JP5140587B2 - 腎臓、血管および軟骨の病理を治療におけるレニン−アンギオテンシン系の阻害 - Google Patents

腎臓、血管および軟骨の病理を治療におけるレニン−アンギオテンシン系の阻害 Download PDF

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Description

本発明は、ＧＡＧのアップレギュレーションが治療的に有益であると考えられる状態を治療するための方法、より具体的には、レニン−アンギオテンシン系を阻害することによってそのような状態を治療するための方法に関連する。
グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）は体内における最も多く存在するヘテロ多糖であることが知られている。グリコサミノグリカンは本質的には、２つの修飾された糖の１つ（Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）またはＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ））と、ウロン酸（例えば、グルクロン酸またはイズロン酸など）とを順に含む反復する二糖ユニットを含む長鎖の非分枝状多糖である。ＧＡＧは主として細胞表面または細胞外マトリックス（ＥＣＭ）に存在する。生理学的に重要である具体的なＧＡＧには、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸およびケラタン硫酸が含まれる。
体内におけるＧＡＧの大部分はコアタンパク質に連結され、プロテオグリカン（ムコ多糖とも呼ばれる）を形成している。ＧＡＧは刷毛様構造でコアから垂直に延びる。タンパク質コアへのＧＡＧの連結は、２つのガラクトース残基および１つのキシロース残基から構成される特異的な三糖を伴う（ＧＡＧ−ＧａｌＧａｌＸｙｌ−Ｏ−ＣＨ２−タンパク質）。
ＧＡＧに付随する大きな負荷電、ならびに、その広がった立体配座により、大きい粘性がＥＣＭにもたらされる。ＧＡＧの圧縮性が低いために、関節滑液においてその存在は不可欠である。同時に、その堅さは構造的一体性を細胞にもたらし、また、細胞間の通路を提供し、これにより細胞遊走を可能にしている。
生命維持に必要な多くの身体機能が、一般にはプロテオグリカンによって、具体的にはＧＡＧによって発揮されるので、その産生またはその迅速な分解における欠損が広範囲の様々な疾患に関連する。加えて、多くの疾患が、ＧＡＧの増大によって利益を受けることが示されている。
変形性関節症は、合衆国だけで２千万人を超える人々が罹患している関節炎の最も一般的な形態である。変形性関節症の発生率は年齢とともに増大する。この疾患は、最小限の炎症とともに関節軟骨の進行性の悪化を伴う［Ｓｃｈｏｅｎｈｅｒｒ他、Ｓｍａｌｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（第４版、Ｈａｎｄ他編、Ｗａｌｓｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍａｒｃｅｌｉｎｅ、Ｍｏ、２０００）、９０７〜９２１；Ｈｅｄｂｏｍ他、Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．、５９：４５〜５３、２００２；Ｐｏｏｌ、Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ、４：Ｄ６６２〜７０、１９９９］。
関節軟骨は軟骨細胞（約５％）および細胞外マトリックス（約９５％）を含む。軟骨細胞は、コラーゲン、プロテオグリカンおよびＧＡＧ、ならびに、軟骨代謝のための酵素を産生することによるマトリックスの代謝回転の制御において重要である。関節軟骨の機能的一体性が、細胞外マトリックスの軟骨細胞による生合成と、その分解との間におけるバランスによって決定される。
コンドロイチン硫酸は、関節軟骨に見出される主要なＧＡＧである。その会合したコアタンパク質とともにコンドロイチン硫酸は、リウマチ様関節炎だけでなく変形性関節症を含む様々な形態の関節炎において減少し、これにより軟骨の厚さおよびスチフネスにおける低下を引き起こすことが示されている［Ａｌｔｍａｎ ＲＤ他、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ、１６：１７９、１９７３；Ｊａｓｉｎ ＨＥ、Ｄｉｎｇｌｅ ＪＴ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ、６８：５７１〜５８１、１９８１］。
関節炎を治療するための標準的薬物治療では、痛みおよび炎症が、主に非ステロイド系抗炎症性薬物（ＮＳＡＩＤ）の使用によって抑制される。しかしながら、これらの薬物はまた、ＧＡＧ合成および軟骨修復を阻害することによって疾患プロセスの進行を促進させる。従って、いくつかの試みが、様々な方法を使用して、関節軟骨のＧＡＧおよびプロテオグリカンの構成成分に直接に影響を及ぼすために行われている。
そのような方法の１つが、ＧＡＧ合成における必須成分であるグルコサミン硫酸の投与である。いくつかのヒト研究では、経口または関節内注射を使用するグルコサミン硫酸の投与による、変形性関節症の症状において軽度の低下が示されている［Ｒｅｉｃｈｅｌｔ Ａ他、Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ、４４：７５〜８０、１９９４；Ｒｅｇｉｎｓｔｅｒ ＪＹ他、Ｌａｎｃｅｔ、３５７：２５１〜２５６、２００１；Ｖａｊａｒａｄｕｌ Ｙ、Ｃｌｉｎ Ｔｈｅｒ、３：３３６〜３４３、１９８１］。６件の最も良く設計された試験のメタ分析では、痛みに対するグルコサミンの小さい有益な効果から、適度な有益な効果までが見出された［ＭｃＡｌｉｎｄｏｎ ＴＥ、ＪＡＭＡ、１５：１４６９〜１６７５、２０００］。
別の方法がコンドロイチン硫酸の投与である。２００３年のメタ分析では、コンドロイチン硫酸または偽薬を受けるように割り当てられた、膝の変形性関節症を有する７５５名の患者を伴った８件の試験が評価された［Ｒｉｃｈｙ Ｆ、Ａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ、１６３：１５１４〜１５２２、２００３］。利益に関して、コンドロイチン硫酸に応答するという可能性が、偽薬と比較して著しく増大した。しかしながら、これらの補充物の長期間の効果およびそれらの潜在的な相互作用に関する情報は限られている。加えて、コンドロイチンおよびグルコサミンは通常、何らかの利益が感じられるまでに何ヶ月にもわたる投与を必要とする。
遺伝的に遺伝するいくつかの疾患（例えば、リソソーム蓄積症）が、複雑な膜結合ＧＡＧの代謝に関わるリソソーム酵素における欠如から生じている。これらの特定の疾患（これらは、より初期の用語を参照してムコ多糖症（ＭＰＳ）と呼ばれ、この場合、ムコ単糖はグリコサミノグリカン類に関して使用される）では、分泌または分解することができない不完全なＧＡＧの細胞内での蓄積が引き起こされる。ＧＡＧ代謝に影響を及ぼす少なくとも１４のタイプのリソソーム蓄積症が知られており、より一般的に遭遇する例のいくつかが、ハーラー症候群、ハンター症候群、サンフィリッポ症候群、マロトー・ラミー症候群およびモルキオ症候群である。ハンター症候群を除いて、これらの疾患のすべてが常染色体劣性様式で遺伝する。
いくつかの方法がＭＰＳの治療のために今も使用または追求されており、それらの大部分が、疾患管理において単独で使用されるための遺伝子治療または酵素置換治療に集中する。加えて、研究者はＭＳＰの管理のためのいくつかの小分子を特定している。しかしながら、これらの方法はどれも、完全な治療的効力を示していない。
嚢胞性線維症は、ＧＡＧにおける増大に関連する疾患の別の一例である。嚢胞性線維症（ＣＦ）の患者は、粘性でかつ不溶性の粘液分泌物による気道閉塞を伴う慢性的な肺感染症を発症する。コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＣＳＰＧ）が、ＣＦの痰が不溶性であることの一因であることが示されており、また、コンドロイチナーゼによる治療は、この影響を改善することが示された［Ｋｈａｔｒｉ他、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ．、２００３（Ａｐｒ）、５３（４）：６１９〜２７］。
従って、上記の制限を有しない、ＧＡＧの過少産生または過剰産生に関連する疾患を治療するための新規な治療計画が必要であることが広く認識されており、また、そのような治療計画を有することは非常に好都合である。
アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）は、アンギオテンシンＩＩ（ＡＩＩ）およびブラジキニンを伴う組織の調節ペプチド系に関与するメタロペプチダーゼである。ＡＣＥは、ＡＩＩがその不活性な前駆体（アンギオテンシンＩ自体はプロテアーゼのレニンによるアンギオテンシノーゲンの切断によって生じる）から形成されることを触媒する。ＡＩＩは、その生物学的作用を、特異的な細胞表面受容体を介して発揮する。特異的な細胞表面受容体の２つの主要なサブタイプ（これらはＡＴ１受容体およびＡＴ２受容体と呼ばれる）がヒトにおいて特定されている。ＡＩＩは強力な血管収縮剤であり、血管形成、線維芽細胞増殖および増殖因子発現を刺激することができ、これらのそれぞれがＡＴ１受容体によって媒介される［Ｔｉｍｍｅｒｍａｎｓ ＰＢ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖｉｅｗ、４５：２０５〜２５１、１９９３］。さらに、ＡＣＥ阻害剤（ＡＣＥ−Ｉ）およびＡＴ１受容体アンタゴニスト（ＡＲＢ）はこれらの作用を阻害する。
ＡＣＥ阻害剤およびＡＲＢは典型的には、心不全、高血圧および心筋梗塞の管理のために処方される。それらはまた、慢性的腎臓疾患において、また、タンパク尿を伴う腎臓疾患において腎臓機能を保護するための治療の標準であると見なされる。これらの薬剤に関連する腎臓保護の正確な機構は依然として明らかにされてない。
ＡＣＥ阻害剤およびＡＲＢがタンパク尿の病理発生に関して有する治療的効果に関与する機構を研究している間に、本発明者らは、予想外ではあったが、レニン−アンギオテンシン系の阻害により、ＧＡＧがアップレギュレーションされることを発見した。従って、ＧＡＧのアップレギュレーションから利益を受けると考えられる病理を治療することにおけるＡＣＥ阻害剤およびＡＲＢの使用が本明細書中に提案される。特に注目されるのが、軟骨における低いレベルのＧＡＧに関連する疾患を治療するためのそのような薬剤の局所投与である。
米国特許出願第２００３００７８１９０号は、ＡＲＢを場合によりＡＣＥ−Ｉ阻害剤との組合せで使用する、リウマチ様関節炎（ＲＡ）および紅斑性狼瘡を含む広範囲の様々な疾患の治療を教示する。
米国特許出願第２００３００４０５０９号は、低レベルのアンギオテンシンＩＩに関連する疾患を治療するためのＡＣＥ阻害剤の使用に関連する。疾患のそれらの列挙にはまた、低レベルのＧＡＧに関連する疾患が含まれる。
本発明に反して、これらの特許出願はともに、レニン−アンギオテンシン調節薬剤の局所投与を教示していない。さらに、治療的効力は、軟骨、皮膚またはリソソーム蓄積症についてではなく、心臓血管疾患（例えば、高血圧、慢性的心不全など）および腎臓疾患（例えば、タンパク尿および慢性腎疾患など）について示されただけであった。
リウマチ様関節炎の患者におけるＡＣＥ阻害剤のいくつかの小規模な非盲検試験が、ＡＣＥ阻害剤のカプトプリルを使用して行われているが、結果が一定していない［Ｍａｒｔｉｎ ＭＦ他、Ｌａｎｃｅｔ、１９８４、１：１３２５〜８；Ｂｉｒｄ ＨＡ他、Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、１９９０、１７：６０３〜８］。カプトプリルの臨床的利益は、そのチオール残基のためにペニシラミンとの構造的類似性に起因すると考えられた［Ｍａｒｔｉｎ ＭＦ他、Ｌａｎｃｅｔ、１９８４、１：１３２５〜８］。その後の研究において、ＡＣＥ−Ｉのキナプリルがマウスにおける炎症性関節炎を抑制することが示された［Ｄａｌｂｅｔｈ他、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、４４：２４〜３１、２００４］。ＡＲＢのカンデサルタンも同様に、疾患活性に対して類似する阻害作用を有していた。これらの研究のすべてにおいて、レニン−アンギオテンシン系阻害剤の局所投与は示唆されず、また、ＧＡＧに対するこれらの薬剤の作用は仮定されていなかった。
本発明の１つの目的は、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患または状態を治療するための方法を提供することである。
本発明の別の目的は、軟骨または皮膚の疾患または状態を治療するための方法を提供することである。
本発明のさらに別の目的は、変形性関節症を治療するための方法を提供することである。
本発明のさらに別の目的は、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である対象における治療計画を決定する方法を提供することである。
本発明のさらに別の目的は、対象における高いレベルのＧＡＧによって特徴づけられる状態または疾患を治療する方法を提供することである。
従って、本発明の１つの態様によれば、レニン−アンギオテンシン系の成分の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量を対象に局所投与し、それにより、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患または状態を治療することを含む、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患または状態を治療する方法が提供される。
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、対象は低いレベルのＧＡＧを示す。
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、方法はさらに、対象の生物学的サンプルにおけるＧＡＧレベルを、薬剤を投与する前に、および／または、薬剤を投与するのと同時に、および／または、薬剤を投与した後で分析することを含む。
本発明の別の態様によれば、レニン−アンギオテンシン系の成分の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量をその必要性のある対象に投与し、それにより、対象における軟骨または皮膚の疾患または状態を治療することを含む、対象における軟骨または皮膚の疾患または状態を治療する方法が提供される。
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、軟骨の疾患はリウマチ様関節炎ではない。
本発明のさらに別の態様によれば、レニン−アンギオテンシン系の成分の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量をその必要性のある対象に投与し、それにより、対象における変形性関節症を治療することを含む、対象における変形性関節症を治療する方法が提供される。
本発明のさらに別の態様によれば、軟骨または皮膚の疾患または状態を治療するために特定される医薬品を製造するための、レニン−アンギオテンシン系の成分の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる薬剤の使用が提供される。
本発明のさらに別の態様によれば、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが対象において治療的に有益である疾患の治療方針を決定する方法が提供され、この場合、この方法は、（ａ）レニン−アンギオテンシン系をダウンレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量をその必要性のある対象に投与すること；および（ｂ）前記対象の生物学的サンプルにおけるＧＡＧレベルを（ａ）の後で分析し、それにより、ＧＡＧレベルによって、治療方針が示されることを含む。
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、方法はさらに、対象のさらなる生物学的サンプルを工程（ａ）の前および／または工程（ｂ）と同時に得ることを含む。
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、方法はさらに、生物学的サンプルにおけるＧＡＧレベルをさらなる生物学的サンプルと比較することを含む。
本発明のさらに別の態様によれば、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患に苦しむ対象における治療方針を決定する方法が提供され、この場合、この方法は、（ａ）対象の生物学的サンプルにおけるＧＡＧレベルを分析すること；および（ｂ）レニン−アンギオテンシン系をダウンレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量を前記ＧＡＧレベルに従って対象に投与することを含む。
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、方法はさらに、工程（ａ）を工程（ｂ）の後で繰り返すことを含む。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、疾患または状態は、軟骨または皮膚の疾患または状態からなる群から選択される。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、薬剤はアンギオテンシン変換酵素阻害剤である。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、アンギオテンシン変換酵素阻害剤は、ＡＢ−１０３、アンコベニン、ベナゼプリラト、ＢＲＬ−３６３７８、ＢＷ−Ａ５７５Ｃ、ＣＧＳ−１３９２８Ｃ、ＣＬ２４２８１７、ＣＶ−５９７５、Ｅｑｕａｔｅｎ、ＥＵ４８６５、ＥＵ４８６７、ＥＵ−５４７６、ホロキシミチン、ＦＰＬ６６５６４、ＦＲ−９００４５６、Ｈｏｅ−０６５、Ｉ５Ｂ２、インドラプリル、ケトメチルウレアス（ｋｅｔｏｍｅｔｈｙｌｕｒｅａｓ）、ＫＲＩ−１１７７、ＫＲＩ−１２３０、Ｌ６８１１７６、リベンザプリル、ＭＣＤ、ＭＤＬ−２７０８８、ＭＤＬ−２７４６７Ａ、モベルチプリル、ＭＳ−４１、ニコチアナミン、ペントプリル、フェナセイン、ピボプリル、レンチアプリル、ＲＧ−５９７５、ＲＧ−６１３４、ＲＧ−６２０７、ＲＧＨ０３９９、ＲＯＯ−９１１、ＲＳ−１００８５−１９７、’ＲＳ−２０３９、ＲＳ５１３９、ＲＳ８６１２７、ＲＵ−４４４０３、Ｓ−８３０８、ＳＡ−２９１、スピラプリラト、ＳＱ２６９００、ＳＱ−２８０８４、ＳＱ−２８３７０、ＳＱ−２８９４０、ＳＱ−３１４４０、Ｓｙｎｅｃｏｒ、ウチバプリル、ＷＦ−１０１２９、Ｗｙ−４４２２１、Ｗｙ−４４６５５、Ｙ−２３７８５、Ｙｉｓｓｕｍ、Ｐ−０１５４、ザビシプリル、Ａｓａｈｉ Ｂｒｅｗｅｒｙ ＡＢ−４７、アラトリオプリル、ＢＭＳ１８２６５７、Ａｓａｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ−１１１、Ａｓａｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ−１１２、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ ＤＵ−１７７７、ミキサンプリル（ｍｉｘａｎｐｒｉｌ）、Ｐｒｅｎｔｙｌ、ゼフェノプリラト、１（−（Ｉ−カルボキシ−６−（４−ピペリジニル）ヘキシル）アミノ）−１−オキソプロピルオクタヒドロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、Ｂｉｏｐｒｏｊｅｃｔ ＢＰ１．１３７、Ｃｈｉｅｓｉ ＣＨＦ１５１４、Ｆｉｓｏｎｓ ＦＰＬ−６６５６４、イドラプリル、ペリンドプリラトおよびＳｅｒｖｉｅｒ Ｓ−５５９０、アラセプリル、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラト、ホシノプリル、ホシノプリラト、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、ラミプリラト、酢酸サララシン、テモカプリル、トランドラプリル、トランドラプリラト、セラナプリル、モエキシプリル、キナプリラトおよびスピラプリルからなる群から選択される。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、薬剤はＮＥＰ／ＡＣＥ阻害剤である。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、薬剤はＡＴ１受容体アンタゴニストである。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ＡＴ１受容体アンタゴニストは、酢酸サララシン、カンデサルタンシレキセチル、ＣＧＰ−６３１７０、ＥＭＤ−６６３９７、ＫＴ３−６７１、ＬＲ−Ｂ／０８１、バルサルタン、Ａ−８１２８２、ＢＩＢＲ−３６３、ＢＩＢＳ−２２２、ＢＭＳ−１８４６９８、カンデサルタン、ＣＶ−１１１９４、ＥＸＰ−３１７４、ＫＷ−３４３３、Ｌ−１６１１７７、Ｌ−１６２１５４、ＬＲ−Ｂ／０５７、ＬＹ−２３５６５６、ＰＤ−１５０３０４、Ｕ−９６８４９、Ｕ−９７０１８、ＵＰ−２７５−２２、ＷＡＹ−１２６２２７、ＷＫ−１４９２．２Ｋ、ＹＭ−３１４７２、ロサルタンカリウム、Ｅ４１７７、ＥＭＤ−７３４９５、エプロサルタン、ＨＮ−６５０２１、イルベサルタン、Ｌ−１５９２８２、ＭＥ−３２２１、ＳＬ−９１．０１０２、Ｔａｓｏｓａｒｔａｎ、Ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ、ＵＰ−２６９−６、ＹＭ−３５８、ＣＧＰ−４９８７０、ＧＡ−００５６、Ｌ−１５９６８９、Ｌ−１６２２３４、Ｌ−１６２４４１、Ｌ−１６３００７、ＰＤ−１２３１７７、Ａ−８１９８８、ＢＭＳ−１８０５６０、ＣＧＰ−３８５６０Ａ、ＣＧＰ−４８３６９、ＤＡ−２０７９、ＤＥ−３４８９、ＤｕＰ−１６７、ＥＸＰ−０６３、ＥＸＰ−６１５５、ＥＸＰ−６８０３、ＥＸＰ−７７１１、ＥＸＰ−９２７０、ＦＫ−７３９、ＨＲ−７２０、ＩＣＩ−Ｄ６８８８、ＩＣＩ−Ｄ７１５５、ＩＣＩ−Ｄ８７３１、イソテオリン（ｉｓｏｔｅｏｌｉｎｅ）、ＫＲＩ−１１７７、Ｌ−１５８８０９、Ｌ−１５８９７８、Ｌ−１５９８７４、ＬＲ Ｂ０８７、ＬＹ−２８５４３４、ＬＹ−３０２２８９、ＬＹ−３１５９９５、ＲＧ−１３６４７、ＲＷＪ−３８９７０、ＲＷＪ−４６４５８、Ｓ−８３０７、Ｓ−８３０８、サプリサルタン、サララシン、Ｓａｒｍｅｓｉｎ、ＷＫ−１３６０、Ｘ−６８０３、ＺＤ−６８８８、ＺＤ−７１５５、ＺＤ−８７３１、ＢＩＢＳ３９、ＣＩ−９９６、ＤＭＰ−８１１、ＤｕＰ−５３２、ＥＸＰ−９２９、Ｌ−１６３０１７、ＬＹ−３０１８７５、ＸＨ−１４８、ＸＲ−５１０、ゾラサルタンおよびＰＤ−１２３３１９からなる群から選択される。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、薬剤はレニン阻害剤である。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、レニン阻害剤は、エナルクレイン、ＲＯ４２−５８９２、Ａ６５３１７、ＣＰ８０７９４、ＥＳ１００５、ＥＳ８８９１、ＳＱ３４０１７、ＣＧＰ２９２８７、ＣＧＰ３８５６０、ＳＲ４３８４５、Ｕ−７１０３８、Ａ６２１９８、Ａ６４６６２、Ａ−６９７２９、ＦＫ９０６およびＦＫ７４４からなる群から選択される。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、薬剤は、レニン−アンギオテンシン系の少なくとも１つの成分を発現する内因性の核酸配列に向けられたオリゴヌクレオチドである。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、低いレベルのＧＡＧが、対象の軟骨、皮膚または滑液において存在する。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、投与することが局所的に行われる。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、局所投与することが、関節内投与、局部投与または滑液嚢内投与によって行われる。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、関節内投与は、膝関節、肘関節、股関節、胸鎖関節、顎関節、手根関節、足根関節、手関節、足関節、椎間円板および黄色靭帯からなる群から選択される関節の中に投与することを含む。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、軟骨の疾患または状態は、変形性関節症、制限された関節の運動性、痛風、リウマチ様関節炎、軟骨融解、強皮症、変性椎間板疾患および全身性エリテマトーデスからなる群から選択される。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、皮膚の疾患または状態は、しわ形成、乾癬、ケロイドおよび火傷からなる群から選択される。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、前記アンギオテンシン変換酵素阻害剤の局所用量は１日あたり５ｍｇを超えない。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、前記ＡＴ１受容体アンタゴニストの局所用量は１日あたり５ｍｇを超えない。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患は、腎臓の疾患または状態、血管の疾患または状態、皮膚の疾患または状態、および、軟骨の疾患または状態からなる群から選択される。
本発明のさらに別の態様によれば、ＧＡＧをダウンレギュレーションすることが対象において治療的に有益である状態または疾患を治療する方法が提供され、この場合、この方法は、レニン−アンギオテンシン系の成分の活性および／または発現をアップレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量をその必要性のある対象に投与し、それにより、ＧＡＧをダウンレギュレーションすることが対象において治療的に有益である状態または疾患を治療することを含む。
記載された好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、薬剤はアンギオテンシンＩＩアゴニストまたはアンギオテンシンＩＩ活性化因子である。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、状態はリソソーム蓄積状態である。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、リソソーム蓄積状態はムコ多糖症の状態である。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、疾患は嚢胞性線維症である。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、投与することが全身的に行われる。
記載された好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、投与することが局所的に行われる。
本発明は、低いレベルまたは高いレベルのＧＡＧに関連する状態または疾患を治療するための方法およびその使用を提供することによって、現在知られている形態の欠点に対処することに成功している。
別途定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似または同等である方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が下記に記載される。本明細書中で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参考として援用される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
図面の簡単な記述
本明細書では本発明を単に例示し図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の好ましい実施形態を例示考察することだけを目的としており、本発明の原理や概念の態様の最も有用でかつ容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために提示していることを強調するものである。この点について、本発明を基本的に理解するのに必要である以上に詳細に本発明の構造の詳細は示さないが、図面について行う説明によって本発明のいくつもの形態を実施する方法は当業者には明らかになるであろう。
図１Ａ〜図１Ｃは、アルデヒドおよび四酸化オスミウムにより固定処理され、アラルダイトに包埋されたラット腎臓の薄い切片の電子顕微鏡写真画像の写真である（ｘ１００００の原倍率）。図１Ａは、０．９％ＮａＣｌが注射されたコントロールラットの腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。写真は、無数の足突起を有する正常な足細胞構造を示す。図１Ｂは、ピューロマイシンアミノヌクレオシド（ＰＡＮ）注射ラットの腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。写真は、足突起の平坦化および消失を伴う糸球体における足細胞構造の喪失を示す。足細胞の細胞体において、細胞質内空胞を認めることができる。図１Ｃは、エナラプリル治療（５０ｍｇ／ｍｌ）と一緒でのＰＡＮ注射ラットの腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。写真は、正常な足細胞構造の類似する喪失を示す。
図２Ａ〜図２Ｃは、アルデヒドにより固定処理され、ＬＲ−ホワイトに包埋され、ＣＣＧにより標識されたラット腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。図２Ａは、０．９％ＮａＣｌが注射されたコントロールラットの腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。写真は、ＧＢＭに対する強いＣＣＧ結合を示す（ｘ１５０００の原倍率）。図２Ｂは、ＰＡＮ注射ラットの腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。写真は、ＧＢＭに対するＣＣＧ結合における顕著な低下を示す。対照的に、高ＣＣＧ密度の標識化がボーマン嚢において認められる（ｘ１５０００の原倍率）。図２Ｃは、エナラプリル治療（５０ｍｇ／ｍｌ）と一緒でのＰＡＮ注射ラットの腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。写真は、コントロールに類似する強いＣＣＧ結合を示す（ｘ１８０００の原倍率）。
図３は、薄いＬＲ−ホワイト腎臓切片でのＧＢＭに対するＣＣＧ結合の形態計測分析を例示する棒グラフである。結果が、コントロール腎臓、ＰＡＮ腎臓およびエナラプリル治療のＰＡＮ腎臓におけるＣＣＧ密度を比較する、１μｍ２のＧＢＭに結合したＣＣＧ粒子の数として示される。
図４は、培養におけるＲＭＣ結合ＧＡＧの濃度を例示する棒グラフである。ＲＭＣを４０μｇ／ｍｌのＰＡＮおよび増大する用量のエナラプリルとインキュベーションした。結果がμｇＧＡＧ／１０６細胞として示される。
図５Ａ〜図５Ｄは、Ｒｏｌｌｉ Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚの部分的半月板切除の知られているＯＡモデルを使用する変形性関節症（ＯＡ）誘導ラットの組織学的切片の代表的なサンプルの写真である。図５Ａ〜図５Ｂは、何らかのさらなる治療を伴わないラット（すなわち、コントロール）の切片を例示する（図５Ａ〜図５Ｂ）。図５Ｃ〜図５Ｄは、カプトプリルにより治療されたＯＡ誘導ラットである（図５Ｃ〜図５Ｄ）。
本発明は、レニン−アンギオテンシン系を調節する薬剤の投与によるＧＡＧレベルの変化から利益を受けると考えられる疾患を治療する方法に関連する。
具体的には、本発明は、レニン−アンギオテンシン阻害剤の薬剤を投与することによるＧＡＧのアップレギュレーションから利益を受けると考えられる疾患、および、レニン−アンギオテンシン活性化因子の薬剤を投与することによるＧＡＧのダウンレギュレーションから利益を受けると考えられる疾患を治療するために使用することができる。
低いレベルまたは高いレベルのＧＡＧに関連する状態を治療する原理および作用は、実施例および付随する説明を参照してより十分に理解することができる。
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳しく説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明において示される細部、または、実施例によって例示される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は他の実施形態が可能であり、または、様々な方法で実施または実行される。また、本明細書中で用いられる表現法および用語法は記述のためであって、限定であると見なしてはならないことを理解しなければならない。
アンギオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤およびアンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）は一般には、心不全、高血圧および心筋梗塞の管理のために処方される。それらはまた、慢性的腎臓疾患において、また、タンパク尿を伴う腎臓疾患において腎臓機能を保護するための治療の標準であると見なされる。これらの薬剤に関連する腎臓保護の正確な機構は依然として明らかにされてない。
ヒトおよび動物モデルにおけるタンパク尿の病理発生に関与する機構の１つが、糸球体の毛細血管壁（ＧＣＷ）におけるアニオン性部位の喪失である［Ｒａａｔｓ ＣＪＩ他、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ、５７：３８５〜４００、２０００；Ｇｒｏｆｆｅｎ ＡＪＡ他、Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ、１４：２１１９〜２１２９、１９９９］。これらの部位における変化が、ピューロマイシンアミノヌクレオシド（ＰＡＮ）によるネフローゼを有するラットにおいて明らかにされており、従って、このネフローゼは、タンパク尿の病態生理学を研究するための有用なモデルとなっている。
ＰＡＮネフローゼのラットの糸球体における機能的電荷バリアを調べている間に、本発明者らは、予想外ではあったが、ＡＣＥ−Ｉのエナラプリルが、（実施例１に示されるように）ＧＡＧの合成を増大させることによってこれらのラットにおける糸球体のアニオン分布に影響を及ぼしたことを見出している。
このことは、ＲＡＳ経路がＧＡＧの代謝に関与していることの最初のものである。本発明では、ＧＡＧのアップレギュレーションが治療的に有益である疾患または状態、特に、ＧＡＧのレベルにおける不足に関連する疾患または状態を治療するための新規な治療計画を提供するためにこの発見が利用される。本発明ではまた、ＧＡＧレベルの増大に関連する疾患を治療するための治療計画の新規な使用が教示される。
本明細書中下記において、また、下記の実施例の節において例示されるように、ＰＡＮは軟骨細胞結合ＧＡＧの合成における著しい低下をインビトロ系で引き起こした。ＡＣＥ−Ｉおよびアンギオテンシン受容体遮断剤（ＡＲＢ）を加えることにより、３５Ｓの増大した取り込みによって証明されるように、コントロールレベルへの細胞結合ＧＡＧの完全な回復が達成されるまで、この作用の用量依存的な阻害がもたらされた。下記の実施例の節の実施例３において例示されるように、変形性関節症ラットへのＡＣＥ−Ｉの関節内投与は疾患の症状発現を最小限に抑えた。
いくつかの特許出願（例えば、米国特許出願第２００３００７８１９０号および米国特許出願第２００３００４０５０９号）が従来から、本発明によって想定される疾患を含む広範囲の様々な疾患を治療するためのレニン−アンギオテンシン阻害剤の使用を示唆していることが理解される。しかしながら、本発明とは際立って対照的に、これらの特許出願はともに、レニン−アンギオテンシン調節薬剤をそのような状態の治療のために局所投与することを示唆していない。局所投与の利点は、ＲＡＳ調節剤のより大きい用量の投与が、関連した全身的な副作用を伴うことなく許容され得ることである。
さらに、本発明は、ＡＣＥ−ＩおよびＡＲＢが軟骨細胞結合ＧＡＧを増大させることができることを明らかにすることによって、そのような状態を治療することの実現可能性についての実験的証拠を初めて提供する。
ＡＣＥ−Ｉのキナプリルの治療的効果は、マウスにおける炎症性関節炎を抑制することが示された［Ｄａｌｂｅｔｈ他、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、４４：２４〜３１、２００４］。ＡＲＢのカンデサルタンも同様に、疾患の進行に対する類似する阻害作用を有していた。しかしながら、レニン−アンギオテンシン系調節剤の局所投与は示唆されず、また、ＧＡＧに対するこれらの薬剤の作用は仮定されていなかった。
従って、本発明の１つの態様によれば、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患または状態を治療する方法が提供される。
本発明のこの態様の方法は、レニン−アンギオテンシン系の成分の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量をその必要性のある対象に局所投与し、それにより、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患または状態を治療することを含む。
本明細書中で使用される用語「ＧＡＧ」（グリコサミノグリカン）は、細胞結合型でもあり得る、細胞外マトリックスの大きい分子を示す。ＧＡＧは、タンパク質コアに典型的には連結される反復する二糖ユニットから構成される。二糖ユニットはグルコサミンおよびグルクロン酸から構成される。Ｎ−Ａｃ−グルコサミン上の硫酸分子の位置により、ＧＡＧのタイプが決定される（例えば、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸およびケラタン硫酸、または、これらの組合せなど、これらに限定されない）。本発明のＧＡＧはコアタンパク質に結合してもよく、または、結合しなくてもよい。ＧＡＧは、軟骨、骨、皮膚、筋肉、角膜、心臓弁、緩い結合組織のＥＣＭ、基底膜、ならびに、肺、肝臓および皮膚の組織の動脈を裏打ちするマスト細胞（これらに限定されない）を含む組織または組織の一部に存在し得る。
本明細書中で使用される表現「ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である疾患または状態」は、炎症性疾患、骨格筋疾患、軟骨疾患および皮膚疾患を示す。そのような疾患の様々な例が本明細書中下記においてさらに提供される。
本発明のこの態様の好ましい実施形態によれば、治療されている対象は、好ましくは、低いレベルのＧＡＧを示す。低いレベルのＧＡＧは、特定の罹患組織において、コントロールの健康な個体における同じ組織領域に対する比較で決定することができる。
本明細書中で使用される表現「低いレベルのＧＡＧ」は、例えば、軟骨、滑液または皮膚における罹患組織領域に限定される、低いレベルの正常（すなわち、機能的）ＧＡＧを示すか、あるいは、全身的に示される場合がある。低いレベルのＧＡＧは、ＧＡＧ合成およびＧＡＧ分解の間における崩れた平衡の結果としてであり得る。ＧＡＧの生合成は、糖側鎖のアクセプターとしてのコアタンパク質の利用性によって、ならびに、関連した細胞内部におけるグリコシルトランスフェラーゼ［すなわち、コアタンパク質へのグリコシル（糖）残基の転移を触媒する酵素］のレベルおよび利用性によって調節される。ＧＡＧの分解は主として、メタロペプチダーゼによるコアタンパク質の分解によって行われる。
低いレベルのＧＡＧは、例えば、変形性関節症でのように、コアタンパク質（プロテオグリカン）含有量の減少から生じ得る［Ａｌｔｍａｎ ＲＤ他、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ、１６：１７９、１９７３；Ｊａｓｉｎ ＨＥ、Ｄｉｎｇｌｅ ＪＴ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ、６８：５７１〜５８１、１９８１］。あるいは、低いレベルのＧＡＧは、リウマチ様関節炎などでは、自己抗体のアップレギュレーションから生じ得る［Ｗａｎｇ他、Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．、２００２（Ｏｃｔ ２９）、９９（２２）：１４３６２〜７］。ＧＡＧレベルはまた、加齢の関数として低下すること［Ｈｉｃｋｅｒｙ他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７８巻、第５２号、５３０６３〜５３０７１］が、例えば、皮膚［Ｚｉｍｎｉｔｓｋｉｉ他、Ｂｉｏｍｅｄ Ｋｈｉｍ、２００４（Ｍａｙ−Ｊｕ）、５０（３）、３０９〜１３］で示されている。ＧＡＧレベルはまた、狼瘡に関連する皮膚疾患でも低下する［Ａｌａｈｌａｆｉ Ａ．Ｍ．、Ｌｕｐｕｓ、２００４、１３（８）、５９４〜６００］。
本明細書中で使用される用語「対象」は哺乳動物対象を示し、好ましくは、ヒト対象を示す。非ヒト哺乳動物の例には、マウス、ラット、ウサギ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌおよびネコが含まれるが、これらに限定されない。
表現「その必要性のある対象」は、上記疾患のいずれか１つに罹患する対象、または、そのような疾患を発症する危険性がある対象を示す。そのような対象は低いレベルのＧＡＧを示す場合がある。
本明細書中で使用される表現「レニン−アンギオテンシン系」（ＲＡＳ）は、アンギオテンシンＩＩの産生に関わるカスケード系を示す。この系において、プロテアーゼのレニンが前駆体のアンギオテンシノーゲンを切断して、アンギオテンシンＩを産生し、このアンギオテンシンＩ自身がメタロペプチダーゼのアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって切断されて、アンギオテンシンＩＩを産生する。レニン−アンギオテンシン系の成分は、酵素（例えば、レニン（ＥＣ３．４．２３．１５）およびＡＣＥ（ＥＣ３．４．１５．１））、その対象物［アンギオテンシノーゲン（Ｋ０２２１５）およびアンギオテンシンＩを含む］、アンギオテンシンＩＩが相互作用する受容体（例えば、ＡＴ１（ＮＭ＿００９５８５）およびＡＴ２（ＮＭ＿０００６８６））、および、その下流側エフェクターを示す場合がある。
本明細書中で使用される「下流側エフェクター」は、作用（すなわち、アンギオテンシンＩＩがその受容体と相互作用することによるＧＡＧの増大）に関わるシグナル伝達カスケードにおける標的分子を示す。アンギオテンシンＩＩの下流側エフェクターの一例がアルドステロンである。従って、レニン−アンギオテンシン系の成分にはまた、アルドステロンおよびアルドステロン受容体が含まれる場合がある。
ＲＡＳの成分の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる薬剤は、ＲＡＳの少なくとも１つの成分の活性または発現を阻害することができる分子（例えば、化学物質、核酸またはタンパク質性分子またはそれらの組合せなど）を示す。
タンパク質またはタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる様々な薬剤が当技術分野で周知である。
化学的阻害剤
例えば、ＲＡＳの成分の活性または発現をダウンレギュレーションすることができる薬剤はＲＡＳの化学的阻害剤である場合がある。これには、投与したとき、ＧＡＧの産生に対するＲＡＳの作用を、アンギオテンシンＩＩの合成を低下させることによって、または、その作用を受容体において遮断することによって阻止する任意の化合物が含まれる。
ＲＡＳの化学的阻害剤には、ＡＣＥ阻害剤、アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト、アルドステロン阻害剤、アルドステロン受容体アンタゴニスト、レニン阻害剤、および、それらの医薬的に許容され得る誘導体（プロドラッグおよび代謝産物を含む）が含まれるが、これらに限定されない。
ＲＡＳ阻害剤の医薬的に許容され得る誘導体は、ＲＡＳ阻害剤の生理学的に許容可能な塩を含むことが理解され、そのような生理学的に許容可能な塩は、その有機塩および無機塩の両方を意味するとして理解され、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１７版、１４１８頁（１９８５））などに記載される。物理的および化学的な安定性ならびに溶解性のために、酸性基については、とりわけ、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩およびアンモニウム塩が好ましく、塩基性基については、とりわけ、塩酸、硫酸、リン酸の塩、あるいは、カルボン酸またはスルホン酸（例えば、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸およびｐ−トルエンスルホン酸など）の塩が好ましい。
本明細書中で使用される用語「代謝産物」は、その投与の後での、例えば、肝臓における加水分解の後での本発明の薬剤の分解生成物を示す。活性な代謝産物の一例がエナロプリラト（ｅｎａｌｏｐｒｉｌａｔ）であり、これはエナロプリル（ｅｎａｌｏｐｒｉｌ）の生物転換生成物である。
表現「ＡＣＥ阻害剤」は、ＡＣＥの活性（例えば、アンギオテンシンのオクタペプチド形態（「アンギオテンシンＩＩ」）へのアンギオテンシンの生理学的に不活性なデカペプチド形態（「アンギオテンシンＩ」）の酵素変換）を少なくとも部分的にダウンレギュレーションすることができる化学的薬剤を示す。典型的なＡＣＥ阻害剤が、中性エンドペプチダーゼ（ＮＥＰ）阻害活性および／またはアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害活性によって特徴づけられるＮＥＰ／ＡＣＥ阻害剤である。
本発明のこの態様による使用に好適なＡＣＥ阻害剤の例には、ＡＢ−１０３、アンコベニン、ベナゼプリラト、ＢＲＬ−３６３７８、ＢＷ−Ａ５７５Ｃ、ＣＧＳ−１３９２８Ｃ、ＣＬ２４２８１７、ＣＶ−５９７５、Ｅｑｕａｔｅｎ、ＥＵ４８６５、ＥＵ４８６７、ＥＵ−５４７６、ホロキシミチン、ＦＰＬ６６５６４、ＦＲ−９００４５６、Ｈｏｅ−０６５、Ｉ５Ｂ２、インドラプリル、ケトメチルウレアス（ｋｅｔｏｍｅｔｈｙｌｕｒｅａｓ）、ＫＲＩ−１１７７、ＫＲＩ−１２３０、Ｌ６８１１７６、リベンザプリル、ＭＣＤ、ＭＤＬ−２７０８８、ＭＤＬ−２７４６７Ａ、モベルチプリル、ＭＳ−４１、ニコチアナミン、ペントプリル、フェナセイン、ピボプリル、レンチアプリル、ＲＧ−５９７５、ＲＧ−６１３４、ＲＧ−６２０７、ＲＧＨ０３９９、ＲＯＯ−９１１、ＲＳ−１００８５−１９７、’ＲＳ−２０３９、ＲＳ５１３９、ＲＳ８６１２７、ＲＵ−４４４０３、Ｓ−８３０８、ＳＡ−２９１、スピラプリラト、ＳＱ２６９００、ＳＱ−２８０８４、ＳＱ−２８３７０、ＳＱ−２８９４０、ＳＱ−３１４４０、Ｓｙｎｅｃｏｒ、ウチバプリル、ＷＦ−１０１２９、Ｗｙ−４４２２１、Ｗｙ−４４６５５、Ｙ−２３７８５、Ｙｉｓｓｕｍ、Ｐ−０１５４、ザビシプリル、Ａｓａｈｉ Ｂｒｅｗｅｒｙ ＡＢ−４７、アラトリオプリル、ＢＭＳ１８２６５７、Ａｓａｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ−１１１、Ａｓａｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ−１１２、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ ＤＵ−１７７７、ミキサンプリル（ｍｉｘａｎｐｒｉｌ）、Ｐｒｅｎｔｙｌ、ゼフェノプリラト、１（−（Ｉ−カルボキシ−６−（４−ピペリジニル）ヘキシル）アミノ）−１−オキソプロピルオクタヒドロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、Ｂｉｏｐｒｏｊｅｃｔ ＢＰ１．１３７、Ｃｈｉｅｓｉ ＣＨＦ１５１４、Ｆｉｓｏｎｓ ＦＰＬ−６６５６４、イドラプリル、ペリンドプリラトおよびＳｅｒｖｉｅｒ Ｓ−５５９０、アラセプリル、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラト、ホシノプリル、ホシノプリラト、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、ラミプリラト、酢酸サララシン、テモカプリル、トランドラプリル、トランドラプリラト、セラナプリル、モエキシプリル、キナプリラトおよびスピラプリルが含まれるが、これらに限定されない。
そのようなＡＣＥ阻害剤は市販されている。例えば、ＡＣＥ阻害剤のラミプリル（これは欧州特許ＥＰ７９０２２から知られている）が、Ａｖｅｎｔｉｓによって、例えば、Ｄｅｌｉｘ（登録商標）またはＡｌｔａｃｅ（登録商標）の商標で販売される。エナラプリルまたはマレイン酸エナラプリル、および、リシノプリルの２つが、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ ＣｏおよびＳｉｇｍａ（カタログ番号０７７３）によって販売される。エナラプリルはＶａｓｏｔｅｃ（登録商標）の商標で販売される。リシノプリルはＰｒｉｎｉｖｉｌ（登録商標）の商標で販売される。
本明細書中での使用のために好適であるＮＥＰ／ＡＣＥ阻害剤の例には、米国特許第５５０８２７２号、同第５３６２７２７号、同第５３６６９７３号、同第５２２５４０１号、同第４７２２８１０号、同第５２２３５１６号、同第５５５２３９７号、同第４７４９６８８号、同第５５０４０８０号、同第５６１２３５９号、同第５５２５７２３号、同第５４３０１４５号および同第５６７９６７１号、ならびに、欧州特許出願第０４８１５２２号、同第０５３４２６３号、同第０５３４３９６号、同第０５３４４９２号および同第０６７１１７２号に開示されるＮＥＰ／ＡＣＥ阻害剤が含まれる。
表現「アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト」は、アンギオテンシン受容体（好ましくは、ＡＴ１受容体）に結合することによりアンギオテンシンＩＩの活性を部分的または完全にダウンレギュレーションすることができる（例えば、ＧＡＧを低下させることができる）化学的薬剤を示す。
本発明のこの態様による使用に好適なアンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニストの例には、酢酸サララシン、カンデサルタンシレキセチル、ＣＧＰ−６３１７０、ＥＭＤ−６６３９７、ＫＴ３−６７１、ＬＲ−Ｂ／０８１、バルサルタン、Ａ−８１２８２、ＢＩＢＲ−３６３、ＢＩＢＳ−２２２、ＢＭＳ−１８４６９８、カンデサルタン、ＣＶ−１１１９４、ＥＸＰ−３１７４、ＫＷ−３４３３、Ｌ−１６１１７７、Ｌ−１６２１５４、ＬＲ−Ｂ／０５７、ＬＹ−２３５６５６、ＰＤ−１５０３０４、Ｕ−９６８４９、Ｕ−９７０１８、ＵＰ−２７５−２２、ＷＡＹ−１２６２２７、ＷＫ−１４９２．２Ｋ、ＹＭ−３１４７２、ロサルタンカリウム、Ｅ４１７７、ＥＭＤ−７３４９５、エプロサルタン、ＨＮ−６５０２１、イルベサルタン、Ｌ−１５９２８２、ＭＥ−３２２１、ＳＬ−９１．０１０２、Ｔａｓｏｓａｒｔａｎ、Ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ、ＵＰ−２６９−６、ＹＭ−３５８、ＣＧＰ−４９８７０、ＧＡ−００５６、Ｌ−１５９６８９、Ｌ−１６２２３４、Ｌ−１６２４４１、Ｌ−１６３００７、ＰＤ−１２３１７７、Ａ−８１９８８、ＢＭＳ−１８０５６０、ＣＧＰ−３８５６０Ａ、ＣＧＰ−４８３６９、ＤＡ−２０７９、ＤＥ−３４８９、ＤｕＰ−１６７、ＥＸＰ−０６３、ＥＸＰ−６１５５、ＥＸＰ−６８０３、ＥＸＰ−７７１１、ＥＸＰ−９２７０、ＦＫ−７３９、ＨＲ−７２０、ＩＣＩ−Ｄ６８８８、ＩＣＩ−Ｄ７１５５、ＩＣＩ−Ｄ８７３１、イソテオリン（ｉｓｏｔｅｏｌｉｎｅ）、ＫＲＩ−１１７７、Ｌ−１５８８０９、Ｌ−１５８９７８、Ｌ−１５９８７４、ＬＲ Ｂ０８７、ＬＹ−２８５４３４、ＬＹ−３０２２８９、ＬＹ−３１５９９５、ＲＧ−１３６４７、ＲＷＪ−３８９７０、ＲＷＪ−４６４５８、Ｓ−８３０７、Ｓ−８３０８、サプリサルタン、サララシン、Ｓａｒｍｅｓｉｎ、ＷＫ−１３６０、Ｘ−６８０３、ＺＤ−６８８８、ＺＤ−７１５５、ＺＤ−８７３１、ＢＩＢＳ３９、ＣＩ−９９６、ＤＭＰ−８１１、ＤｕＰ−５３２、ＥＸＰ−９２９、Ｌ−１６３０１７、ＬＹ−３０１８７５、ＸＨ−１４８、ＸＲ−５１０、ゾラサルタンおよびＰＤ−１２３３１９が含まれるが、これらに限定されない。これらの阻害剤は市販されている。
本発明のこの態様による使用に好適なレニン阻害剤の例には、エナルクレイン；ＲＯ４２−５８９２；Ａ６５３１７；ＣＰ８０７９４；ＥＳ１００５；ＥＳ８８９１；ＳＱ３４０１７；ＣＧＰ２９２８７；ＣＧＰ３８５６０；ＳＲ４３８４５；Ｕ−７１０３８；Ａ６２１９８；Ａ６４６６２；Ａ−６９７２９；ＦＫ９０６およびＦＫ７４４が含まれるが、これらに限定されない。
表現「アルドステロン阻害剤」は、アルドステロンの合成または活性を直接的または間接的に低下させるか、または妨げることによってプレ受容体機構を介してアルドステロンの活性を部分的または完全にダウンレギュレーションすることができる（すなわち、ＧＡＧを低下させることができる）化学的薬剤を示す。
本発明のアルドステロン阻害剤の例には、アロマターゼ阻害剤、例えば、Ｒ−７６７１３、Ｒ−８３８４２、ＣＧＳ−１６９４９Ａ（ファドロゾール）、ＣＧＳ−２０２６７（レトロゾール）、ＣＧＳ−２０２６７、アミノグルテタミド、ＣＧＳ−４７６４５、ＩＣＩ−Ｄ−１０３３、クロモン誘導体＆キサントン誘導体およびＹＭ−５１１など；１２−リポキシゲナーゼ阻害剤、例えば、ＰＤＧＦ、ＴＮＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−１β、ＢＷ７５５ｃ、フェニドン、バイカレイン、アミノグアニジン、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）、シンナミル−３，４−ジヒドロキシ−α−シアノシンナマート（ＣＤＣ）、パナキシノール、ピオグリタゾンおよびｍＲＮＡ切断リボザイムなど；Ｐ４５０．ｓｕｂ．１１．ｂｅｔａ．阻害剤、例えば、１８−ビニルプロゲステロンおよび１８−エチニルプロゲステロンなど、脂肪酸、例えば、オレイン酸など；１８−ビニルデオキシコルチコステロン、ケトコナゾール、クロトリマゾール、ミコナゾール、エトミダート、スピロノラクトンおよび２３−０５８６など；心房性ナトリウム利尿因子、例えば、ＡＮＰ、ＡＮＦおよびＡＮＦフラグメントなど；１７，２０リサーゼ（ｌｙｓａｓｅ）阻害剤、例えば、ＹＭ−５５２０８およびＹＭ−５３７９８など；プロスタグランジン合成阻害剤、例えば、インドメタシン、メクロフェナマート、アミノグルテタミドおよびアスピリンなど；ＰＫＣ阻害剤、例えば、スフィンゴシン、レチナール、Ｈ−７、スタウロスポリンおよびトリフルオペラジンなど；ベンゾジアゼピン系薬剤、例えば、ジアゼパムおよびミダゾラムなど；カルシウム遮断剤、例えば、アムロジピンおよびミベフラジルなど；ジアシルグリセロールリパーゼ阻害剤、例えば、ＲＨＣ−８０２６７［１，６−ビス（シクロヘキシルオキシミノカルボニルアミノ）ヘキサン］など；カリウムイオノホア、例えば、バリノマイシンおよびクロマカリムなど；電子伝達遮断剤（代謝拮抗剤）、例えば、アンチマイシンＡ、シアニド、ロテノンおよびアミタールなど；ドーパミン（プロラクチン阻害ホルモン）、クロルブトール、１８−エチニル−１１−デオキシコルチコステロン（１８−ＥｔＤＯＣ）など；およびエタノールが含まれるが、これらに限定されない。
表現「アルドステロンアンタゴニスト」は、アルドステロン受容体に結合することによってアルドステロンの活性を部分的または完全にダウンレギュレーションすることができる（すなわち、ＧＡＧを低下させることができる）化学的薬剤を示す。
アルドステロンアンタゴニストの例には、スピロノラクトン、アルダクトン、ドロスピレノン、エポキシメキスレノンおよびエプレレノンが含まれるが、これらに限定されない。
タンパク質薬剤
ＲＡＳをダウンレギュレーションすることができる薬剤の別の一例が、ＲＡＳの成分と特異的に結合し、その活性を少なくとも部分的にダウンレギュレーションすることができる抗体または抗体フラグメント（すなわち、中和抗体）である。例えば、抗体は、ＡＣＥに、好ましくは、その２つの触媒作用ドメインの一方に結合し、それにより、その機能を妨げることができる。あるいは、抗体または抗体フラグメントは、ＡＣＥに存在する活性化部位に結合することができる。ＡＣＥセクレターゼは、ＡＣＥの膜結合形態を切断することに関わっており、従って、ＡＣＥが、「シェディング（ｓｈｅｄｄｉｎｇ）」として知られているプロセスで可溶性酵素として細胞外液（例えば、血漿ならびに精液および脳脊髄液など）に放出され得る。シェディングプロセスを妨げる、ＡＣＥのシェディングドメインに対して惹起された抗体が当技術分野で既知である（例えば、ｍＡｂ ３Ｇ８［Ｂａｌｙａｓｎｉｋｏｖａ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（２００２）、３６２（５８５〜５９５）］。ＡＣＥに対して惹起された他のモノクローナル抗体が市販されている（例えば、カタログ＃ＡＣＥ２３−ＭＡＤＩ、Ｓａｎ Ａｎｔｏｎｉｏ（米国））。
レニンについての抗体（例えば、カタログ番号：ＲＤＩ−ｒｔｒｅｎｉｎａｂｍ）、および、アンギオテンシノーゲンについての抗体（例えば、カタログ番号：ＲＤＩ−ｒｔａｎｇｔｅｎａｂｍ）もまた市販されており、これらはともに、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、米国）から得られる。
好ましくは、抗体はタンパク質の少なくとも１つのエピトープに特異的に結合する。本明細書中で使用される用語「エピトープ」は、抗体のパラトープが結合する抗原における任意の抗原性決定基を示す。ＡＣＥ触媒作用ドメインのエピトープは好ましくは、Ａｒｇ−１２０３およびＳｅｒ−１２０４を含む［Ｐａｒｋｉｎ他、Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｌｅｔｔｅｒｓ、２００４（１０月）、第１１巻、第５号、４２３頁〜４３２頁（１０）］。
エピトープ決定基は、通常、分子の化学的に活性な表面基（例えば、アミノ酸または炭水化物側鎖など）からなり、また、通常、特異的な電荷特徴と同様に、特異的な三次元の構造的特徴を有する。
本発明で使用される用語「抗体」には、完全な分子ならびにマクロファージによって示される抗原に結合することができるその機能的フラグメント（Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖなど）が含まれる。これらの機能的抗体フラグメントを以下のように定義する：（１）Ｆａｂ：抗体分子の１価の抗原結合フラグメントを含み、完全な軽鎖および１つの重鎖の一部を得るために酵素パパインでの完全な抗体の消化によって産生される、フラグメント；（２）Ｆａｂ’：完全な軽鎖および重鎖の一部を得るためにペプシンでの完全な抗体の処理およびその後の還元によって得ることができる抗体分子のフラグメント；抗体分子あたり２つのＦａｂ’フラグメントが得られる；（３）（Ｆａｂ’）２：その後に還元することなく酵素ペプシンでの完全な抗体の処理によって得ることができる抗体のフラグメント；（Ｆａｂ’）２は、２つのジスルフィド結合により互いに結合した２つのＦａｂ’フラグメントの二量体である；（４）Ｆｖ：２つの鎖として発現された軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む遺伝子操作されたフラグメントとして定義される；および（５）単鎖抗体（「ＳＣＡ」）：適切なペプチドリンカーによって連結された軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む、遺伝子融合された１本鎖分子としての遺伝子操作された分子。
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体、ならびにそれらのフラグメントの作製方法は、当該分野で周知である（例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８８（本明細書中で参考として援用されている）を参照のこと）。
本発明の抗体フラグメントは、抗体のタンパク質加水分解によって、またはＥ．ｃｏｌｉまたは哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞培養物または他のタンパク質発現系）でフラグメントをコードするＤＮＡを発現させることによって調製することができる。従来の方法による完全な抗体のペプシンまたはパパイン消化によって、抗体フラグメントを得ることができる。例えば、Ｆ（ａｂ’）２と呼ばれる５Ｓフラグメントを得るためのペプシンでの抗体の酵素分解によって抗体フラグメントを産生することができる。チオール還元剤、および必要に応じて、ジスルフィド結合の切断により生じるスルフヒドリル基をブロックする基を使用してこのフラグメントをさらに切断して、１価の３．５ＳＦａｂ’フラグメントを産生することができる。あるいは、ペプシンを使用した酵素切断により、２つの１価のＦａｂ’フラグメントおよびＦｃフラグメントを直接産生する。これらの方法は、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇ、米国特許第４０３６９４５号、および同第４３３１６４７号ならびにこれらに記載の参考文献（これらの特許は、その全体が本明細書中で参考として援用されている）によって記載されている。Ｐｏｒｔｅｒ，Ｒ．Ｒ．（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，７３：１１９−１２６，１９５９）もまた参照のこと。フラグメントが完全な抗体によって認識される抗原に結合する限りは、１価の軽鎖−重鎖フラグメントを形成するための重鎖の分離、フラグメントのさらなる切断、または他の酵素技術、化学的技術、または遺伝子技術などの抗体を切断するための他の方法を使用することもできる。
Ｆｖフラグメントは、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖の結合を含む。Ｉｎｂａｒ他（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ６９：２６５９−６２，１９７２）に記載のように、この結合は非共有結合であり得る。あるいは、可変鎖は、分子内ジスルフィド結合によって結合するか、グルタルアルデヒドなどの化学物質によって架橋することができる。好ましくは、Ｆｖフラグメントは、ペプチド結合によって連結したＶＨ鎖およびＶＬ鎖を含む。これらの単鎖抗原結合タンパク質（ｓＦｖ）を、オリゴヌクレオチドによって連結されたＶＨおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を含む構造遺伝子の構築によって調製する。構造遺伝子を発現ベクターに挿入し、その後Ｅ．ｃｏｌｉなどの宿主細胞に導入する。組換え宿主細胞は、２つのＶドメインを架橋するリンカーペプチドを有する単鎖ポリペプチドを合成する。ｓＦｖの産生方法は、例えば、Ｗｈｉｔｌｏｗ およびＦｉｌｐｕｌａ（（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ，２：９７−１０５）；Ｂｉｒｄ他（（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６）；Ｐａｃｋ他（（１９９３）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １１：１２７１−７７）；および米国特許第４９４６７７８号（本明細書中で参考として援用されている）によって記載されている。
抗体フラグメントの別の形態は、単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするペプチドである。ＣＤＲペプチド（「最小認識単位」）を、目的の抗体のＣＤＲをコードする遺伝子の構築によって得ることができる。このような遺伝子は、例えば、抗体産生細胞のＲＮＡから可変領域を合成するためのポリメラーゼ連鎖反応を使用して調製する。例えば、ＬａｒｒｉｃｋおよびＦｒｙ（（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，２：１７２−１８９および米国特許第６５８００１６号）を参照のこと。
非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖または非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含むそのフラグメント（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合配列など）のキメラ分子である。ヒト化抗体には、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）を形成する残基が所望の特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどのヒト以外の種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基に置換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基を、対応する非ヒト残基に置換する。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体、取り込まれたＣＤＲ、またはフレームワーク配列のいずれにも見出されない残基を含み得る。一般に、ヒト化抗体は、全てのまたは実質的に全てのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、全てのまたは実質的に全てのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である、実質的に全ての、少なくとも１つの、典型的には２つの可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、必要に応じて、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的には、ヒト免疫グロブリンの定常領域）の少なくとも一部を含む（Ｊｏｎｅｓ他，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ 他，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２９（１９８８）；ａｎｄ Ｐｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２））。
非ヒト抗体のヒト化方法は、当該分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は、ヒト以外の供給源由来のアミノ酸残基に導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。典型的には導入可変ドメインから採取されるこれらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば導入残基といわれる。本質的に、げっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列の対応するヒト抗体配列との置換によるＷｉｎｔｅｒ ａｎｄ ｃｏ−ｗｏｒｋｅｒｓの方法（Ｊｏｎｅｓ他，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ他，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））にしたがってヒト化を行うことができる。したがって、このようなヒト化抗体は、実質的に完全ではないヒト可変ドメインがヒト以外の種由来の対応配列に置換されているキメラ抗体である（米国特許第４８１６５６７号）。実際には、ヒト化抗体は一般に、いくつかのＣＤＲ残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基がげっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基によって置換されているヒト抗体である。
当該分野で公知の種々の技術（ファージディスプレイライブラリーを含む）を使用してヒト抗体を産生することもできる（ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９２）；Ｍａｒｋｓ他，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））。ヒトモノクローナル抗体の調製のためのＣｏｌｅ他およびＢｏｅｒｎｅｒ他の技術も利用可能である（Ｃｏｌｅ他，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）およびＢｏｅｒｎｅｒ他，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１））。同様に、トランスジェニック動物（例えば、外因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活化されているマウス）へのヒト免疫グロブリン遺伝子座の導入によってヒト抗体を作製することができる。チャレンジにより、ヒト抗体産生が認められる。これは、遺伝子の再配置、構築、および抗体レパートリーを含むあらゆる点でヒトで認められる特徴に非常に類似している。このアプローチは、例えば、米国特許第５５４５８０６号、同第５５４５８０７号、同第５５６９８２５号、同第５６２５１２６号、同第５６３３４２５号、同第５６６１０１６号、および以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓ他，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０，７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ他，Ｎａｔｕｒｅ ３６８ ８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８ ８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ他，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８２６（１９９６）；Ｌｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３ ６５−９３（１９９５）に記載されている。
あるいは、ＲＡＳの活性をダウンレギュレーションすることができる別のタンパク質性薬剤は、その非機能的誘導体（すなわち、優性ネガティブ体）が可能である。タンパク質を不活性にする様々な変異を含むＡＣＥ形態が当技術分野で既知である［Ｒｉｇａｔ他、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ、８６、１３４３］。様々な変異がレニン遺伝子においてもまた生じ得る。これらには、例えば、２つのナンセンス変異が含まれる［Ｈａｓｉｍｕ他、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、２００３（Ｆｅｂ）、４１（２）：３０８〜１２；Ｖｉｌｌａｒｄ他、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、１９９４（Ｄｅｃ ２）、２６９（４８）：３０３０７〜１２］。
これらの非機能的誘導体および他の誘導体を模倣するペプチドを、当技術分野では周知であり、また、Ｊｏｈｎ Ｍｏｒｒｏｗ ＳｔｅｗａｒｔおよびＪａｎｉｓ Ｄｉｌｌａｈａ Ｙｏｕｎｇ［Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ（第２版、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８４）］によって記載される固相ペプチド合成法を使用して合成することができる。合成ペプチドは調製用高速液体クロマトグラフィーによって精製することができ［Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ Ｔ．（１９８３）、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ、ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｎ．Ｙ．］、また、その組成をアミノ酸配列決定によって確認することができる。
多量のペプチドが所望される場合、多量のペプチドを、例えば、Ｂｉｔｔｅｒ他（１９８７）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５３：５１６〜５４４；Ｓｔｕｄｉｅｒ他（１９９０）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１８５：６０〜８９；Ｂｒｉｓｓｏｎ他（１９８４）、Ｎａｔｕｒｅ、３１０：５１１〜５１４；Ｔａｋａｍａｔｓｕ他（１９８７）、ＥＭＢＯ Ｊ．、６：３０７〜３１１；Ｃｏｒｕｚｚｉ他（１９８４）、ＥＭＢＯ Ｊ．、３：１６７１〜１６８０；Ｂｒｏｇｌｉ他（１９８４）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２４：８３８〜８４３；Ｇｕｒｌｅｙ他（１９８６）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、６：５５９〜５６５；Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ＆Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ、１９８８、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ）、第ＶＩＩＩ節、４２１頁〜４６３頁などによって記載される組換え技術を使用して作製することができる。
核酸薬剤
あるいは、本発明のこの態様の薬剤は、ＲＡＳに関与する成分を発現する内因性の核酸配列に向けられたオリゴヌクレオチドである場合がある。
小さい干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子は、ＲＡＳに関与する成分をダウンレギュレーションすることができるオリゴヌクレオチド薬剤の例である。ＲＮＡ干渉は２つの工程プロセスである。開始工程と称される第一工程では、加えられたｄｓＲＮＡがたぶんダイサー（ｄｓＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼのＲＮＡａｓｅ ＩＩＩファミリーの一員であり、ｄｓＲＮＡ（直接導入されたか、または発現ベクター、カセットまたはウイルスを介して導入される）をＡＴＰ依存性の様式で開裂する）の作用によって２１〜２３個のヌクレオチド（ｎｔ）の小さい干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）分子へと消化される。連続する開裂事象はＲＮＡを１９〜２１ｂｐの二本鎖（ｓｉＲＮＡ）に分解し、それぞれの鎖は２−ヌクレオチド３’オーバーハングを有する（ＨｕｔｖａｇｎｅｒおよびＺａｍｏｒｅ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２：２２５−２３２（２００２）；およびＢｅｒｎｓｔｅｉｎ Ｎａｔｕｒｅ ４０９：３６３−３６６（２００１））。
エフェクター工程では、ｓｉＲＮＡ二本鎖はヌクレアーゼ複合体に結合してＲＮＡによって誘導されるサイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）を形成する。ｓｉＲＮＡ二本鎖のＡＴＰ依存性巻き戻しがＲＩＳＣの活性化のために要求される。次に、活性なＲＩＳＣは、塩基対合相互作用によって相同な転写物を標的とし、ｍＲＮＡをｓｉＲＮＡの３’末端から１２ヌクレオチドの断片へと開裂する（ＨｕｔｖａｇｎｅｒおよびＺａｍｏｒｅ Ｃｕｒｒ，Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２：２２５−２３２（２００２）；Ｈａｍｍｏｎｄ他（２００１）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎ．２：１１０−１１９（２００１）；およびＳｈａｒｐ Ｇｅｎｅｓ．Ｄｅｖ．１５：４８５−９０（２００１））。開裂のメカニズムは未だ解明されようとしているが、研究は各ＲＩＳＣが単一のｓｉＲＮＡおよびＲＮａｓｅを含むことを示している（ＨｕｔｖａｇｎｅｒおよびＺａｍｏｒｅ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２：２２５−２３２（２００２））。
ＲＮＡｉの顕著な有効性のため、ＲＮＡｉ経路内の増幅工程が示唆されている。増幅は、加えられたｄｓＲＮＡを複写すること（これはより多くのｓｉＲＮＡを生み出す）によって、または形成されたｓｉＲＮＡを複製することによって生じることがありうる。代わりにまたは追加的に、増幅はＲＩＳＣの多数の代謝事象によって行われることがありうる（Ｈａｍｍｏｎｄ他 Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎ．２：１１０−１１９（２００１），Ｓｈａｒｐ Ｇｅｎｅｓ．Ｄｅｖ．１５：４８５−９０（２００１），ＨｕｔｖａｇｎｅｒおよびＺａｍｏｒｅ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２：２２５−２３２（２００２））。ＲＮＡｉについてのさらなる情報については、Ｔｕｓｃｈｌ ＣｈｅｍＢｉｏｃｈｅｍ．２：２３９−２４５（２００１）；Ｃｕｌｌｅｎ Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３：５９７−５９９（２００２）；およびＢｒａｎｔｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ．１５７５：１５−２５（２００２）の解説を参照されたい。
本発明で用いるのに好適なＲＮＡｉ分子の合成は以下のようにして行われることができる。まず、ｍＲＮＡ配列標的はＡＡジヌクレオチド配列についてＡＵＧ開始コドンの下流に走査される。各ＡＡおよび３’隣接１９ヌクレオチドの存在は潜在的なｓｉＲＮＡ標的部位として記録される。好ましくはｓｉＲＮＡ標的部位はオープンリーディングフレームから選択される。なぜなら、非翻訳領域（ＵＴＲ）は制御タンパク質結合部位に富んでいるからである。ＵＴＲ結合タンパク質および／または翻訳開始複合体はｓｉＲＮＡエンドヌクレアーゼ複合体の結合に干渉するかもしれない（Ｔｕｓｃｈｌ（２００１）ＣｈｅｍＢｉｏｃｈｅｍ．２：２３９−２４５）。しかし、非翻訳領域に指向されたｓｉＲＮＡもＧＡＰＤＨについて示されているように効果的であることは理解されるであろう。ＧＡＰＤＨについては、５’ＵＴＲに指向されたｓｉＲＮＡは細胞内ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの約９０％の減少を媒介し、タンパク質レベルを有意に減少させた（ｗｗｗ．ａｍｂｉｏｎ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｌｉｂ／ｔｎ／９１／９１２．ｈｔｍｌ）。
次に、可能性のある標的部位は、ＮＣＢＩサーバ（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）から入手可能なＢＬＡＳＴソフトウェアなどのいかなる配列アラインメントソフトウェアを用いて適切なゲノムデータベース（例えばヒト、マウス、ラットなど）と比較される。他のコード配列に対して顕著な相同性を示す仮想的な標的部位は取り除かれる。
定性化する標的配列はｓｉＲＮＡ合成のための鋳型として選択される。好ましい配列は低いＧ／Ｃ含有量を含む配列である。なぜなら、かかる配列は、５５％より高いＧ／Ｃ含有量を有する配列と比較してより効果的に遺伝子サイレンシングを媒介することが証明されているからである。いくつかの標的部位は評価のために標的遺伝子の長さに沿って選択されることが好ましい。選択されたｓｉＲＮＡのより良好な評価のためには、陰性コントロールを併用することが好ましい。陰性コントロールｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡと同じヌクレオチド組成を含むがゲノムに対する顕著な相同性を欠くことが好ましい。従って、いかなる他の遺伝子に対しても顕著な相同性を示さないという条件の下で、ｓｉＲＮＡの混合されたヌクレオチド配列は用いられることが好ましい。
ｄｓＲＮＡを使用して、ＡＣＥを首尾よく阻害した一例が、Ｂｒｏｏｋｓ他［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２７８巻、第５２号、５２３４０〜５２３４６、２００３］によって提供される。
ＲＡＳに関与する成分をダウンレギュレーションすることができる別のオリゴヌクレオチド薬剤が、標的のｍＲＮＡ転写物またはＤＮＡ配列を特異的に切断することができるＤＮＡザイム分子である。ＤＮＡザイムは、一本鎖および二本鎖の両方の標的配列を切断することができる一本鎖ポリヌクレオチドである（Ｂｒｅａｋｅｒ，Ｒ．Ｒ．およびＪｏｙｃｅ，Ｇ．、Ｇ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９５、２：６５５；Ｓａｎｔｏｒｏ、Ｓ．Ｗ．＆Ｊｏｙｃｅ，Ｇ．Ｆ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９７、９４：４２６２）。ＤＮＡザイムについての一般的なモデル（「１０−２３」モデル）が提案されている。「１０−２３」ＤＮＡザイムは、それぞれが７個〜９個のデオキシリボヌクレオチドからなる２つの基質認識ドメインが隣接する、１５個のデオキシリボヌクレオチドからなる触媒作用ドメインを有する。このタイプのＤＮＡザイムはその基質ＲＮＡをプリン：ピリミジン接合部において効率的に切断することができる（Ｓａｎｔｏｒｏ、Ｓ．Ｗ．＆Ｊｏｙｃｅ，Ｇ．Ｇ．、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９；ＤＮＡザイムの総説については、Ｋｈａｃｈｉｇｉａｎ，Ｌ．Ｍ．［Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ、４：１１９〜２１（２００２）］を参照のこと）。
一本鎖および二本鎖の標的の切断部位を認識する合成および操作されたＤＮＡザイムの構築および増幅の様々な例が米国特許第６３２６１７４号（Ｊｏｙｃｅ他）に開示されている。ヒトウロキナーゼ受容体に対して向けられた類似する設計のＤＮＡザイムが最近、ウロキナーゼ受容体の発現を阻害し、また、結腸ガン細胞の転移をインビボで首尾よく阻害することが認められた（Ｉｔｏｈ他、２００２、アブストラクト４０９、Ａｎｎ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｍ Ｓｏｃ Ｇｅｎ Ｔｈｅｒ、ｗｗｗ．ａｓｇｔ．ｏｒｇ）。別の適用では、ｂｃｒ−ａｂ１ガン遺伝子に対して相補的なＤＮＡザイムが、白血病細胞におけるガン遺伝子の発現を阻害すること、ならびに、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）の場合には自家骨髄移植における再発率を低下させることに成功していた。
ＲＡＳに関与する成分のダウンレギュレーションはまた、ＲＡＳに関与する成分をコードするｍＲＮＡ転写物と特異的にハイブリダイゼーションすることができるアンチセンスポリヌクレオチド（例えば、ＡＣＥの２つの触媒作用部位の一方に向けられたアンチセンスオリゴヌクレオチド）を使用することによって行うことができる。
ＲＡＳ系に関与する成分を有効にダウンレギュレーションするために使用されることができるアンチセンス分子の設計は、アンチセンスアプローチに対する２つの重要な側面を考慮に入れて行われなければならない。第一の側面は適切な細胞の細胞質中へのオリゴヌクレオチドの送達であり、第二の側面は細胞内の指定されたｍＲＮＡの翻訳を阻害するような態様で細胞内の指定されたｍＲＮＡに特異的に結合するオリゴヌクレオチドの設計である。
従来技術は、幅広い種類の細胞中にオリゴヌクレオチドを効果的に送達するために用いられることができる多数の送達戦略を教示する（例えばＬｕｆｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ７６：７５−６（１９９８）；Ｋｒｏｎｅｎｗｅｔｔ他，Ｂｌｏｏｄ ９１：８５２−６２（１９９８）；Ｒａｊｕｒ他，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ ８：９３５−４０（１９９７）；Ｌａｖｉｇｎｅ他，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２３７：５６６−７１（１９９７）およびＡｏｋｉ他 Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２３１：５４０−５（１９９７）を参照）。
加えて、標的ｍＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドの両方における構造的変化のエネルギーを計算に入れる熱動力学サイクルに基づく標的ｍＲＮＡに対する最高の予想された結合親和性を有する配列を同定するためのアルゴリズムも利用可能である（例えばＷａｌｔｏｎ他，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ６５：１−９（１９９９）参照）。
かかるアルゴリズムは、細胞におけるアンチセンスアプローチを実行するために成功して用いられている。例えば、Ｗａｌｔｏｎ他によって開発されたアルゴリズムを用いて科学者はウサギのベータグロブリン（ＲＢＧ）およびマウスの腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦアルファ）転写物に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを設計するのに成功している。同じ研究グループは、動的ＰＣＲ技術によって評価されるように細胞培養物中で３つのモデル標的ｍＲＮＡ（ヒトの乳酸デヒドロゲナーゼＡおよびＢおよびラットのｇｐ１３０）に対する合理的に選択されたオリゴヌクレオチドのアンチセンス活性がホスホジエステルおよびホスホロチオエートオリゴヌクレオチド化学を用いた２つの細胞型における３つの異なる標的に対する試験を含むほぼ全ての場合において有効であることを証明したことを最近報告している。
加えて、インビトロシステムを用いて特定のオリゴヌクレオチドを設計してその有効性を予測するためのいくつかのアプローチも発表されている（Ｍａｔｖｅｅｖａ他，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １６，１３７４−１３７５（１９９８））。
いくつかの臨床試験はアンチセンスオリゴヌクレオチドの安全性、実行可能性および活性を証明している。例えばがんの治療のために好適なアンチセンスオリゴヌクレオチドは成功して用いられており（Ｈｏｌｍｕｎｄ他，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：３７２−８５（１９９９））、一方、アンチセンスオリゴヌクレオチド標的化ｃ−ｍｙｂ遺伝子、ｐ５３およびＢｃｌ−２を介した血液の悪性腫瘍の治療は、臨床試験の段階に入っており、患者によって耐えられることが示されている（Ｇｅｒｗｉｔｚ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：２９３−３０６（１９９９））。
最近、ヒトのヘパラナーゼ遺伝子発現のアンチセンス媒介された抑制は、マウスモデル中のヒトがん細胞の胸膜転移を阻害することが報告されている（Ｕｎｏ他，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ６１：７８５５−６０（２００１））。
ＲＡＳにおける遺伝子のアンチセンス媒介による抑制もまた首尾よく行われている（例えば、アンギオテンシノーゲン合成の阻害［Ｓｃｈｉｎｋｅ他、Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ、１９９６、２７：５０８〜５１３］）。
従って、現在のコンセンサスは、上記で記載されたように、非常に正確なアンチセンス設計アルゴリズムおよび広範囲の様々なオリゴヌクレオチド送達システムをもたらしているアンチセンス技術の分野における最近の開発により、当業者は、過度な試行錯誤実験に頼ることを必要とすることなく、既知配列の発現をダウンレギュレーションするために好適なアンチセンス法を設計し、実行することができるということである。
ＲＡＳの成分をダウンレギュレーションすることができる別の薬剤が、ＲＡＳに関与する成分をコードするｍＲＮＡ転写物を特異的に切断することができるリボザイム分子である。リボザイムは、目的とするタンパク質をコードするｍＲＮＡの切断による遺伝子発現の配列特異的な阻害のためにますます使用されている［Ｗｅｌｃｈ他、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、９：４８６〜９６（１９９８）］。任意の特定の標的ＲＮＡを切断するためにリボザイムを設計することができることにより、リボザイムは基礎研究および治療的適用の両方において貴重なツールになっている。治療剤の領域では、リボザイムは、感染性疾患におけるウイルスＲＮＡ、ガンにおける優勢なガン遺伝子、および、遺伝病における特定の体細胞変異を標的化するために利用されている［Ｗｅｌｃｈ他、Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｖｉｒｏｌ、１０：１６３〜７１（１９９８）］。最も注目すべきことは、ＨＩＶ患者のためのいくつかのリボザイム遺伝子治療プロトコルが既に第１相試験中である。より近年には、様々なリボザイムが、トランスジェニック動物研究、遺伝子標的妥当性確認および経路解明のために使用されている。いくつかのリボザイムが臨床試験の様々な段階にある。ＡＮＧＩＯＺＹＭＥは、ヒト臨床研究で研究されるための最初の化学合成されたリボザイムであった。ＡＮＧＩＯＺＹＭＥは、血管形成経路における重要な成分であるＶＥＧＦ−ｒ（血管内皮増殖因子受容体）の形成を特異的に阻害する。Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、ならびに、他の企業が、抗血管形成治療剤の重要性を動物モデルで明らかにしている。ＨＥＰＴＡＺＹＭＥ、すなわち、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＲＮＡを選択的に破壊するために設計されたリボザイムは、Ｃ型肝炎ウイルスのＲＮＡを細胞培養アッセイで低下させることにおいて効果的であることが見出された（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ−ｗｗｗ．ｒｐｉ．ｃｏｍ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）。
細胞におけるＲＡＳ遺伝子の成分の発現を調節するさらなる方法が、三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）による方法である。最近の十年間において、様々な研究により、二本鎖のらせんＤＮＡにおけるポリプリン／ポリピリミジン領域を配列特異的な様式で認識し、かつ、これに結合することができるＴＦＯを設計できることが示されている。これらの認識規則がＭａｈｅｒ ＩＩＩ，Ｌ．Ｊ．他、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８９）、２４５：７２５〜７３０；Ｍｏｓｅｒ、Ｈ．Ｅ．他、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８７）、２３８：６４５〜６３０；Ｂｅａｌ，Ｐ．Ａ．他、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９１）、２５１：１３６０〜１３６３；Ｃｏｏｎｅｙ，Ｍ．他、Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９８８）、２４１：４５６〜４５９；およびＨｏｇａｎ，Ｍ．Ｅ．他、欧州特許公開３７５４０８号によって概略される。オリゴヌクレオチドの改変（例えば、インターカレーターおよび骨格置換の導入など）、および、結合条件（ｐＨおよびカチオン濃度）の最適化は、ＴＦＯ活性に対する本来的な疾患（例えば、電荷反発および不安定性など）を克服することを助けており、また、最近では、合成オリゴヌクレオチドが特定の配列に標的化され得ることが示された（最近の総説については、ＳｅｉｄｍａｎおよびＧｌａｚｅｒ（２００３）、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ、１１２：４８７〜９４を参照のこと）。
一般に、三重鎖形成オリゴヌクレオチドは下記の配列対応を有する：
オリゴ ３’−Ａ Ｇ Ｇ Ｔ
二重鎖 ５’−Ａ Ｇ Ｃ Ｔ
二重鎖 ３’−Ｔ Ｃ Ｇ Ａ
しかしながら、Ａ−ＡＴおよびＧ−ＧＣの三重鎖は、最大の三重らせん安定性を有することが示されている（ＲｅｉｔｈｅｒおよびＪｅｌｔｓｃｈ（２００２）、ＢＭＣ Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｓｅｐｔ １２、Ｅｐｕｂ）。同じ著者らは、Ａ−ＡＴおよびＧ−ＧＣの規則に従って設計されたＴＦＯが非特異的な三重鎖を形成しないことを明らかにしている。このことは、三重鎖形成が実際に、配列特異的であることを示している。
従って、調節領域における任意の所与の配列について、三重鎖形成配列を考案することができる。三重鎖形成オリゴヌクレオチドは好ましくは、長さが少なくとも１５ヌクレオチド、より好ましくは２５ヌクレオチド、さらにより好ましくは３０ヌクレオチドまたはそれ以上から、５０ｂｐまたは１００ｂｐまでである。
ＴＦＯによる細胞のトランスフェクション（例えば、カチオン性リポソームによるトランスフェクション）、および、標的ＤＮＡとの三重鎖らせん構造の形成は、立体的および機能的な変化を誘導し、これにより、転写の開始および伸長を妨げ、内因性ＤＮＡにおける所望される配列変化の誘導を可能にし、また、遺伝子発現の特異的なダウンレギュレーションをもたらす。ＴＦＯにより治療された細胞における遺伝子発現のそのような抑制の例には、哺乳動物細胞におけるエピソームｓｕｐＦＧ１遺伝子および内因性ＨＰＲＴ遺伝子のノックアウト（Ｖａｓｑｕｅｚ他、Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（１９９９）、２７：１１７６〜８１；Ｐｕｒｉ他、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（２００１）、２７６：２８９９１〜９８）、ならびに、Ｅｔｓ２転写因子（これは前立腺ガンの病因において重要である）の発現の配列特異的および標的特異的なダウンレギュレーション（Ｃａｒｂｏｎｅ他、Ｎｕｃｌ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２００３）、３１：８３３〜４３）、ならびに、前炎症性ＩＣＡＭ−１遺伝子の配列特異的および標的特異的なダウンレギュレーション（Ｂｅｓｃｈ他、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ（２００２）、２７７：３２４７３〜７９）が含まれる。加えて、ＶｕｙｉｓｉｃｈおよびＢｅａｌは近年、配列特異的なＴＦＯがｄｓＲＮＡに結合し、これにより、ｄｓＲＮＡ依存性酵素（例えば、ＲＮＡ依存性キナーゼなど）の活性を阻害することができることを示している（ＶｕｙｉｓｉｃｈおよびＢｅａｌ、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ（２０００）、２８：２３６９〜７４）。
加えて、上記の原理に従って設計されたＴＦＯは、ＤＮＡ修復を行うことができる誘導された変異誘発を誘導することができ、従って、内因性遺伝子の発現のダウンレギュレーションおよびアップレギュレーションの両方をもたらすことができる［ＳｅｉｄｍａｎおよびＧｌａｚｅｒ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（２００３）、１１２：４８７〜９４］。効果的なＴＦＯの設計、合成および投与の詳細な記載を、米国特許出願公開第２００３０１７０６８号および同第２００３００９６９８０（Ｆｒｏｅｈｌｅｒ他）、同第２００２０１２８２１８号および同第２００２０１２３４７６号（Ｅｍａｎｕｅｌｅ他）、ならびに、米国特許第５７２１１３８号（Ｌａｗｎ）に見出すことができる。
オリゴヌクレオチド薬剤のさらなる記載がさらに本明細書中下記に提供される。治療的オリゴヌクレオチドはさらに、生物学的利用能、治療的効力を増大させることができ、また、細胞毒性を低下させることができる塩基修飾および／または骨格修飾を含み得ることが理解される。そのような修飾が、Ｙｏｕｎｅｓ（２００２）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｅｓｉｇｎ、８：１４５１〜１４６６に記載される。
例えば、本発明のオリゴヌクレオチドは、３’〜５’ホスホジエステル結合で結合したプリン塩基およびピリミジン塩基からなる複素環式ヌクレオシドを含み得る。
好ましくは、使用するオリゴヌクレオチドは、以下で広く説明するように、骨格、ヌクレオシド間結合、または塩基で修飾されたものである。
本発明のこの態様で有用な好ましいオリゴヌクレオチドの特定の例には、修飾された骨格または非天然のヌクレオシド内結合を含むオリゴヌクレオチドが含まれる。修飾された骨格を有するオリゴヌクレオチドとして、米国特許第４４６９８６３号、同第４４７６３０１号、同第５０２３２４３号、同第５１７７１９６号、同第５１８８８９７号、同第５２６４４２３号、同第５２７６０１９号、同第５２７８３０２号、同第５２８６７１７号、同第５３２１１３１号、同第５３９９６７６号、同第５４０５９３９号、同第５４５３４９６号、同第５４５５２３３号、同第５４６６６７７号、同第５４７６９２５号、同第５５１９１２６号、同第５５３６８２１号、同第５５４１３０６号、同第５５５０１１１号、同第５５６３２５３号、同第５５７１７９９号、同第５５８７３６１号、および同第５６２５０５０号に開示の骨格中にリン原子を保持するものが挙げられる。
好ましい修飾されたオリゴヌクレオチド骨格としては、例えば、通常の３’−５’結合を有するホスホロチオエート、キラルなホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび他のアルキルのホスホネート（３’アルキルホスホネートおよびキラルなホスホネートを含む）、ホスフィナート、ホスホラミデート（３’−アミノホスホラミデートおよびアミノアルキルホスホラミデート、チオノホスホラミデート、チオノアルキルホスホネートを含む）、チオノアルキルホスホトリエステル、およびボラノホスフェート、これらの２’−５’結合アナログ、およびヌクレオシド単位の隣接対が３’−５’から５’−３’または２’−５’から５’−２’で結合している逆の極性を有するものが挙げられる。種々の塩、混合塩、および遊離酸形態も使用することができる。
あるいは、リン原子を中に含まない修飾されたオリゴヌクレオチド骨格は、短鎖アルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド内結合、混合へテロ原子、およびアルキルまたはシクロアルキルヌクレオシド内結合、または１つ以上の短鎖へテロ原子もしくは複素環ヌクレオシド内結合によって形成された骨格を有する。これらには、モルホリノ結合（一部がヌクレオシドの糖部分から形成される）；シロキサン骨格；スルフィド、スルフォキシド、およびスルホン骨格；ホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；メチレンホルムアセチルおよびチオホルムアセチル骨格；アルケン含有骨格；スルファマート骨格；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格；スルホネートおよびスルホンアミド骨格；アミド骨格；および混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２成分を有する他の骨格を有するものが含まれ、これらは、米国特許第５０３４５０６号、同第５１６６３１５号、同第５１８５４４４号、同第５２１４１３４号、同第５２１６１４１号、同第５２３５０３３号、同第５２６４５６２号、同第５２６４５６４号、同第５４０５９３８号、同第５４３４２５７号、同第５４６６６７７号、同第５４７０９６７号、同第５４８９６７７号、同第５５４１３０７号、同第５５６１２２５号、同第５５９６０８６号、同第５６０２２４０号、同第５６０８０４６語、同第５６１０２８９号、同第５６１８７０４号、同第５６２３０７０号、同第５６６３３１２号、同第５６３３３６０号、同第５６７７４３７号、同第５６７７４３９号に開示されている。
本発明で使用することができる他のオリゴヌクレオチドは、糖およびヌクレオシド内結合の両方が修飾されたものである（すなわち、ヌクレオチド単位の骨格が新規の基に置換されている）。適切なポリヌクレオチド標的との相補性のために塩基単位は維持される。このようなオリゴヌクレオチド模倣物の例には、ペプチド核酸（ＰＮＡ）が含まれる。ＰＮＡオリゴヌクレオチドは、糖−骨格がアミド含有骨格（特に、アミノエチルグリシン骨格）に置換されたオリゴヌクレオチドをいう。塩基は、保持され、骨格のアミド部分のアザ窒素原子に直接または間接的に結合する。ＰＮＡ化合物の調製を教示する米国特許には、米国特許第５５３９０８２号、同第５７１４３３１号および同第５７１９２６２号（それぞれ本明細書中で参考として援用されている）が含まれるが、これらに限定されない。本発明で使用することができる他の骨格修飾は、米国特許第６３０３３７４号に開示されている。
本発明のオリゴヌクレオチドには、塩基の修飾または置換も含み得る。本明細書中で使用される場合は、「非修飾」または「天然の」塩基には、プリン塩基であるアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）ならびにピリミジン塩基であるチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）、およびウラシル（Ｕ）が含まれる。修飾塩基には、５−メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン、および２−チオシトシン、５−ハロウラシルおよびシトシン、５−プロピルウラシルおよびシトシン、６−アゾウラシル、シトシン、およびチミン、５−ウラシル（偽ウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキシル、および他の８−置換アデニンおよびグアニン、５−ハロ、特に５−ブロモ、５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン、７−メチルグアニンおよび７−メチルアデニン、８−アザグアニンおよび８−アザアデニン、７−デアザグアニンおよび７−デアザアデニンおよび３−デアザグアニンおよび３−デアザアデニンなどの他の合成および天然の塩基が含まれるが、これらに限定されない。さらなる塩基としては、米国特許第３６８７８０８号に開示の塩基、Ｔｈｅ Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｉｐｅｄｉａ Ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｐａｇｅｓ８５８−８５９，Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ，Ｊ．Ｉ．ｅｄ．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９０に開示の塩基、Ｅｎｇｌｉｓｃｈ他，Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，３０，６１３に開示の塩基、およびＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｈａｐｔｅｒ １５，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐａｇｅｓ２８９−３０２，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．ｅｄ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９９３に開示されている塩基を挙げることができる。このような塩基は、特に、本発明のオリゴマー化合物の結合親和性の増大に有用である。これらには、５置換ピリミジン、６−アザピリミジン、およびＮ−２、Ｎ−６、およびＯ−６置換プリン（２−アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル、および５−プロピニルシトシンが含まれる）が含まれる。５−メチルシトシン置換により、核酸二重鎖の安定性が０．６〜１．２℃増大することが示されており（Ｓａｎｇｈｖｉ ＹＳ他（１９９３）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ ２７６−２７８）、これが現在好ましい塩基置換であり、特に２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾と組み合わせるとさらに好ましい。
ＲＡＳタンパク質の発現をダウンレギュレーションするために使用されているオリゴヌクレオチド薬剤の様々な例が（Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ他、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０００、２０：９１５）に記載される。
本発明の組換え薬剤またはオリゴヌクレオチド薬剤は、本明細書中下記に記載される任意の好適な投与様式を用いて対象に投与することができる（すなわち、インビボ遺伝子治療）。あるいは、核酸構築物を、適切な遺伝子送達ビヒクル／方法（トランスフェクション、形質導入など）および適切な発現システムを使用して好適な細胞に導入することができる。改変された細胞が続いて培養で拡大され、個体に戻される（すなわち、エクスビボ遺伝子治療）。好適な構築物の例には、ｐｃＤＮＡ３、ｐｃＤＮＡ３．１（＋／−）、ｐＧＬ３、ＰｚｅｏＳＶ２（＋／−）、ｐＤｉｓｐｌａｙ、ｐＥＦ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ、ｐＣＭＶ／ｍｙｃ／ｃｙｔｏ（これらのそれぞれがＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏ．（ｗｗｗ．ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ．ｃｏｍ）から市販されている）が含まれるが、これらに限定されない。レトロウイルスおよびパッケージングシステムの例には、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆ．）によって販売されるものがあり、これには、マルチクローニング部位内へのクローニングおよびＣＭＶプロモーターから導かれる導入遺伝子の転写を可能にするＲｅｔｒｏ−ＸベクターのｐＬＮＣＸおよびｐＬＸＳＮが含まれる。Ｍｏ−ＭｕＬＶに由来するベクターもまた含まれる（例えば、導入遺伝子が５’ＬＴＲプロモーターから転写されるｐＢａｂｅなど）。
本発明の核酸薬剤は、ＲＡＳ系の天然の変異を模倣することなどによって非機能的タンパク質の形成をもたらす周知の「遺伝子ノックイン法」を使用して対象に導入することができることが理解される［例えば、Ｍａｔｓｕｄａ他、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、２００４、２５９：３７９〜９０を参照のこと］。
ＡＣＥのアミノ酸配列は、その３Ｄ構造とともに、ＡＣＥを点変異および遺伝子ノックイン法のための比較的容易な標的にしている。この酵素は、酵素の活性化のために絶対的に要求されるクロリド結合中心をそれらのそれぞれが含む２つの触媒作用ドメインから構成される。従って、これらの部位のいずれかにおける点変異はＡＣＥを不活性にすると考えられ、また、そのような点変異を、本明細書中で述べられるような遺伝子ノックイン法を使用して対象に導入することができる。当技術分野で既知である天然に存在するＡＣＥ点変異の一例には、茎領域におけるＰｒｏ１１９９Ｌｅｕを引き起こす点変異が含まれる［Ｋｒａｍｅｒｓ他、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、２００１、１０４：１２３６］。
述べられたように、本発明の薬剤は、ＧＡＧのアップレギュレーションから利益を受けると考えられる任意の疾患を治療するために使用することができる。
本明細書中において本明細書および下記の特許請求の範囲の節で使用される場合、用語「治療（処置）」および用語「治療する（処置する）」は、疾患の有害な作用を防止すること、治療すること、逆戻りさせること、弱めること、改善すること、最小限に抑えること、抑制すること、または、停止させることを示す。
ＧＡＧレベルを増大させることが治療的に有益であり得る疾患または状態の一群の一例には、炎症性疾患が含まれる［Ｃｈｏｕ他、Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ、２００５（Ａｐｒ）、２３０（４）、２５５〜６２］。本明細書中で使用される表現「炎症性疾患」には、慢性的な炎症性疾患および急性の炎症性疾患が含まれるが、これらに限定されない。そのような疾患および状態の様々な例が下記にまとめられる。
過敏症に関連する炎症性疾患
過敏症の例には、Ｉ型過敏症、ＩＩ型過敏症、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、即時型過敏症、抗体媒介過敏症、免疫複合体媒介過敏症、Ｔリンパ球媒介過敏症およびＤＴＨが含まれるが、これらに限定されない。
Ｉ型過敏症または即時型過敏症、例えば、喘息など。
ＩＩ型過敏症には、下記が含まれるが、それらに限定されない：リウマチ様疾患、リウマチ様自己免疫疾患、リウマチ様関節炎（Ｋｒｅｎｎ Ｖ他、Ｈｉｓｔｏｌ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ、２０００（Ｊｕｌ）、１５（３）：７９１）、脊椎炎、強直性脊椎炎（Ｊａｎ Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌ他、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ、２００１、３（３）：１８９）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ Ｊ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ、１９９８、１７（１−２）：４９）、硬化症、全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ Ｙ他、Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９（Ｍａｒ）、６（２）：１５６；Ｃｈａｎ ＯＴ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ、１９９９（Ｊｕｎ）、１６９：１０７）、腺疾患、腺の自己免疫疾患、膵臓の自己免疫疾患、糖尿病、Ｉ型糖尿病（Ｚｉｍｍｅｔ Ｐ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ、１９９６（Ｏｃｔ）、３４ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、甲状腺疾患、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴズ病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ Ｊ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ、２０００（Ｊｕｎ）、２９（２）：３３９）、甲状腺炎、突発性自己免疫性甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ ＨおよびＹｕ Ｓ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｄｅｃ １５）、１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ Ｎ他、Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１８１０）、粘液水腫、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ Ｔ、Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１７５９）；自己免疫性生殖疾患、卵巣疾患、卵巣の自己免疫性（Ｇａｒｚａ ＫＭ他、Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８（Ｆｅｂ）、３７（２）：８７）、自己免疫性抗精子不妊症（Ｄｉｅｋｍａｎ ＡＢ他、Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｍａｒ）、４３（３）：１３４）、反復した胎児消失（Ｔｉｎｃａｎｉ Ａ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１０７〜９）、神経変性疾患、神経学的疾患、神経学的自己免疫疾患、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ ＡＨ他、Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｎｎｕｎｏｌ、２００１（Ｊａｎ １）、１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ Ｌ他、Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ Ｓｕｐｐｌ、１９９７、４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ ＡＪおよびＫｒａｉｇ Ｅ、Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９、１８（１−２）：８３）、運動神経障害（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ ＡＬ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２０００（Ｍａｙ）、７（３）：１９１）、ギラン・バレー症候群、神経障害および自己免疫性神経障害（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ Ｓ、Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２３４）、筋無力症疾患、ランバード・イートン筋無力症症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ Ｍ、Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２０４）、腫瘍随伴性神経学的疾患、小脳萎縮症、腫瘍随伴性小脳萎縮症、腫瘍非随伴性スティッフマン症候群、小脳萎縮症、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シドナム舞踏病、ジル・ド・ラ・ツレット症候群、多発性内分泌腺症、自己免疫性多発性内分泌腺症（Ａｎｔｏｉｎｅ ＪＣおよびＨｏｎｎｏｒａｔ Ｊ、Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｊａｎ）、１５６（１）：２３）、神経障害、異常免疫による神経障害（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ Ｅ他、Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ Ｃｌｉｎ Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｕｐｐｌ、１９９９、５０：４１９）；ニューロミオトニー、後天性ニューロミオトニー、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ Ａ他、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ、１９９８（Ｍａｙ １３）、８４１：４８２）、心臓血管疾患、心臓血管の自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化（Ｍａｔｓｕｕｒａ Ｅ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ Ｏ、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ Ａ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１０７〜９）、肉芽腫症、ヴェーゲナー肉芽腫症、動脈炎、高安動脈炎および川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ Ｓ他、Ｗｉｅｎ Ｋｌｉｎ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ、２０００（Ａｕｇ ２５）、１１２（１５−１６）：６６０）；抗第ＶＩＩＩ因子による自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ Ｓ他、Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ、２０００、２６（２）：１５７）；血管炎、壊死性小血管血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、糸球体腎炎、少免疫性（ｐａｕｃｉ−ｉｍｍｕｎｅ）巣状壊死性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ ＬＨ、Ａｎｎ Ｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｍａｙ）、１５１（３）：１７８）；抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ Ｒ他、Ｊ Ｃｌｉｎ Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ、１９９９、１４（４）：１７１）；心不全、心不全におけるアゴニスト様β−アドレナリン作動性受容体抗体（Ｗａｌｌｕｋａｔ Ｇ他、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ １７）、８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ Ｆ、Ａｎｎ Ｉｔａｌ Ｍｅｄ Ｉｎｔ、１９９９（Ａｐｒ−Ｊｕｎ）、１４（２）：１１４）；溶血性貧血、自己免疫性溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ ＤＧ他、Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、１９９８（Ｊａｎ）、２８（３−４）：２８５）、胃腸疾患、胃腸管の自己免疫疾患、腸疾患、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ Ｈｅｒｏｌａ Ａ他、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ｊａｎ）、２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ ＹＥおよびＳｈｏｅｎｆｅｌｄ Ｙ、Ｈａｒｅｆｕａｈ、２０００（Ｊａｎ １６）、１３８（２）：１２２）、筋組織の自己免疫疾患、筋炎、自己免疫性筋炎、シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ Ｅ他、Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｓｅｐ）、１２３（１）：９２）；平滑筋の自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ Ｄ他、Ｂｉｏｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ、１９９９（Ｊｕｎ）、５３（５−６）：２３４）、肝疾患、肝臓の自己免疫疾患、自己免疫性肝炎（Ｍａｎｎｓ ＭＰ、Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ａｕｇ）、３３（２）：３２６）および原発性胆汁性肝硬変（Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ ＣＰ他、Ｅｕｒ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ）、１１（６）：５９５）。
ＩＶ型過敏症またはＴ細胞媒介過敏症には、リウマチ様疾患、リウマチ様関節炎（Ｔｉｓｃｈ Ｒ、ＭｃＤｅｖｉｔｔ ＨＯ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、１９９４（Ｊａｎ １８）、９１（２）：４３７）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｄａｔｔａ ＳＫ、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７（９）：５９１）、腺疾患、腺自己免疫疾患、膵臓疾患、膵臓自己免疫疾患、１型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ Ｌ．およびＥｉｓｅｎｂａｒｔｈ ＧＳ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８：６４７）；甲状腺疾患、自己免疫による甲状腺疾患、グレーヴズ病（Ｓａｋａｔａ Ｓ他、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１９９３（Ｍａｒ）、９２（１）：７７）；卵巣疾患（Ｇａｒｚａ ＫＭ他、Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８（Ｆｅｂ）、３７（２）：８７）、前立腺炎、自己免疫による前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＲＢ他、Ｕｒｏｌｏｇｙ、１９９７（Ｄｅｃ）、５０（６）：８９３）、多腺性症候群、自己免疫による多腺性症候群、Ｉ型自己免疫多腺性症候群（Ｈａｒａ Ｔ他、Ｂｌｏｏｄ、１９９１（Ｍａｒ １）、７７（５）：１１２７）、神経学的疾患、自己免疫による神経学的疾患、多発性硬化症、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ Ｍ他、Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１９９４（Ｍａｙ）、５７（５）：５４４）、重症筋無力症（Ｏｓｈｉｍａ Ｍ他、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９０（Ｄｅｃ）、２０（１２）：２５６３）、スティッフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ ＨＳ他、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、２００１（Ｍａｒ ２７）、９８（７）：３９８８）、心臓血管疾患、シャガス病における心臓の自己免疫性（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ Ｅ他、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ、１９９６（Ｏｃｔ １５）、９８（８）：１７０９）、自己免疫による血小板減少性紫斑病（Ｓｅｍｐｌｅ ＪＷ他、Ｂｌｏｏｄ、１９９６（Ｍａｙ １５）、８７（１０）：４２４５）、抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫性（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ ＡＰ他、Ｖｉｒａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８、１１（１）：９）、溶血性貧血（Ｓａｌｌａｈ Ｓ他、Ａｎｎ Ｈｅｍａｔｏｌ、１９９７（Ｍａｒ）、７４（３）：１３９）、肝臓疾患、肝臓自己免疫疾患、肝炎、慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ Ａ他、Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、１９９０（Ｍａｒ）、５４（３）：３８２）、胆汁性肝硬変、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ ＤＥ、Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）、１９９６（Ｎｏｖ）、９１（５）：５５１）、腎臓疾患、腎臓自己免疫疾患、腎炎、間質性腎炎（Ｋｅｌｌｙ ＣＪ、Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ、１９９０（Ａｕｇ）、１（２）：１４０）、結合組織疾患、耳疾患、自己免疫による結合組織疾患、自己免疫による耳疾患（Ｙｏｏ ＴＪ他、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９４（Ａｕｇ）、１５７（１）：２４９）、内耳の疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ Ｂ他、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ、１９９７（Ｄｅｃ ２９）、８３０：２６６）、皮膚（ｓｋｉｎ）疾患、皮膚（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）疾患、皮膚（ｄｅｒｍａｌ）疾患、水疱性皮膚疾患、尋常性天疱瘡、水疱性天疱瘡および落葉状天疱瘡が含まれるが、これらに限定されない。
遅発型過敏症の例には、接触性皮膚炎および薬疹が含まれるが、これらに限定されない。
Ｔリンパ球媒介過敏症の例には、ヘルパーＴリンパ球および細胞傷害性Ｔリンパ球が含まれるが、これらに限定されない。
ヘルパーＴリンパ球媒介過敏症の例には、Ｔｈ１リンパ球媒介過敏症およびＴｈ２リンパ球媒介過敏症が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫疾患
心臓血管疾患、リウマチ様疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚疾患、肝疾患、神経学的疾患、筋疾患、腎疾患、生殖関連疾患、結合組織疾患および全身性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫性による心臓血管疾患の例には、アテローム性動脈硬化（Ｍａｔｓｕｕｒａ Ｅ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ Ｏ、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ Ａ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１０７〜９）、ヴェーゲナー肉芽腫症、高安動脈炎および川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ Ｓ他、Ｗｉｅｎ Ｋｌｉｎ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ、２０００（Ａｕｇ ２５）、１１２（１５−１６）：６６０）、抗第ＶＩＩＩ因子による自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ Ｓ他、Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓｔ、２０００、２６（２）：１５７）、壊死性小血管血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、少免疫性巣状壊死性糸球体腎炎および半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ ＬＨ、Ａｎｎ Ｍｅｄ Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｍａｙ）、１５１（３）：１７８）、抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ Ｒ他、Ｊ Ｃｌｉｎ Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ、１９９９、１４（４）：１７１）、抗体誘導の心不全（Ｗａｌｌｕｋａｔ Ｇ他、Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ １７）、８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ Ｆ、Ａｎｎ Ｉｔａｌ Ｍｅｄ Ｉｎｔ、１９９９（Ａｐｒ−Ｊｕｎ）、１４（２）：１１４；Ｓｅｍｐｌｅ ＪＷ他、Ｂｌｏｏｄ、１９９６（Ｍａｙ １５）、８７（１０）：４２４５）、自己免疫性溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ ＤＧ他、Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ、１９９８（Ｊａｎ）、２８（３−４）：２８５；Ｓａｌｌａｈ Ｓ他、Ａｎｎ Ｈｅｍａｔｏｌ、１９９７（Ｍａｒ）、７４（３）：１３９）、シャガス病における心臓の自己免疫性（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ Ｅ他、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ、１９９６（Ｏｃｔ １５）、９８（８）：１７０９）、および、抗ヘルパーＴリンパ球による自己免疫性（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ ＡＰ他、Ｖｉｒａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８、１１（１）：９）が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫によるリウマチ様疾患の例には、リウマチ様関節炎（Ｋｒｅｎｎ Ｖ他、Ｈｉｓｔｏｌ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ、２０００（Ｊｕｌ）、１５（３）：７９１；Ｔｉｓｃｈ Ｒ、ＭｃＤｅｖｉｔｔ ＨＯ、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ｕｎｉｔｓ Ｓ Ａ、１９９４（Ｊａｎ １８）、９１（２）：４３７）および強直性脊椎炎（Ｊａｎ Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌ他、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ、２００１、３（３）：１８９）が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による腺疾患の例には、膵臓疾患、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患、グレーヴズ病、甲状腺炎、突発性自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣の自己免疫性、自己免疫性抗精子不妊症、自己免疫性前立腺炎およびＩ型自己免疫性多腺性症候群が含まれるが、これらに限定されない。疾患には、膵臓の自己免疫疾患、Ｉ型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ ＬおよびＥｉｓｅｎｂａｒｔｈ ＧＳ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８：６４７；Ｚｉｍｍｅｔ Ｐ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｐｒａｃｔ、１９９６（Ｏｃｔ）、３４ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴズ病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ Ｊ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ、２０００（Ｊｕｎ）、２９（２）：３３９；Ｓａｋａｔａ Ｓ他、Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１９９３（Ｍａｒ）、９２（１）：７７）、突発性自己免疫性甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ ＨおよびＹｕ Ｓ、Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｄｅｃ １５）、１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ Ｎ他、Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１８１０）、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ Ｔ、Ｎｉｐｐｏｎ Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１７５９）、卵巣の自己免疫性（Ｇａｒｚａ ＫＭ他、Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８（Ｆｅｂ）、３７（２）：８７）、自己免疫性抗精子不妊症（Ｄｉｅｋｍａｎ ＡＢ他、Ａｍ Ｊ Ｒｅｐｒｏｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｍａｒ）、４３（３）：１３４）、自己免疫性前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ ＲＢ他、Ｕｒｏｌｏｇｙ、１９９７（Ｄｅｃ）、５０（６）：８９３）およびＩ型自己免疫性多腺性症候群（Ｈａｒａ Ｔ他、Ｂｌｏｏｄ、１９９１（Ｍａｒ １）、７７（５）：１１２７）が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による胃腸疾患の例には、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ Ｈｅｒｏｌａ Ａ他、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ｊａｎ）、２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ ＹＥおよびＳｈｏｅｎｆｅｌｄ Ｙ、Ｈａｒｅｆｕａｈ、２０００（Ｊａｎ １６）、１３８（２）：１２２）、大腸炎、回腸炎およびクローン病が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による皮膚疾患の例には、自己免疫による水疱性の皮膚疾患（例えば、尋常性天疱瘡、水疱性天疱瘡および落葉状天疱瘡など、これらに限定されない）が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による肝疾患の例には、肝炎、自己免疫性慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ Ａ他、Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、１９９０（Ｍａｒ）、５４（３）：３８２）、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ ＤＥ、Ｃｌｉｎ Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）、１９９６（Ｎｏｖ）、９１（５）：５５１；Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ ＣＰ他、Ｅｕｒ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ）、１１（６）：５９５）および自己免疫性肝炎（Ｍａｎｎｓ ＭＰ、Ｊ Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ａｕｇ）、３３（２）：３２６）が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による神経学的疾患の例には、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ ＡＨ他、Ｊ Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２００１（Ｊａｎ １）、１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ Ｌ他、Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ Ｓｕｐｐｌ、１９９７、４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ ＡＪおよびＫｒａｉｇ Ｅ、Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９、１８（１−２）：８３；Ｏｓｈｉｍａ Ｍ他、Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９０（Ｄｅｃ）、２０（１２）：２５６３）、神経障害、運動神経障害（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ ＡＪ、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２０００（Ｍａｙ）、７（３）：１９１）、ギラン・バレー症候群および自己免疫性神経障害（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ Ｓ、Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２３４）、筋無力症、ランバード・イートン筋無力症症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ Ｍ、Ａｍ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２０４）、腫瘍随伴性神経学的疾患、小脳萎縮症、腫瘍随伴性の小脳萎縮症およびスティッフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ ＨＳ他、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ｕｎｉｔｓ Ｓ Ａ、２００１（Ｍａｒ ２７）、９８（７）：３９８８）；腫瘍非随伴性スティッフマン症候群、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シドナム舞踏病、ジル・ド・ラ・ツレット症候群および自己免疫性多発性内分泌腺症（Ａｎｔｏｉｎｅ ＪＣおよびＨｏｎｎｏｒａｔ Ｊ、Ｒｅｖ Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｊａｎ）、１５６（１）：２３）；異常免疫による神経障害（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ Ｅ他、Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ Ｃｌｉｎ Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ Ｓｕｐｐｌ、１９９９、５０：４１９）；後天性ニューロミオトニー、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ Ａ他、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ、１９９８（Ｍａｙ １３）、８４１：４８２）、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ Ｍ他、Ｊ Ｎｅｕｒｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１９９４（Ｍａｙ）、５７（５）：５４４）および神経変性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による筋疾患の例には、筋炎、自己免疫性筋炎および原発性シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ Ｅ他、Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｓｅｐ）、１２３（１）：９２）、および、平滑筋の自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ Ｄ他、Ｂｉｏｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ、１９９９（Ｊｕｎ）、５３（５−６）：２３４）が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による腎疾患の例には、腎炎、および、自己免疫性間質性腎炎（Ｋｅｌｌｙ ＣＪ、Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ、１９９０（Ａｕｇ）、１（２）：１４０）が含まれるが、これらに限定されない。
生殖に関連する自己免疫疾患の例には、反復した胎児消失（Ｔｉｎｃａｎｉ Ａ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ１０７〜９）が含まれるが、これらに限定されない。
自己免疫による結合組織疾患の例には、耳の疾患、自己免疫による耳の疾患（Ｙｏｏ ＴＪ他、Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９４（Ａｕｇ）、１５７（１）：２４９）、および、内耳の自己免疫疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ Ｂ他、Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ、１９９７（Ｄｅｃ ２９）、８３０：２６６）が含まれるが、これらに限定されない。
全身性自己免疫疾患の例には、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ Ｊ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｓ、１９９８、１７（１−２）：４９）および全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ Ｙ他、Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９（Ｍａｒ）、６（２）：１５６；Ｃｈａｎ ＯＴ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ、１９９９（Ｊｕｎ）、１６９：１０７）が含まれるが、これらに限定されない。
感染性疾患
感染性疾患の例には、慢性的な感染性疾患、亜急性の感染性疾患、急性の感染性疾患、ウイルス性疾患、細菌性疾患、原虫性疾患、寄生虫性疾患、真菌性疾患、マイコプラズマ疾患およびプリオン疾患が含まれるが、これらに限定されない。
移植片拒絶疾患
移植片の移植に関連する疾患の例には、移植片拒絶、慢性的移植片拒絶、亜急性移植片拒絶、超急性移植片拒絶、急性移植片拒絶および移植片対宿主病が含まれるが、これらに限定されない。
アレルギー性疾患
アレルギー性疾患の例には、喘息、皮疹、じんま疹、花粉アレルギー、ダスト・ダニアレルギー、毒液アレルギー、化粧品アレルギー、ラテックスアレルギー、化学品アレルギー、薬物アレルギー、昆虫咬刺アレルギー、動物鱗屑アレルギー、刺毛植物アレルギー、ウルシアレルギーおよび食物アレルギーが含まれるが、これらに限定されない。
ガン性疾患
ガンの例には、ガン腫、リンパ腫、芽細胞種、肉腫および白血病が含まれるが、これらに限定されない。ガン性疾患の具体的な例には、骨髄性白血病、例えば、慢性骨髄性白血病、成熟化に伴う急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、増大した好塩基球を伴う急性非リンパ性白血病、急性単球性白血病、好酸球増加症を伴う急性骨髄単球性白血病など；悪性リンパ腫、例えば、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫など；リンパ性白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病など；骨髄増殖性疾患、例えば、固形腫瘍、良性髄膜種、唾液腺の混合腫瘍、結腸腺腫など；腺ガン、例えば、小細胞肺ガン、腎臓、子宮、前立腺、膀胱、卵巣、結腸、肉腫、脂肪肉腫、粘液様、滑膜肉腫、横紋筋肉腫（肺胞）、骨外性粘液様軟骨肉腫、ユーイング腫瘍などが含まれるが、これらに限定されない；他のガンには、精巣および卵巣の未分化胚細胞腫、網膜芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、神経芽細胞腫、悪性メラノーマ、中皮腫、乳房、皮膚、前立腺および卵巣が含まれる。
本明細書中上記で述べられたように、炎症性疾患のリウマチ様関節炎はＧＡＧにおける増大から利益を受けることができる。このことは、Ｄａｌｂｅｔｈ他［Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、４４：２４〜３１、２２０４］によって示されている。ＧＡＧレベルにおける上昇から利益を受けることができる他の関節炎疾患には、変形性関節症が含まれる［Ｒｉｃｈｙ Ｆ、Ａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ、１６３：１５１４〜１５２２、２００３］。
本明細書中で使用される用語「変形性関節症」は、最小限の炎症とともに関節軟骨の進行性の悪化を伴う関節炎疾患を示す［Ｓｃｈｏｅｎｈｅｒｒ他、Ｓｍａｌｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（第４版、Ｈａｎｄ他編、Ｗａｌｓｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｍａｒｃｅｌｉｎｅ、Ｍｏ．）、２０００、９０７〜９２１；Ｈｅｄｂｏｍ他、Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．、５９：４５〜５３、２００２；Ｐｏｏｌ、Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ、４：Ｄ６６２〜７０、１９９９］。
ＧＡＧレベルを増大させることが治療的に有益であり得る疾患または状態の一群の別の例には、骨格筋を冒すものが含まれる。ＧＡＧミメティクスは、骨格筋の修復を促進させることが示された［Ｚｉｍｏｗｓｋａ Ｍ、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２００５（Ｍａｙ １０）］。ＧＡＧにおける増大から利益を受けることができる骨格筋疾患の例には、筋ジストロフィー、構造的筋疾患、炎症性筋疾患、筋緊張性疾患、イオンチャネル疾患および代謝性筋疾患が含まれる。
膀胱の感染症および腫瘍もまた、ＧＡＧの減少に関連し、これらは、それらの投与から利益を受けると考えられる状態のさらなる一例を提供する［Ｋｙｋｅｒ Ｋ．Ｄ．他、ＢＭＣ Ｕｒｏｌ．、２００５（Ｍａｒ ２３）、５（１）：４；Ｃｅｎｇｉｚ Ｎ．他、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｎｅｐｈｒｏｌ．、２００５（Ｍａｙ ５）］。
ＧＡＧの投与から利益を受けることができる具体的な疾患の他の例には、子宮頸ガン［Ｓｈｉｎｙｏ他、Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ、２００５（Ｍａｒ）、９６（３）、７７６〜８３］、アルツハイマー病［Ｕｂｒａｎｙｉ Ｚ他、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ Ｉｎｔ、２００５（Ｍａｙ）、４６（６）、４７１〜７］、変性椎間板疾患［Ｓｔｏｅｃｋｅｌｈｕｂｅｒ Ｍ、Ａｎｎ Ａｎａｔ、２００５（Ｍａｒ）、１８７（１）：３５〜４２］および糖尿病性神経疾患［Ｌｅｎｓｅｎ他、Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．、２００５（Ｍａｙ）、１６（５）、１２７９〜８８］がある。
眼の合併症もまた、ＧＡＧレベルにおける上昇から利益を受けることが示されている。例えば、角膜切開部の封着［Ｒｅｙｅｓ他、Ｉｎｖｅｓ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ、２００５（Ａｐｒ）、４６（４）、１２４７〜５０］、および、ＭＰＳに関連する眼の合併症［Ａｓｈｗｏｒｔｈ Ｊ．Ｌ．、Ｅｙｅ、２００５（Ｍａｙ ２０）］。
ＧＡＧは軟骨のそのような重要な成分であり、かつ、正常な関節運動におけるこの組織の機能発現のために不可欠であるので、１つの好ましい疾患群が軟骨疾患である。本明細書中下記の実施例の節に記載されるように、ＡＣＥ−ＩのエナラプリラトおよびＡＲＢのカンデサルタンはともに、３５Ｓの増大した取り込みによって証明されるように、ＧＡＧ合成をコントロールレベルに著しく増大させた。
本明細書中で使用される「軟骨疾患」は、軟骨を含む組織（例えば、関節など）において機能発現に影響を及ぼすか、または、痛みを引き起こす任意の疾患を示す。本明細書中で使用される用語「関節」は、例えば、膝関節、肘関節、股関節、胸鎖関節、顎関節、手根関節、足根関節、手関節、足関節、椎間円板または黄色靭帯を示す。
軟骨疾患の例には、変形性関節症、制限された関節運動性、痛風、リウマチ様関節炎、軟骨溶解、線維筋痛、強皮症、腱炎、脊椎炎、変性椎間板疾患、全身性エリテマトーデおよび手根管症候群が含まれるが、これらに限定されない。
ＧＡＧはまた、皮膚において極めて重要な役割を果たしており、従って、疾患の別の好ましい一群に属する。ＧＡＧは、皮膚の老化に関連する皮膚状態に利益をもたらすことが示されている：例えば、しわ形成［Ｉｓｎａｒｄ他、Ｂｉｏｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ、２００４（Ａｐｒ）、５８（３）：２０２〜４；Ｔｉｔｚ他、Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｈｅａｒｔ Ｃｕｒｃ Ｐｈｙｓｉｏｌ、２００４（Ｓｅｐ）、２８７（３）：Ｈ１４３３；Ｎｏｍｕｒａ他、Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ、２００３（Ｓｅｐ）、３０（９）：６５５〜６４］、乾癬［Ｖｅｒｇｅｓ、Ｍｅｄ Ｃｌｉｎ（Ｂａｒｃ）、２００４（Ｎｏｖ ２７）、１２３（１９）：７３９〜４２］、ケロイド［Ａｌａｉｓｈ他、Ｊ Ｐｅｄｉａｔｒ Ｓｕｒｇ、１９９５（Ｊｕｌ）、３０（７）：９４９〜５２］および火傷［Ｈｅｉｔｌａｎｄ他、Ｂｕｒｎｓ、２００４（Ａｕｇ）、３０（５）：４７１〜５］。
本発明ではまた、ＧＡＧをダウンレギュレーションすることが対象において治療的に有益である疾患または状態を治療することが想定され、この場合、この方法は、レニン−アンギオテンシン系の成分の活性および／または発現をアップレギュレーションすることができる薬剤の治療効果的な量をその必要性のある対象に投与し、それにより、ＧＡＧをダウンレギュレーションすることが対象において治療的に有益である状態または疾患を治療することを含む。
ＧＡＧをダウンレギュレーションすることが治療的に有益であり得る状態の例には、ムコ多糖症（ＭＰＳ）などのリソソーム蓄積症（これらには、ハーラー症候群、ハンター症候群、サンフィリッポ症候群、マロトー・ラミー症候群およびモルキオ症候群が含まれるが、これらに限定されない）を含めて、高いレベルのＧＡＧによって特徴づけられる状態がある。
ＧＡＧをダウンレギュレーションすることが治療的に有益であり得る疾患の別の一例が嚢胞性線維症である［Ｋｈａｔｒｉ他、Ｐｅｄｉａｔｒ Ｒｅｓ、２００３（Ａｐｒ）、５３（４）：６１９〜２７］。
レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）の成分の活性をアップレギュレーションすることができる薬剤には、酵素のＡＣＥ（ＥＣ３．４．１５．１）またはレニン（ＥＣ３．４．２３．１５）を含むＲＡＳの構成成分そのものが含まれる。ＲＡＳの成分をアップレギュレーションすることができる他の薬剤には、ＡＴ受容体においてアゴニストとして作用する化学的薬剤またはペプチド薬剤（例えば、Ｌ−１６２，３１３）、あるいは、ＡＣＥの活性化因子として作用する化学的薬剤またはペプチド薬剤［Ｅｌｉｓｓｅｅｖａ他、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｉｎｔ、１９９３（Ｊｕｌ）、３０（４）：６６５〜７３］、または、レニンの活性化因子として作用する化学的薬剤またはペプチド薬剤がある。
ＲＡＳの成分の発現をアップレギュレーションすることができる薬剤にはまた、ＲＡＳの構成成分の少なくとも機能的部分を発現させるために設計および構築された外因性のポリヌクレオチド配列が含まれ得る。従って、そのような外因性ポリヌクレオチド配列は、ＧＡＧのレベルを低下させることができるＲＡＳの構成成分をコードするＤＮＡ配列またはＲＮＡ配列であり得る。本明細書中で使用される表現「機能的部分」は、活性（すなわち、ＧＡＧの低下）を発揮するために十分である、レニンまたはＡＣＥの一部分（すなわち、ポリペプチド）を示す。これらの遺伝子を投与するための遺伝子治療技術が本明細書中上記で議論される。
本発明のＲＡＳ調節薬剤（すなわち、上記で記載されるような、ＧＡＧをアップレギュレーションまたはダウンレギュレーションするためのＲＡＳ調節薬剤）は、それ自体で生物に投与することができ、あるいは、ＲＡＳ調節薬剤が好適なキャリアまたは賦形剤と混合される医薬組成物で生物に投与することができる。
本明細書中で使用される「医薬組成物」は、本明細書中に記載される有効成分の１つまたは複数と、他の化学的成分（例えば、生理学的に好適なキャリアおよび賦形剤など）との調製物を示す。医薬組成物の目的は、生物に対する化合物の投与を容易にすることである。
本明細書中において、用語「有効成分（活性成分）」は、生物学的効果を担うＲＡＳ調節剤を示す。
以降、交換可能に使用されうる表現「医薬的に許容され得るキャリア」および表現「生理学的に許容され得るキャリア」は、生物に対する著しい刺激を生じさせず、投与された化合物の生物学的な活性および性質を阻害しないキャリアまたは希釈剤を示す。アジュバントはこれらの表現に含まれる。
本明細書中において、用語「賦形剤」は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性な物質を示す。賦形剤の非限定的な例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖およびデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが含まれる。
薬物の配合および投与のための様々な技術が“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版）に見出され得る（これは参考として本明細書中に組み込まれる）。
本発明の医薬組成物は、この分野で十分に知られている様々なプロセスによって、例えば、混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥の従来のプロセスによって製造することができる。
本発明に従って使用される医薬組成物は、医薬品として使用され得る調製物への有効成分の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の医薬的に許容され得るキャリアを使用して従来の様式で配合することできる。適正な配合は、選ばれた投与経路に依存する。
好適な投与経路には、例えば、経口送達、直腸送達、経粘膜送達、特に経鼻送達、腸管送達または非経口送達（これには、筋肉内注射、皮下注射および髄内注射、ならびに、クモ膜下注射、直接的な脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻内注射または眼内注射が含まれる）が含まれ得る。
本発明の薬剤は、好ましくは、例えば、医薬組成物を患者の組織領域に直接に注入することにより局所投与される。
特定の疾患のための局所投与方法が本明細書中下記において表１に詳しく記載される：
表１
疾患または病状 局所的投与方法
軟骨疾患 関節内／滑液包内
皮膚疾患 局所的
筋疾患 筋肉内
変性椎間板疾患 椎間板領域内への直接注入
腹膜透析により治療される末期腎臓不全 透析液を介して腹膜腔内に直接に
アルツハイマー病 脳内に直接に
膀胱感染症 カテーテルを介して膀胱に
眼疾患 局所的
局所適用のために、本発明のＲＡＳ調節剤は、局所適用のために好適なゲルに懸濁することができる。局所適用、経粘膜適用または経鼻適用のために好適な医薬組成物の他の例には、クリーム、軟膏、ペースト、ローション、乳状物、懸濁物、フォームおよび漿液が含まれるが、これらに限定されない。
注射の場合、医薬組成物の有効成分は、水溶液において、好ましくは生理学的に適合し得る緩衝液（例えば、ハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理学的な生理的食塩緩衝液など）において配合することができる。経粘膜投与の場合、浸透されるバリアに対して適切な浸透剤が配合において使用される。そのような浸透剤はこの分野では一般に知られている。
経口投与の場合、医薬組成物は、活性化合物をこの分野で広く知られている医薬的に許容され得るキャリアと組み合わせることによって容易に配合され得る。そのようなキャリアは、医薬組成物が、患者によって経口摂取される錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー剤および懸濁物などとして配合されることを可能にする。経口使用される薬理学的調製物を、固体の賦形剤を使用し、得られた混合物を場合により粉砕し錠剤または糖衣錠コアを得るために、所望する場合には好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して作製することができる。好適な賦形剤には、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロースなど；および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に許容され得るポリマーがある。所望する場合には、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤を加えることができる。
糖衣錠コアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液を使用することができ、この場合、糖溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る。色素または顔料を、活性化合物の量を明らかにするために、または活性化合物の量の種々の組合せを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに加えることができる。
経口使用され得る医薬組成物には、ゼラチンから作製されたプッシュ・フィット型カプセル、ならびに、ゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトールなど）から作製された軟いシールされたカプセルが含まれる。プッシュ・フィット型カプセルは、充填剤（例えば、ラクトースなど）、結合剤（例えば、デンプンなど）、滑剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど）および場合により安定化剤との混合で有効成分を含有することができる。軟カプセルでは、有効成分を好適な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィンまたは液状のポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁させることができる。また、安定化剤を加えることができる。経口投与される配合物はすべて、選ばれた投与経路について好適な投薬形態でなければならない。
口内投与の場合、組成物は、従来の様式で配合された錠剤またはトローチの形態を取ることができる。
鼻吸入による投与の場合、本発明による使用のための有効成分は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素）の使用により加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示物の形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投薬量単位が、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定され得る。ディスペンサーにおいて使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジで、化合物および好適な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはデンプンなど）の粉末混合物を含有するカプセルおよびカートリッジを配合することができる。
本明細書中に記載される医薬組成物は、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。注射用配合物は、場合により保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは多回用量容器における単位投薬形態で提供され得る。組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクルにおける懸濁物または溶液剤またはエマルションにすることができ、また、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤などの配合剤を含有することができる。
非経口投与される医薬組成物には、水溶性形態での活性調製物の水溶液が含まれる。また、有効成分の懸濁物を適切な油性または水性の注射用懸濁物として調製することができる。好適な親油性の溶媒またはビヒクルには、脂肪油（例えば、ゴマ油など）、または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルなど）、トリグリセリドまたはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁物は、懸濁物の粘度を増大させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁物はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために有効成分の溶解性を増大させる好適な安定化剤または薬剤を含有することができる。
本発明の医薬組成物はまた、特に本明細書中上記に記載される関節炎疾患を治療するためには、長期放出組成物または持続放出組成物として配合することができる。
表現「長期放出」配合物または表現「持続放出」配合物は、活性な阻害剤の放出または活性化が、持続した期間または長期間にわたって、すなわち、少なくとも、薬剤が未加工状態または非配合状態でインビボで利用可能になった場合よりも長い期間にわたってもたらされる本発明の薬剤の配合物を示す。場合により、長期放出組成物は一定の速度で存在し、かつ／または、活性なポリペプチドの持続した濃度および／または連続した濃度をもたらす。好適な長期放出組成物は、マイクロカプセル化、固体の疎水性ポリマーの半透過性マトリックス、生分解性ポリマー、生分解性ヒドロゲル、懸濁物またはエマルション（例えば、水中油型または油中水型）を含むことができる。場合により、長期放出組成物はポリ−ラクチド−ｃｏ−グリコール酸（ＰＬＧＡ）を含み、Ｌｅｗｉｓ、“ラクチド／グリコリドポリマーからの生物活性剤の制御された放出”、Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｓ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍ．Ｃｈａｓｉｎ＆Ｒ．Ｌａｎｇｅｅｒ編（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、１頁〜４１頁）に記載されるように調製することができる。場合により、長期放出組成物は安定であり、従って、ＲＡＳ阻害剤の活性は長期にわたる貯蔵により認められ得るほど低下しない。より具体的には、そのような安定性は、安定化剤（例えば、水溶性の多価金属塩など）を存在させることにより高めることができる。
あるいは、有効成分は、好適なビヒクル（例えば、無菌の、パイロジェン非含有水溶液）を使用前に用いて構成される粉末形態にすることができる。
本発明の医薬組成物はまた、例えば、カカオ脂または他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を使用して、座薬または停留浣腸剤などの直腸用組成物に配合することができる。
本発明に関連した使用のために好適な医薬組成物には、有効成分が、その意図された目的（例えば、ＡＣＥの阻害またはアンギオテンシンＩＩ受容体のブロック）を達成するために効果的な量で含有される組成物が含まれる。より具体的には、治療効果的な量は、治療されている対象の病状（例えば、虚血）を予防、緩和あるいは改善するために効果的であるか、または、治療されている対象の生存を延ばすために効果的である、有効成分（核酸構築物）の量を意味する。
治療効果的な量の決定は、特に本明細書中に提供される詳細な説明に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。
本発明のＲＡＳ阻害剤の治療効果的な量を決定する１つの方法が、ＧＡＧレベルを、薬剤を投与する前に、および／または、薬剤を投与するのと同時に、および／または、薬剤を投与した後で分析することによる方法である。そうすることにおいて、さらなる情報を、治療計画、治療方針の決定、および／または、疾患の重篤度の測定に関して集めることができる。
ＧＡＧレベルは、生物学的流体（例えば、滑液）または組織（例えば、軟骨）を、当技術分野で既知である技術を使用して対象から取り出すことによって測定することができる。ＧＡＧを測定する様々な方法が当技術分野で既知であり、これらには、下記において実施例１および実施例２に記載される方法が含まれる。好ましくは、分析されたサンプルにおけるＧＡＧレベルが、コントロール個体から得られたＧＡＧレベルと比較される。コントロールサンプルは、同じ生物種、年齢の対象に由来すること、また、同じ亜組織（ｓｕｂ−ｔｉｓｓｕｅ）に由来することが好ましい。あるいは、コントロールのデータをデータベースおよび文献から選ぶことができる。
考えられ得るところでは、ＧＡＧレベルを分析する工程および投与する工程を治療の方針期間中に何回か繰り返すことができる。例えば、ＧＡＧレベルを薬剤投与後１週間で分析することができる。ＧＡＧレベルが、コントロールと比較されたＧＡＧレベルよりも高いならば、薬剤の用量を減らすことができる。ＧＡＧレベルが、対照と比較されたＧＡＧレベルよりも低いままであるならば、薬剤の用量を増大させることができる。
本発明のこの態様の好ましい実施形態において、治療方針を、腎臓の疾患または状態、血管の疾患または状態、皮膚の疾患または状態および軟骨の疾患または状態（これらに限定されない）を含めて、ＧＡＧをアップレギュレーションすることが治療的に有益である任意の疾患についてこのように決定することができる。これらの疾患には、下記の実施例の節において例示されるように、ＧＡＧの低下が付随する場合がある。具体的には、実施例１におけるインビボ結果、図２Ａ〜図２Ｃおよび図３Ａ〜図３Ｃ、ならびに、実施例２におけるインビトロ結果、図４および表３から理解されるように、ＧＡＧが、タンパク尿に関連する腎臓疾患において減少する。実施例２の表４には、内皮細胞でのＧＡＧの低下が例示され、また、実施例２の表５には、軟骨細胞でのＧＡＧにおける低下が例示される。
本発明の方法において使用される任意の調製物について、治療効果的な量または用量は、最初はインビトロでアッセイおよび細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、用量は所望の濃度または滴定量を得るために動物モデルにおいて配合することが可能である。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。
本明細書中に記載される有効成分の毒性および治療効力は、細胞培養または実験動物における、インビトロで標準的な薬学的手法によって、明らかにすることができる。これらのインビトロでの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用に対する投薬量範囲を決定するために使用することができる。投薬量は、用いられる投薬形態および利用される投与経路に依存して変化し得る。正確な配合、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選ぶことができる（Ｆｉｎｇｌ，ｅｔ ａｌ，（１９７５年）「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ｃｈ．１ｐ．１参照）。
投薬量および投薬間隔は、有効成分の局所レベルが生物学的効果を誘導または抑制するために十分であるように個々に調節することができる（最小有効濃度、ＭＥＣ）。ＭＥＣはそれぞれの調製物について変化するが、インビトロデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投薬量は、個体の特徴、および、投与経路に依存する。様々な検出アッセイを、血漿中濃度を求めるために使用することができる。
本発明の薬剤（例えば、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、ＡＴ１受容体アンタゴニスト）の局所投与される治療的用量は好ましくは、約１０ｍｇを超えず、好ましくは約９ｍｇを超えず、好ましくは約８ｍｇを超えず、好ましくは約７ｍｇを超えず、好ましくは約６ｍｇを超えず、好ましくは約５ｍｇを超えず、好ましくは約４ｍｇを超えず、好ましくは約３ｍｇを超えず、好ましくは約２ｍｇを超えず、好ましくは約１ｍｇを超えず、好ましくは約０．５ｍｇを超えず、好ましくは約０．１ｍｇを超えない。
本発明の薬剤を全身投与するための全身用量は、対象の必要性に従って決定することができ、例えば、１日あたり１ｍｇ〜２５０ｍｇの薬剤などである。
処置される状態の重篤度および応答性に依存して、投薬は、単回または複数回投与で行うことができ、この場合、処置期間は、数日から数週間まで、または治療が達成されるまで、または疾患状態の軽減が達成されるまで続く。
投与される組成物の量は、当然のことではあるが、処置されている患者、苦痛の重篤度、投与様式、処方医の判断などに依存する。
本発明の組成物は、所望されるならば、有効成分を含有する１つまたは複数の単位投薬形態物を含有し得るパックまたはディスペンサーデバイス（例えば、ＦＤＡ承認キットなど）で提供され得る。パックは、例えば、金属ホイルまたはプラスチックホイルを含むことができる（例えば、ブリスターパックなど）。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与のための説明書が付随し得る。パックまたはディスペンサーデバイスはまた、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府当局によって定められた形式で、容器に関連した通知によって適応させることがあり、この場合、そのような通知は、組成物の形態、あるいはヒトまたは動物への投与の当局による承認を反映する。そのような通知は、例えば、処方薬物について米国食品医薬品局によって承認されたラベル書きであり得るか、または、承認された製品添付文書であり得る。適合し得る医薬用キャリアに配合された本発明の調製物を含む組成物もまた、上でさらに詳述されたように、適応される状態を処置するために調製され、適切な容器に入れられ、かつ標識され得る。
本発明の薬剤はまた、他の医薬用薬剤との組合せで投与することができる。混合治療の一例が、リソソーム蓄積症を治療するための混合治療である場合がある。本明細書中上記で述べられたように、リソソーム蓄積症（例えば、ＭＰＳなど）はリソソームのヒドロラーゼ酵素における変異に関連する。従って、リソソームのヒドロラーゼ酵素もまた、ＲＡＳ活性化薬剤と一緒に患者に投与される。酵素を患者に導入する１つの方法が、本明細書中上記で議論されるような遺伝子治療技術を使用することによる方法である。
別の一例が腎臓患者において例示される。腹膜透析によって治療された末期腎臓疾患に苦しむ患者に関連する共通の問題が、その選択的透過性にとって非常に重要であるアニオン性部位の減少、それにより、長期間の腹膜透析（ＰＤ）のときの患者における腹膜の輸送特性が損なわれることである。流体の高い重量モル浸透圧濃度のために要求される透析液における高濃度のグルコースが膜の機能喪失の原因であると考えられており、グルコースが、そのＧＡＧ含有量を低下させることによって膜に影響を及ぼすことが示されている［Ｙｕｎｇ他、Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ、２００４（Ｍａｙ）、１５（５）：１１７８〜８８］。従って、本発明の薬剤を、腹膜中皮におけるＧＡＧレベルを増大させ、それにより、高いグルコース濃度の有害な影響を改善するために透析液に加えることができる。
本発明のさらなる目的、利点および新規な特徴は、下記実施例を考察すれば、当業技術者には明らかになるであろう。なおこれら実施例は本発明を限定するものではない。さらに、先に詳述されかつ本願の特許請求の範囲の項に特許請求されている本発明の各種実施形態と側面は各々、下記実施例の実験によって支持されている。
上記説明とともに、以下の実施例を参照して本発明を例示する。なおこれら実施例によって本発明は限定されない。
本願で使用される用語と、本発明で利用される実験方法には、分子生化学、微生物学および組み換えＤＮＡの技法が広く含まれている。これらの技法は文献に詳細に説明されている。例えば以下の諸文献を参照されたい：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋら１９８９年；Ａｕｓｕｂｅｌ， Ｒ．Ｍ．編１９９４年「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻；Ａｕｓｕｂｅｌら著１９８９年「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，米国メリーランド州バルチモア；Ｐｅｒｂａｌ著「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，米国ニューヨーク１９８８年；Ｗａｔｓｏｎら、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｂｏｏｋｓ、米国ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎら編「Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｓｅｒｉｅｓ」１〜４巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、米国ニューヨーク１９９８年；米国特許の４６６６８２８号、４６８３２０２号、４８０１５３１号、５１９２６５９号および５２７２０５７号に記載される方法；Ｃｅｌｌｉｓ， Ｊ．Ｅ．編「Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」Ｉ〜ＩＩＩ巻１９９４年；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ「Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ−Ａ Ｍａｍｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ」Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、Ｎ．Ｙ．、１９９４年、第３版；Ｃｏｌｉｇａｎ， Ｊ．Ｅ．編「Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻１９９４年；Ｓｔｉｔｅｓら編「Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ、米国コネティカット州ノーウォーク１９９４年；ＭｉｓｈｅｌｌとＳｈｉｉｇｉ編「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、米国ニューヨーク１９８０年；また利用可能な免疫検定法は、例えば以下の特許と科学文献に広範囲にわたって記載されている。米国特許の３７９１９３２号、３８３９１５３号、３８５０７５２号、３８５０５７８号、３８５３９８７号、３８６７５１７号、３８７９２６２号、３９０１６５４号、３９３５０７４号、３９８４５３３号、３９９６３４５号、４０３４０７４号、４０９８８７６号、４８７９２１９号、５０１１７７１号および５２８１５２１号；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」１９８４年；Ｈａｍｅｓ， Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編「Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」１９８５年；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ Ｓ．Ｊ．編「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」１９８４年；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， Ｒ．Ｉ．編「Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ」１９８６年；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ １９８６年；Ｐｅｒｂａｌ， Ｂ．著「Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ」１９８４年および「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」１〜３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、米国カリフォルニア州サンディエゴ１９９０年；Ｍａｒｓｈａｋら、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ、１９９６年；なお、これらの文献は、あたかも本願に完全に記載されているように援用するものである。その他の一般的な文献は、本明細書を通じて提供される。これらの文献に記載の方法は当業技術界で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。これらの文献に含まれるすべての情報は本願に援用するものである。
（実施例１）
ＰＡＮネフローゼのラットの糸球体における機能的電荷バリアの研究
本研究の目的は、ＡＣＥ−Ｉの投与によるＲＡＳの阻害がピューロマイシン投与後にＧＡＧ合成を増大させるかどうかを、電子顕微鏡観察形態学および組織化学の技術を使用してインビボで確認することであった。
材料および方法
動物および治療計画
２６匹のオスのＷｉｓｔａｒラット（Ｂｅｌｉｎｓｏｎ、イスラエル、それぞれが２２０ｇｒ〜２６０ｇｒ）を個々の代謝ケージに収容し、標準食および水を自由に取らせた。３日の順応期間の後、ラットを無作為に３つの群に分けた：コントロール、ピューロマイシンアミノヌクレオシド処置（ＰＡＮ処置）およびＰＡＮ＋エナラプリル処置。６匹のコントロールには０．９％ＮａＣｌを注射し、２０匹のラットにはＰＡＮ（７５ｍｇ／ｋｇ、Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）を尾静脈経由により注射した。後者のうちの１０匹を、ＰＡＮ注射の３日前に、飲み水中のエナラプリル（Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、５０ｍｇ／Ｌ）により処置した。９日目に、２４時間の尿採取を行い、タンパク質含有量を、Ｂｅｃｋｍａｎ Ａｒｒａｙ−Ｐｒｏｔｅｉｎシステムを使用して測定した。１０日目に、ラットの体重を測定し、血液を、血清アルブミン、血清クレアチニンおよび血清コレステロールの測定のために集めた（Ａｕｔｏａｎａｌｙｚｅｒ、Ｈｉｔａｃｈｉ、日本）。すべての動物実験は、実験動物の管理および使用のためのＲａｂｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ倫理委員会によって制定された指針に従って行われた。
組織調製：腎臓を直ちに取り出し、氷上に置き、皮質を髄質から分離した。それぞれの腎臓の薄片を形態学的研究および組織化学的研究のために０．５％グルタルアルデヒド／リン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）（ｐＨ７．４）において固定処理した。電子顕微鏡観察（ＥＭ）のために、ＧＡ固定処理された腎臓の１ｍｍ３の組織ブロックを洗浄し、エタノールで脱水し、ＬＲ−ｗｈｉｔｅ樹脂（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＰＡ）に包埋した。ＥＭ形態学のために、類似する組織ブロックを、４℃で１時間、Ｖｅｒｏｎａｌ酢酸緩衝液（ｐＨ７．４）における１％四酸化オスミウム（ＯｓＯ４）により後固定処理し、エタノールおよびプロピレンオキシドにおいて脱水し、アラルダイト（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）に包埋した。
電子顕微鏡観察による形態学および組織化学：ＥＭ形態学のために、超薄アラルダイト切片を４００メッシュの格子に載せ、酢酸ウラニルおよびクエン酸鉛により染色し、炭素により被覆した。ＥＭ組織化学のために、超薄ＬＲ−ｗｈｉｔｅ切片を２００メッシュのニッケル格子に載せ、ホルムバルフィルムにより被覆し、カーボンにより含浸処理した。ポリカチオンのコロイド状金（ＣＣＧ）を、Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ他［Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ、８：５８６〜５９５、１９９７］によって記載されるように、ポリ−Ｌ−リシンによるコロイド状金（１２ｎｍ）の安定化により調製した。切片をＣＣＧにより染色し、洗浄し、その後、５０％エタノールにおける飽和酢酸ウラニルにより染色した。すべての切片の検査を、ＪＥＯＬ−１００Ｂ ＥＭを８０ｋＶで使用して行った。
形態測定：ＣＣＧ標識化密度の分析をＣＣＧ染色されたＬＲ−ｗｈｉｔｅ包埋の腎臓組織に対して盲検様式で行った。分析を、無作為に切断された膜の１μｍ２の面積あたりの金粒子の密度を計算することによって行った。それぞれの群からの５匹のラットを調べた。それぞれのラットにおいて、１０個の糸球体からの１００回の測定を行った。すべての測定を、Ｍａｃｉｎｔｏｓｈ用のＮＩＨ−Ｉｍａｇｅ１．４９プログラムを使用して、５０００倍の倍率でのデジタル化された電子顕微鏡写真に対して行った。
結果
血液検査および尿検査の結果が下記の表２に示される。
血清アルブミンが、コントロールと比較して、ＰＡＮ群では、非処置ラット（ｐ＜０．００１）およびエナラプリル処置ラット（ｐ＜０．００５）の両方で低下していた。血清コレステロールがＰＡＮ群では著しく増大していた（ｐ＜０．００１）。２４時間の尿採取では、著しいタンパク尿が非処置のＰＡＮ群（ｐ＜０．００１）で示されたが、これはエナラプリル処置のＰＡＮ群では著しく改善した（ｐ＜０．０２）。
形態学：コントロールラットの電子顕微鏡観察分析では、無数の足突起を有する正常な足細胞構造が示された（図１Ａ）。しかしながら、ＰＡＮラットにおいて、糸球体は、足突起の平坦化および消失とともに足細胞構造の喪失を示した（図１Ｂ）。足細胞の細胞体において、細胞質内空胞を認めることができる。変化が糸球体基底膜（ＧＢＭ）または内皮において全く観察されなかった。エナラプリル処置されたＰＡＮラットでもまた、正常な足細胞構造の類似した喪失が認められた。
ＧＢＭに対するＣＣＧの結合：電子顕微鏡観察によるＣＣＧ染色の形態測定分析では、ＣＣＧの結合が主として、ＧＢＭ、ボーマン嚢、ならびに、細管および血管の基底膜に限定されたことが示された。糸球体のＣＣＧ結合が図２Ａ〜図２Ｃに例示される。形態測定分析の結果が図３Ａ〜図３Ｃに例示される。コントロール群では、１μｍ２のＧＢＭあたり６７．３±５．６個の粒子が存在した（図３Ａ）；非処置のＰＡＮ群では、ＣＣＧの結合が１μｍ２のＧＢＭあたり３９．１±１．０個の粒子に著しく低下し（ｐ＜０．００１（対コントロール）、図３Ｂ）、エナラプリル処置のＰＡＮ群では、ＣＣＧの結合が１μｍ２のＧＢＭあたり５６．０±５．５個の粒子に増大した（ｐ＜０．０２（対ＰＡＮ、ＮＳ対コントロール）、図３Ｃ）。これらの結果から、ネフローゼのＰＡＮラットでは、ＧＢＭにおけるアニオン性ＧＡＧ部位が減少していたことが明らかにされる。エナラプリル処置は、ネフローゼのＰＡＮラットのＧＢＭにおけるＧＡＧの維持に対する有益な作用を有していた。
（実施例２）
インビトロでのプロテオグリカン合成に対するＲＡＳ系の影響の決定
本研究の目的は、ＲＡＳの阻害が、ＧＡＧ合成を、腎臓メサンギウム細胞培養物、内皮細胞培養物および軟骨細胞培養物においてインビトロで増大させるかどうかを、細胞結合ＧＡＧアッセイおよび放射能取り込みアッセイを使用して確認することであった。
材料および方法
すべての組織培養培地および添加剤をＢｉｏｌｏｇｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（Ｂｅｉｔ Ｈａｅｍｅｋ、イスラエル）から得た。エナラプリラト（Ｅ）はＭＳＤ（イスラエル）からの譲渡物であり、カンデサルタン（Ｃ）はＡｓｔｒａ Ｚｅｎｅｋａ（スウェーデン）からの譲渡物であった。
細胞および細胞株
ラットのメサンギウム細胞（ＲＭＣ）：Ｓｐｒａｕｇｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに由来するＲＭＣ（＃ＡＴＣＣ−メサンギウム−ＣＲＬ−２５７３）を、ＡＴＣＣの説明書に従って、１５％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）および抗生物質が補充されたＤＭＥＭで培養した。メサンギウム細胞は腎臓の糸球体間質に由来し、従って、ＧＢＭを分析するための貴重なツールとして役立つ。
内皮細胞：ヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）をコラゲナーゼ処理によって単離した。培養を、１０％ＦＣＳ、２５μｌ／ｍｌの内皮マイトジェン（Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＭＡ、米国）および抗生物質を含有するＭ−１９９培地において確立した。ＨＵＶＥＣを０．２５％トリプシン／０．０２％ＥＤＴＡによる処理によって継代培養し、２回〜３回の継代培養物を実験のために使用した。
軟骨細胞：関節軟骨由来の組織片をインビトロでインキュベーションし、外植片細胞培養物を記載されたように確立した［Ｎｅｖｏ他、１９７２、Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ、２８：２１９〜２２８］。細胞培養物を免疫組織化学によって評価した。
細胞結合ＧＡＧアッセイ
比色アッセイ：細胞結合ＧＡＧを、（Ｎｅｖｏ他、１９７２）によって記載されるように、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ、Ｓｉｇｍａ）沈殿によってＲＭＣから単離した。簡単に記載すると、細胞を、２％ＦＣＳにおいて２４時間、休止状態（すなわち、飢餓状態）にし、その後、下記のプロトコルに従って、増大用量のエナラプリラト［（Ｅ）、エナラプリルの活性形態］の存在下、４０μｇ／ｍｌのＰＡＮ（Ｓｉｇｍａ）とともにＤＭＥＭにおいて３６時間インキュベーションした：コントロール、ＰＡＮ、ＰＡＮ＋Ｅ（２００μｇ／ｍｌ）、ＰＡＮ＋Ｅ（４００μｇ／ｍｌ）、ＰＡＮ＋Ｅ（８００μｇ／ｍｌ）。ＰＢＳで徹底的に洗浄した後、ＲＭＣを、０．０５％トリプシン／ＥＤＴＡを使用して集めた。０．１Ｍ酢酸ナトリウム、０．００５Ｍ ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ）、０．００５Ｍシステイン（Ｓｉｇｍａ）および０．１％パパイン（Ｓｉｇｍａ）を含有する緩衝液（ｐＨ５．４）を加えた後、混合物を６５℃で４８時間インキュベーションし、その後、蒸留水に対して２４時間透析した。ＮａＣｌを３０ｍＭの最終濃度に透析液に加え、十分に混合した。ＧＡＧを、ＣＰＣを０．５％の最終濃度に加えることによって沈殿させ、溶液を３７℃で一晩インキュベーションした。沈殿物を遠心分離によって集め、２Ｍ ＣａＣｌ２に溶解し、エタノール：エーテル（２：１）により再沈殿させ、遠心分離によって集め、乾燥した。ＧＡＧを、へパラン硫酸を標準物として使用して比色法によって求め（ウロン酸含有量ｘ３．３＝ＧＡＧ含有量）、１０６細胞あたりのμｇＧＡＧとして表した。
放射性アッセイ（３５Ｓ標識化）：細胞をコンフルエンスに成長させ、２％ＦＣＳにおいて２４時間、休止状態にし、その後、細胞を血清非含有培地＋下記添加剤の１つに移した：１μＣｉ／ｍｌの３５Ｓの存在下において、コントロール、ＰＡＮ（４０μｇ／ｍｌ）、ＰＡＮ＋Ｅ（２００μｇ／ｍｌ）、ＰＡＮ＋Ｅ（４００μｇ／ｍｌ）、ＰＡＮ＋Ｅ（８００μｇ／ｍｌ）、ＰＡＮ＋Ｃ（１０−７Ｍカンデサルタン）。２４時間後、培地を集め、細胞をトリプシン処理によって集め、アリコットを細胞測定およびタンパク質測定のために得た。細胞を、記載されたようにパパインで消化し、続いて、水が１００ｃｐｍ／ｍｌ未満を含有するまで、非放射性の硫酸ナトリウムを含有する水に対して徹底的に透析した。透析液をＣｏｒｅｘチューブに移し、同じ手順を、非放射性ＧＡＧについて、記載されたように行った。放射能をベータカウンターで測定した。
統計学的分析：データが平均±ＳＥとして示される。インビボ研究では、群間の比較を一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）の使用によって行った。マン・ホイットニー検定を、インビトロ研究における比較のために使用した。両側でｐ＜０．０５を有意であると見なした。
結果
比色アッセイ：ＰＡＮはＲＭＣにおける細胞結合ＧＡＧの著しい低下を誘導した（図４）。コントロール群では、１０６細胞あたり５．０３±０．０６μｇのＧＡＧが存在し、ＰＡＮ群では、１０６細胞あたり２．３５±０．５４μｇのＧＡＧが存在し、コントロール群での場合よりも著しく少なかった（ｐ＜０．００１）。培養培地へのエナラプリラト（Ｅ）の添加は、ＧＡＧ含有量における用量依存的な上昇を引き起こした。ＰＡＮ＋Ｅ（２００μｇ／ｍｌ）では、１０６細胞あたり２．４３±０．４２μｇのＧＡＧが存在した。ＰＡＮ＋Ｅ（４００μｇ／ｍｌ）では、１０６細胞あたり２．８±０．６５μｇのＧＡＧへの、著しくはないが、わずかな上昇が認められた。ＰＡＮ＋Ｅ（８００μｇ／ｍｌ）では、１０６細胞あたり５．３±０．４３μｇのＧＡＧが存在し、これはＰＡＮ群での場合よりも著しく大きかったが、コントロール群とは差がなかった。
放射性アッセイ：
１．ＲＭＣ
下記の表３に示されるように、ＰＡＮは、コントロールの６９％へのＲＭＣにおける細胞結合ＧＡＧの著しい低下を誘導した。培養培地へのエナラプリラト（８００μｇ／ｍｌ）の添加はＧＡＧ合成を８０％に上昇させ、これに対して、カンデサルタン（Ｍ−７）の添加はＧＡＧ合成をコントロール値の１０２％に上昇させた（すべて、ＰＡＮの存在下において）。
２．内皮細胞
下記の表４に示されるように、ＰＡＮは、コントロールの８１％への細胞結合ＧＡＧにおける著しい減少を誘導し、これに対して、エナラプリラト（８００μｇ／ｍｌ）の添加はＧＡＧ合成をコントロールの９６％に上昇させ、カンデサルタン（Ｍ−７）はコントロールの１０７％に上昇させた。
３．軟骨細胞
下記の表５に示されるように、ＰＡＮは、コントロールの６８％への細胞結合ＧＡＧにおける著しい減少を誘導し、これに対して、エナラプリラト（２００μｇ／ｍｌ）の添加はＧＡＧ合成をコントロールの１５２％に上昇させた。
結論
まとめると、ＡＣＥ阻害剤およびアンギオテンシンＩＩ受容体遮断剤はともに、ＧＡＧのピューロマイシン誘導による低下の影響を、ＧＡＧの合成を活性化することによって改善することができた。このことはラット腎臓においてインビボで示され、また、腎臓、軟骨および内皮細胞培養物においてインビトロで明らかにされた。
（実施例３）
変形性関節症の動物モデルにおけるＡＣＥ阻害剤の関節内投与
本研究の目的は、変形性関節症誘導ラットへのＡＣＥ阻害剤の関節内投与が、変形性関節症の症状発現を遅らせるために、または、最小限に抑えるために役立つかどうかを確認することであった。
材料および方法
変形性関節症（ＯＡ）を、Ｒｏｌｌｉ Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚの部分的半月板切除のモデル［Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ、ＲＷおよびＧｏｌｄｂｅｒｇ，ＶＭ、Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ、１９８７（Ｍａｙ）、１４ Ｓｐｅｃ Ｎｏ：１１６〜８；Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚ、ＲＷ他、Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ、１９８１（Ｄｅｃ）、４０（６）：５８４〜９２］を使用して３２匹のラットにおいて誘導した。部分的半月板切除を受けているコントロールラット（８匹）の組織を縫合によって直ちに閉じ、一方、ＡＣＥ−Ｉ処置群（２４匹）に対しては、部分的半月板切除の後直ちに、ＡＣＥ−Ｉを含有するコンポジットゲル（５％カプトリル）を加え、その後、関節層を縫合した。６週間後、動物を屠殺した。実験終了前に、健康診断により、跛行の程度および手術した下肢の運動制限の程度を、健常な足に対する疾患の程度（これは、手術した足によって作動されるガラム単位での圧力に転換される）のデジタル測定を行う装置を使用して確保した。関節、大腿骨および脛骨の組織学的切片を調製し、ヘマトキシリン−エオシン（Ｈ＆Ｅ）により、同様にまた、ｐＨ２．５およびｐＨ１．０でのアルシアンブルー、および、Ｍａｓｓｏｎ三色染料（Ｄａｋｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国）により染色した。まとめると、これらの染色技術により、プロテオグリカン含有量および細胞外マトリックス沈着が評価される。
結果
図５Ａ〜図５Ｂに例示されるように、コントロール動物は重度のＯＡを大腿骨および脛骨の両方の軟骨表面において発症した。ほんのわずかな半月板残渣が残っただけであった。軟骨下骨に達する深い線維攣縮が認められた。関節軟骨は主に無細胞であり、そのプロテオグリカンの大部分を失っていた。
図５Ｃ〜図５Ｄに例示されるように、カプトプリルにより処置された動物は、プロテオグリカンを濃く示すとともに、非常に細胞性である関節軟骨を呈した。ＯＡのほんの穏やかな開始があったにすぎず、これは最小限の線維攣縮および細胞クローン化によって明白であった。
結論
部分的半月板切除により、古典的なＯＡが、明瞭な解剖学的徴候および組織学的徴候を伴って数週間以内に誘導される。ＡＣＥ−Ｉ（カプトプリル）の関節内投与はＯＡの症状発現を遅らせ、また、ＯＡの症状発現を最小限に抑える。
明確にするため別個の実施形態で説明されている本発明の特定の特徴は単一の実施形態に組み合わせて提供することもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするため単一の実施形態で説明されている本発明の各種の特徴は別個にまたは適切なサブコンビネーションで提供することもできる。
本発明はその特定の実施形態によって説明してきたが、多くの別法、変更および変形があることは当業者には明らかであることは明白である。従って、本発明は、本願の請求項の精神と広い範囲の中に入るこのような別法、変更および変形すべてを包含するものである。本明細書中で挙げた刊行物、特許および特許出願はすべて、個々の刊行物、特許および特許出願が各々あたかも具体的にかつ個々に引用提示されているのと同程度に、全体を本明細書に援用するものである。さらに、本願で引用または確認したことは本発明の先行技術として利用できるという自白とみなすべきではない。
図１Ａ〜図１Ｃは、アルデヒドおよび四酸化オスミウムにより固定処理され、アラルダイトに包埋されたラット腎臓の薄い切片の電子顕微鏡写真画像の写真である（ｘ１００００の原倍率）。 図２Ａ〜図２Ｃは、アルデヒドにより固定処理され、ＬＲ−ホワイトに包埋され、ＣＣＧにより標識されたラット腎臓の切片の電子顕微鏡写真画像の写真である。 図３は、薄いＬＲ−ホワイト腎臓切片でのＧＢＭに対するＣＣＧ結合の形態計測分析を例示する棒グラフである。 図４は、培養におけるＲＭＣ結合ＧＡＧの濃度を例示する棒グラフである。 図５Ａ〜図５Ｄは、Ｒｏｌｌｉ Ｍｏｓｋｏｗｉｔｚの部分的半月板切除の知られているＯＡモデルを使用する変形性関節症（ＯＡ）誘導ラットの組織学的切片の代表的なサンプルの写真である。

Claims (1)

  1. 変形性関節症を治療するために特定される医薬品を製造するための薬剤の使用であって、前記薬剤が局所投与のために処方され、前記薬剤が、ＡＢ−１０３、アンコベニン、ベナゼプリラト、ＢＲＬ−３６３７８、ＢＷ−Ａ５７５Ｃ、ＣＧＳ−１３９２８Ｃ、ＣＬ２４２８１７、ＣＶ−５９７５、Ｅｑｕａｔｅｎ、ＥＵ４８６５、ＥＵ４８６７、ＥＵ−５４７６、ホロキシミチン、ＦＰＬ６６５６４、ＦＲ−９００４５６、Ｈｏｅ−０６５、Ｉ５Ｂ２、インドラプリル、ケトメチルウレアス、ＫＲＩ−１１７７、ＫＲＩ−１２３０、Ｌ６８１１７６、リベンザプリル、ＭＣＤ、ＭＤＬ−２７０８８、ＭＤＬ−２７４６７Ａ、モベルチプリル、ＭＳ−４１、ニコチアナミン、ペントプリル、フェナセイン、ピボプリル、レンチアプリル、ＲＧ−５９７５、ＲＧ−６１３４、ＲＧ−６２０７、ＲＧＨ０３９９、ＲＯＯ−９１１、ＲＳ−１００８５−１９７、’ＲＳ−２０３９、ＲＳ５１３９、ＲＳ８６１２７、ＲＵ−４４４０３、Ｓ−８３０８、ＳＡ−２９１、スピラプリラト、ＳＱ２６９００、ＳＱ−２８０８４、ＳＱ−２８３７０、ＳＱ−２８９４０、ＳＱ−３１４４０、Ｓｙｎｅｃｏｒ、ウチバプリル、ＷＦ−１０１２９、Ｗｙ−４４２２１、Ｗｙ−４４６５５、Ｙ−２３７８５、Ｙｉｓｓｕｍ、Ｐ−０１５４、ザビシプリル、Ａｓａｈｉ Ｂｒｅｗｅｒｙ ＡＢ−４７、アラトリオプリル、ＢＭＳ１８２６５７、Ａｓａｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ−１１１、Ａｓａｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ−１１２、Ｄａｉｎｉｐｐｏｎ ＤＵ−１７７７、ミキサンプリル、Ｐｒｅｎｔｙｌ、ゼフェノプリラト、１（−（１−カルボキシ−６−（４−ピペリジニル）ヘキシル）アミノ）−１−オキソプロピルオクタヒドロ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸、Ｂｉｏｐｒｏｊｅｃｔ ＢＰ１．１３７、Ｃｈｉｅｓｉ ＣＨＦ１５１４、Ｆｉｓｏｎｓ ＦＰＬ−６６５６４、イドラプリル、ペリンドプリラトおよびＳｅｒｖｉｅｒ Ｓ−５５９０、アラセプリル、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラト、ホシノプリル、ホシノプリラト、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、ラミプリラト、酢酸サララシン、テモカプリル、トランドラプリル、トランドラプリラト、セラナプリル、モエキシプリル、キナプリラト、スピラプリル、酢酸サララシン、カンデサルタンシレキセチル、ＣＧＰ−６３１７０、ＥＭＤ−６６３９７、ＫＴ３−６７１、ＬＲ−Ｂ／０８１、バルサルタン、Ａ−８１２８２、ＢＩＢＲ−３６３、ＢＩＢＳ−２２２、ＢＭＳ−１８４６９８、カンデサルタン、ＣＶ−１１１９４、ＥＸＰ−３１７４、ＫＷ−３４３３、Ｌ−１６１１７７、Ｌ−１６２１５４、ＬＲ−Ｂ／０５７、ＬＹ−２３５６５６、ＰＤ−１５０３０４、Ｕ−９６８４９、Ｕ−９７０１８、ＵＰ−２７５−２２、ＷＡＹ−１２６２２７、ＷＫ−１４９２．２Ｋ、ＹＭ−３１４７２、ロサルタンカリウム、Ｅ４１７７、ＥＭＤ−７３４９５、エプロサルタン、ＨＮ−６５０２１、イルベサルタン、Ｌ−１５９２８２、ＭＥ−３２２１、ＳＬ−９１．０１０２、Ｔａｓｏｓａｒｔａｎ、Ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ、ＵＰ−２６９−６、ＹＭ−３５８、ＣＧＰ−４９８７０、ＧＡ−００５６、Ｌ−１５９６８９、Ｌ−１６２２３４、Ｌ−１６２４４１、Ｌ−１６３００７、ＰＤ−１２３１７７、Ａ−８１９８８、ＢＭＳ−１８０５６０、ＣＧＰ−３８５６０Ａ、ＣＧＰ−４８３６９、ＤＡ−２０７９、ＤＥ−３４８９、ＤｕＰ−１６７、ＥＸＰ−０６３、ＥＸＰ−６１５５、ＥＸＰ−６８０３、ＥＸＰ−７７１１、ＥＸＰ−９２７０、ＦＫ−７３９、ＨＲ−７２０、ＩＣＩ−Ｄ６８８８、ＩＣＩ−Ｄ７１５５、ＩＣＩ−Ｄ８７３１、イソテオリン、ＫＲＩ−１１７７、Ｌ−１５８８０９、Ｌ−１５８９７８、Ｌ−１５９８７４、ＬＲ Ｂ０８７、ＬＹ−２８５４３４、ＬＹ−３０２２８９、ＬＹ−３１５９９５、ＲＧ−１３６４７、ＲＷＪ−３８９７０、ＲＷＪ−４６４５８、Ｓ−８３０７、Ｓ−８３０８、サプリサルタン、サララシン、Ｓａｒｍｅｓｉｎ、ＷＫ−１３６０、Ｘ−６８０３、ＺＤ−６８８８、ＺＤ−７１５５、ＺＤ−８７３１、ＢＩＢＳ３９、ＣＩ−９９６、ＤＭＰ−８１１、ＤｕＰ−５３２、ＥＸＰ−９２９、Ｌ−１６３０１７、ＬＹ−３０１８７５、ＸＨ−１４８、ＸＲ−５１０、ゾラサルタン、ＰＤ−１２３３１９、エナルクレイン、ＲＯ４２−５８９２、Ａ６５３１７、ＣＰ８０７９４、ＥＳ１００５、ＥＳ８８９１、ＳＱ３４０１７、ＣＧＰ２９２８７、ＣＧＰ３８５６０、ＳＲ４３８４５、Ｕ−７１０３８、Ａ６２１９８、Ａ６４６６２、Ａ−６９７２９、ＦＫ９０６およびＦＫ７４４からなる群から選択される、使用。
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