JP4737796B2 - Liver function enhancer - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒトまたは動物のための肝機能増強剤に関する。
本発明はまた、ヒトまたは動物の肝機能を増強させる食品および飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
肝臓は何らかの異常があったとしてもなかなか症状が現れず、「沈黙の臓器」と呼ばれている。国内の肝臓病患者全てを合わせると３００〜５００万人といわれており、調査報告により数値に違いがあるが、非常に多い数字であることには違いない。
【０００３】
また、肝臓病は日本人全体の死因の中では第８位であるが、３５歳から６５歳の働き盛りの年齢層の死亡原因を見ると、ガン、心臓病、脳卒中に次いで肝硬変、肝ガン、劇症肝炎等の肝臓病が第４位に位置しており、死亡原因の上位であるといえる。
【０００４】
肝疾患の原因にはいくつかあり、その原因により疾患の種類が異なる。肝臓の疾患としてもっとも多いのがウイルス性肝炎であり、肝臓病患者全体の７０〜８０％を占めるといわれている。その他としては、アルコールの飲み過ぎや薬物の乱用による肝疾患、肥満による脂肪肝が挙げられる。
【０００５】
ウイルス性肝炎の原因となるウイルスは、１０年ほど前まではＡ型、Ｂ型、Ｃ型が知られていたが、現在ではこのほかにＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＴＴＶ等の合わせて８種類が存在することがわかっており、最近注目されている分野である。具体的に説明すると、Ａ型肝炎は経口感染し慢性化せず無症状で終わる人もいるが、まれに劇症肝炎となって治療が必要になる。衛生状態のよい日本ではほとんど見かけられなくなったが、海外旅行などで感染する場合が増えている。Ｂ型は昔は輸血や集団予防接種が感染原因であったが、現在では大部分が性行為により感染している。通常は急性肝炎ですみ、慢性化することは少ないといわれているが、２〜３％の人は劇症肝炎になり、死亡するといわれている。また、キャリアの状態が長く続くと慢性肝炎に移行し、ウイルス性肝硬変にまで症状が進むケースもあり、肝硬変にかかると肝ガンにかかる危険性も高くなる。Ｃ型肝炎の感染経路については現在もいろいろな説があり、輸血、鍼治療、覚醒剤の回し打ち、過去の医療行為、性行為、母子感染の可能性が挙げられている。その他のウイルスについては現在のところまだよくわかっていない。
【０００６】
アルコールが原因となる肝障害の初期は脂肪肝であり、さらに慢性的にアルコールを摂取しているとアルコール性肝炎になり、やがては肝線維症、慢性肝炎、肝硬変になるといわれている。近年、アルコールのとりすぎ、不規則な食事、脂質のとりすぎ、偏食、ストレスなどが複合的に作用し、肥満や肝障害が増加している。
【０００７】
このように、飽食の時代である現在、アルコールの過剰摂取や栄養バランスの崩れによる肥満、海外旅行の一般化、不特定多数の間での性行為等、様々な原因から肝障害が増加し、注目されている。
【０００８】
ヒトの場合、肝障害はウイルスおよび不適切な食生活が原因して起こることが多く、これらの原因にストレスが加わると特に起こりやすくなる。このことは動物にも当てはまり、水・畜産業界でも、ウイルスの他に養殖魚や家畜、家禽の飼料やストレスが原因で、肝障害が増加している。特に、水産業界では、養魚飼料に含まれる魚やその他の脂質が酸化されやすく、これら過酸化脂質を摂取することにより魚の肝障害が現れる。また肝機能が低下すると体力の低下、発育不良を起こし、魚病の蔓延化、高い斃死率を引き起こすことが少なくない。また、家庭で飼育される熱帯魚にも、餌由来の肝障害抑制、および愛玩動物に対する健康志向から肝機能向上が求められている。このようなことから、最近では肝機能を向上させるといわれている各種漢方や強肝成分を養殖魚や熱帯魚に与えることがあり、グルタチオン、インチンコウ、サンシシ、サイコ、ウコン、甘草、タウリン、胆汁末、パントテン酸カルシウム、イノシトール、ビタミンＢ６などを添加した魚用混合飼料が販売されている。また、家畜、家禽にしても、飼料の酸化による過酸化脂質の摂取、およびコレステロールの過剰摂取にストレスが加わることにより、脂肪肝およびその他の肝障害が現れる。しかし、家畜や家禽に対し、飼料に添加して使用できるような安全性の高い肝機能増強剤は販売されていない。
【０００９】
従来より肝疾患、肝障害に対する薬剤の研究が多数行われ、医薬品または健康食品として報告または製品化されている。これらの肝障害抑制効果または肝機能増強効果を確認するには、いくつかの方法があるが、動物実験による肝障害モデルを使用した方法が一般的である。
【００１０】
従来よく使われていた肝障害モデルとして、四塩化炭素を用いた肝細胞壊死型肝障害モデルがある。四塩化炭素は、１回筋注することにより動物の種を問わず急性肝障害を起こし、ラットの場合、１２〜２４時間後にはＧＯＴおよびＧＰＴなどのトランスアミナーゼが肝細胞から血中に急激に移行するが、その後肝細胞の壊死の進行が止まると、血中のトランスアミナーゼ量は低下し、約７２時間後には正常値に戻る。四塩化炭素を2回以上筋注すると肝硬変になりその症状は非可逆的であるため、通常肝障害抑制剤の効果を確認するためには、１回接種による急性肝障害モデルを用いる。このモデルで肝障害に対して効果のある剤として、具体的には、特定のシステイン誘導体を有効成分として含有する肝障害抑制剤（特開昭５５−０５１０２１号公報）、肝臓、胎盤、イースト等から得られるムコプロチドより成る肝臓疾患用剤（特開昭５４−１１０３０９号公報）が報告されているが、前者は化合物であり、後者は動物性抽出物である。後者の肝臓疾患用剤はアリルアルコールによる肝障害にも効果があることが記載されている。また、植物由来の肝機能改善剤としては、エルバ・デ・サリーニョの溶媒または水抽出物（特開平６−９４１５号公報）、甘草抽出液の乳酸発酵物（ＷＯ９２／０１３９３号公報）、グリチルリチン抽出後の甘草残渣を有効成分とする強肝剤（特開平９−１４３０８５号公報）が報告されている。植物抽出物ではないが、植物中に存在するフィチン酸及びその塩を有効成分とする肝疾患治療予防剤（特開平２−１５０３２号公報）も報告されている。
【００１１】
最近よく用いられる肝障害モデルとして、ヒトのウイルス性肝炎に類似する組織像を実験的に作り出すことができる、Ｄ−ガラクトサミンを用いた急性肝炎モデルがある。この物質を投与すると、肝臓で特異的に代謝され、その過程により肝障害を生ずる。このモデルに対する肝障害抑制効果を持つ化合物として、分子中に（２−ピリジル）メチルチオ構造を有するベンツイミダゾール化合物またはその塩を含有して成る肝疾患治療剤（特開平８−２８３１５８号公報）、１，４−ジヒドロピリジン化合物（特開昭５８−１５９４９０号公報）、および２，２’−ジチオビスベンズイミダゾールを有効成分として含有する肝疾患治療剤（特開平４−２０８２２３号公報）が報告されている。ベンツイミダゾール化合物に関してはＤ−ガラクトサミンに関する効果のみを確認しているが、１，４−ジヒドロピリジン化合物および２，２’−ジチオビスベンズイミダゾールに関しては四塩化炭素肝障害に対する効果も確認されている。植物由来の強肝剤として、田七人参より得たギンセノサイドＲｅ／ギンセノサイドＲｇ１から成る肝臓保護薬（特開平９−２４１１６４号公報）が報告されている。この成分はＤ−ガラクトサミンに関する効果以外に、四塩化炭素肝障害およびPropionibacterium acnes／リポ多糖誘発肝障害モデルにおいても効果が確認されている。
【００１２】
胆汁の生成は肝臓の重要な機能の一つであり、肝細胞から十二指腸にいたる胆道の異常により十二指腸への胆汁流出が阻害されると、胆汁がうっ滞し、胆汁の主要成分であるビリルビン、胆汁酸、コレステロールなどが血中に逆流し、増加するようになる。このような病態を胆汁うっ滞といい、黄疸、肝腫、灰白色便、濃緑尿などを主な特徴とする。胆汁うっ滞は胆石や腫瘍により肝外胆管の機械的通過障害に起因する肝外胆汁うっ滞と先天性胆管閉塞症や、ウイルスや薬物性肝障害などによる胆内胆汁うっ滞がある。それぞれ多くのモデルが開発されているが、その内の１つとしてα−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）を用いる方法がよく用いられる。ＡＮＩＴによる肝障害は、小葉内胆管に炎症と閉塞を起こし、肝内性胆汁うっ滞を起こす、胆管系障害モデルとして知られている。このモデルに対する効果のある肝疾患用剤として、ヤマモモの樹皮を乾燥した楊梅皮の溶媒抽出物が報告されており（特開昭６３−２２２１１９号公報）、これは四塩化炭素肝障害モデルに対する効果も確認されている。
【００１３】
その他の植物由来の肝障害抑制剤として、コショウに含まれるアルカロイドのアセトアミノフェン急性肝障害モデルに対する効果（特開平５−２６２６４６号公報）、ケブラ・ペドラの溶媒または水抽出物の高コレステロール飼料による高脂血症モデルに対する効果（特開平９−２４１１７６号公報）、セテサングリア全草の熱水抽出物の高コレステロール食マウス肝障害モデルに対する効果（特開平５−２９４８４１号公報）、トベラ科植物の水溶性抽出物の肝疾患患者に対する効果（特開平２−９６５３２号公報）等が報告されている。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
従来報告されてきた肝機能増強剤あるいは肝疾患予防治療剤には、化合物及び動植物由来の天然成分があるが、そのほとんどが医薬品として治療に用いられる医薬品である。ヒトや魚類用飼料に用いられる化合物や漢方由来の成分は、元来医薬品であるためその副作用の問題があり、肝障害予防のため長期にわたって安全に摂取し続けられるわけではない。また、価格が比較的高い。
【００１５】
健康食品に用いられる肝機能増強剤は、漢方由来の成分やビタミン類を医薬品におけるより少ない量で含有することで構成されているものが多く、有効で安全な食品レベルの天然成分を含むものはほとんどない。
【００１６】
また、従来の天然由来成分の肝障害抑制効果及び肝機能増強剤は、いくつかの肝障害モデルのうち１、２のモデルに対する試験しか行っていないものが多く、特定の肝障害ではない広範囲の肝機能増強に用いるには、効果に疑問がある。
【００１７】
以上のことから、複数の肝障害モデルに対し効果があり、安全であり、低コストで生産できる天然由来の肝機能増強剤が求められている。
【００１８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の問題点に鑑み、ヒトをはじめとする動物に安全な、低コストで調製できる、複数の肝障害モデルに対し効果がある肝機能増強剤を得るべく鋭意検討を重ねてきたが、古来より食品として使用されている甘蔗を処理して得られるエキスが、複数の肝障害抑制効果を発揮することを見いだし、本発明を完成した。
【００１９】
すなわち、本発明は甘蔗由来のエキスを有効成分とする肝機能増強剤である。
【００２０】
本発明は特に、甘蔗汁、甘蔗の溶媒抽出液及び甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料を固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理することにより得られる画分を有効成分とする肝機能増強剤である。
【００２１】
あるいは、本発明は、甘蔗由来のバガスを原料とし、水、親水性溶媒、またはこれらの混合液を用いて抽出して得られるエキスを有効成分とする肝機能増強剤である。
【００２２】
甘蔗は本来蔗糖を得るためにその原料植物として栽培されるが、本発明はカラムクロマトグラフィーにより甘蔗汁、甘蔗由来の糖蜜および甘蔗の溶媒抽出液より選ばれる原料からエキスを抽出する方法、または通常廃棄している甘蔗を圧搾した残渣であるバガスから抽出する方法をとるため、本発明のエキスを抽出しても蔗糖は従来と変わらない収率で甘蔗汁から回収することができるため、従来の蔗糖製造を妨げることはない。つまり、本発明のエキスは甘蔗から蔗糖を除いた部分から得ることができるため、低コストで製造でき、また資源の有効利用にもなる。
【００２３】
本発明において、「肝機能増強剤」とは、ウイルス、薬剤、アルコール、食事内容などが原因として引き起こされる、脂肪肝、肝炎、胆汁うっ滞、肝細胞の変性壊死等の肝障害を予防、治療、または症状を低減する効果を包含する。
【００２４】
なお、本明細書においては、強肝作用または効果、肝機能増強作用または効果、肝障害抑制作用または効果、および肝疾患予防治療作用または効果を、特に区別せず、同義としている。
【００２５】
本発明において、動物とはヒト以外の脊椎動物を意味し、哺乳類、鳥類および魚類を含む。例えば、ウシ、ブタ、馬などの家畜、ニワトリ、ウズラ等の家禽、ハマチ、タイ、ヒラメ、フグ、カンパチ、アユ、ウナギ、マス、コイ、金魚などの魚類、イヌ、ネコなどのコンパニオン・アニマルが挙げられる。
【００２６】
本発明において、甘蔗由来のエキスとは、甘蔗を原料として得られたエキスである。
【００２７】
１つの実施態様においては、甘蔗由来のエキスは、甘蔗汁、甘蔗の溶媒抽出液および甘蔗由来の糖蜜より選ばれる原料（以下で、単に原料ということがある）を固定担体を用いたカラムクロマトグラフィーで処理して得られる画分である。更に好ましくは、原料を、固定担体として合成吸着剤が充填されたカラムに通液し、該合成吸着剤に吸着された成分を、水、メタノール、エタノールおよびこれらの混合物から選ばれる溶媒で溶出することによって得られる画分、あるいは原料を、固定担体としてのイオン交換樹脂が充填されたカラムでの親和力の差を利用したカラムクロマトグラフィー処理により分離して得られる画分のうち、波長４２０ｎｍの光を吸収する画分である。
【００２８】
従来、甘蔗由来の原料、中間製品及び製品の色価の評価は、波長４２０ｎｍの光の吸光度により行われている。この吸光度は、サンプルのｐＨにより若干影響されるので、通常、ｐＨを中性付近に調整してから吸光度を測定している。本発明において、吸光度は、サンプルのｐＨを６〜８の範囲に調整した後に測定されるものとする。実施例にあるように、得られた画分の凍結乾燥粉末０．２５ｇを０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）で溶解して全量を１００ｍｌにし、１ｃｍセルを用いて波長４２０ｎｍでの吸光度を測定したとき、吸光度が０．８以上の画分に本発明の高い効果が認められる。しかし、波長４２０ｎｍの吸光度は甘蔗由来の色素の量を示す値であって有効成分自体の量を示す値であるかどうかは不明であること、また原料となる甘蔗の産地や種類により甘蔗自体に含まれる色素の絶対量が異なることから、異なる甘蔗に由来する種々のエキスの間で効果と吸光度が必ずしも比例関係にあるわけではない。１つの原料から得られる複数の画分の吸光度を測定し、相対的に吸光度が高い画分が本発明の画分である。
【００２９】
固定担体として合成吸着剤をカラムに充填してカラムクロマトグラフィーを行う場合は、肝機能増強効果の有効成分の合成吸着剤に対する親和性が非常に強いため、原料をカラムに通液したとき有効成分が合成吸着剤に吸着される。その後、溶媒で溶出を行うと、合成吸着剤に吸着された成分が脱着され溶出される。一方、固定担体としてイオン交換樹脂を用いた場合には、肝機能増強効果の有効成分と樹脂との親和性は吸着ほど強いわけではない。有効成分とその他の成分のイオン交換樹脂に対する親和性の強さに差がある。原料をカラムに供給し、その後溶離液として水を流すことにより、有効成分とその他の成分の溶出速度の違いに基づいて両者を分離することができる。
【００３０】
あるいは、別の実施態様においては、甘蔗由来のエキスは、甘蔗由来のバガスを水、親水性溶媒、及びこれらの混合物より選ばれた溶液で溶出することにより得られるエキスであり、更に好ましくは、甘蔗から糖汁を圧搾した残渣であるバガスを、水、エタノール、及びこれらの混合物より選ばれる溶液で抽出することにより得られるエキスである。
【００３１】
ここで、本発明における甘蔗汁は、甘蔗（サトウキビ）を圧搾して得られる圧搾汁、甘蔗を水で浸出して得られる浸出汁、または原糖製造工場における石灰処理した清浄汁、濃縮汁を包含する。
【００３２】
本発明における甘蔗の溶媒抽出液とは、甘蔗を汎用の有機溶媒で抽出した溶液を濃縮、乾固後、水に再溶解した抽出液等を意味する。直上の有機溶媒としては、例えばメタノールやエタノール等のアルコール類が挙げられ、これらを単独でも組み合わせて使用しても良い。更に、これらの溶媒と水を組み合わせて使用しても良い。
【００３３】
本発明における甘蔗由来の糖蜜とは、結晶化工程で得られた砂糖結晶と母液の混合物を遠心分離にかけ、砂糖結晶と分離して得られる振蜜を意味し、例えば、原糖製造工場における１番蜜、２番蜜、製糖廃蜜、および精製糖製造工場における洗糖蜜、１〜７番蜜、精糖廃蜜等が挙げられる。また、これらの糖蜜を原料としてアルコール発酵を行った分離液のように、糖蜜を脱糖処理したものも同様に用いることができる。
【００３４】
また、本発明において、バガスとは典型的には原糖工場における製糖過程で排出されるバガスをいう。なおここでいう原糖工場における製糖過程で排出されるバガスには、最終圧搾機を出た最終バガスだけではなく、第１圧搾機を含む以降の圧搾機に食い込まれた細裂甘蔗をも含む。好ましくは、原糖工場において圧搾工程により糖汁を圧搾した後に排出されるバガスを用いる。圧搾工程より排出されるバガスは、甘蔗の種類、収穫時期などにより、その含まれる水分、糖分及びその組成比が異なるが、本発明においては、これらのバガスを任意に用いうる。また、原糖工場と同様に、例えば、黒糖工場において排出される甘蔗圧搾後に残るバガスを使用しても良い。あるいは、実験室レベルの小規模な実施では、甘蔗から糖液を圧搾した後のバガスを用いても良い。
【００３５】
このような甘蔗由来のエキスは、より具体的には例えば次にようにして得ることができる。
【００３６】
まず、カラムクロマトグラフィー処理により得る方法について述べる。
【００３７】
甘蔗汁、甘蔗の溶媒抽出液、または甘蔗由来の糖蜜（以下、単に原料ということがある）を、固定担体を充填したカラムに通液する。上記原料は、そのまま、または水で任意の濃度に調整して、用いることができる。なお、異物除去のために、カラムで処理する前に、原料をろ過することが好ましい。ろ過の手法は特に限定されず、食品工業で広く使用されているスクリーンろ過、ケイソウ土ろ過、精密ろ過、限外ろ過等の手段を好ましく使用できる。
【００３８】
固定担体としては、合成吸着剤及びイオン交換樹脂が好ましい。
【００３９】
まず、固定担体として合成吸着剤を用いる方法の好ましい態様は、以下の通りである。
【００４０】
合成吸着剤としては、好ましくは有機系樹脂を用いることができ、例えば、芳香族系樹脂、アクリル酸系メタクリル樹脂、アクリロニトリル脂肪族系樹脂等が使用できる。更に好ましくは芳香族系樹脂であり、特に無置換基型の芳香族系樹脂が使用できる。合成吸着剤として、例えばスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂の芳香族系樹脂などが使用でき、芳香族系樹脂としては、例えば疎水性置換基を有する芳香族系樹脂、無置換基型の芳香族系樹脂、無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂等の多孔性樹脂が使用できる。より好ましくは無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂が使用できる。そのような合成吸着剤は市販されており、例えばダイヤイオン（商標）ＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＨＰ−２１、ＨＰ−３０、ＨＰ−４０、ＨＰ−５０（以上、無置換基型の芳香族系樹脂、三菱化学株式会社製）；ＳＰ−８２５、ＳＰ−８００、ＳＰ−８５０、ＳＰ−８７５、ＳＰ−７０、ＳＰ−７００（以上、無置換基型に特殊処理を施した芳香族系樹脂、三菱化学株式会社製）；ＳＰ−９００（芳香族系樹脂、三菱化学株式会社製）；アンバーライト（商標）ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−１６、ＸＡＤ−２０００（以上、芳香族系樹脂、株式会社オルガノ製）；ダイヤイオン（商標）ＳＰ−２０５、ＳＰ−２０６、ＳＰ−２０７（以上、疎水性置換基を有する芳香族系樹脂、三菱化学株式会社製）；ＨＰ−２ＭＧ、ＥＸ−００２１（以上、疎水性置換基を有する芳香族系樹脂、三菱化学株式会社製）；アンバーライト（商標）ＸＡＤ−７、ＸＡＤ−８（以上、アクリル酸系エステル樹脂、株式会社オルガノ製）；ダイヤイオン（商標）ＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（以上、アクリル酸系メタクリル樹脂、三菱化学株式会社製）；セファデックス（商標）ＬＨ２０、ＬＨ６０（以上、架橋デキストランの誘導体、アマシャム ファルマシア バイオテク株式会社製）等が挙げられる。中でもＳＰ−８５０が特に好ましい。
【００４１】
固定担体の量は、カラムの大きさ、溶媒の種類、固定担体の種類などによって変化する。原料の固形分に対して、０．０１〜５倍湿潤体積量が好ましい。
【００４２】
原料を上記カラムに通すことにより、原料中の肝機能増強効果を有する成分は固定担体に吸着され、蔗糖、グルコース、フラクトースおよび無機塩類の大部分がそのまま流出する。
【００４３】
固定担体に吸着された成分を、溶媒により溶出する。ここで、肝機能増強効果を有する成分を効率よく溶出するには、その前に残留する蔗糖、グルコース、フラクトースおよび無機塩類を水洗により充分洗い流すことが好ましい。これにより、吸着されている目的の効果を有する成分を効率よく回収することができる。溶出溶媒は、水、メタノール、エタノールおよびこれらの混合物から選ばれることが好ましく、さらに好ましくは水とアルコールの混合溶媒、特に好ましくはエタノール−水混合溶媒が使用される。室温において効率よく目的の効果を有する成分を溶出するためには、５０／５０〜６０／４０（体積／体積）エタノール−水混合溶媒が好ましい。さらに、カラム温度を上げることにより、エタノール−水混合溶媒のエタノール混合比を減らすことができる。この場合、カラム内は常圧もしくは加圧された状態である。肝機能増強効果を有する成分は、前記溶媒で溶出される画分に存在する。溶出速度はカラムの大きさ、溶媒の種類、固定担体の種類などによって変化するので特に限定されないが、ＳＶ＝０．１〜１０ｈｒ-1が好ましい。なお、ＳＶ（Space velocity、空間速度）は、１時間当たり樹脂容積の何倍量の液体を通液するかという単位である。
【００４４】
前記肝機能増強効果を有する成分は、好ましくは次のようにして得ることができるが、下記に限定されない。すなわち、原料の固形分に対して０．０１〜５倍湿潤体積量の無置換基型の芳香族系樹脂を充填したカラムに、カラム温度６０〜９７℃にて原料を通液した後、カラム内を水洗し、次いでカラムに吸着されている成分を、カラム温度２０〜４０℃にて５０／５０〜６０／４０（体積／体積）エタノール−水混合溶媒で溶出させ、溶出開始時点から集めた溶出液の量が前記樹脂の４倍湿潤体積量以内に溶出する画分を回収する。
【００４５】
一方、固定担体としてイオン交換樹脂を用いる方法の好ましい態様は、以下の通りである。
【００４６】
イオン交換樹脂は、イオン交換の性質の観点から、陽イオン交換樹脂と陰イオン交換樹脂とに分類されるが、本発明では好ましくは陽イオン交換樹脂が使用できる。更に好ましくは強酸性型の、ナトリウムイオン型またはカリウムイオン型の陽イオン交換樹脂が使用できる。またイオン交換樹脂は、樹脂の形態の観点からは、ゲル型樹脂と、ポーラス型、マイクロポーラス型、ハイポーラス型などの多孔性樹脂に分類されるが、本発明では好ましくはゲル型のイオン交換樹脂が使用できる。更に好ましくは、強酸性型でナトリウムイオン型またはカリウムイオン型であるゲル型の陽イオン交換樹脂が使用できる。そのようなイオン交換樹脂は市販されており、例えばダイヤイオン（商標）系としてＳＫ１Ｂ、ＳＫ１０４、ＳＫ１１０、ＳＫ１１２、ＳＫ１１６（以上、三菱化学株式会社製）、ＵＢＫ５３０、ＵＢＫ５５０（以上、三菱化学株式会社製）、アンバーライト（商標）系としてアンバーライトＩＲ１２０ＢＮ、ＩＲ１２４、ＸＴ１００６、ＩＲ１１８、アンバーリスト３１、クロマトグラフ用アンバーライトＣＧ１２０、ＣＧ６０００（以上、オルガノ株式会社製）、ダウエックス（商標）系として、ＨＣＲ−Ｓ、ＨＣＲ−Ｗ２、ＨＧＲ−Ｗ２、モノスフィアー６５０Ｃ、マラソンＣ６００、５０Ｗ×２、５０Ｗ×４、５０Ｗ×８（以上、ダウ・ケミカル日本株式会社製）、ムロマック５０ＷＸ（室町化学工業株式会社製）、ピュロライト（商標）系としてＣ−１００Ｅ、Ｃ−１００、Ｃ−１００×１０、Ｃ−１２０Ｅ、ＰＣＲ４３３、ＰＣＲ５６３Ｋ、ＰＣＲ８２２、ＰＣＲ８３３、ＰＣＲ８６６、ＰＣＲ８８３、ＰＣＲ８９２、ＰＣＲ９４５（以上、エイエムピー・アイオネクス株式会社製）等が挙げられる。中でも、ＵＢＫシリーズが特に好ましい。
【００４７】
固定担体の量は、カラムの大きさ、固定担体の種類などによって変化する。原料の固形分に対して、好ましくは２〜１０，０００倍、より好ましくは５〜５００倍湿潤体積量である。
【００４８】
原料を上記カラムに通し、次に溶離液として水を用いてクロマトグラフィー処理し、得た多数の画分のうち波長４２０ｎｍの光を吸収する画分を分取して目的とするエキスを得ることができる。以下において、この方法をイオンクロマト分離ということがある。
【００４９】
通液条件は、原料の組成および固定担体の種類などによって変化する。溶離液として脱気処理した水を用い、単塔式回分分離法の場合、流速はＳＶ＝０．３〜１．０ｈｒ-1、サンプルの供給量は液量として樹脂の１〜２０％、温度は４０〜７０℃が好ましい。この分離法により得た画分の夫々について、波長４２０ｎｍでの吸収、電気伝導度（塩分の量の尺度）、蔗糖、グルコースおよびフラクトースの濃度を分析し、時系列的にグラフに表すと、波長４２０ｎｍでの吸光度のピーク、電気伝導度のピーク、蔗糖および還元糖のピークの順にピークが現れる。後記の図１における画分３〜１４に相当する画分を、波長４２０ｎｍの光を吸収する画分として分取する。特に画分３〜８が好ましい。また、蔗糖が出きった後の画分１８〜３０については、画分をそのまま用いて測定した波長４２０ｎｍでの吸光度は低いものの、これらを合わせて濃縮したサンプルについては、製造例８のサンプル８に示すように、吸光度が高い。つまり、画分１８〜３０は濃度が低くても、固形分当りの有効成分の純度が比較的高い。従って非蔗糖画分全体（画分１〜９と画分１８〜３０とを合わせたもの）は、有効成分の濃度は画分３〜８のみより低いが、同様に本発明のエキスとして使用することができる。擬似移動床式連続分離法の場合、原料液供給量、溶離液流量、各画分抜き出し流量を原料の組成、固定担体の種類、樹脂量に合わせて設定するため、一般的な通液条件を示すことができない。
【００５０】
原糖工場において２番蜜を原料として擬似移動床式連続分離法により得られる本画分の組成は、原料の種類およびイオン交換樹脂の分離能により変化するが、固形分当たりの蔗糖が６％以下、非糖分が９０％以上、見掛純糖率が１０％である。見掛純糖率は、ブリックス（Ｂｘ．）度（ブリックス度計で測定した固形百分率）に対する糖度（糖度計で測定した純蔗糖規定量に対する直接旋光度）の百分率である。
【００５１】
また、単塔式回分分離法により得られる本画分は、２番蜜を原料として得られた画分の場合、固形分（凍結乾燥固形分）当たりのポリフェノール量が約５％、電気伝導度灰分（塩分）が約４４．７％、糖分は約５％である。
【００５２】
肝機能増強効果の有効成分である物質は、波長４２０ｎｍの吸収のピーク部分の画分に多く含まれることは明らかであるが、有効成分自体が４２０ｎｍの吸収を持つかどうかは現在のところ明らかではない。
【００５３】
次に、バガスを抽出することにより甘蔗由来のエキスを得る方法について述べる。
【００５４】
バガスを水、親水性溶媒、これらの混合物からなる群より選択される溶液で抽出することによって、バガス抽出物が得られる。親水性溶媒としては、例えばメタノール、エタノール等の低級アルコール類、アセトンなどのケトン類、酢酸メチルや酢酸エチルなどの酢酸エステル類を用いることができる。より好ましくは、親水性溶媒としてエタノールを使用する。抽出のための好ましい溶媒は、６０／４０体積比以下の比で、より好ましくは５０／５０体積比以下の比でエタノールを含む、エタノール−水混合溶媒である。抽出温度は、効率よく抽出するためには、５０〜１００℃が好ましい。抽出時間は、バガスの原料、種類、状態などによっても異なってくるが、通常１〜３時間である。抽出方法は、一般的な汎用性のある方法が使用でき、例えばバガスと抽出溶媒を共に容器に入れて抽出する方法、抽出溶媒を循環させて抽出する方法、連続式に抽出する方法が挙げられる。抽出のための装置しては、例えば、デスメット式押出機、ルルギ式押出機等を任意に使用することができる。バガスから抽出されたエキスは糖含量が多いので、バガスエキスを上記と同様のカラムクロマトグラフィー処理に付すことにより糖を除去しても良い。
【００５５】
上記のように甘蔗から種々の方法で得られたエキスを、慣用の手段（減圧下での溶媒除去、凍結乾燥など）により濃縮して、本発明の効果を有する成分を得ることができる。このようにして得られた肝機能増強効果を有する成分は、固形分２０％以上に濃縮した液状または粉末状で保存することができる。保存は、特に液状の場合、冷凍保存、もしくは腐敗防止のためにアルコールを入れて冷蔵保存することが好ましい。
【００５６】
本発明の甘蔗由来のエキスは、マウスを用いた甘蔗由来のエキスの経口投与による動物実験の結果、四塩化炭素急性肝障害モデル、フェノバルビタール＋四塩化炭素急性肝障害モデル、ガラクトサミン急性肝障害モデル、α−ナフチルイソチオシアネート急性肝障害モデルの４つの肝障害モデルに関して肝機能増強効果を示した（後述の実施例１〜４）。よって、本発明における甘蔗由来のエキスは広い範囲での肝機能増強効果を示すと考えられる。従って本発明は、ヒトあるいは動物などの肝機能を増強することにより、各種の肝疾患の予防、治療のために使用できる。
【００５７】
本発明の肝機能増強剤の投与時期は、特に限定されない。
【００５８】
本発明の肝機能増強剤の投与量は、甘蔗由来のエキスの抽出方法、形態、対象とする動物の種類、健康状態、成長の度合い等によって異なり、特に限定されないが、例えば後述の製造例１〜８で得た甘蔗由来のエキス粉末の場合には、体重１Ｋｇ当たり１日に１〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜１０００ｍｇである。
【００５９】
本発明に係る甘蔗由来のエキスの投与形態は特に限定されないが、例えば経口的、静脈内、筋肉内、皮下、皮内、腹腔内、直腸内、舌下、経皮、点眼などの方法で投与することができる。
【００６０】
本発明に係る甘蔗由来のエキスを投与する際のエキスの形状は特に限定されず、液状または粉末状のエキスをそのまま投与してもよく、また通常用いられる製剤用担体によって、公知の方法により固形剤とすることも液剤とすることもでき、また製剤化の有無に関わらず食品、飼料、飲水などに混合することもできる。
【００６１】
経口用固形製剤を調製する場合には、エキスに賦形剤、結合剤、粘結剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、抗酸化剤、溶解補助剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などとする。
【００６２】
上記賦形剤としては、例えばデンプン、コーンスターチ、デキストリン、小麦粉、小麦ミドリング、ふすま、米ぬか、米ぬか油粕、大豆かす、大豆粉、大豆油かす、きな粉、ブドウ糖、乳糖、白糖、マルトース、植物油、動物油、硬化油、高級飽和脂肪酸、その他の脂肪酸、酵母、マンニトール、結晶セルロース、二酸化珪素、無水珪素、珪酸カルシウム、珪酸、リン酸一水素カルシウム、リン酸三カルシウム、リン酸二水素カルシウムなどが用いられる。
【００６３】
結合剤としては、例えばポリビニルピロリドン、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、トラガント、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、カゼインナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、プロピレングリコール、ポリアクリル酸ナトリウム等が用いられる。
【００６４】
滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸などが用いられる。
【００６５】
着色剤、着香料としては、医薬品、食品、飼料に添加することが許可されているものであればよく、特に限定されない。
【００６６】
抗酸化剤としては、例えばアスコルビン酸、α−トコフェロール、エトキシキン、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソールなどが挙げられ、医薬品や食品、飼料に添加することが許可されているものであればよい。また、錠剤、顆粒剤は必要に応じてコーティングすることは差し支えない。
【００６７】
注射製剤を製造する場合には、必要に応じて主薬にｐＨ調製剤、緩衝剤、懸濁化剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、抗酸化剤、保存剤などを添加し、常法により製造することができる。この際必要に応じ、凍結乾燥剤とすることも可能である。この注射剤は静脈内、皮下、筋肉内などに投与することができる。
【００６８】
懸濁化剤としては例えば、メチルセルロース、ポリソルベート８０、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートなどを挙げることができる。
【００６９】
溶解補助剤としては、例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート８０、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートなどが用いられる。
【００７０】
保存剤としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸等が用いられる。
【００７１】
本発明はまた、前記した肝機能増強剤を含む食品および飼料を提供する。食品および飼料は固体でも液体でも良い。食品としては、例えば菓子類、清涼飲料、機能性調味料、健康食品などが挙げられる。飼料としては、例えばドッグフード、キャットフードなどのペット用飼料、家畜用飼料、養殖魚介類用飼料等が挙げられる。
【００７２】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に解説する。実施例で使用する物質の投与量に関する記載、例えば「１０ｍｇ／ｋｇ」または「１０ｍｇ／ｋｇ体重」は、体重１ｋｇ当たり１０ｍｇを投与したという意味である。
【００７３】
製造例１
原糖製造工場の製造工程にて得られた甘蔗の圧搾汁（固形分１８．６％）約１０００リットルを、ジュースヒーターで８０℃に加温し、管型限外ろ過（ＭＨ２５型、有効膜面積２ｍ2×３本、分画分子量１０万、ダイセル化学工業株式会社製）でろ過処理して、約７５０リットルの処理液を得た。
合成吸着剤ＳＰ−８５０（商標、三菱化学株式会社）１５リットルを、ウォータージャケット付きのカラム（カラムサイズ：内径１７．０ｃｍ、高さ１００ｃｍ）に充填し、これに前記の圧搾汁ろ過処理液を、流速７５リットル／時間（ＳＶ＝５ｈｒ-1）の速度で通液した。なお、圧搾汁ろ過処理液通液中は、ウォータージャケットに、６５℃の水を常に循環させた。次に、４５リットルのイオン交換水を流速３０リットル／時間（ＳＶ＝２ｈｒ-1）でカラムに通液して洗浄した。イオン交換水で洗浄後、カラムから溶出した画分についての糖類の検出を行ったところ、ハンドレフブリックス（Ｂｘ．）計（アタゴ株式会社製、Ｎ−１Ｅ型）において、Ｂｘ．が約０になっているのが確認された。その後、溶出溶媒として３０リットルの５５％エタノール水溶液（エタノール／水＝５５／４５（体積／体積））を流速３０リットル／時間（ＳＶ＝２ｈｒ-1）にてカラムに通液して、合成吸着剤に吸着した成分を溶出させた。なお、溶出溶媒およびその後のイオン交換水通液中は、ウォータージャケットに、２５℃の水を常に循環させた。５５％エタノール水溶液でカラムから溶出した溶出液および、その後のイオン交換水を２０分間流して得られた溶出液を混合し、濃縮機にて約２０倍に減圧濃縮した後、１晩凍結乾燥して、茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）４３５ｇを得た。
【００７４】
製造例２
原糖製造工場の製造工程にて得られた清浄汁（固形分１１．５％）約６２０リットルを限外ろ過処理せずにそのまま使用した以外は、製造例１と同様にしてカラム処理を行った。得られた溶出液を濃縮機にて約２０倍に減圧濃縮した後、１晩凍結乾燥して、茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）２１０ｇを得た。
【００７５】
製造例３
原糖製造工場で得られた乾燥バガス１ｋｇをナイロンネット製の袋に入れ、袋ごとタンクに入れ、８０℃の水を２５リットル添加し、１時間撹拌抽出した。得られた抽出液をコットンフィルターでろ過し、異物を除去した。濾液を遠心式薄膜濃縮機で減圧濃縮した後、一晩凍結乾燥して、２６．３１ｇの茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）を得た。
【００７６】
製造例４
原糖製造工場で得られた生バガス２ｋｇを使用した以外は、製造例３と同様にエキスを抽出した。得られた抽出液はコットンフィルターでろ過し、異物を除去し、半量は遠心式薄膜濃縮機で減圧濃縮した後、一晩凍結乾燥して、１６．２４ｇの茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）を得た。また、残りの異物を除去した濾液は、０．４５μｍのセルロースアセテートフィルターで除菌のためろ過した後、遠心式薄膜濃縮機で減圧濃縮した後、一晩凍結乾燥して、１５．４５ｇの茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）を得た。
【００７７】
製造例５
原糖工場で得られた乾燥バガス３５０ｇをナイロンネット製の袋に入れ、袋ごとステンレス製寸胴鍋に入れ、５０／５０（体積／体積）エタノール−水混合溶媒５．２５リットルを添加し、室温で２時間抽出した。得られた抽出液は濾紙（東洋濾紙Ｎｏ．２、アドバンテック東洋株式会社製）でろ過し、異物を除去し、濾液をエバポレーターで減圧濃縮した後、一晩凍結乾燥して、６．７２ｇの茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）を得た。
【００７８】
製造例６
原糖工場で得られた乾燥バガス５００ｇをナイロンネット製の袋に入れ、袋ごとステンレス製寸胴鍋に入れ、５０／５０（体積／体積）エタノール−水混合溶媒７．５リットルを添加し、室温で２４時間抽出した。得られた抽出液は濾紙（東洋濾紙Ｎｏ．２、アドバンテック東洋株式会社製）でろ過し、異物を除去し、濾液をエバポレーターで減圧濃縮した後、一晩凍結乾燥して、９．９５ｇの茶褐色の粉末（甘蔗由来のエキス）を得た。
【００７９】
製造例７
原糖工場において、結晶缶にて２回蔗糖結晶を回収し、遠心分離により結晶を除いた振蜜である２番蜜を原料として、陽イオン交換樹脂を充填した分離糖を用いた擬似移動床式連続分離法により、イオン交換カラムクロマト分離を行った。
原料の調製からイオン交換クロマト分離までの工程は連続的に行われるため、各工程の液の固形分濃度や組成は時間と共に若干変動するが、以下の濃度や組成は定常運転における測定値である。
２番蜜はブリックス（Ｂｘ．）が約８５であった。この濃度はカラムクロマト処理を行うには高いため、ブリックス約５０に希釈した。これに、消石灰、炭酸ソーダを添加して不純物を凝集させ、ケイソウ土ろ過を行った。得られたろ液は、ブリックス４７．３、糖度（Ｐｏｌ．）２３．６、純糖率（Ｐｕｒｉｔｙ）４９．９、還元糖分２．５％であった。ろ液をイオン交換クロマトグラフィーの原料として用いた。
陽イオン交換樹脂としてＵＢＫ５３０（三菱化学株式会社）を用いた擬似移動床式連続分離法によるイオン交換クロマトグラフィーを行った。樹脂を充填した分離塔は８分割されており、１塔当たりの樹脂量は６．５ｍ3である。原料液と溶離液（水）の供給、および蔗糖画分と非蔗糖画分の抜き出し位置を一定時間毎に切り替えることにより、連続的に供給、抜き出しを行った。定常時の既定値は、供給流量３ｍ3／時間、溶離水流量１３．５ｍ3／時間、非蔗糖画分抜き出し流量１２．１３ｍ3／時間、蔗糖画分抜き出し流量４．３７ｍ3／時間、切り替え時間２６７秒であった。このクロマトグラフィー処理により、蔗糖画分と非蔗糖画分が分離された。これらは夫々、後述の図１における画分１０〜１７、および画分１〜９と画分１８〜３０とを合わせたものに相当する。蔗糖画分は蔗糖が固形分当たり約８７％（ＨＰＬＣ分析による）でブリックスは約３５であり、この画分を、清浄汁と混合して製糖本工程に戻し、再び蔗糖を回収する操作を行った。また、得られた非蔗糖画分は、蔗糖分が約０．３％（ＨＰＬＣ分析による）でブリックスが約８であった。この非蔗糖画分を濃縮缶により濃縮し、ブリックス４０．０、糖度（Ｐｏｌ．）２．３、純糖率（Ｐｕｒｉｔｙ）５．８、還元糖分５．４％とした。この非蔗糖画分を、後の試験に用いるため、１晩凍結乾燥処理に付した。得られた凍結乾燥粉末０．２５ｇを０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）で１００ｍｌ溶液にし、波長４２０ｎｍでの吸光度を測定した。吸光度は１．１１であった。
【００８０】
製造例８
原糖工場で得られた２番蜜処理液を原料として、単塔式回分分離法によるイオン交換カラムクロマトグラフィー処理を行った。
原料として使用した２番蜜処理液は、２番蜜を希釈後、炭酸ソーダによる清浄処理、ケイソウ土ろ過を行ったものである。この原料液の分析値は、ブリックス４７．４、糖度（Ｐｏｌ．）２３．２、純糖率（Ｐｕｒｉｔｙ）４８．９、還元糖分３．２％であった。
この原料を用いて、ＦＰＬＣシステム（ファルマシア株式会社製）を用いた単塔式回分分離法によるイオン交換クロマトグラフィーによる分画分離を行った。
カラムにゲル型の強酸性陽イオン交換樹脂ＵＢＫ５３０、ナトリウムイオン型（商標、三菱化学株式会社）５００ｍｌを充填した。カラムは内径２６ｍｍ、高さ１０００ｍｍで、フローアダプター付きであった。通液条件は、溶離液として脱気した蒸留水を用い、流速ＳＶ＝０．５ｈｒ-1（４．１７ｍｌ／分）、温度６０℃で行った。
約２５ｍｌの原料をカラムに供与した。分画条件は、原料供与３０分後から溶出液の回収を開始し、試験管１本当たり３．６分間（約１５ｍｌ／本）回収し、全部で３０本回収した。
得られた３０画分についての波長４２０ｎｍの吸光度、電気伝導度、および糖濃度を測定し、図１に示した。ここで、吸光度測定のためには、０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）２ｍｌに各画分０．１ｍｌを加えて試料とした。電気伝導度測定のためには、各画分を蒸留水で０．５％に希釈して試料とした。糖濃度はＨＰＬＣにより測定された。
各ピークの分析を行うため、波長４２０ｎｍの吸光ピーク部分を４つに、また蔗糖のピーク部分を３つに、蔗糖のピーク以降を１つにまとめた。すなわち、画分３および４を合わせてサンプル１に、画分５および６を合わせてサンプル２に、画分７および８を合わせてサンプル３に、画分９および１０を合わせてサンプル４に、画分１１および１２を合わせてサンプル５に、画分１３および１４を合わせてサンプル６に、画分１５および画分１６を合わせてサンプル７に、画分１７〜３０を合わせてサンプル８とした。画分１および２は溶出される成分がほとんどないため、廃棄した。各サンプルを１晩凍結乾燥して、粉末とした。得られた凍結乾燥粉末０．２５ｇを０．５ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ７．５）に溶解して１００ｍｌとし、波長４２０ｎｍでの吸光度を測定した。また、凍結乾燥固形分の分配比率、電導度灰分（塩分）、蔗糖、グルコースおよびフラクトース含量、ポリフェノール量も測定した。電導度灰分は、電気伝導度と既知の硫酸灰分の関係の検量線から係数を求め算出したものであり、蔗糖、グルコースおよびフラクトース含量はＨＰＬＣ分析により求めたものを、それぞれ各サンプルの固形分重量に対する比（％）として示した。ポリフェノール含量は、カテキン水溶液を標準溶液として検量線を引き、フェノール試薬で反応させて波長７６５ｎｍの吸光度を測定するフォリン−チオカルト法により測定し、カテキン換算の値として示した。凍結乾燥固形分の分配比率は、全サンプルの固形分重量の合計に対する各サンプルの固形分重量の比（％）である。
各サンプルの分析結果を以下の表１に示した。
サンプル８の吸光度は０．８６と比較的高かったが、これはテーリングした成分を集めて濃縮したものだからである。他のサンプルは２画分ずつを一緒にしたものであるのに対し、サンプル８は１４画分を合わせたものである。従って、４２０ｎｍの吸光度は高いが、この画分だけを本効果の画分として回収するのは効率が悪い。
糖分含量から、サンプル１〜３および８が非蔗糖分画分に相当し、サンプル４〜７が蔗糖分画分に相当することがわかる。
【００８１】
【表１】
甘蔗由来のエキスの急性毒性試験
製造例1で得られたエキス粉末を使用して、ラットを用いた単回経口投与毒性試験を行った。Sprague-Dawley系ＳＰＦラット（Crj:CD(SD)）の雌雄各１６匹を５週令で入手し、約１週間検疫・馴化飼育した。飼育条件は、温度２３±３℃、相対湿度５０±２０％、換気回数１時間１０〜１５回、照明１日１２時間であり、固形飼料（ＣＦＲ−１（商品名）、オリエンタル酵母株式会社）及び飲料水を自由に摂取させて飼育した。その後、健康な動物を選び、６週令で試験に供した。投与時の体重範囲は雄で１５７〜１７１ｇ、雌で１２３〜１３３ｇであった。
投与前一晩（約１６時間）絶食させたラットに、蒸留水で所定の濃度になるように調製した甘蔗由来の画分を一定の投与容量（１０ｍｌ／ｋｇ体重）にて１回強制経口投与した。対照群の動物には滅菌蒸留水のみを同様に投与した。投与量は、２００ｍｇ／ｋｇおよび１０００ｍｇ／ｋｇの２用量とし、これに対照群を加えて計３群を使用した。１群の動物数は雌雄共に５匹とした。
絶食後の再給餌は、投与６時間後に開始し、その後１４日間、上記飼育条件にて飼育した。
結果を以下の表２に示す。
【００８３】
【表２】
投与後１４日間が経過した後、雌雄とも最大投与量の１０００ｍｇ／ｋｇでも、ラットの死亡は認められなかったので、致死量は１０００ｍｇ／ｋｇを上回るものと推定される。
飼育中いずれのラットにおいても異常は認められず、さらに各被検液投与群の雌雄の体重は、対照群とほぼ同等であった。また、いずれのラットにおいても、解剖学的検査の結果、体外表、頭部、胸部および腹部の器官・組織に異常は見られなかった。
【００８５】
以上の結果から、製造例１で得られたエキス粉末をラットに単回経口投与毒性試験を行ったときの毒性は極めて弱いものと考えられる。
【００８６】
実施例１（Ｄ−ガラクトサミン急性肝障害モデルに対する作用）
製造例１〜７で得られた甘蔗由来のエキスまたはウコンエキス粉末（丸善製薬株式会社製）をそれぞれ１回投与当り５００ｍｇ／ｋｇの用量で、１群５匹のSlc:ICR雄性５〜６週令マウス（体重２５〜３０ｇ）に１日１回、５日間連続経口投与し、５日目にＤ−ガラクトサミン５ｇ／ｋｇを生理食塩液に１匹分当たり０．２ｍｌになるように溶解したものを、腹腔内投与した。この際、ウコンエキスは０．５ｍｌの蒸留水に溶解して用い、甘蔗由来のエキスはそのまま用いた。エキス投与開始から６日目に全採血し、得られた血液を遠心分離し、血漿中の肝機能検査値（ＧＯＴ、ＧＰＴ）を測定した。
また、陰性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与しかつＤ−ガラクトサミンを投与しない群を設定した。陽性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与し、エキス投与群と同様に肝障害を惹起させた群を設定した。
結果を以下の表３に示した。甘蔗由来のエキスを投与した群の肝機能検査値は、どれも陰性対照群の値に近く、陽性対照群と比較し肝障害が軽減された。また、ウコンエキスを投与した群も対照と比較し肝機能が改善されたが、甘蔗由来のエキスを投与した群よりその効果は低かった。
以上のことから、甘蔗由来のエキスはＤ−ガラクトサミン急性肝障害モデルに対する肝機能増強作用を示すことが明らかになった。
【００８７】
【表３】
実施例２（四塩化炭素急性肝障害モデルに対する作用）
製造例１〜３および５〜６で得られた甘蔗由来のエキスをそれぞれ１回投与当たり１００〜５００ｍｇ／ｋｇ（０．５ｍｌになるように注射用蒸留水に溶解したもの）の用量で、１群５匹のSlc:ICR雄性５〜６週令マウス（体重２５〜３０ｇ）に１日１回、５日間連続投与し、５日目のエキス投与の６時間前に肝障害負荷として、四塩化炭素（ＣＣｌ4）０．００１ｍｌ（オリーブオイルに懸濁して０．５ｍｌにしたもの）を経口投与した。エキス投与開始から６日目に全採血し、得られた血液を遠心分離し、血漿中の肝機能検査値（ＧＯＴ、ＧＰＴ）を測定した。
また、陰性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与しかつ四塩化炭素を投与しない群を設定した。陽性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与し、エキス投与群と同様に肝障害を惹起させた群を設定した。
結果を以下の表４に示した。エキス投与群の値は、陰性対照群の値と陽性対照群の値の中間の値を示し、エキスの投与量に依存して陰性対照群の値に近づいており、肝細胞保護作用が見られた。
以上のことから、甘蔗由来のエキスは四塩化炭素急性肝障害モデルに対する肝機能増強作用を示すことが明らかになった。
【００８９】
【表４】
実施例３（フェノバルビタール＋四塩化炭素急性肝障害モデル）
製造例１、３、５および６で得られた甘蔗由来のエキスをそれぞれ１回投与当たり５００ｍｇ／ｋｇ（０．５ｍｌになるように注射用蒸留水に溶解したもの）の用量で、１群５匹のSlc:ICR雄性５〜６週令マウス（体重２５〜３０ｇ）に１日１回、５日間連続経口投与した。また、肝障害負荷として、０．５％フェノバルビタールナトリウム−生食液を０．５ｍｌ、エキス投与開始日から１日１回、４日間連続経口投与し、また四塩化炭素０．０５ｍｌ（オリーブオイルに懸濁して０．５ｍｌにしたもの）を５日目のエキス投与の６時間前に経口投与した。エキス投与開始から６日目に全採血し、得られた血液を遠心分離し、血漿中の肝機能検査値（ＧＯＴ、ＧＰＴ）を測定した。
また、陰性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与しかつフェノバルビタールナトリウムおよび四塩化炭素を投与しない群を設定した。陽性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与し、エキス投与群と同様に肝障害を惹起させた群を設定した。
結果を以下の表５に示した。甘蔗由来のエキスを投与した群の肝機能検査値は、どれも陰性対照群の値に近く、陽性対照群と比較し肝機能が改善された。
以上のことから、甘蔗由来のエキスはフェノバルビタール＋四塩化炭素急性肝障害モデルに対する肝機能増強作用を示すことが明らかになった。
【００９１】
【表５】
実施例４（α−ナフチルイソチオシアネート急性肝障害モデルに対する作用）
製造例１、３、５および６で得られた甘蔗由来のエキスをそれぞれ１回投与当たり５００ｍｇ／ｋｇ（０．５ｍｌになるように注射用蒸留水に溶解したもの）の用量で、１群５匹のSlc:ICR雄性５〜６週令マウス（体重２５〜３０ｇ）に１日１回、５日間連続経口投与し、５日目にオリーブオイル０．５１ｍｌに懸濁したα−ナフチルイソチオシアネート（ＡＮＩＴ）１００ｍｇ／ｋｇを経口投与した。エキス投与開始から６日目に全採血し、得られた血液を遠心分離し、血漿中の肝機能検査値（ＧＯＴ、ＧＰＴ）を測定した。
また、陰性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与しかつＡＮＩＴを投与しない群を設定した。陽性対照群として、エキスの代わりに同容量の蒸留水を経口投与し、エキス投与群と同様に肝障害を惹起させた群を設定した。
結果を以下の表６に示した。甘蔗由来のエキスを投与した群の肝機能検査値はどれも陰性対照群の値に近く、陽性対照群と比較し肝機能が改善された。
以上のことから、甘蔗由来のエキスはＡＮＩＴ急性肝障害モデルに対する肝機能増強作用を示すことが明らかになった。
【００９３】
【表６】
【発明の効果】
本発明によれば、甘蔗由来のエキスをヒトまたは動物に例えば経口的に与えることにより、ヒトまたは動物の肝障害を予防、治療および低減することができる。しかも、甘蔗由来のエキスは植物由来であり、古来より、ヒトが黒糖などの含蜜糖として食してきた天然物に含まれるため、ヒトおよび動物の健康を害することなく安全で、しかも低コストである。また、天然物であるにもかかわらずその肝機能増強効果は高く、少量で作用するため、産業上非常に有用である。
【００９５】
【図面の簡単な説明】
【図１】製造例８で行ったイオン交換樹脂を用いた分離により得た画分の吸光度、電気伝導度および糖濃度を示すグラフ。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a liver function enhancer for humans or animals.
The present invention also relates to foods and feeds that enhance human or animal liver function.
[0002]
[Prior art]
Even if there are any abnormalities in the liver, symptoms do not appear easily, and it is called a “silent organ”. The total number of patients with liver disease in Japan is said to be 3 to 5 million, and there are differences in the numbers according to survey reports, but it must be very large.
[0003]
Liver disease is the 8th most common cause of death among all Japanese, but looking at the cause of death in the active age group of 35 to 65 years old, cirrhosis and liver cancer are followed by cancer, heart disease and stroke. Liver diseases such as fulminant hepatitis are ranked 4th, which is the top cause of death.
[0004]
There are several causes of liver disease, and the type of disease varies depending on the cause. Viral hepatitis is the most common liver disease and is said to account for 70 to 80% of all liver disease patients. Others include liver disease due to excessive drinking of alcohol and drug abuse, and fatty liver due to obesity.
[0005]
Viruses that cause viral hepatitis were known to be A, B, and C until about 10 years ago, but now, in addition to these, D, E, F, G, TTV, etc. It is an area that has recently been attracting attention because it is known that there are types. Specifically, hepatitis A is orally infected and does not become chronic and ends asymptomatically, but rarely becomes fulminant hepatitis and requires treatment. In Japan, where hygiene is good, it is almost impossible to see, but there are increasing cases of infections when traveling abroad. In the past, type B was caused by blood transfusions and mass vaccinations, but now it is mostly infected by sexual activity. It is usually said that it is acute hepatitis and it is rare to become chronic, but 2-3% of people are said to have fulminant hepatitis and die. In addition, if the carrier condition continues for a long time, it may shift to chronic hepatitis, and symptoms may progress to viral cirrhosis. If cirrhosis occurs, the risk of developing liver cancer increases. There are still various theories about the infection route of hepatitis C, and the possibility of blood transfusion, acupuncture treatment, stimulant rotation, past medical practice, sexual activity, and mother-to-child transmission are mentioned. Other viruses are not yet well understood.
[0006]
It is said that the early stage of liver damage caused by alcohol is fatty liver, and if alcohol is ingested chronically, it becomes alcoholic hepatitis and eventually hepatic fibrosis, chronic hepatitis, and cirrhosis. In recent years, excessive intake of alcohol, irregular diets, excessive intake of lipids, unbalanced diet, stress, etc. act in a complex manner, increasing obesity and liver damage.
[0007]
In this way, at the time of satiety, hepatic disorder has increased due to various causes such as obesity due to excessive intake of alcohol and nutritional balance, generalization of overseas travel, sexual activity among unspecified majority, etc. Has been.
[0008]
In humans, liver damage is often caused by viruses and inappropriate eating habits, especially when stress is added to these causes. This is also true for animals, and in the aquatic and livestock industry, liver damage is increasing due to farmed fish, livestock, poultry feed and stress in addition to viruses. In particular, in the fishery industry, fish and other lipids contained in fish feed are easily oxidized, and ingestion of these lipid peroxides causes liver damage to fish. In addition, a decrease in liver function often leads to a decrease in physical strength and poor development, causing the spread of fish diseases and a high mortality rate. In addition, tropical fish bred at home are also required to improve liver function from the suppression of diet-induced liver damage and health-consciousness of pet animals. For these reasons, various herbal medicines and strong liver components that are recently said to improve liver function may be given to cultured fish and tropical fish. Glutathione, Inchinkou, Sanshishi, Psycho, Turmeric, Licorice, Taurine, Bile powder, Fish mixed feed to which calcium pantothenate, inositol, vitamin B6 and the like are added is on the market. In addition, even in livestock and poultry, fatty liver and other liver disorders appear when stress is applied to intake of lipid peroxides due to oxidation of feed and excessive intake of cholesterol. However, a highly safe liver function enhancer that can be used by adding it to feed for livestock and poultry is not sold.
[0009]
Many researches on drugs for liver diseases and liver disorders have been conducted, and have been reported or commercialized as pharmaceuticals or health foods. There are several methods for confirming these liver injury-suppressing effects or liver function-enhancing effects, but a method using a liver injury model based on animal experiments is generally used.
[0010]
Conventionally used liver injury models include a hepatocyte necrosis type liver injury model using carbon tetrachloride. Carbon tetrachloride causes acute liver injury by intramuscular injection once, regardless of animal species. In rats, transaminases such as GOT and GPT are rapidly transferred from hepatocytes into the blood after 12 to 24 hours. However, when the progression of hepatocyte necrosis stops thereafter, the amount of transaminase in the blood decreases and returns to the normal value after about 72 hours. Intramuscular injection of carbon tetrachloride more than once results in cirrhosis and the symptoms are irreversible, so in order to confirm the effect of a liver disorder inhibitor, an acute liver disorder model with a single inoculation is usually used. As an agent having an effect on liver damage in this model, specifically, a liver disorder inhibitor containing a specific cysteine derivative as an active ingredient (Japanese Patent Laid-Open No. 55-051021), liver, placenta, yeast, etc. An agent for liver diseases consisting of mucoprotide obtained from JP-A-54-110309 has been reported. The former is a compound and the latter is an animal extract. It is described that the latter agent for liver diseases is also effective for liver damage caused by allyl alcohol. Examples of plant-derived liver function improving agents include Elba de Salinho's solvent or water extract (Japanese Patent Laid-Open No. 6-9415), lactic acid fermented licorice extract (WO 92/01393), and glycyrrhizin extraction. A strong liver agent (Japanese Patent Laid-Open No. 9-143085) having the later licorice residue as an active ingredient has been reported. Although not a plant extract, an agent for the treatment and prevention of liver diseases comprising phytic acid and salts thereof present in plants as an active ingredient has also been reported (JP-A-2-15032).
[0011]
As a liver injury model frequently used recently, there is an acute hepatitis model using D-galactosamine, which can experimentally create a tissue image similar to human viral hepatitis. When this substance is administered, it is specifically metabolized in the liver and the process causes liver damage. As a compound having an inhibitory effect on liver damage to this model, a therapeutic agent for liver disease comprising a benzimidazole compound having a (2-pyridyl) methylthio structure or a salt thereof in the molecule (Japanese Patent Laid-Open No. 8-283158), 1 , 4-dihydropyridine compound (Japanese Patent Laid-Open No. 58-159490) and a therapeutic agent for liver disease (Japanese Patent Laid-Open No. 4-208223) containing 2,2′-dithiobisbenzimidazole as active ingredients have been reported. . Only the effect on D-galactosamine has been confirmed for the benzimidazole compound, but the effect on carbon tetrachloride liver injury has also been confirmed for the 1,4-dihydropyridine compound and 2,2′-dithiobisbenzimidazole. As a plant-derived strong liver medicine, a liver protective drug (Japanese Patent Laid-Open No. 9-241164) composed of ginsenoside Re / ginsenoside Rg1 obtained from Tananachi ginseng has been reported. In addition to the effects of D-galactosamine, this component has been confirmed to be effective in carbon tetrachloride liver injury and Propionibacterium acnes / lipopolysaccharide-induced liver injury models.
[0012]
The production of bile is one of the important functions of the liver, and when bile outflow to the duodenum is inhibited due to abnormalities in the biliary tract from the hepatocytes to the duodenum, the bile becomes stagnant and bilirubin, the main component of bile, Bile acids, cholesterol, etc. will flow back into the blood and increase. Such a pathological condition is called cholestasis and is characterized by jaundice, hepatoma, grayish white stool, dark green urine and the like. Cholestasis includes extrahepatic cholestasis and congenital bile duct obstruction due to glandular stones and tumors, and congenital biliary obstruction caused by disturbance of mechanical passage of the extrahepatic bile duct. Many models have been developed, and a method using α-naphthyl isothiocyanate (ANIT) is often used as one of them. Liver damage due to ANIT is known as a model of bile duct damage that causes inflammation and obstruction in the intralobular bile duct and causes intrahepatic cholestasis. As an agent for liver disease having an effect on this model, a solvent extract of Japanese apricot bark from dried bayberry bark has been reported (Japanese Patent Laid-Open No. 63-222119), which has an effect on a carbon tetrachloride liver injury model. Has also been confirmed.
[0013]
Effects of alkaloids contained in pepper on acetaminophen acute liver injury models as other plant-derived liver injury inhibitors (Japanese Patent Laid-Open No. 5-262646), by Kevlar Pedra solvent or water extract high cholesterol diet Effect on hyperlipidemia model (Japanese Patent Laid-Open No. 9-241176), effect of hot water extract of whole cetesangria on high cholesterol diet mouse liver damage model (Japanese Patent Laid-Open No. 5-294842), The effect of a water-soluble extract on patients with liver diseases (Japanese Patent Laid-Open No. 2-96532) has been reported.
[0014]
[Problems to be solved by the invention]
Conventionally reported liver function enhancers or liver disease preventive and therapeutic agents include compounds and natural ingredients derived from animals and plants, most of which are pharmaceuticals used for treatment as pharmaceuticals. The compounds used in human and fish feeds and ingredients derived from traditional Chinese medicines are inherently pharmaceuticals and thus have side effects, and cannot be safely consumed for a long time to prevent liver damage. Also, the price is relatively high.
[0015]
Liver function enhancers used in health foods are often composed of smaller amounts of Kampo-derived ingredients and vitamins in medicines, and those that contain natural ingredients that are effective and safe food levels. rare.
[0016]
In addition, many of the conventional naturally-occurring components for inhibiting liver damage and enhancing liver function have been tested only for one or two of several liver damage models. There are doubts about its effects when used to enhance liver function.
[0017]
In view of the above, there is a demand for a naturally-derived liver function enhancer that is effective against a plurality of liver injury models, is safe, and can be produced at low cost.
[0018]
[Means for Solving the Problems]
In view of the above problems, the present inventors have conducted intensive studies to obtain a liver function enhancer that is safe for animals including humans and can be prepared at low cost and is effective against a plurality of liver injury models. However, the present inventors have found that an extract obtained by treating sweet candy used as a food since ancient times exhibits a plurality of effects of suppressing liver damage, and has completed the present invention.
[0019]
That is, this invention is a liver function enhancer which uses the extract derived from a sweet potato as an active ingredient.
[0020]
In particular, the present invention is a liver function enhancer comprising as an active ingredient a fraction obtained by treating a raw material selected from sweet potato juice, sweet potato solvent extract and molasses derived from sweet potato by column chromatography using a fixed carrier. is there.
[0021]
Alternatively, the present invention is a liver function enhancer comprising, as an active ingredient, an extract obtained by using bagasse derived from sweet potato as a raw material and extracting with water, a hydrophilic solvent, or a mixture thereof.
[0022]
Although sweet potato is originally cultivated as a raw material plant to obtain sucrose, the present invention is a method of extracting an extract from a raw material selected from sweet potato juice, sweet potato-derived molasses and a sweet potato solvent extract by column chromatography, or Since it takes a method of extracting from the bagasse which is a residue obtained by squeezing the sugarcane that has been discarded, sucrose can be recovered from the sugarcane soup in the same yield as before even if the extract of the present invention is extracted, Does not interfere with sucrose production. That is, since the extract of the present invention can be obtained from a portion obtained by removing sucrose from sweet potato, it can be produced at a low cost, and the resource can be effectively used.
[0023]
In the present invention, the term “liver function enhancer” refers to prevention and treatment of liver disorders such as fatty liver, hepatitis, cholestasis, and hepatocyte degenerative necrosis caused by viruses, drugs, alcohol, dietary content, etc. Or an effect of reducing symptoms.
[0024]
In the present specification, the strong liver action or effect, the liver function enhancing action or effect, the hepatic disorder suppressing action or effect, and the liver disease preventing or treating action or effect are not particularly distinguished and are synonymous.
[0025]
In the present invention, animals mean vertebrates other than humans, and include mammals, birds and fish. For example, domestic animals such as cattle, pigs, horses, poultry such as chickens and quails, fishes such as hamachi, thailand, flounder, puffer fish, amberjack, ayu, eel, trout, carp, goldfish, companion animals such as dogs and cats. Can be mentioned.
[0026]
In the present invention, the sweet potato-derived extract is an extract obtained from sweet potato as a raw material.
[0027]
In one embodiment, the extract derived from sweet potato is obtained by column chromatography using a raw material selected from sweet potato juice, a sweet potato solvent extract and molasses derived from sweet potato (hereinafter, simply referred to as a raw material) as a fixed carrier. It is a fraction obtained by processing with. More preferably, the raw material is passed through a column packed with a synthetic adsorbent as a fixed carrier, and the component adsorbed on the synthetic adsorbent is eluted with a solvent selected from water, methanol, ethanol and a mixture thereof. Among the fractions obtained by the above, or the fraction obtained by separating the raw material by column chromatography using the affinity difference in a column packed with an ion exchange resin as a fixed carrier, light having a wavelength of 420 nm Is the fraction that absorbs
[0028]
Conventionally, evaluation of the color value of raw materials, intermediate products and products derived from sweet potato is performed by the absorbance of light having a wavelength of 420 nm. Since this absorbance is slightly affected by the pH of the sample, the absorbance is usually measured after adjusting the pH to near neutral. In the present invention, the absorbance is measured after adjusting the pH of the sample to a range of 6-8. As in the Examples, 0.25 g of the lyophilized powder obtained was dissolved in 0.5 mM phosphate buffer (pH 7.5) to make a total volume of 100 ml, and the absorbance at a wavelength of 420 nm using a 1 cm cell. When measuring the above, the high effect of the present invention is recognized in the fraction having an absorbance of 0.8 or more. However, it is unknown whether the absorbance at a wavelength of 420 nm is a value indicating the amount of pigment derived from sweet potato and indicating the amount of the active ingredient itself, and depending on the production area and type of the sweet potato as a raw material, Since the absolute amounts of the pigments contained are different, the effect and absorbance are not necessarily in a proportional relationship between various extracts derived from different sweet potatoes. The absorbance of a plurality of fractions obtained from one raw material is measured, and the fraction having a relatively high absorbance is the fraction of the present invention.
[0029]
When column chromatography is performed with a synthetic adsorbent packed as a fixed carrier, the affinity of the active ingredient for enhancing liver function to the synthetic adsorbent is very strong. Is adsorbed on the synthetic adsorbent. Thereafter, when elution is performed with a solvent, the components adsorbed on the synthetic adsorbent are desorbed and eluted. On the other hand, when an ion exchange resin is used as a fixed carrier, the affinity between the active ingredient for enhancing liver function and the resin is not as strong as the adsorption. There is a difference in the strength of affinity between the active ingredient and other ingredients for the ion exchange resin. By supplying the raw material to the column and then flowing water as an eluent, both can be separated based on the difference in elution rate between the active ingredient and the other ingredients.
[0030]
Alternatively, in another embodiment, the sweet potato-derived extract is an extract obtained by eluting the sweet potato-derived bagasse with a solution selected from water, a hydrophilic solvent, and a mixture thereof, and more preferably, It is an extract obtained by extracting bagasse, which is a residue obtained by pressing sugar juice from sweet potato, with a solution selected from water, ethanol, and a mixture thereof.
[0031]
Here, the sweet potato soup in the present invention is a squeezed juice obtained by squeezing sweet potato (sugar cane), a leached juice obtained by leaching sweet potato with water, or a lime-treated clean juice or concentrated juice in a raw sugar manufacturing factory. Include.
[0032]
The solvent extract of sweet potato in the present invention means an extract obtained by concentrating and drying a solution obtained by extracting sweet potato with a general-purpose organic solvent and then re-dissolving it in water. Examples of the organic solvent directly above include alcohols such as methanol and ethanol, and these may be used alone or in combination. Furthermore, these solvents and water may be used in combination.
[0033]
The molasses derived from sweet potato in the present invention means treacle obtained by centrifuging a mixture of sugar crystals and mother liquor obtained in the crystallization process and separating them from the sugar crystals. Examples include honey, honey, sugar-making waste honey, and sugar-washed honey in refined sugar production plants, 1-7 honey, and refined sugar honey. Moreover, the thing which desugared molasses like the isolation | separation liquid which performed alcoholic fermentation using these molasses as a raw material can be used similarly.
[0034]
In the present invention, bagasse typically refers to bagasse discharged during the sugar production process in a raw sugar factory. In addition, the bagasse discharged in the sugar production process in the raw sugar factory here includes not only the final bagasse that has left the final press, but also shredded sweet potato that has been bitten by the subsequent press including the first press. . Preferably, bagasse discharged after squeezing the sugar juice in the raw sugar factory in the pressing step is used. The bagasse discharged from the pressing process has different moisture content, sugar content and composition ratio depending on the type of sweet potato, harvest time, etc., but in the present invention, these bagasse can be used arbitrarily. Moreover, you may use the bagasse which remain | survives after the sweet potato pressing discharged | emitted in a brown sugar factory similarly to a raw sugar factory, for example. Alternatively, in a small-scale implementation at the laboratory level, bagasse after squeezing sugar liquid from sweet potato may be used.
[0035]
More specifically, such a sweet potato-derived extract can be obtained, for example, as follows.
[0036]
First, a method obtained by column chromatography will be described.
[0037]
A sweet potato juice, a sweet potato solvent extract, or molasses derived from sweet potato (hereinafter sometimes simply referred to as a raw material) is passed through a column packed with a fixed carrier. The raw materials can be used as they are or after adjusting to an arbitrary concentration with water. In addition, it is preferable to filter a raw material before processing with a column for a foreign material removal. The filtration method is not particularly limited, and means such as screen filtration, diatomaceous earth filtration, microfiltration, and ultrafiltration that are widely used in the food industry can be preferably used.
[0038]
As the fixed carrier, a synthetic adsorbent and an ion exchange resin are preferable.
[0039]
First, a preferred embodiment of a method using a synthetic adsorbent as a fixed carrier is as follows.
[0040]
As the synthetic adsorbent, an organic resin can be preferably used. For example, an aromatic resin, an acrylic acid-based methacrylic resin, an acrylonitrile aliphatic resin, or the like can be used. An aromatic resin is more preferable, and an unsubstituted aromatic resin can be used. As the synthetic adsorbent, for example, an aromatic resin such as a styrene-divinylbenzene resin can be used. Examples of the aromatic resin include an aromatic resin having a hydrophobic substituent and an unsubstituted aromatic resin. A porous resin such as an aromatic resin obtained by subjecting an unsubstituted group to a special treatment can be used. More preferably, an aromatic resin obtained by subjecting an unsubstituted type to a special treatment can be used. Such synthetic adsorbents are commercially available, for example, Diaion (trademark) HP-10, HP-20, HP-21, HP-30, HP-40, HP-50 (above, non-substituted fragrance Family resin, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation); SP-825, SP-800, SP-850, SP-875, SP-70, SP-700 SP-900 (aromatic resin, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation); Amberlite (trademark) XAD-2, XAD-4, XAD-16, XAD-2000 (above, aromatic Type resin (manufactured by Organo Corporation); Diaion (trademark) SP-205, SP-206, SP-207 (above, aromatic resin having a hydrophobic substituent, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation); HP-2MG, EX-0021 ( Above, aromatic resin having a hydrophobic substituent, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation); Amberlite (trademark) XAD-7, XAD-8 (above, acrylic ester resin, manufactured by Organo Corporation); Diaion ( (Trademark) HP1MG, HP2MG (Acrylic acid methacrylic resin, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation); Sephadex (trademark) LH20, LH60 (Derivatives of cross-linked dextran, Amersham Pharmacia Biotech Co., Ltd.) and the like. Of these, SP-850 is particularly preferred.
[0041]
The amount of the fixed carrier varies depending on the size of the column, the type of solvent, the type of fixed carrier, and the like. A wet volume of 0.01 to 5 times the solid content of the raw material is preferable.
[0042]
By passing the raw material through the column, the component having the liver function enhancing effect in the raw material is adsorbed on the fixed carrier, and most of sucrose, glucose, fructose and inorganic salts flow out as they are.
[0043]
The component adsorbed on the fixed carrier is eluted with a solvent. Here, in order to efficiently elute the component having the liver function enhancing effect, it is preferable to sufficiently wash away residual sucrose, glucose, fructose and inorganic salts by washing with water. Thereby, the component which has the target effect adsorbed | sucked can be collect | recovered efficiently. The elution solvent is preferably selected from water, methanol, ethanol and mixtures thereof, more preferably a mixed solvent of water and alcohol, particularly preferably an ethanol-water mixed solvent. A 50/50 to 60/40 (volume / volume) ethanol-water mixed solvent is preferable in order to elute components having the desired effect efficiently at room temperature. Furthermore, the ethanol mixing ratio of the ethanol-water mixed solvent can be reduced by raising the column temperature. In this case, the inside of the column is at normal pressure or under pressure. The component having the liver function enhancing effect is present in the fraction eluted with the solvent. The elution rate is not particularly limited because it varies depending on the column size, the type of solvent, the type of fixed carrier, etc., but SV = 0.1 to 10 hr -1 Is preferred. In addition, SV (Space velocity, space velocity) is a unit of how many times the liquid volume of the resin volume per 1 hour.
[0044]
The component having the liver function enhancing effect can be preferably obtained as follows, but is not limited to the following. That is, after passing a raw material at a column temperature of 60 to 97 ° C. through a column packed with an unsubstituted aromatic resin having a wet volume of 0.01 to 5 times the solid content of the raw material, The inside was washed with water, and then the components adsorbed on the column were eluted with a 50 / 50-60 / 40 (volume / volume) ethanol-water mixed solvent at a column temperature of 20-40 ° C. and collected from the elution start time. The fraction that elutes within 4 times wet volume of the resin is collected.
[0045]
On the other hand, a preferred embodiment of a method using an ion exchange resin as a fixed carrier is as follows.
[0046]
Ion exchange resins are classified into cation exchange resins and anion exchange resins from the viewpoint of ion exchange properties. In the present invention, cation exchange resins can be preferably used. More preferably, a strongly acidic cation exchange resin of sodium ion type or potassium ion type can be used. In addition, ion exchange resins are classified into gel type resins and porous resins such as porous type, microporous type, and high porous type from the viewpoint of the form of the resin. In the present invention, gel type ion exchange is preferable. Resin can be used. More preferably, a gel-type cation exchange resin which is a strongly acidic type, sodium ion type or potassium ion type can be used. Such ion exchange resins are commercially available. For example, as diaion (trademark) series, SK1B, SK104, SK110, SK112, SK116 (above, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), UBK530, UBK550 (above, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) ), Amberlite (trademark) series as Amberlite IR120BN, IR124, XT1006, IR118, Amberlist 31, Amberlite CG120 for chromatograph, CG6000 (above, manufactured by Organo Corporation), Dowex (trademark) series as HCR- S, HCR-W2, HGR-W2, Monosphere 650C, Marathon C600, 50W × 2, 50W × 4, 50W × 8 (above, manufactured by Dow Chemical Japan Co., Ltd.), Muromac 50WX (manufactured by Muromachi Chemical Industry Co., Ltd.) , Purolite (quotient ) As a system, C-100E, C-100, C-100 × 10, C-120E, PCR433, PCR563K, PCR822, PCR833, PCR866, PCR883, PCR892, PCR945 (above, made by AMP IONEX Co., Ltd.) and the like can be mentioned. . Of these, the UBK series is particularly preferable.
[0047]
The amount of the fixed carrier varies depending on the column size, the type of the fixed carrier, and the like. The wet volume is preferably 2 to 10,000 times, more preferably 5 to 500 times the solid content of the raw material.
[0048]
The raw material is passed through the above column and then chromatographed using water as the eluent, and the fraction that absorbs light with a wavelength of 420 nm is fractionated from the obtained many fractions to obtain the desired extract. Can do. Hereinafter, this method is sometimes referred to as ion chromatography separation.
[0049]
Liquid passing conditions vary depending on the composition of the raw material and the type of the fixed carrier. In the case of single-column batch separation using degassed water as the eluent, the flow rate is SV = 0.3 to 1.0 hr. -1 The sample supply amount is preferably 1 to 20% of the resin as the liquid amount, and the temperature is preferably 40 to 70 ° C. For each of the fractions obtained by this separation method, the absorption at a wavelength of 420 nm, the electrical conductivity (a measure of the amount of salt), the concentration of sucrose, glucose and fructose are analyzed, and the time series shows the wavelength. Absorbance peaks at 420 nm, electrical conductivity peaks, sucrose and reducing sugar peaks appear in this order. Fractions corresponding to
[0050]
The composition of this fraction obtained by the simulated moving bed continuous separation method using the second honey at the raw sugar factory varies depending on the type of raw material and the separation ability of the ion exchange resin, but the sucrose per solid content is 6%. Hereinafter, the non-sugar content is 90% or more, and the apparent pure sugar ratio is 10%. The apparent pure sugar rate is a percentage of the sugar content (direct optical rotation relative to the specified amount of pure sucrose measured with a saccharimeter) relative to the Brix (Bx.) Degree (solid percentage measured with a Brix meter).
[0051]
In addition, this fraction obtained by the single-column batch separation method has a polyphenol content of about 5% per solid content (freeze-dried solid content) in the case of a fraction obtained from No. 2 honey, and electric conductivity. Ash (salt) is about 44.7% and sugar is about 5%.
[0052]
It is clear that many substances that are active ingredients for enhancing liver function are contained in the fraction of the peak of absorption at a wavelength of 420 nm, but it is not clear at present whether the active ingredients themselves have absorption at 420 nm. Absent.
[0053]
Next, a method for obtaining a sweet potato-derived extract by extracting bagasse will be described.
[0054]
By extracting bagasse with a solution selected from the group consisting of water, hydrophilic solvents, and mixtures thereof, a bagasse extract is obtained. As the hydrophilic solvent, for example, lower alcohols such as methanol and ethanol, ketones such as acetone, and acetates such as methyl acetate and ethyl acetate can be used. More preferably, ethanol is used as the hydrophilic solvent. A preferable solvent for extraction is an ethanol-water mixed solvent containing ethanol at a ratio of 60/40 volume ratio or less, more preferably at a ratio of 50/50 volume ratio or less. The extraction temperature is preferably 50 to 100 ° C. for efficient extraction. The extraction time varies depending on the bagasse raw material, type, state, etc., but is usually 1 to 3 hours. As the extraction method, a general versatile method can be used. Examples include a method of extracting bagasse and an extraction solvent in a container, a method of extracting by circulating the extraction solvent, and a method of continuous extraction. . As an apparatus for extraction, for example, a Desmet type extruder, a Lurgi type extruder or the like can be arbitrarily used. Since the extract extracted from bagasse has a high sugar content, the sugar may be removed by subjecting the bagasse extract to the same column chromatography treatment as described above.
[0055]
As described above, the extract obtained from sweet potato by various methods can be concentrated by conventional means (such as solvent removal under reduced pressure, lyophilization, etc.) to obtain a component having the effects of the present invention. The component having the liver function enhancing effect thus obtained can be stored in a liquid or powder form concentrated to a solid content of 20% or more. In particular, in the case of a liquid state, it is preferable to store in a refrigerated state by adding alcohol to prevent freezing or preventing spoilage.
[0056]
The sugarcane-derived extract of the present invention was obtained as a result of animal experiments by oral administration of a sugarcane-derived extract using a mouse. As a result, a carbon tetrachloride acute liver injury model, a phenobarbital + carbon tetrachloride acute liver injury model, a galactosamine acute liver injury model , Α-naphthyl isothiocyanate showed liver function enhancing effects with respect to four liver injury models of acute liver injury models (Examples 1 to 4 described later). Therefore, it is considered that the sweet potato-derived extract in the present invention exhibits a liver function enhancing effect in a wide range. Therefore, the present invention can be used for prevention and treatment of various liver diseases by enhancing liver function of humans or animals.
[0057]
The administration time of the liver function enhancer of the present invention is not particularly limited.
[0058]
The dose of the liver function-enhancing agent of the present invention varies depending on the extraction method, form, sweet potato-derived extract, type of animal, health condition, degree of growth, etc., and is not particularly limited. In the case of the sweet potato-derived extract powder obtained in ˜8, it is 1-1000 mg per day, preferably 50-1000 mg per 1 kg body weight.
[0059]
The dosage form of the extract derived from sweet potato according to the present invention is not particularly limited. For example, it is administered by a method such as oral, intravenous, intramuscular, subcutaneous, intradermal, intraperitoneal, intrarectal, sublingual, transdermal, and eye drops. can do.
[0060]
The shape of the extract when administering the sweet potato-derived extract according to the present invention is not particularly limited, and the liquid or powdery extract may be administered as it is, and it may be solidified by a known method depending on a commonly used pharmaceutical carrier. It can be used as a preparation or liquid, and can be mixed with food, feed, drinking water, etc., regardless of the presence or absence of formulation.
[0061]
When preparing an oral solid preparation, after adding excipients, binders, binders, disintegrants, lubricants, coloring agents, flavoring agents, antioxidants, solubilizing agents, etc. to the extract According to a conventional method, tablets, coated tablets, granules, powders, capsules and the like are obtained.
[0062]
Examples of the excipient include starch, corn starch, dextrin, wheat flour, wheat middling, bran, rice bran, rice bran oil cake, soybean meal, soybean powder, soybean oil meal, kinako, glucose, lactose, sucrose, maltose, vegetable oil, animal oil, Hardened oil, higher saturated fatty acid, other fatty acid, yeast, mannitol, crystalline cellulose, silicon dioxide, anhydrous silicon, calcium silicate, silicic acid, calcium monohydrogen phosphate, tricalcium phosphate, calcium dihydrogen phosphate and the like are used.
[0063]
As the binder, for example, polyvinylpyrrolidone, ethylcellulose, methylcellulose, gum arabic, tragacanth, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sodium alginate, sodium caseinate, sodium carboxymethylcellulose, propylene glycol, sodium polyacrylate and the like are used.
[0064]
As the lubricant, for example, magnesium stearate, talc, stearic acid or the like is used.
[0065]
The colorant and flavoring agent are not particularly limited as long as they are permitted to be added to pharmaceuticals, foods, and feeds.
[0066]
Antioxidants include, for example, ascorbic acid, α-tocopherol, ethoxyquin, dibutylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, and the like, as long as they are permitted to be added to pharmaceuticals, foods, and feeds. Tablets and granules may be coated as necessary.
[0067]
When manufacturing injection preparations, add pH adjusters, buffers, suspending agents, solubilizers, stabilizers, tonicity agents, antioxidants, preservatives, etc. It can be produced by a conventional method. In this case, a lyophilizing agent can be used as necessary. This injection can be administered intravenously, subcutaneously, intramuscularly, and the like.
[0068]
Examples of the suspending agent include methyl cellulose, polysorbate 80, hydroxyethyl cellulose, gum arabic, tragacanth powder, sodium carboxymethyl cellulose, polyoxyethylene sorbitan monolaurate and the like.
[0069]
As the solubilizer, for example, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, polysorbate 80, nicotinamide, polyoxyethylene sorbitan monolaurate and the like are used.
[0070]
As the preservative, for example, methyl paraoxybenzoate, ethyl paraoxybenzoate, sorbic acid and the like are used.
[0071]
The present invention also provides foods and feeds containing the aforementioned liver function enhancer. The food and feed may be solid or liquid. Examples of food include confectionery, soft drinks, functional seasonings, and health foods. Examples of the feed include pet feed such as dog food and cat food, livestock feed, and feed for cultured seafood.
[0072]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to examples. The description relating to the dosage of the substance used in the examples, for example, “10 mg / kg” or “10 mg / kg body weight” means that 10 mg was administered per kg body weight.
[0073]
Production Example 1
About 1000 liters of sweet potato pressed juice (solid content 18.6%) obtained in the manufacturing process of the raw sugar manufacturing plant is heated to 80 ° C. with a juice heater, and tube type ultrafiltration (MH25 type, effective membrane) Area 2m 2 × 3, fractional molecular weight 100,000, manufactured by Daicel Chemical Industries, Ltd.) to obtain a treatment liquid of about 750 liters.
A synthetic adsorbent SP-850 (trademark, Mitsubishi Chemical Co., Ltd.) 15 liters is packed in a column with a water jacket (column size: inner diameter 17.0 cm, height 100 cm), and the above-mentioned pressed juice filtration treatment liquid is added thereto. , Flow rate 75 liters / hour (SV = 5hr -1 ). In addition, 65 degreeC water was always circulated through the water jacket during the passage of the pressed juice filtration treatment liquid. Next, 45 liters of ion-exchanged water was supplied at a flow rate of 30 liters / hour (SV = 2 hr). -1 ) And passed through the column for washing. After washing with ion-exchanged water, saccharides in the fraction eluted from the column were detected. In a hand reflex Brix (Bx.) Meter (Atago Co., Ltd., N-1E type), Bx. Was confirmed to be about 0. Thereafter, 30 liters of 55% ethanol aqueous solution (ethanol / water = 55/45 (volume / volume)) was used as an elution solvent at a flow rate of 30 liters / hour (SV = 2 hr). -1 ) Was passed through the column to elute the components adsorbed on the synthetic adsorbent. In addition, 25 degreeC water was always circulated through the water jacket in the elution solvent and the subsequent ion exchange water flow. The eluate eluted from the column with 55% ethanol aqueous solution and the eluate obtained by flowing subsequent ion-exchanged water for 20 minutes are mixed, concentrated under reduced pressure about 20 times with a concentrator, and then freeze-dried overnight. Thus, 435 g of a brown powder (an extract derived from sweet potato) was obtained.
[0074]
Production Example 2
Column treatment was performed in the same manner as in Production Example 1 except that about 620 liters of purified juice (solid content 11.5%) obtained in the production process of the raw sugar production plant was used as it was without being subjected to ultrafiltration. It was. The obtained eluate was concentrated under reduced pressure about 20 times with a concentrator and then freeze-dried overnight to obtain 210 g of brown powder (an extract derived from sweet potato).
[0075]
Production Example 3
1 kg of dried bagasse obtained at the raw sugar manufacturing factory was put into a bag made of nylon net, put into the tank together with the bag, added with 25 liters of 80 ° C. water, and extracted by stirring for 1 hour. The obtained extract was filtered through a cotton filter to remove foreign matters. The filtrate was concentrated under reduced pressure using a centrifugal thin film concentrator and then freeze-dried overnight to obtain 26.31 g of a brown powder (an extract derived from sweet potato).
[0076]
Production Example 4
Extracts were extracted in the same manner as in Production Example 3 except that 2 kg of raw bagasse obtained at the raw sugar production factory was used. The resulting extract was filtered through a cotton filter to remove foreign substances, and half of the extract was concentrated under reduced pressure using a centrifugal thin film concentrator and then freeze-dried overnight to yield 16.24 g of brown powder (an extract derived from sweet potato) Got. The filtrate from which the remaining foreign matters were removed was filtered for sterilization with a 0.45 μm cellulose acetate filter, concentrated under reduced pressure with a centrifugal thin film concentrator, and then freeze-dried overnight to yield 15.45 g of brownish brown Powder (an extract derived from sweet potato) was obtained.
[0077]
Production Example 5
350 g of dry bagasse obtained at the raw sugar factory is put into a nylon net bag, and the bag is put into a stainless steel pan, and 5.25 liters of 50/50 (volume / volume) ethanol-water mixed solvent is added to the room temperature. For 2 hours. The obtained extract was filtered through a filter paper (Toyo Filter Paper No. 2, manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd.) to remove foreign matters. The filtrate was concentrated under reduced pressure using an evaporator, and then freeze-dried overnight to obtain 6.72 g of brown Powder (an extract derived from sweet potato) was obtained.
[0078]
Production Example 6
500 g of dry bagasse obtained at the raw sugar factory is put into a nylon net bag, the whole bag is put into a stainless steel pan, and 7.5 liters of 50/50 (volume / volume) ethanol-water mixed solvent is added to the room temperature. For 24 hours. The obtained extract was filtered through a filter paper (Toyo Filter Paper No. 2, manufactured by Advantech Toyo Co., Ltd.) to remove foreign matters, the filtrate was concentrated under reduced pressure using an evaporator, and then freeze-dried overnight to obtain 9.95 g of brown Powder (an extract derived from sweet potato) was obtained.
[0079]
Production Example 7
In the raw sugar factory, sucrose crystals are collected twice in a crystal can and simulated moving bed using separated saccharide filled with cation exchange resin from 2nd honey, which is the honey removed from the crystals by centrifugation. Ion exchange column chromatographic separation was performed by a continuous type separation method.
Since the steps from raw material preparation to ion-exchange chromatographic separation are performed continuously, the solid content concentration and composition of each step vary slightly with time, but the following concentrations and compositions are measured values in steady operation. .
The second honey had a Brix (Bx.) Of about 85. Since this concentration is high for column chromatography, it was diluted to about 50 Brix. To this, slaked lime and sodium carbonate were added to agglomerate impurities, and diatomaceous earth filtration was performed. The obtained filtrate had Brix 47.3, sugar content (Pol.) 23.6, pure sugar ratio (Purity) 49.9, and reducing sugar content 2.5%. The filtrate was used as a raw material for ion exchange chromatography.
Ion exchange chromatography was performed by a simulated moving bed continuous separation method using UBK530 (Mitsubishi Chemical Corporation) as a cation exchange resin. The separation tower filled with resin is divided into 8 parts, and the amount of resin per tower is 6.5 m. Three It is. By supplying the raw material solution and the eluent (water) and switching the extraction position of the sucrose fraction and the non-sucrose fraction at regular intervals, the supply and extraction were performed continuously. The default value for regular operation is a supply flow rate of 3 m. Three / Hour, elution water flow 13.5m Three / Hour, non-sucrose fraction extraction flow rate 12.13m Three / Hour, sucrose fraction extraction flow rate 4.37m Three / Hour, switching time was 267 seconds. By this chromatography treatment, a sucrose fraction and a non-sucrose fraction were separated. These correspond to the
[0080]
Production Example 8
Using the second honey treatment liquid obtained at the raw sugar factory as a raw material, ion-exchange column chromatography treatment by a single tower batch separation method was performed.
The No. 2 honey treatment liquid used as a raw material is obtained by diluting No. 2 honey, followed by cleaning with sodium carbonate and diatomaceous earth filtration. The analytical values of this raw material solution were Brix 47.4, sugar content (Pol.) 23.2, pure sugar rate (Purity) 48.9, and reducing sugar content 3.2%.
Using this raw material, fractional separation was performed by ion exchange chromatography using a single-column batch separation method using an FPLC system (manufactured by Pharmacia).
The column was packed with gel type strongly acidic cation exchange resin UBK530 and sodium ion type (trademark, Mitsubishi Chemical Corporation) 500 ml. The column had an inner diameter of 26 mm, a height of 1000 mm, and a flow adapter. As the flow-through conditions, degassed distilled water was used as an eluent, and a flow rate SV = 0.5 hr. -1 (4.17 ml / min) at a temperature of 60 ° C.
About 25 ml of raw material was donated to the column. As for the fractionation conditions, collection of the eluate was started 30 minutes after the supply of the raw material, and 3.6 minutes (about 15 ml / tube) was collected per test tube, and a total of 30 tubes were collected.
The obtained 30 fractions were measured for absorbance at a wavelength of 420 nm, electrical conductivity, and sugar concentration, and are shown in FIG. Here, for absorbance measurement, 0.1 ml of each fraction was added to 2 ml of 0.5 mM phosphate buffer (pH 7.5) to prepare a sample. For the measurement of electrical conductivity, each fraction was diluted to 0.5% with distilled water and used as a sample. Sugar concentration was measured by HPLC.
In order to analyze each peak, the absorption peak portion at a wavelength of 420 nm was combined into four, the sucrose peak portion into three, and the sucrose peak and subsequent portions into one. That is,
The analysis results of each sample are shown in Table 1 below.
The absorbance of
From the sugar content, it can be seen that
[0081]
[Table 1]
Acute toxicity test of sugarcane-derived extract
Using the extract powder obtained in Production Example 1, a single oral dose toxicity test was conducted using rats. 16 male and 16 female Sprague-Dawley SPF rats (Crj: CD (SD)) were obtained at 5 weeks of age and quarantined and acclimated for about 1 week. Breeding conditions are temperature 23 ± 3 ° C.,
Rats fasted overnight (about 16 hours) prior to administration were once gavaged at a fixed dose volume (10 ml / kg body weight) with a fraction derived from sweet potato prepared to a prescribed concentration with distilled water. did. A control group of animals was similarly administered only sterile distilled water. Two doses of 200 mg / kg and 1000 mg / kg were used, and a total of 3 groups were used by adding a control group thereto. The number of animals in one group was 5 for both males and females.
Refeeding after fasting was started 6 hours after administration, and was then raised for 14 days under the above breeding conditions.
The results are shown in Table 2 below.
[0083]
[Table 2]
After 14 days from the administration, since the death of the rat was not observed even at the maximum dose of 1000 mg / kg in both males and females, the lethal dose is estimated to exceed 1000 mg / kg.
No abnormality was observed in any of the rats during breeding, and the weights of males and females in each test solution administration group were almost the same as those in the control group. In any rat, as a result of anatomical examination, no abnormality was found in the organs / tissues of the external surface, head, chest and abdomen.
[0085]
From the above results, it is considered that the toxicity when the extract powder obtained in Production Example 1 is subjected to a single oral administration toxicity test in rats is extremely weak.
[0086]
Example 1 (effect on D-galactosamine acute liver injury model)
The sweet potato-derived extract or turmeric extract powder (manufactured by Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.) obtained in Production Examples 1 to 7 is each administered at a dose of 500 mg / kg, and 5 Slc: ICR males per group for 5 to 6 weeks Orally administered to aged mice (25 to 30 g body weight) once a day for 5 consecutive days, and 5 g / kg of D-galactosamine dissolved in physiological saline to a volume of 0.2 ml per mouse on the 5th day Was administered intraperitoneally. At this time, the turmeric extract was used by dissolving in 0.5 ml of distilled water, and the sweet potato-derived extract was used as it was. On the 6th day from the start of extract administration, the whole blood was collected, the obtained blood was centrifuged, and the liver function test values (GOT, GPT) in plasma were measured.
Moreover, the group which orally administers the same volume distilled water instead of an extract and does not administer D-galactosamine was set as a negative control group. As a positive control group, a group in which the same volume of distilled water was orally administered instead of the extract and liver damage was induced in the same manner as the extract administration group was set.
The results are shown in Table 3 below. The liver function test values of the group to which the extract derived from sweet potato was administered were close to those of the negative control group, and the liver damage was reduced compared to the positive control group. Moreover, although the liver function improved also in the group which administered the turmeric extract compared with the control, the effect was lower than the group which administered the sweet potato-derived extract.
From the above, it has been clarified that the extract derived from sweet potato shows liver function enhancing action on D-galactosamine acute liver injury model.
[0087]
[Table 3]
Example 2 (effect on carbon tetrachloride acute liver injury model)
Each of the sweet potato-derived extracts obtained in Production Examples 1 to 3 and 5 to 6 was administered at a dose of 100 to 500 mg / kg (dissolved in distilled water for injection to be 0.5 ml). A group of 5 Slc: ICR male 5-6 week old mice (25-30 g body weight) was administered once a day for 5 consecutive days, and hepatic damage was induced 6 hours before the extract administration on the 5th day. Carbon (CCl Four ) 0.001 ml (0.5 ml suspended in olive oil) was orally administered. On the 6th day from the start of extract administration, the whole blood was collected, the obtained blood was centrifuged, and the liver function test values (GOT, GPT) in plasma were measured.
Further, as a negative control group, a group in which the same volume of distilled water was orally administered instead of the extract and carbon tetrachloride was not administered was set. As a positive control group, a group in which the same volume of distilled water was orally administered instead of the extract and liver damage was induced in the same manner as the extract administration group was set.
The results are shown in Table 4 below. The value of the extract administration group is intermediate between the value of the negative control group and the value of the positive control group, and is close to the value of the negative control group depending on the dose of the extract. It was.
From the above, it has been clarified that the extract derived from sweet potato exhibits liver function enhancing action on carbon tetrachloride acute liver injury model.
[0089]
[Table 4]
Example 3 (phenobarbital + carbon tetrachloride acute liver injury model)
Each of the sweet potato-derived extracts obtained in Production Examples 1, 3, 5 and 6 was administered at a dose of 500 mg / kg (dissolved in distilled water for injection so as to be 0.5 ml), One Slc: ICR male 5-6 week old mouse (body weight 25-30 g) was orally administered once a day for 5 consecutive days. In addition, as a liver damage load, 0.5 ml of 0.5% phenobarbital sodium-saline solution was orally administered once a day for 4 days from the start of extract administration, and 0.05 ml of carbon tetrachloride (in olive oil) Suspended to 0.5 ml) was orally administered 6 hours before the extract administration on the fifth day. On the 6th day from the start of extract administration, the whole blood was collected, the obtained blood was centrifuged, and the liver function test values (GOT, GPT) in plasma were measured.
In addition, as a negative control group, a group in which the same volume of distilled water was orally administered instead of the extract and phenobarbital sodium and carbon tetrachloride were not administered was set. As a positive control group, a group in which the same volume of distilled water was orally administered instead of the extract and liver damage was induced in the same manner as the extract administration group was set.
The results are shown in Table 5 below. The liver function test values of the group administered with the sweet potato-derived extract were all close to those of the negative control group, and the liver function was improved as compared with the positive control group.
From the above, it has been clarified that the extract derived from sweet potato shows liver function enhancing action on phenobarbital + carbon tetrachloride acute liver injury model.
[0091]
[Table 5]
Example 4 (action on α-naphthyl isothiocyanate acute liver injury model)
Each of the sweet potato-derived extracts obtained in Production Examples 1, 3, 5 and 6 was administered at a dose of 500 mg / kg (dissolved in distilled water for injection so as to be 0.5 ml), Α-Naphthyl isothiocyanate (suc: ICR male 5-6 week old mice (body weight 25-30 g) was orally administered once a day for 5 consecutive days and suspended in 0.51 ml of olive oil on the 5th day ( ANIT) 100 mg / kg was orally administered. On the 6th day from the start of extract administration, the whole blood was collected, the obtained blood was centrifuged, and the liver function test values (GOT, GPT) in plasma were measured.
Further, as a negative control group, a group in which the same volume of distilled water was orally administered instead of the extract and ANIT was not administered was set. As a positive control group, a group in which the same volume of distilled water was orally administered instead of the extract and liver damage was induced in the same manner as the extract administration group was set.
The results are shown in Table 6 below. The liver function test values of the group administered with the sugarcane-derived extract were all close to those of the negative control group, and the liver function was improved as compared with the positive control group.
From the above, it has been clarified that the extract derived from sweet potato shows the liver function enhancing action on the ANIT acute liver injury model.
[0093]
[Table 6]
【The invention's effect】
According to the present invention, human or animal liver damage can be prevented, treated or reduced by, for example, oral administration of a sweet potato-derived extract to humans or animals. In addition, sugarcane-derived extracts are plant-derived and are included in natural products that humans have traditionally eaten as honey-containing sugar such as brown sugar, so they are safe without compromising human and animal health and at low cost. is there. In addition, although it is a natural product, its liver function enhancing effect is high and it works in a small amount, so it is very useful industrially.
[0095]
[Brief description of the drawings]
1 is a graph showing the absorbance, electrical conductivity, and sugar concentration of fractions obtained by separation using an ion exchange resin performed in Production Example 8. FIG.
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