JP4528490B2 - Anti-anxiety agent containing ginkgolide-A - Google Patents

Description

【００１２】
で表されるギンコライド−Ａを有効成分として含有することを特徴とする抗不安剤（ギンコライド−Ａを含有するイチョウ葉抽出物そのものを有効成分として含有するものを除く。）を提供する。
【００１４】
【発明の実施の形態】
発明者らは、鋭意研究により、イチョウ葉エキス（Ginkgo-biloba Extract: GBE）に含まれるギンコライド-Ａ（GLD-A）に強い抗不安作用があり、かつベンゾジアゼピン系抗不安剤に見られる副作用がないことを見出し、本願発明に至ったものである。
【００１５】
イチョウ（Ginkgo biloba L.）は１科１属１種であり、近縁の植物がない。化石の研究からは、イチョウが約１億５千万年前の中生代ジュラ紀に繁茂し、当時は数種類存在したことが知られている。また、イチョウには種子であるギンナンや葉に特有の生理活性を示す各種の物質が含まれていることが古くから知られている。このような経緯から、イチョウは植物学、生物学、薬学等の様々な分野において注目されており、その研究が広く進められている。
【００１６】
イチョウ葉エキスは1960〜1970年代にフランス、ドイツで脳血管系や末梢循環系の医薬品として承認され、以来、作用発現因子に関して世界的に研究が進められている。その生理活性物質は、フラボノイド類とテルペノイド類であり、とくに後者（ギンコライド-Ａ、ギンコライド-Ｂ、ギンコライド-Ｃ、およびビロバライドの４種類）に関しては、その薬理効果が報告がされている（例えば、非特許文献２、３、４）。しかし、これまでに報告されているテルペノイド類の脳循環系、中枢系に対する作用効果は、血栓の原因となる血小板凝集の抑制作用によるものであり、イチョウ葉エキス中に抗不安剤として高い効果を示す成分が含まれることは知られていなかった。
【００１７】
この出願の発明の抗不安剤は、イチョウ葉エキスの成分の一つであり、次式（Ｉ）
【００１８】
【化３】

【００１９】
で表されるギンコライド-Ａ（GLD-A）を含有することを特徴とするものである。このとき、ギンコライド-Ａは、どのような方法で得られるものであってもよく、例えばイチョウ葉エキスから熱水抽出操作を行い、活性炭吸着物質を熱アセトンで溶出した後、エーテル抽出部分より結晶化して得られるもの（非特許文献５）をそのまま使用してもよいし、公知の方法（非特許文献６）等に基づき全合成されるもの、あるいは試薬として市販されているもの（例えば、和光純薬工業社、Sigma-Aldrich社；CAS No. 15291-75-5）を用いてもよい。中でもイチョウ葉エキスから前記の方法により抽出したものを直接使用するか、イチョウ葉エキスから分離精製されたもの（例えばSigma-Aldrich社製Ginkgolide A from Ginkgo leaves: G4028）を試薬として購入することが好ましい。ここで、イチョウ葉エキスとは、イチョウ葉抽出物を意味し、どのような方法により得られるものであってもよい。例えば、乾燥イチョウ葉を熱水やアルコール等の有機溶媒中で加熱および／または攪拌することにより得られるものが一般的である。
【００２０】
この出願の発明の抗不安剤は、少なくともギンコライド−Ａを有効成分とするものであればよく、その組成や形態はとくに限定されない。ギンコライド−Ａの作用を阻害しない限り、他の成分を含有していてもよい。また、このような抗不安剤は、どのような方法で投与されるものであってもよく、錠剤、粒・散剤、シロップ剤等の形態での経口投与、注射剤等の形態での非経口投与、座薬等の形態での直腸投与など患者の症状や状態に応じた投与方法を選択することができる。
【００２１】
抗不安剤を経口投与する場合には、錠剤、トローチ、カプセル、霊薬、粉末、顆粒、懸濁液、乳液、およびシロップ等の形態とすることができる。また、被覆粒子、多層錠剤あるいは微小顆粒等として、緩慢放出または遅延放出される形態としてもよい。これらの形態においては、抗不安剤は、ギンコライド-Ａとともに、薬学認容性の結合剤、甘味料、崩壊剤、希釈剤、人工香味料、被覆剤、保存剤、潤滑剤および／または効果遅延剤等を含有していてもよい。
【００２２】
結合剤としては、アラビアガム、ゼラチン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、またはポリエチレングリコールが好ましく例示される。また、甘味料としては、スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテームまたはサッカリンなどが例示される。さらに、崩壊剤としては、コーンスターチ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸あるいは寒天が好適に挙げられる。希釈剤としては、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、カオリン、セルロース、炭酸カルシウム、珪酸カルシウムまたはリン酸二カルシウムなどが例示される。また、人工香味料としては、ペパーミント油、ウィンターグリーン油、チェリー、オレンジまたはラズベリーの香料が、被覆剤としては、アクリル酸、メタクリル酸、およびそれらのコポリマーやエステルのポリマーまたはコポリマー、ワックス、脂肪アルコール、グルテン等が挙げられる。さらに、好適な保存剤としては、安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、α−トコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、または亜硫酸水素ナトリウムが、そして、潤滑剤としては、スレアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、タルクが、効果遅延剤としては、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルが挙げられる。
【００２３】
抗不安剤を経口投与する場合には、固体形態だけでなく、液体形態を有するものとしてもよい。このような液体形態は、上記の物質等に加えて液体キャリアを添加することにより得られる。好適な液体キャリアとしては、水、オリーブ油、ピーナツ油、ゴマ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、落花生油、ココナッツ油等の油、流動パラフィン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、グリセロール、脂肪アルコール、トリグリセリドまたはそれらの混合物等が挙げられる。また、このような液体形態としては、さらに分散剤および／または懸濁剤も含まれる。懸濁剤には、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウムまたはセチルアルコールが好ましく例示される。分散剤には、レシチン、例えばステアリン酸のような脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、ポリオキシエチレンソルビトールモノまたはジオレイン酸、ステアリン酸またはラウリン酸などが挙げられる。また、経口投与用の乳状液としては、さらに１つまたは複数の乳化剤を含んでいてもよい。好適な乳化剤には、上で例示されるような分散剤またはアラビアガムのような天然ガムが挙げられる。
【００２４】
非経口投与では、前記式（Ｉ）の化合物は、無菌の水溶液、または油性溶液、あるいは懸濁液中で調製してもよい。毒性を有さず、非経口的に認容される希釈剤や溶媒としては、水、リンガー溶液、生理食塩水、水と混合した１，３−ブタンジオール、エタノール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールが挙げられる。また、水溶液または懸濁液はさらに１種以上の緩衝剤を含んでいてもよい。さらに、緩衝剤としては、例えば酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウムまたは酒石酸ナトリウムを含有していてもよい。
【００２５】
この出願の発明の抗不安剤では、ギンコライド-Ａは、座薬等の形態で直腸投与されるものであってもよい。好適な座薬は、活性物質を常温では固体で直腸では融解する非刺激性の賦形剤と混合することによって調製してもよい。そのような物質で好適なものとしては、ココアバターやポリエチレングリコールが挙げられる。
【００２６】
この出願の発明の抗不安剤は、さらに、あまり一般的ではないものの、吸入スプレーや軟膏等の経皮投与用形態を有するものであってもよい。例えば、吸入スプレーは、前記のような溶液、懸濁液または乳状液とし、低毒性の吸入可能な噴霧剤を含んでもよい。好適な噴霧剤は二酸化炭素及び一酸化二窒素である。一方、経皮投与用としては、クリーム、軟膏、ジェル、ゼリー、チンキ、懸濁液または乳状液の形態が好ましく挙げられる。これらは、前記のような薬学認容性の結合剤、希釈剤、崩壊剤、保存剤、潤滑剤、分散剤、懸濁剤および／または乳化剤を含有してもよいものである。
【００２７】
この出願の発明の抗不安剤は、一般的に知られる各種の方法によって製造されてもよい。例えば、ギンコライド-Ａを１種以上の好適なキャリア、補助剤、希釈剤または賦形剤と共にすりつぶす、粉砕する、ブレンドする、分散する、溶解する、懸濁する、混合する、混和する、組合せる、乳化する、またはホモジネートすることによって調製される。またこれらのステップを１以上組合せて製造されるものであってもよい。
【００２８】
この出願の発明の抗不安剤において、有効成分の含有量はとくに限定されない。例えば、ギンコライドＡ濃度が1〜10 mg/人となるように配合することができる。もちろん、患者への投与量は、患者の年齢、性別、体重などを考慮して主治医の診断により患者の症状、状態に応じて決定されるべきものである。好ましくは、患者の体重に応じて0.02〜0.2 mg/kgの範囲で投与することが望ましい。
【００２９】
後述の実施例からも明らかなように、ギンコライド-Ａに抗不安様作用があること、および情動運動への影響がないことが発明者らにより行動薬理学的に実証されており、この出願の発明の抗不安剤は、不安症、ストレスおよびそれに関連した身体的精神的状態に対して有効なものである。
【００３０】
以下、実施例を示してこの出願の発明についてさらに詳細に説明する。もちろん、この出願の発明は、以下の実施例に限定されるものではないことはいうまでもない。
【００３１】
【実施例】
＜実施例１＞ イチョウ葉エキスおよびギンコライド-Ａの抗不安作用
（１）試薬
イチョウ葉エキス（以下ＧＢＥ）、ギンコライド-Ａ、ギンコライド-Ｂ、ギンコライド-Ｃ、およびビロバライドは、株式会社常盤植物化学研究所（千葉）より購入した。
【００３２】
ジアゼパムはセルシン注射液を武田薬品工業（大阪）より入手し、用いた。
【００３３】
フルマゼニルは、Hoffmann-LaRoche（Nutley, N.J.）より入手した。
（２）投与方法
ddY系７週齢マウス（オス）に表１に示した投与量で各物質を経口投与した。
（３）試験方法
改良型高架式十字迷路装置（側壁だけで囲ったクローズドアームと、平板だけのオープンアームを十字に交差させ、40 cmの高さに台座で固定したもの。十字路の中心にマウスを置くと、オープンアーム側には不安があり、板上になかなか出ない。抗不安剤を投与することにより、不安がとれ、オープンアーム側にも移動するようになる。オープンアームでの滞留時間を調べることにより抗不安剤の効果の程度が判定できる。）によりギンコライド-Ａの効果を判定した。
【００３４】
また、抗不安剤効果測定後、直ちに、直径20 cmのアクリル樹脂製測定ケージを有する群馬大学式アンビュロメーター（AMB-10；小原医科産業、東京）（マウスの水平方向の運動（移所運動）のみによって生じる測定ケージのわずかな振動をマイクロスイッチを介して記録するもの）により自発運動量を測定した。
【００３５】
対照として、同様の方法によりベンゾジアゼピン系抗不安剤のジアゼパム、ギンコライド-Ｂ、ギンコライド-Ｃおよびビロバライドの抗不安効果を判定した。
【００３６】
結果を表１に示した。
【００３７】
【表１】

【００３８】
表１より、ＧＢＥ（１３０ ｍｇ／ｋｇ）を７日間経口投与することにより、市販のジアゼパム（１ ｍｇ／ｋｇ）の約６０％の抗不安様作用が見られることが確認された。また、ＧＢＥ中のテルペノイド類の中ではギンコライド−Ａが顕著な抗不安作用を示し、その効果がジアゼパムと同程度であることが確認された。なお、これらが情動運動への影響によるものでないことも合わせて確認された。
＜参考試験例＞ 併用投与試験
実施例１と同様の方法により、ＧＢＥとジアゼパム、ＧＢＥとベンゾジアゼピン受容体拮抗剤のフルマゼニルをそれぞれ併用して投与し、抗不安作用を判定した。さらに、ジアゼパムを投与した後フルマゼニルを投与し、抗不安作用を判定した。
【００３９】
各薬剤の投与量および方法と投与試験の結果（抗不安作用）を表２に示した。
【００４０】
【表２】

【００４１】
表２より、ジアゼパムの効果はその拮抗薬であるフルマゼニルにより減少するものの、ＧＢＥの効果はフルマゼニルにより変化しないことが確認された。また、ＧＢＥとジアゼパムを併用したところ、抗不安作用が２倍以上となることも確認された。
＜実施例２＞ ペントバルビタール誘発睡眠実験
睡眠薬であるペントバルビタールが誘発する睡眠時間に対するＧＢＥおよびギンコライド−Ａの抑制作用を調べた。まず、各群１０匹のマウスに、ＧＢＥ（０〜１ ｇ／ｋｇ；３０分前投与）（ただし、０＝溶媒のみ）またはギンコライド−Ａ（０〜２０ ｍｇ／ｋｇ；３０分前投与）（ただし、０＝溶媒のみ）を経口投与し、続いてペントバルビタールＮａ（５０ ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。また、対照として、ベンゾジアゼピン系中枢抑制剤のジアゼパム（０および１ ｍｇ／ｋｇ；１０分前投与）（ただし、０＝溶媒のみ）を経口投与した。
【００４２】
マウスの正向反射の消失から回復までの時間を睡眠時間として記録した。
【００４３】
結果を表３に示した。
【００４４】
【表３】

【００４５】
ジアゼパムは、高架式十字迷路実験で抗不安作用を発揮する用量（１ ｍｇ／ｋｇ）でペントバルビタールＮａ誘発睡眠を強く増強した。これより、常用量のジアゼパムが強い中枢抑制作用を示し、それに起因する副作用が出現しやすいことが示された。また、１ ｇ／ｋｇのＧＢＥもペントバルビタール誘発睡眠を有意に延長させることが確認された。一方、ギンコライド−Ａは、２０ ｍｇ／ｋｇにおいてもペントバルビタール誘発睡眠に影響を及ぼさなかった。
＜実施例３＞ シャトル型非連続回避試験
マウスは、ブザー警告音の後に床を電気刺激されると、これを回避して通常の床へ移動する。このような実験装置への回避率の高い動物を訓練して放置し、警告−回避の往復（シャトル）データから、ＧＢＥおよびギンコライド−Ａの効果を試験した。（ただし、実験条件の規律性が動物側に伝達されない仕組み（非連続的）とした）。
【００４６】
シャトル実験箱（30 L X 9 W X 15 H cm）、行動制御装置、および記録装置（GT-8450, De CARES GT-M5およびTIDP-10；小原医科産業、東京）を用いて、これらの装置１セットにつき同時に５匹のマウスの回避反応を制御・記録した。
【００４７】
回避試行は、試行間隔24秒、警告刺激（800 Hz音）の提示時間5秒、電撃（100 V, 0.3 mA, 50 Hz AC）の提示時間1秒からなり、１セッションを60分として120試行が実施された。回避反応の指標は、セッション内のシャトル数およびショック被爆数とした。
【００４８】
さらに、ＧＢＥおよびギンコライド-Ａの効果は、十分な試練により安定したシャトル数（150-250回／時間）および低レベルのショック被爆数（常に10回／120試行以下）を示すようになったマウスを用い、３〜４日間隔で試験した。なお、薬物投与前日の回避行動が不安定な場合には、予定された薬物投与は３日以上延期した。
（１）単回投与：ＧＢＥ（0〜2 g/kg）（ただし、0＝溶媒のみ）、ギンコライド-Ａ（0、1および5 mg/kg）（ただし、0＝溶媒のみ）を回避実験の30分前に経口投与した。
【００４９】
結果を表４に示した。
【００５０】
【表４】

【００５１】
ＧＢＥは1および2 g/kgにおいて回避反応を抑制し、シャトル数の減少あるいはショック被爆数の増加を引き起こした。一方、ギンコライド-Ａは5 mg/kgの投与量でも回避反応に影響しなかった。
（２）併用投与：併用薬として中枢興奮薬のカフェイン、抑制薬としてジアゼパムをそれぞれ用いた。すなわち、ＧＢＥ（1 g/kg）＋カフェイン（10 mg/kg）、ＧＢＥ（1 g/kg）＋ジアゼパム（1 mg/kg）、ギンコライド-Ａ（1 mg/kg）＋カフェイン（10 mg/kg）およびギンコライド-Ａ（1 mg/kg）＋ジアゼパム（12 mg/kg）の併用効果をそれぞれ検討した。
【００５２】
対照として、カフェインおよびジアゼパムの単独投与の効果も試験した。ＧＢＥおよびギンコライド-Ａは回避実験の30分前に、カフェインおよびジアゼパムは回避実験開始の直前に経口投与した。
【００５３】
結果を表５に示した。
【００５４】
【表５】

【００５５】
ＧＢＥ（1 g/kg）はカフェインによる回避反応の促進、すなわちシャトル数の増加をほぼ完全に阻止した。しかし、ＧＢＥの回避反応抑制効果は、ジアゼパムを併用しても変化しなかった。一方、ギンコライド-Ａ（1 mg/kg）をカフェインおよびジアゼパムと各々併用投与したところ、いずれの場合にも相互作用は認められなかった。
【００５６】
さらに、肉眼的観察から、ＧＢＥ（0.5〜2 g/kg）を投与したマウスでは、1〜3時間に渡って軽度の鎮静状態が見られたが、ギンコライド-Ａでは、20 mg/kgを投与してもマウスに鎮静状態、興奮状態のいずれも観察されなかった。また、ジアゼパム（1 mg/kg）は、軽度の筋弛緩および運動失調を引き起こした。
【００５７】
マウスの体重増加は、ＧＢＥおよびギンコライド-Ａの７日間反復投与中、投与終了後とも溶媒のみを投与した対照群と同等であり、差異は見られなかった。
【００５８】
以上より、ＧＢＥは、ペントバルビタール誘発睡眠を延長し、シャトル型回避反応を抑制し、カフェインの回避反応促進作用を阻止することが確認された。このような結果から、ＧＢＥ中にはジアゼパムとは異なる中枢抑制作用を有する物質が含まれていることが示唆された。
【００５９】
一方、副作用については、ＧＢＥがペントバルビタール誘発睡眠や回避反応に影響を及ぼす有効用量が抗不安作用発現の４倍量以上であることが確認された。これより、ＧＢＥを抗不安剤として使用した場合には、ジアゼパムより副作用が起こりにくいことが示唆された。
【００６０】
さらに、ギンコライド-Ａは、抗不安作用を発現する有効量の20倍および5倍用量でも、それぞれペントバルビタール誘発睡眠および回避反応に影響を及ぼさず、抗不安作用発現の有効量においてカフェインおよびジアゼパムとの相互作用も示さなかった。
【００６１】
したがって、ギンコライド-Ａは、ベンゾジアゼピン系抗不安剤で発現しやすい過鎮静、筋弛緩、運動失調、中枢抑制剤の作用増強等の副作用がなく、選択的に抗不安作用を発揮できる薬剤として期待される。
【００６２】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この出願の発明により、非ベンゾジアゼピン系の抗不安剤が提供される。この抗不安剤は、従来使用されているベンゾジアゼピン系抗不安剤と同程度の抗不安作用を示すと同時に、情動運動への影響を示さないことから、従来用いられているベンゾジアゼピン系、あるいはバルビツール酸系薬剤に見られる筋弛緩、眠気、依存症などの副作用のない抗不安剤として有用性が高い。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The invention of this application relates to an anxiolytic agent characterized by containing ginkgolide-A. More specifically, the invention of this application relates to an anxiolytic agent with low side effects, characterized by containing ginkgolide-A, which is an active ingredient in ginkgo biloba extract.
[0002]
[Prior art and its problems]
The present age is said to be an overstressed era, and “stress” itself is also considered a modern disease. The number of people who suffer from various mental and physical symptoms caused by stress is increasing year by year.
[0003]
Central medicines such as antidepressants and anxiolytics are generally prescribed in internal medicine, psychosomatic medicine, and psychiatry for anxiety caused by stress and physical symptoms such as headache, stomach pain, and palpitation. ing. Various such central inhibitors are commercially available, but many are benzodiazepines such as diazepam, oxazepam, clothiazepam, alprazolam, bromazepam, ethyl loflazepate, and barbiturates such as pentobarbital salts. (For example, Non-Patent Document 1).
[0004]
The central inhibitory action of benzodiazepine drugs is due to the suppression of intracellular transmission mechanisms by GABA receptors distributed over a wide area in the brain, and anxiolytic action is one of the intensive effects of such various inhibitory actions. It is. For this reason, these benzodiazepine drugs have the problem that side effects such as muscle relaxation, prolonged sleep time, dependence, and memory impairment occur frequently along with their effects.
[0005]
In addition, barbituric acid drugs bind to the pyrotoxin binding site of GABAa receptor and cause inhibitory nerve function enhancement and excitatory synaptic transmission inhibition, as well as sedation, anxiolytic action, weakness, vomiting, coma There were problems that side effects such as respiratory depression, blood pressure and body temperature decrease, and dependency occurred.
[0006]
In addition, non-benzodiazepines such as buspirone, hydroxyzine, zolpidem, etc. are provided, but these non-benzodiazepines also have the same effect / side effect balance. It is a fact.
[0007]
Therefore, development of a drug that selectively acts on central suppression of anxiety emotion has been desired.
[0008]
[Non-Patent Document 1]
“Drug Guide”, [online], [Search January 6, 2003], Internet <URL: http://www.nihs.go.jp/tipdb/YAKUKOU.php3?!key=112>
[Non-Patent Document 2]
Defeudis FV (ed), Ginkgo Biloba Extract (EGb 761). Pharmacological activities and clinical applications., Elsevier, Paris, (1991)
[Non-Patent Document 3]
Schneider B, Ginkgo biloba extract in peripheral arterial diseases.Meta-analysis of controlled clinical studies., Arzneim. Forsh. 42: 428-436, (1992)
[Non-Patent Document 4]
Corrigan D: Fossil, Medicine-Ginkgo biloba., Eur.J.Herb.Med., 1: 16-18, (1995)
[Non-Patent Document 5]
K. Okabe, K. Yamada, S. Yamamura, and S. Takada, J. Chemical Society, 2201-2206, (1967)
[Non-Patent Document 6]
EJCorey and Arun K. Ghosh, Total synthesis of ginkgolide A., Tetrahedron Letters, Vol. 29, No. 26, 3205-3206, (1988)
Accordingly, an object of the invention of this application is to solve the problems as described above, and to provide an anti-anxiety agent having a high effect in suppressing anxiety and having no adverse effect on spontaneous exercise.
[0009]
[Means for Solving the Problems]
In order to solve the above-described problems, the invention of this application firstly includes an anxiolytic agent (ginkgo biloba containing ginkgolide-A ) characterized by first containing at least ginkgolide-A as an active ingredient. Except those containing the leaf extract itself as an active ingredient) .
[0010]
In addition, the invention of this application, secondly, the following formula (I)
[0011]
[Chemical 2]

[0012]
An anxiolytic agent characterized by containing ginkgolide-A represented by the formula (excluding those containing ginkgolide-A-containing ginkgo biloba extract itself as an active ingredient) .
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The inventors of the present invention have found that Ginkgolide-A (GLD-A) contained in Ginkgo-biloba Extract (GBE) has a strong anxiolytic action and has side effects seen in benzodiazepine anxiolytic agents. It has been found that there is no such thing, and the present invention has been achieved.
[0015]
Ginkgo biloba L. is one species per genus and no related plants. From fossil research, it is known that ginkgo thrives in the Mesozoic Jurassic about 150 million years ago, and there were several types at that time. In addition, it has long been known that ginkgo biloba contains various substances exhibiting physiological activities peculiar to ginnan and leaves. For these reasons, ginkgo has attracted attention in various fields such as botany, biology, pharmacy, etc., and its research has been widely promoted.
[0016]
Ginkgo biloba extract was approved as a medicine for the cerebrovascular system and peripheral circulatory system in France and Germany in the 1960s and 1970s. The physiologically active substances are flavonoids and terpenoids, and the pharmacological effects of the latter (four kinds of ginkgolide-A, ginkgolide-B, ginkgolide-C, and bilobalide) have been reported (for example, Non-patent documents 2, 3, 4). However, the effects of terpenoids reported so far on the cerebral circulatory system and the central system are due to the inhibitory action of platelet aggregation that causes thrombus, and it is highly effective as an anxiolytic agent in ginkgo biloba extract. It was not known that the indicated ingredients were included.
[0017]
The anxiolytic agent of the invention of this application is one of the components of ginkgo biloba extract, and has the following formula (I)
[0018]
[Chemical 3]

[0019]
It contains ginkgolide-A (GLD-A) represented by the following. At this time, ginkgolide-A may be obtained by any method. For example, after performing hot water extraction operation from ginkgo biloba extract and eluting the activated carbon adsorbent with hot acetone, crystals are extracted from the ether extraction part. (Non-patent Document 5) obtained by conversion may be used as it is, or it may be totally synthesized based on a known method (Non-patent Document 6) or the like, or commercially available as a reagent (for example, Japanese Mitsui Chemicals, Sigma-Aldrich; CAS No. 15291-75-5) may be used. Among them, it is preferable to directly use the one extracted from the ginkgo biloba extract by the above-mentioned method or to purchase the one isolated from the ginkgo biloba extract (for example, Ginkgolide A from Ginkgo leaves: G4028 manufactured by Sigma-Aldrich) as a reagent. . Here, the ginkgo leaf extract means a ginkgo biloba extract and may be obtained by any method. For example, what is obtained by heating and / or stirring dried ginkgo leaves in an organic solvent such as hot water or alcohol is generally used.
[0020]
The anxiolytic agent of the invention of this application is not particularly limited as long as it contains at least ginkgolide-A as an active ingredient. Other components may be contained as long as the action of ginkgolide-A is not inhibited . Parenteral of such anti-anxiety agent may be one that is administered in any manner, tablets, granules, powders, oral administration in the form of such syrups, the form of such injection Administration methods can be selected depending on the patient's symptoms and conditions such as administration, rectal administration in the form of suppositories, and the like.
[0021]
When an anxiolytic is orally administered, it can be in the form of tablets, troches, capsules, spirits, powders, granules, suspensions, emulsions, syrups and the like. Moreover, it is good also as a form with slow release or delayed release as a coated particle, a multilayer tablet, or a micro granule. In these forms, the anxiolytic agent, along with ginkgolide-A, is a pharmaceutically acceptable binder, sweetener, disintegrant, diluent, artificial flavor, coating agent, preservative, lubricant and / or effect-retarding agent. Etc. may be contained.
[0022]
Preferred examples of the binder include gum arabic, gelatin, corn starch, sodium alginate, carboxymethyl cellulose, and polyethylene glycol. Examples of sweeteners include sucrose, lactose, glucose, aspartame or saccharin. Furthermore, preferable examples of the disintegrant include corn starch, methyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone, xanthan gum, bentonite, alginic acid, and agar. Examples of the diluent include lactose, sorbitol, mannitol, dextrose, kaolin, cellulose, calcium carbonate, calcium silicate, dicalcium phosphate and the like. Artificial flavors include peppermint oil, winter green oil, cherry, orange or raspberry flavors, and coating agents include acrylic acid, methacrylic acid, and copolymers or copolymers of these esters, waxes, fatty alcohols. , Gluten and the like. In addition, preferred preservatives include sodium benzoate, vitamin E, α-tocopherol, ascorbic acid, methyl paraben, propyl paraben, or sodium hydrogen sulfite, and lubricants include magnesium threaphosphate, stearic acid, oleic acid. Sodium, sodium chloride, and talc are effective delaying agents such as glyceryl monostearate or glyceryl distearate.
[0023]
When an anxiolytic agent is administered orally, it may have a liquid form as well as a solid form. Such a liquid form can be obtained by adding a liquid carrier in addition to the above substances. Suitable liquid carriers include water, olive oil, peanut oil, sesame oil, sunflower oil, safflower oil, peanut oil, coconut oil, etc., liquid paraffin, ethylene glycol, propylene glycol, polyethylene glycol, ethanol, propanol, isopropanol, glycerol , Fatty alcohol, triglyceride or a mixture thereof. Such liquid forms further include dispersants and / or suspending agents. Preferred examples of the suspending agent include sodium carboxymethylcellulose, methylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, sodium alginate or cetyl alcohol. Dispersants include lecithins such as polyoxyethylene esters of fatty acids such as stearic acid, polyoxyethylene sorbitol mono- or dioleic acid, stearic acid or lauric acid. Further, the emulsion for oral administration may further contain one or more emulsifiers. Suitable emulsifiers include dispersants as exemplified above or natural gums such as gum arabic.
[0024]
For parenteral administration, the compound of formula (I) may be prepared in a sterile aqueous or oily solution or suspension. Non-toxic and parenterally acceptable diluents and solvents include water, Ringer's solution, physiological saline, 1,3-butanediol mixed with water, ethanol, propylene glycol or polyethylene glycol. . The aqueous solution or suspension may further contain one or more buffering agents. Furthermore, the buffer may contain, for example, sodium acetate, sodium citrate, sodium borate or sodium tartrate.
[0025]
In the anxiolytic agent of the invention of this application, ginkgolide-A may be administered rectally in the form of a suppository or the like. Suitable suppositories may be prepared by mixing the active substance with a non-irritating excipient that is solid at ordinary temperatures and melts in the rectum. Suitable examples of such substances include cocoa butter and polyethylene glycol.
[0026]
The anxiolytic agent of the invention of this application may further have a form for transdermal administration such as inhalation spray and ointment, although it is not so common. For example, the inhalation spray may be a solution, suspension or emulsion as described above and may contain a low toxicity inhalable spray. Suitable propellants are carbon dioxide and nitrous oxide. On the other hand, for transdermal administration, the form of cream, ointment, gel, jelly, tincture, suspension or milky liquid is preferably mentioned. These may contain pharmaceutically acceptable binders, diluents, disintegrants, preservatives, lubricants, dispersants, suspending agents and / or emulsifiers as described above.
[0027]
The anxiolytic agent of the invention of this application may be produced by various generally known methods. For example, ginkgolide-A is ground, ground, blended, dispersed, dissolved, suspended, mixed, blended, combined with one or more suitable carriers, adjuvants, diluents or excipients Prepared by emulsifying, homogenizing. Moreover, it may be manufactured by combining one or more of these steps.
[0028]
In the anxiolytic agent of the invention of this application, the content of the active ingredient is not particularly limited. For example, it can mix | blend so that a ginkgolide A density | concentration may be 1-10 mg / person. Of course, the dose to the patient should be determined according to the patient's symptom and condition in accordance with the diagnosis of the attending physician in consideration of the patient's age, sex, weight and the like. Preferably, it is desirable to administer in the range of 0.02 to 0.2 mg / kg depending on the weight of the patient.
[0029]
As apparent from the examples described later, the inventors have demonstrated behavioral pharmacologically that ginkgolide-A has an anxiolytic-like action and has no effect on emotional movement. The anti-anxiety agents of the invention are effective against anxiety, stress and related physical and mental conditions.
[0030]
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. Of course, it goes without saying that the invention of this application is not limited to the following examples.
[0031]
【Example】
<Example 1> Anti-anxiety action of Ginkgo biloba extract and Ginkgolide-A (1) Reagent Ginkgo biloba leaf extract (hereinafter referred to as GBE), Ginkgolide-A, Ginkgolide-B, Ginkgolide-C, and Bilovalide are Tokiwa phytochemical research Purchased from Tokoro (Chiba).
[0032]
Diazepam obtained and used Celsin injection solution from Takeda Pharmaceutical Company (Osaka).
[0033]
Flumazenil was obtained from Hoffmann-LaRoche (Nutley, NJ).
(2) Administration method
Each substance was orally administered to ddY 7-week-old mice (male) at the doses shown in Table 1.
(3) Test method Improved elevated cross maze device (a closed arm surrounded only by side walls and an open arm consisting only of flat plates intersected with a cross and fixed with a pedestal at a height of 40 cm. Mouse at the center of the cross If you put the, there is anxiety on the side of the open arm and it does not come out easily on the board.By administering an anti-anxiety agent, you will be anxious and move to the side of the open arm. The degree of the effect of the anxiolytic agent can be determined by examining the effect of Ginkgolide-A.
[0034]
Immediately after measuring the anxiolytic effect, Gunma University Ambulometer (AMB-10; Ohara Medical Sangyo, Tokyo) with an acrylic resin measuring cage with a diameter of 20 cm (Mouse horizontal movement (transition) Spontaneous momentum was measured by recording a slight vibration of the measurement cage caused only by movement) through a microswitch.
[0035]
As a control, the anxiolytic effects of diazepam, ginkgolide-B, ginkgolide-C and bilobalide, which are benzodiazepine anxiolytic agents, were determined by the same method.
[0036]
The results are shown in Table 1.
[0037]
[Table 1]

[0038]
From Table 1, it was confirmed that an anxiolytic-like action of about 60% of commercially available diazepam (1 mg / kg) was observed by oral administration of GBE (130 mg / kg) for 7 days. Further, among the terpenoids in GBE, ginkgolide-A showed a remarkable anxiolytic action, and it was confirmed that the effect was comparable to that of diazepam. It was also confirmed that these were not due to affect on emotional movement.
<Reference Test Example> Combined Administration Test In the same manner as in Example 1, GBE and diazepam, GBE and benzodiazepine receptor antagonist flumazenil were administered in combination, and the anxiolytic effect was determined. Furthermore, after administering diazepam, flumazenil was administered to determine the anxiolytic effect.
[0039]
Table 2 shows the dosage and method of each drug and the results of the administration test (anti-anxiety action).
[0040]
[Table 2]

[0041]
From Table 2, it was confirmed that although the effect of diazepam was reduced by its antagonist, flumazenil, the effect of GBE was not changed by flumazenil. In addition, when GBE and diazepam were used in combination, it was also confirmed that the anxiolytic effect was more than doubled.
<Example 2> Pentobarbital-induced sleep experiment The inhibitory action of GBE and ginkgolide-A on the sleep time induced by pentobarbital, a sleeping pill, was examined. First, 10 mice in each group were given GBE (0 to 1 g / kg; 30 minutes before administration) (where 0 = solvent only) or ginkgolide-A (0 to 20 mg / kg; 30 minutes before administration) ( However, 0 = solvent only) was orally administered, followed by intraperitoneal administration of pentobarbital Na (50 mg / kg). As a control, diazepam (0 and 1 mg / kg; 10 minutes before administration) (however, 0 = solvent only) was orally administered as a benzodiazepine central inhibitor.
[0042]
The time from disappearance of the right reflex of the mouse to recovery was recorded as sleep time.
[0043]
The results are shown in Table 3.
[0044]
[Table 3]

[0045]
Diazepam strongly enhanced pentobarbital Na-induced sleep at a dose (1 mg / kg) that exerts an anxiolytic effect in an elevated plus-maze experiment. From this, it was shown that a normal dose of diazepam showed a strong central inhibitory action and side effects caused by it were likely to appear. It was also confirmed that 1 g / kg GBE significantly prolonged pentobarbital-induced sleep. On the other hand, ginkgolide-A did not affect pentobarbital-induced sleep even at 20 mg / kg.
<Example 3> Shuttle type non-continuous avoidance test When the floor is electrically stimulated after a buzzer warning sound, the mouse moves to a normal floor avoiding this. Animals with a high avoidance rate to such experimental devices were trained and left to test the effects of GBE and Ginkgolide-A from warning-avoidance shuttle data. (However, the mechanism is such that the discipline of the experimental conditions is not transmitted to the animal side (discontinuous)).
[0046]
One set of these devices using a shuttle experiment box (30 LX 9 WX 15 H cm), a behavior control device, and a recording device (GT-8450, De CARES GT-M5 and TIDP-10; Ohara Medical Industry, Tokyo) At the same time, the avoidance response of 5 mice was controlled and recorded.
[0047]
The avoidance trial consists of a trial interval of 24 seconds, a warning stimulus (800 Hz sound) presentation time of 5 seconds, and an electric shock (100 V, 0.3 mA, 50 Hz AC) presentation time of 1 second. Was implemented. The index of avoidance reaction was the number of shuttles and shock exposure in the session.
[0048]
In addition, the effects of GBE and Ginkgolide-A have been shown to show stable shuttle numbers (150-250 times / hour) and low levels of shock exposure (always 10 times / 120 trials or less) with sufficient trials. And tested at 3-4 day intervals. If the avoidance behavior on the day before drug administration was unstable, the scheduled drug administration was postponed for 3 days or more.
(1) Single administration: avoiding GBE (0-2 g / kg) (0 = solvent only), ginkgolide-A (0, 1 and 5 mg / kg) (however, 0 = solvent only) Orally administered 30 minutes before.
[0049]
The results are shown in Table 4.
[0050]
[Table 4]

[0051]
GBE suppressed the avoidance response at 1 and 2 g / kg, causing a decrease in the number of shuttles or an increase in the number of shock exposures. On the other hand, ginkgolide-A did not affect the avoidance reaction even at a dose of 5 mg / kg.
(2) Concomitant administration: Caffeine as a central stimulant was used as a concomitant drug, and diazepam was used as an inhibitor. That is, GBE (1 g / kg) + caffeine (10 mg / kg), GBE (1 g / kg) + diazepam (1 mg / kg), ginkgolide-A (1 mg / kg) + caffeine (10 mg / kg) and ginkgolide-A (1 mg / kg) + diazepam (12 mg / kg) were examined.
[0052]
As a control, the effect of caffeine and diazepam alone was also tested. GBE and ginkgolide-A were orally administered 30 minutes before the avoidance experiment, and caffeine and diazepam were administered orally immediately before the start of the avoidance experiment.
[0053]
The results are shown in Table 5.
[0054]
[Table 5]

[0055]
GBE (1 g / kg) almost completely prevented the promotion of the avoidance reaction by caffeine, that is, the increase in the number of shuttles. However, the avoidance reaction inhibitory effect of GBE did not change even when diazepam was used in combination. On the other hand, when ginkgolide-A (1 mg / kg) was administered in combination with caffeine and diazepam, no interaction was observed in either case.
[0056]
Furthermore, from a macroscopic observation, mice administered with GBE (0.5-2 g / kg) showed mild sedation over 1-3 hours, whereas ginkgolide-A administered 20 mg / kg. However, neither sedation nor excitement was observed in the mice. Diazepam (1 mg / kg) also caused mild muscle relaxation and ataxia.
[0057]
The weight gain of the mice was equivalent to the control group to which only the solvent was administered during the repeated administration of GBE and ginkgolide-A for 7 days, and no difference was observed.
[0058]
From the above, it was confirmed that GBE prolongs pentobarbital-induced sleep, suppresses the shuttle-type avoidance reaction, and prevents caffeine's avoidance reaction promoting action. From these results, it was suggested that GBE contains a substance having a central inhibitory action different from that of diazepam.
[0059]
On the other hand, with regard to side effects, it was confirmed that the effective dose that GBE affects pentobarbital-induced sleep and avoidance responses is four times or more the amount of anxiolytic action. This suggests that when GBE is used as an anti-anxiety agent, side effects are less likely to occur than diazepam.
[0060]
Furthermore, ginkgolide-A does not affect pentobarbital-induced sleep and avoidance responses at doses 20 and 5 times the effective doses that exert an anxiolytic effect, respectively, and caffeine and diazepam in an effective dose of anxiolytic effects. There was also no interaction.
[0061]
Therefore, ginkgolide-A is expected as a drug that can selectively exert an anxiolytic action without side effects such as oversedation, muscle relaxation, ataxia, and central inhibitory action that are likely to occur with benzodiazepine anxiolytic agents. The
[0062]
【The invention's effect】
As explained in detail above, the invention of this application provides a non-benzodiazepine anxiolytic agent. This anxiolytic agent exhibits an anxiolytic effect comparable to that of a conventional benzodiazepine anxiolytic agent, and at the same time does not affect emotional movement. Therefore, a conventional benzodiazepine or barbitur tool is used. It is highly useful as an anxiolytic agent without the side effects such as muscle relaxation, drowsiness and addiction that are found in acid drugs.

Claims (2)

An anxiolytic agent comprising at least ginkgolide-A as an active ingredient (excluding those containing ginkgolide-A-containing ginkgo biloba extract itself as an active ingredient) . Formula (I)

An anxiolytic agent characterized by containing ginkgolide-A represented by the formula (excluding those containing ginkgolide-A-containing ginkgo biloba extract itself as an active ingredient) .