JP4596373B2 - Method for producing low viscosity glucomannan-containing composition having moisturizing effect - Google Patents
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Description
本発明は、皮膚で保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物の製造方法と、該方法により製造される皮膚で保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物を含む化粧料とに関する。 The present invention relates to a method for producing a low-viscosity glucomannan-containing composition having a moisturizing effect on the skin, and a cosmetic comprising the low-viscosity glucomannan-containing composition having a moisturizing effect on the skin produced by the method.
自然の材料、特に伝統的に食用に供されてきた材料は、安全性が高いだけでなく、消費者に親近感があるので、化粧料の材料として好ましい。コンニャク粉は、サトイモ科の植物であるＡｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ ｋｏｎｊａｃの球茎から精製される。食材のコンニャクはコンニャク粉の水溶液をカルシウム塩等で凝固させたものである。コンニャク粉の主成分であるグルコマンナンは保水性が高く、保湿性を有する化粧料の原料として有望である。 Natural materials, especially materials that have been traditionally used for food, are not only highly safe, but also are familiar to consumers, and thus are preferred as cosmetic materials. Konjac flour is purified from the corms of Amorphophallus konjac, a plant of the taro family. Ingredients konjac is an aqueous solution of konjac powder coagulated with calcium salt or the like. Glucomannan, the main component of konjac powder, has high water retention and is promising as a raw material for cosmetics having moisture retention.
しかしコンニャク粉の水溶液は、主成分のグルコマンナンの分子量が高いため、粘性が高いうえ、加熱、カルシウム塩等の添加により容易にゲル化する。濃度を自由に調節して十分な保湿性を有しつつ粘性の低い溶液を調製することが困難なので、そのままではコンニャク粉は化粧料には利用できない。 However, the aqueous solution of konjac powder has a high viscosity because of the high molecular weight of the main component, glucomannan, and is easily gelled by heating, addition of calcium salt, and the like. Since it is difficult to prepare a solution having a low viscosity while having sufficient moisture retention by adjusting the concentration freely, konjac powder cannot be used for cosmetics as it is.
従来技術には、コンニャクゲルを低分子化する微生物が特許文献１に開示されている。しかし、特許文献１に記載の微生物はコンニャクゲルに作用してマンノオリゴ糖を生成し粘性を著しく低下させて液状化させてしまう。かかる微生物はゲル化したグルコマンナンを一気に分解してしまうため、皮膚での保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物の製造には適さない。
そこで、コンニャク粉を出発材料として、低粘性化グルコマンナンを含み、かつ、皮膚で保湿効果を有する組成物を製造する安全な方法を開発する必要がある。 Therefore, it is necessary to develop a safe method for producing a composition containing low viscosity glucomannan and having a moisturizing effect on the skin using konjac powder as a starting material.
本発明は、（１）グルコマンナンを含む原料と、該原料を低粘性化する微生物を含むグルコマンナン低粘性化剤とを用意するステップと、（２）前記原料と前記低粘性化剤とを添加及び混合した水溶液のインキュベーションを行なって皮膚の保湿性を生じさせるステップとを含むことを特徴とする、皮膚で保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物の製造方法を提供する。 The present invention comprises (1) preparing a raw material containing glucomannan and a glucomannan thinning agent containing a microorganism that lowers the viscosity of the raw material; and (2) the raw material and the thinning agent. And a step of incubating the added and mixed aqueous solution to produce a skin moisturizing property, and a method for producing a low-viscosity glucomannan-containing composition having a moisturizing effect on the skin.
前記微生物は、受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−２７２で表されるパエニバチルス・パブリ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ）ＳＷ１０か、受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−２７３で表されるパエニバチルス・パブリＳＷ１２かの場合がある。 The microorganism may be Paenibacillus public SW10 represented by accession number NITE P-272 or Paenibacillus public SW12 represented by accession number NITE P-273.
前記原料は、コンニャク粉の場合がある。 The raw material may be konjac powder.
前記インキュベーションは、インキュベーション開始時における前記水溶液が０．５％（ｗ／ｖ）コンニャク粉水溶液で、微生物の個数が前記水溶液２Ｌ中に２ｘ１０９個であり、インキュベーション温度が３７°Ｃであり、３Ｌの三角フラスコを毎分１３０回で振盪し、インキュベーション時間が１２ないし３６時間という条件で行なわれる場合がある。 In the incubation, the aqueous solution at the start of incubation is a 0.5% (w / v) konjac flour aqueous solution, the number of microorganisms is 2 × 10 9 in 2 L of the aqueous solution, the incubation temperature is 37 ° C., 3 L The Erlenmeyer flask may be shaken at 130 times per minute, and the incubation time may be 12 to 36 hours.
本発明は、前記方法により製造される、保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物を含むことを特徴とする化粧料を提供する。 This invention provides the cosmetics characterized by including the low-viscosity glucomannan containing composition which has the moisturizing effect manufactured by the said method.
本発明のグルコマンナンを含む原料は、グルコマンナンを含み、本発明の製造方法に供することのできるいずれかの原料をいう。グルコマンナンは、サトイモ科の植物コンニャク（Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ ｋｏｎｊａｃ）の球茎の主成分であり、マンノース及びグルコース残基がおよそ３：２の割合でβ１→４結合したヘテロ多糖である。前記原料は、サトイモ科の植物コンニャクの球茎の粉等を含むが、これらに限定されない。 The raw material containing the glucomannan of the present invention refers to any raw material that contains the glucomannan and can be used in the production method of the present invention. Glucomannan is the main component of the corm of the taro plant, Amorphophallus konjac, and is a heteropolysaccharide in which mannose and glucose residues are β1 → 4 linked in a ratio of approximately 3: 2. Examples of the raw material include, but are not limited to, cornflower powder of the plant konjac of the taro family.
本発明のグルコマンナン低粘性化剤は、本発明のグルコマンナンを含む原料とともに添加及び混合した水溶液のインキュベーションによって、保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物を産生することができる物質をいう。 The glucomannan thinning agent of the present invention refers to a substance capable of producing a low-viscosity glucomannan-containing composition having a moisturizing effect by incubation of an aqueous solution added and mixed with a raw material containing the glucomannan of the present invention. .
本発明の微生物は、本発明のグルコマンナンを含む原料とともに添加及び混合した水溶液のインキュベーションによって、保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物を産生することができる微生物をいう。前記微生物は、受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−２７２で表されるパエニバチルス パブリ ＳＷ１０（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ ＳＷ１０）と、受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−２７３で表されるパエニバチルス パブリ ＳＷ１２（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ ＳＷ１２）とを含むが、これらに限定されない。本発明の微生物はグルコマンナンを含む培地中で増殖される。 The microorganism of the present invention refers to a microorganism capable of producing a low-viscosity glucomannan-containing composition having a moisturizing effect by incubation of an aqueous solution added and mixed with a raw material containing the glucomannan of the present invention. The microorganisms include, but are not limited to, Paenibacillus public SW10 represented by accession number NITE P-272 and Paenibacillus public SW12 represented by accession number NITE P-273. Not. The microorganism of the present invention is grown in a medium containing glucomannan.
本明細書において、皮膚の保湿性、あるいは、皮膚で保湿効果を有するとは、ヒトを含む動物の皮膚中への水分の保持を促進する効果があることをいう。前記効果は、皮膚中の水分量の維持及び向上効果、皮膚中の水分量の蒸散抑制効果等を含む。本明細書において保湿効果を有するとは、本発明の低粘性化グルコマンナン含有組成物を含む水溶液を塗布する前より塗布した後の方が皮表角層の水分量が多いことをいう。皮表角層の水分量は、皮膚表面に交流電圧を印加した場合の位相及び振幅の変化から測定される。例えば、Ｔａｇａｍｉ Ｈ．ら、Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍ． ７５：５００−５０７（１９８０）に記載の測定方法があるがこれに限定されない。皮表角層の水分量の測定装置は、ＳＫＩＣＯＮ−２００ＥＸ（アイ・ビイ・エス株式会社）、コルネオメータ（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、登録商標）ＣＭ８２５（株式会社インテグラル）を含むが、これらに限定されない。 In this specification, the skin moisturizing property or having a moisturizing effect on the skin means that there is an effect of promoting moisture retention in the skin of animals including humans. The effect includes the effect of maintaining and improving the amount of moisture in the skin, the effect of suppressing the transpiration of the amount of moisture in the skin, and the like. In this specification, having a moisturizing effect means that the moisture content of the skin surface horn layer is greater after application than before applying the aqueous solution containing the low-viscosity glucomannan-containing composition of the present invention. The amount of water in the skin surface horn layer is measured from changes in phase and amplitude when an AC voltage is applied to the skin surface. For example, Tagami H. et al. Et al. Invest. Derm. 75: 500-507 (1980), but is not limited thereto. The apparatus for measuring the moisture content of the skin surface horn layer includes, but is not limited to, SKICON-200EX (IBS Corporation) and Corneometer (registered trademark) CM825 (Integral Corporation).
本明細書において、組成物の粘性は、絶対粘度として直接測定するか、相対粘度の計測にもとづいて間接的に測定することによって決定される。例えば、絶対粘度の測定は回転円筒粘度計ビスコテスタＶＴ−０４（リオン株式会社）が、相対粘度の測定はオストワルド相対粘度計（柴田科学株式会社）がそれぞれ用いられる場合があるが、これらに限定されない。本明細書において、グルコマンナン含有組成物の粘性が高いとは、２０°Ｃにおいて２００−５００ｍＰａ・ｓ又はそれ以上であることをいう。本明細書において、グルコマンナン含有組成物の粘性が低いとは、２０°Ｃにおいて３０−９０ｍＰａ・ｓの範囲にあることをいう。したがって、低粘性化とは、２０°Ｃにおいて２００−５００ｍＰａ・ｓ又はそれ以上の粘度から、３０−９０ｍＰａ・ｓの範囲の粘度まで粘性を下げることをいう。 In the present specification, the viscosity of the composition is determined by measuring directly as an absolute viscosity or indirectly by measuring relative viscosity. For example, a rotational cylinder viscometer Viscotester VT-04 (Rion Co., Ltd.) may be used for measuring absolute viscosity, and an Ostwald relative viscometer (Shibata Kagaku Co., Ltd.) may be used for measuring relative viscosity. However, the present invention is not limited thereto. . In the present specification, the high viscosity of the glucomannan-containing composition means that it is 200 to 500 mPa · s or more at 20 ° C. In the present specification, the low viscosity of the glucomannan-containing composition means that it is in the range of 30-90 mPa · s at 20 ° C. Accordingly, the reduction in viscosity means that the viscosity is lowered from a viscosity of 200-500 mPa · s or higher at 20 ° C. to a viscosity in the range of 30-90 mPa · s.
本発明の製造方法において、グルコマンナンを含む原料と、該原料を低粘性化する微生物を含むグルコマンナン低粘性化剤とを添加及び混合した水溶液のインキュベーションの条件は、インキュベーション開始時における前記微生物の数と、インキュベーション温度と、インキュベーションの際の旋回の有無及び回転数と、インキュベーションの時間の長さとに依存する。インキュベーション温度は、前記微生物の増殖と、グルコマンナン分解酵素との至適温度に近いことが好ましい。インキュベーション温度は、好ましくは３２−４０°Ｃであり、より好ましくは３５−３８°Ｃである。インキュベーションの際の振盪（又は旋回）の有無及び回数は、前記微生物の酸素要求性等の呼吸特性に依存して設定することが好ましい。グルコマンナンを含む原料の低粘性化は、前記微生物の数が多く、インキュベーション時間が長いほど反応が進行する。低粘性化グルコマンナンの保湿性は、インキュベーションの開始後徐々に増大し、やがてピークに達するが、インキュベーションのさらなる継続により徐々に低減する。したがって高い保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物を産生するために、適切なインキュベーション条件を設定する必要がある。インキュベーション開始時における前記水溶液は０．５％（ｗ／ｖ）コンニャク粉水溶液で、微生物の個数は前記水溶液２Ｌ中に２ｘ１０９個であり、インキュベーション温度は３７°Ｃであり、３Ｌの三角フラスコを毎分１３０回で振盪するときには、前記インキュベーション時間は、ＳＷ１０株については１２−３０時間、ＳＷ１２株については３０−４８時間が好ましく、ＳＷ１０株については１６−２４時間、ＳＷ１２株については３６時間がより好ましい。 In the production method of the present invention, the conditions for incubation of the aqueous solution in which the raw material containing glucomannan and the glucomannan thinning agent containing microorganisms that lower the viscosity of the raw material are added and mixed are the conditions of the microorganisms at the start of incubation. It depends on the number, the incubation temperature, the presence / absence of rotation and the number of rotations during the incubation and the length of the incubation time. The incubation temperature is preferably close to the optimum temperature for the growth of the microorganism and the glucomannan degrading enzyme. The incubation temperature is preferably 32-40 ° C, more preferably 35-38 ° C. The presence / absence and number of shaking (or swirling) during incubation are preferably set depending on respiratory characteristics such as oxygen demand of the microorganism. In reducing the viscosity of a raw material containing glucomannan, the reaction proceeds as the number of microorganisms increases and the incubation time increases. The moisturizing properties of the low-viscosity glucomannan increase gradually after the start of incubation and eventually reach a peak, but gradually decrease with further continuation of incubation. Therefore, in order to produce a low viscosity glucomannan-containing composition having a high moisturizing effect, it is necessary to set appropriate incubation conditions. The aqueous solution at the start of incubation is a 0.5% (w / v) konjac powder aqueous solution, the number of microorganisms is 2 × 10 9 in 2 L of the aqueous solution, the incubation temperature is 37 ° C., and a 3 L Erlenmeyer flask is added. When shaking at 130 times per minute, the incubation time is preferably 12-30 hours for the SW10 strain, 30-48 hours for the SW12 strain, 16-24 hours for the SW10 strain, and 36 hours for the SW12 strain. More preferred.
本発明の「化粧料」とは、身体を清潔にしたり、外見を美しくしたりする目的で、皮膚への塗布、散布等を行うもので、作用の緩和なものをいう。本発明の化粧料は、基礎化粧料、メイクアップ化粧料、薬用化粧料、トイレタリー製品等を含む。 The “cosmetics” of the present invention refers to those having a relaxed action, which are applied to the skin, spread, etc. for the purpose of cleansing the body and making the appearance beautiful. The cosmetics of the present invention include basic cosmetics, makeup cosmetics, medicinal cosmetics, toiletry products and the like.
本発明の化粧料は、前記製造方法により製造される低粘性化グルコマンナン含有組成物を含み、保湿効果を有する。本発明の化粧料は、剤形に応じ常法により製造することができる。その剤形は、本発明の効果を損なわないものであれば特に限定されない。例えば、ローション剤、ゲル剤、クリーム、軟膏及びシート状製品等の任意の剤形を採用することができる。 The cosmetic of the present invention includes a low-viscosity glucomannan-containing composition produced by the production method, and has a moisturizing effect. The cosmetic of the present invention can be produced by a conventional method according to the dosage form. The dosage form is not particularly limited as long as it does not impair the effects of the present invention. For example, arbitrary dosage forms such as lotions, gels, creams, ointments and sheet products can be adopted.
また、本発明の化粧料には、他の有効成分や生理学的に許容可能な賦形剤、色素、香料等の添加物を組み合わせて配合することができる。例えば、本発明の効果を損なわない範囲で、化粧料に配合し得る油脂類、保湿剤、色素、香料、栄養素、抗菌剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤等を配合することができる。 In addition, the cosmetic of the present invention can be combined with other active ingredients, physiologically acceptable excipients, pigments, fragrances and other additives. For example, fats and oils, humectants, pigments, fragrances, nutrients, antibacterial agents, antioxidants, ultraviolet absorbers and the like that can be blended in cosmetics can be blended within a range that does not impair the effects of the present invention.
以下に実施例を示すが、これらは実施態様の例示を意図しており本発明の範囲を限定することは意図しない。 Examples are shown below, but these are intended to illustrate embodiments and are not intended to limit the scope of the present invention.
１．材料の調製
１．１ コンニャク粉溶液の調製
コンニャク粉は、荻野商店（群馬県甘楽郡下仁田町）から入手できる白雪特級を使用した。コンニャク粉５ｇを１０００ｍＬの滅菌水に室温で混合及び撹拌し、懸濁させたものをコンニャク粉溶液とした。
1. 1. Preparation of material 1.1 Preparation of konjac powder solution As the konjac powder, a white snow special grade available from Hadano Shoten (Shimonita-cho, Kanraku-gun, Gunma Prefecture) was used. A konjac powder solution was prepared by mixing and stirring 5 g of konjac powder in 1000 mL of sterilized water at room temperature.
１．２ ＳＷ１０及びＳＷ１２株の菌の調製
パエニバチルス パブリ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ）ＳＷ１０及びＳＷ１２株は、コンニャク粉水溶液に土などの微生物源を添加して、室温で振盪培養を行なって、粘性が低下した溶液中の微生物をコンニャク粉を含む寒天培地上でコロニー形成させて単一コロニーとして単離された。ＳＷ１０及びＳＷ１２株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構 特許微生物寄託センターに寄託され、それぞれＮＩＴＥ Ｐ−２７２及びＮＩＴＥ Ｐ−２７３という受託番号を付与された。
1.2 Preparation of strains of SW10 and SW12 strains Paenibacillus pavuli strains SW10 and SW12 are prepared by adding a microorganism source such as soil to a konjac powder aqueous solution and performing shaking culture at room temperature to reduce viscosity. The microorganism inside was colonized on an agar medium containing konjac flour and isolated as a single colony. The SW10 and SW12 strains were deposited with the Patent Microorganism Depositary Center for Product Evaluation Technology of the Incorporated Administrative Agency, and were assigned deposit numbers of NITE P-272 and NITE P-273, respectively.
本発明の微生物の増殖に用いられる液体培地の組成は以下のとおりである。
（ＮＨ４）２ＳＯ４ ６．６ｇ
Ｋ２ＨＰＯ４ １．３９ｇ
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２７２ｇ
ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ０．２０３ｇ
ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．１４７ｇ
コンニャク粉 ５．０ｇ
滅菌水 １０００ｍｌ
ｐＨを７．０ないし７．２に調整してオートクレーブ滅菌する。
The composition of the liquid medium used for the growth of the microorganism of the present invention is as follows.
(NH 4 ) 2 SO 4 6.6 g
K 2 HPO 4 1.39 g
KH 2 PO 4 0.272 g
MgCl 2 · 6H 2 O 0.203g
CaCl 2 · 2H 2 O 0.147 g
Konjac flour 5.0g
Sterile water 1000ml
Adjust the pH to 7.0 to 7.2 and sterilize by autoclave.
本発明の微生物の増殖に用いられる寒天培地の組成は以下のとおりである。
（ＮＨ４）２ＳＯ４ ６．６ｇ
Ｋ２ＨＰＯ４ １．３９ｇ
ＫＨ２ＰＯ４ ０．２７２ｇ
ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ ０．２０３ｇ
ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ ０．１４７ｇ
寒天 １５．０ｇ
コンニャク粉 ５．０ｇ
滅菌水 １０００ｍｌ
ｐＨを７．０ないし７．２に調整してオートクレーブ滅菌する。
The composition of the agar medium used for the growth of the microorganism of the present invention is as follows.
(NH 4 ) 2 SO 4 6.6 g
K 2 HPO 4 1.39 g
KH 2 PO 4 0.272 g
MgCl 2 · 6H 2 O 0.203g
CaCl 2 · 2H 2 O 0.147 g
Agar 15.0g
Konjac flour 5.0g
Sterile water 1000ml
Adjust the pH to 7.0 to 7.2 and sterilize by autoclave.
ＳＷ１０及びＳＷ１２株の菌は１×１０９／ｍＬのグリセロールストックを使用した。試験に当たり、前記液体培地に１００μＬのグリセロールストックを添加し、３７°Ｃ、２４時間、毎分１３０回の振盪の前培養を行い前培養液を得た。次いで２，０００ｍＬの前記液体培地に前記前培養液を２ｍＬ添加し、３７°Ｃ、２４時間、毎分１３０回の振盪の本培養を行い、ＳＷ１０及びＳＷ１２の本培養液を得た。 SW10 and SW12 strains used 1 × 10 9 / mL glycerol stock. In the test, 100 μL of glycerol stock was added to the liquid medium, and pre-culture was performed at 37 ° C. for 24 hours at 130 times per minute to obtain a preculture solution. Next, 2 mL of the preculture solution was added to 2,000 mL of the liquid medium, and main culture was performed at 37 ° C. for 24 hours, 130 times per minute to obtain a main culture solution of SW10 and SW12.
１．３ ＳＷ１０及びＳＷ１２株の菌の特徴付け
１６Ｓ リボソームＲＮＡ遺伝子の解析は、Ｗｅｉｓｂｕｒｇ ＷＧら、Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １７３：６９７（１９９１）に従って行い、配列データは国立遺伝学研究所の日本ＤＮＡデータバンク（ＤＤＢＪ）のデータベースを用いて近縁配列を検索し、アライメントをとって表示した。糖利用能力はアピ５０ＣＨ判定キット（日本ビオメリュー株式会社）で判定した。安全性試験は、ＳＷ１０又はＳＷ１２株のコンニャク溶液による培養液（菌数１ｘ１０９／ｍＬ）か、滅菌水かをそれぞれＪｃｌ：ＭＣＨ（ＩＣＲ）マウス（日本クレア株式会社）に連日０．１ｍＬずつ経口投与して、体重の変化を記録し、５７日後に屠殺解剖して内臓所見を得た。マウスはそれぞれ実験条件当たりオス３個体ずつ用いた。安全性試験は、実験開始時に１２週齢のマウスを使って１回、１９週齢のマウスを使ってもう１回行った。
1.3 Characterization of fungi of SW10 and SW12 strains Analysis of 16S ribosomal RNA gene was performed as described by Weisburg WG et al., J Bacteriol. 173: 697 (1991), and the sequence data were searched by using a database of the Japan DNA Data Bank (DDBJ) of the National Institute of Genetics and related sequences were displayed. The sugar utilization ability was determined with API 50CH determination kit (Nihon Biomeryu Co., Ltd.). In the safety test, the culture solution (
１．４ 結果
今回土壌から単離し、ＤＮＡ配列を決定したＳＷ１０及びＳＷ１２株の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子のヌクレオチド配列を配列表の配列番号１及び２にそれぞれ示す。ＳＷ１０及びＳＷ１２の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子のヌクレオチド配列と相同性の高い配列をＤＤＢＪのデータベースで検索したところ、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉがヒットした。ＤＤＢＪのＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ菌の１６ＳリボソームＲＮＡ遺伝子のヌクレオチド配列を配列番号３に示す。これらのヌクレオチド配列のアライメントをとった結果を図１に示す。ＳＷ１０株及びＳＷ１２株の１６Ｓ リボソームＲＮＡ遺伝子の間ではヌクレオチドが１個だけ相違した。ＳＷ１０株とＤＤＢＪのＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ菌の１６Ｓ リボソームＲＮＡ遺伝子との間ではヌクレオチドが５個相違し、ＳＷ１２株とＤＤＢＪのＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ菌の１６Ｓ リボソームＲＮＡ遺伝子との間ではヌクレオチドが４個相違していた。そこで、ＳＷ１０及びＳＷ１２株はＰａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉに属する新株と考えられる。
1.4 Results The nucleotide sequences of the 16S ribosomal RNA genes of the SW10 and SW12 strains isolated from the soil this time and determined for their DNA sequences are shown in SEQ ID NOs: 1 and 2, respectively. When a sequence having high homology with the nucleotide sequence of the 16S ribosomal RNA gene of SW10 and SW12 was searched in the database of DDBJ, Paenibacillus pabuli was hit. The nucleotide sequence of the 16S ribosomal RNA gene of DDBJ Paenibacillus pavuli is shown in SEQ ID NO: 3. The results of alignment of these nucleotide sequences are shown in FIG. There was only one nucleotide difference between the 16S ribosomal RNA genes of the SW10 and SW12 strains. There were 5 nucleotide differences between the SW10 strain and the 16S ribosomal RNA gene of DDBJ Paenibacillus pabuli, and there were 4 nucleotide differences between the SW12 strain and the 16S ribosomal RNA gene of DDBJ Paenibacillus pabuli. Therefore, the SW10 and SW12 strains are considered as new strains belonging to Paenibacillus pabuli.
ＳＷ１０及びＳＷ１２株の糖利用能力をアピ５０ＣＨ判定キット（日本ビオメリュー株式会社）で判定した結果を以下に示す。 The results of determining the sugar utilization ability of the SW10 and SW12 strains with the API 50CH determination kit (Nihon Biomelieu Co., Ltd.) are shown below.
ＳＷ１０株 糖類の利用（＋；利用する −；利用しない） ※ガス産生なし
グリセロール ＋、エリスリトール −、Ｄ−アラビノース −、Ｌ−アラビノース ＋、Ｄ−リボース ＋、Ｄ−キシロース ＋、Ｌ−キシロース −、Ｄ−アドニトール −、メチル−β−Ｄ−キシロピラノシド ＋、Ｄ−ガラクトース ＋、Ｄ−グルコース ＋、Ｄ−フルクトース ＋、Ｄ−マンノース ＋、Ｌ−ソルボース −、Ｌ−ラムノース ＋、ズルシトール ＋、イノシトール −、Ｄ−マンニトール ＋、Ｄ−ソルビトール ＋、メチル−α−Ｄ−マンノピラノシド −、メチル−α−Ｄ−グルコサミン ＋、Ｎ−アセチルグルコサミン ＋／−、アミグダリン ＋、アルブチン ＋、エスクリンクエン酸鉄 ＋、サリシン ＋、Ｄ−セリオビオース ＋、Ｄ−マルトース ＋、Ｄ−ラクトース ＋、Ｄ−メリビオース ＋、Ｄ−スクロース ＋、Ｄ−トレハロース ＋、イヌリン −、Ｄ−メレジトース −、Ｄ−ラフィノース ＋、スターチ ＋、グリコーゲン ＋、キシリトール −、ゲンチビオース ＋、Ｄ−ツラノース ＋／−、Ｄ−リキソース −、Ｄ−タガトース −、Ｄ−フコース −、Ｌ−フコース −、Ｄ−アラビトール −、Ｌ−アラビトール −、グルコネート −、２−ケトグルコネート −、５−ケトグルコネート −
ＳＷ１２株糖類の利用（＋；利用する −；利用しない）※ガス産生なし
グリセロール ＋、エリスリトール −、Ｄ−アラビノース −、Ｌ−アラビノース ＋、Ｄ−リボース ＋、Ｄ−キシロース ＋、Ｌ−キシロース −、Ｄ−アドニトール −、メチル−β−Ｄ−キシロピラノシド ＋／−、Ｄ−ガラクトース ＋、Ｄ−グルコース ＋、Ｄ−フルクトース ＋、Ｄ−マンノース ＋、Ｌ−ソルボース −、Ｌ−ラムノース ＋、ズルシトール ＋、イノシトール −、Ｄ−マンニトール ＋、Ｄ−ソルビトール ＋、メチル−α−Ｄ−マンノピラノシド −、メチル−α−Ｄ−グルコサミン ＋、Ｎ−アセチルグルコサミン ＋／−、アミグダリン ＋、アルブチン ＋、エスクリンクエン酸鉄 ＋、サリシン ＋、Ｄ−セリオビオース ＋、Ｄ−マルトース ＋、Ｄ−ラクトース ＋、Ｄ−メリビオース ＋、Ｄ−スクロース ＋、Ｄ−トレハロース ＋、イヌリン −、Ｄ−メレジトース −、Ｄ−ラフィノース ＋、スターチ ＋、グリコーゲン ＋、キシリトール −、ゲンチビオース ＋、Ｄ−ツラノース ＋／−、Ｄ−リキソース −、Ｄ−タガトース −、Ｄ−フコース −、Ｌ−フコース −、Ｄ−アラビトール −、Ｌ−アラビトール −、グルコネート −、２−ケトグルコネート −、５−ケトグルコネート −
ＳＷ１０及びＳＷ１２の糖利用能力の間ではメチル−β−Ｄ−キシロピラノシドの利用能のみが不一致であった。ＳＷ１０及びＳＷ１２株の糖利用能力は、Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ属の菌のうち、Ｐ．ａｌｖｅｉ、Ｐ．ｍａｃｅｒａｎｓ及びＰ．ｐｏｌｙｍｙｘａの糖利用能力とは不一致であった。なお、グラム染色を施して鏡検したところ、ＳＷ１０及びＳＷ１２株はともにグラム陽性の桿菌であった。
SW10 strain Use of saccharides (+; use-; do not use) * No gas production Glycerol +, erythritol-, D-arabinose-, L-arabinose +, D-ribose +, D-xylose +, L-xylose-, D-adonitol −, methyl-β-D-xylopyranoside +, D-galactose +, D-glucose +, D-fructose +, D-mannose +, L-sorbose −, L-rhamnose +, dulcitol +, inositol −, D-mannitol +, D-sorbitol +, methyl-α-D-mannopyranoside −, methyl-α-D-glucosamine +, N-acetylglucosamine +/−, amygdalin +, arbutin +, iron esculenoate +, salicin +, D-seriobiose +, D-maltose +, D-lacto S +, D-melibiose +, D-sucrose +, D-trehalose +, inulin-, D-melezitose-, D-raffinose +, starch +, glycogen +, xylitol-, gentibiose +, D-turanose +/-, D-lyxose, D-tagatose, D-fucose, L-fucose, D-arabitol, L-arabitol, gluconate, 2-ketogluconate, 5-ketogluconate
Use of SW12 strain saccharides (+; use-; do not use) * No gas production Glycerol +, erythritol-, D-arabinose-, L-arabinose +, D-ribose +, D-xylose +, L-xylose-, D-adonitol −, methyl-β-D-xylopyranoside +/−, D-galactose +, D-glucose +, D-fructose +, D-mannose +, L-sorbose −, L-rhamnose +, dulcitol +, inositol -, D-mannitol +, D-sorbitol +, methyl-α-D-mannopyranoside-, methyl-α-D-glucosamine +, N-acetylglucosamine +/-, amygdalin +, arbutin +, iron esculinate , Salicin +, D-seriobiose +, D-maltose +, D-lac S +, D-melibiose +, D-sucrose +, D-trehalose +, inulin-, D-melezitose-, D-raffinose +, starch +, glycogen +, xylitol-, gentibiose +, D-turanose +/- , D-lyxose, D-tagatose, D-fucose, L-fucose, D-arabitol, L-arabitol, gluconate, 2-ketogluconate, 5-ketogluconate
Only the availability of methyl-β-D-xylopyranoside was inconsistent between the sugar availability of SW10 and SW12. The sugar utilization capacity of the SW10 and SW12 strains is P. alvei, P.M. macerans and P.M. It was inconsistent with the sugar utilization ability of polymyxa. In addition, when the gram staining was performed and microscopically examined, both the SW10 and SW12 strains were Gram-positive rods.
ＳＷ１０及びＳＷ１２株と、滅菌水とをそれぞれ経口投与したマウスの体重の平均値の変化を図２に示す。ＳＷ１０及びＳＷ１２株と、滅菌水との間でマウスの体重変化に格別の相違は見られなかった。また、解剖所見からも、ＳＷ１０及びＳＷ１２株と、滅菌水とでは異常はみられなかった。したがって、ＳＷ１０及びＳＷ１２株はともにマウス経口投与での安全性が確認された。 FIG. 2 shows changes in the average value of the body weights of mice that were orally administered with the SW10 and SW12 strains and sterile water. There was no particular difference in the weight change of mice between the SW10 and SW12 strains and sterile water. Further, from the anatomical findings, no abnormality was observed between the SW10 and SW12 strains and the sterilized water. Therefore, both the SW10 and SW12 strains were confirmed to be safe after oral administration to mice.
２．コンニャク粉溶液の低粘性化処理
２．１ 方法
コンニャク粉の０．５％溶液２，０００ｍＬに対して、ＳＷ１０又はＳＷ１２の本培養液２ｍＬを混合した。インキュベーション開始時における菌数は１ｍＬ当たり１ｘ１０９個であった。前記混合液を３Ｌの三角フラスコに入れて、３７°Ｃ、２４時間、毎分１３０回の振盪をしながらインキュベーションした。インキュベーション開始後、４、８、１２、２４、３０、５２、６４、６８及び７２時間の前記混合液について、粘度測定を実施した。粘度測定は、絶対粘度の測定は回転円筒粘度計ビスコテスタＶＴ−０４（リオン株式会社）が、相対粘度の測定はオストワルド相対粘度計（柴田科学株式会社）がそれぞれ用いられた。
2. 2.1 Method of reducing viscosity of konjac flour solution 2.1 Method 2 mL of the main culture solution of SW10 or SW12 was mixed with 2,000 mL of 0.5% solution of konjac flour. The number of bacteria at the start of incubation was 1 × 10 9 per mL. The mixture was placed in a 3 L Erlenmeyer flask and incubated at 37 ° C. for 24 hours with 130 shakes per minute. Viscosity measurements were performed on the mixture for 4, 8, 12, 24, 30, 52, 64, 68 and 72 hours after the start of incubation. As for the viscosity measurement, a rotating cylinder viscometer Viscotester VT-04 (Rion Co., Ltd.) was used for measuring absolute viscosity, and an Ostwald relative viscometer (Shibata Kagaku Co., Ltd.) was used for measuring relative viscosity.
２．２ 結果
図３は、各インキュベーション時間におけるコンニャク粉溶液の粘度変化を示すグラフである。粘度は、インキュベーション開始直後には４７０ｍＰａ・ｓであったが、ＳＷ１０株については４時間、ＳＷ１２株では８時間で、ともに７０ｍＰａ・ｓ前後に急激に低下し、その後は３０時間で５０ｍＰａ・ｓ程度まで緩やかに低下した。その後、５２時間以降は約３ｍＰａ・ｓまで低下し、粘性はほぼ消失した。
2.2 Results FIG. 3 is a graph showing changes in viscosity of the konjac powder solution at each incubation time. The viscosity was 470 mPa · s immediately after the start of the incubation, but for the SW10 strain, it was 4 hours and for the
３．保湿性試験
３．１．方法
インキュベーション後の測定時間に１６、３０、３６及び４８時間を追加する以外は２．１に示したのと同じ方法で、ＳＷ１０菌体又はＳＷ１２菌体による低粘性化コンニャク粉溶液を調製した。保湿性試験は、室温２７°Ｃ、湿度７０％の条件で半そで服を着用した複数人の被験者を使用して実施した。被験者の左手前腕掌側の皮膚に半径７ｍｍの円でマーキングし、この円形の場所にそれぞれのインキュベーション時間の低粘性化コンニャク粉溶液１０μＬを滴下した。塗布前と、塗布後１０分、２０分又は３０分に、ＳＫＩＣＯＮ−２００ＥＸ（アイ・ビイ・エス株式会社）を用いて皮表角層の水分量を５回連続測定して、その平均値を塗布前及び塗布後各時点での皮表角層の水分量とした。塗布後の皮表角層の水分量を塗布前に皮膚の同じ場所で測定した皮表角層の水分量の測定値を１００とした相対値を保湿性の変化率とした。
3. Moisturizing test 3.1. Method A low-viscosity konjac powder solution with SW10 cells or SW12 cells was prepared in the same manner as described in 2.1 except that 16, 30, 36, and 48 hours were added to the measurement time after incubation. The moisture retention test was carried out using a plurality of subjects wearing half sleeves under the conditions of room temperature 27 ° C. and
３．２．結果
図４及び５は、それぞれＳＷ１０及びＳＷ１２株で低粘性化したコンニャク粉溶液のインキュベーション時間と保湿性変化率を示すグラフである。それぞれのインキュベーション時間及び塗布後の時間の条件ごとにＳＷ１０では複数人の被検者の皮膚合計８箇所、ＳＷ１２では合計５箇所の測定を行い、実験条件ごとの皮膚の保湿性の変化率の平均値を棒グラフで表した。図４及び５から、インキュベーション時間がＳＷ１０株については１２−２４時間、ＳＷ１２株については１６時間の低粘性化コンニャク粉溶液は保湿性の変化率は１００を超えており、保湿効果があった。
3.2. Results FIGS. 4 and 5 are graphs showing the incubation time and the moisture retention rate of the konjac flour solution that has been reduced in viscosity with the SW10 and SW12 strains, respectively. For each incubation time and time after application, SW10 measures a total of 8 skins of a plurality of subjects, and SW12 measures a total of 5 locations, and averages the rate of change of skin moisture retention for each experimental condition. The value was represented by a bar graph. 4 and 5, the low viscosity konjac powder solution having an incubation time of 12-24 hours for the SW10 strain and 16 hours for the SW12 strain had a moisturizing change rate of more than 100 and had a moisturizing effect.
Claims (1)
（１）グルコマンナンを含む原料と、該原料を低粘性化する微生物を含むグルコマンナン低粘性化剤とを用意するステップと、（２）前記原料と前記低粘性化剤とを添加及び混合した水溶液のインキュベーションを行なって皮膚の保湿性を生じさせるステップとを含み、
前記微生物は、受託番号ＮＩＴＥ Ｐ−２７２で表されるパエニバチルス・パブリ（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｂｕｌｉ）ＳＷ１０であり、
前記原料はコンニャク粉であり、
前記インキュベーションは、インキュベーション開始時における前記水溶液が０．５％（ｗ／ｖ）コンニャク粉水溶液で、前記微生物の個数が前記水溶液２Ｌ中に２×１０９個であり、インキュベーション温度が３７°Ｃであり、３Ｌの三角フラスコを毎分１３０回で振盪し、インキュベーション時間が、ＳＷ１０で１６ないし２４時間という条件で行なうことを特徴とする、皮膚で保湿効果を有する低粘性化グルコマンナン含有組成物の製造方法。 A method for producing a low-viscosity glucomannan-containing composition having a moisturizing effect on the skin,
(1) preparing a raw material containing glucomannan and a glucomannan thinning agent containing a microorganism that lowers the viscosity of the raw material; and (2) adding and mixing the raw material and the thinning agent. Incubating with an aqueous solution to produce skin moisture retention,
The microorganism is Paenibacillus pavuli SW10 represented by accession number NITE P-272,
The raw material is konjac powder,
In the incubation, the aqueous solution at the start of the incubation is a 0.5% (w / v) konjac flour aqueous solution, the number of the microorganisms is 2 × 10 9 in 2 L of the aqueous solution, and the incubation temperature is 37 ° C. Yes, a low-viscosity glucomannan-containing composition having a moisturizing effect on the skin, characterized in that a 3 L Erlenmeyer flask is shaken 130 times per minute and the incubation time is 16 to 24 hours with SW10. Production method.
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