JP4443740B2 - Anthracycline antibiotics - Google Patents

Description

（式中、Ｒ₁およびＲ₂は水素原子または水酸基を表わし、Ｙは、
【化１０】

、
【化１１】

または、
【化１２】

を表す）で示される化合物である。
【０００９】
本発明者らは、これらの化合物のうち、式（Ｉ―１）、
【化１３】

で示される化合物を抗生物質ＨＵ２−７０５Ａ、
式（Ｉ―２）、
【化１４】

で示される化合物を抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂ、
式（Ｉ―３）、
【化１５】

で示される化合物を抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃ、
式（Ｉ―４）、
【化１６】

で示される化合物を抗生物質ＨＵ２−７０５Ｅとそれぞれ命名した。以後、これらの化合物は、上記名称を用いて説明する。
【００１０】
本発明に使用される微生物は、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属し、本発明のアントラサイクリン抗生物質を生産する能力を有する菌株であれば、どのようなものでも使用できる。例えば、ロドマイシン系抗生物質およびその類縁化合物を生産する能力を有する土壌分離株または公知の菌株を、変異源として例えば紫外線あるいはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）を用いる通常の変異処理に供することにより単離され、本発明のアントラサイクリン抗生物質を生産する菌株を挙げることができる。
【００１１】
これらの生産菌株のうち具体的なものとしては出願人が保存中のβ−ロドマイシン類生産菌ストレプトミセス・ビオラセウス（Ｓｔｏｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓ）Ａ２６２菌株をＮＴＧで変異処理して得られた変異株ＨＵ２−７０５菌株を挙げることができる。該菌株は、平成１２年８月４日付で工業技術院生命工学工業技術研究所に生命研菌寄第１７９８６号（ＦＥＲＭ Ｐ−１７９８６）として寄託されている。
【００１２】
以下に、ＨＵ２−７０５菌株の菌学的性状を示す。
１．形態
良く分岐した基中菌糸より、螺旋状の気中菌糸を形成し、輪生枝は認められない。成熟した胞子鎖は１０個〜５０個の胞子の連鎖を認める。胞子の表面はとげ状である。
【００１３】
２．各種培地における生育状態
培養はすべて２８℃で行った。結果を表１に示す。なお、色の記載について、（）内に示す標準はＨ．Ｄ．Ｔｒｅｓｎｅｒ ＆ Ｅ．ｊ．Ｂａｃｋｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｃｏｌｏｒ ｗｈｅｅｌｓ ｆｏｒ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｔｅ ｔａｘｏｎｏｍｙ（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｅｌ．１１，３３５〜３３８（１９６３））を用い、補足的に日本色彩研究所出版の「色の標準」も用いた。
【００１４】
【表１】

【００１５】
３．生理的性質
（１）生育温度範囲：（イースト・麦芽・寒天培地を使用、ｐＨ６．０で、２０℃、２８℃、３０℃、３７℃、４２℃の各温度で実験）２０℃から３７℃までの各温度では生育が認められた。４２℃では生育しない。
（２）ゼラチンの液化：陽性（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地を使用し、２０℃で培養）
（３）スターチの加水分解：陽性（スターチ・無機塩寒天培地）
（４）スキム・ミルクの凝固、ペプトン化：はじめはすべて陰性、培養を開始して１５日を過ぎる頃ペプトン化をはじめる。
（５）メラニン様色素の生成：（トリプトン・イースト・ブロス培地、ペプトン・イースト・鉄・寒天培地およびチロシン寒天培地使用）いずれの培地でも陽性
【００１６】
４．各種炭素源の利用性：（フリドハム・ゴドリープ寒天培地上）
Ｌ−アラビノース 陽性
Ｄ−キシロース 陽性
Ｄ−グルコース 陽性
Ｄ−フラクトース 陽性
シュークロース 陽性
イノシトール 陽性
Ｌ−ラムノース 陽性
ラフィノース 陽性
Ｄ−マンニット 陽性
【００１７】
本発明のアントラサイクリン抗生物質は上記菌株を栄養培地に接種し、好気的に培養することにより製造される。上記菌株の培養方法は、原則的には一般微生物の培養方法に準ずるが、通常は液体培養による振とう培養、通気撹拌培養などの好気的条件下で行うのが好適である。
【００１８】
培養に用いることのできる培地としては、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物が利用できる栄養源を含有する培地であればよく、各種の合成培地、半合成培地、天然培地などいずれも用いることができる。培地組成としては、例えば、炭素源として、グルコース、マルトース、シュークロース、水あめ、糖みつ、デキストリン、澱粉、グリセロール、動物油、植物油などを単独または組み合わせて使用することができ、また窒素源としては、大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、魚粉、尿素、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム、リン酸アンモニウム、などを単独または組み合わせて使用することができる。また必要に応じて、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、リン酸塩、金属塩などの無機塩を加えることができる。その他、上記菌株の生育あるいは本発明のアントラサイクリン抗生物質の生産を促進する有機物、例えば、ビタミン類、アミノ酸類を加えることができる。さらに必要に応じて、消泡剤、例えば、アデカノール（商品名：旭電化工業（株）製）、シリコーン（商品名：信越化学工業（株）製）などを添加することができる。
【００１９】
培養条件は、上記菌株が良好に生育して本発明のアントラサイクリン抗生物質を生産し得る範囲内で適宜選択すればよい。例えば、培地のｐＨは、５〜９程度、通常６〜７とすることが好ましい。培養温度は、微生物が良好に生育する温度、通常２０〜４０℃、好ましくは２５〜２８℃に保つのがよい。培養時間は、２〜８日間程度でよく、好ましくは４〜５日間である。もちろん上述した各種の培養条件は、使用微生物の種類や特性、外部条件などに応じて適宜変更でき、またそれに応じて上記範囲から最適条件を選択、調整できる。その際、培養液中の目的化合物の蓄積量が最大になったときに培養を停止して得た培養液を以下の精製工程に使用すればよい。
【００２０】
このようにして得た培養液中に蓄積された本発明のアントラサイクリン抗生物質は、培養後、濾過、遠心分離等の一般的固液分離手段によって菌体を分離し、濾液または上澄液から回収可能である。また分離した菌体からも回収可能である。濾液または上澄液から回収する場合、まず、ｐＨ７〜９において、クロロホルム、トルエン、酢酸エチルなどの有機溶媒で抽出し、さらにアンバーライトＸＡＤ（ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化学（株）製）等のポリスチレン系吸着樹脂、シリカゲル、アルミナ、活性炭などの担体を用いるカラムクロマトグラフィーにより処理することができる。これらの担体から目的物質を溶出させる方法は、担体の種類、性質によって異なるが、一例として、ポリスチレン系吸着樹脂の場合には、溶出溶媒として、含水アルコール、含水アセトン等を用いることができる。
【００２１】
さらにセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ−２０（ファルマシア社製）、バイオ・ゲルＰ−２（バイオ・ラッド社製）等によるゲル濾過、シリカゲル、アルミナ等による薄層クロマトグラフィー、順相あるいは逆相カラムを用いた分取用高速液体クロマトグラフィー（分取ＨＰＬＣ）等を用いることができ、これらの方法を単独または適宜組み合わせて、場合によっては反復使用することにより、分離、精製することができる。また、分離した菌体から回収する場合はアセトン、メタノール、エタノールまたはブタノール等の適当な有機溶媒を用いて抽出した後、クロロホルムで再抽出し、上記と同様に単離精製することができる。
【００２２】
以上のようにして得られる本発明のアントラサイクリン抗生物質は、以下に示す物理化学的性質を有する。
１．アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ａの物理化学的性質
（１）色および形状：ピンク色、固体。
（２）分子式：Ｃ₂₈Ｈ₃₁ＮＯ₈
（３）マススペクトル
ＦＡＢ−ＭＳ：図１に示すとおりである。
ＨＲＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５１０．２０９５ ［Ｍ＋Ｈ］⁺
（４）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）：重クロロホルム中で測定した結果は図２に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフト、多重度は表２に示すとおりである。
（５）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）：重クロロホルム中で測定した結果は図３に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフトは、表３に示すとおりである。
（６）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：シリカゲルプレート（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ７０Ｆ₂₅₄：和光純薬（株）製）にて、０．３７（クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１）
【００２３】
２．アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂの物理化学的性質
（１）色および形状：赤色、粉末。
（２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₃₃ＮＯ₁₁
（３）マススペクトル
ＦＡＢ−ＭＳ：図４に示すとおりである。
ＨＲＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５７１．２１５６ ［Ｍ＋Ｈ］⁺
（４）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）：重メタノール中で測定した結果は図５に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフト、多重度は表２に示すとおりである。
（５）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）：重メタノール中で測定した結果は図６に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフトは、表３に示すとおりである。
（６）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：シリカゲルプレート（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ７０Ｆ₂₅₄：和光純薬（株）製）にて、０．１８（クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１）
（７）比旋光度：［α］²⁵ _D ＋１４４°（ｃ ０．１，メタノール）
（８）紫外部吸収スペクトル：９０％メタノール中で測定した結果は図７に示すとおりである。また特徴的な吸収は次のとおりである。
ＵＶ λｍａｘ ｎｍ，（ε^1% _1cm）：２３３（５９７）、２５４（４５１）、２９１（１６２）、４９３（２２７）
【００２４】
３．アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃの物理化学的性質
（１）色および形状：オレンジ色、粉末。
（２）分子式：Ｃ₂₉Ｈ₃₃ＮＯ₁₁
（３）マススペクトル
ＦＡＢ−ＭＳ：図８に示すとおりである。
ＨＲＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５７１．２１６４ ［Ｍ＋Ｈ］⁺
（４）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）：重メタノール中で測定した結果は図９に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフト、多重度は表２に示すとおりである。
（５）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）：重メタノール中で測定した結果は図１０に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフトは、表３に示すとおりである。
（６）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：シリカゲルプレート（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ７０Ｆ₂₅₄：和光純薬（株）製）にて、０．１３（クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１）
（７）比旋光度：［α］²⁵ _D ＋３４°（ｃ ０．０７６，メタノール）
（８）紫外部吸収スペクトル：９０％メタノール中で測定した結果は図１１に示すとおりである。また特徴的な吸収は次のとおりである。
ＵＶ λｍａｘ ｎｍ，（ε^1% _1cm）：２０８（６８６）、２３５（ｓｈ５７０）、２５８（４１８）、２９０（ｓｈ２３０）、４９１（１２６）
【００２５】
４．アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｅの物理化学的性質
（１）色および形状：赤色、固体。
（２）分子式：Ｃ₂₈Ｈ₃₃ＮＯ₉
（３）マススペクトル
ＦＡＢ−ＭＳ：図１２に示すとおりである。
ＨＲＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ ５２８．２１８２ ［Ｍ＋Ｈ］⁺
（４）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）：重クロロホルム中で測定した結果は図１３に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフト、多重度は表２に示すとおりである。
（５）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）：重メタノール中で測定した結果は図１４に示すとおりである。また、主要なシグナルの化学シフトは、表３に示すとおりである。
（６）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値：シリカゲルプレート（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ７０Ｆ₂₅₄：和光純薬（株）製）にて、０．２８（クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１）
【００２６】
【表２】

【００２７】
【表３】

【００２８】
本発明のアントラサイクリン抗生物質は、それぞれ培養白血病細胞Ｌ１２１０に対して増殖抑制作用を示し、それ自体制がん剤として有用である。
【００２９】
（マウス白血病Ｌ１２１０細胞に対する増殖および核酸合成阻害作用）
２０％仔牛血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地（ローズウェルバーグ研究所）へＬ１２１０細胞を５×１０⁴個／ｍｌ接種し、同様に本発明のアントラサイクリン抗生物質を各種濃度で添加し、３７℃にて炭酸ガス培養器中で培養し対照区に対する５０％増殖阻害濃度を求めた。さらに１０％仔牛血清を含むＲＰＭＩ１６４０培地へ上記のＬ１２１０培養細胞を５×１０⁴個／ｍｌとなる様に懸濁し、３７℃にて炭酸ガス培養器中で１〜２時間培養を行ったのち、本物質を種々の濃度で添加し、１５分後にさらに¹⁴Ｃ−ウリジン（０．０５μＣｉ／ｍｌ）または¹⁴Ｃ−チミジン（０．０５μＣｉ／ｍｌ）を添加し、３７℃にて６０分間培養した。反応液へ冷１０％トリクロル酢酸を添加し、反応を中止すると同時に、酸不溶物を沈殿させ、冷５％トリクロル酢酸にてさらに２回洗浄したのち、ギ酸に溶解し、放射活性を測定し、無添加対照区に対する放射能の取り込み率から５０％取り込み阻害濃度（ＩＣ₅₀）を求めた。表４に結果を示す。
【００３０】
【表４】

【００３１】
以下、実施例を挙げ、本発明をさらに詳細に説明する。
【実施例】
実施例１ 培養液の調製
ストレプトミセス・ビオラセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｕｓ）ＨＵ２−７０５菌株（ＦＥＲＭ Ｐ−１７９８６）のＹＧＳ（可溶性デンプン０．５％、酵母エキス０．３％、グルコース０．５％、寒天２．０％、ｐＨ７．２）斜面培養より一白金耳を採り、ＹＧＳ液体培地（可溶性デンプン０．５％、酵母エキス０．３％、グルコース０．５％、ｐＨ７．２）５ｍｌを分注、殺菌した試験管に接種し、２８℃、１３０ｒｐｍで５日間往復振とう培養し、種母を作成した。
【００３２】
次に生産培地（可溶性デンプン２．５％、大豆粉１．５％、酵母エキス０．２％、グルコース０．５％、塩化ナトリウム０．１％、ミネラル混液０．１％、炭酸カルシウム０．２％、１０％アデカノール０．１％、ｐＨ７．０：但し、ミネラル混液は、塩化亜鉛４０ｍｇ、塩化第一鉄・６水和物２００ｍｇ、塩化第一銅・２水和物１０ｍｇ、塩化マンガン・４水和物１０ｍｇ、ピロホウ酸ナトリウム・１０水和物１０ｍｇおよびモリブデン酸アンモニウム・４水和物１０ｍｇを蒸留水１０００ｍｌに溶解し、塩酸でｐＨ２．２に調整したものである。）５０ｍｌを分注、殺菌した５００ｍｌ容坂口フラスコに、前記種母を１．５ｍｌ接種し、２８℃、１３０ｒｐｍで４日間往復振とう培養した。これを、生産培地５０ｍｌを分注、殺菌した５００ｍｌ容坂口フラスコ２０本に１ｍｌずつ接種し、２８℃、１３０ｒｐｍで５日間往復振とう培養し、培養液１０００ｍｌを得た。
【００３３】
実施例２ アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５ＢおよびＨＵ２−７０５Ｃの精製
実施例１に記載した方法で得た培養液１０００ｍｌをリン酸でｐＨ２．０に調製し、室温で１時間穏やかに攪拌した。３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄液と菌体を含む沈殿物に分離後、沈殿物にリン酸で、ｐＨ２．９に調製したアセトン３００ｍｌを添加し、激しく攪拌した。３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、アセトンを含む上澄液を濃縮し、先の上澄液と併せた。この酸性溶液を、リン酸でｐＨ調整した酸性水溶液（ｐＨ２．４）で洗浄したＨＰ−２０カラム（φ３０ｍｍ×２０５ｍｍ、１４５ｍｌ）に付した。酸性水（ｐＨ２．４）で洗浄後、ｐＨ２．４に調整した９０％アセトン溶液で溶出した。減圧濃縮後、１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ７．５に調整し、クロロホルム２００ｍｌを添加後、激しく攪拌し遠心分離を行った。同クロロホルム洗浄を二回行った後、水相を１Ｍ塩酸でｐＨ２．５に調整した。これに１−ブタノール３００ｍｌを加え攪拌抽出した後、遠心分離し、生成物を１−ブタノールに転溶した。この操作を二度繰り返し、得られたブタノール溶液を併せ、さらに少量の水を加えて５０℃で濃縮乾固し、粗抽出物１．１３ｇを回収した。
【００３４】
粗抽出物を混合溶媒（クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝４００：１００：１０：１）５０ｍｌに溶解し、Ｗａｋｏｇｅｌ Ｃ−２００シリカゲルカラム（φ２５ｍｍ×２２０ｍｍ、１０８ｍｌ）に吸着させた。次いで、クロロホルム：メタノール：水：酢酸系の展開溶媒（４００：１００：１０：１、１０００ｍｌ→４００：２００：１０：１、２００ｍｌ）で溶出した。クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１を展開溶媒としてＴＬＣ分析（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ７０ Ｆ₂₅₄：和光純薬社製）を行い、各画分に含まれる成分を確認した。そのうちＲｆ値０．１８のスポットを示す生成物（赤色、アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂ）と、Ｒｆ値０．１３のスポットを示す生成物（オレンジ色、アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃ）をそれぞれ回収した。
【００３５】
アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂは濃縮乾固後、１Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（ｐＨ７．５）１００ｍｌに溶解し、１００ｍｌのクロロホルムを用いて洗浄した。残った水相を１Ｍ塩酸でｐＨ２．５に調整し、ブタノール抽出を行った。水相の色素が見えなくなるまでこの操作を繰り返し、回収したブタノール層を集め濃縮乾固した。これを混合溶媒（トルエン：メタノール＝５：１）に溶解し、濃縮乾固すると次々に赤色粉末が析出した。完全に乾固する直前に濃縮を止め、析出物質および溶液を試験管に移した後、遠心分離した。沈殿物を回収し、トルエン相は再度トルエン、メタノールを加え、濃縮し晶析を繰り返し粉末状のＨＵ２−７０５Ｂ結晶を１３６．４ｍｇ回収した。また、アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃも、アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂ同様トルエン：メタノール系混合溶媒で結晶化を行い、４８．６ｍｇ取得した。
【００３６】
実施例３ アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５ＡおよびＨＵ２−７０５Ｅの精製
実施例１に記載した方法で得た培養液１０００ｍｌを３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、その上清に０．１Ｍクエン酸緩衝液を加えｐＨ３．３に調整した。また同緩衝液（ｐＨ３．３）で緩衝化した吸着樹脂ＨＰ−２０カラム（三菱化学社製：φ２８ｍｍ×２５０ｍｍ、１５４ｍｌ）に、あらかじめ３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して得たｐＨ調整済の上清を付した。５０％アセトン溶液５００ｍｌ（ｐＨ６．５）で溶出を行い、減圧濃縮して、粗抽出物０．５ｇを回収した。
【００３７】
次に得られた粗抽出物を混合溶媒（クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝２００：２０：１：１）３０ｍｌに溶解し、シリカゲルカラム（φ１０ｍｍ×１５０ｍｍ、１２ｍｌ）に付した。次いで、以下に示すクロロホルム：メタノール：水：酢酸系の混合溶媒を用いて順次溶出した。
（１）クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝２００：２０：１：１
（２）クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝２００：３０：２．５：１
（３）クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝２００：４０：５：１．５
（４）クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１
【００３８】
各画分を、クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１を展開溶媒としてＴＬＣ分析（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ７０ Ｆ₂₅₄：和光純薬（株）製）を行い、Ｒｆ値０．３７を示す画分を集めて濃縮し、アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ａを１７．７ｍｇ取得した。次にＨＵ２−７０５Ａ以外の画分を集め、濃縮し、分取用ＴＬＣ（シリカゲル２０ｃｍ×２０ｃｍ：Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ７０ Ｆ₂₅₄：和光純薬（株）製）にて精製した。クロロホルム：メタノール：水：酢酸＝１００：３０：５：１を展開溶媒として用い、Ｒｆ値０．２８のオレンジ色のスポットをかき取り、切り落とし短くしたパスツールピペットに詰め、クロロホルム：メタノール＝１：１で溶出した。これを濃縮し、アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｅを８．５ｍｇ取得した。
【図面の簡単な説明】
【図１】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ａのマススペクトルである。
【図２】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ａの重クロロホルム中での¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）である。
【図３】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ａの重クロロホルム中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）である。
【図４】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂのマススペクトルである。
【図５】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂの重メタノール溶液中での¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）である。
【図６】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂの重メタノール溶液中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）である。
【図７】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｂの９０％メタノール中での紫外部吸収スペクトルである。
【図８】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃのマススペクトルである。
【図９】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃの重メタノール中での¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）である。
【図１０】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃの重メタノール中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）である。
【図１１】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｃの９０％メタノール中での紫外部吸収スペクトルである。
【図１２】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｅのマススペクトルである。
【図１３】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｅの重クロロホルム中での¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ）である。
【図１４】 アントラサイクリン抗生物質ＨＵ２−７０５Ｅの重メタノール中での¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ）である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel anthracycline antibiotic produced by a microorganism belonging to the genus Streptomyces.
[0002]
BACKGROUND OF THE INVENTION
Anthracycline antibiotics produced by actinomycetes are pigment glycosides (glycosides) composed of an aglycone moiety (chromophore) having a 4-membered ring quinone structure as a basic skeleton and saccharides mainly composed of amino sugars. . Although it has a broad anti-cancer spectrum, it is an anti-cancer antibiotic that has been shown to be difficult to accumulate. Among them, doxorubicin (Doxorubicin: Acramone, FG et al. Biotechnol. Bioeng. 11, 1101-1110 (1969)) and daunorubicin (Daunorubicin: Dimarco, A), which are currently most commonly used anticancer drugs. Et al. Nature 201, 706-707 (1964)), aclarubicin (Oki, T. et al. J. Antibiot. 28, 830-834 (1975)), etc., and their derivatives are also clinically developed. Has been.
[0003]
These antibiotics bind to DNA and generate radicals to cleave the DNA strand or inhibit topoisomerase II. Topoisomerase has DNase and ligase activity and catalyzes temporary cleavage and recombination with the DNA strand, but most anticancer drugs, including anthracycline antibiotics, inhibit this enzyme (type II), Impairs DNA replication and exerts anticancer activity.
[0004]
On the other hand, among the anthracycline antibiotics, rhodomycin group antibiotics discovered early are glycosides having β-rhodomycinone in the aglycone, and are not used as anticancer agents because they are particularly toxic. However, betaclamycin A (Betaclamycin A: Oki, T. et al. J. Antibiot. 33, 1331-1340 (1980)) and oxanomycin (Oxaunomycin: Yoshimoto, A et al. J. Antibiot) discovered thereafter. 39, 902 to 909 (1986)) are highly effective in experimental tumors, and all are compounds having β-rhodomycinone in the aglycone.
[0005]
As described above, various related compounds have been proposed for anthracycline antibiotics as anticancer agents, but none are satisfactory in terms of both toxicity and anticancer activity. In addition, anticancer drugs require multifaceted research because the results of in vitro and animal tests cannot always be directly reflected as human anticancer effects. Therefore, proposals for compounds belonging to a new class of anthracycline antibiotics that have been evaluated as anticancer agents are desired.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention provides novel anthracycline antibiotics produced by microorganisms belonging to the genus Streptomyces, methods for producing them, and microorganisms produced.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted research for the purpose of proposing a novel compound that can be a more useful anthracycline antibiotic or a synthetic intermediate thereof, and as a result, Streptomyces violaceus A262, a strain of rhodomycin-producing bacteria. The present inventors completed the present invention by finding that a mutant strain produced a novel anthracycline antibiotic.
[0008]
The novel anthracycline antibiotics provided by the present invention include the following general formula (I),
[Chemical 9]

(Wherein R₁And R₂Represents a hydrogen atom or a hydroxyl group, Y represents
[Chemical Formula 10]

,
Embedded image

Or
Embedded image

It represents a compound represented by
[0009]
Among these compounds, the present inventors have the formula (I-1),
Embedded image

The compound represented by the antibiotic HU2-705A,
Formula (I-2),
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The compound represented by the antibiotic HU2-705B,
Formula (I-3),
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The compound represented by the antibiotic HU2-705C,
Formula (I-4),
Embedded image

Were designated as antibiotics HU2-705E, respectively. Hereinafter, these compounds will be described using the above names.
[0010]
Any microorganism may be used as long as it belongs to the genus Streptomyces and has the ability to produce the anthracycline antibiotics of the present invention. For example, a soil isolate or a known strain having the ability to produce rhodomycin antibiotics and related compounds is usually used using, for example, ultraviolet light or N-methyl-N′-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG) as a mutation source. And a strain that produces the anthracycline antibiotic of the present invention.
[0011]
Specific examples of these production strains include mutant HU2-705 obtained by subjecting the β-rhodomycins-producing bacterium Streptomyces violaceus A262 strain preserved by the applicant to mutation treatment with NTG. Can be mentioned. The strain has been deposited with the Institute of Biotechnology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology as of August 4, 2000 as Life Research Bacteria No. 17986 (FERM P-17986).
[0012]
The mycological properties of HU2-705 strain are shown below.
1. Form
Helical aerial hyphae are formed from the well-branched basic mycelia, and no limbal branches are observed. Mature spore chains recognize a chain of 10-50 spores. The surface of the spore is spiny.
[0013]
2. Growth conditions in various media
All cultures were performed at 28 ° C. The results are shown in Table 1. Regarding the color description, the standard shown in parentheses is H.264. D. Tresner & E. j. Backus System of Colors for Streptomycetate Taxonomy (J. Appl. Microbiel. 11, 335-338 (1963)) was used, and “Color Standard” published by Japan Color Research Institute was also used.
[0014]
[Table 1]

[0015]
3. Physiological properties
(1) Growth temperature range: (East, malt, agar medium is used, pH 6.0, experiment at 20 ° C., 28 ° C., 30 ° C., 37 ° C., 42 ° C.) 20 ° C. to 37 ° C. Growth was observed at temperature. It does not grow at 42 ° C.
(2) Gelatin liquefaction: Positive (Glucose, peptone, gelatin medium is used and cultured at 20 ° C)
(3) Starch hydrolysis: positive (starch / inorganic salt agar medium)
(4) Coagulation of skimmed milk and peptone formation: Initially all negative, peptone conversion begins about 15 days after the start of culture.
(5) Production of melanin-like pigment: (Use of tryptone / east / broth medium, peptone / east / iron / agar medium and tyrosine agar medium) Positive in any medium
[0016]
4). Availability of various carbon sources: (on Fridham Godreap agar)
L-arabinose positive
D-xylose positive
D-glucose positive
D-fructose positive
Sucrose positive
Inositol positive
L-rhamnose positive
Raffinose positive
D-mannit positive
[0017]
The anthracycline antibiotics of the present invention are produced by inoculating the above strains in a nutrient medium and culturing aerobically. The method for culturing the strain is basically the same as the method for culturing general microorganisms, but usually it is preferably performed under aerobic conditions such as shaking culture by liquid culture and aeration and agitation culture.
[0018]
As a medium that can be used for the culture, any medium containing a nutrient source that can be used by microorganisms belonging to the genus Streptomyces can be used, and any of various synthetic media, semi-synthetic media, natural media, and the like can be used. Can do. As the medium composition, for example, glucose, maltose, sucrose, starch syrup, sugar beet, dextrin, starch, glycerol, animal oil, vegetable oil and the like can be used alone or in combination as a carbon source, and as a nitrogen source, Soy flour, wheat germ, corn steep liquor, cottonseed meal, meat extract, peptone, yeast extract, fish meal, urea, ammonium sulfate, ammonium chloride, sodium nitrate, ammonium phosphate, etc. can be used alone or in combination. If necessary, inorganic salts such as sodium chloride, potassium chloride, magnesium sulfate, calcium carbonate, phosphate and metal salts can be added. In addition, organic substances such as vitamins and amino acids that promote the growth of the above strain or the production of the anthracycline antibiotics of the present invention can be added. Further, if necessary, an antifoaming agent such as Adecanol (trade name: manufactured by Asahi Denka Kogyo Co., Ltd.), silicone (trade name: manufactured by Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.), or the like can be added.
[0019]
The culture conditions may be appropriately selected within a range in which the above strain can grow well and produce the anthracycline antibiotic of the present invention. For example, the pH of the medium is preferably about 5 to 9, usually 6 to 7. The culture temperature is preferably maintained at a temperature at which microorganisms grow well, usually 20 to 40 ° C, preferably 25 to 28 ° C. The culture time may be about 2 to 8 days, preferably 4 to 5 days. Of course, the various culture conditions described above can be appropriately changed according to the type and characteristics of microorganisms used, external conditions, and the like, and the optimum conditions can be selected and adjusted from the above ranges accordingly. At that time, the culture solution obtained by stopping the culture when the accumulation amount of the target compound in the culture solution becomes maximum may be used in the following purification step.
[0020]
The anthracycline antibiotic of the present invention accumulated in the culture solution thus obtained is separated from the filtrate or supernatant by culturing and then separating the cells by general solid-liquid separation means such as filtration and centrifugation. It can be recovered. It can also be recovered from the separated cells. When recovering from the filtrate or supernatant, first, it is extracted with an organic solvent such as chloroform, toluene, ethyl acetate at pH 7-9, and further Amberlite XAD (manufactured by Rohm and Haas), Diaion HP-20. It can be processed by column chromatography using a carrier such as polystyrene-based adsorption resin (made by Mitsubishi Chemical Corporation), silica gel, alumina, activated carbon and the like. The method for eluting the target substance from these carriers varies depending on the type and properties of the carrier. For example, in the case of a polystyrene-based adsorption resin, hydrous alcohol, hydrous acetone, or the like can be used as an elution solvent.
[0021]
Furthermore, gel filtration with Sephadex LH-20 (Pharmacia), Bio Gel P-2 (Bio-Rad), etc., thin layer chromatography with silica gel, alumina, etc., normal phase or reverse phase column The preparative high performance liquid chromatography (preparative HPLC) used can be used, and these methods can be separated and purified by using them alone or in combination as appropriate, and repeatedly using them in some cases. Moreover, when recovering from the separated microbial cells, extraction with an appropriate organic solvent such as acetone, methanol, ethanol or butanol, followed by re-extraction with chloroform and isolation and purification in the same manner as described above.
[0022]
The anthracycline antibiotics of the present invention obtained as described above have the following physicochemical properties.
1. Physicochemical properties of anthracycline antibiotic HU2-705A
(1) Color and shape: Pink, solid.
(2) Molecular formula: C₂₈H₃₁NO₈
(3) Mass spectrum
FAB-MS: As shown in FIG.
HRFAB-MS: m / z 510.2095 [M + H]⁺
(4)¹H-NMR spectrum (500 MHz): The results of measurement in deuterated chloroform are as shown in FIG. The chemical shift and multiplicity of main signals are as shown in Table 2.
(5)¹³C-NMR spectrum (125 MHz): The results of measurement in deuterated chloroform are as shown in FIG. Further, chemical shifts of main signals are as shown in Table 3.
(6) Rf value of thin layer chromatography: Silica gel plate (Silicagel 70F₂₅₄: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 0.37 (chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1)
[0023]
2. Physicochemical properties of anthracycline antibiotic HU2-705B
(1) Color and shape: red, powder.
(2) Molecular formula: C₂₉H₃₃NO₁₁
(3) Mass spectrum
FAB-MS: As shown in FIG.
HRFAB-MS: m / z 571.2156 [M + H]⁺
(4)¹H-NMR spectrum (500 MHz): The results of measurement in deuterated methanol are as shown in FIG. The chemical shift and multiplicity of main signals are as shown in Table 2.
(5)¹³C-NMR spectrum (125 MHz): The result of measurement in deuterated methanol is as shown in FIG. Further, chemical shifts of main signals are as shown in Table 3.
(6) Rf value of thin layer chromatography: Silica gel plate (Silicagel 70F₂₅₄: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 0.18 (chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1)
(7) Specific rotation: [α]^{twenty five} _D  + 144 ° (c 0.1, methanol)
(8) Ultraviolet absorption spectrum: The result of measurement in 90% methanol is as shown in FIG. The characteristic absorption is as follows.
UV λmax nm, (ε^1% _1cm): 233 (597), 254 (451), 291 (162), 493 (227)
[0024]
3. Physicochemical properties of anthracycline antibiotic HU2-705C
(1) Color and shape: orange, powder.
(2) Molecular formula: C₂₉H₃₃NO₁₁
(3) Mass spectrum
FAB-MS: As shown in FIG.
HRFAB-MS: m / z 571.2164 [M + H]⁺
(4)¹H-NMR spectrum (500 MHz): The results of measurement in deuterated methanol are as shown in FIG. The chemical shift and multiplicity of main signals are as shown in Table 2.
(5)¹³C-NMR spectrum (125 MHz): The results of measurement in deuterated methanol are as shown in FIG. Further, chemical shifts of main signals are as shown in Table 3.
(6) Rf value of thin layer chromatography: Silica gel plate (Silicagel 70F₂₅₄: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 0.13 (chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1)
(7) Specific rotation: [α]^{twenty five} _D  + 34 ° (c 0.076, methanol)
(8) Ultraviolet absorption spectrum: The results of measurement in 90% methanol are as shown in FIG. The characteristic absorption is as follows.
UV λmax nm, (ε^1% _1cm): 208 (686), 235 (sh570), 258 (418), 290 (sh230), 491 (126)
[0025]
4). Physicochemical properties of anthracycline antibiotic HU2-705E
(1) Color and shape: red, solid.
(2) Molecular formula: C₂₈H₃₃NO₉
(3) Mass spectrum
FAB-MS: As shown in FIG.
HRFAB-MS: m / z 528.2182 [M + H]⁺
(4)¹H-NMR spectrum (500 MHz): The result of measurement in deuterated chloroform is as shown in FIG. The chemical shift and multiplicity of main signals are as shown in Table 2.
(5)¹³C-NMR spectrum (125 MHz): The result of measurement in deuterated methanol is as shown in FIG. Further, chemical shifts of main signals are as shown in Table 3.
(6) Rf value of thin layer chromatography: Silica gel plate (Silicagel 70F₂₅₄: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), 0.28 (chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1)
[0026]
[Table 2]

[0027]
[Table 3]

[0028]
The anthracycline antibiotics of the present invention each show a growth inhibitory action against cultured leukemia cells L1210 and are useful as their own cancer agents.
[0029]
(Proliferation and inhibition of nucleic acid synthesis on mouse leukemia L1210 cells)
5 × 10 L1210 cells into RPMI 1640 medium (Rosewellberg Laboratories) containing 20% calf serum^FourSimilarly, the anthracycline antibiotics of the present invention were added at various concentrations and cultured at 37 ° C. in a carbon dioxide incubator to obtain a 50% growth inhibitory concentration relative to the control group. Furthermore, 5 × 10 5 of the above L1210 cultured cells were added to RPMI1640 medium containing 10% calf serum.^FourAfter suspension at 37 ° C. in a carbon dioxide incubator for 1 to 2 hours, this substance was added at various concentrations, and further after 15 minutes.¹⁴C-uridine (0.05 μCi / ml) or¹⁴C-thymidine (0.05 μCi / ml) was added and incubated at 37 ° C. for 60 minutes. Cold 10% trichloroacetic acid was added to the reaction solution to stop the reaction, and at the same time, acid insolubles were precipitated, washed twice with cold 5% trichloroacetic acid, dissolved in formic acid, and the radioactivity was measured. 50% uptake inhibition concentration (IC) from the uptake rate of radioactivity compared to the control group without addition (IC₅₀) Table 4 shows the results.
[0030]
[Table 4]

[0031]
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples.
【Example】
Example 1 Preparation of culture solution
YGS of Streptomyces violaceus HU2-705 strain (FERM P-17986) (soluble starch 0.5%, yeast extract 0.3%, glucose 0.5%, agar 2.0%, pH 7.2) ) Take a platinum loop from the slant culture, dispense 5ml of YGS liquid medium (soluble starch 0.5%, yeast extract 0.3%, glucose 0.5%, pH 7.2) and inoculate into a sterilized test tube. The seed mother was prepared by reciprocal shaking culture at 28 ° C. and 130 rpm for 5 days.
[0032]
Next, production medium (soluble starch 2.5%, soybean flour 1.5%, yeast extract 0.2%, glucose 0.5%, sodium chloride 0.1%, mineral mixture 0.1%, calcium carbonate 0. 2%, 10% adecanol, 0.1%, pH 7.0: However, the mineral mixture is zinc chloride 40 mg, ferrous chloride hexahydrate 200 mg, cuprous chloride dihydrate 10 mg, manganese chloride 10 mg of tetrahydrate, 10 mg of sodium pyroborate · 10 hydrate and 10 mg of ammonium molybdate · 4 hydrate are dissolved in 1000 ml of distilled water and adjusted to pH 2.2 with hydrochloric acid.) 50 ml is dispensed The sterilized 500 ml Sakaguchi flask was inoculated with 1.5 ml of the seed mother and cultured with reciprocating shaking at 28 ° C. and 130 rpm for 4 days. 20 ml of production medium was dispensed and sterilized, and 20 ml of sterilized 500 ml Sakaguchi flask was inoculated 1 ml at a time, and cultured by reciprocal shaking at 28 ° C. and 130 rpm for 5 days to obtain 1000 ml of a culture solution.
[0033]
Example 2 Purification of anthracycline antibiotics HU2-705B and HU2-705C
1000 ml of the culture solution obtained by the method described in Example 1 was adjusted to pH 2.0 with phosphoric acid and gently stirred for 1 hour at room temperature. Centrifugation was performed at 3,000 rpm for 10 minutes, and after separation into a precipitate containing supernatant and cells, 300 ml of acetone adjusted to pH 2.9 with phosphoric acid was added to the precipitate and stirred vigorously. After centrifugation at 3,000 rpm for 10 minutes, the supernatant containing acetone was concentrated and combined with the previous supernatant. This acidic solution was applied to an HP-20 column (φ30 mm × 205 mm, 145 ml) washed with an acidic aqueous solution (pH 2.4) adjusted to pH with phosphoric acid. After washing with acidic water (pH 2.4), elution was performed with a 90% acetone solution adjusted to pH 2.4. After concentration under reduced pressure, the pH was adjusted to 7.5 with 1M aqueous sodium hydrogen carbonate solution, 200 ml of chloroform was added, and the mixture was vigorously stirred and centrifuged. After performing the same chloroform washing twice, the aqueous phase was adjusted to pH 2.5 with 1M hydrochloric acid. To this was added 300 ml of 1-butanol, followed by extraction with stirring, followed by centrifugation, and the product was dissolved in 1-butanol. This operation was repeated twice, and the resulting butanol solution was combined, a small amount of water was added, and the mixture was concentrated to dryness at 50 ° C. to recover 1.13 g of the crude extract.
[0034]
The crude extract was dissolved in 50 ml of a mixed solvent (chloroform: methanol: water: acetic acid = 400: 100: 10: 1) and adsorbed on a Wakogel C-200 silica gel column (φ25 mm × 220 mm, 108 ml). Subsequently, elution was performed with a developing solvent (400: 100: 10: 1, 1000 ml → 400: 200: 10: 1, 200 ml) of chloroform: methanol: water: acetic acid. TLC analysis (Silicagel 70 F) using chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1 as a developing solvent₂₅₄: Manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and the components contained in each fraction were confirmed. Among them, a product showing a spot having an Rf value of 0.18 (red, anthracycline antibiotic HU2-705B) and a product showing a spot having an Rf value of 0.13 (orange, anthracycline antibiotic HU2-705C), respectively. It was collected.
[0035]
The anthracycline antibiotic HU2-705B was concentrated to dryness, dissolved in 100 ml of 1M aqueous sodium carbonate (pH 7.5), and washed with 100 ml of chloroform. The remaining aqueous phase was adjusted to pH 2.5 with 1M hydrochloric acid and extracted with butanol. This operation was repeated until the pigment in the aqueous phase disappeared, and the recovered butanol layer was collected and concentrated to dryness. This was dissolved in a mixed solvent (toluene: methanol = 5: 1) and concentrated to dryness to deposit red powder one after another. Concentration was stopped just prior to complete drying, and the precipitated material and solution were transferred to a test tube and then centrifuged. The precipitate was recovered, and toluene and methanol were added again to the toluene phase, followed by concentration and repeated crystallization to recover 136.4 mg of powdered HU2-705B crystals. In addition, anthracycline antibiotic HU2-705C was crystallized with a toluene: methanol mixed solvent in the same manner as anthracycline antibiotic HU2-705B to obtain 48.6 mg.
[0036]
Example 3 Purification of anthracycline antibiotics HU2-705A and HU2-705E
1000 ml of the culture solution obtained by the method described in Example 1 was centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes, and 0.1 M citrate buffer was added to the supernatant to adjust to pH 3.3. In addition, the pH-adjusted resin obtained by centrifuging at 3000 rpm in advance for 10 minutes in an adsorption resin HP-20 column (Mitsubishi Chemical Corporation: φ28 mm × 250 mm, 154 ml) buffered with the same buffer (pH 3.3). The supernatant was added. Elution was carried out with 500 ml of 50% acetone solution (pH 6.5) and concentrated under reduced pressure to recover 0.5 g of a crude extract.
[0037]
Next, the obtained crude extract was dissolved in 30 ml of a mixed solvent (chloroform: methanol: water: acetic acid = 200: 20: 1: 1) and applied to a silica gel column (φ10 mm × 150 mm, 12 ml). Subsequently, elution was carried out sequentially using a mixed solvent of chloroform: methanol: water: acetic acid shown below.
(1) Chloroform: methanol: water: acetic acid = 200: 20: 1: 1
(2) Chloroform: methanol: water: acetic acid = 200: 30: 2.5: 1
(3) Chloroform: methanol: water: acetic acid = 200: 40: 5: 1.5
(4) Chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1
[0038]
Each fraction was analyzed by TLC (Silicagel 70 F) using chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1 as a developing solvent.₂₅₄: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.), fractions having an Rf value of 0.37 were collected and concentrated to obtain 17.7 mg of anthracycline antibiotic HU2-705A. Next, fractions other than HU2-705A were collected, concentrated, and preparative TLC (silica gel 20 cm × 20 cm: Silicagel 70 F₂₅₄: Purified by Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Chloroform: methanol: water: acetic acid = 100: 30: 5: 1 was used as a developing solvent, and an orange spot having an Rf value of 0.28 was scraped off and packed in a short Pasteur pipette, chloroform: methanol = 1: Elute with 1. This was concentrated to obtain 8.5 mg of anthracycline antibiotic HU2-705E.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a mass spectrum of an anthracycline antibiotic HU2-705A.
FIG. 2 shows anthracycline antibiotic HU2-705A in deuterated chloroform.¹It is a H-NMR spectrum (500 MHz).
FIG. 3 shows anthracycline antibiotic HU2-705A in deuterated chloroform.¹³It is a C-NMR spectrum (125 MHz).
FIG. 4 is a mass spectrum of anthracycline antibiotic HU2-705B.
FIG. 5 shows anthracycline antibiotic HU2-705B in deuterated methanol solution.¹It is a H-NMR spectrum (500 MHz).
FIG. 6 shows anthracycline antibiotic HU2-705B in deuterated methanol solution.¹³It is a C-NMR spectrum (125 MHz).
FIG. 7 is an ultraviolet absorption spectrum of anthracycline antibiotic HU2-705B in 90% methanol.
FIG. 8 is a mass spectrum of anthracycline antibiotic HU2-705C.
FIG. 9: Anthracycline antibiotic HU2-705C in deuterated methanol.¹It is a H-NMR spectrum (500 MHz).
FIG. 10: Anthracycline antibiotic HU2-705C in deuterated methanol.¹³It is a C-NMR spectrum (125 MHz).
FIG. 11 is an ultraviolet absorption spectrum of anthracycline antibiotic HU2-705C in 90% methanol.
FIG. 12 is a mass spectrum of anthracycline antibiotic HU2-705E.
FIG. 13: Anthracycline antibiotic HU2-705E in deuterated chloroform.¹It is a H-NMR spectrum (500 MHz).
FIG. 14: Anthracycline antibiotic HU2-705E in deuterated methanol.¹³It is a C-NMR spectrum (125 MHz).

Claims (7)

An anthracycline antibiotic represented by the following formula (I):

R ₁ is H, R ₂ is OH, Y is

Anthracycline antibiotic, indicated by
R ₁ is H, R ₂ is OH, Y is

Anthracycline antibiotic, indicated by
R ₁ is OH, R ₂ is H, Y is

Anthracycline antibiotics indicated by or
R ₁ is H, R ₂ is OH, Y is

Anthracycline antibiotics indicated by The following formula (I-1),

An anthracycline antibiotic HU2-705A indicated by The following formula (I-2),

An anthracycline antibiotic HU2-705B indicated by The following formula (I-3),

An anthracycline antibiotic HU2-705C indicated by The following formula (I-4),

An anthracycline antibiotic HU2-705E indicated by A microorganism belonging to the genus Streptomyces and capable of producing the anthracycline antibiotic according to any one of claims 1 to 5, is cultured, and from the culture, any one of claims 1 to 5 is cultured. The method for producing an anthracycline antibiotic according to any one of claims 1 to 5, wherein the anthracycline antibiotic according to claim 1 is collected. Streptomyces violaceus HU2-705 strain (FERM P-17986) having the ability to produce the anthracycline antibiotics according to any one of claims 1-5.

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