JP4601118B2

JP4601118B2 - Inflammatory disease treatment

Info

Publication number: JP4601118B2
Application number: JP2000108331A
Authority: JP
Inventors: 晟八木; 隆夫信太; 克辛劉; 太乙郭; 喜治角田
Original assignee: JAPAN BIOPRODUCTS CO., LTD.
Current assignee: JAPAN BIOPRODUCTS CO., LTD.
Priority date: 2000-04-10
Filing date: 2000-04-10
Publication date: 2010-12-22
Anticipated expiration: 2020-04-10
Also published as: JP2001288106A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は炎症性疾患治療剤に関する。より詳細には、ハイドロキシプロリン誘導体又はその塩を有効成分として含有する炎症性疾患治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、ヒト胎盤及びその水解物には種々の生理活性物質が含まれていることが知られている。例えば、フィラトフ法(Filatov's method)はヒト胎盤水解物を用いた組織治療法で、血管壁の弾力線維及び筋線維を再生招来させるといわれており、喘息、リウマチ、肝炎などの慢性難治性疾患の治療又は老化防止などに用いられている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
上述のように、ヒト胎盤水解物には生理活性物質が含まれていると推察されるが、その本態は不明である。このような問題から、本発明者等は、ヒト胎盤水解物中の生理活性物質を同定するために、ヒト胎盤水解物を分離・精製したところ、細胞増殖作用、細胞保護作用などを有するハイドロキシプロリン誘導体を見出し、特許出願を行った（特開平１１−２１２９５号公報、特願2000-21807号参照）。本発明者らは、上記のハイドロキシプロリン誘導体の研究を進めたところ、当該ハイドロキシプロリン誘導体が炎症性疾患の予防・治療に有効であることを見出して本発明を完成した。本発明はかかる知見に基づいてなされたもので、本発明は４−ハイドロキシプロリン(4-Hyp)誘導体及びその塩を有効成分として含有する炎症性疾患治療剤を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するためになされた本発明の要旨は、
▲１▼下記一般式（１）又は（２）
【化２】

【０００５】
（式中、Ｒ_１及びＲ_２は、同一又は異なって、水素原子又は水酸基の保護基）
で表されるハイドロキシプロリン誘導体又はその塩を有効成分として含有する炎症性疾患治療剤；
(2)Ｒ_１及びＲ_２が共に水素原子又は共にアセチル基である上記(1)記載の炎症性疾患治療剤；
(3)慢性関節リウマチ治療剤である上記(1)又は(2)記載の炎症性疾患治療剤；
(4)炎症性腸疾患治療剤である上記(1)又は(2)記載の炎症性疾患治療剤；
である。
【０００６】
【発明の実施の形態】
上記の一般式（１）及び（２）で表される化合物において、Ｒ_１及びＲ_２は、同一又は異なって、水素原子又は水酸基の保護基である。
当該水酸基の保護基としては慣用の水酸基の保護基が例示され、例えば、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、クロロアセチル、ブロモアセチル、ベンゾイル、置換ベンゾイル等のアシル基、ベンジル、ｐ−クロロベンジル等のアラルキル基、アリールオキシカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基などが挙げられる。特に、アセチル基及びベンジル基が好ましい。
【０００７】
一般式（１）で表される化合物の塩としては、薬理学的に許容され得る無毒性のものであれば特に制限されず、例えば、酸付加塩としては、無機酸との塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、硫酸塩等）、有機酸との塩（酢酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩等）などが挙げられ、塩基付加塩としては、無機塩基との塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等）、有機塩基との塩（例えば、トリエチルアミン塩、アルギニンとの塩等）が挙げられる。
一般式（１）及び（２）で表される化合物は分子内に不斉炭素及び環構造を有しており、当該不斉炭素及び環構造に基づく光学異性体、幾何異性体、それらの混合物の全てを本発明の化合物は包含するものとする。
【０００８】
本発明の炎症性疾患治療剤において、炎症性疾患には特異的炎症性疾患及び非特異的炎症性疾患が包含され、例えば、慢性関節リウマチ；潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性腸疾患；アレルギー疾患などが例示される。
【０００９】
本発明の炎症性疾患治療剤の有効成分である一般式（１）及び（２）で表される化合物は、一般的には化学的合成法により調製される。その調製法は特に限定されないが、例えば、前掲の特開平１１−２１２９５号公報、特願2000-21807号などに記載の方法で得ることができる。より具体的には、下記式に示される方法により目的化合物を得ることができる。
【００１０】
【化３】

【００１１】
（上記式において、Ｒ_１及びＲ_２は前記と同じ、Ｙはカルボキシル基の保護基、Ｚはアミノ基の保護基を示す）
【００１２】
上記の反応工程式において、一般式（５）で表される化合物は、アミノ基を慣用の保護基で保護した４−ハイドロキシプロリン誘導体（３）と慣用の保護基でカルボキシル基を保護したセリン誘導体（４）とを縮合することにより得ることができる。かかる縮合は、ジシクロヘキシルカルボジイミド等の縮合剤を用いる方法、活性エステル化法などの慣用のアミド化法に準じて行うことができる。また、保護基を有する化合物（３）及び（４）も常法に準じて調製することができる。なお、アミノ基の保護基としては、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基などが例示され、またカルボキシル基の保護基としては、例えば、メチル、エチル、プロピル、フェナシル等の置換基を有することのあるアルキル基、ベンジル、置換ベンジル等のアラルキル基が例示される。
【００１３】
かくして得られた一般式（５）で表される化合物は、常法に準じて保護基Ｚ及びＹの脱離反応に付すことにより一般式（１）で表される本発明の化合物が得られる。
また、一般式（１）で表される化合物を、前述の縮合剤を用いて環化することにより、一般式（２）で表される化合物を得ることができる。
【００１４】
上記の一般式（１）及び（２）で表される化合物は後記の実施例に示されるように抗炎症作用を有し、炎症性疾患の治療に有用である。
本発明の炎症性疾患治療剤は、上述の作用・効果に基づくもので、一般式（１）及び／又は（２）で表される化合物又はそれらの塩を有効成分として含有するものである。特に、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患の予防・治療に好適に利用される。
本発明の治療剤は、一般式（１）及び／又は（２）で表される化合物又はそれらの塩を、適宜の薬理的に許容される添加剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）などの製薬上必要な成分と混合し、粉末、顆粒、腸溶錠を含む錠剤、カプセル剤、注射剤、軟膏を含む外用剤、点鼻剤、点眼剤、坐剤、舌下錠、口腔内崩壊剤を含む口腔用剤などの形態の医薬製剤に調製され、経口的又は非経口的に投与される。当該製剤は製剤上の常套手段に準じて調製することができる。一般式（１）及び／又は（２）で表される化合物又はそれらの塩の含量は、製剤形態、疾患、患者の症状などにより適宜変更することができ、上記製剤中に一般式（１）及び／又は（２）で表される化合物又はそれらの塩はその有効量が配合される。
本発明の製剤の効果的な投与量及び投与スケジュールは経験的に決定することができ、当該決定は当業者にとって自明である。製剤の投与経路は製剤形態により適宜設定することができ、例えば注射剤においては静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、関節腔内などに投与することができる。また、投与量は投与ルート、症状、患者の体重あるいは年令などによって適宜調整されるが、0.1〜300mg/kg体重の範囲から選択され、好ましい範囲は0.5〜200 mg/kg体重であり、これを１日１回又は数回に分けて投与される。
【００１５】
【発明の効果】
本発明の治療剤の有効成分である一般式（１）及び（２）で表される化合物は抗炎症作用を有しており、本発明の治療剤は各種の炎症性疾患の予防・治療に利用することができる。
【００１６】
【実施例】
以下、実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００１７】
実施例１
炎症性腸疾患に対する効果
文献(Eur. J. Pharmacol. 309, 261, 1996)に記載の方法に準じて、ハイドロキプロリン誘導体の炎症性腸疾患に対する効果を検討した。
具体的には、体重１８０±２０ｇの雄Wistarラットを１群７匹で用いた。１００ｍｇ／ｋｇの試験化合物を連続７日間（１日１回）経口投与した。第２日目に、試験化合物の投与２時間後にラットの遠側大腸内に、ＤＮＢＳ(2,4-dinitorobenzene sulfonic acid)３０ｍｇ（３０％エタノールに溶解したもの）を点滴投与し、大腸炎を惹起した。試験化合物の最終投与から２４時間後、ラットを殺し、大腸の重量を測定し、大腸重量と体重の比を評価指標とした。その結果を図１に示す。また、大腸潰瘍の発生数、大腸と他の臓器との癒着を観察し、更に試験中、毎日下痢の状態を記録した。その結果を表１に示す。
【００１８】
試験化合物としては、下記の化合物を使用した。
試験化合物略号
ＪＢＰ−２：
３’−ハイドロキシメチル−４−ハイドロキシピロリド［１，２−ｆ］２’，５’−ピペラジンジオン（一般式（２）で表される化合物において、Ｒ_１及びＲ_２が水素原子の化合物）
ＪＢＰ−３：
４−ハイドロキシプロリルセリン（一般式（１）で表される化合物において、Ｒ_１及びＲ_２が水素原子の化合物）
ＪＢＰ−６：
４−アセトキシプロリル−（３−アセチル）セリン（一般式（１）で表される化合物において、Ｒ_１及びＲ_２がアセチル基の化合物）
陽性対照：Sulfasalazine
なお、試験化合物ＪＢＰ−２、３及び６は前掲の特開平１１−２１２９５号公報及び特願2000-21807号に記載の方法などで調製することができる。
【００１９】
【表１】

【００２０】
図１及び表１に示されるように、本発明の炎症性疾患治療剤の有効成分であるＪＢＰ−２、３及び６は炎症性腸疾患の治療に有効であり、副作用も少ないことが明らかとなった。
【００２１】
実施例２
コラーゲン関節炎に対する効果
文献(Autoimmunity 22, 137, 1995)に記載の方法に準じてハイドロキプロリン誘導体のコラーゲン関節炎に対する効果を検討した。
具体的には、６−８週齢のBALB/cByJマウスを１群３匹で用いた。マウスに４ｍｇ／マウスの用量で抗ＩＩ型コラーゲンモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を静脈から注射した。注射後第４日目に、２５μｇ／マウスの用量でリポポリサッカライドを静脈より注射し、同日より２５ｍｇ／ｋｇのＪＢＰ−２を３日間（１日１回）連続経口投与した。一方、陽性対照として、３ｍｇ／ｋｇのインドメタシンを投与した。ｍＡｂ処理後、第５、７及び１０日目に、マウスの後肢をPlethysmometerで測定し、腫脹容量(Swollen volume)を求めた。その結果を図２に示す。図２に示されるように、ＪＢＰ−２は腫脹の生成を抑制しており、コラーゲン関節炎の治療に有効であることが判明した。
【００２２】
製剤例１
常法に準じて、腸溶性カプセルにＪＢＰ−２を２５０ｍｇ充填し、腸溶性カプセル製剤を調製した。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の治療剤の有効成分であるＪＢＰ−２、３及び６の炎症性腸疾患に対する効果を示す図である。図中の数値は平均値±標準誤差である（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）
【図２】本発明の治療剤の有効成分であるＪＢＰ−２のコラーゲン関節炎に対する効果を示す図である。図中の数値は平均値±標準誤差である（＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１）[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a therapeutic agent for inflammatory diseases. More specifically, the present invention relates to a therapeutic agent for inflammatory diseases containing a hydroxyproline derivative or a salt thereof as an active ingredient.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, it is known that human placenta and its hydrolyzate contain various physiologically active substances. For example, the Filatov method (Filatov's method) is a tissue treatment method using human placental hydrolyzate and is said to induce the regeneration of elastic fibers and muscle fibers of the blood vessel wall. It is used for treatment or anti-aging.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
As described above, it is speculated that the human placental hydrolyzate contains a physiologically active substance, but its true state is unknown. From these problems, the present inventors isolated and purified human placental hydrolyzate in order to identify bioactive substances in human placental hydrolyzate. As a result, hydroxyproline having cell proliferation action, cell protection action, etc. A derivative was found and a patent application was filed (see Japanese Patent Application Laid-Open No. 11-21295 and Japanese Patent Application No. 2000-21807). As a result of researches on the above hydroxyproline derivatives, the present inventors have found that the hydroxyproline derivatives are effective in the prevention and treatment of inflammatory diseases, thereby completing the present invention. The present invention has been made on the basis of such findings, and an object of the present invention is to provide a therapeutic agent for inflammatory diseases containing a 4-hydroxyproline (4-Hyp) derivative and a salt thereof as active ingredients.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
The gist of the present invention made to solve the above problems is as follows.
(1) The following general formula (1) or (2)
[Chemical 2]

[0005]
(Wherein R ₁ and R ₂ are the same or different and are a hydrogen atom or a hydroxyl-protecting group)
A therapeutic agent for inflammatory diseases comprising a hydroxyproline derivative represented by the formula:
(2) The R ₁ and R ₂ are both hydrogen atoms or together an acetyl group (1) Symbol placement inflammatory disease therapeutic agent for;
(3) The therapeutic agent for inflammatory diseases according to (1) or (2) above, which is a therapeutic agent for rheumatoid arthritis;
(4) The inflammatory disease therapeutic agent according to (1) or (2) above, which is a therapeutic agent for inflammatory bowel disease;
It is.
[0006]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
In the compounds represented by the above general formulas (1) and (2), R ₁ and R ₂ are the same or different and are a hydrogen atom or a hydroxyl-protecting group.
Examples of the hydroxyl-protecting group include conventional hydroxyl-protecting groups, for example, acyl groups such as acetyl, propionyl, pivaloyl, chloroacetyl, bromoacetyl, benzoyl and substituted benzoyl, and aralkyl groups such as benzyl and p-chlorobenzyl. , Aryloxycarbonyl group, alkyloxycarbonyl group and the like. In particular, an acetyl group and a benzyl group are preferable.
[0007]
The salt of the compound represented by the general formula (1) is not particularly limited as long as it is pharmacologically acceptable and nontoxic, and examples of acid addition salts include salts with inorganic acids (hydrochlorides) , Hydrobromide, phosphate, sulfate, etc.), salts with organic acids (acetate, succinate, maleate, fumarate, malate, tartrate, etc.) Examples of the base addition salt include salts with inorganic bases (for example, sodium salt, potassium salt, calcium salt, ammonium salt, etc.) and salts with organic bases (for example, salt with triethylamine salt, arginine, etc.).
The compounds represented by the general formulas (1) and (2) have an asymmetric carbon and a ring structure in the molecule, and optical isomers, geometric isomers, and mixtures thereof based on the asymmetric carbon and the ring structure. All of these are included in the compounds of the present invention.
[0008]
In the therapeutic agent for inflammatory diseases of the present invention, the inflammatory diseases include specific inflammatory diseases and non-specific inflammatory diseases, for example, rheumatoid arthritis; inflammatory bowel diseases such as ulcerative colitis and Crohn's disease Examples include allergic diseases.
[0009]
The compounds represented by the general formulas (1) and (2), which are active ingredients of the therapeutic agent for inflammatory diseases of the present invention, are generally prepared by a chemical synthesis method. The preparation method is not particularly limited, and for example, it can be obtained by the method described in JP-A No. 11-21295, Japanese Patent Application No. 2000-21807, and the like. More specifically, the target compound can be obtained by the method represented by the following formula.
[0010]
[Chemical 3]

[0011]
(In the above formula, R ₁ and R ₂ are the same as above, Y represents a protecting group for a carboxyl group, and Z represents a protecting group for an amino group)
[0012]
In the above reaction process formula, the compound represented by the general formula (5) includes a 4-hydroxyproline derivative (3) in which an amino group is protected with a conventional protective group and a serine derivative in which a carboxyl group is protected with a conventional protective group. (4) can be obtained by condensation. Such condensation can be carried out according to a conventional amidation method such as a method using a condensing agent such as dicyclohexylcarbodiimide or an active esterification method. In addition, compounds (3) and (4) having a protecting group can also be prepared according to a conventional method. Examples of the amino-protecting group include t-butoxycarbonyl group, benzyloxycarbonyl group and the like, and examples of the carboxyl-protecting group include substituents such as methyl, ethyl, propyl and phenacyl. Illustrative are aralkyl groups such as alkyl group, benzyl, substituted benzyl and the like.
[0013]
The compound of the present invention represented by the general formula (1) is obtained by subjecting the compound represented by the general formula (5) thus obtained to the elimination reaction of the protecting groups Z and Y according to a conventional method. .
Moreover, the compound represented by General formula (2) can be obtained by cyclizing the compound represented by General formula (1) using the above-mentioned condensing agent.
[0014]
The compounds represented by the above general formulas (1) and (2) have an anti-inflammatory action as shown in the examples below, and are useful for the treatment of inflammatory diseases.
The therapeutic agent for inflammatory diseases of the present invention is based on the above-mentioned actions and effects, and contains a compound represented by the general formula (1) and / or (2) or a salt thereof as an active ingredient. In particular, it is suitably used for the prevention and treatment of rheumatoid arthritis and inflammatory bowel disease.
The therapeutic agent of the present invention comprises a compound represented by the general formula (1) and / or (2) or a salt thereof as appropriate pharmacologically acceptable additive (for example, carrier, excipient, diluent). Etc.) and mixed with pharmaceutically necessary ingredients such as powders, granules, tablets containing enteric tablets, capsules, injections, external preparations including ointments, nasal drops, eye drops, suppositories, sublingual tablets, It is prepared into a pharmaceutical preparation in the form of an oral preparation containing an orally disintegrating agent and is orally or parenterally administered. The said formulation can be prepared according to the conventional method on a formulation. The content of the compound represented by the general formula (1) and / or (2) or a salt thereof can be appropriately changed depending on the preparation form, disease, patient symptom and the like. And / or an effective amount of the compound represented by (2) or a salt thereof.
Effective dosages and dosing schedules for the formulations of the present invention can be determined empirically and such determinations will be apparent to those skilled in the art. The administration route of the preparation can be appropriately set depending on the form of the preparation. For example, in the case of injection, it can be administered intravenously, intraarterially, subcutaneously, intramuscularly, intraarticularly, and the like. The dose is appropriately adjusted according to the administration route, symptoms, patient weight or age, etc., but is selected from the range of 0.1 to 300 mg / kg body weight, and the preferred range is 0.5 to 200 mg / kg body weight. Is administered once a day or divided into several times.
[0015]
【The invention's effect】
The compounds represented by the general formulas (1) and (2), which are active ingredients of the therapeutic agent of the present invention, have an anti-inflammatory action, and the therapeutic agent of the present invention is useful for the prevention and treatment of various inflammatory diseases. Can be used.
[0016]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail based on an Example, this invention is not limited to these examples.
[0017]
Example 1
Effect on inflammatory bowel disease The effect of hydroxyproline derivatives on inflammatory bowel disease was examined according to the method described in the literature (Eur. J. Pharmacol. 309 , 261, 1996).
Specifically, 7 male Wistar rats weighing 180 ± 20 g were used. 100 mg / kg of the test compound was orally administered for 7 consecutive days (once daily). On the second day, 2 hours after administration of the test compound, 30 mg of DNBS (2,4-dinitorobenzene sulfonic acid) (dissolved in 30% ethanol) was instilled into the far side colon of the rat to induce colitis. did. 24 hours after the final administration of the test compound, the rats were killed, the weight of the large intestine was measured, and the ratio between the large intestine weight and the body weight was used as an evaluation index. The result is shown in FIG. In addition, the number of large intestine ulcers and the adhesion between the large intestine and other organs were observed, and the state of diarrhea was recorded every day during the test. The results are shown in Table 1.
[0018]
The following compounds were used as test compounds.
Test compound abbreviation JBP-2:
3′-Hydroxymethyl-4-hydroxypyrrolide [1,2-f] 2 ′, 5′-piperazinedione (a compound represented by the general formula (2), wherein R ₁ and R ₂ are hydrogen atoms)
JBP-3:
4-hydroxyprolylserine (a compound represented by the general formula (1), wherein R ₁ and R ₂ are hydrogen atoms)
JBP-6:
4-acetoxyprolyl- (3-acetyl) serine (compound represented by the general formula (1), wherein R ₁ and R ₂ are acetyl groups)
Positive control: Sulfasalazine
Test compounds JBP-2, 3 and 6 can be prepared by the methods described in JP-A-11-21295 and Japanese Patent Application No. 2000-21807.
[0019]
[Table 1]

[0020]
As shown in FIG. 1 and Table 1, it is clear that JBP-2, 3 and 6 which are active ingredients of the therapeutic agent for inflammatory disease of the present invention are effective for the treatment of inflammatory bowel disease and have few side effects. became.
[0021]
Example 2
Effect on collagen arthritis The effect of hydroxyproline derivatives on collagen arthritis was examined according to the method described in the literature (Autoimmunity 22 , 137, 1995).
Specifically, 6-8 week old BALB / cByJ mice were used in 3 groups per group. Mice were injected intravenously with anti-type II collagen monoclonal antibody (mAb) at a dose of 4 mg / mouse. On the fourth day after injection, lipopolysaccharide was injected intravenously at a dose of 25 μg / mouse, and 25 mg / kg of JBP-2 was orally administered continuously for 3 days (once daily) from the same day. On the other hand, 3 mg / kg indomethacin was administered as a positive control. On the fifth, seventh and tenth days after mAb treatment, the hind limbs of the mice were measured with a Plethysmometer to determine the swollen volume. The result is shown in FIG. As shown in FIG. 2, JBP-2 suppressed the production of swelling and was found to be effective in treating collagen arthritis.
[0022]
Formulation Example 1
According to a conventional method, an enteric capsule was filled with 250 mg of JBP-2 to prepare an enteric capsule preparation.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing the effect of JBP-2, 3 and 6 which are active ingredients of the therapeutic agent of the present invention on inflammatory bowel disease. The numerical values in the figure are mean values ± standard errors (*: p <0.05, **: p <0.01)
FIG. 2 is a graph showing the effect of JBP-2, which is an active ingredient of the therapeutic agent of the present invention, on collagen arthritis. The numerical values in the figure are mean values ± standard errors (*: p <0.05, **: p <0.01)

Claims

General formula (2)

(Wherein R ₁ and R ₂ are the same or different and are a hydrogen atom or a hydroxyl-protecting group)
Inflammatory bowel disease therapeutic agent containing hydroxyproline derived material as an active component represented in.

The inflammatory bowel disease therapeutic agent according to claim 1, wherein R ₁ and R ₂ are both hydrogen atoms or both acetyl groups.