JP5154215B2 - 被検物質の齧歯類発がん性予測方法 - Google Patents
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Description
被検物質溶液又は溶媒の各群への投与期間経過後に各群からmRNAを採取し、下記(A)〜(C)
(A)配列番号1〜5に示す塩基配列を含む遺伝子
(B)配列番号6〜8に示す塩基配列を含む遺伝子
(C)配列番号9〜32に示す塩基配列を含む遺伝子
からそれぞれ選択される1以上の遺伝子から発現されるmRNAの発現量を測定する工程と、
被検群と対照群の間で前記選択された遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められるかどうかを有意差検定により判定する工程と、
被検群と対照群の間で前記選択された遺伝子のいずれか1の遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められ、かつ対照群に対する被検群の当該mRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該mRNAを発現させる遺伝子毎に予め定められる方向に増加又は減少しているときに被検物質に発がん性有りと決定する工程と、
を有する被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
被検物質溶液又は溶媒の各群への投与期間経過後に各群からmRNAを採取し、下記(A)〜(C)
(A)配列番号1〜5に示す塩基配列を含む遺伝子
(B)配列番号6〜8に示す塩基配列を含む遺伝子
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からそれぞれ選択される1以上の遺伝子から発現されるmRNAの発現量を測定する工程と、
被検群と対照群の間で前記選択された遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められるかどうかを有意差検定により判定する工程と、
被検群と対照群の間で前記選択された遺伝子のいずれか1の遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められ、かつ対照群に対する被検群の当該mRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該mRNAを発現させる遺伝子毎に予め定められる方向に増加又は減少しているときに被検物質に発がん性有りと決定し、前記選択された遺伝子のいずれについても被検群と対照群の間でmRNAの発現量に有意差が認められないとき、又は前記選択された遺伝子のいずれかに有意差が認められる場合であっても対照群に対する被検群の当該遺伝子から発現しているmRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該遺伝子毎に予め定められる方向でないときに発がん性無しと決定する工程と、
を有する被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
被検物質溶液又は溶媒の各群への投与期間経過後に各群からmRNAを採取し、下記(A)〜(C)
(A)配列番号1〜5に示す塩基配列を含む遺伝子
(B)配列番号6〜8に示す塩基配列を含む遺伝子
(C)配列番号9〜32に示す塩基配列を含む遺伝子
からそれぞれ選択される1以上の遺伝子と、下記(D)の遺伝子
(D)配列番号33に示す塩基配列を含む遺伝子
と、から発現されるmRNAの発現量を測定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められるかどうかを有意差検定により判定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子のいずれか1から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められ、かつ対照群に対する被検群の当該mRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該mRNAを発現させる遺伝子毎に予め定められる方向に増加又は減少しているときに被検物質に発がん性有りと決定する工程と、
を有する被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
(A)配列番号1〜5に示す塩基配列を含む遺伝子
(B)配列番号6〜8に示す塩基配列を含む遺伝子
(C)配列番号9〜32に示す塩基配列を含む遺伝子
本発明においては、上記(A)〜(C)からそれぞれ1以上の遺伝子を選択し、選択した遺伝子から発現しているmRNAの発現量を測定する。(A)〜(C)の各群から選択する遺伝子数は、各群に属する遺伝子数を上限とする1以上の任意の数である。(A)〜(C)の各群からそれぞれ選択する遺伝子数は、同一であってもよいし、異なっていてもよい。発がん性の予測の精度を高く維持しつつ操作を簡略化する観点から、(A)〜(C)から選択する遺伝子数はそれぞれ1〜3程度とすることが好ましく、1又は2とすることがより好ましく、1とすることが最も好ましい。
(1)mRNAの発現量を測定した遺伝子のうち少なくともいずれか1つから発現しているmRNAの発現量が、被検群と対照群との間で有意差があること。
(2)(1)でmRNAの発現量に有意差が見られた遺伝子のうち、少なくともいずれか1つの遺伝子の被検群におけるmRNAの発現量が、対照群におけるmRNAの発現量に対し、当該遺伝子毎に定められる方向に増加又は減少していること。
(グループ1)
2,4-ジアミノトルエン、キノリン、ジエチルニトロサミン、2-ニトロプロパン、N-ニトロソモルホリン、フラン、N-ニトロソジメチルアミン、N-ニトロソピペリジン、2-アセチルアミノフルオレン、2-アミノ-3,8-ジメチルイミダゾ[4,5-f]キノキサリン、メチルカルバメート、チオアセトアミド、ウレタン、アセトアミド、メタピリレン塩酸塩、3'-メチル-4-ジメチルアミノアゾベンゼン、1,4-ジオキサン
(グループ2)
サフロール、クロフィブレート、ジ(2-エチルヘキシル)フタレート、ヘキサクロロベンゼン、α-ヘキサクロロシクロヘキサン、D,L-エチオニン、クロレンド酸、2-アミノ-1-メチル-6-フェニルイミダゾ[4,5-b]-ピリジン、7,12-ジメチルベンズ[a]アントラセン、3-メチルコラントレン、4-ニトロキノリン-1-オキサイド、N-エチル-N-ニトロソウレア、ベンゾ[a]ピレン、4-ジメチルアミノアゾベンゼン、アルドリン、アジピン酸ジ(2-エチルヘキシル)、トリクロロエチレン、ブチル化ヒドロキシアニソール、D-リモネン、テトラクロロエチレン、1,4-ジクロロベンゼン、フェニトインナトリウム塩、トリクロロ酢酸
(グループ3)
エチニルエストラジオール、クロロホルム、ベンズ[a]アントラセン、ペンタクロロエタン、ジエチルスチルベストロール、フェノバルビタール
(B)配列番号6,7
(C)配列番号9、10、14、15、17、21、22、30、31、32
・(A)配列番号1、(B)配列番号7、(C)配列番号10
・(A)配列番号3、(B)配列番号7、(C)配列番号10
・(A)配列番号4、(B)配列番号7、(C)配列番号10
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号9
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号10
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号14
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号15
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号17
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号21
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号22
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号30
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号31
・(A)配列番号2、(B)配列番号7、(C)配列番号32
表2〜6に示す発がん物質、非発がん物質を、表2〜6に示す溶媒に溶解して試験溶液を調製した。調製した試験溶液と、調製に使用した溶媒を、各群のラットに強制経口投与した。ラットは日本チャールス・リバー社から入手した5週令の雄性ラット(F344、SPF系統)を4匹/群に分けて使用した。媒体対照群への溶媒の投与量は、発がん物質投与群又は非発がん物質投与群に投与した試験溶液の容量と同量とした。試験溶液又は溶媒の投与は1日1回とし、28日間行った。投与開始から28日経過後にラットの肝臓から断片を切り出し、total RNAを抽出して精製した。自家製のオリゴDNAマイクロアレイ(2007/05/16版UniGeneデータベースに基づくUniGene ID数:6,689、1プローブあたりの遺伝子長さ:60mer)を用いてtotal RNAに含まれる各mRNA量を測定した。
(B)表7に示すグループ2の発がん物質(23物質)のうちの13物質以上について有意に発現量が変動し、かつ非発がん物質(26物質)のうち有意に発現量が変動した物質数が8以下である遺伝子
(C)表7に示すグループ3の発がん物質(6物質)のうちの5物質以上について有意に発現量が変動し、かつ非発がん物質(26物質)のうち有意に発現量が変動した物質数が8以下である遺伝子
(D)表7に示すグループ2の発がん物質のうち、(B)の遺伝子では発現量が変動していない発がん物質で有意に発現量が変動している遺伝子
検討例1で選定した(A)〜(C)の遺伝子を使用して、遺伝子の選定に使用した化学物質(トレーニング物質)と、遺伝子の選定に使用しなかった化学物質(検証物質)とについて、発がん性の予測を行った。予測は以下の手順で行った。
表7に示す(A)〜(C)からそれぞれ選択した1の遺伝子と、(D)の遺伝子を使用して、実施例1と同様に化学物質の発がん性を予測した。全ての組み合わせについて調べるのは難しいが、以下の結果を得た。検証物質で60%以上の予測率であった。予測に使用した遺伝子と、正解した物質数、正解した物質数から算出した予測率を表17、18に示す。
実施例1において最も予測率が高かった遺伝子の組み合わせのうち、1種を検討例1で選択されなかった遺伝子に代えて、トレーニング物質、検証物質の発がん性を予測した。結果を表19に示す。なお、本比較例において実施例1の遺伝子に代えて用いた遺伝子は、検討例1で選択されなかった遺伝子の中から無作為に抽出した遺伝子である。
Claims (8)
- 被検物質を溶媒に溶解又は分散させて調製した被検物質溶液を被検群に、前記被検物質溶液の調製に使用した溶媒を対照群に投与する工程と、
被検物質溶液又は溶媒の各群への投与期間経過後に各群からmRNAを採取し、以下の組み合わせ(1)〜(13);
(1)配列番号1、配列番号7及び配列番号10
(2)配列番号3、配列番号7及び配列番号10
(3)配列番号4、配列番号7及び配列番号10
(4)配列番号2、配列番号7及び配列番号9
(5)配列番号2、配列番号7及び配列番号10
(6)配列番号2、配列番号7及び配列番号14
(7)配列番号2、配列番号7及び配列番号15
(8)配列番号2、配列番号7及び配列番号17
(9)配列番号2、配列番号7及び配列番号21
(10)配列番号2、配列番号7及び配列番号22
(11)配列番号2、配列番号7及び配列番号30
(12)配列番号2、配列番号7及び配列番号31
(13)配列番号2、配列番号7及び配列番号32
のいずれかに示す配列番号の塩基配列を有する遺伝子から発現されるmRNAの発現量を測定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められるかどうかを有意差検定により判定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子のいずれか1の遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められ、かつ対照群に対する被検群の当該mRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該mRNAを発現させる遺伝子毎に予め定められる方向に増加又は減少しているときに被検物質に発がん性有りと決定する工程と、
を有する被検物質の齧歯類発がん性予測方法。 - 被検物質を溶媒に溶解又は分散させて調製した被検物質溶液を被検群に、前記被検物質溶液の調製に使用した溶媒を対照群に投与する工程と、
被検物質溶液又は溶媒の各群への投与期間経過後に各群からmRNAを採取し、以下の組み合わせ(1)〜(13);
(1)配列番号1、配列番号7及び配列番号10
(2)配列番号3、配列番号7及び配列番号10
(3)配列番号4、配列番号7及び配列番号10
(4)配列番号2、配列番号7及び配列番号9
(5)配列番号2、配列番号7及び配列番号10
(6)配列番号2、配列番号7及び配列番号14
(7)配列番号2、配列番号7及び配列番号15
(8)配列番号2、配列番号7及び配列番号17
(9)配列番号2、配列番号7及び配列番号21
(10)配列番号2、配列番号7及び配列番号22
(11)配列番号2、配列番号7及び配列番号30
(12)配列番号2、配列番号7及び配列番号31
(13)配列番号2、配列番号7及び配列番号32
のいずれかに示す配列番号の塩基配列を有する遺伝子から発現されるmRNAの発現量を測定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められるかどうかを有意差検定により判定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子のいずれか1の遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められ、かつ対照群に対する被検群の当該mRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該mRNAを発現させる遺伝子毎に予め定められる方向に増加又は減少しているときに被検物質に発がん性有りと決定し、前記遺伝子のいずれについても被検群と対照群の間でmRNAの発現量に有意差が認められないとき、又は前記遺伝子のいずれかに有意差が認められる場合であっても対照群に対する被検群の当該遺伝子から発現しているmRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該遺伝子毎に予め定められる方向でないときに発がん性無しと決定する工程と、
を有する被検物質の齧歯類発がん性予測方法。 - 被検物質溶液の投与期間が1〜90日間である請求項1又は2に記載の被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
- 被検群及び対照群の試験動物が、ラット、マウス、ハムスター、又はモルモットである請求項1又は2に記載の被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
- 前記組み合わせが(5)配列番号2、配列番号7及び配列番号10である請求項1又は2に記載の被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
- 被検物質を溶媒に溶解又は分散させて調製した被検物質溶液を被検群に、前記被検物質溶液の調製に使用した溶媒を対照群に投与する工程と、
被検物質溶液又は溶媒の各群への投与期間経過後に各群からmRNAを採取し、以下の組み合わせ(1)〜(13);
(1)配列番号1、配列番号7及び配列番号10
(2)配列番号3、配列番号7及び配列番号10
(3)配列番号4、配列番号7及び配列番号10
(4)配列番号2、配列番号7及び配列番号9
(5)配列番号2、配列番号7及び配列番号10
(6)配列番号2、配列番号7及び配列番号14
(7)配列番号2、配列番号7及び配列番号15
(8)配列番号2、配列番号7及び配列番号17
(9)配列番号2、配列番号7及び配列番号21
(10)配列番号2、配列番号7及び配列番号22
(11)配列番号2、配列番号7及び配列番号30
(12)配列番号2、配列番号7及び配列番号31
(13)配列番号2、配列番号7及び配列番号32
のいずれかに示す配列番号の塩基配列を有する遺伝子と、下記(D)の遺伝子
(D)配列番号33に示す塩基配列を含む遺伝子
と、から発現されるmRNAの発現量を測定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められるかどうかを有意差検定により判定する工程と、
被検群と対照群の間で前記遺伝子のいずれか1から発現しているmRNAの発現量に有意差が認められ、かつ対照群に対する被検群の当該mRNAの発現量の増加又は減少の方向が当該mRNAを発現させる遺伝子毎に予め定められる方向に増加又は減少しているときに被検物質に発がん性有りと決定する工程と、
を有する被検物質の齧歯類発がん性予測方法。 - 被検物質溶液の投与期間が1〜90日間である請求項6に記載の被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
- 前記組み合わせが(5)配列番号2、配列番号7及び配列番号10である請求項6に記載の被検物質の齧歯類発がん性予測方法。
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