JP4461267B2 - Multiwell plate - Google Patents

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Description

本発明はマルチウェルプレートに関する。より詳細には、微生物（菌体）、ファージ、ＤＮＡ、細胞などの運搬、保管などに有用な薄型マルチウェルプレートに関する。   The present invention relates to a multiwell plate. More specifically, the present invention relates to a thin multi-well plate useful for transportation and storage of microorganisms (bacteria), phages, DNA, cells and the like.

従来から、新薬開発のソースとして微生物の産生する物質が用いられており、そのような有用産物を産生する微生物の探索が行われている。
また、昨今の遺伝子組換技術の発展により、有用物質の遺伝子を導入した微生物（形質転換体）を培養することにより、有用産物の生産が行われるようになっている。
更に、食品工業では、従前より微生物を用いた発酵により種々の食品の製造が行われてきた。
このように、医薬、生化学、食品、化学などの分野では、微生物が重要な働きをしており、クローン化された有用微生物は貴重な資源であることから慎重に保管されている。このような微生物は、通常、穿刺培養法、冷凍法、凍結乾燥法などにより保存されている。
上記の微生物を保管している研究機関などが、他の研究機関の求めに応じて、当該微生物を供給する際に微生物の運搬が行われる。微生物の運搬は、通常、微生物培養液を濾紙にスポットし、包装用ラップで包んで運搬したり、アンプルに収納した状態で運搬されている。また、微生物の数が多い場合には、マイクロタイタープレートに培養液を分注し、ビニールシートでシールして運搬したり、寒天培地にスポット植菌して運搬している。
しかし、、濾紙に吸着させて運搬する方法では雑菌が混入し易いし、運搬する微生物の数が多い場合には濾紙の枚数が増えて非効率的である。また、マイクロタイタープレート、寒天培地又はアンプルで運搬する方法では、容器の破損の問題があると共に容器が破損した場合には微生物汚染の問題もある。更に、運搬物が嵩張ることも大きな問題点である。
なお、微生物用のマルチウェルプレートしては、特開２００１−２１８５７５号公報、特開２００２−１９９８７４号公報などに記載のプレートが知られている。
特開２００１−２１８５７５号公報 特開２００２−１９９８７４号公報 Conventionally, substances produced by microorganisms have been used as a source of new drug development, and microorganisms producing such useful products have been searched.
Also, with the recent development of gene recombination technology, useful products are produced by culturing microorganisms (transformants) into which genes of useful substances have been introduced.
Furthermore, in the food industry, various foods have been conventionally produced by fermentation using microorganisms.
As described above, microorganisms play an important role in fields such as medicine, biochemistry, food, and chemistry, and cloned useful microorganisms are valuable resources and are carefully stored. Such microorganisms are usually stored by a puncture culture method, a freezing method, a freeze-drying method, or the like.
When a research institution or the like that stores the above-mentioned microorganisms supplies the microorganisms in response to requests from other research institutions, the microorganisms are transported. Microorganisms are usually transported in a state where a microorganism culture solution is spotted on a filter paper and wrapped in a packaging wrap or stored in an ampoule. When the number of microorganisms is large, the culture solution is dispensed on a microtiter plate and transported by sealing with a vinyl sheet or spot-inoculated on an agar medium.
However, in the method of adsorbing and transporting on the filter paper, various bacteria are likely to be mixed, and when the number of microorganisms to be transported is large, the number of filter papers is increased, which is inefficient. Further, in the method of transporting with a microtiter plate, an agar medium or an ampoule, there is a problem of breakage of the container, and there is also a problem of microbial contamination when the container is broken. Furthermore, it is a big problem that the transported goods are bulky.
In addition, as multi-well plates for microorganisms, plates described in JP-A Nos. 2001-218575 and 2002-199874 are known.
JP 2001-218575 A JP 2002-199874 A

解決しようとする問題点は、多数の微生物を簡便に且つ安全に運搬・保管しえる薄型マルチウェルプレートを提供することにある。   The problem to be solved is to provide a thin multi-well plate that can carry and store a large number of microorganisms easily and safely.

本発明のマルチウェルプレートは、(a)耐水性を有する基材シート、(b)複数の透孔を有し、基材シートに貼着されたスペーサーシート、(c)スペーサーシートの透孔を介して基材シートに貼着された吸水性素材、及び(d) ペーサーシート上を覆うカバーシートからなる。
上記のマルチウェルプレートは、全体の厚みが３ｍｍ以下、通常は１ｍｍ以下、素材の選択によっては０．５ｍｍ以下とすることができ、超薄型のマルチウェルプレートである。 The multi-well plate of the present invention comprises (a) a base sheet having water resistance, (b) a spacer sheet having a plurality of through holes, and is attached to the base sheet, and (c) the through holes of the spacer sheet. A water-absorbing material attached to the base sheet, and (d) a cover sheet covering the pacer sheet.
The multi-well plate described above is an ultra-thin multi-well plate having an overall thickness of 3 mm or less, usually 1 mm or less, and 0.5 mm or less depending on the material selected.

本発明のマルチウェルプレートによれば、一枚のプレートで多数の微生物（又は動物細胞）を運搬することができるので極めて効率的であり、しかも運搬容器の破損による微生物の損失や微生物汚染の問題も解消でき、更に超薄型であるので嵩張らないという特長を有し、その上安価に製造できるという格別の効果を奏する。   According to the multiwell plate of the present invention, a large number of microorganisms (or animal cells) can be transported by a single plate, which is extremely efficient, and there are problems of microbial loss and microbial contamination due to breakage of the transport container. Furthermore, since it is ultra-thin, it has the feature that it is not bulky.

以下、図面に基づいて、本発明をより詳細に説明する。
本発明の一実施例を図１及び２に示す。図１は本発明のマルチウェルプレートの平面概略図であり、図２は図１のＡ−Ａ線端面概念図である。図１及び図２において、１は基材シート、２はスペーサーシート、３は透孔、４は吸水性素材、５はカバーシートである。
なお、図１及び図２は、本発明の一例として９６ウェルのマルチウェルプレートを示しているが、ウェルの数は９６に限定されるものではなく、所望に応じて適宜な数でよく、例えば６，１２、２４、４８、３８４などが例示される。
また、本明細書において、シートはフィルムを含む概念である。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the drawings.
One embodiment of the present invention is shown in FIGS. FIG. 1 is a schematic plan view of a multiwell plate according to the present invention, and FIG. 2 is a conceptual diagram of an end surface taken along line AA of FIG. 1 and 2, 1 is a base sheet, 2 is a spacer sheet, 3 is a through hole, 4 is a water-absorbing material, and 5 is a cover sheet.
1 and 2 show a 96-well multi-well plate as an example of the present invention, the number of wells is not limited to 96, and may be an appropriate number as desired. 6, 12, 24, 48, 384 and the like are exemplified.
Moreover, in this specification, a sheet | seat is the concept containing a film.

図１及び図２において、基材シート１は耐水性を有する材料、好ましくはプラスチック素材からなり、例えばＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレート）、シリコーン、ＰＥ（ポリエチレン）、ＰＰ（ポリプロピレン）、ＰＳ（ポリスチレン）などが例示される。
基材シート１の厚さは特に限定されず、スペーサーシート２などを保持できる強度を有すればよく、通常５０〜１００μｍ程度のシートが用いられる。 1 and 2, the base sheet 1 is made of a water-resistant material, preferably a plastic material, such as PET (polyethylene terephthalate), silicone, PE (polyethylene), PP (polypropylene), and PS (polystyrene). Illustrated.
The thickness of the base material sheet 1 is not specifically limited, What is necessary is just to have the intensity | strength which can hold | maintain the spacer sheet 2 etc., and a sheet | seat about 50-100 micrometers is normally used.

基材シート１の上面には接着剤が塗布されており、係る接着剤層（図示は省略）を介してスペーサーシート２が貼着されている。スペーサーシート２には、透孔３が一列８個で１２列形成されており、合計９６個の透孔３が設けられている。
透孔３の形状は円筒形にされ、径としては通常直径５ｍｍ程度とされるがこの径に限定されるものではない。透孔３は通常円筒形とされるが、係る形状に特定されず、断面が矩形の孔であってもよい。なお、前述のように、係る透孔３はウェルを形成するものであって、その数は９６個に限定されるものではない。
スペーサーシート２の材質は特に限定されないが、通常耐水性を有するプラスチック素材が用いられ、例えばＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレート）、シリコーン、ＰＥ（ポリエチレン）、ＰＰ（ポリプロピレン）、ＰＳ（ポリスチレン）などが例示される。スペーサーシート２の厚さは特に限定されず、通常３００〜４００μｍ程度のシートが用いられる。 An adhesive is applied to the upper surface of the base sheet 1, and a spacer sheet 2 is attached via the adhesive layer (not shown). The spacer sheet 2 is formed with 12 rows of 8 through-holes 3 in a row, and a total of 96 through-holes 3 are provided.
The shape of the through-hole 3 is cylindrical, and the diameter is usually about 5 mm, but is not limited to this diameter. Although the through-hole 3 is usually cylindrical, it is not limited to such a shape and may be a hole having a rectangular cross section. As described above, the through holes 3 form wells, and the number is not limited to 96.
The material of the spacer sheet 2 is not particularly limited, but usually a plastic material having water resistance is used, and examples thereof include PET (polyethylene terephthalate), silicone, PE (polyethylene), PP (polypropylene), PS (polystyrene) and the like. . The thickness of the spacer sheet 2 is not particularly limited, and a sheet of about 300 to 400 μm is usually used.

基材シート１に貼着されたスペーサーシート２の透孔３内には、吸水性素材４が基材シート１に貼着されている。吸水性素材４は、微生物含有液を滲み込ませ、微生物を保持できる材質であれば特に限定されないが、繊維状素材が好ましく、例えば濾紙、不織布、フエルトなどが例示される。
吸水性素材４の形状は、透孔３に適合するような形状であればよく、前述のように透孔３が直径５ｍｍとされる場合には、吸水性素材４は直径３ｍｍ程度に調製される。吸水性素材４は透孔３内に収納され、吸水性素材４の上端が透孔３と略同じ高さ又はやや突出する程度に調製される。 A water-absorbing material 4 is attached to the base sheet 1 in the through holes 3 of the spacer sheet 2 attached to the base sheet 1. The water-absorbing material 4 is not particularly limited as long as it is a material that can soak a microorganism-containing liquid and retain microorganisms, but is preferably a fibrous material, and examples thereof include filter paper, nonwoven fabric, and felt.
The shape of the water-absorbing material 4 may be any shape that fits the through-hole 3, and when the through-hole 3 has a diameter of 5 mm as described above, the water-absorbing material 4 is prepared to have a diameter of about 3 mm. The The water-absorbing material 4 is accommodated in the through-hole 3 and is prepared so that the upper end of the water-absorbing material 4 is substantially the same height as the through-hole 3 or slightly protrudes.

吸水性素材４を収納したスペーサーシート２は、その上面をカバーシート５で被覆する。カバーシート５の材質・厚みは特に限定されないが、通常、自己粘着性を有するプラスチックシートが好ましく、厚さ１００μｍ程度とされる。   The spacer sheet 2 containing the water-absorbing material 4 is covered with a cover sheet 5 on its upper surface. The material and thickness of the cover sheet 5 are not particularly limited, but usually a plastic sheet having self-adhesiveness is preferable, and the thickness is about 100 μm.

上記のようにカバーシート５で被覆された本発明のマルチウェルプレートは、密封可能の容器（例えば、ポリ袋、ポリ容器等）に収容し、密封するの好ましい。容器としては、ポリ袋が簡便で好ましい。   The multiwell plate of the present invention covered with the cover sheet 5 as described above is preferably accommodated in a sealable container (for example, a plastic bag, a plastic container, etc.) and sealed. As a container, a plastic bag is simple and preferable.

以下、本発明のマルチウェルプレートの使用方法を説明する。
上記のように、カバーシート５で被覆され、密封容器に収容されたマルチウェルプレートは、慣用の滅菌手段（例えば、電子線滅菌、ガンマー線滅菌、高圧蒸気滅菌等）で滅菌する。この滅菌状態で、使用者に供給される。
使用者は、クリーンルームで容器を開封し、本発明のマルチウェルプレートを取り出し、取り出した後、カバーシート５を剥離する。
次いで、上面が開放されたスペーサーシート２の透孔３内の吸水性素材４に微生物含有液を滴下し、滲み込ませて微生物（菌株）を保持する。微生物含有液は、通常、定常期まで培養・保存されている微生物を慣用の媒体（例えば、生理食塩水等）に分散させた液が用いられる。微生物含有液の滴下量は適宜選択することができるが、通常１０μｌ程度とされる。 Hereinafter, a method of using the multiwell plate of the present invention will be described.
As described above, the multiwell plate covered with the cover sheet 5 and accommodated in a sealed container is sterilized by a conventional sterilization means (for example, electron beam sterilization, gamma ray sterilization, high-pressure steam sterilization, etc.). This sterilized state is supplied to the user.
The user opens the container in a clean room, takes out the multi-well plate of the present invention, removes the cover sheet 5 after taking out the multi-well plate.
Next, a microorganism-containing liquid is dropped onto the water-absorbing material 4 in the through holes 3 of the spacer sheet 2 whose upper surface is opened, and the microorganism-containing liquid is retained by being soaked. As the microorganism-containing liquid, a liquid in which microorganisms that have been cultured and stored until the stationary phase are usually dispersed in a common medium (for example, physiological saline) is used. The dripping amount of the microorganism-containing liquid can be appropriately selected, but is usually about 10 μl.

なお、本発明のマルチウェルプレートには複数の吸水性素材４が設けられているので、それぞれに異なった微生物（菌株）を保持することができる。即ち、添付図面の９６穴マルチウェルプレートであれば、９６種類の微生物を保持することができる。
かくして、各吸水性素材４に微生物を保持した後、カバーシート５でスペーサーシート２の上面を覆う。カバーシート５で覆うことにより、雑菌のコンタミネーションを防止すると共に孔相互間の混入を防ぐことができる。 In addition, since the multi-well plate of this invention is provided with the some water absorbing material 4, it can hold | maintain a different microorganism (strain) in each. In other words, the 96-well multiwell plate in the attached drawing can hold 96 types of microorganisms.
Thus, after holding microorganisms in each water-absorbing material 4, the upper surface of the spacer sheet 2 is covered with the cover sheet 5. By covering with the cover sheet 5, contamination of various bacteria can be prevented and mixing between the holes can be prevented.

カバーシート５で被覆した後、前述の容器（好ましくはポリ袋）に収納し、開口部を慣用の密封手段（例えば、ヒートシール、密封チャック等）で密封し、運搬に供する。
運搬された本発明のマルチウェルプレートは、受け取った使用者がクリーンルームで開封し、カバーシート５を剥離した後、慣用の固型培地上にレプリカすることにより、プレート上の全微生物を一度に培養することができる。 After covering with the cover sheet 5, it is accommodated in the above-mentioned container (preferably a plastic bag), and the opening is sealed with a conventional sealing means (for example, heat seal, sealing chuck, etc.) and used for transportation.
The transported multi-well plate of the present invention is opened in a clean room by the receiving user, the cover sheet 5 is peeled off, and then replicated on a conventional solid medium to culture all the microorganisms on the plate at once. can do.

なお、上記の微生物については特に限定されず、例えば大腸菌、枯草菌、酵母などが例示される。また、当該微生物は、組換遺伝子を含む形質転換体であってもよく、更には組換遺伝子を有するファージが感染した微生物であってもよい。更に、凍結保存が可能な微生物においては、適当な凍結保護剤（例えば、ＤＭＳＯ等）を含む微生物含有液を、前記吸水性素材４に滴下し、以下は上記と同様に密封した後、凍結処理をしてもよい。係る態様によれば、凍結状態で微生物を保管することが可能になる。   In addition, it does not specifically limit about said microorganisms, For example, colon_bacillus | E._coli, Bacillus subtilis, yeast etc. are illustrated. The microorganism may be a transformant containing a recombinant gene, or may be a microorganism infected with a phage having the recombinant gene. Furthermore, in the case of microorganisms that can be cryopreserved, a microorganism-containing liquid containing an appropriate cryoprotectant (for example, DMSO or the like) is dropped on the water-absorbing material 4, and the following is sealed in the same manner as described above, followed by freezing treatment. You may do. According to this aspect, it becomes possible to store the microorganisms in a frozen state.

本発明のマルチウェルプレートは、微生物の運搬に供される他、動物細胞の運搬にも利用可能である。動物細胞は通常足場依存性を有するが、前記の吸水性素材４が動物細胞の足場として機能する。従って、動物細胞含有液を、前記の吸水性素材４に滴下し、以下は上記と同様に密封することにより、動物細胞の運搬に供することができる。この際、当該動物細胞含有液に凍結保護剤を添加することにより、凍結状態で動物細胞を運搬し、また保存することも可能である。
動物細胞としては、慣用の株化細胞の他、組換遺伝子を含む動物細胞（形質転換体）であってもよい。係る形質転換体の調製に用いられる動物細胞としては、遺伝子組換技術で繁用される動物細胞、例えば、マウス線維芽細胞Ｃ１２７、チャイニーズハムスター卵巣細胞ＣＨＯ、サルＣＯＳ細胞などが例示される。 The multiwell plate of the present invention can be used not only for transporting microorganisms but also for transporting animal cells. Although animal cells usually have anchorage dependency, the water-absorbing material 4 functions as a scaffold for animal cells. Accordingly, the animal cell-containing liquid can be dropped onto the water-absorbing material 4 and the following can be sealed in the same manner as described above to be used for transporting animal cells. At this time, the animal cells can be transported and stored in a frozen state by adding a cryoprotectant to the animal cell-containing solution.
The animal cell may be a conventional cell line or an animal cell (transformant) containing a recombinant gene. Examples of animal cells used for the preparation of such transformants include animal cells frequently used in gene recombination techniques, such as mouse fibroblast C127, Chinese hamster ovary cell CHO, monkey COS cell, and the like.

以下、実施例に基づいて、本発明をより詳細に説明するが、本発明はこの例に限定されるものではない。
実施例１
基材シートとしてＰＰ製シート（電気化学工業社製、85mm×145mm×80μm）を用い、その一面にシリコン系接着剤を均一に塗布した。
一方、スペーサーシートとしてＰＰ製シート（タキロン社製、85mm×145mm×350μm）を用い、それに直径約５ｍｍの透孔を、図１に示されるように一列８個で１２列の等間隔で設けた。このスペーサーシートを、上記の接着剤層の上に重ね合わせて貼着した。
次いで、市販濾紙（厚さ約350μm）を直径約３ｍｍの円形に裁断したものを用意し、この濾紙を上記の透孔に一枚ずつ加え、押圧することにより基材シートに貼着させた。
更に、スペーサーシートの上面を、ＰＥ製カバーシート（ＦＳＫ社製）で被覆した後、ポリ袋（220mm×95mm）に収容し、開口部をヒートシールした後、電子線滅菌して、本発明のマルチウェルプレートを調製した。 EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated in detail based on an Example, this invention is not limited to this example.
Example 1
A PP sheet (85 mm x 145 mm x 80 µm, manufactured by Denki Kagaku Kogyo Co., Ltd.) was used as the base sheet, and a silicon adhesive was uniformly applied on one surface thereof.
On the other hand, a PP sheet (85 mm × 145 mm × 350 μm, manufactured by Takiron Co., Ltd.) was used as a spacer sheet, and through-holes with a diameter of about 5 mm were provided at regular intervals of 12 rows in 8 rows as shown in FIG. . This spacer sheet was laminated and pasted on the adhesive layer.
Next, a commercially available filter paper (thickness: about 350 μm) cut into a circle with a diameter of about 3 mm was prepared. The filter paper was added to the above through holes one by one and pressed to adhere to the base sheet.
Furthermore, after the upper surface of the spacer sheet was covered with a PE cover sheet (manufactured by FSK), it was accommodated in a poly bag (220 mm × 95 mm), the opening was heat sealed, and then sterilized with an electron beam. Multiwell plates were prepared.

有用微生物や動物細胞の運搬・保存に広く利用することができる。   It can be widely used for transportation and storage of useful microorganisms and animal cells.

本発明のマルチウェルプレートの一例を示す平面概略図である。It is a plane schematic diagram showing an example of the multiwell plate of the present invention. 図１のＡ−Ａ線端面概念図である。It is an AA line end surface conceptual diagram of FIG.

符号の説明Explanation of symbols

１ 基材シート
２ スペーサーシート
３ 透孔
４ 吸水性素材
５ カバーシート DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Base material sheet 2 Spacer sheet 3 Through-hole 4 Water absorbing material 5 Cover sheet

Claims (2)

(a)耐水性を有する基材シート、(b)複数の透孔を有し、基材シートに貼着された、耐水性を有するスペーサーシート、(c)スペーサーシートの透孔を介して基材シートに貼着された吸水性素材、及び(d)スペーサーシート上を覆うカバーシートからなることを特徴とするマルチウェルプレート。 (a) a water-resistant base sheet, (b) a water-resistant spacer sheet having a plurality of through-holes and attached to the base sheet, and (c) a spacer sheet through the through-holes of the spacer sheet. A multi-well plate comprising: a water-absorbing material adhered to a material sheet; and (d) a cover sheet covering the spacer sheet. 包装容器に密封収容されている請求項１記載のマルチウェルプレート。 The multiwell plate according to claim 1, which is hermetically accommodated in a packaging container.
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