JP4509702B2 - 細胞内の顆粒状構造物の測定方法 - Google Patents
細胞内の顆粒状構造物の測定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4509702B2 JP4509702B2 JP2004253316A JP2004253316A JP4509702B2 JP 4509702 B2 JP4509702 B2 JP 4509702B2 JP 2004253316 A JP2004253316 A JP 2004253316A JP 2004253316 A JP2004253316 A JP 2004253316A JP 4509702 B2 JP4509702 B2 JP 4509702B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- granular
- granular structure
- intracellular molecules
- receptor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
従来の画像解析ソフトウエアの流用では、解析パラメータの自由度が制限されていること、
従来の方法では、形成された顆粒状の構造物を網羅的に計測していたので、多くの時間と手間を要し、多量の検体を計測するうえでの現実的な制限を加える要因になっていること、
などの問題があった。
K. Rothkamm and M. Lobrich et al.、Evidence for a lack of DNA double-strand break repair in human cells exposed to very low x-ray doses、"Proc. Natl. Acad. Sci. USA"、(USA)、2003年、Vol. 100、p.5057-5062 K. Rothkamm et al.、Pathways of DNA Double-Stranded Break Repair during the Mammalian Cell Cycle、"Mol. Cell. Biol."、2003年、 Vol. 23、p. 5706-5715 R. H. Oakley et al.、The cellular distribution of fluorescently labeled arrestins provides a robust, sensitive and univeersal assay for screening G protein-coupled receptors、"Assay Drug Dev Technol"、2002年、Vol. 1、p.21-30
本発明の第9態様によると、細胞の受容体の機能を調節する物質をスクリーニングするための方法であって、細胞に対して試験物質を接触させることと、前記第7態様に記載の方法によって、前記試験物質を接触させた細胞における細胞内分子を含む顆粒状構造物をその凝集度により分類することとを含むことを特徴とする方法が提供される。
本発明の第10態様によると、細胞の受容体とそのリガンドの相互作用による機能を調節する物質をスクリーニングするための方法であって、細胞に対して試験物質を接触させることと、前記試験物質を接触させた細胞に、前記受容体に対するリガンドを投与することと、前記第7態様に記載の方法によって、前記試験物質を接触させた細胞における細胞内分子を含む顆粒状構造物をその凝集度により分類することとを含むことを特徴とする方法が提供される。
本発明の第11態様によると、前記第7態様に記載の方法であって、前記凝集度は、細胞内分子を含む顆粒状構造物の蛍光輝度を測定することにより決定され、最も蛍光輝度の高い顆粒状構造物を細胞状態の変化の指標とする方法が提供される。
本発明の第12態様によると、前記受容体はGPCRであることを特徴とする、前記第1態様〜前記第11態様のいずれかに記載の方法が提供される。
本発明の第13態様によると、前記顆粒状構造物の大きさは、蛍光強度閾値により特定されることを特徴とする前記第2態様に記載の方法が提供される。
細胞内の核を含む領域を認識する工程、
細胞に存在する顆粒状構造物を認識する工程、
顆粒状構造物をその大きさによって分類する工程、
分類した顆粒状構造物のうちの所望の大きさの顆粒状構造物の細胞あたりの数量を算出する工程。
骨肉芽腫細胞株であるU2OS細胞に、GFPで標識したアレスチン(アレスチンGFP)およびアドレナリン受容体を強制発現させた細胞において、本発明の方法に使用するアルゴリズムに基づいて解析を行った。アドレナリン受容体を化合物で活性化させると、これと連動してアレスチンGFPが顆粒状の構造物を細胞質内に形成する。顕微鏡と画像解析を組み合わせたシステム」には、CompuCyte社製のiCyteを使用した。
2・・・DRAQ5で染色された画像を下に描いた細胞核の輪郭(核輪郭)
3・・・面積のパラメータ(1〜2平方マイクロメータ)に分類された顆粒状構造物の輪郭の位置
4・・・面積のパラメータ(3〜7平方マイクロメータ)に分類された顆粒状構造物の輪郭の位置
5・・・面積のパラメータ(8〜18平方マイクロメータ)に分類された顆粒状構造物の輪郭の位置
構造物輪郭
Claims (13)
- 細胞内分子と受容体との相互作用により細胞内に形成される細胞内分子を含む顆粒状構造物を指標に前記受容体の機能を測定する方法であって、以下の工程によって細胞あたりの前記細胞内分子を含む顆粒状構造物の数量を測定することにより受容体の機能を評価することを特徴とする方法:
前記細胞内の核を含む領域を認識することと、
前記細胞に存在する細胞内分子を含む顆粒状構造物を認識することと、
前記認識された細胞内分子を含む顆粒状構造物の中から前記核の輪郭内部に存在する顆粒状構造物を選択することと、
前記核の輪郭内部に存在する細胞内分子を含む顆粒状構造物をその大きさによって分類することと、
前記分類された細胞内分子を含む顆粒状構造物のうちの所望の大きさの顆粒状構造物の細胞あたりの数量を算出すること。 - 請求項1に記載の方法であって、
前記核を含む領域は、細胞核を発光系色素で染色することによって認識されること、および、
前記細胞に存在する細胞内分子を含む顆粒状構造物の認識は、前記細胞内分子を蛍光標識することによって認識されること、
を特徴とする方法。 - 細胞に対する刺激の影響を測定するための方法であって、
細胞に対して所望の刺激を与えることと、
請求項1または2に記載の方法によって、細胞内分子を含む顆粒状構造物の細胞あたりの数量を測定することと、
を含むことを特徴とする方法。 - 細胞の受容体の機能を調節する物質をスクリーニングするための方法であって、
細胞に対して試験物質を接触させることと、
請求項2に記載の方法によって、前記試験物質を接触させた細胞における細胞内分子を含む顆粒状構造物の細胞あたりの数量を測定することと、
を含むことを特徴とする方法。 - 細胞の受容体とそのリガンドの相互作用による機能を調節する物質をスクリーニングするための方法であって、
細胞に対して試験物質を接触させることと、
前記試験物質を接触させた細胞に、前記受容体に対するリガンドを投与することと、
請求項2に記載の方法によって、前記試験物質を接触させた細胞における細胞内分子を含む顆粒状構造物の細胞あたりの数量を測定することと、
を含むことを特徴とする方法。 - 細胞内分子と受容体との相互作用により細胞内に形成される細胞内分子を含む顆粒状構造物を指標に前記受容体の機能を測定する方法であって、以下の工程によって前記細胞内分子を含む顆粒状構造物の凝集度を測定することにより受容体の機能を評価することを特徴とする方法:
前記細胞内の核を含む領域を認識することと、
前記細胞に存在する細胞内分子を含む顆粒状構造物を認識することと、
前記認識された細胞内分子を含む顆粒状構造物の中から前記核の輪郭内部に存在する顆粒状構造物を選択することと、
前記核の輪郭内部に存在する細胞内分子を含む顆粒状構造物をその凝集度によって分類すること。 - 請求項6に記載の方法であって、
前記核を含む領域は、細胞核を発光系色素で染色することによって認識されること、および、
前記細胞に存在する細胞内分子を含む顆粒状構造物の認識は、前記細胞内分子を蛍光標識することによって認識されること、
を特徴とする方法。 - 細胞に対する刺激の影響を測定するための方法であって、
細胞に対して所望の刺激を与えることと、
請求項6または7に記載の方法によって、細胞内分子を含む顆粒状構造物をその凝集度によって分類すること、
を含むことを特徴とする方法。 - 細胞の受容体の機能を調節する物質をスクリーニングするための方法であって、
細胞に対して試験物質を接触させることと、
請求項7に記載の方法によって、前記試験物質を接触させた細胞における細胞内分子を含む顆粒状構造物をその凝集度により分類することと、
を含むことを特徴とする方法。 - 細胞の受容体とそのリガンドの相互作用による機能を調節する物質をスクリーニングするための方法であって、
細胞に対して試験物質を接触させることと、
前記試験物質を接触させた細胞に、前記受容体に対するリガンドを投与することと、
請求項7に記載の方法によって、前記試験物質を接触させた細胞における細胞内分子を含む顆粒状構造物をその凝集度により分類することと、
を含むことを特徴とする方法。 - 請求項7に記載の方法であって、前記凝集度は、細胞内分子を含む顆粒状構造物の蛍光輝度を測定することにより決定され、最も蛍光輝度の高い顆粒状構造物を細胞状態の変化の指標とする方法。
- 前記受容体はGPCRであることを特徴とする、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記顆粒状構造物の大きさは、蛍光強度閾値により特定されることを特徴とする請求項2に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004253316A JP4509702B2 (ja) | 2004-08-31 | 2004-08-31 | 細胞内の顆粒状構造物の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004253316A JP4509702B2 (ja) | 2004-08-31 | 2004-08-31 | 細胞内の顆粒状構造物の測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006071374A JP2006071374A (ja) | 2006-03-16 |
JP4509702B2 true JP4509702B2 (ja) | 2010-07-21 |
Family
ID=36152177
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004253316A Expired - Fee Related JP4509702B2 (ja) | 2004-08-31 | 2004-08-31 | 細胞内の顆粒状構造物の測定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4509702B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100948794B1 (ko) * | 2008-11-10 | 2010-03-24 | 메디스커브 주식회사 | 세포내로 도입된 입자를 소포로부터 세포질로 노출시키는 세포질 노출첨가제 및 방법 |
JP5530126B2 (ja) * | 2009-07-24 | 2014-06-25 | オリンパス株式会社 | 三次元細胞画像解析システム及びそれに用いる三次元細胞画像解析装置 |
JP2014157158A (ja) * | 2014-04-17 | 2014-08-28 | Olympus Corp | 細胞観察方法、三次元細胞画像解析システム及びそれに用いる三次元細胞画像解析装置 |
JP6977287B2 (ja) * | 2017-03-29 | 2021-12-08 | 東ソー株式会社 | 複数の蛍光物質を用いた標識方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH11248698A (ja) * | 1998-03-05 | 1999-09-17 | Hitachi Ltd | 尿中赤血球分類方法及び尿中赤血球分類装置 |
WO2001007919A1 (fr) * | 1999-07-23 | 2001-02-01 | Olympus Optical Co., Ltd. | Procede visant a examiner une substance ayant une interaction avec un recepteur hormonal |
JP2002355090A (ja) * | 1997-02-27 | 2002-12-10 | Cellomics Inc | 細胞に基づくスクリーニングシステム |
JP2003107081A (ja) * | 2001-09-28 | 2003-04-09 | Olympus Optical Co Ltd | 画像解析方法、装置、及び記録媒体 |
WO2003095986A1 (en) * | 2002-05-14 | 2003-11-20 | Amersham Biosciences Niagara, Inc. | System and methods for rapid and automated screening of cells |
WO2004070362A1 (de) * | 2003-02-05 | 2004-08-19 | Evotec Technologies Gmbh | Mehrparametriges zell-identifikations- und sortierverfahren und zugehörige vorrichtung |
-
2004
- 2004-08-31 JP JP2004253316A patent/JP4509702B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002355090A (ja) * | 1997-02-27 | 2002-12-10 | Cellomics Inc | 細胞に基づくスクリーニングシステム |
JPH11248698A (ja) * | 1998-03-05 | 1999-09-17 | Hitachi Ltd | 尿中赤血球分類方法及び尿中赤血球分類装置 |
WO2001007919A1 (fr) * | 1999-07-23 | 2001-02-01 | Olympus Optical Co., Ltd. | Procede visant a examiner une substance ayant une interaction avec un recepteur hormonal |
JP2003107081A (ja) * | 2001-09-28 | 2003-04-09 | Olympus Optical Co Ltd | 画像解析方法、装置、及び記録媒体 |
WO2003095986A1 (en) * | 2002-05-14 | 2003-11-20 | Amersham Biosciences Niagara, Inc. | System and methods for rapid and automated screening of cells |
WO2004070362A1 (de) * | 2003-02-05 | 2004-08-19 | Evotec Technologies Gmbh | Mehrparametriges zell-identifikations- und sortierverfahren und zugehörige vorrichtung |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2006071374A (ja) | 2006-03-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Stoddart et al. | Probing the pharmacology of G protein-coupled receptors with fluorescent ligands | |
US6716588B2 (en) | System for cell-based screening | |
US20070250301A1 (en) | Normalizing cell assay data for models | |
JP2002525603A (ja) | 細胞ベースのスクリーニングのためのシステム | |
Singh et al. | Single-vesicle architecture of synaptobrevin2 in astrocytes | |
Brodwolf et al. | Faster, sharper, more precise: Automated Cluster-FLIM in preclinical testing directly identifies the intracellular fate of theranostics in live cells and tissue | |
CN105765364A (zh) | 在仪器校准方面或涉及仪器校准的改进 | |
Nagar et al. | Inflammasome and caspase-1 activity characterization and evaluation: an imaging flow cytometer–based detection and assessment of inflammasome specks and caspase-1 activation | |
Greife et al. | Structural assemblies of the di-and oligomeric G-protein coupled receptor TGR5 in live cells: an MFIS-FRET and integrative modelling study | |
US20210041337A1 (en) | Systems and methods for identifying protein aggregates in biotherapeutics | |
US20180040120A1 (en) | Methods for quantitative assessment of mononuclear cells in muscle tissue sections | |
JP5482057B2 (ja) | 細胞核を構成する構造体の解析方法 | |
US20180106781A1 (en) | Cell analysis using dynamic biophysical methods | |
US20070250270A1 (en) | Cellular predictive models for toxicities | |
Hintersteiner et al. | A two-channel detection method for autofluorescence correction and efficient on-bead screening of one-bead one-compound combinatorial libraries using the COPAS fluorescence activated bead sorting system | |
Filby et al. | The analysis of cell cycle, proliferation, and asymmetric cell division by imaging flow cytometry | |
US20050282208A1 (en) | Cellular phenotype | |
Sherman et al. | Resolving multi-molecular protein interactions by photoactivated localization microscopy | |
Stoneman et al. | Fluorescence-Based Detection of Proteins and Their Interactions in Live Cells | |
JP4509702B2 (ja) | 細胞内の顆粒状構造物の測定方法 | |
Zhang et al. | Structural analysis of sterol distributions in the plasma membrane of living cells | |
EP2776813B1 (en) | A method, system and computer program product for determining the mobility of fluorescent particles | |
JP2007006830A (ja) | 細胞内の顆粒状構造物の測定方法 | |
US20070082327A1 (en) | Cellular phenotype | |
JP4113063B2 (ja) | 特定高分子結晶の検出方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070801 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20090930 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091027 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091225 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100406 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100428 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130514 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140514 Year of fee payment: 4 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |