JP4569299B2 - プトレスシン生産能を有する微生物及びそれを用いたプトレスシンの製造方法 - Google Patents
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Description
ファインケミカルマーケットデータ、第1巻、1999、株式会社シーエムシー ’The Acetylation of Polyamines in Escherichia coli’ DONALD T. DUBIN AND SANFORD M. ROSENTHAL The Jounal of Biological Chemistry Vol.235,No.3,March 1960 M.E.Arena, et al., Journal of Applied Microbiology 2001, 90(2), 158-162
(1)配列番号1に示す塩基配列と90%以上相同な16S rDNA配列を有し、かつ、プトレスシン生産能を有するエンテロバクター属に属する微生物。
(2)エンテロバクター属に属する微生物が、エンテロバクター・アズブリエ(Enterobacter asburiae) PAY 3057株(NITE P-52)である、(1)に記載の微生物。
(3)(1)又は(2)に記載の微生物を、プトレスシン生成のための基質と窒素源を添加した培地にて嫌気的条件下で培養し、培養物中からプトレスシンを採取することを特徴とする、プトレスシンの製造方法。
(4)プトレスシン生成のための基質が、アルギニンまたはオルニチンである、(3)に記載のプトレスシンの製造方法。
1.プトレスシン生産能を有する微生物
本発明の微生物は、配列番号1に示す塩基配列と90%以上相同な16S rDNA配列を有し、かつ、プトレスシン生産能を有する微生物である。
本発明の微生物は、プトレスシンの製造に使用することができる。上記1において得られた微生物菌株を、プトレスシン生成のための基質と窒素源を添加した培地にて嫌気的条件下で培養し、プトレスシンを生産することができる。プトレスシン生成のための基質としては、好適にはアルギニンであるが、オルニチンであってもよい。また、窒素源としては、特に限定はされないが、前記の窒素源のうち、酵母エキス、肉エキスなどの天然窒素源が好ましい。培養は、例えば、25〜35℃で12〜48時間程度行う。
(実施例1) プトレスシン高生産菌の単離と同定
(1) プトレスシン高生産菌の単離
日本各地で採集した土壌検体(400種)を下記表1に示す組成の液体培地に添加し、混合ガス(窒素:二酸化炭素:水素=8:8:1)下、30℃にて21日間培養した。その後、培養液を下記表2に示す条件にてガスクロマトグラフ質量分析計(GC/MS)で分析し、プトレスシン生産量を測定した。
PAY3057株の16S rDNA塩基配列による相同性検索を以下のようにして行った。ゲノムの抽出には、InstraGene Matrix(BIO RAD, CA, USA)を使用し、操作はBIO RAD社のプロトコールに従った。抽出したゲノムDNAを鋳型とし、プライマー9F(5’−gagtttgatcctggctcag−3’:配列番号2)及びプライマー1510R(5’−ggctaccttgttacga−3’:配列番号3)を用いて、PCR(Ready-To-Go PCR Beads:Amersham Pharmacia Biotech, NJ, USAを使用)により16S ribosomal RNA遺伝子(16S rDNA)の全塩基配列1500〜1600bpの領域を増幅した。その後、増幅された16S rDNAをシーケンシングし(ABI PRISM 3100 DNA Sequencer:Applied Biosystems, CA, USAを使用)、16S rDNAの塩基配列を決定した。決定した塩基配列を配列番号1に示す。
PAY 3057株を基質(アルギニン)を含む前記表1に示す組成の培地に接種し、混合ガス(窒素:二酸化炭素:水素=8:8:1)下、30℃にて約1週間培養した。
Claims (3)
- エンテロバクター・アズブリエ(Enterobacter asburiae)PAY 3057株(NITE P-52)。
- 請求項1に記載の微生物を、プトレスシン生成のための基質と窒素源を添加した培地にて嫌気的条件下で培養し、培養物中からプトレスシンを採取することを特徴とする、プトレスシンの製造方法。
- プトレスシン生成のための基質が、アルギニンまたはオルニチンである、請求項2に記載のプトレスシンの製造方法。
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