-C-プロトンに対する[δ_H 3.52 (1H, dd, J=4.6, 11.4 Hz)]が、割り当てられた。
化合物６は、二次元ＮＭＲ（HMBC：heteronuclear multiple bond correlation）スペクトルの帰属において、(i) H-4/C-5、(ii) H-5/C-11、(iii) H-14/C-1とC-10の間に相関シグナルが観察された。スピン脱カップリングは、以前、Vassoura oilおよびLabdanum oilで発見された、5,11-エポキシカジネンに関して報告されたものと類似した(化学シフトおよび結合定数において)配列を与えた。これらのデータから、化合物６を、新規化合物（−）−５，１１−エポキシカジン−１（１０）−エン−１４−オールとして決定した。

化合物６: 無色油状物、[α]_D ^26.7 −9.2°(c 0.42 CHCl₃); HR-EIMS m/z 236.1802 ([M]⁺, 分子式 C₁₅H₂₄O₂ 236.1776); EIMS m/z 236 [M]⁺ (76), 221 (10), 205 (12), 147 (78), 91 (base), 43 (41); IR ν_max (film) cm^-1 3396, 2928, 1260, 1073; ¹H-NMR (CDCl₃), δ 4.13 (1H, d, J=11.4 Hz, H-14), 4.08 (1H, d, J=11.4 Hz, H-14), 3.59 (1H, dd, J=4.6, 11.4 Hz, H-5), 2.42 (1H, ddd, J=2.2, 4.8, 14.1 Hz, H-2), 2.36 (1H, dd, J=7.8, 11.4 Hz, H-6), 2.32 (1H, dddq, J=2.2, 4.6, 4.7, 7.0 Hz, H-4), 2.20 (1H, ddd, J=2.8, 4.0, 16.0 Hz, H-9), 2.09 (1H, ddd, J=3.8, 12.8, 16.0 Hz, H-9), 1.96 (1H, ddd, J=4.8, 7.8, 13.0 Hz, H-7), 1.91 (1H, m, H-2), 1.68 (1H, dddd, J=2.2, 2.4, 4.7, 13.7 Hz, H-3), 1.64 (1H, m, H-8), 1.49 (1H, m, H-3), 1.48 (1H, m, H-8), 1.28 (3H, s, H-12), 1.23 (3H, s, H-13), 1.03 (3H, d, J=7.0 Hz, H-15);¹³Ｃ−ＮＭＲを表１に示す。

化合物７
化合物７、（＋）−（１０Ｒ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エンの構造は以下のＭＳ、ＩＲ、およびＮＭＲデータから決定した。
化合物７([α]_D ^28.9＋29.5°(c 1.0 CHCl₃))は、無色油状物として得られた。化合物７のＨＲ−ＥＩＭＳでは、ｍ／ｚ値236.1798、分子式C₁₅H₂₄O₂であった。
化合物７のＩＲスペクトルでは、水酸基(3374 cm^-1)の存在が示された。
^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲでは、１級アルコールの存在が示された[δ_H 3.41 (1H, d, J=10.9 Hz), 3.28 (1H, d, J=10.9 Hz); δ_C 73.3 (CH₂)] および３級アルコール[δ_C 74.1 (C)]。
化合物７は、二次元ＮＭＲ（HMBC：heteronuclear multiple bond correlation）スペクトルの帰属において、(i) H-2/C-4とC-10、(ii) H-13/C-6とC-7、(iii) H-14/C-1とC-9の間に相関シグナルが観察された。化合物８は、ＮＯＥｓスペクトルの解析より(i) H-5/H-12とH-14、(ii) H-13/H-6と7の間で相関が見られた。(R)としての化合物７のC-10の配置を、H-14/H-5間のＮＯＥｓから推定した。これらのデータから、化合物７を、新規化合物（＋）−（１０Ｒ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エンとして決定した。

化合物７: 無色油状物、[α]_D ^28.9 ＋29.5°(c 1.0 CHCl₃); HR-EIMS m/z 236.1798 ([M]⁺, 分子式 C₁₅H₂₄O₂ 236.1777); EIMS m/z 236 [M]⁺ （2）, 218 (21), 203 (13), 185(20), 159(27), 119(29), 105(37), 91 (50), 79(34), 43 (base); IR ν_max (film) cm^-1 3374, 2923, 1026; ¹H-NMR (CDCl₃), δ 5.55 (1H, dd, J=1.7, 3.1 Hz, H-2), 3.41 (1H, d, J=10.9 Hz, H-13), 3.28 (1H, d, J=10.9 Hz, H-13), 2.44 (1H, dddq, J=7.0, 7.5, 7.5, 10.3 Hz, H-4), 2.25 (1H, ddd, J=3.1, 7.5, 15.2 Hz, H-3), 2.05 (1H, brdd, J=7.5, 9.6 Hz, H-5), 2.01 (1H, m, H-3), 1.89 (1H, m, H-9), 1.88 (1H, m, H-8), 1.57 (1H, brdd, J=11.8, 12.3 Hz, H-9), 1.29 (3H, s, H-14), 1.14 (3H, s, H-12), 1.08 (3H, d, J=7.0 Hz, H-15), 1.05 (1H, m, H-8), 0.71 (1H, ddd, J=5.3, 9.7, 11.2 Hz, H-7), 0.62 (1H, dd, J=9.6, 9.7 Hz, H-6);¹³Ｃ−ＮＭＲを表１に示す。

化合物８
化合物８、（＋）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エンの構造は以下のＭＳ、ＩＲ、およびＮＭＲデータから決定した。
化合物８([α]_D ^29.0 ＋42.4°(c 1.0 CHCl₃))は、無色油状物として得られた。化合物８のＨＲ−ＥＩＭＳでは、ｍ／ｚ値236.1780、分子式C₁₅H₂₄O₂であった。
化合物８のＩＲスペクトルでは、水酸基(3366 cm^-1)の存在が示された。
^１Ｈ−ＮＭＲおよび^１３Ｃ−ＮＭＲでは、１級アルコールの存在が示された[δ_H 3.40 (1H, d, J=10.9 Hz), 3.28 (1H, d, J=10.9 Hz); δ_C 73.5 (CH₂)]および３級アルコール[δ_C 71.4 (C)]。
化合物８は、二次元ＮＭＲ（HMBC：heteronuclear multiple bond correlation）スペクトルの帰属において、(i) H-2/C-4とC-10、(ii) H-13/C-6とC-7、(iii) H-14/C-1とC-9の間に相関シグナルが観察された。化合物８は、ＮＯＥｓスペクトルの解析より(i) H-5/H-12、(ii) H-13/H-6と7の間で相関が見られた。化合物８のHMBCスペクトルは、化合物７のHMBCスペクトルに類似していた。化合物８は、化合物７のジアステレオマーとして同定した。これらのデータから、化合物８を、新規化合物（＋）−（１０Ｓ，１１Ｓ）−１０，１３−ジヒドロキシアロマデンドル−１−エンとして決定した。

化合物８:無色油状物、[α]_D ^29.0 ＋42.4°(c 1.0 CHCl₃); HR-EIMS m/z 236.1780 ([M]⁺, 分子式 C₁₅H₂₄O₂ 236.1776); EIMS m/z 236 [M]⁺ （2）, 218 (20), 203 (13), 185(19), 159(27), 119(29), 105(37), 91 (40), 79(34), 43 (base); IR ν_max (film) cm^-1 3366, 2923, 1028; ¹H-NMR (CDCl₃) δ5.54 (1H, dd, J=1.7, 3.1 Hz, H-2), 3.40 (1H, d, J=10.9 Hz, H-13), 3.28 (1H, d, J=10.9 Hz, H-13), 2.50 (1H, brdd, J=7.7, 9.6 Hz, H-5), 2.36 (1H, dddq, J=7.0, 7.7, 7.7, 10.3 Hz, H-4), 2.24 (1H, ddd, J=3.1, 7.7, 15.7 Hz, H-3), 2.02 (1H, m, H-3), 1.86 (1H, m, H-9), 1.72 (1H, m, H-8), 1.56 (1H, m, H-9), 1.56 (1H, m, H-8), 1.46 (3H, s, H-14), 1.19 (3H, s, H-12), 1.08 (3H, d, J=7.0 Hz, H-15), 0.67 (1H, ddd, J=5.5, 9.7, 11.2 Hz, H-7), 0.58 (1H, dd, J=9.6, 9.7 Hz, H-6);¹³Ｃ−ＮＭＲを表１に示す。

表１ 化合物１〜８の^１３Ｃ-ＮＭＲスペクトルデータ（CDCl₃中、125.7MHz）

官能評価
基質および変換物(化合物４〜８)について官能評価を行った。試料１ mgを水およびエタノール０．１ mlに溶解し、評価用試料とした。水、エタノールを標準試料として、１３名のパネラーによって、甘味、酸味、塩味、苦味、および旨味について評価した。評価基準は、標準試料を１とし、非常に強い味を５とした場合の５段階評価とした。その結果を表２に示す。

したがって、化合物４〜８は、基質としてのアロマデンドラン骨格を有する化合物と異なる味を有する。

基質（＋）−アロマデンドレンをアスペルギルス ウェンティーによって微生物変換したときの、基質（＋）−アロマデンドレン(■)および化合物４(●)それぞれの相対的存在量についての経時変化を示す。 基質（−）−アロアロマデンドレンをアスペルギルス ウェンティーによって微生物変換したときの、基質（−）−アロアロマデンドレン(■)、化合物５(●)および化合物６(▲)それぞれの相対的存在量についての経時変化を示す。 基質（＋）−レデンをアスペルギルス ウェンティーによって微生物変換したときの、基質（＋）−レデン(■)、化合物６(●)、化合物７(▲)および化合物８(□)それぞれの相対的存在量についての経時変化を示す。

Claims (10)

1. 式（ＩＩ）：
   

   

   ［式中、（ａ’）Ｒ_１’はβ−ヒドロキシ基であり、Ｒ_２’はα−ヒドロキシメチル基であり、波線で結ばれたＲ_３’はシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をトランス配位とする水素原子を表し、点線の箇所は１重結合である；（ｂ’）Ｒ_１’とＲ_２’は両者合してメチレン基を表し、波線で結ばれたＲ_３’はシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をトランス配位とするヒドロキシ基を表し、点線の箇所は１重結合である；（ｃ’）Ｒ_１’はα−ヒドロキシ基であり、Ｒ_２’はβ−メチル基であり、波線で結ばれたＲ_３’は存在せず、点線の箇所は２重結合である；または（ｄ’）Ｒ_１’はβ−ヒドロキシ基であり、Ｒ_２’はα−メチル基であり、波線で結ばれたＲ_３’は存在せず、点線の箇所は２重結合である。］
   で表されるセスキテルペン炭化水素誘導体を製造する方法であって、
   基質としての式（Ｉ）：
   

   

   ［式中、（ａ）Ｒ_１とＲ_２は両者合してメチレン基を表し、波線で結ばれたＨはシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をトランス配位とする水素原子を表し、点線の箇所は１重結合である；（ｂ）Ｒ_１とＲ_２は両者合してメチレン基を表し、波線で結ばれたＨはシクロペンタンタン環とシクロヘプタン環の接合をシス配位とする水素原子を表し、点線の箇所は１重結合である；または（ｃ）Ｒ_１はメチル基を表し、Ｒ_２および波線で結ばれたＨは存在せず、点線の箇所は２重結合である。］
   で表される化合物を、上記誘導体を産生する能力を有するアスペルギルス属に属する微生物または当該微生物の生体内酵素と接触させることを特徴とする方法。
2. 式（ＩＩ）で表されるセスキテルペン炭化水素誘導体に加え、式：
   

   

   で表されるエポキシカジネン誘導体を製造することを特徴とする、請求項１記載の方法。
3. セスキテルペン炭化水素誘導体を産生する能力を有するアスペルギルス属に属する微生物がアスペルギルス ウェンティーである、請求項１または２に記載の方法。
4. アスペルギルス ウェンティーが寄託番号ＮＢＲＣ８８６４の株種である、請求項３に記載の方法。
5. 式：
   

   

   で表される、セスキテルペン炭化水素誘導体。
6. 式：
   

   

   で表される、セスキテルペン炭化水素誘導体。
7. 式：
   

   

   で表される、セスキテルペン炭化水素誘導体。
8. 式：
   

   

   で表される、セスキテルペン炭化水素誘導体。
9. 式：
   

   

   で表される、セスキテルペン炭化水素誘導体。
10. 請求項５〜９のいずれかに記載のセスキテルペン炭化水素誘導体を含有する、香辛料。

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