JP4815421B2 - Postprandial blood neutral fat concentration inhibitor and food and drink - Google Patents

Postprandial blood neutral fat concentration inhibitor and food and drink Download PDF

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Description

本発明は、食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及びこの食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食品に関する。   The present invention relates to a postprandial blood neutral fat concentration increase inhibitor and a food or drink containing the postprandial blood neutral fat concentration increase inhibitor.

近年、日本人の生活様式は変化し、平均寿命は急速に増加しているものの、食生活においては高カロリー、高脂肪化が進むとともに、運動不足なども加わり、肥満、高脂血症、高血圧や糖尿病など生活習慣病が増加している。平成17年国民健康・栄養調査結果の概要によれば、エネルギー摂取量の平均値は男女ともに漸減しているにもかかわらず、その脂質エネルギー比は適正比率である25%未満の者の比率が男女共に漸減し、30%以上の者の比率が男女共に漸増している。また運動習慣のある者の割合が最も低いのは、男性においては40代で15.6%、女性においては30代で14.0%と働き盛りの世代で最も低い。以上の生活習慣により、40〜74歳でみると、男性の2人に1人、女性の5人に1人が、メタボリックシンドローム(内臓脂肪症候群)が強く疑われる者又は予備群と考えられる。これらの生活習慣病を改善あるいは予防するには、食事制限により摂取カロリーを減らすことが有効な手段ではあるが、しっかりとした栄養指導を受けなければならず、日常生活においての実行は困難である場合が多い。また、定期的な運動も有効ではあるものの、今まで運動習慣のなかった者においては継続的な実施は困難な場合が多い。   In recent years, the Japanese lifestyle has changed and life expectancy has increased rapidly. However, dietary habits have increased in calories and fat and are accompanied by lack of exercise. Obesity, hyperlipidemia, hypertension Lifestyle-related diseases such as diabetes and diabetes are increasing. According to the summary of the 2005 National Health and Nutrition Survey, the average energy intake for both men and women has gradually decreased, but the lipid energy ratio is less than 25%, the appropriate ratio. Both men and women are gradually decreasing, and the ratio of those over 30% is increasing gradually for both men and women. The percentage of those with exercise habits is the lowest in the working generation, with 15.6% in the 40s for men and 14.0% in the 30s for women. Based on the above lifestyle habits, it is considered that one in two men and one in five women are those who are strongly suspected of metabolic syndrome (visceral fat syndrome) or a reserve group when they are 40-74 years old. In order to improve or prevent these lifestyle-related diseases, reducing calorie intake through dietary restrictions is an effective means, but it requires careful nutritional guidance and is difficult to implement in daily life. There are many cases. In addition, although regular exercise is effective, it is often difficult for those who have not had exercise habits until now.

一方、世界の各地からヒトの疾病の改善あるいは健康増進に有用な生物を探索することにも注力されているが、乱獲は資源保護、生物多様性条約の観点から好ましいものではない。また、産地や栽培履歴等が不明といったトレーサビリティーが不十分、あるいは安定供給が確保できない原料を用いたいわゆる健康食品が市場に出回ることにより、深刻な副作用や社会的混乱を引き起こしている。   On the other hand, efforts are being made to search for organisms useful for improving human disease or promoting health from around the world, but overfishing is not desirable from the viewpoint of resource conservation and the Convention on Biological Diversity. In addition, so-called health foods that use raw materials that have insufficient traceability such as unknown origin and cultivation history, or that cannot ensure a stable supply, are on the market, causing serious side effects and social disruption.

茶(Camellia sinensis)はツバキ科(Theaceae)に属する多年生の木本性常緑樹で、最も長い歴史を持つ飲料であり、2005年には日本では100,000トン、世界では3,201,000トン生産されていることから、茶を原料とすることは安心・信頼できるものがある。   Tea (Camellia sinensis) is a perennial woody evergreen tree belonging to the family Theaceae, and has the longest history of beverages.In 2005, 100,000 tons were produced in Japan and 3,201,000 tons worldwide. It is safe and reliable to use as a raw material.

緑茶には既に種々の機能性が明らかにされている。その生理活性の中心は茶カテキンの一種であるエピガロカテキン3-O-ガレートである場合が多く(Liao A.ら Vitamins and Hormons 62, 1-94, 2001)、近年、特定保健用食品素材として使用されている。しかし、こうした食品や飲料ではエピガロカテキン3-O-ガレートの作用が不十分なために高濃度のカテキンを使用する必要があり、その結果苦みが強く、お茶本来の風味を損なう場合が多い。こうした理由から、高濃度のカテキンを使用する場合は、苦みをマスクする特殊な方法が必要となる。また茶の発酵を利用して出来た重合ポリフェノールが脂肪吸収を阻害する食品や飲料(特開2006−1909号公報など)も発売されていが、こうした食品では、エピガロカテキン3-O-ガレートなどの茶カテキンは著しく減少し、お茶本来の風味を失っている。
Liao A.ら Vitamins and Hormons 62, 1-94, 2001 特開2006−1909号公報
Various functions have already been clarified in green tea. The center of its bioactivity is often epigallocatechin 3-O-gallate, a type of tea catechin (Liao A. et al. Vitamins and Hormons 62, 1-94, 2001). in use. However, in such foods and beverages, the action of epigallocatechin 3-O-gallate is insufficient, so it is necessary to use a high concentration of catechin, and as a result, the bitterness is strong and the original flavor of tea is often impaired. For these reasons, when using a high concentration of catechin, a special method for masking bitterness is required. In addition, foods and beverages (such as Japanese Patent Application Laid-Open No. 2006-1909) in which a polymerized polyphenol produced by fermentation of tea inhibits fat absorption have been put on the market, such as epigallocatechin 3-O-gallate. The tea catechins are significantly reduced and the original flavor of tea is lost.
Liao A. et al Vitamins and Hormons 62, 1-94, 2001 JP 2006-1909 A

従って、生活習慣病を改善するには、風味がよく、また茶カテキンと発酵によってできたポリフェノールの適度なバランスを維持することが課題であった。そのために、エピガロカテキン 3-O-ガレートよりも低濃度で有効な茶由来重合カテキンが望まれていた。   Therefore, in order to improve lifestyle-related diseases, it has been a challenge to maintain a proper balance between the flavor and the tea catechin and the polyphenol produced by fermentation. Therefore, a tea-derived polymerized catechin that is effective at a lower concentration than epigallocatechin 3-O-gallate has been desired.

そこで本発明の目的は、エピガロカテキン 3-O-ガレートに代わる新たな物質であって、生活習慣病を改善するに適した、特に、中性脂肪吸収抑制効果に優れた物質を見いだし、食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供することにある。   Therefore, an object of the present invention is to find a new substance that replaces epigallocatechin 3-O-gallate, which is suitable for improving lifestyle-related diseases, and particularly has an excellent neutral fat absorption inhibitory effect. The object is to provide a blood neutral fat level increase inhibitor.

さらに本発明の目的は、上記新規食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する、中性脂肪吸収抑制効果を有する飲食品を提供することにある。   Furthermore, the objective of this invention is providing the food / beverage products which have the neutral fat absorption inhibitory effect containing the said novel postprandial blood neutral fat concentration raise inhibitor.

本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ラッカーゼ処理した緑茶エキス及び紅茶中に含まれるエピテアフラガリン3-O-ガレートが低濃度で優れた食後血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that laccase-treated green tea extract and epitea fragalin 3-O-gallate contained in black tea are excellent in postprandial blood at low concentrations. It has been found that it has an effect of suppressing the increase in sex fat concentration, and the present invention has been completed.

本発明は以下のとおりである。
[1] エピテアフラガリン3-O-ガレートを有効成分として含有する、膵臓由来リパーゼ阻害剤。
[2] 飲食品に添加して、食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤として用いられる[1]に記載の膵臓由来リパーゼ阻害剤。
[3] 肥満予防および/または肥満治療に用いられる[1]または[2]に記載の膵臓由来リパーゼ阻害剤。
[4] エピテアフラガリン3-O-ガレートが、エピガロカテキンガレートを含有する茶抽出物に没食子酸を添加し、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて得られる、エピテアフラガリン-3-O-ガレートを含有する混合物に含まれるエピテアフラガリン3-O-ガレートである[1]〜[3]のいずれかに記載の膵臓由来リパーゼ阻害剤。
The present invention is as follows.
[1] A pancreatic lipase inhibitor containing epitheaflavalin 3-O-gallate as an active ingredient.
[2] The pancreatic lipase inhibitor according to [1], which is used as a postprandial blood neutral fat concentration increase inhibitor added to food and drink.
[3] The pancreatic lipase inhibitor according to [1] or [2], which is used for obesity prevention and / or obesity treatment.
[4] Epiteaalagalin-3-O-gallate is obtained by adding gallic acid to a tea extract containing epigallocatechin gallate and allowing polyphenol oxidase to act. The pancreatic lipase inhibitor according to any one of [1] to [3], which is epitheaflavalin 3-O-gallate contained in a mixture containing.

本発明によれば、優れた食後血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を有する食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及びこの食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食品を提供できる。   ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the food-drinks containing the postprandial blood neutral fat concentration increase inhibitor which has the outstanding postprandial blood neutral fat concentration increase inhibitor, and this postprandial blood neutral fat concentration increase inhibitor can be provided. .

エピテアフラガリン3-O-ガレート
Epithea fragalin 3-O-gallate

エピテアフラガリン-3-O-ガレートは、上記化学式で表され、紅茶由来の物質であるが、緑茶や紅茶に含有される量は微量であり、最も含有量の高い通常の紅茶の抽出物においても、その量は、一般に0.1%以下である(Itoh N.ら、Teterahedron, 63, 9488-9492, 2007)。従って、通常の茶の抽出物からエピテアフラガリン-3-O-ガレートを摂取することは事実上できなかった。それに対して、本発明者らは、エピテアフラガリン-3-O-ガレートの新たな製造方法を確立すべく研究し、エピテアフラガリン-3-O-ガレートが、エピガロカテキンガレートに、没食子酸の存在下、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて、エピテアフラガリン-3-O-ガレートに変換することで製造できることを見いだし、既に特許出願し(特願2006-156488)、この出願は特許されている。   Epitea fragalin-3-O-gallate is a black tea-derived substance represented by the above chemical formula, but the amount contained in green tea and black tea is very small, and the extract of ordinary black tea with the highest content The amount is generally 0.1% or less (Itoh N. et al., Teterahedron, 63, 9488-9492, 2007). Therefore, it was virtually impossible to ingest epiteafragalin-3-O-gallate from a normal tea extract. On the other hand, the present inventors have studied to establish a new production method of epitheafragalin-3-O-gallate, and epitheaflagalin-3-O-gallate is converted to epigallocatechin gallate. It has been found that it can be produced by the action of polyphenol oxidase in the presence of gallic acid to convert it to epitheaflavalin-3-O-gallate, and a patent application has already been filed (Japanese Patent Application No. 2006-156488). ing.

本発明に用いるエピテアフラガリン-3-O-ガレートは、上記方法により、初めて大量に食品素材として製造することができるようになり、その結果、その効能についても、本発明者らが初めて明らかにして、本発明を完成することができた。   Epitheaflavalin-3-O-gallate used in the present invention can be produced as a food material in large quantities for the first time by the above-mentioned method, and as a result, the inventors of the present invention for the first time reveal its efficacy. Thus, the present invention was completed.

上記方法の原料となるエピガロカテキンガレートは、茶抽出物に含まれることから、エピガロカテキンガレートに代わって、エピガロカテキンガレートを含有する茶抽出物に没食子酸を添加し、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて、前記茶抽出物に含まれる少なくとも一部のエピガロカテキンガレートを、エピテアフラガリン-3-O-ガレートに変換することで、エピテアフラガリン-3-O-ガレートを含有する混合物を製造することもできる。茶抽出物としては、例えば、緑茶抽出物、ウーロン茶抽出物、または紅茶抽出物を挙げることができる。   Epigallocatechin gallate, which is the raw material of the above method, is contained in the tea extract. A mixture containing epitheafragalin-3-O-gallate by converting at least a portion of epigallocatechin gallate contained in the tea extract into epiteafragalin-3-O-gallate Can also be manufactured. Examples of the tea extract include green tea extract, oolong tea extract, and black tea extract.

緑茶抽出物
緑茶は、ツバキ属(Camellia)植物の葉の抽出物であり、主にCamellia sinensis、Camellia assamicaの新芽を原料として、それを乾燥させたものである。緑茶抽出物としては、例えば、SD緑茶エキスパウダーNo.16714(三栄源エフ・エフ・アイ株式会社)、サンフェノンBG(太陽化学株式会社)などを挙げることができる。また、抽出法としては、原料を熱水、含水アルコール、グリセリン水溶液、酢酸エチル等にて抽出し、精製・濃縮し、噴霧乾燥または凍結乾燥する方法がある。
Green tea extract Green tea is an extract of the leaves of Camellia plants, which are mainly dried from Camellia sinensis and Camellia assamica sprouts. Examples of the green tea extract include SD Green Tea Extract Powder No. 16714 (San-Eigen FFI Co., Ltd.), Sunphenon BG (Taiyo Chemical Co., Ltd.), and the like. As an extraction method, there is a method in which the raw material is extracted with hot water, hydrous alcohol, glycerin aqueous solution, ethyl acetate or the like, purified and concentrated, and spray-dried or freeze-dried.

ウーロン茶抽出物
ウーロン茶は、緑茶抽出物と同様の茶葉を一定時間発酵させ、その後加熱して発酵を停止したものである(半発酵茶)。ウーロン茶抽出物としては、例えば、FDウーロン茶エキスパウダーNo.16297(三栄源エフ・エフ・アイ株式会社)などを挙げることができる。また、抽出法としては、原料を熱水、含水アルコール、グリセリン水溶液、酢酸エチル等にて抽出し、精製・濃縮し、噴霧乾燥または凍結乾燥する方法がある。
Oolong tea extract Oolong tea is obtained by fermenting tea leaves similar to green tea extract for a certain period of time and then heating to stop fermentation (semi-fermented tea). As the oolong tea extract, for example, FD oolong tea extract powder No. 16297 (San-Eigen FFI Co., Ltd.). As an extraction method, there is a method in which the raw material is extracted with hot water, hydrous alcohol, glycerin aqueous solution, ethyl acetate or the like, purified and concentrated, and spray-dried or freeze-dried.

紅茶抽出物
紅茶は、緑茶抽出物と同様の茶葉を強発酵させ、その後加熱して発酵を停止したものである(強発酵茶)。紅茶抽出物としては、例えば、SD紅茶エキスパウダーNo.16691(三栄源エフ・エフ・アイ株式会社)などを挙げることができる。また、抽出法としては、原料を熱水、含水アルコール、グリセリン水溶液、酢酸エチル等にて抽出し、精製・濃縮し、噴霧乾燥または凍結乾燥する方法がある。
Black tea extract Black tea is obtained by strongly fermenting tea leaves similar to the green tea extract and then heating to stop fermentation (strongly fermented tea). Examples of the black tea extract include SD black tea extract powder No. 16691 (Saneigen FFI Co., Ltd.). As an extraction method, there is a method in which the raw material is extracted with hot water, hydrous alcohol, glycerin aqueous solution, ethyl acetate or the like, purified and concentrated, and spray-dried or freeze-dried.

茶抽出物の例を以下の表1に示す。但し、これらの茶抽出物は一例であり、これらに限定されるものではない。   Examples of tea extract are shown in Table 1 below. However, these tea extracts are examples, and are not limited to these.

上記の方法では、茶抽出物に含まれるエピガロカテキンガレートの総量に対してモル比で1〜10の没食子酸を添加することが適当である。好ましくはエピガロカテキンガレートの総量に対してモル比で2〜5の没食子酸を添加する。   In said method, it is suitable to add 1-10 gallic acid by molar ratio with respect to the total amount of epigallocatechin gallate contained in a tea extract. Preferably, gallic acid having a molar ratio of 2 to 5 is added to the total amount of epigallocatechin gallate.

ポリフェノールオキシダーゼは、エピガロカテキンガレートをエピテアフラガリン-3-O-ガレートに変換することができる酵素であれば、特に制限はない。そのようなポリフェノールオキシダーゼとしては、例えば、ラッカーゼ(EC1.10.3.2)、チロシナーゼ(EC 1.14.18.1)、ビリルビンオキシダーゼ (EC1.3.3.5)、フェノールおよびポリフェノールオキシダーゼ(EC1.10.3.1)から成る群から選ばれる少なくとも1種の酵素を挙げることができる。なお、チロシナーゼ(EC 1.14.18.1)は、一部、1.10.3.1にも分類されるが、1.10.3.1に分類される酵素も、本発明ではチロシナーゼ(EC 1.14.18.1)の一部である。   The polyphenol oxidase is not particularly limited as long as it is an enzyme capable of converting epigallocatechin gallate to epitheafragalin-3-O-gallate. Examples of such polyphenol oxidase include laccase (EC1.10.3.2), tyrosinase (EC 1.14.18.1), bilirubin oxidase (EC1.3.3.5), phenol and polyphenol oxidase (EC1.10.3.1). Mention may be made of at least one enzyme selected from the group. Tyrosinase (EC 1.14.18.1) is also partly classified as 1.10.3.1, but the enzyme classified as 1.10.3.1 is also a part of tyrosinase (EC 1.14.18.1) in the present invention.

ポリフェノールオキシダーゼは遊離の酵素または固定化酵素であることができる。ポリフェノールオキシダーゼは遊離の酵素である場合、ポリフェノールオキシダーゼは没食子酸を添加した茶抽出物に所定量添加し、所定時間、所定温度で変換反応を行う。ポリフェノールオキシダーゼの所定量とは、例えば、茶抽出物を0.5(w/v)% 〜15(w/v)%を含む溶液1mlに対して10〜200Uの範囲である。   The polyphenol oxidase can be a free enzyme or an immobilized enzyme. When polyphenol oxidase is a free enzyme, a predetermined amount of polyphenol oxidase is added to a tea extract to which gallic acid is added, and a conversion reaction is performed at a predetermined temperature for a predetermined time. The predetermined amount of polyphenol oxidase is, for example, in the range of 10 to 200 U with respect to 1 ml of a solution containing 0.5 (w / v)% to 15 (w / v)% of tea extract.

尚、茶抽出物にどの程度のエピガロカテキンガレートが含有されているかは、茶抽出物により異なる。例えば、SD緑茶エキスパウダーでは、エピガロカテキンガレートが約13(w/w)%ほど含まれている。従って、例えば茶抽出物を1%含む溶液は、エピガロカテキンガレートが約1.3mg/mlになる。   Note that how much epigallocatechin gallate is contained in the tea extract varies depending on the tea extract. For example, SD green tea extract powder contains about 13 (w / w)% of epigallocatechin gallate. Thus, for example, a solution containing 1% tea extract has an epigallocatechin gallate of about 1.3 mg / ml.

変換反応についての所定時間とは、例えば、10分〜15時間、所定温度とは20〜60℃の範囲である。ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応後に、茶抽出物を加熱して酵素を失活させることをさらに含む。加熱条件は、70〜90℃で2〜10分とすることが適当である。   The predetermined time for the conversion reaction is, for example, 10 minutes to 15 hours, and the predetermined temperature is in the range of 20 to 60 ° C. The method further comprises heating the tea extract to inactivate the enzyme after the conversion reaction with polyphenol oxidase. The heating condition is suitably 2 to 10 minutes at 70 to 90 ° C.

ポリフェノールオキシダーゼは固定化酵素であることもできる。固定化酵素を用いる場合、ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応は、固定化酵素を、没食子酸を添加した茶抽出物に添加して行うことができる。変換反応の時間及び温度は、例えば、10〜240分、所定温度とは20〜60℃の範囲である。変換反応後に茶抽出物から固定化酵素を除去する。除去は、例えば、固定化酵素を濾過することで行うことができる。   Polyphenol oxidase can also be an immobilized enzyme. When using an immobilized enzyme, the conversion reaction with polyphenol oxidase can be performed by adding the immobilized enzyme to a tea extract to which gallic acid has been added. The time and temperature of the conversion reaction are, for example, 10 to 240 minutes, and the predetermined temperature is in the range of 20 to 60 ° C. After the conversion reaction, the immobilized enzyme is removed from the tea extract. The removal can be performed, for example, by filtering the immobilized enzyme.

ポリフェノールオキシダーゼは固定化酵素である場合、ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応は、固定化酵素を充填した容器に没食子酸を添加した茶抽出物を通すことで行うこともできる。茶抽出物の流通の条件は、温度を20〜60℃の範囲とし、固定化酵素との接触時間を例えば、10〜240分の範囲とすることで行うことができる。   When polyphenol oxidase is an immobilized enzyme, the conversion reaction by polyphenol oxidase can also be performed by passing a tea extract to which gallic acid has been added into a container filled with the immobilized enzyme. The circulation conditions of the tea extract can be performed by setting the temperature in the range of 20 to 60 ° C. and the contact time with the immobilized enzyme in the range of 10 to 240 minutes, for example.

ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応は、茶抽出物に酸素または空気を通気しながら行うことができる。酸素または空気を通気することで、変換反応を促進することができる。酸素または空気の通気条件は例えば、0.2〜10 L/L/minとすることができる。さらに、通気の効果を高めるために、反応液を攪拌しながら通気を行うこともできる。   The conversion reaction with polyphenol oxidase can be performed while aeration of oxygen or air through the tea extract. The conversion reaction can be promoted by ventilating oxygen or air. The ventilation condition of oxygen or air can be, for example, 0.2 to 10 L / L / min. Furthermore, in order to enhance the aeration effect, aeration can be performed while stirring the reaction solution.

ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応は、茶抽出物に含まれる少なくとも一部のエピガロカテキンガレートを、エピテアフラガリン-3-O-ガレートに変換するように実施する。目的によっては、エピガロカテキンガレートの全量がエピテアフラガリン-3-O-ガレートに変換するように、没食子酸の添加量や反応条件を選択することができる。   The conversion reaction with polyphenol oxidase is carried out so as to convert at least a portion of epigallocatechin gallate contained in the tea extract into epitheaflavalin-3-O-gallate. Depending on the purpose, the amount of gallic acid added and the reaction conditions can be selected so that the total amount of epigallocatechin gallate is converted to epitheaflavalin-3-O-gallate.

ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応は、茶抽出物に没食子酸を添加して行うが、茶抽出物には、ポリフェノールオキシダーゼ活性のpH依存性を考慮して、pH調整を目的として緩衝剤を添加することもできる。但し、変換反応生成物は、そのまま飲料として利用されることを考慮すると、緩衝剤としては、例えば、リン酸及びその塩類、クエン酸及びその塩類などを用いることが好ましい。勿論、緩衝剤を添加せずに、ポリフェノールオキシダーゼによる変換反応を行うこともできる。   The conversion reaction with polyphenol oxidase is performed by adding gallic acid to the tea extract. However, in consideration of the pH dependence of the polyphenol oxidase activity, a buffer may be added to the tea extract for the purpose of pH adjustment. it can. However, considering that the conversion reaction product is used as a beverage as it is, it is preferable to use, for example, phosphoric acid and its salts, citric acid and its salts, etc. as the buffer. Of course, the conversion reaction by polyphenol oxidase can also be performed without adding a buffer.

上記製造方法により得られるエピテアフラガリン-3-O-ガレートまたはエピテアフラガリン-3-O-ガレート含有混合物は、そのまま飲食品に加えて、本発明の飲食品とすることができる。本発明の飲食品は、具体的には飲料であり、より具体的には茶飲料である。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、緑茶風飲料、ウーロン茶飲料、ウーロン茶風飲料、紅茶飲料、または紅茶風飲料を挙げることができる。本発明の飲料は、エピテアフラガリン-3-O-ガレートを、例えば、0.01〜0.5質量%含有するものであることができる。   In addition to food / beverage products, the epithea fragalin-3-O-gallate or the epithea fragalin-3-O-gallate-containing mixture obtained by the above production method can be used as the food / beverage product of the present invention. The food and drink of the present invention is specifically a beverage, and more specifically a tea beverage. Examples of the tea beverage include green tea beverage, green tea beverage, oolong tea beverage, oolong tea beverage, black tea beverage, and black tea beverage. The beverage of the present invention may contain, for example, 0.01 to 0.5% by mass of epiteafragalin-3-O-gallate.

さらに、上記製造方法により得られるエピテアフラガリン-3-O-ガレートまたはエピテアフラガリン-3-O-ガレート含有混合物は、そのまま飲食品に添加して利用することもできるが、没食子酸存在下で茶抽出物をポリフェノールオキシダーゼで処理した液を、抽出・精製または濃縮を行い、噴霧乾燥または凍結乾燥し、整粒によりエキス粉末を調製することもできる。こうした濃縮溶液またはエキス粉末を各種形態の食品およびヘルスケア製品の原料として供することもできる。   Furthermore, epithea flagaline-3-O-gallate or epitea fragalin-3-O-gallate-containing mixture obtained by the above production method can be used as it is by adding it to foods and drinks. The extract powder can also be prepared by sizing the liquid obtained by treating the tea extract with polyphenol oxidase under the following conditions, extracting, purifying or concentrating, spray drying or freeze drying. Such concentrated solutions or extract powders can also be used as raw materials for various forms of food and health care products.

濃縮溶液またはエキス粉末を適用できる食品としては、例えば、ガム、菓子、キャンデー、サプリメント等を挙げることができる。濃縮溶液またはエキス粉末を適用できるヘルスケア製品としては、例えば、口腔洗浄液、歯磨きペースト等を挙げることができる。   Examples of foods to which the concentrated solution or extract powder can be applied include gums, confectionery, candy, and supplements. Examples of the health care product to which the concentrated solution or the extract powder can be applied include an oral cleaning liquid and a toothpaste.

本発明において、所望の食後血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を得るには、後述する実施例のデータに基づけば、エピテアフラガリン-3-O-ガレートとして、20mg/kg以下程度を目安として食後に摂取すればよい。但し、食事により摂取する脂肪の量や、脂肪吸収能の個人差に応じて、エピテアフラガリン-3-O-ガレートの摂取量は適宜変更できる。例えば、上記本発明のエピテアフラガリン-3-O-ガレートを0.1〜0.5質量%含有する飲料を200ml(0.2〜1g相当)摂取すれば、食後血中中性脂肪濃度上昇抑制効果が得られる。   In the present invention, in order to obtain a desired postprandial blood triglyceride concentration-inhibiting effect, based on the data of the examples described later, about 20 mg / kg or less as a guideline is used as epiteaflavalin-3-O-gallate. As long as it is taken after meals. However, the intake amount of epitheaflavalin-3-O-gallate can be changed as appropriate according to the amount of fat taken from the meal and individual differences in fat absorption capacity. For example, if 200 ml (equivalent to 0.2 to 1 g) of a beverage containing 0.1 to 0.5% by mass of the above-described epitheaflavalin-3-O-gallate according to the present invention is ingested, an effect of suppressing postprandial blood neutral fat concentration can be obtained. .

<参考例1>ラッカーゼ処理緑茶エキスおよびのエピテアフラガリン3-O-ガレートの調製
・ラッカーゼ処理緑茶エキス
緑茶エキス(カメリアエキス40R(太陽化学))1g及び没食子酸一水和物(純正化学)0.48gを取り、水100mLに溶解した。ラッカーゼダイワ Y120(天野エンザイム、108,000U/g)0.0093g〜0.093gを添加し、反応温度45〜50℃で、1〜4hr反応した。反応後、反応液を加熱処理して放冷し凍結乾燥し、得られた乾燥粉末をラッカーゼ処理緑茶エキスとした(特願2006-156488)。当該エキス中には、エピテアフラガリン3-O-ガレートが0.2〜1.5%(w/w)含まれていた。
<Reference Example 1> Preparation of laccase-treated green tea extract and epitheafragalin 3-O-gallate ・ Laccase-treated green tea extract 1 g of green tea extract (Camelia extract 40R (Taiyo Kagaku)) and gallic acid monohydrate (pure chemistry) 0.48 g was taken and dissolved in 100 mL of water. Laccase Daiwa Y120 (Amano Enzyme, 108,000 U / g) was added in 0.0093 g to 0.093 g, and the reaction was carried out at a reaction temperature of 45 to 50 ° C. for 1 to 4 hours. After the reaction, the reaction solution was heated, allowed to cool, and freeze-dried. The resulting dry powder was used as a laccase-treated green tea extract (Japanese Patent Application No. 2006-156488). The extract contained 0.2 to 1.5% (w / w) of epitheafragalin 3-O-gallate.

・エピテアフラガリン 3-O-ガレート
エピガロカテキン3-O-ガレート4gを水300mLに加えて攪拌した(氷冷)。フェリシアン酸カリウム10g, 炭酸水素ナトリウム 6g/水60mL、ピロガロール2.8g/水60mLを滴加した。反応液を酢酸エチル抽出(100mL×3)し、減圧下、溶媒留去し、カラムクロマト精製[ポリアミド C-200 50g(カラム径3cm)、水/エタノール混液で溶出]、エピテアフラガリン 3-O-ガレート画分を集め、水/メタノ−ルで再結晶し橙色結晶840mgを得た。
Epithea fragalin 3-O-gallate 4 g of epigallocatechin 3-O-gallate was added to 300 mL of water and stirred (ice cooling). Potassium ferricyanate 10 g, sodium hydrogen carbonate 6 g / water 60 mL, pyrogallol 2.8 g / water 60 mL were added dropwise. The reaction solution was extracted with ethyl acetate (100 mL × 3), evaporated under reduced pressure, and purified by column chromatography [polyamide C-200, 50 g (column diameter: 3 cm), eluted with water / ethanol mixture], epitheaflavalin 3- The O-gallate fraction was collected and recrystallized from water / methanol to obtain 840 mg of orange crystals.

<実施例1>膵リパーゼに対する阻害効果
膵臓由来リパーゼは、食事中の油脂成分であるトリグリセリドを脂肪酸とグリセロールに分解・消化し小腸で吸収するために必須の酵素である。従って、膵臓由来リパーゼを阻害できれば,脂肪の蓄積を直接抑えることが可能であり、抗肥満が期待できる。そこで、茶由来重合カテキンによる膵リパーゼ阻害を測定した。
<Example 1> Inhibitory effect on pancreatic lipase Pancreatic lipase is an essential enzyme for degrading and digesting triglyceride, which is an oil and fat component in diet, into fatty acid and glycerol and absorbing it in the small intestine. Therefore, if pancreatic lipase can be inhibited, fat accumulation can be directly suppressed, and anti-obesity can be expected. Therefore, pancreatic lipase inhibition by tea-derived polymerized catechin was measured.

リパーゼ活性はトリオレインからのオレイン酸遊離量を測定することによって算出した。トリオレイン80mg、レシチン10mg、胆汁酸5mgを9mLの0.1Mトリス緩衝液中で超音波処理を行うことで均一な懸濁液とし、これを基質液として用いた。実験操作として、基質液0.1mLに豚由来膵リパーゼ液0.05mL及び検体液0.1mLを加え、37℃、30分間反応させ、遊離した脂肪酸を銅試薬法で定量した。活性値は検体無添加の値を100%とし、各検体の活性値を算出した。ポジディブコントロールとして市販の膵リパーゼ阻害剤であるゼニカル(Orlistat)を用いた。   The lipase activity was calculated by measuring the amount of oleic acid released from triolein. A uniform suspension was obtained by sonicating 80 mg of triolein, 10 mg of lecithin, and 5 mg of bile acid in 9 mL of 0.1 M Tris buffer, and this was used as a substrate solution. As an experimental operation, 0.05 mL of a porcine pancreatic lipase solution and 0.1 mL of a sample solution were added to 0.1 mL of a substrate solution, reacted at 37 ° C. for 30 minutes, and the liberated fatty acid was quantified by a copper reagent method. The activity value of each sample was calculated with the value of no sample added as 100%. As a positive control, commercially available pancreatic lipase inhibitor Xenical (Orlistat) was used.

図1に示した通り、参考例1で得た、ラッカーゼ処理緑茶エキス(エピテアフラガリン3-O-ガレートを3mg/gエキス含有)及びエピテアフラガリン3-O-ガレートは、膵リパーゼ活性を阻害した。これらは、図2に示した通り、用量依存的に膵リパーゼ活性を阻害し、50%の阻害を示す濃度(IC50)は、それぞれ1.4、1.2mg/mLであった。一方、コントロールとして使用したエピガロカテキン3-O-ガレート(サンフェノンEGCG、太陽化学社製)及びエピテアフラガリンの両成分は膵リパーゼの阻害作用を示さなかった。ゼニカルは終濃度0.04mg/mLで膵リパーゼ活性を約96%阻害した。 As shown in FIG. 1, the laccase-treated green tea extract (containing 3 mg / g extract of epithea fragalin 3-O-gallate) and epithea fragalin 3-O-gallate obtained in Reference Example 1 have pancreatic lipase activity. Was inhibited. As shown in FIG. 2, they inhibited pancreatic lipase activity in a dose-dependent manner, and the concentrations showing 50% inhibition (IC 50 ) were 1.4 and 1.2 mg / mL, respectively. On the other hand, both components of epigallocatechin 3-O-gallate (Sanphenon EGCG, manufactured by Taiyo Kagaku Co., Ltd.) and epitheaflagalin used as controls did not show pancreatic lipase inhibitory action. Xenical inhibited pancreatic lipase activity by about 96% at a final concentration of 0.04 mg / mL.

また牛由来膵リパーゼを用いて、合成基質である4-メチルウンベリフェリルオレート(MUO)を用いて、蛍光強度を測定する方法でも測定した。即ち、150mMNaCl、1.3mMCaCl2を含む13mMTris-HCl緩衝液(pH8.0)にて溶解したリパーゼ(牛膵液由来、50U/ml)25μl、0.1mM 4-MUO溶液50μl及び被検液25μlを混和し、25℃、30分間反応させた。0.1Mクエン酸緩衝液(pH4.2)100μl添加して反応停止後蛍光強度(Ex:360、Em:450)を測定した。その結果、参考例1で得た、ラッカーゼ処理緑茶エキス、エピテアフラガリン3-O-ガレートは、コントロールとして使用したエピガロカテキン3-O-ガレートより強いリパーゼ阻害を示し、トリオレインからのオレイン酸遊離量によるリパーゼ阻害と一致するデータが得られた(表2)。 Moreover, it measured also by the method of measuring a fluorescence intensity using 4-methylumbelliferyl oleate (MUO) which is a synthetic substrate using bovine origin pancreatic lipase. Specifically, 25 μl of lipase (derived from bovine pancreatic juice, 50 U / ml) dissolved in 13 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0) containing 150 mM NaCl and 1.3 mM CaCl 2 , 50 μl of 0.1 mM 4-MUO solution and 25 μl of test solution were mixed. And reacted at 25 ° C. for 30 minutes. After stopping the reaction by adding 100 μl of 0.1 M citrate buffer (pH 4.2), the fluorescence intensity (Ex: 360, Em: 450) was measured. As a result, the laccase-treated green tea extract obtained in Reference Example 1 and epitheaflavalin 3-O-gallate showed stronger lipase inhibition than epigallocatechin 3-O-gallate used as a control, and olein from triolein. Data consistent with lipase inhibition by acid release was obtained (Table 2).

*IC50(μg/ml)カッコ内は100μM作用時の抑制率 * IC 50 (μg / ml) In parentheses, inhibition rate at 100 μM action

ラッカーゼ処理緑茶エキス(エピテアフラガリン3-O-ガレート含有)、エピテアフラガリン3-O-ガレートが強い膵臓由来パーゼの阻害を示すことが明らかとなった。 Laccase treatment green tea extract (epi tare Fraga phosphate 3-O-gallate containing), was found to exhibit inhibition of epi tare Fraga phosphate 3-O-gallate is a strong pancreatic lipase.

<実施例2>ラットにおける食後中性脂肪上昇抑制効果
一晩絶食したラット(226g前後、各5匹、コントロールは9匹)に脂質エマルジョン及び各検体(ラッカーゼ処理緑茶エキス[エピテアフラガリン3-O-ガレートを3mg/gエキス含有]、エピテアフラガリン3-O-ガレート、被検液溶液の代わりに蒸留水を添加したものをコントロールとした)を含む脂質エマルジョンを3mlずつ強制的に経口投与した。投与前、投与後60、120、180、240、300分まで経時的に尾静脈より採血し、血中の中性脂肪量をトリグリセライド-E-テストキット(和光純薬工業製)にて測定した。脂質エマルジョンは、コーンオイル6ml、生理食塩水6ml、胆汁酸100mg、コレステロールオレエート2gを混合し、超音波処理にて調製したものを脂質エマルジョンとした。
<Example 2> Postprandial neutral fat increase inhibitory effect in rats Rats fasted overnight (around 226 g, 5 each, 9 controls) were given lipid emulsion and each sample (laccase-treated green tea extract [Epitea Fragalin 3- 3 mg / g extract of O-gallate], epitheafragalin 3-O-gallate, and a lipid emulsion containing distilled water instead of the test solution as a control) Administered. Blood was collected from the tail vein over time up to 60, 120, 180, 240, and 300 minutes after administration, and the amount of neutral fat in the blood was measured with a triglyceride-E-test kit (manufactured by Wako Pure Chemical Industries). . The lipid emulsion was prepared by mixing 6 ml of corn oil, 6 ml of physiological saline, 100 mg of bile acid and 2 g of cholesterol oleate, and prepared by sonication to obtain a lipid emulsion.

結果を図3に平均値±標準誤差(SE)で表している。群間の有意差検定にはSuper ANOVAソフトを用い、Fisher's Protected LSD testより検定を行い、p<0.05を有意とした。その点を*マークで示した。その結果、ラッカーゼ処理した緑茶エキスには有意な食後の中性脂肪の上昇抑制作用が認められた。一方、エピテアフラガリン3-O-ガレートの20mg/kg投与では、明瞭な有意な食後中性脂肪上昇抑制作用を示した。   The results are expressed as mean values ± standard error (SE) in FIG. Super ANOVA software was used for the significant difference test between groups, and the test was performed by Fisher's Protected LSD test, and p <0.05 was regarded as significant. This point is indicated by * mark. As a result, the green tea extract treated with laccase showed a significant inhibitory effect on postprandial neutral fat elevation. On the other hand, when 20 mg / kg of epitheaflavalin 3-O-gallate was administered, a clear and significant postprandial neutral fat increase inhibitory effect was shown.

本発明は、食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供するものであり、例えば、健康食品等の飲食品分野に有用である。   The present invention provides a postprandial blood neutral fat concentration increase inhibitor, and is useful, for example, in the field of food and drink such as health foods.

膵臓由来リパーゼに対する阻害作用Inhibitory action on pancreatic lipase 膵臓由来リパーゼに対する阻害作用(用量依存性)Inhibitory effect on pancreatic lipase (dose-dependent) 食後中性脂肪上昇抑制作用Inhibition of postprandial neutral fat elevation

Claims (4)

エピテアフラガリン3-O-ガレートを有効成分として含有する、膵臓由来リパーゼ阻害剤。 A pancreatic lipase inhibitor comprising epiteafragalin 3-O-gallate as an active ingredient. 飲食品に添加して、食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤として用いられる請求項1に記載の膵臓由来リパーゼ阻害剤。 2. The pancreatic lipase inhibitor according to claim 1, wherein the pancreatic lipase inhibitor is used as a post-meal blood neutral fat concentration increase inhibitor added to a food or drink. 肥満予防および/または肥満治療に用いられる請求項1または2に記載の膵臓由来リパーゼ阻害剤。 3. The pancreatic lipase inhibitor according to claim 1 or 2, which is used for obesity prevention and / or obesity treatment. エピテアフラガリン3-O-ガレートが、エピガロカテキンガレートを含有する茶抽出物に没食子酸を添加し、ポリフェノールオキシダーゼを作用させて得られる、エピテアフラガリン-3-O-ガレートを含有する混合物に含まれるエピテアフラガリン3-O-ガレートである請求項1〜3のいずれかに記載の膵臓由来リパーゼ阻害剤。 Epithea fragalin 3-O-gallate contains epitea fragalin-3-O-gallate obtained by adding gallic acid to a tea extract containing epigallocatechin gallate and allowing polyphenol oxidase to act. 4. The pancreatic lipase inhibitor according to claim 1, wherein the pancreatic lipase inhibitor is epitheaflavalin 3-O-gallate contained in the mixture.
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