JP5025646B2 - 虚血性心疾患の治療方法 - Google Patents
虚血性心疾患の治療方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5025646B2 JP5025646B2 JP2008522137A JP2008522137A JP5025646B2 JP 5025646 B2 JP5025646 B2 JP 5025646B2 JP 2008522137 A JP2008522137 A JP 2008522137A JP 2008522137 A JP2008522137 A JP 2008522137A JP 5025646 B2 JP5025646 B2 JP 5025646B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mdk
- heart
- sfrp4
- rat
- sfrp2
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 title claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 25
- 101000864793 Homo sapiens Secreted frizzled-related protein 4 Proteins 0.000 claims description 35
- 102100030052 Secreted frizzled-related protein 4 Human genes 0.000 claims description 35
- 230000036573 scar formation Effects 0.000 claims description 27
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 22
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims description 15
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 70
- 108010092801 Midkine Proteins 0.000 description 68
- 102000016776 Midkine Human genes 0.000 description 68
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 44
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 43
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 41
- 102000005162 pleiotrophin Human genes 0.000 description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 38
- 101000864786 Homo sapiens Secreted frizzled-related protein 2 Proteins 0.000 description 37
- 102100030054 Secreted frizzled-related protein 2 Human genes 0.000 description 36
- 102100034998 Thymosin beta-10 Human genes 0.000 description 36
- 101000658138 Homo sapiens Thymosin beta-10 Proteins 0.000 description 28
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 26
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 26
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 22
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 21
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 17
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 17
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 16
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 15
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 14
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 14
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 13
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 13
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 12
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 11
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 11
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 11
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108010044465 thymosin beta(10) Proteins 0.000 description 9
- 208000033774 Ventricular Remodeling Diseases 0.000 description 8
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 8
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 8
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 8
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 206010028594 Myocardial fibrosis Diseases 0.000 description 7
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 7
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- 208000037891 myocardial injury Diseases 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 6
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 6
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 6
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 5
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 5
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 5
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 4
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 4
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 4
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000011694 lewis rat Methods 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 3
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 206010002383 Angina Pectoris Diseases 0.000 description 2
- 101150005607 Mdk gene Proteins 0.000 description 2
- 102000005604 Myosin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010084498 Myosin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- YIQKLZYTHXTDDT-UHFFFAOYSA-H Sirius red F3B Chemical compound C1=CC(=CC=C1N=NC2=CC(=C(C=C2)N=NC3=C(C=C4C=C(C=CC4=C3[O-])NC(=O)NC5=CC6=CC(=C(C(=C6C=C5)[O-])N=NC7=C(C=C(C=C7)N=NC8=CC=C(C=C8)S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)O)S(=O)(=O)O)S(=O)(=O)[O-])S(=O)(=O)[O-].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[Na+] YIQKLZYTHXTDDT-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 101001023030 Toxoplasma gondii Myosin-D Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 description 2
- 108050003627 Wnt Proteins 0.000 description 2
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000013130 cardiovascular surgery Methods 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 2
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 238000007491 morphometric analysis Methods 0.000 description 2
- 230000010016 myocardial function Effects 0.000 description 2
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 210000003540 papillary muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- OWEFQTXQEHYDEJ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxypropanal diphosphono hydrogen phosphate Chemical compound OCC(O)C=O.OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O OWEFQTXQEHYDEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920000623 Cellulose acetate phthalate Polymers 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005698 Frizzled receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010045438 Frizzled receptors Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000990990 Homo sapiens Midkine Proteins 0.000 description 1
- 101000819074 Homo sapiens Transcription factor GATA-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 206010048858 Ischaemic cardiomyopathy Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100038380 Myogenic factor 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710099061 Myogenic factor 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100032970 Myogenin Human genes 0.000 description 1
- 108010056785 Myogenin Proteins 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 1
- 101150114527 Nkx2-5 gene Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 101100130580 Rattus norvegicus Mdk gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 102100021380 Transcription factor GATA-4 Human genes 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000001772 anti-angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002942 anti-growth Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940081734 cellulose acetate phthalate Drugs 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000001447 compensatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008828 contractile function Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007418 data mining Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010247 heart contraction Effects 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- 102000046379 human SFRP2 Human genes 0.000 description 1
- 229940034998 human von willebrand factor Drugs 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000007433 macroscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 238000005399 mechanical ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 1
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229960001412 pentobarbital Drugs 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920002721 polycyanoacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 102000041876 secreted frizzled-related protein (sFRP) family Human genes 0.000 description 1
- 108091079696 secreted frizzled-related protein (sFRP) family Proteins 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 210000001057 smooth muscle myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229920000208 temperature-responsive polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/2292—Thymosin; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
- A61K9/0024—Solid, semi-solid or solidifying implants, which are implanted or injected in body tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/5005—Wall or coating material
- A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
- A61K9/5052—Proteins, e.g. albumin
- A61K9/5057—Gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
しかし、これらの分子、即ちSFRP2、SFRP4、MDK、PTN及びTB10の、損傷した心筋における役割、およびそれらの虚血性心筋症に対する治療応用可能性に関してはあまり知られていない。
(心筋梗塞モデルラットの作成)
本実験では、Wistar-Lewisラット[180-220g;6?10週齡;セアック吉富(株)、福岡(SDラット、日本クレア、日本)]を用いた。全てのラットは、「"Principles of Laboratory Animal Care", National Society for Medical Research」及び「"Guide for the Care and Use of Laboratory Animals", National Institutes of Health, NIH Publication. No. 85-23, 1996」に従って人道的に扱われた。SDラットは、ペントバルビタール(50mg/kg体重)の腹膜内注射により麻酔した。麻酔下のラットに挿管し、人工呼吸器(SN?480?7型、株式会社シナノ製作所、東京)を用いて陽圧換気を維持した。左胸部を横に2.5cm開胸して、心臓を露出させた。左冠動脈主幹部(Left Anterior Descendant main branch)を、7番(segment 7)において6.0プロリン手術用縫合糸で結紮(LAD結紮)し、心筋梗塞モデルとした。以下、LAD結紮2週間後のラットを「モデルラット」ということがある。
(心筋梗塞モデルラットの作成)
雄の8週齡Lewisラット(220?225g;セアック吉富(株)、福岡)を用いた。全てのラットは、大阪大学大学院医学系研究科が定めた動物実験ガイドライン及び動物の愛護及び管理に関する法律に従って適切に扱われた。本実験のプロトコルは、大阪大学動物実験委員会によって検討・承認された。ケタミン(90mg/kg)及びキシラジン(10mg/kg)を用いてラットを麻酔し、文献記載の方法(Circulation. 1988;78:186-201)に従い、人工呼吸(機械換気)下に冠動脈左前下行枝(LAD)を結紮することにより心筋梗塞を引き起こした。以下、これらのラットを「LAD結紮ラット」ということがある。また、LAD結紮2週間後のラットを「モデルラット」ということがある。
(筋芽細胞注入モデル)
SDラットの後肢骨格筋から筋芽細胞を単離した。ラットを安楽死させ、筋肉を切り出してリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄した。非筋組織を注意深く除去した後、筋肉を細かく刻み、5mg/mLのコラーゲナーゼ(ギブコBRL、米国メリーランド州ロックヴィル)酵素により37SYMBOL 176 \f "Symbol" \s 10.5Cで40分間消化した。処理後、細胞を回収し、20%ウシ胎児血清及び1%ペニシリン_ストレプトマイシン添加ダルベッコ変法イーグル培地(DMEM)(ギブコBRL)に再懸濁した。まず、細胞を100−mmコラーゲン被覆培養皿(岩城硝子、東京)に植え、5%CO2含有湿潤雰囲気下37度で培養した。翌日、培養基を替えることにより非付着細胞を除去し、残りの付着細胞を約70%の集密度になるまで培養した。5日間の培養後、細胞を集め、DMEMで洗浄し、移植まで氷上に保存した。通常、一匹のラットから20×106個の筋芽細胞が得られ、培養細胞は約50%のデスミン陽性細胞を含有していた。得られた筋芽細胞を参考例4の筋芽細胞シートの形成に用いた。
(筋芽細胞シートモデル)
参考例1で単離された筋芽細胞を、温度応答性高分子であるポリN-イソプロピルアクリルアミド(PIPAAm)で被覆された組織培養皿(プロセル、株式会社セルシード、東京)上で培養し、筋芽細胞シートを調製した。なお、これらの培養皿の表面は、37℃においては疎水性であるが、20℃未満の温度になると親水性に変化する。6cm皿内の細胞密度5×106の細胞懸濁液を、20%ウシ胎児血清(FBS)含有DMEM中、5%CO2雰囲気下37℃で1〜2日間培養した。6cm皿で培養した集密細胞(コンフルエント細胞)は、20℃の温度に1時間保持することによって自発的に剥離し、1.5cm×2.0cmの大きさの筋芽細胞シートが得られた。
(ジーンチップ分析)
ラット6匹[Wistar?Lewisラット(180?220g;6?10週齡:セアック吉富(株)、福岡(SDラット、日本クレア、日本)]を屠殺し、非処置心臓サンプルを対照として得た(以下、A群という)。
参考例2で得られたモデルラットから、結紮から4、7、14又は56日後に梗塞及び非梗塞左心室(LV)心筋を採取し、使用するまでの間、直ちにRNAlater(登録商標)溶液(QIAGEN、ドイツ国ヒルデン)中に保存した(各時点につきn=5)。正常ラット15匹から無処置の心筋を同様に採取し、参照試料として用いた。RNeasyミニキット(QIAGEN)を用いて全RNAを抽出し、PTN又はMDK遺伝子の転写物の相対的レベルを、ABI PRISM7700配列決定システム(J Heart Lung Transplant. 2002;21:1090?1100)を用いた定量的リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応法(RT?PCR)により測定した。用いたforwardプライマー、reverseプライマー及びTaqManプローブ(登録商標)の塩基配列は下記の通りである:
ラットMDK;
CGG ATG GTC TCC TGG CAC (配列番号1)、
AGC AAG GAC TGC GGC ATG (配列番号2)、
GCC ACA CGC CCC CCA GCT (配列番号3)、
ラットPTN;
GCA AAT ACC AGT TCC AGG CTT G (配列番号4)、
TTC TTG CCT TCC TTT TTC TTC TTC T (配列番号5)、
GAA CTC ACC AGC CCA AGC CTC AAG C (配列番号6)。
R&Dシステム製SFRP2(1μg)をゼラチン(新田ゼラチン、日本)10mgと混合し、直径100〜150μmの徐放性ゲル微粒子(マイクロスフェア)を調製した。前記微粒子を、2cm×2cmサイズの生分解性PLGAシート(足場用シート;ベーリンガーインゲルハイム製「Resomer RG858」、「Resomer768」)に設置し、LAD結紮2週間後のラット虚血心の表面に移植した。
SFRP2に代えて、SFRP4を1μg(実施例2)、ミッドカインを1μg(実施例3)、プレイオトロフィンを2μg(実施例4)、以上いずれもR&Dシステム製、又はチモシンβ10、シグマ製、を1μg(実施例5)用いた以外は、実施例1と同様の操作を行った。得られたゲル微粒子を、2cm×2cmサイズの生分解性PLGAシート(実施例1に同じ)に設置し、LAD結紮2週間後のラット虚血心の表面に移植した。
SFRP2を用いずに直径100〜150μmのゲル微粒子を調製する以外は、実施例1と同様の操作を行った。得られたゲル微粒子を、2cm×2cmサイズの生分解性PLGAシート(実施例1に同じ)に設置し、LAD結紮2週間後のラット虚血心の表面に移植した。
2μgのSFRP2(R&Dシステム製)をPBS中に溶解したSFRP2溶液を、LAD結紮2週間後のラット虚血心に投与した。投与は、30ゲージ注射針(テルモ、東京)を用いた左側開胸術下6箇所への注入、又は、腹腔内への単回投与により行った。
SFRP2に代えて、SFRP4を1μg(実施例7)、ミッドカインを1μg(実施例8)、プレイオトロフィンを2μg(実施例9)、以上いずれもR&Dシステム製、又はチモシンβ10、シグマ製、を1μg(実施例10)用いた以外は、実施例6と同様の操作を行った。
SFRP2に代えて、SFRP2を2μg、SFRP4を2μg、ミッドカインを1μg、プレイオトロフィンを4μg、以上いずれもR&Dシステム製、及びチモシンβ10、シグマ製、を1μg(実施例10)含有する混合物を用いた以外は、実施例6と同様の操作を行った。
SFRP2溶液に代えて、PBSをLAD結紮2週間後のラット虚血心に投与した以外は、実施例3と同様の操作を行った。
前記参考例2で得られた、LAD結紮2週間後のモデルラットを用いて、心機能のベースラインを測定した。そして、前記梗塞ラットの境界部心筋4箇所に、種々の量の組換えヒトPTN又はMDK(R&Dシステム社、米国ミネソタ州ミネアポリス)を注入した(各亜群につきn=10)。注入は、前記と同様の麻酔下にラットの左胸部を再開胸して行った。サイトカインは、コラーゲン200μl中に1、5又は25μgの各タンパク質を含有したものを、それぞれ実施例12、13及び14として、30ゲージ注射針を用いてNature.2005;432:466−472に記載のように投与した。比較例3として、コラーゲンゲルのみを対照ラットに投与した。
前記参考例1で得られた、LAD結紮2週間後のモデルラットを用いて、心機能のベースラインを測定した。そして、前記梗塞ラットの境界部心筋4箇所に、種々の量の組換えヒトSFRP2又はSFRP4(R&Dシステム社、米国ミネソタ州ミネアポリス)を注入した(各亜群につきn=10)。注入は、前記と同様の麻酔下にラットの左胸部を再開胸して行った。サイトカインは、コラーゲン200μl中に4又は20μgの各タンパク質を含有したものを、それぞれ実施例15及び16として、30ゲージ注射針を用いて上記(Nature.2005;432:466−472)のように投与した。比較例4として、PBSを含有するコラーゲンを対照ラットに投与した。
前記参考例1で得られた、LAD結紮2週間後のモデルラットを用いて、心機能のベースラインを測定した。そして、前記梗塞ラットの境界部心筋4箇所に、種々の量の組換えヒトチモシンβ10(R&Dシステム社、米国ミネソタ州ミネアポリス)を注入した(各亜群につきn=10)。注入は、前記と同様の麻酔下にラットの左胸部を再開胸して行った。サイトカインは、コラーゲン200μl中に4又は20μgのチモシンβ10を含有したものを、実施例17として、30ゲージ注射針を用いて上記(Nature. 2005;432:466−472)のように投与した。比較例5として、PBSを含有するコラーゲンを対照ラットに投与した。
組織学的検査
実施例1〜10及び比較例1及び2において移植若しくは注入したラットから心臓を回収し、前記心臓の横断切片(厚み2μm)を10%緩衝ホルマリンで固定し、パラフィンに包埋し、ヘマトキシリン・エオジン(H.E.)染色及びマッソントリクローム染色を行った。
実施例12〜14及び比較例3のラットについて、注入から6週間後に、冷却心筋保護液(24mEq/Lカリウム含有5%グルコース溶液)を注入することにより、全ての処置心臓を拡張期で停止させ、取り出した。前記心臓を梗塞巣中心部において水平方向に薄切した。サンプルは全て10%緩衝ホルマリンで固定し、パラフィン包埋した。前記特定処置を行った群について、通常のヘマトキシリン・エオジン(HE)染色及びマッソントリクローム染色を常法に従って行った。また、心筋繊維化の評価のためにピクロシリウス赤染色を、又は心筋細胞肥大の評価のために過ヨウ素酸シッフ(PAS)染色を、Hypertension. 2005;46:412−418, Circ Res. 2002;90:d641−648に記載のように行った。各染色について、MacScopeソフトウェア(三谷商事(株)、東京)を用いた定量的形態計測解析を行った。
参考例6で得られたラットの心臓を、LAD結紮から1週間後に取り出し、?80SYMBOL 176 \f "Symbol" \s 10.5Cで保存した(n=5)。厚み5μmの凍結切片を、ポリクローナル山羊抗ラットMDK血清(sc−1398、サンタ・クルーズ・バイオテクノロジー社、米国カリフォルニア州サンタクルーズ)と共に温置し、ABCキット(ABC KIT、ベクターラボラトリー社、米国カリフォルニア州バーリンゲーム)を用いて可視化した(Circulation.2002 (suppl I);106:I−264−I−269)。
結果として、ゲル単独又は組換えMDK25μgで処置した心臓の全体の様子が得られた(データ不示)。心筋梗塞の中心部における短軸切片において、青色染料で染色された梗塞瘢痕部は、ゲル単独投与群の方が、左心室腔の拡張のため、より細く且つ長かった。しかし、算出された心筋梗塞巣の総面積については、何れの用量のMDK注入についてもあまり影響がなかった(図3A)。一方、MDK25μgを注入した心臓の非梗塞心筋は厚みが増していた。事実、MDK注入心臓における非梗塞部面積は、ゲル注入心臓の非梗塞部面積よりも有意に大きかった(図3B)。MDK投与心臓における非梗塞部の増加は、MDKの用量に依存していた。このような非梗塞部の拡張の用量依存性は、図2Dに示す心エコー法による知見と一致した。
ピクロシリウス赤染色による顕微鏡観察での評価(データ不示)において、ゲル投与対照群において非梗塞心筋の繊維化について強い変化が認められた。これは、おそらく、梗塞後の左室リモデリングの不適応反応を反映しているものと考えられる。心筋繊維化は、MDK投与群の心臓においても認められるが、ゲル投与対照群の心臓に比べると、その程度は有意に低い(図4)。
さらに、MDKが血管新生能を有することが既に報告されているため、ゲル単独投与群及びMDK25μg投与群の心臓の血管密度を評価した(データ不示)。心筋梗塞後、ゲル又はMDK投与群の心臓の梗塞性瘢痕部及び境界部において、フォン・ウィルブランド因子陽性血管が優勢に認められた。前記境界部及び梗塞性瘢痕の血管密度は、MDK投与群心臓の方が、ゲル投与群心臓よりも有意に高かった(図5)。非梗塞部の血管数は比較的少なく、ゲル投与群心臓とMDK投与群心臓の間で信頼性の高い血管数の比較を行うことは困難であった。
上記作成した組織切片の肉眼的評価によると、実施例1〜10における梗塞巣の壁厚は改善したが、比較例1及び2においては、前記壁厚が薄くなり、心内腔が拡張していた。特に、前記壁厚の改善に関しては、実施例1〜5の方が実施例6〜10よりもさらに厚みが改善されていた。
実施例1〜10並びに比較例1及び2の移植又は注入されたラットについて、イソフルラン麻酔下、12MHz環状配列変換素子を備えた市販の心エコー検査装置SONO 5500(アジレント・テクノロジー社、米国)を用いて、心エコー測定を下記の方法で行った。
上記の方法により、6週間後まで毎週心エコー図を記録した。
一方、実施例12〜14及び比較例3における投与後ラットの左心室機能を、サイトカイン注入から2、4、及び6週間後に、安定した血行動態条件下に心エコー図上でモニターし、注入前(ベースライン)と比較した(表1)。前記心エコー図は、ジエチルエーテル麻酔下、12MHz環状配列変換素子を備えた心エコー検査装置SONOS 5500(アジレント・テクノロジー社、米国カリフォルニア州パロアルト)を用いて記録した。心臓を乳頭筋のレベルで短軸2D画像化し、左心室収縮終期面積(LVESA)、左心室拡張終期面積(LVEDA)、並びに収縮終期及び拡張終期における左心室寸法(LVDs及びLVDd)を測定した。駆出率(EF)は、Pombo法により下記式に従い算出した:EF(%)={(LVDd3−LVDs3)/LVDd3}×100。間接tail−cuff方式を採用したMK−2000型血圧モニター装置(室町機械株式会社、東京)を用いて、ラットの心拍数(HR)及び血圧(BP)を測定中連続的に記録した。ベースラインにおける前記LVEDA、LVESA、EF、HR及び平均BPに関して、7群間に有意差は見られなかった。
データは全て平均値±標準誤差(SE)で表される。心機能の経時的解析データを、StatView 5.0(Abacus Concept社、米国カリフォルニア州バークリー)を用いた二元配置多重比較反復測定分散分析(ANOVA)に供した。それぞれの群間の有意差検定には、独立スチューデントt−検定を用いた。その他の項目の比較は、ボンフェローニの事後検定又は独立スチューデントt−検定を用いた一元配置ANOVAによって行った。P値が0.05より小さければ有意であるとみなした。
非梗塞心筋部面積の増大を細胞レベルで解明するために、ゲル単独投与又はMDK25μg投与群の心臓を処置から6週間後に取り出し、PAS染色を行った(データ不示)。ゲル単独投与群の心筋細胞は、有意にその直径がより大きく(図6A)、長さがより長く(図6B)、細胞サイズがより大きかった(図6C)。これは、心筋梗塞後の体積及び圧力の過負荷を反映している。これに対して、MDK投与群心臓の心筋細胞は、非梗塞正常心臓の心筋細胞よりも若干大きいものの、その増加は、ゲル投与対照群心臓の心筋細胞よりも有意に小さかった。この結果は驚くべきものである。何故なら、MDK投与群心臓は、ゲル投与群心臓に比べ筋体積が増加しており、このことは、MDK投与群心臓の心筋細胞数が、ゲル投与対照群心臓の心筋細胞数よりも多いにちがいないことを強く示唆するからである。
Claims (4)
- SFRP4を含有する、虚血性心疾患の治療剤。
- 薬剤担体に挿入された、請求項1記載の治療剤。
- シートに支持され及び/又は固定された薬剤担体に挿入されたSFRP4を含有する、請求項1記載の治療剤。
- SFRP4を、損傷した心筋組織を修復するために使用する効果的要素として含有する瘢痕形成促進剤。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US73428505P | 2005-11-08 | 2005-11-08 | |
US60/734,285 | 2005-11-08 | ||
PCT/JP2006/322782 WO2007055397A1 (en) | 2005-11-08 | 2006-11-08 | Method of treatment for ischemic heart disease |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009514787A JP2009514787A (ja) | 2009-04-09 |
JP5025646B2 true JP5025646B2 (ja) | 2012-09-12 |
Family
ID=38023383
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008522137A Expired - Fee Related JP5025646B2 (ja) | 2005-11-08 | 2006-11-08 | 虚血性心疾患の治療方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7893018B2 (ja) |
EP (1) | EP1948210A4 (ja) |
JP (1) | JP5025646B2 (ja) |
WO (1) | WO2007055397A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004078065A2 (en) | 2003-03-03 | 2004-09-16 | Sinus Rhythm Technologies, Inc. | Electrical conduction block implant device |
SE526861C2 (sv) | 2003-11-17 | 2005-11-15 | Syntach Ag | Vävnadslesionsskapande anordning samt en uppsättning av anordningar för behandling av störningar i hjärtrytmregleringssystemet |
JP4791770B2 (ja) * | 2004-12-06 | 2011-10-12 | 株式会社セルシグナルズ | 心筋障害又は心不全の治療もしくは予防組成物 |
EP2015791B1 (en) * | 2006-05-09 | 2013-03-20 | Syntach AG | Formation of therapeutic scar using small particles |
CA2621452A1 (en) * | 2007-02-21 | 2008-08-21 | Innovational Holdings, Llc | Stent and method for reducing tissue damage after ischemic injury with thymosin b4 |
WO2008129851A1 (ja) * | 2007-03-30 | 2008-10-30 | Cell Signals Inc. | 一酸化窒素合成酵素活性化剤 |
WO2009033816A2 (en) * | 2007-09-11 | 2009-03-19 | Mondobiotech Laboratories Ag | Use of the combination of thymosin beta 10 and thymosin alpha 1 peptides as a therapeutic agent |
US20150355529A1 (en) * | 2013-01-11 | 2015-12-10 | Panasonic Intellectual Property Management Co., Ltd. | Stroboscopic device and image pickup device provided with same |
WO2014125663A1 (ja) * | 2013-02-15 | 2014-08-21 | 国立大学法人奈良先端科学技術大学院大学 | 虚血性疾患の治療又は予防のための薬剤及びその利用 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0827021A (ja) | 1994-07-22 | 1996-01-30 | Mitsui Toatsu Chem Inc | 医薬組成物 |
DE69726884T2 (de) | 1997-02-06 | 2004-06-03 | Genetics Institute, LLC, Cambridge | Menschliches sdf-5 protein und diesbezügliche zusammensetzungen |
US8106009B2 (en) * | 1997-09-26 | 2012-01-31 | Medical Therapies Limited | Pharmaceutical composition for preventing or treating ischemic diseases |
US20050079151A1 (en) * | 1998-07-10 | 2005-04-14 | Shinya Ikematsu | Therapeutic agents for apoptosis-related diseases |
US20020115627A1 (en) * | 2000-07-19 | 2002-08-22 | Susan Schiavi | Phosphatonin-related gene and methods of use thereof |
CZ20031855A3 (cs) * | 2000-12-06 | 2003-09-17 | Applied Research Systems Ars Holding N. V. | Použití SARP-1 pro léčbu a/nebo prevenci onemocnění sklerodermie |
CA2436076A1 (en) * | 2001-01-26 | 2002-08-01 | Genetix Pharmaceuticals, Inc. | Use of compositions containing pdgf-bb for promoting angiogenesis |
JP2004115413A (ja) * | 2002-09-25 | 2004-04-15 | Yasuhiko Tabata | 冠状動脈狭窄または閉塞治療用徐放性製剤 |
US8383158B2 (en) * | 2003-04-15 | 2013-02-26 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Methods and compositions to treat myocardial conditions |
EP1639097B1 (en) * | 2003-06-25 | 2013-08-07 | Ottawa Health Research Institute | Methods and compositions for modulating stem cell growth and differentiation |
CN1290576C (zh) * | 2003-07-25 | 2006-12-20 | 干春玉 | 胸腺素β15在制备促进伤口愈合及血管生成的物质中的用途 |
JP2005068122A (ja) * | 2003-08-27 | 2005-03-17 | Mitsuru Horiba | ミッドカインによる心筋障害予防および治療への応用。 |
JP4791770B2 (ja) * | 2004-12-06 | 2011-10-12 | 株式会社セルシグナルズ | 心筋障害又は心不全の治療もしくは予防組成物 |
EP2226079B1 (en) * | 2005-08-19 | 2012-07-11 | Duke University | Stem cell derived paracrine factor SFRP2 for use in reducing cell death associated with myocardial infarction |
-
2006
- 2006-11-08 EP EP06823430A patent/EP1948210A4/en not_active Withdrawn
- 2006-11-08 WO PCT/JP2006/322782 patent/WO2007055397A1/en active Application Filing
- 2006-11-08 JP JP2008522137A patent/JP5025646B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-11-08 US US12/084,547 patent/US7893018B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20090270313A1 (en) | 2009-10-29 |
US7893018B2 (en) | 2011-02-22 |
EP1948210A1 (en) | 2008-07-30 |
JP2009514787A (ja) | 2009-04-09 |
WO2007055397A1 (en) | 2007-05-18 |
EP1948210A4 (en) | 2010-07-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5025646B2 (ja) | 虚血性心疾患の治療方法 | |
Zhang et al. | Enhancing efficacy of stem cell transplantation to the heart with a PEGylated fibrin biomatrix | |
Rufaihah et al. | Dual delivery of VEGF and ANG-1 in ischemic hearts using an injectable hydrogel | |
US10632153B2 (en) | Compositions and methods for cardiac tissue repair | |
JP4943844B2 (ja) | 三次元組織構造体 | |
Yu et al. | Restoration of left ventricular geometry and improvement of left ventricular function in a rodent model of chronic ischemic cardiomyopathy | |
Li et al. | Injectable AuNP-HA matrix with localized stiffness enhances the formation of gap junction in engrafted human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes and promotes cardiac repair | |
US20050271631A1 (en) | Material compositions and related systems and methods for treating cardiac conditions | |
JP2012180355A (ja) | 筋肉由来前駆細胞、その組成物、および治療法を使用した軟部組織および骨の増大および肥厚 | |
JP2002541221A (ja) | 三次元的間質組織 | |
JP2005036007A (ja) | トロンビン由来ペプチドを使用した治療法 | |
JP5395672B2 (ja) | 心臓病理学を処置するための筋肉由来の細胞およびその作製法および使用法 | |
CA2504019A1 (en) | Stromal cell-derived factor-1 mediates stem cell homing and tissue regeneration in ischemic cardiomyopathy | |
EP3539558B1 (en) | Bifunctional peptide having capability to permeate cells and capability to regenerate muscles and use thereof | |
US20030139333A1 (en) | Methods and compositions for promoting angiogenesis | |
US20230285507A1 (en) | Compositions and methods for cardiac tissue repair | |
TWI263784B (en) | Encapsulated cell indicator system | |
EP3280429B1 (en) | Fstl1 for use in repairing cardiac tissue | |
JP2010536331A (ja) | 生着のための細胞を調製するための方法 | |
Kanemitsu et al. | Insulin-like growth factor-1 enhances the efficacy of myoblast transplantation with its multiple functions in the chronic myocardial infarction rat model | |
JP2009530412A (ja) | 損傷心臓組織治療の方法と方式 | |
WO2018106536A1 (en) | Methods for making and using dedifferentiated and stem-like human cells | |
JP2005035945A (ja) | 組織再生複合療法 | |
US11186612B2 (en) | Substance P analog having progenitor cell or stem cell recruiting activity and method for progenitor cell or stem cell recruiting using the same | |
WO2022159878A9 (en) | Compositions and methods for delivering therapeutics to the heart |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091105 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120306 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120502 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120502 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120619 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120619 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150629 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |