JP4770032B2

JP4770032B2 - Sheatan derivative

Info

Publication number: JP4770032B2
Application number: JP2001033369A
Authority: JP
Inventors: 武史佐々; 修雄加藤; 栄一木村; まゆ子高橋
Original assignee: 株式会社キノックス
Priority date: 2001-02-09
Filing date: 2001-02-09
Publication date: 2011-09-07
Anticipated expiration: 2021-02-09
Also published as: JP2002234896A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、シアタン誘導体に関し、詳しくは、例えば、ハリタケ科（Ｈｙｄｎａｃｅａｅ）、サンゴハリタケ科（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ）のキノコであるヤマブシタケ（Ｈｅｒｉｃｉｕｍｅｒｉｎａｃｅｕｍ）の培養菌糸体中に含有される新規なシアタン（ｃｙａｔｈａｎｅ）誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、キノコの培養物や子実体中に含まれる化合物およびその薬剤効果については複数の報告例がある。例えば、ハリタケ科のキノコであるヤマブシタケの子実体中には、オクタデセン酸誘導体、イソインドリノン誘導体、フタリド誘導体が含有され、これらには子宮頚癌細胞に対する殺細胞効果があることが報告されている（例えば、特開平３−１５７３４７号公報、特開平３−１５７３６７号公報、特開平３−１５７３７９号公報）。
【０００３】
ヤマブシタケの子実体、培養菌糸体、培養液中には、高い抗腫瘍活性が認められる多糖類が含有されていることも報告されている（例えば、特開平５−１１７３０３号公報、特開平５−１１７３０４号公報）。
【０００４】
また、子実体中のベンジルアルコール誘導体やクマロン誘導体がＰＧＥ（プロスタグランジンＥ２）産生抑制剤やＮＧＦ（神経成長因子）産生誘導剤として利用できることも報告され（特公平７−７２１５７号公報、特公平８−２６０１０号公報）、更に、培養菌糸体中のシアタン誘導体がＮＧＦ産生誘導剤や抗菌剤として利用できることも報告されている（特開平６−２５６３５２号、特開平６−２５６３７８号、特開平７−６９９６１号、特開平７−７０１３３号、特開平７−７０１６８号、特開平８−７３４８６号、特開平９−２４１２９１号、特開平９−２４１１５８号の各公報）。
【０００５】
特に、培養菌糸体中に含有されるＮＧＦ産生を誘導するシアタン誘導体であるエリナシン類に関しては、エリナシンＡ、エリナシンＢ、エリナシンＣ、エリナシンＥ、エリナシンＦ、エリナシンＧの６つの化合物の構造が決定されている（テトラヘドロン（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ）Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１０，１５６９〜１５７２（１９９４）及びＶｏｌ．３７，Ｎｏ．４１，７３９９〜７４０２（１９９６））。また、その他、エリナシンＤ（Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ，Ｃｏｍｍｕｎ．２，５１〜５４（１９９６））、その関連物質（天然物討論会，３９３〜４００（１９９３））、エリナシンＨ及びエリナシンＩ（特開平９−２４１１５８号公報）、Ｒが水素またはアルカリ金属であるシアタン誘導体（特開平９−２４１２９１号公報）についても報告されている。
【０００６】
一方、本発明者らは、先に、特願２０００−１０８８９０号明細書において、次の化学式（２）で表されるシアタン誘導体（以下エリナシンＰと言う）は、ＤＡＢＣＯ−ＬｉＢｒ（１，４−ジアザビシクロオクタン−リチウムブロマイド）試薬系の変換反応により、既にＮＧＦ産生誘導効果などの薬効が証明されているエリナシンＡやエリナシンＢなどに人為的に変換可能であることを明らかにした。従って、エリナシンＰは、老人性痴呆症治療剤などとしての利用可能なエリナシンＡ、エリナシンＢ、エリナシンＣなどの種々のエリナシン類への人為的変換のための前駆物質として利用することが出来る。
【０００７】
【化２】

【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、従来報告されているシアタン誘導体とは異なる新規なシアタン誘導体を提供することにある。そして、本発明によって提供されるシアタン誘導体は、上記の化学式（２）で表されるシアタン誘導体の前駆物質として利用することが出来る。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ヤマブシタケの培養菌糸体中に含有される化合物について鋭意検討を重ねた結果、ヤマブシタケの特定培養期間内の培養菌糸体中に、従来まったく報告例のない新規な化学構造を有し且つ既にＮＧＦ産生誘導効果などが立証されている公知のシアタン誘導体（エリナシン−Ａ、Ｂ、Ｃなど）への化学的変換が可能である新規なシアタン誘導体が含有されていることを見出し、本発明の完成に至った。
【００１０】
すなわち、本発明の要旨は、次の化学式（１）で表されることを特徴とするシアタン誘導体に存する。
【００１１】
【化３】

【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のシアタン誘導体は、例えば、ヤマブシタケの菌糸体を次の様に処理することにより得ることが出来る。
【００１３】
先ず、ファーマメディア培地（５．０重量％グルコース、０．５重量％ヘプトン、１．０重量％ファーマメディア、０．５重量％ＮａＣｌ及び脱塩水で調製された培地）にてヤマブシタケの菌糸体を２５℃で２０日間振盪培養する。得られた培養菌糸体を吸引濾過し、脱塩水で十分に洗浄後、培養濾液とエリナシン類が多く含有されている培養菌糸体とに分離する。
【００１４】
次いで、水および有機溶媒の混合系で上記の培養菌糸体を抽出する。この場合、水および有機溶媒の混合系としては、８５容量％アセトン（残余は水）、８０〜８５容量％メタノール（又はエタノール）等が使用される。抽出は、通常、室温で約１週間行なう。その後、濾過して得た抽出液から有機溶媒を蒸発除去して残渣の水溶液を回収する。有機溶媒の蒸発除去には例えばエバポレーターが好適に使用される。
【００１５】
次いで、上記の水溶液（抽出工程の水相側）をｐＨ調整剤（例えば５重量％Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液）でｐＨ９に調整した後、水および有機溶媒の混合系で液−液抽出する。この際の有機溶媒としては、酢酸エチル、ブタノール等が使用される。そして、有機相を分取し、有機溶媒を蒸発除去、中性・塩基性区分の乾固物を回収する。
【００１６】
次いで、上記の乾固物をクロマト分画処理して精製し不純物を除去し、更に、再分画処理して目的とするシアタン誘導体を単離する。この際、クロマト分画処理は、例えば、クロロホルム／エタノール、ベンゼン／エタノール等を展開溶媒とするフラッシュクロマトグラフィーや薄層クロマトグラフィーによって行なうことが出来る。また、再分画処理は、ＯＤＳカラムを使用した高速液体クロマトグラフィーによって行なうことが出来る。
【００１７】
上記の様に再分画処理により単離された化合物の物理化学的性質および構造解析結果は次の通りである。
【００１８】
（１）分子量：５１７（Ｃ₂₇Ｈ₄₂Ｏ₈）
【００１９】
（２）核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−ＮＭＲ，δ）：０．７７（３Ｈ，ｓ）、０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８）、０．９５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８）、１．０３（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝〜１３）、１．０６（３Ｈ，ｓ）、１．４０（１Ｈ，ｄｍ，Ｊ＝〜１３）、１．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，７．８，７．６）、１．４９（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，１２．８，４．２）、１．５６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，７．８，７．６）、１．９５（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１２．０）、２．１０（３Ｈ，ｓ）、２．１３（１Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，Ｊ＝〜１３，〜１３）、２．２６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝〜１２，〜１２，〜１１）、２．２６（２Ｈ，ｔ．ｌｉｋｅ，＜Ｊ＝〜８＞）、２．８８（１Ｈ，ｓｅｐｔｅｔ，Ｊ＝６．８）、３．０３（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝〜１２）、３．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０，８．０）、３．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．６，６．２）、３．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，７．６）、３．７０（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．０，７．８，４．４）、３．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６）、４．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．０，４．４）、４．０８（２Ｈ，ｂｒ．ｓ）、４．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２）、５．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６）、５．９８（１Ｈ，ｂｒ．ｄ，Ｊ＝１０．４）
【００２０】
（３）核磁気共鳴スペクトル（¹³Ｃ−ＮＭＲ，δ）：１６．５，２１．２，２１．７，２１．８，２４．２，２６．７，２８．６，３３．４，３３．６，３６．６，３７．８，４０．５，４２．２，４９．２，６３．４，６４．６，６９．５，７２．３，７３．９，７４．７，８２．３，１０３．９，１２５．７，１３７．８，１４０．０，１４３．８，１７１．４
【００２１】
（４）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチルに可溶、クロロホルムにやや可溶、水に不溶
【００２２】
（５）塩基性、中性、酸性の区別：中性物質
【００２３】
（６）色および性状：無色無定形、固体
【００２４】
以上の物理化学的性質および構造解析結果から、前記の単離された化合物は、前述の化学式（１）で表されるシアタン誘導体であると決定された。
【００２５】
前述の化学式（１）で表される本発明のシアタン誘導体は、菌糸体の培養日数別の生産量を調査した結果によれば、培養開始日より６目から１９日目頃（１１日目頃が最大値）の極く限られた期間内に限定的に産生される物質である。
【００２６】
そして、本発明のシアタン誘導体は、後述の実施例２に示す様に、菌糸体の培養日数別のエリナシンＰと本発明のシアタン誘導体（以下エリナシンＱと言う）とのＨＰＬＣによる産生量の経日的変化の調査結果より、エリナシンＰの前駆体であること、すなわち、菌糸体内でエリナシンＱが酸化されてエリナシンＰへ変化することが判明している。更に、実施例３に示す様に、エリナシンＰは、ＮａＢＨ₄による還元反応によりエリナシンＱへ人為的に変換可能である。従って、本発明のシアタン誘導体は、エリナシンＰを経由することにより、老人性痴呆治療剤などとしての利用可能なエリナシンＡ、エリナシンＢ、エリナシンＣなどの種々のエリナシン類への人為的変換のための前駆物質として利用することが出来る。
【００２７】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。
【００２８】
実施例１
＜本発明のシアタン誘導体の抽出および単離＞
ファーマメディア培地にてヤマブシタケの菌糸体を２５℃の暗所で２０日間振盪培養して培養菌糸体を得た。この培養菌糸体６３ｇ（湿重量）をアセトン０．３Ｌに加えて室温で１週間放置した後、得られた抽出液をエバポレーターで減圧濃縮してアセトンを蒸発除去し、残渣水溶液１５０ｍｌを回収した。
【００２９】
上記の水溶液に５重量％Ｎａ₂ＣＯ₃水溶液添を加してｐＨを９に調整した後、ヘキサンを加え、振盪後、放置し、分相した水相を分取した。ヘキサン抽出の水相部に酢酸エチル０．３Ｌを加え、振盪後、放置し、分相した酢酸エチル相を分取した。同様の液−液抽出操作を合計３回行い、分取した酢酸エチル相を合体し、飽和食塩水洗および芒硝による脱水後、エバポレーターで減圧濃縮して酢酸エチルを蒸発除去し、中性区物質として約１．７ｇの乾固物を回収した。
【００３０】
メタノールに上記の乾固物を溶解し、クロロホルム／エタノール＝５：１（容量比）を展開溶媒とする薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で分析を行なった結果、Ｒｆ＝０．５〜０．８付近にバニリン−硫酸試薬による紫色の呈色を示す、エリナシン類に特有と見られるスポットが検出された。
【００３１】
上記の乾固物（約１．７ｇ）中のエリナン類を分離・精製するため、極性が順次大きくなる様に調整された展開溶媒、クロロホルム／エタノール＝４０：１（容量比）、２０：１、１０：１、５：１を使用し、フラッシュクロマトグラフィーによる段階溶出を行なった。１０ｍｌ毎に分取した各フラクションについてＴＬＣで分析した結果、フラクション６１−６５に約２３０．７ｍｇの単一物質であるエリナシンＢ、フラクション６８−７２に約７５．８ｍｇの単一物質であるエリナシンＡ、フラクション８３−８８に約３４．６ｍｇの単一物質であるエリナシンＣ、フラクション１０９−１１１に約３７３．７ｍｇの単一物質であるエリナシンＰを夫々得ることが出来た。そして、フラクション１３０−１３３について、前記の化学式（１）で表されるシアタン誘導体（エリナシンＱ）約１１８．３ｍｇが単一物質として単離された。
【００３２】
実施例２
＜エリナシンＱからエリナシンＰへの経日変換＞
ファーマメディア培地にてヤマブシタケの菌糸体を２５℃の暗所で振盪培養し、培養日数６、８、１１、１５、１９及び２３日目に培養液のサンプリングを行い、吸引濾過して菌糸体を得た。この菌糸体を２０ｍｌアセトン中でワーリングブレンダーで１分間破砕し、５０℃で３０分間撹拌した後、吸引濾過してアセトン水溶液を得た。
【００３３】
次いで、アセトン水溶液をエバポレーターで減圧濃縮して食塩飽和した後、酢酸エチル３０ｍｌで抽出した。酢酸エチル相を飽和食塩水洗および芒硝による脱水後、エバポレーターで減圧濃縮して酢酸エチルを蒸発除去し、乾固物を回収した。各乾固物を１００μｌのＨＰＬＣ溶出溶媒で溶解し、夫々５μｌを供試してＨＰＬＣ分析を行った結果、表１に示す様に、エリナシンＱの産生ピークは培養日数１１日目であり、エリナシンＰの産生ピークが培養日数１９日目であることから、菌糸体内でエリナシンＱからエリナシンＰへ経日的に変化していることが確認された。
【００３４】
【表１】

【００３５】
実施例３
＜エリナシンＰからエリナシンＱへの人為的変換＞
エリナシンＰからエリナシンＱへの化学変換を目的として、本発明のエリナシンＱを使用し、メタノール溶媒中、氷冷・撹拌下、過剰のＮａＢＨ₄を加えて２０分間０℃で撹拌を続けた。反応の終了をＴＬＣ（クロロホルム：エタノール＝１０：１）で確認後、混合物をＮＨ₄Ｃｌ水溶液で希釈し、酢酸エチルで抽出した。
有機相を食塩水で洗浄し、無水ＭｇＳＯ₄で処理後、エバポレーターで減圧濃縮して酢酸エチルを蒸発除去し、乾固物を回収した。得られた乾固物はＳｉＯ₂カラム（クロロホルム：エタノール＝８：１）で分離精製することにより、７５％の収率でエリナシンＱとして回収した。
【００３６】
上記の様に、エリナシンＰの反応液からエリナシンＱが単一物質として分離できたこと、菌糸体内でエリナシンＱからエリナシンＰへ経日的に変化することが確認できたことから、本発明のシアタン誘導体であるエリナシンＱはエリナシンＰの前駆体であることが実験的に証明された。
【００３７】
【発明の効果】
以上説明した本発明のシアタン誘導体（エリナシンＱ）は、他の有用なシアタン誘導体、例えば、ＮＧＦ産生誘導剤などとしてのエリナシンＡまたはエリナシンＢへの人為的な変換を容易に行い得る効果を有する。しかも、本発明のシアタン誘導体は、菌糸体内の培養初期の段階で短期間に産生されることから、有用なシアタン誘導体を効率的に合成し得るという効果を有する。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
TECHNICAL FIELD The present invention relates to a sheatan derivative, and more particularly to a novel cyathane derivative contained in a cultured mycelium of a mushroom of the family Hyderaceae and Hericium, for example, Hericium erinaceum. .
[0002]
[Prior art]
Conventionally, there have been several reports on compounds contained in mushroom cultures and fruit bodies and their drug effects. For example, the fruit body of Yamabushitake, a mushroom of the agaricaceae family, contains octadecenoic acid derivatives, isoindolinone derivatives, and phthalide derivatives, which have been reported to have a cytocidal effect on cervical cancer cells. (For example, JP-A-3-157347, JP-A-3-157367, JP-A-3-157379).
[0003]
It has also been reported that the fruit bodies, cultured mycelium, and culture solution of Yamabushitake contain polysaccharides that have high antitumor activity (for example, Japanese Patent Laid-Open Nos. 5-117303 and 5- 117304).
[0004]
It has also been reported that benzyl alcohol derivatives and coumarone derivatives in fruiting bodies can be used as PGE (prostaglandin E2) production inhibitors and NGF (nerve growth factor) production inducers (Japanese Patent Publication No. 7-72157, Japanese Patent Publication No. Hokukai). Furthermore, it has also been reported that the cyanane derivatives in cultured mycelia can be used as NGF production inducers and antibacterial agents (JP-A-6-256352, JP-A-6-256378, JP-A-7). JP-A-696961, JP-A-7-70133, JP-A-7-70168, JP-A-8-73486, JP-A-9-241291, and JP-A-9-241158).
[0005]
In particular, with regard to erinasin, which is a thiatan derivative that induces NGF production contained in cultured mycelium, the structures of six compounds, erinasin A, erinasin B, erinasin C, erinasin E, erinasin F, and erinasin G, are determined. (Tetrahedron Vol. 35, No. 10, 1569-1572 (1994) and Vol. 37, No. 41, 7399-7402 (1996)). In addition, Erinacin D (Heterocycle, Commun. 2, 51-54 (1996)), related substances (Natural Product Discussion, 393-400 (1993)), Erinacin H and Erinacin I (Japanese Patent Laid-Open No. 9-241158). Gazette), and a cyanane derivative (Japanese Patent Laid-Open No. 9-241291) in which R is hydrogen or an alkali metal.
[0006]
On the other hand, the present inventors previously described in the specification of Japanese Patent Application No. 2000-108890, the cyanane derivative represented by the following chemical formula (2) (hereinafter referred to as Erinasin P) is DABCO-LiBr (1,4- (Diazabicyclooctane-lithium bromide) It was clarified that the reagent system can be artificially converted to erinasin A, erinasin B, etc., which have already been proven to have a medicinal effect such as NGF production-inducing effect. Therefore, erinasin P can be used as a precursor for artificial conversion to various erinasin such as erinasin A, erinasin B, and erinasin C that can be used as a therapeutic agent for senile dementia.
[0007]
[Chemical 2]

[0008]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a novel cyanane derivative different from the conventionally reported cyanane derivatives. The cyanane derivative provided by the present invention can be used as a precursor of the cyanane derivative represented by the above chemical formula (2).
[0009]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies on the compounds contained in the cultured mycelium of Yamabushitake, the present inventors have found that the cultured mycelium within the specified culture period of Yamabushitake has a novel chemical structure that has never been reported before. In addition, the present inventors have found that a novel cyanane derivative that can be chemically converted to a known cyanane derivative (erinasin-A, B, C, etc.) that has already been proven to have an NGF production-inducing effect, etc. The invention has been completed.
[0010]
That is, the gist of the present invention resides in a cyanane derivative represented by the following chemical formula (1).
[0011]
[Chemical 3]

[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The sheatan derivative of the present invention can be obtained, for example, by treating a mycelium of Yamabushitake as follows.
[0013]
First, the mycelium of Yamabushitake was prepared in a pharmamedia medium (medium prepared with 5.0 wt% glucose, 0.5 wt% heptone, 1.0 wt% pharmamedia, 0.5 wt% NaCl and demineralized water). Incubate with shaking at 25 ° C. for 20 days. The obtained cultured mycelium is filtered by suction, washed thoroughly with demineralized water, and then separated into a culture filtrate and a cultured mycelium containing a large amount of erinasin.
[0014]
Next, the cultured mycelium is extracted with a mixed system of water and an organic solvent. In this case, as a mixed system of water and an organic solvent, 85 volume% acetone (the balance is water), 80 to 85 volume% methanol (or ethanol), or the like is used. The extraction is usually performed at room temperature for about 1 week. Thereafter, the organic solvent is evaporated and removed from the extract obtained by filtration to recover a residual aqueous solution. For example, an evaporator is preferably used for removing the organic solvent by evaporation.
[0015]
Then, after adjusting to pH9 by the aqueous solution (aqueous phase extracted side step) a pH adjusting agent (e.g., 5 wt% Na ₂ CO ₃ aq), liquid water and mixed system of an organic solvent - liquid extract. As the organic solvent at this time, ethyl acetate, butanol or the like is used. Then, the organic phase is separated, the organic solvent is removed by evaporation, and the dry solids of the neutral / basic classification are recovered.
[0016]
Next, the dried product is purified by chromatographic fractionation to remove impurities, and further refractionated to isolate the desired cyanane derivative. At this time, the chromatographic fractionation treatment can be performed by, for example, flash chromatography or chloroform chromatography using chloroform / ethanol, benzene / ethanol or the like as a developing solvent. The re-fractionation process can be performed by high performance liquid chromatography using an ODS column.
[0017]
The physicochemical properties and structural analysis results of the compound isolated by the re-fractionation treatment as described above are as follows.
[0018]
(1) Molecular weight: 517 (C ₂₇ H ₄₂ O ₈ )
[0019]
(2) Nuclear magnetic resonance spectrum (1H-NMR, δ): 0.77 (3H, s), 0.94 (3H, d, J = 6.8), 0.95 (3H, d, J = 6) .8), 1.03 (1H, br.d, J = ˜13), 1.06 (3H, s), 1.40 (1H, dm, J = ˜13), 1.46 (1H, ddd) , J = 12.8, 7.8, 7.6), 1.49 (1H, ddd, J = 12.8, 12.8, 4.2), 1.56 (1H, ddd, J = 12) .8, 7.8, 7.6), 1.95 (1H, br.d, J = 12.0), 2.10 (3H, s), 2.13 (1H, br.dd, J = ˜13, ˜13), 2.26 (1H, ddd, J = ˜12, ˜12, ˜11), 2.26 (2H, t.like, <J = ˜8>), 2.88 (1H , Septet, J = 6.8), 3 03 (1H, br.d, J = ˜12), 3.30 (1H, dd, J = 12.0, 8.0), 3.52 (1H, dd, J = 7.6, 6.2) ), 3.57 (1H, dd, J = 7.8, 7.6), 3.70 (1H, ddd, J = 8.0, 7.8, 4.4), 3.73 (1H, d, J = 6.6), 4.01 (1H, dd, J = 12.0, 4.4), 4.08 (2H, br.s), 4.47 (1H, d, J = 6) .2), 5.87 (1H, d, J = 6.6), 5.98 (1H, br.d, J = 10.4)
[0020]
(3) Nuclear magnetic resonance spectrum ( ¹³ C-NMR, δ): 16.5, 21.2, 21.7, 21.8, 24.2, 26.7, 28.6, 33.4, 33. 6,36.6,37.8,40.5,42.2,49.2,63.4,64.6,69.5,72.3,73.9,74.7,82.3 103.9, 125.7, 137.8, 140.0, 143.8, 171.4
[0021]
(4) Solubility in solvents: soluble in methanol, ethanol, acetone, ethyl acetate, slightly soluble in chloroform, insoluble in water
(5) Basic, neutral and acidic distinction: neutral substance
(6) Color and properties: colorless amorphous, solid
From the above physicochemical properties and structural analysis results, the isolated compound was determined to be a cyanane derivative represented by the chemical formula (1).
[0025]
According to the results of investigating the production amount of mycelium by the number of days of cultivation, the thiatane derivative of the present invention represented by the chemical formula (1) described above is around the 6th to 19th day (around the 11th day). Is a substance that is produced in a limited time within a very limited period.
[0026]
Then, as shown in Example 2 described later, the thiatan derivative of the present invention is the amount of production by HPLC of erinasin P according to the number of days of culture of mycelium and the sheatan derivative of the present invention (hereinafter referred to as erinasin Q). From the results of the investigation on the change, it is found that it is a precursor of erinasin P, that is, erinasin Q is oxidized into myosin P in the mycelium. Furthermore, as shown in Example 3, erinasin P can be artificially converted to erinasin Q by a reduction reaction with NaBH ₄ . Therefore, the thiatan derivative of the present invention can be used for artificial conversion to various erinacins such as erinasin A, erinasin B, and erinasin C that can be used as therapeutic agents for senile dementia and the like via erinasin P. It can be used as a precursor.
[0027]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention still in detail, this invention is not limited to a following example, unless the summary is exceeded.
[0028]
Example 1
<Extraction and isolation of the sheatan derivative of the present invention>
The mycelium of Yamabushitake was cultured with shaking in a dark place at 25 ° C. for 20 days in a Pharmamedia medium to obtain a cultured mycelium. After 63 g (wet weight) of this cultured mycelium was added to 0.3 L of acetone and allowed to stand at room temperature for 1 week, the obtained extract was concentrated under reduced pressure with an evaporator to remove acetone by evaporation, and 150 ml of an aqueous residue was recovered.
[0029]
A 5 wt% Na ₂ CO ₃ aqueous solution was added to the above aqueous solution to adjust the pH to 9, hexane was added, the mixture was shaken and allowed to stand, and the separated aqueous phase was separated. 0.3 L of ethyl acetate was added to the aqueous phase part of hexane extraction, and after shaking, the ethyl acetate phase was separated by allowing to stand. The same liquid-liquid extraction operation was performed a total of 3 times, and the separated ethyl acetate phases were combined, washed with saturated brine and dehydrated with sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure with an evaporator to remove ethyl acetate by evaporation. About 1.7 g of dried product was recovered.
[0030]
The above dried product was dissolved in methanol and analyzed by thin layer chromatography (TLC) using chloroform / ethanol = 5: 1 (volume ratio) as a developing solvent. As a result, Rf = 0.5 to 0.8. A spot that appears to be peculiar to elinacins and shows a purple coloration by vanillin-sulfuric acid reagent was detected in the vicinity.
[0031]
A developing solvent, chloroform / ethanol = 40: 1 (volume ratio), 20: 1, which has been adjusted so as to increase in polarity in order to separate and purify the elinans in the dried product (about 1.7 g). Step elution by flash chromatography was performed using 10: 1, 5: 1. As a result of TLC analysis of each fraction fractionated every 10 ml, Erinacin B, which is about 230.7 mg of single substance in fractions 61-65, and Erinacin A, which is about 75.8 mg of single substance, in fractions 68-72 In the fraction 83-88, about 34.6 mg of single substance Erinacin C was obtained, and in fraction 109-111 about 373.7 mg of single substance Elinasin P was obtained. And about 118.3 mg of the cyanane derivative (Erinasin Q) represented by said Chemical formula (1) was isolated as a single substance about the fraction 130-133.
[0032]
Example 2
<Conversion of Erinacin Q to Erinacin P>
The mycelium of Yamabushitake is shake-cultured in a dark place at 25 ° C in Pharmamedia medium, and the culture solution is sampled on the 6th, 8th, 11th, 15th, 19th and 23rd days of culture, and suction filtered to remove the mycelium Obtained. This mycelium was crushed with a Waring blender in 20 ml acetone for 1 minute, stirred at 50 ° C. for 30 minutes, and then suction filtered to obtain an aqueous acetone solution.
[0033]
Subsequently, the acetone aqueous solution was concentrated under reduced pressure with an evaporator to be saturated with sodium chloride, and then extracted with 30 ml of ethyl acetate. The ethyl acetate phase was washed with saturated brine and dehydrated with sodium sulfate, and then concentrated under reduced pressure using an evaporator to evaporate and remove ethyl acetate. Each dried product was dissolved in 100 μl of HPLC elution solvent, and 5 μl of each sample was subjected to HPLC analysis. As a result, as shown in Table 1, the peak of production of erinasin Q was on the 11th day of culture. Since the production peak of No. 1 was on the 19th day of culture, it was confirmed that there was a daily change from erinasin Q to erinasin P in the mycelium.
[0034]
[Table 1]

[0035]
Example 3
<Artificial conversion from Erinasin P to Erinasin Q>
For the purpose of chemical conversion of erinasin P to erinasin Q, the erinasin Q of the present invention was used, and excess NaBH ₄ was added in a methanol solvent under ice-cooling and stirring, and stirring was continued for 20 minutes at 0 ° C. After confirming the completion of the reaction by TLC (chloroform: ethanol = 10: 1), the mixture was diluted with an aqueous NH ₄ Cl solution and extracted with ethyl acetate.
The organic phase was washed with brine, treated with anhydrous MgSO ₄ , concentrated under reduced pressure with an evaporator, and ethyl acetate was removed by evaporation to recover a dry solid. The resulting dried product was separated and purified with a SiO ₂ column (chloroform: ethanol = 8: 1) and recovered as erinasin Q in a yield of 75%.
[0036]
As described above, it was confirmed that erinasin Q was separated as a single substance from the reaction solution of erinasin P, and that it was confirmed that erinasin Q was changed over time from erinasin Q to erinasin P. The derivative erinasin Q has been experimentally proven to be a precursor of erinasin P.
[0037]
【The invention's effect】
The above-described thiatane derivative (Erinasin Q) of the present invention has an effect capable of easily performing artificial conversion to other useful cyanane derivatives, for example, Erinasin A or Erinasin B as an NGF production inducer. Moreover, since the sheatan derivative of the present invention is produced in a short period of time in the initial stage of culture in the mycelium, it has an effect that a useful sheatan derivative can be efficiently synthesized.

Claims

A sheatan derivative represented by the following chemical formula (1):